KR101451797B1 - 멀티머-형성 폴리펩타이드의 멀티머 정량분석을 위한 표준 단백질 복합체 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 멀티머-형성 폴리펩타이드의 멀티머 정량분석을 위한 표준 단백질 복합체 및 이를 포함하는 키트에 관한 것이다. 본 발명의 표준 단백질 복합체는 MDS에 적용시 신호 증폭이 가능하여 적은 농도(1 ng/㎖)의 표준 단백질 복합체도 MDS로 검출될 수 있다. 본 발명은 다양한 질환과 관련된 멀티머-형성 폴리펩타이드의 멀티머 의 정량분석을 가능하게 한다.

Description

멀티머-형성 폴리펩타이드의 멀티머 정량분석을 위한 표준 단백질 복합체{Standard Protein Complex for Quantitative Analysis of Multimeric Form of Multimer-Forming Polypeptides}
본 발명은 멀티머-형성 폴리펩타이드의 멀티머 정량분석을 위한 표준 단백질 복합체 및 이를 포함하는 키트에 관한 것이다.
단백질을 구성하는 폴리펩타이드의 멀티머 형성은 단백질의 기능에 필요한 것으로 일반적으로 알려져 있다. 그러나, 멀티머 형(multimeric form)은 몇몇 단백질에서 질환을 유발하는 경우가 많다. 특히, 단백질은 정상적인 상태에서는 모노머로 존재하다가 비정상적인 상태(예컨대, 미스폴딩형으로 전환)가 되면 멀티머(또는 응집형)로 전환된다.
미스폴딩 되고 결국 응집된(또는 축적된), 즉 기능적으로 관련 있는 구조(conformation)를 가지지 않는 단백질은 정상적인 생리활성을 나타내지 않는다는 것으로 알려져 있다. 올바르게 폴딩되지 않거나 올바르게 폴딩 된 상태를 유지하지 못하는 경우 다양한 형태의 생리학적 기능부전을 유발하고, 그 결과 다양한 형태의 질환을 유발한다(Massimo Stefani, et al., J. Mol. Med. 81:678-699(2003); and Radford SE, et al., Cell. 97:291-298(1999)). 올바르지 않은 구조, 즉 정상적으로 기능을 하는 것과는 다른 구조를 가지는 단백질 분자의 존재 때문에 생명체에서 많은 질환이 유발된다.
단백질의 비정상적인 응집과 관련된 질환 중 대표적인 질환으로 알츠하이머 질환이 있다. 퇴화되어 있는 알츠하이머 환자의 뇌의 부검 시 뇌의 단면을 면역 조직학적 방법으로 염색했을 때, 신경세포의 손상부위 주변에서 β-아밀로이드가 축적되어 생긴 노인성반과 Tau 단백질에 의한 신경섬유성 엉킴 형상을 관찰할 수 있다. 이 부분을 구성하는 β-아밀로이드 펩타이드가 알츠하이머 질환의 원인인 것으로 여겨지고 있다. β-아밀로이드는 인체 내에서 다량체(멀티머 또는 응집형) 형태로 존재하며, 이것이 세포 독성을 일으키는 것으로 간주되어 진다. 병의 진행에 있어 다량체의 β-아밀로이드 펩타이드가 독성을 갖고 뇌세포의 사멸에 관여하고 있음이 여러 연구를 통해 밝혀지고 있다. 따라서, β-아밀로이드 멀티머의 존재유무는 알츠하이머 질환의 진단에 있어 중요한 지표이다.
단백질의 비정상적인 응집과 관련된 질환인 파킨슨씨병은 알파-시누클레인이 외부적 또는 내부적 요인에 의하여 단백질 변형이 초래되고 응축되면서 유발되는 것으로 알려져 있다. 따라서, 파킨슨씨병은 알파-시누클레인이 축적되어 나타나는 질환으로 여겨지며, 이를 파킨슨씨병의 진단에 이용하고 있다.
단백질의 비정상적인 응집과 관련된 질환인 프리온 질환은 정상인 프리온(PrPC) 단백질의 구조가 변형 프리온 단백질 (PrPSC) 구조로 바뀌어 뇌, 비장, 림프기관 등의 신경세포에 축척되며, 이러한 응집된 변형 프리온은 신경세포의 죽음을 유발하며 전염성을 동반한다. 프리온 단백질(PrPC)의 정상형은 α-나선 및 무질서한 부분을 포함하고 모노머형으로 존재하며(Zahn, R., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:145-150(2000)), 스크래피형(PrPSc)은 고도의 β-쉬트 구조를 가지고 멀티머(응집)형 또는 최소한 다이머형으로 존재한다(Caughey, B., et al., J. Biol. Chem. 273:32230-35(1998)).
상기한 바와 같은 다양한 질환의 원인으로 알려져 있는 응집된 형태의 단백질(멀티머 형)을 모노머 형과 분별하여 검출하는 것으로 다양한 응집-관련 질환을 진단할 수 있다. 이를 위한 기술로, 본 발명자들은 멀티머 검출 방법(multimer detection system, MDS)을 개발하여 특허등록을 받은 바 있다(한국등록특허 제10-0987639호). 상기 멀티머 검출 방법은 멀티머-형성 폴리펩타이드의 멀티머 형을 모노머 형으로부터 분별 검출할 수 있는 새로운 ELISA 기술이다. 일반적인 ELISA를 이용하면 멀티머 형과 모노머 형을 구분할 수 없으나, 상기 방법에 의하면 이를 효과적으로 분별 검출할 수 있고, 이를 통하여 궁극적으로 응집-관련 질환을 진단할 수 있다.
상기 멀티머 검출 방법을 이용한 면역분석 실시 시 검출된 단백질의 정량분석을 위하여 표준 단백질이 이용된다. 기존의 멀리머 형 표준 단백질의 제조는 멀티머-형성 폴리펩타이드의 모노머를 멀티머로 만드는 처리과정 후에 그 멀티머를 브래드포드 단백질 분석(Bradford protein assay), HPLC, SDS-phage 등을 이용하여 멀티머의 농도를 측정하는 방식으로 실시된다. 그러나, 종래 기술은 멀티머의 합성이 일정하지 않고 이량체, 삼량체, 피브릴 등 다양한 형태(conformation)의 멀티머로 합성되기 때문에 획일적이지 않으며, 멀티머의 펩타이드 분자의 정확한 몰(mole) 수를 측정하기 어려운 문제가 있게 된다. 또한, 멀티머 합성 후 정제, 정량 등의 과정을 거치면서 멀티머의 특성이 변성되며, 그 정량 농도가 다시 변화하여 실험 조건의 제어가 매우 어려운 문제가 있다.
본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.
본 발명자들은 상기와 같은 종래 표준 단백질의 문제점을 개선하고, 응집-관련 질환의 병인과 관련된 멀티머-형성 폴리펩타이드의 모노머 형으로부터 멀티머 형의 분별 검출을 위한 ELISA (MDS)에 적용 가능한 표준 단백질을 개발하기 위하여 연구노력 하였다. 그 결과, 멀티머-형성 폴리펩타이드의 모노머 형 펩타이드 다수가 캐리어 단백질에 결합된 새로운 구조의 표준 단백질 복합체(standard protein complex)를 개발함으로써, 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명의 목적은 멀티머-형성 폴리펩타이드의 멀티머 정량분석을 위한 표준 단백질 복합체를 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적은 멀티머-형성 폴리펩타이드의 모노머 형으로부터 멀티머 형을 분별 검출하기 위한 키트를 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.
본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 다음을 포함하는 멀티머-형성 폴리펩타이드의 멀티머 정량분석을 위한 표준 단백질 복합체(standard protein complex)를 제공한다:
(a) 링커를 갖는 캐리어 단백질; 및
(b) 상기 링커와 N 말단 또는 C 말단이 공유결합 된 폴리펩타이드,
상기 폴리펩타이드는 멀티머-형성 폴리펩타이드의 모노머 형 또는 이의 단편으로서 N 말단 또는 C 말단에 상기 링커와 공유결합 하는 반응기를 가지며, 3-12개가 각각 상기 반응기를 통하여 캐리어 단백질의 각각의 링커와 결합하며, 그리고
상기 캐리어 단백질은 상기 폴리펩타이드에 대한 항체와 결합하지 않는 단백질이다.
본 발명자들은 상기와 같은 종래 표준 단백질의 문제점을 개선하고, 응집-관련 질환의 병인과 관련된 멀티머-형성 폴리펩타이드의 모노머 형으로부터 멀티머 형의 분별 검출을 위한 ELISA (MDS)에 적용 가능한 표준 단백질을 개발하기 위하여 연구노력 하였다. 그 결과, 멀티머-형성 폴리펩타이드의 모노머 형 펩타이드 다수가 캐리어 단백질에 결합된 새로운 구조의 표준 단백질 복합체(standard protein complex)를 개발함으로써, 본 발명을 완성하였다.
본 명세서에서 용어, "멀티머-형성 폴리펩타이드"는 응집형을 형성할 수 있는 폴리펩타이드를 의미한다. 특히, 하기 구조적 변화는 다양한 질환을 유발한다. 예컨대, 알츠하이머 질환, 크로이츠펠트-야콥병, 스폰지폼 뇌질환(Spongiform encephalopathies), 파킨슨 질환, 헌팅톤 질환, 근위축성 측삭경화증(Amyotrophic lateral sclerosis), 서핀 결핍증(Serpin deficiency), 폐기종(emphysema), 경변증(cirrhosis), 제II형 당뇨병, 일차 전신성 아밀로이드증, 이차 전신성 아밀로이드증, 프론토-일시적 치매(Fronto-temporal dementias), 노인 전신성 아밀로이드증, 가족성 아밀로이드 다발신경병(familial amyloid polyneuropathy), 유전성 대뇌 아밀로이드맥관병(hereditary cerebral amyloid angiopathy) 및 혈투석-관련 아밀로이드증을 포함한다. 따라서, 용어 "멀티머-형성 폴리펩타이드"는 용어"응집체-형성 폴리펩타이드"와 서로 바꾸어 사용할 수 있다.
일반적으로, 상기 멀티머-형성 폴리펩타이드의 모노머 형(즉, 비-응집형)은 정상이고 멀티머 형(즉, 응집형)은 질환, 특히 알츠하이머 질환 및 크로이츠펠트-야콥병과 같은 신경 퇴행성 질환을 유발한다. 따라서, 상기 멀티머-형성 폴리펩타이드의 멀티머 형을 모노머 형으로부터 분별 검출하거나, 시료 내 포함된 상기 멀티머 형을 정량분석 하여 응집-관련 질환을 진단할 수 있다. 이러한 멀티머 형의 정량분석을 위해서는 농도를 정확히 알고 있는 멀티머 형의 표준 단백질이 요구된다. 이에, 본 발명자들은 멀티머-형성 폴리펩타이드의 멀티머 정량분석을 위한 표준 단백질로서, 멀티머 형 펩타이드를 모방하는 표준 단백질(Oligomer Mimicking Standard Protein)을 개발하였다.
본 발명의 바람직한 일구현예에 따르면, 상기 멀티머-형성 폴리펩타이드는 알츠하이머 질환에 관여하는 Aβ 펩타이드(β-아밀로이드)와 tau 단백질, 크로이츠펠트-야콥병 및 스폰지폼 뇌질환에 관여하는 프라이온, 파킨슨 질환에 관여하는 α-시누클레인, 일차 전신성 아밀로이드증에 관여하는 Ig 경사슬, 이차 전신성 아밀로이드증에 관여하는 혈청 아밀로이드 A, 프론토-일시적 치매에 관여하는 tau 단백질, 노인 전신성 아밀로이드증에 관여하는 트랜스티레틴, 가족성 아밀로이드 다발신경병에 관여하는 트랜스티레틴, 유전성 대뇌 아밀로이드 맥관병에 관여하는 시스타틴 C, 혈투석-관련 아밀로이드증에 관여하는 β2-마이크로글로블린, 헌팅톤 병에 관여하는 헌팅틴, 근위축성 측삭경화증에 관여하는 슈퍼옥사이드 디스뮤타아제, 서핀 결핍증, 폐기종, 및 경변증에 관여하는 서핀, 제II형 당뇨병에 관여하는 아밀린, 및 상기 펩타이드의 인산화 된 형(form)을 포함한다.
바람직하게는, 상기 멀티머 형성 폴리펩타이드는 Aβ 펩타이드, α-시누클레인, 프라이온 단백질 또는 상기 펩타이드의 인산화 된 형이다. 본 발명 방법을 프라이온 단백질(PrP)에 적용하는 경우, 모노머 형은 PrPc(프라이온의 세포 또는 정상형)이고 멀티머 형은 PrPSc(프라이온의 스그래피 또는 감염형)이다.
본 발명의 캐리어 단백질은 멀티머-형성 폴리펩타이드의 모노머 형 또는 이의 단편과 결합하여 복합체를 형성할 수 있도록 다수의 링커를 갖는다.
본 발명의 바람직한 일구현예에 따르면, 본 발명의 캐리어 단백질은 표면이 관능기로 수식되어 있으며, 상기 관능기가 링커로서 역할을 하여 상기 멀티머-형성 폴리펩타이드의 모노머 형 또는 이의 단편의 일 말단과 결합한다. 바람직하게는, 상기 관능기는 말레이미드기, 아미노기, 카르복실기, 알데히드기, 프로피온 알데히드기, 부틸 알데히드기, 석시니미딜 프로피오네이트, 석시니미딜 카르복시메틸, 하이드록시 석시니미딜 및 석시니미딜 카보네이트로 구성된 군으로부터 선택되며, 보다 바람직하게는 말레이미드기이다.
상기 링커로서 역할을 하는 관능기의 개수는 3 내지 12개가 바람직하며, 보다 바람직하게는 3 내지 11개, 보다 더 바람직하게는 3 내지 10개, 보다 더 바람직하게는 3 내지 9개, 보다 더 바람직하게는 3 내지 8개, 보다 더 바람직하게는 3 내지 7개, 보다 더 바람직하게는 4 내지 12개, 보다 더 바람직하게는 4 내지 11개, 보다 더 바람직하게는 4 내지 10개, 보다 더 바람직하게는 4 내지 9개, 보다 더 바람직하게는 4 내지 8개, 보다 더 바람직하게는 4 내지 7개이다.
본 발명의 바람직한 일구현예에 따르면, 상기 캐리어 단백질은 구상 단백질(globular protein)이다. 용어, 구상 단백질은 분자의 형상이 구상 또는 구상에 가까운 타원체인 단백질을 의미하며, 섬유상 단백질에 대응한 용어로서 이해된다.
본 발명의 보다 바람직한 일구현예에 따르면, 상기 캐리어 단백질은 알부민, 오브알부민, 락토알부민, 혈청알부민, 류코신(leucosin), 레구멜린(legumelin), 키홀-림펫 헤모사이아닌(keyholelimpet hemocyanin), 글로빈 및 글로블린으로 구성된 군으로부터 선택된다. 바람직하게는, 상기 캐리어 단백질은 알부민, 오브알부민 또는 키홀-림펫 헤모사이아닌이고, 보다 바람직하게는 오브알부민이다.
본 발명의 멀티머-형성 폴리펩타이드의 모노머 형 또는 이의 단편은 N 말단 또는 C 말단에 상기 캐리어 단백질의 링커와 공유결합 하는 반응기를 가지며, 상기 반응기를 통하여 캐리어 단백질의 링커와 결합하여 표준 단백질 복합체를 형성한다. 상기 멀티머-형성 폴리펩타이드의 모노머 형은 Aβ 펩타이드, tau 단백질, 프라이온 단백질과 같은 멀티머-형성 폴리펩타이드의 단량체 분자를 의미한다.
본 발명의 바람직한 일구현예에 따르면, 3 내지 12개의 멀티머-형성 폴리펩타이드의 모노머 형 또는 이의 단편은 반응기를 통하여 상기 캐리어 단백질의 각각의 링커와 결합한다. 바람직하게는, 3 내지 11개의 멀티머-형성 폴리펩타이드의 모노머 형 또는 이의 단편이 캐리어 단백질의 링커와 각각 결합하며, 보다 바람직하게는 3 내지 10개, 보다 더 바람직하게는 3 내지 9개, 보다 더 바람직하게는 3 내지 8개, 보다 더 바람직하게는 3 내지 7개, 보다 더 바람직하게는 4 내지 12개, 보다 더 바람직하게는 4 내지 11개, 보다 더 바람직하게는 4 내지 10개, 보다 더 바람직하게는 4 내지 9개, 보다 더 바람직하게는 4 내지 8개, 보다 더 바람직하게는 4 내지 7개의 멀티머-형성 폴리펩타이드의 모노머 형 또는 이의 단편이 캐리어 단백질의 링커와 각각 결합한다.
본 발명의 바람직한 일구현예에 따르면, 상기 링커와 공유결합 하는 폴리펩타이드의 반응기는 티올기, 하이드록시기 또는 아미노기이다. 바람직하게는, 상기 반응기는 티올기이며, 보다 바람직하게는 시스테인 잔기의 티올기이다. 상기 멀티머-형성 폴리펩타이드의 모노머 형 또는 이의 단편의 N 말단 또는 C 말단에 시스테인 잔기가 없는 경우, 시스테인 잔기를 말단에 도입시켜 티올기를 반응기로 가질 수 있도록 할 수 있다.
본 발명의 바람직한 일구현예에 따르면, 상기 멀티머-형성 폴리펩타이드의 모노머 형 또는 이의 단편은 10 내지 30개의 아미노산을 포함한다.
본 발명의 바람직한 일구현예에 따르면, 상기 멀티머-형성 폴리펩타이드의 모노머 형 또는 이의 단편이 Aβ 펩타이드인 경우에는 β-아밀로이드1-42 펩타이드이며, 바람직하게는 β-아밀로이드1-42 펩타이드의 N말단 영역 펩타이드이고, 보다 바람직하게는 β-아밀로이드1-42 펩타이드의 1-15번 아미노산 서열을 갖는 펩타이드이다. 또한, 상기 멀티머-형성 폴리펩타이드의 모노머 형 또는 이의 단편이 α-시누클레인인 경우에는 α-시누클레인의 122-136번 펩타이드가 바람직하다.
본 발명의 바람직한 일구현예에 따르면, 본 발명의 표준 단백질 복합체는 멀티머 검출 방법(multimer detection system, MDS)에 적용될 수 있다. 상기 멀티머 검출 방법은 본 발명자들에 의하여 개발된, 생시료 내의 멀티머-형성 폴리펩타이드의 모노머 형으로부터 멀티머 형을 분별 검출하는 방법으로서 한국등록특허 제10-0987639호에 개시되어 있다. 상기 문헌은 본 명세서에 참조로서 삽입된다. 따라서, 본 발명의 표준 단백질 복합체는 MDS에 적용되기 위하여 캐리어 단백질이 멀티머-형성 폴리펩타이드의 모노머 형 또는 이의 단편에 대한 항체와 반응(결합)하지 않는다. 이에 따라, 본 발명은 멀티머-형성 폴리펩타이드의 모노머 형 또는 이의 단편에 대한 항체와 반응하지 않는 단백질을 모두 캐리어 단백질로 사용할 수 있다.
바람직하게는, 상기 항체는 상기 멀티머-형성 폴리펩타이드의 모노머 형 또는 이의 단편 상의 에피토프를 인식하는 포획 항체 및 상기 에피토프와 오버래핑 된 에피토프를 인식하는 검출 항체이다. 본 명세서에서 용어, "포획항체"는 생시료에서 검출하고자 하는 멀티머-형성 폴리펩타이드에 결합 할 수 있는 항체를 의미하며, 용어"검출 항체"는 에 상기 포획 항체에 의해 포획된 멀티머-형성 폴리펩타이드에 결합할 수 있는 항체를 의미한다. "항체"는 항원에 결합할 수 있는 면역글로불린 단백질을 의미한다. 본 명세서에 이용된 항체는 검출하고자 하는 에피토프, 항원 또는 항원 단편에 결합할 수 있는 전체 항체뿐만 아니라 항체 단편(예컨대, F(ab')2, Fab', Fab, Fv)을 포함한다.
상기 MDS의 특징은 멀티머-형성 폴리펩타이드 상의 에피토프를 특이적으로 인식하는 한 세트의 포획 항체 및 검출 항체를 이용하는 것으로서, 상기 포획 항체 및 검출 항체가 특이적으로 인식하는 상기 에피토프는 서로 동일하거나 오버래핑 되어 있다. 포획 항체 및 검출 항체에 대한 에피토프를 언급하면서 사용되는 용어, "오버래핑(overlapped with)"은 완전히 또는 부분적으로 오버래핑 된 아미노산 서열을 포함하는 에피토프를 포괄한다. 바람직하게는, 상기 포획 항체 및 검출 항체가 특이적으로 인식하는 에피토프는 멀티머-형성 폴리펩타이드에서 반복되지 않는 서열이다.
MDS에 따르면, 포획 항체에 결합된 멀티머-형성 폴리펩타이드는 검출 항체와 더 이상 결합 할 수 없고, 이는 검출 항체가 인식하는 추가적인 에피토프가 존재하지 않기 때문이다. 따라서, 도 1에 나타난 바와 같이, MDS에 본 발명의 표준 단백질 복합체를 적용하는 경우, 표준 단백질 복합체 상의 다수의 멀티머-형성 폴리펩타이드의 모노머 형 또는 이의 단편 중 일부에 포획 항체가 결합되고, 포획항체가 결합되지 않은 나머지 모노머 형 또는 이의 단편에 검출 항체가 결합한다. 도 2에 나타난 바와 같이, 종래의 다이머(dimer) 형태의 펩타이드는 구조적으로 신호 증폭 효과를 얻기가 어려우나, 본 발명의 표준 단백질 복합체에는 검출 항체가 많이 붙을 수 있어 신호 증폭 효과를 얻을 수 있다. 하기 실시예에서 증명된 바와 같이, 본 발명의 표준 단백질 복합체는 1 ng/㎖의 적은 농도로도 MDS에 의하여 검출될 수 있을 정도로 검출 민감도가 우수하다.
"멀티머 형-검출 항체 복합체" 및 "표준 단백질 복합체-검출 항체 복합체"의 검출은 당업계에 공지된 다양한 방법으로 실시할 수 있다. 상기 복합체의 형성은 생시료에 멀티머 형의 존재를 나타낸다. 상기 단계는 종래의 방법에 따라, 예컨대, Enzyme Immunoassay, E. T. Maggio, ed., CRC Press, Boca Raton, Florida, 1980 및 Harlow and Lane, eds. Antibodies: A Laboratory Manual(1988) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y에 기재된 바와 같이 다양한 검출할 수 있는 표지/기질 쌍을 이용하여, 정량적으로 또는 정성적으로 실시 할 수 있다.
멀티머 형의 정량분석을 위하여, 표준 단백질 복합체를 MDS에 적용하여 얻은 데이터, 구체적으로 표준 단백질의 양(예컨대, 농도, 몰수)과 MDS 검출 신호(detention signal)와의 관계(또는 양상)를 보여주는 데이터, 바람직하게는 캐리어 단백질에 결합된 멀티머-형성 폴리펩타이드의 모노머 형 또는 이의 단편의 양과 MDS 검출 신호와의 관계(또는 양상)를 보여주는 데이터를 이용할 수 있다. 상기 데이터는 검정 곡선의 형태로서 구현될 수 있다. 이러한 데이터를 얻기 위해서는, 먼저 표준 단백질 복합체의 정량이 필요하다. 표준 단백질 복합체에 있는 모노머 형 또는 이의 단편의 정량은, SDS-PAGE, MALDI-TOFF 등의 방법을 사용하여 상기 모노머 형 또는 이의 단편이 캐리어 단백질에 부착하면서 증가하는 단백질 총 분자량을 측정하여 실시할 수 있다. 본 발명은 분자량을 알고 있는(혹은 쉽게 측정이 가능한) 캐리어 단백질에 다수의 상기 모노머 형 또는 이의 단편을 결합시키는 과정을 통하여 표준 단백질을 합성하며, 생성된 표준 단백질의 분자량을 Lab 기반의 용이한 실험을 통하여 쉽게 측정할 수 있으므로 표준 단백질 복합체의 정량을 신속 정확하게 수행할 수 있다. 최종적으로는, 실험군에서 검출된 멀티머의 양을 표준 단백질 복합체의 데이터 값과 비교하여 정량분석한다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 본 발명의 표준 단백질 복합체를 포함하는, 생시료(biosample) 내의 멀티머-형성 폴리펩타이드의 모노머 형으로부터 멀티머 형을 분별 검출하기 위한 키트를 제공한다.
본 발명의 키트는 상술한 표준 단백질 복합체를 포함하기 때문에, 이 둘 사이에 공통된 내용은 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여 그 기재를 생략한다.
본 명세서에서 용어, "생시료(biosample)"는 분석하고자 하는 유기체-유래 시료를 의미한다. 상기 생시료는 생물원의 세포, 조직, 또는 생체액, 또는 본 발명에 따라 분석될 수 있는 다른 미디엄(medium)을 의미하고, 이는 인간으로부터 채취한 시료, 동물로부터 채취한 시료, 인간 또는 동물을 위한 식품으로부터 채취한 시료를 포함한다. 바람직하게는, 상기 생시료는 혈액, 혈청, 혈장, 림프액, 우유, 소변, 대변, 눈물, 타액, 정액, 뇌 추출물(예컨대, 뇌 균질액), 척수액(SCF), 충수, 비장 및 편도 조직 추출물을 포함하는 체내 유체 시료이다. 보다 바람직하게는, 상기 생시료는 뇌 균질액 또는 혈장이다.
본 발명의 바람직한 일구현예에 따르면, 본 발명의 키트는 상기 멀티머 형의 정량분석을 위한 키트이다.
본 발명의 바람직한 일구현예에 따르면, 본 발명의 키트는 상기 검출 항체 및/또는 포획 항체를 추가적으로 포함한다.
본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:
(i) 본 발명은 멀티머-형성 폴리펩타이드의 멀티머 정량분석을 위한 표준 단백질 복합체 및 이를 포함하는 키트를 제공한다.
(ii) 본 발명의 표준 단백질 복합체는 MDS에 적용시 신호 증폭이 가능하여 적은 농도(1 ng/㎖)의 표준 단백질 복합체도 MDS로 검출될 수 있다.
(iii) 본 발명은 다양한 질환과 관련된 멀티머-형성 폴리펩타이드의 멀티머 의 정량분석을 가능하게 한다.
도 1은 MDS에 적용된 본 발명의 표준 단백질 복합체의 검출 과정을 보여주는 모식도이다.
도 2는 종래 dimer 표준 단백질을 MDS에 적용한 경우에 발생하는 문제점을 보여주는 모식도이다.
도 3 내지 5는 β-아밀로이드 표준 단백질 복합체의 ELISA 실험결과를 보여주는 그래프이다.
도 6은 α-시누클레인 표준 단백질 복합체의 ELISA 실험결과를 보여주는 그래프이다.
도 7은 인산화 된 α-시누클레인 표준 단백질 복합체의 ELISA 실험결과를 보여주는 그래프이다.
도 8은 본 발명의 표준 단백질 복합체(OMSP)의 분자량 변화를 보여주는 사진이다. MA-OVA는 말레이미드기로 수식된 오브알부민을 나타내고, Aβ1-OVA는 Aβ1-15(1DAEFRHDSGYEVHHQ15C) 펩타이드가 링커를 통하여 MA-OVA에 공유결합 된 OMSP를 나타내며, 이때의 반응 온도는 상온이다. 4℃Aβ1-OVA은 상기 Aβ1-15 펩타이드와 MA-OVA와의 링커를 통한 공유결합을 4℃ 온도에서 오버나이트로 실시하여 수득한 OMSP를 나타내며, α-S-P는 펩타이드 1이 결합된 OMSP를 나타내고, α-S는 펩타이드 3이 결합된 OMSP를 나타낸다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
실시예
실시예 1. β-아밀로이드 1-42 표준 단백질 복합체의 제조 및 ELISA 실험
3차 증류수에 말레이미드기로 수식된 오브알부민(Thermo Scientific, #77125)(maleimide-activated ovalbumin, MA-OVA)을 최종 농도 10 mg/㎖가 되도록 녹였다. PBS + 10 mM EDTA (pH 7.2) 결합버퍼와 MA-OVA (10 mg/㎖)를 1 mg/㎖로 희석하였다. β-아밀로이드1-42 단백질의 N-말단 1-15번 펩타이드(Aβ1)를 합성한 후 C-말단에 시스테인을 붙인 1DAEFRHDSGYEVHHQ15C 펩타이드(서열목록 제1서열)를 제조하였다. 준비된 1-15 펩타이드 1 mg과 MA-OVA 0.5 mg을 결합버퍼(pH 7.2)와 섞어 주었다(농도 5 mg/㎖의 1-15 펩타이드 100 ㎕, 농도 10 mg/㎖ MA-OVA 50 ㎕, 결합버퍼 350 ㎕; 오브알부민 기준으로 최종 농도를 0.5 mg/500 ㎕ = 1 mg/㎖로 봄). MA-OVA에 남아있을 수 있는 말레이미드 잔기를 블락하기 위하여 시스테인 용액(Sigma C-1276 제품을 PBS pH 4.5에 녹여 농도를 120 mg/㎖로 맞춘 용액) 1 ㎕를 첨가하고, 상온에서 1시간 동안 인큐베이션 하였다. 투석막(Spectra/Por Dialysis membrane 4, MWCO 12-14,000, Normla flat width: 10mm, diameter: 6.4mm, Vol/Length: 0.32 ㎖/cm, Reorder No: 132 697)에 상기 용액을 넣고, PBS에 담그고 투석하여 표준 단백질 복합체를 수득하였다. 완성된 표준 단백질 복합체를 Oligomer Mimicking Standard Protein(OMSP)이라 명명하였다. 완성된 표준 단백질 복합체를 -20℃에 보관하였다.
TBST를 이용하여 β-아밀로이드1-42의 1-15 펩타이드가 부착된 MA-OVA(Oligomer Micking Protein, AβOMSP, 1 mg/㎖)를 1000, 100 및 10 ng/㎖로 희석하여 준비하였다. 이를 100 ㎕씩 항-β-아밀로이드1-42 항체(1E11, Covance)가 2 ㎍/㎖씩 코팅된 플레이트에 분주한 후, 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션 하였다. TBST로 3번 세척 후, 호스라디쉬 퍼옥세다제(HRP)가 부착된 검출 항체 항-β-아밀로이드1-42(6E10, Covance) 200 ng/㎖ 용액을 100 ㎕씩 동일 플레이트에 첨가하고, 37℃에서 1시간동안 인큐베이션 하였다. 이후, TBST로 3번 세척한 다음 ECL 용액(100 ㎕)를 분주하고 발광(luminescence) 강도를 측정하였다. 대조군으로 사용한 β-아밀로이드는 펩타이드(Abeta 1-42, Bachem)를 DMSO로 녹이고, 이를 곧바로 PBS에 희석한 후, 37℃에 인큐베이션 하여 멀티머를 형성시켜 사용하였다. 상기 대조군에는 일부 모노머와 멀티머가 공존하고 있다. 실험결과는 도 3 내지 5에 나타내었다.
도 3 내지 5에 나타난 바와 같이, β-아밀로이드 표준 단백질 복합체는 1 ng/㎖의 적은 농도로도 ELISA (MDS)에 의하여 검출될 수 있음을 확인하였다. 이는 대조군으로 사용한 월등한 차이이다. 이러한 결과는, 본 발명의 표준 단백질 복합체에 검출 항체가 많이 붙을 수 있어 신호 증폭에 효과가 있음을 나타낸다.
실시예 2. α-시누클레인 표준 단백질 복합체의 제조 및 ELISA 실험
3차 증류수에 말레이미드기로 수식된 오브알부민(MA-OVA)을 최종 농도 10 mg/㎖가 되도록 녹였다. 결합버퍼를 이용하여 펩타이드 3(α-시누클레인의 122-136번 펩타이드를 합성한 후에 N-말단에 시스테인을 붙인 펩타이드로서 CNEAYEMPSEEGYQDY; 서열목록 제2서열)은 50 ㎍/㎖로 희석하고, OVA는 100 ㎍/㎖로 희석하였다(865 ㎕ 결합버퍼 + OVA 10 ㎕ + 펩타이드 125 ㎕; OVA=0.1 mg, Pep=0.05 mg). 그리고, 상온에서 2시간 동안 인큐베이션 하였다. 시스테인 용액(120 mg/㎖)을 1 ㎕씩 펩타이드 튜브에 첨가하고, 1시간 동안 상온에 두었다. 펩타이드 용액을 멤브레인 튜브에 넣고 봉인한 뒤 PBS에 담그고 투석하였다(1시간 마다 갈아주는 것 3번 진행 한 후 4℃에서 하룻밤 동안 인큐베이션 함). 멤브레인 튜브의 용액을 appendorf 튜브에 옮겼다(1 ㎍/㎖). 완성된 표준 단백질 복합체를 -20℃에서 보관하였다.
PBST를 이용하여 펩타이드 용액을 1600 ng/㎖로 희석하고, 800, 400, 200, 100, 50 및 25 ng/㎖로 단계희석 하였다. 37℃에서 3시간 동안 인큐베이션 한 후 PBST로 5번 세척하였다. 비오틴화 된 p-s129 항체(Santa Cruz) 1 ㎍/㎖를 211 Ab(Santa Cruz)가 코팅된 플레이트에 분주하고, 37℃에서 3시간 동안 인큐베이션한 후 PBST로 5번 세척하였다. 비오틴과 결합하는 스트렙트-아비딘-폴리 HRP(strept-avidin-poly HRP)을 5000배로 하여 각 웰에 100 ㎕씩 분주하고, 상온에 30분간 두었다. PBST로 세척 후 ECL 용액을 분주하고 형광 강도를 측정하였다(Lumin 5times-2s에서 신호를 읽음). 실험결과는 도 6에 나타내었다.
도 6에 나타난 바와 같이, 적은 농도의 표준 단백질 복합체 역시 ELISA에 의하여 검출될 수 있음을 확인하였다,
실시예 3. 인산화 된 α-시누클레인 표준 단백질 복합체의 제조 및 ELISA 실험
3차 증류수에 말레이미드기로 수식된 오브알부민(MA-OVA)을 10 mg/㎖로 녹였다. 결합버퍼를 이용하여 펩타이드 1(129번 세린이 인산화 된 α-시누클레인의 122-136번 펩타이드를 합성한 후에 N-말단에 시스테인을 붙인 펩타이드로서 CNEAYEMPpSEEGYQDY; 서열목록 제2서열)을 50 ㎍/㎖로 희석하고, OVA는 100 ㎍/㎖로 희석하였다(865 ㎕ 결합버퍼 + OVA 10 ㎕ + 펩타이드 125 ㎕; OVA=0.1 mg, Pep= 0.05 mg). 그리고, 상온에서 2시간 동안 인큐베이션 하였다. 시스테인 용액(120 mg/㎖)을 1 ㎕씩 펩타이드 튜브에 첨가하고, 1시간 동안 상온에 두었다. 펩타이드 용액을 멤브레인 튜브에 넣고 봉인한 뒤 PBS에 담그고 투석하였다(1시간 마다 갈아주는 것 3번 진행 후 4℃에 하룻밤 동안 인큐베이션 함). 멤브레인 튜브의 용액을 appendorf 튜브에 옮기고(1 ㎍/㎖), 완성된 표준 단백질 복합체를 -20℃에 보관하였다.
PBST를 이용하여 펩타이드 3 용액을 640 ng/㎖로 희석하고, 320, 160, 80, 40, 20 및 10 ng/㎖로 단계희석 하였다. 37℃에서 2시간 동안 인큐베이션한 후 PBST로 5번 세척하였다. 비오틴화 된 211 항체(Santa Cruz) 1 ㎍/㎖를 211 Ab가 코팅된 플레이트에 분주하고, 37℃에서 2시간 동안 인큐베이션 한 다음 PBST로 5번 세척하였다. 스트렙트-아비딘-폴리 HRP를 5000배로 하여 각 웰에 100 ㎕ul씩 분주하고, 상온에서 30분 동안 두었다. PBST로 세척 한 후 ECL 용액을 분주하고 형광 강도를 측정하였다(Lumin 5times-2s에서 신호 읽음). 실험결과는 도 7에 나타내었다.
도 7에 나타난 바와 같이, 적은 농도의 표준 단백질 복합체 역시 ELISA에 의하여 검출될 수 있음을 확인하였다.
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현 예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
<110> gachon university <120> Standard Protein Complex for Quantitative Analysis of Multimeric Form of Multimer-Forming Polypeptides <130> PN120484 <160> 2 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cystein - beta-amyloid1-15 <400> 1 Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Cys 1 5 10 15 <210> 2 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> cystein - alpha-synuclein122-136 <400> 2 Cys Asn Glu Ala Tyr Glu Met Pro Ser Glu Glu Gly Tyr Gln Asp Tyr 1 5 10 15

Claims (9)

  1. 다음을 포함하는 멀티머-형성 폴리펩타이드의 멀티머 정량분석을 위한 표준 단백질 복합체(standard protein complex):
    (a) 링커를 갖는 캐리어 단백질; 및
    (b) 상기 링커와 N 말단 또는 C 말단이 공유결합 된 폴리펩타이드,
    상기 폴리펩타이드는 멀티머-형성 폴리펩타이드의 모노머 형 또는 이의 단편으로서 N 말단 또는 C 말단에 상기 링커와 공유결합 하는 반응기를 가지며, 3-12개가 각각 상기 반응기를 통하여 캐리어 단백질의 각각의 링커와 결합하며, 상기 단편은 상기 멀티머-형성 폴리펩타이드의 모노머 형의 부분 아미노산 서열이고, 상기 멀티머-형성 폴리펩타이드는 β-아밀로이드, tau 단백질, 프라이온 단백질, α-시누클레인, Ig 경사슬, 혈청 아밀로이드 A, 트랜스티레틴, 시스타틴 C, β2-마이크로글로블린, 헌팅틴, 슈퍼옥사이드 디스뮤타아제, 서핀 및 아밀린으로 구성된 군으로부터 선택되며, 그리고
    상기 캐리어 단백질은 상기 폴리펩타이드에 대한 항체와 결합하지 않는 단백질이다.
  2. 삭제
  3. 제 1 항에 있어서, 상기 캐리어 단백질의 링커는 말레이미드기, 아미노기, 카르복실기, 알데히드기, 프로피온 알데히드기, 부틸 알데히드기, 석시니미딜 프로피오네이트, 석시니미딜 카르복시메틸, 하이드록시 석시니미딜 및 석시니미딜 카보네이트로 구성된 군으로부터 선택되는 관능기인 것을 특징으로 하는 표준 단백질 복합체.
  4. 제 1 항에 있어서, 상기 캐리어 단백질은 구상 단백질인 것을 특징으로 하는 표준 단백질 복합체.
  5. 제 1 항에 있어서, 상기 캐리어 단백질은 알부민, 오브알부민, 락토알부민, 혈청알부민, 류코신(leucosin), 레구멜린(legumelin), 키홀-림펫 헤모사이아닌(keyholelimpet hemocyanin), 글로빈 및 글로블린으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 표준 단백질 복합체.
  6. 제 1 항에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 10 내지 30개의 아미노산으로 이루어진 것을 특징으로 하는 표준 단백질 복합체.
  7. 제 1 항에 있어서, 상기 링커와 공유결합 하는 폴리펩타이드의 반응기는 티올기, 하이드록시기 또는 아미노기인 것을 특징으로 하는 표준 단백질 복합체.
  8. 제 1 항에 있어서, 상기 폴리펩타이드에 대한 항체는 상기 폴리펩타이드 상의 에피토프를 인식하는 포획 항체 및 상기 에피토프와 오버래핑 된 에피토프를 인식하는 검출 항체인 것을 특징으로 하는 표준 단백질 복합체.
  9. 제 1 항 및 제 3 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항의 표준 단백질 복합체를 포함하는, 생시료(biosample) 내의 멀티머-형성 폴리펩타이드의 모노머 형으로부터 멀티머 형을 분별 검출하기 위한 키트.
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20220157821A (ko) 2021-05-21 2022-11-29 가천대학교 산학협력단 N-[(4'-브로모[1,1'-바이페닐]-4-일)설포닐]-l-발린 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 아밀로이드 베타의 올리고머화 및 피브릴화 억제용 조성물
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002001230A2 (en) 2000-06-23 2002-01-03 Minerva Biotechnologies Corporation Rapid and sensitive detection of protein aggregation
KR20070026363A (ko) * 2003-12-17 2007-03-08 엘란 파마슈티칼스, 인크. Ａβ 면역원성 펩티드 캐리어 컨쥬게이트 및 이의 제조방법
KR20130043088A (ko) * 2010-02-09 2013-04-29 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 면역검정 표준물 및 검정내 보정 표준물을 사용한 임상 바이오마커의 측정

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030219459A1 (en) * 2002-01-18 2003-11-27 Cytos Biotechnology Ag Prion protein carrier-conjugates
US6846640B2 (en) * 2002-04-30 2005-01-25 Pharmacia & Upjohn Company Time-resolved fluorescence assay for the detection of multimeric forms of A-beta 1-40
EP1848817B1 (en) * 2005-02-19 2013-04-24 Peoplebio, Inc. Method for differentially detecting multimeric form from monomeric form of multimer-forming polypeptides

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002001230A2 (en) 2000-06-23 2002-01-03 Minerva Biotechnologies Corporation Rapid and sensitive detection of protein aggregation
KR20070026363A (ko) * 2003-12-17 2007-03-08 엘란 파마슈티칼스, 인크. Ａβ 면역원성 펩티드 캐리어 컨쥬게이트 및 이의 제조방법
KR20130043088A (ko) * 2010-02-09 2013-04-29 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 면역검정 표준물 및 검정내 보정 표준물을 사용한 임상 바이오마커의 측정

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20220157821A (ko) 2021-05-21 2022-11-29 가천대학교 산학협력단 N-[(4'-브로모[1,1'-바이페닐]-4-일)설포닐]-l-발린 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 아밀로이드 베타의 올리고머화 및 피브릴화 억제용 조성물
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