KR101438969B1 - 무취 에바코어 코팅용 미생물 슈도모나스 나이트로리듀센스 및 이의 용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 공조장치에서 냄새를 유발시키지 않는 무취 바이오필름으로의 코팅에 이용되는 미생물 슈도모나스 나이트로리듀센스 (Pseudomonas nitroreducens) 및 이를 이용하여 바이오필름으로 코팅시킨 공조장치 내 냄새를 유발시키지 않는 무취 에바코어에 관한 것이다.
본 발명의 무취 미생물 및 무취 에바코어를 통해 공조 장치에 있어서 냄새를 유발하는 미생물의 증식을 억제시킬 수 있어 종래 대비 쾌적한 실내 환경이 조성될 수 있다.

Description

무취 에바코어 코팅용 미생물 슈도모나스 나이트로리듀센스 및 이의 용도{Pseudomonas nitroreducens for Odorless Bioflim-Coated Evaporator Core and uses thereof}

본 발명은 공조 장치에 있어서 냄새를 유발하는 미생물의 증식을 억제시키기 위해 무취 미생물로 바이오필름으로 코팅시킨 무취 에바코어 및 이의 제조 방법과 에바코어에 냄새를 유발하지 않는 미생물 슈도모나스 나이트로리듀센스에 관한 것이다.

깨끗한 공기는 인간의 건강과 웰빙에 기본으로 인식된다. 예를들면, 밀폐된 건물에서 불만족스러운 실내 공기질로 이끌어 갈 수 있는 두 가지 중요한 요인을 가지고 있다. 하나는 제거되거나 희석되어야 할 많은 양의 실내공기오염물질을 야기하는 건물 자체와, 다른 한 요인은 인간 활동에 의해 발생되는 냄새의 발생이다.

공조 시스템은 공기의 온도, 습도, 기류 및 청정도를 조화시키는 공기 조화에 목적을 두어 실내의 온도를 낮추고 실내 환경을 최적화시키는 시스템이다. 이러한 공조 시스템은 생활 수준의 향상으로 인해 보급률이 점점 증가하고 있다. 공조 시스템의 보급률의 증가로 기본적인 기능은 많은 발전이 있어왔으나, 실내 공기의 질을 위한 환경적 측면으로는 아직 해결해야 할 문제가 많이 남아있다.

공조 시스템 중에 특히, 에어컨 냄새의 원인은 곰팡이와 세균의 대사 물질이 에어컨 냄새인 것으로 알려져 있으나 해당 곰팡이와 세균이 구체적으로 어떠한 대사 물질을 얼마나 분비하는지에 대한 구체적인 자료는 아직까지 밝혀지지 않은 상태에 있다.

공조 장치의 구조상, 블로워를 통과한 모든 공기는 에바코어를 통과하게 되는데, 차가운 냉매와 공기의 열교환시, 에바코어 표면에는 온도차에 따른 응축수 응결 현상이 발생되고, 이 응축수 응결이 지속되면 에바코어 표면에는 곰팡이 및 세균이 서식, 번식하기 좋은 환경이 제공된다. 외부 공기에 노출된 에바코어에 곰팡이 및 세균이 증식한 상태에서, 에바코아 표면에 증식한 세균의 대사 물질로 미생물의 휘발성유기화합물(mVOCs)이 발생하며, 에바코어를 통과한 공기가 실내로 송풍되면, 이때 미생물에 의해 발생한 휘발성유기화합물에 의해서, 장기간 사용시에 실내는 곰팡이 및 세균에 의한 악취에 노출될 수 있다.

악취가 발생하는 에바코어 표면은 장기간의 사용에 따라 바이오 필름으로 덮여 있고, 이들은 박테리아, 셀클러스터, EPS로 구성되는데, EPS는 단백질(Protein), 폴리사카라이드, 폴리우론산(Polyuronic acid), 핵산(Nucletic), 지질(Lipid) 등의 다양한 성분을 포함하는 바, 에바코어 표면에서는 다양한 세균, 곰팡이가 바이오 필름을 양분 삼아 증식하며 대사물질로 미생물에 의한 유기화?물(mVOCs)를 배출하게 되며 이것이 에어컨 악취의 여러 요인 중에 부폐취로 알려져 있다.

이에 본 발명자는 대한민국 공개특허 10-2012-0020309에서 에바코어 표면에 악취의 원인을 제공하는 세균, 곰팡이의 증착 및 번식이 방지될 수 있도록 에바코어 표면에 무취 혹은 향기나는 특정 미생물로 형성된 바이오필름을 코팅시키는 바이오필름층이 코팅된 에바코어를 발명한 바 있다.

하지만, 상기 발명에서는 어떠한 세균이 무취 미생물인지에 대한 확인이 미흡한 상태에 있었다.

상기한 배경기술로서 설명된 사항들은 본 발명의 배경에 대한 이해 증진을 위한 것일 뿐, 이 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 이미 알려진 종래기술에 해당함을 인정하는 것으로 받아들여져서는 안 될 것이다.

이에 본 발명자들은 공조 장치에 있어서 냄새를 유발하는 미생물의 증식을 억제시키기 위해 어떠한 미생물이 무취 미생물로서 바이오필름으로 코팅시켰을 때 무취 에바코어로 이용가능한지에 대하여 연구한 결과 에바코어에 냄새를 유발하지 않는 미생물 슈도모나스 나이트로리듀센스를 확인하였다.

본 발명은 공조장치에서 냄새를 유발시키지 않는 무취 바이오필름으로의 코팅에 이용되는 미생물 슈도모나스 나이트로리듀센스 HKMC-9 (Pseudomonas nitroreducens HKMC-9)(KCCM11333P)를 제공하는 것을 그 목적으로 한다.

본 발명은 슈도모나스 나이트로리듀센스 HKMC-9 (Pseudomonas nitroreducens HKMC-9)(KCCM11333P)가 바이오필름으로 코팅된 공조장치 내 냄새를 유발시키지 않는 무취 에바코어를 제공하는 것을 그 목적으로 한다.

본 발명은

(i) 에바코어 표면에 슈도모나스 나이트로리듀센스 HKMC-9 (Pseudomonas nitroreducens HKMC-9)(KCCM11333P) 번식에 유리한 배지를 도포하는 단계;

(ii) 상기 배지가 도포된 표면에 슈도모나스 나이트로리듀센스 HKMC-9 (Pseudomonas nitroreducens HKMC-9)(KCCM11333P)를 부착하는 단계; 및

(iii) 상기 슈도모나스 나이트로리듀센스 HKMC-9 (Pseudomonas nitroreducens HKMC-9)(KCCM11333P)를 번식시켜 바이오필름을 형성하는 배양 단계;

를 포함하는 공조장치 내 냄새를 유발시키지 않는 무취 에바코어 제조 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.

본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 공조장치에서 냄새를 유발시키지 않는 무취 바이오필름으로의 코팅에 이용되는 미생물 슈도모나스 나이트로리듀센스 HKMC-9 (Pseudomonas nitroreducens HKMC-9)(KCCM11333P)를 제공한다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 슈도모나스 나이트로리듀센스 HKMC-9 (Pseudomonas nitroreducens HKMC-9)(KCCM11333P)가 바이오필름으로 코팅된 공조장치 내 냄새를 유발시키지 않는 무취 에바코어를 제공한다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은

(i) 에바코어 표면에 슈도모나스 나이트로리듀센스 HKMC-9 (Pseudomonas nitroreducens HKMC-9)(KCCM11333P) 번식에 유리한 배지를 도포하는 단계;

(ii) 상기 배지가 도포된 표면에 슈도모나스 나이트로리듀센스 HKMC-9 (Pseudomonas nitroreducens HKMC-9)(KCCM11333P)를 부착하는 단계;및

(iii) 상기 슈도모나스 나이트로리듀센스 HKMC-9 (Pseudomonas nitroreducens HKMC-9)(KCCM11333P)를 번식시켜 바이오필름을 형성하는 배양 단계;

를 포함하는 공조장치 내 냄새를 유발시키지 않는 무취 에바코어 제조 방법을 제공한다.

본 발명의 특징 및 이점은 하기와 같다.

(i) 본 발명은 공조장치에서 냄새를 유발시키지 않는 무취 바이오필름으로의 코팅에 이용되는 미생물 슈도모나스 나이트로리듀센스 HKMC-9 (Pseudomonas nitroreducens HKMC-9)(KCCM11333P)및 이를 이용하여 바이오필름으로 코팅시킨 공조장치 내 냄새를 유발시키지 않는 무취 에바코어에 관한 것이다.

(ii) 본 발명의 무취 미생물 및 무취 에바코어를 통해 공조 장치 내에 악취 미생물의 번식을 억제하여 실내에서 악취를 제거할 수 있다.

도 1은 알루미늄 핀을 멸균시키고 먼지를 포함하는 영양 배지에 Dipping하고 이후 슈도모나스 나이트로리듀센스 HKMC-9 (Pseudomonas nitroreducens HKMC-9)(KCCM11333P)를 접종 시키기 위한 패트리디쉬 사진이다.

본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 공조장치에서 냄새를 유발시키지 않는 무취 바이오필름으로의 코팅에 이용되는 미생물 슈도모나스 나이트로리듀센스 (Pseudomonas nitroreducens)을 제공한다. 보다 바람직하게는 무취 바이오필름으로서의 코팅에 이용되는 미생물은 슈도모나스 나이트로리듀센스 HKMC-9 (Pseudomonas nitroreducens HKMC-9)(KCCM11333P)이다. 본 슈도모나스 나이트로리듀센스를 2012년 11월 14일 한국미생물 보존센터에 기탁하였다. 상기 슈도모나스 나이트로리듀센스 HKMC-9 (Pseudomonas nitroreducens HKMC-9)(KCCM11333P)외에도 메틸로박테리움 아쿠아티쿰 HKMC-1 (Methylobacterium aquaticum HKMC-1)(KCCM11325P), 메틸로박테리움 브라키아툼 HKMC-2(Methylobacterium brachiatum HKMC-2)(KCCM11326P), 메틸로박테리움 플래타니 HKMC-3 (Methylobacterium platani HKMC-3)(KCCM11327P), 아시네토박터 존스니 HKMC-4(Acinetobacter johnsonii HKMC-4)(KCCM11328P), 바실러스 베트나멘시스 HKMC-5(Bacillus vietnamensis HKMC-5)(KCCM11329P), 브레비바실러스 인보카투스 HKMC-6(Brevibacillus invocatus HKMC-6)(KCCM11330P), 데이노코쿠스 피쿠스 HKMC-7(Deinococcus ficus HKMC-7)(KCCM11331P), 레이프소니아 솔리 HKMC-8(Leifsonia soli HKMC-8)(KCCM11332P), 스핑고모나스 아쿠아틸리스 HKMC-10 (sphingomonas aquatilis HKMC-10)(KCCM11334P) 및 메틸로박테리움 코마가태 HKMC-11(Methylobacterium komagatae HKMC-11)(KCCM11335P)을 2012년 11월 14일 한국미생물 보존센터에 기탁하였다.

본 발명의 바이오필름을 코팅할 수 있는 대상은 냉방장치이며, 냉방 장치는 압축기, 블로워, 에바코어 등을 포함하는데, 특히 본원 발명의 바이오 필름을 코팅시킬 수 있는 대상은 에바코어이다. 냉방 장치는 가정용 냉방 장치, 자동차용 냉방 장치 등 어떠한 냉방 장치의 에바코어에도 모두 적용될 수 있는 것이다. 보다 바람직하게는 자동차용 냉방 장치의 에바코어에 이용될 수 있다.

에바코어의 냉각 작용에 의해 실내의 공기는　온도가 낮아 지게 되며, 공기중의 습도가 응축 되어 수분이 발생하게 되며, 이 때 생긴 수분　즉 응축수는 에바코어 내부의 배출구조를 통해 차량 외부로 빠지게 되므로, 에바코어의 악취 미생물 조절을 통해 차량 내부로 공기 유입시 악취 제거를 조절할 수 있다.

즉, 악취 미생물의 번식을 억제할 수 있도록 미리 무취 미생물을 번식시키는 것이다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 슈도모나스 나이트로리듀센스 HKMC-9 (Pseudomonas nitroreducens HKMC-9)가 바이오필름으로 코팅된 공조장치 내 냄새를 유발시키지 않는 무취 에바코어를 제공한다.

또한, 본 발명에서는 슈도모나스 나이트로리듀센스 HKMC-9 (Pseudomonas nitroreducens HKMC-9)(KCCM11333P)가 바이오필름으로 코팅된 이외에도, 바이오필름으로 코팅하기 위해 상기 미생물 이외에 메틸로박테리움 아쿠아티쿰 HKMC-1 (Methylobacterium aquaticum HKMC-1)(KCCM11325P), 메틸로박테리움 브라키아툼 HKMC-2(Methylobacterium brachiatum HKMC-2)(KCCM11326P), 메틸로박테리움 플래타니 HKMC-3 (Methylobacterium platani HKMC-3)(KCCM11327P), 아시네토박터 존스니 HKMC-4(Acinetobacter johnsonii HKMC-4)(KCCM11328P), 바실러스 베트나멘시스 HKMC-5(Bacillus vietnamensis HKMC-5)(KCCM11329P), 브레비바실러스 인보카투스 HKMC-6(Brevibacillus invocatus HKMC-6)(KCCM11330P), 데이노코쿠스 피쿠스 HKMC-7(Deinococcus ficus HKMC-7)(KCCM11331P), 레이프소니아 솔리 HKMC-8(Leifsonia soli HKMC-8)(KCCM11332P), 스핑고모나스 아쿠아틸리스 HKMC-10 (sphingomonas aquatilis HKMC-10)(KCCM11334P) 및 메틸로박테리움 코마가태 HKMC-11(Methylobacterium komagatae HKMC-11)(KCCM11335P)로 구성된 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 미생물을 추가적으로 포함하여 코팅시키는 것을 특징으로 하는 공조장치 내 냄새를 유발시키지 않는 무취 에바코어를 제공할 수 있으며, 반드시 상기 미생물에 한정되는 것은 아니며, 다양한 미생물의 조합을 통해 무취의 효과가 나타날 수 있는 모든 미생물이 가능하다.

에바코어의 재질은 알루미늄 또는 알루미늄 합금인 것을 특징으로 하며, 에바코어에 항균처리를 한 알루미늄 또는 알루미늄 항균처리를 하지 않은 합급 재질을 이용하여 에바코어를 제조한다. 하지만 에바코어의 재질은 알루미늄 또는 알루미늄 합금에 한정되지 않으며, 일반적으로 에바코어는 알루미늄 이외에도 구리(동) 등 열전도율이 좋고 내부식성 뛰어난 금속은 모두 재질로 이용 가능하며 합금 제조로도 이용 가능하며, 전기차 등에는 펠티어(PELTIER) 소자에 열 교환기를 연결하여 사용할 수 있으며, 이처럼 열교환을 용이하게 하는 동일 유사한 구조라면 모두 재질로 이용할 수 있다.

본 발명의 슈도모나스 나이트로리듀센스 HKMC-9 (Pseudomonas nitroreducens HKMC-9) 바이오필름은 냄새를 유발시키는 미생물의 번식을 억제시키는 것으로 냄새를 유발시키지 않도록 한다.

에바코어의 표면에 바이오필름이 코팅되는 경우, 악취의 원인이 되는 세균 및 곰팡이의 증착, 번식이 방지된다. 즉, 에바코어 표면에 미리 특정 미생물 등을 이용하여 바이오필름을 코팅하는 경우, 이러한 특정 미생물 등과 다른 환경에서 서식하는 타 종류의 세균 및 곰팡이는 에바코어 표면에서 증착, 번식할 수 없다.

무취 바이오필름은 한 종류의 미생물으로만 구성되는 것에 한정되지 않으며, 상기 슈도모나스 나이트로리듀센스 HKMC-9 (Pseudomonas nitroreducens HKMC-9)(KCCM11333P)가 바이오필름으로 코팅된 에바코어는 상기 미생물 이외에 메틸로박테리움 아쿠아티쿰 HKMC-1 (Methylobacterium aquaticum HKMC-1)(KCCM11325P), 메틸로박테리움 브라키아툼 HKMC-2(Methylobacterium brachiatum HKMC-2)(KCCM11326P), 메틸로박테리움 플래타니 HKMC-3 (Methylobacterium platani HKMC-3)(KCCM11327P), 아시네토박터 존스니 HKMC-4(Acinetobacter johnsonii HKMC-4)(KCCM11328P), 바실러스 베트나멘시스 HKMC-5(Bacillus vietnamensis HKMC-5)(KCCM11329P), 브레비바실러스 인보카투스 HKMC-6(Brevibacillus invocatus HKMC-6)(KCCM11330P), 데이노코쿠스 피쿠스 HKMC-7(Deinococcus ficus HKMC-7)(KCCM11331P), 레이프소니아 솔리 HKMC-8(Leifsonia soli HKMC-8)(KCCM11332P), 스핑고모나스 아쿠아틸리스 HKMC-10 (sphingomonas aquatilis HKMC-10)(KCCM11334P) 및 메틸로박테리움 코마가태 HKMC-11(Methylobacterium komagatae HKMC-11)(KCCM11335P)로 구성된 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 미생물을 추가적으로 포함하여 코팅시킨 바이오필름은 냄새를 유발시키는 미생물의 번식을 억제시키는 것으로 냄새를 유발시키지 않도록 한다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은

(i) 에바코어 표면에 슈도모나스 나이트로리듀센스 HKMC-9 (Pseudomonas nitroreducens HKMC-9) 번식에 유리한 배지를 도포하는 단계;

(ii) 상기 배지가 도포된 표면에 슈도모나스 나이트로리듀센스 HKMC-9 (Pseudomonas nitroreducens HKMC-9)를 부착하는 단계;및

(iii) 상기 슈도모나스 나이트로리듀센스 HKMC-9 (Pseudomonas nitroreducens HKMC-9)를 번식시켜 바이오필름을 형성하는 배양 단계;

를 포함하는 공조장치 내 냄새를 유발시키지 않는 무취 에바코어 제조 방법을 제공한다.

상기 단계 (i)에서 번식에 유리한 배지를 도포하는 단계는 미생물의 증착을 용이하게 하기 위한 수단으로 자연적으로 미생물이 증착될 수 있도록 한다면 생략이 가능한 단계이다.

상기 단계 (ii)에서 슈도모나스 나이트로리듀센스 HKMC-9 (Pseudomonas nitroreducens HKMC-9) 이외에 메틸로박테리움 아쿠아티쿰 HKMC-1 (Methylobacterium aquaticum HKMC-1)(KCCM11325P), 메틸로박테리움 브라키아툼 HKMC-2(Methylobacterium brachiatum HKMC-2)(KCCM11326P), 메틸로박테리움 플래타니 HKMC-3 (Methylobacterium platani HKMC-3)(KCCM11327P), 아시네토박터 존스니 HKMC-4(Acinetobacter johnsonii HKMC-4)(KCCM11328P), 바실러스 베트나멘시스 HKMC-5(Bacillus vietnamensis HKMC-5)(KCCM11329P), 브레비바실러스 인보카투스 HKMC-6(Brevibacillus invocatus HKMC-6)(KCCM11330P), 데이노코쿠스 피쿠스 HKMC-7(Deinococcus ficus HKMC-7)(KCCM11331P), 레이프소니아 솔리 HKMC-8(Leifsonia soli HKMC-8)(KCCM11332P), 스핑고모나스 아쿠아틸리스 HKMC-10 (sphingomonas aquatilis HKMC-10)(KCCM11334P) 및 메틸로박테리움 코마가태 HKMC-11(Methylobacterium komagatae HKMC-11)(KCCM11335P)로 구성된 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 미생물을 추가적으로 바이오필름으로 코팅시켜 다양한 무취 미생물 군의 조합을 통해서도 무취 바이오 필름을 제조할 수 있으며 이를 통해 악취 미생물의 번식을 억제시킨다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 에바코어 표면은 그 재질이 알루미늄 또는 알루미늄 합금을 이용할 수 있으며, 상기 알루미늄 또는 알루미늄 합금은 항균처리를 한 에바코어를 제조한 후에 무취 미생물을 접종하여 바이오필름을 제조할 수 있다. 또한 알루미늄 또는 알루미늄 합금은 항균처리를 하지 않고 미생물 접종을 통하여 바이오 필름을 제조할 수 있다.

이하, 첨부된 도면들을 참조하면서 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 에바코어에서 무취 미생물의 동정 및 이를 이용한 공조장치용 무취 바이오필름에 대해 상세히 설명하기로 한다.

1. 실시예 1 : 악취 냄새 중고차 확보

No.	차종	sample 종류
1	차종 A	에바코어
2	차종 B	에바코어
3	차종 C	에바코어
4	차종 D	에바코어
5	차종 E	에바코어

본 발명자는 악취 냄새가 나는 중고차 5종을 확보하여 각각 차종 A 내지 차종 E에 장착되어 있는 에바코어를 떼어내어 에바코어 시편을 샘플링하고자 하였다.

2. 실시예 2 : 에바코어 시편 샘플링

상기 악취 중고차 A 내지 E로부터 확보한 에바코어로부터 에바코어 sample을 사용하기 전까지 4℃에서 냉장 보관되었으며, polyethylene bag으로 밀봉하여 보관하였다. 미생물을 분리 배양하기 위해 각각의 에바코어에서 전면부 및 후면부를 포함한 임의의 부위에서 fin 시료를 멸균된 롱 노즈 플라이어를 사용하여 각 5g씩 채취한 후 혼합하여 사용하였다.

3. 실시예 3 : 에바코어로부터 미생물의 탈리 과정

하기 과정을 통해 에바코어로부터 미생물의 탈리 절차 및 방법에 대하여 서술하였다.　

① 에바코어에서 추출한 시료를 섞어 mixer에 넣는다.

② 멸균된 1× Phosphate buffed saline(PBS)를 200ml mixer에 넣는다.

③ 혼합된 시료와 PBS를 30초간 mixing 한다.

④ mixer를 ice에 1분간 둔다.

⑤ ③-④ step을 2회 추가 반복한다.

⑥ 현탁액을 13000rpm 4℃에서 3분간 centrifuge한다.

⑦ 상등액만을 취해서 새 tube에 옮겨 담는다.

⑧ 멸균된 면봉을 상등액에 적셔 샘플을 채취한 에바코어의 표면을 수회 닦아낸다.

⑨ 닦아낸 면봉은 상등액에 head만을 넣고 votexing 한다.

⑩ ⑥번 step에서 획득한 침전물과 ⑨번 혼합물을 섞어 접종원액으로 사용한다.

상기 ① 내지 ⑩의 과정을 차종 A 내지 차종 E에 장착되어 있는 에바코어에 대하여 각각 물리적 탈리를 시행하여 미생물을 분리하였다.

4. 실시예 4 : 박테리아의 분리 배양

에어컨의 세균의 분리는 일반적으로 일반세균이라 하는 호기성 종속영양 세균을 종속영양 평판 배양을 통하여 분리한다. 일반세균의 분리에 사용하는 복합영양배지는 PTYG agar medium, R2A agar medium 2가지를 사용한다. PTYG agar medium은 Peptone 0.25g (Difco), Triptone 0.25g (Difco), Yeast extract 0.5g (Difco), Glucose 0.5g (Difco), MgSO₄ 30mg (Sigma), CaCl₂ 3mg (Sigma), Bacto agar 15g (Difco)을 증류수 980ml에 넣고 pH 7.0으로 맞춘 후 121℃에서 15분간 고압멸균 하였다. R2A arar medium은 Yeast extract 0.5g (Difco), Proteose peptone No.3 0.5g (Difco), Casamino acids 0.5g (Difco), Dextrose 0.5g (Difco), Soluble starch 0.5g (Difco), Sodium pyruvate 0.3g (Difco), Dipotassium sulfate 0.3g (Difco), Magnesium sulfate 0.05g (Difco), Bacto agar 15g (Difco)을 증류수 980ml에 넣고 pH 7.2를 맞춘 뒤 121℃에서 15분간 고압멸균 하였다. 비우점 일반세균의 분리를 위하여 3가지 종류의 항생제를 사용하며 (표 2), 각 항생제는 100ppm의 농도로 필터멸균 후 배지온도가 50℃ 정도 되었을 때 접종하여 항생제 medium을 제작하였다.

No.	항생제	계열	제조사
1	Kanamycin	Aminoglycoside	Sigma
2	Ampicillin	beta-lactam	Sigma
3	Chloramphenicol	Chloramphenicol	Sigma

5. 실시예 5 : 진균(곰팡이)의 분리 배양

에어컨 진균(곰팡이)의 분리배양은 영양배지에서 호기성평판배양을 통하여 분리한다. 진균(곰팡이)의 분리배양에 사용하는 배지는 Potato dextrose agar medium, Malt extract agar medium 2가지를 사용하였다. Potato dextrose agar medium은 Potato starch 4g (Difco), Dextrose 20g (Difco), Bacto agar 15g (Difco)를 증류수 980ml에 넣고 pH 5.1을 맞춘 뒤 121℃에서 15분간 고압멸균하였다. Malt extract agar medium은 Malt extract 20g (Difco), Bacto agar 15g (Difco)를 증류수 980ml에 넣고 pH 5.0을 맞춘 뒤 121℃에서 15분간 고압멸균하였다.

진균의 분리 배양을 위하여 90mm×15mm의 petri dish를 사용하였고, 배양된 진균을 각각 분리 배양하기 위해서는 60mm×15mm의 petri dish가 사용되었다.

6. 실시예 6 : 에바코어 미생물이 배양된 전체 배지에서 우점 균주의 분리 배양

우점 균주를 분리배양하기 위해서는 우선 희석비율과 콜로니 색, 크기, 모양 등 morphology적인 접근을 통하여 여러 가지 우점 균주를 선별하여야 하므로, 하기 절차에 따라 우점 균주를 분리 배양한다.

　

① 분리배양 된 배지에서 곰팡이와 박테리아를 구분하여 분리한다.

② morphology가 다른 여러 가지 세균을 loop를 사용하여 복합배지에 접종 순수 분리한다.

③ 접종된 배지 중 가장 생육이 좋은 배지를 선택하여 계대 배양한다.

④ 곰팡이는 균사의 끝부분을 scalpel을 사용하여 분리한 뒤 복합배지에 접종한다.

⑤ 곰팡이 균주도 접종된 배지 중 가장 생육이 좋은 배지를 선택하여 계대 배양한다.

7. 실시예 7 : 에바코어 우점 박테리아의 유전적 특성의 분석

REP-PCR 패턴 분석을 통한 핑거프린트(Fingerprints)조사

REP-PCR은 세균 염색체의 구조를 분석하는 분자생물학적 방법으로서 각 세균 균주를 다른 세균과 구별하여 식별할 수 있는 fingerprinting 방법이다. REP-PCR을 수행하기 위해 하기의 각 절차에 따라 유전적 특성을 분석하였다.

　

(1) Cell lysis 절차

① Lyse-N-Go PCR Reagent (Thermo) 2.5㎕를 PCR tube에 담는다.

② 클린벤치에서 콜로니를 피펫으로 따서 위 tube에 넣고 pipetting한다. 이 때 따는 양은 용액이 약간 뿌옇게 될 정도로 되지 않도록 주의한다.

③ Manufacturer의 지시에 따라 PCR machine에서 배양한다.

④ 하기의 표 3에 기재되어 있는 Lysis 프로그램에 의한 사이클을 반복하고, 9 사이클에서 80℃가 되었을 때 끄지 말고 그대로 둔다.

Cycle	Temperature(℃)	Time(seconds)
1	65	30
2	8	30
3	65	90
4	97	180
5	8	60
6	65	180
7	97	60
8	65	60
9	80	hold

(2) PCR reaction

하기 표 4에 기재되어 있는 PCR 반응에 필요한 성분들을 필요한 양에 맞게 혼합하여 반응 혼합물을 제조하였고 이를 이용하여 표 5에 기재된 바와 같이 예비 변성 단계(pre-denaturation) 94℃에서 7 분, 변성 단계(denaturation) 92℃에서 1분, 냉각 단계(annealing)에서 51.5℃에서 1분, 연장(extension) 단계에서 65℃에서 8분간 변성, 냉각, 연장 과정을 33회 반복하여 PCR 증폭 과정을 수행하였다.

①	dNTP (2.5mM each)		12.5 ㎕
②	Gitschier buffer		5.0 ㎕
③	DMSO (100%)		2.5 ㎕
④	Autoclaved 3o D.W.		0.3 ㎕
⑤	BOXA1R primer(50 pmole/㎕)		1.0 ㎕
	5'CTACGGCAAGGCGACGCTGACG
⑥	BSA (10㎎/㎖)		0.4 ㎕
⑦	Bacterial DNA		2.5㎕
⑧	Taq polymerase(Roche) (5 U/㎕)		0.8 ㎕

step 1	93℃	7min
step 2	92℃	1min
step 3	51.5℃	1min
step 4	65℃	8min
step 2,3,4 : additional 33 cycles
step 6	65℃	16min
step 7	4℃

(3) Gel electrophoresis

각각의 PCR에 의해 증폭된 DNA 단편을 취하여EtBr을 첨가한 1.2-1.5 % agarose gel을 사용하며, 6x dye를 sample과 1:5비율로 섞어 가능한 많은 양을 loading하였다. 대부분의 PCR product들은 100~1000 bp 사이에 있으므로 100bp ladder를 함께 loading하여, 가능한 한 천천히 (50 V) bromophenol blue와 xylene cyanol dye의 중간이 전체 gel의 중간까지 가도록 전기 영동한다. gel상의 DNA pattern이 같은 균주는 동일한 균주로 간주한다.

(4) 에어컨 우점 박테리아의 16S rRNA 유전자 분석을 통한 동정

16S rRNA(ribosomal Ribonucleic acid) 유전자는 박테리아의 유전학적 분류 동정을 위해 사용되며, REP-PCR을 통하여 분류된 박테리아의 genus 및 species 수준에서의 동정이 가능하다. 16S rRNA는 다양한 단백질들과 상호작용하여 리보솜(Ribosome)을 구성하는 RNA로서, 그 완전한 서열이나 올리고뉴클레오티드(Oligonucleotide) 목록에 대한 염기서열이 2000 종 이상의 세균에서 밝혀졌기 때문에 16S rRNA의 유전자 유사성에 근거하여 세균을 몇 가지 주요군으로 나눌 수 있다. 상기 16S rRNA 유전자 염기서열의 변화율이 대부분의 게놈에 있는 다른 유전자 염기서열보다 월등히 적기 때문에 16S rRNA 염기서열 유사도의 정도가 생물간의 계통학적 거리를 반영하는 것으로 인식되고 있다. 상기 16S rRNA 유전자 절편의 염기서열을 분석하여 그 유사도에 따라 미생물을 동정하는 방법은 상술한 지방산 분석 및 탄수화물 자화능 분석법과 함께 미생물, 특히 산업적으로 유용한 미생물을 동정하는데 대표적인 동정방법으로 이용되어 왔다.

<16S rRNA PCR>

PCR condtions (Total 50㎕) : DNA와 Taq를 제외한 나머지 용액을 하기 표 6에 기재되어 있는 것과 같이 필요량만큼 혼합하여 위 lysis 용액에 44.5㎕를 가하였다. 이 후 표 7에 기재되어 있는 바와 같이 예비 변성 단계(pre-denaturation) 94℃에서 5분, 변성 단계(denaturation) 94℃에서 1분, 냉각 단계(annealing) 55℃에서 1분, 연장 단계(extension) 72℃에서 1분 30초를 수행하고, 변성, 냉각 및 연장 단계를 29회 수행하여 PCR 증폭 과정을 수행하였다.

	Autoclaved 3o D.W.	22㎕
	10xbuffer (Roche)	5㎕
	dNTP (Roche, 2.5mM)	5㎕
	DMSO	5㎕
	BSA (10mg/ml)	2.5㎕
	27mf (20pmole/㎕)	2.5㎕
	1492r (20pmole/㎕)	2.5㎕
	DNA	5㎕
	Taq (Roche)	0.5㎕

step 1	94℃	5min
step 2	94℃	1min
step 3	55℃	1min
step 4	72℃	1min 30sec
Go to step 2 : additional 29 cycles
step 6	72℃		10min
step 7	4℃		hold

(5) PCR purification

16S-rRNA PCR을 통해 증폭한 산물을 Qiaquick PCR purifcation kit를 이용하여 하기의 절차에 따라 Purification하였다.　

① PCR product의 5배의 PB buffer를 넣는다.

② 혼합된 액을 QIAquick column에 분주한다.

③ DNA를 binding하기 위하여 1분간 centrifuge 한 후 통과된 혼합액을 제거한다.

④ wash를 위하여 750㎕의 PE buffer를 QIAquick column에 넣고 1분간 centrifuge한 뒤 통과된 혼합액을 제거한다.

⑤ 1분간 다시 centrifuge한다.

⑥ QIAquick column 새 tube에 옮긴다.

⑦ DNA를 추출하기 위하여 30㎕의 EB buffer를 넣고 1분간 둔다.

⑧ 1분간 centrifuge하여 EB에 녹은 DNA를 tube에 모이게 한다.

(6) 분리한 각 미생물의 명칭 및 미생물의 특성

<미생물 1>

1. 미생물의 명칭 : HKMC-1

속 명 : Methylobacterium

종 명 : aquaticum

2. 복원조건

가. 복원제

(1) 조성 : PTYG medium (1 L 당 Peptone 0.25 g, Triptone 0.25 g, Yeast extract 0.5 g, Glucose 0.5 g, MgSO₄ 30 mg, CaCl₂ 3 mg) 또는 R2A medium.

(2) pH : 7.0

(3) 살균조건 : 121℃에서 20분

나. 온도(℃) 28℃에서 7일간 배양

3. 배지

(1) 조성 : PTYG medium (1 L 당 Peptone 0.25 g, Triptone 0.25 g, Yeast extract 0.5 g, Glucose 0.5 g, MgSO₄ 30 mg, CaCl₂ 3 mg) 또는 R2A medium.

(2) pH : 7.0

(3) 살균조건 : 121℃에서 20분

4. 배양조건

가. 호기성, 혐기성 : 호기성

나. 온도(℃) 28℃

다. 진탕, 정치(액체,고체) 구분없이 사용가능

5. 보존조건

온도(℃) -70℃

6. 16S rRNA 유전자 시퀀스

서열번호 1

<미생물 2>

1. 미생물의 명칭 : HKMC-2

속 명 : Methylobacterium

종 명 : brachiatum

2. 복원조건

가. 복원제

(1) 조성 : PTYG medium (1 L 당 Peptone 0.25 g, Triptone 0.25 g, Yeast extract 0.5 g, Glucose 0.5 g, MgSO₄ 30 mg, CaCl₂ 3 mg) 또는 R2A medium.

(2) pH : 7.0

(3) 살균조건 : 121℃에서 20분

나. 온도(℃) 28℃에서 7일간 배양

3. 배지

(1) 조성 : PTYG medium (1 L 당 Peptone 0.25 g, Triptone 0.25 g, Yeast extract 0.5 g, Glucose 0.5 g, MgSO₄ 30 mg, CaCl₂ 3 mg) 또는 R2A medium.

(2) pH : 7.0

(3) 살균조건 : 121℃에서 20분

4. 배양조건

가. 호기성, 혐기성 : 호기성

나. 온도(℃) 28℃

다. 진탕, 정치(액체,고체) 구분없이 사용가능

5. 보존조건

온도(℃) -70℃

6. 16S rRNA 유전자 시퀀스

서열번호 2

<미생물 3>

1. 미생물의 명칭 : HKMC-3

속 명 :Methylobacterium

종 명 :platani

2. 복원조건

가. 복원제

(1) 조성 : PTYG medium (1 L 당 Peptone 0.25 g, Triptone 0.25 g, Yeast extract 0.5 g, Glucose 0.5 g, MgSO₄ 30 mg, CaCl₂ 3 mg) 또는 R2A medium.

(2) pH : 7.0

(3) 살균조건 : 121℃에서 20분

나. 온도(℃) 28℃에서 7일간 배양

3. 배지

(1) 조성 : PTYG medium (1 L 당 Peptone 0.25 g, Triptone 0.25 g, Yeast extract 0.5 g, Glucose 0.5 g, MgSO₄ 30 mg, CaCl₂ 3 mg) 또는 R2A medium.

(2) pH : 7.0

(3) 살균조건 : 121℃에서 20분

4. 배양조건

가. 호기성, 혐기성 : 호기성

나. 온도(℃) 28℃

다. 진탕, 정치(액체,고체) 구분없이 사용가능

5. 보존조건

온도(℃) -70℃

6. 16S rRNA 유전자 시퀀스

서열번호 3

<미생물 4>

1. 미생물의 명칭 : HKMC-4

속 명 :Acinetobacter

종 명 :johnsonii

2. 복원조건

가. 복원제

(1) 조성 : PTYG medium (1 L 당 Peptone 0.25 g, Triptone 0.25 g, Yeast extract 0.5 g, Glucose 0.5 g, MgSO₄ 30 mg, CaCl₂ 3 mg) 또는 R2A medium.

(2) pH : 7.0

(3) 살균조건 : 121℃에서 20분

나. 온도(℃) 28℃에서 7일간 배양

3. 배지

(1) 조성 : PTYG medium (1 L 당 Peptone 0.25 g, Triptone 0.25 g, Yeast extract 0.5 g, Glucose 0.5 g, MgSO₄ 30 mg, CaCl₂ 3 mg) 또는 R2A medium.

(2) pH : 7.0

(3) 살균조건 : 121℃에서 20분

4. 배양조건

가. 호기성, 혐기성 : 호기성

나. 온도(℃) 28℃

다. 진탕, 정치(액체,고체) 구분없이 사용가능

5. 보존조건

온도(℃) -70℃

6. 16S rRNA 유전자 시퀀스

서열번호 4

<미생물 5>

1. 미생물의 명칭 : HKMC-5

속 명 :Bacillus

종 명 :vietnamensis

2. 복원조건

가. 복원제

(1) 조성 : PTYG medium (1 L 당 Peptone 0.25 g, Triptone 0.25 g, Yeast extract 0.5 g, Glucose 0.5 g, MgSO₄ 30 mg, CaCl₂ 3 mg) 또는 R2A medium.

(2) pH : 7.0

(3) 살균조건 : 121℃에서 20분

나. 온도(℃) 28℃에서 7일간 배양

3. 배지

(1) 조성 : PTYG medium (1 L 당 Peptone 0.25 g, Triptone 0.25 g, Yeast extract 0.5 g, Glucose 0.5 g, MgSO₄ 30 mg, CaCl₂ 3 mg) 또는 R2A medium.

(2) pH : 7.0

(3) 살균조건 : 121℃에서 20분

4. 배양조건

가. 호기성, 혐기성 : 호기성

나. 온도(℃) 28℃

다. 진탕, 정치(액체,고체) 구분없이 사용가능

5. 보존조건

온도(℃) -70℃

6. 16S rRNA 유전자 시퀀스

서열번호 5

<미생물 6>

1. 미생물의 명칭 : HKMC-6

속 명 :Brevibacillus

종 명 :invocatus

2. 복원조건

가. 복원제

(1) 조성 : PTYG medium (1 L 당 Peptone 0.25 g, Triptone 0.25 g, Yeast extract 0.5 g, Glucose 0.5 g, MgSO₄ 30 mg, CaCl₂ 3 mg) 또는 R2A medium.

(2) pH : 7.0

(3) 살균조건 : 121℃에서 20분

나. 온도(℃) 28℃에서 7일간 배양

3. 배지

(1) 조성 : PTYG medium (1 L 당 Peptone 0.25 g, Triptone 0.25 g, Yeast extract 0.5 g, Glucose 0.5 g, MgSO₄ 30 mg, CaCl₂ 3 mg) 또는 R2A medium.

(2) pH : 7.0

(3) 살균조건 : 121℃에서 20분

4. 배양조건

가. 호기성, 혐기성 : 호기성

나. 온도(℃) 28℃

다. 진탕, 정치(액체,고체) 구분없이 사용가능

5. 보존조건

온도(℃) -70℃

6. 16S rRNA 유전자 시퀀스

서열번호 6

<미생물 7>

1. 미생물의 명칭 : HKMC-7

속 명 :Deinococcus

종 명 :ficus

2. 복원조건

가. 복원제

(1) 조성 : PTYG medium (1 L 당 Peptone 0.25 g, Triptone 0.25 g, Yeast extract 0.5 g, Glucose 0.5 g, MgSO₄ 30 mg, CaCl₂ 3 mg) 또는 R2A medium.

(2) pH : 7.0

(3) 살균조건 : 121℃에서 20분

나. 온도(℃) 28℃에서 7일간 배양

3. 배지

(1) 조성 : PTYG medium (1 L 당 Peptone 0.25 g, Triptone 0.25 g, Yeast extract 0.5 g, Glucose 0.5 g, MgSO₄ 30 mg, CaCl₂ 3 mg) 또는 R2A medium.

(2) pH : 7.0

(3) 살균조건 : 121℃에서 20분

4. 배양조건

가. 호기성, 혐기성 : 호기성

나. 온도(℃) 28℃

다. 진탕, 정치(액체,고체) 구분없이 사용가능

5. 보존조건

온도(℃) -70℃

6. 16S rRNA 유전자 시퀀스

서열번호 7

<미생물 8>

1. 미생물의 명칭 : HKMC-8

속 명 :Leifsonia

종 명 :soli

2. 복원조건

가. 복원제

(1) 조성 : PTYG medium (1 L 당 Peptone 0.25 g, Triptone 0.25 g, Yeast extract 0.5 g, Glucose 0.5 g, MgSO₄ 30 mg, CaCl₂ 3 mg) 또는 R2A medium.

(2) pH : 7.0

(3) 살균조건 : 121℃에서 20분

나. 온도(℃) 28℃에서 7일간 배양

3. 배지

(1) 조성 : PTYG medium (1 L 당 Peptone 0.25 g, Triptone 0.25 g, Yeast extract 0.5 g, Glucose 0.5 g, MgSO₄ 30 mg, CaCl₂ 3 mg) 또는 R2A medium.

(2) pH : 7.0

(3) 살균조건 : 121℃에서 20분

4. 배양조건

가. 호기성, 혐기성 : 호기성

나. 온도(℃) 28℃

다. 진탕, 정치(액체,고체) 구분없이 사용가능

5. 보존조건

온도(℃) -70℃

6. 16S rRNA 유전자 시퀀스

서열번호 8

<미생물 9>

1. 미생물의 명칭 : HKMC-9

속 명 : Pseudomonas

종 명 : nitroreducens

2. 복원조건

가. 복원제

(1) 조성 : PTYG medium (1 L 당 Peptone 0.25 g, Triptone 0.25 g, Yeast extract 0.5 g, Glucose 0.5 g, MgSO₄ 30 mg, CaCl₂ 3 mg) 또는 R2A medium.

(2) pH : 7.0

(3) 살균조건 : 121℃에서 20분

나. 온도(℃) 28℃에서 7일간 배양

3. 배지

(1) 조성 : PTYG medium (1 L 당 Peptone 0.25 g, Triptone 0.25 g, Yeast extract 0.5 g, Glucose 0.5 g, MgSO₄ 30 mg, CaCl₂ 3 mg) 또는 R2A medium.

(2) pH : 7.0

(3) 살균조건 : 121℃에서 20분

4. 배양조건

가. 호기성, 혐기성 : 호기성

나. 온도(℃) 28℃

다. 진탕, 정치(액체,고체) 구분없이 사용가능

5. 보존조건

온도(℃) -70℃

6. 16S rRNA 유전자 시퀀스

서열번호 9

<미생물 10>

1. 미생물의 명칭 : HKMC-10

속 명 :Sphingomonas

종 명 :aquatilis

2. 복원조건

가. 복원제

(1) 조성 : PTYG medium (1 L 당 Peptone 0.25 g, Triptone 0.25 g, Yeast extract 0.5 g, Glucose 0.5 g, MgSO₄ 30 mg, CaCl₂ 3 mg) 또는 R2A medium.

(2) pH : 7.0

(3) 살균조건 : 121℃에서 20분

나. 온도(℃) 28℃에서 7일간 배양

3. 배지

(1) 조성 : PTYG medium (1 L 당 Peptone 0.25 g, Triptone 0.25 g, Yeast extract 0.5 g, Glucose 0.5 g, MgSO₄ 30 mg, CaCl₂ 3 mg) 또는 R2A medium.

(2) pH : 7.0

(3) 살균조건 : 121℃에서 20분

4. 배양조건

가. 호기성, 혐기성 : 호기성

나. 온도(℃) 28℃

다. 진탕, 정치(액체,고체) 구분없이 사용가능

5. 보존조건

온도(℃) -70℃

6. 16S rRNA 유전자 시퀀스

서열번호 10

<미생물 11>

1. 미생물의 명칭 : HKMC-11

속 명 :Methylobacterium

종 명 :komagatae

2. 복원조건

가. 복원제

(1) 조성 : PTYG medium (1 L 당 Peptone 0.25 g, Triptone 0.25 g, Yeast extract 0.5 g, Glucose 0.5 g, MgSO₄ 30 mg, CaCl₂ 3 mg) 또는 R2A medium.

(2) pH : 7.0

(3) 살균조건 : 121℃에서 20분

나. 온도(℃) 28℃에서 7일간 배양

3. 배지

(1) 조성 : PTYG medium (1 L 당 Peptone 0.25 g, Triptone 0.25 g, Yeast extract 0.5 g, Glucose 0.5 g, MgSO₄ 30 mg, CaCl₂ 3 mg) 또는 R2A medium.

(2) pH : 7.0

(3) 살균조건 : 121℃에서 20분

4. 배양조건

가. 호기성, 혐기성 : 호기성

나. 온도(℃) 28℃

다. 진탕, 정치(액체,고체) 구분없이 사용가능

5. 보존조건

온도(℃) -70℃

6. 16S rRNA 유전자 시퀀스

서열번호 11

8. 실시예 8 : 분리한 미생물의 관능 평가

(1) 영양배지에서의 관능 평가

상기 실시예 7로부터 동정한 미생물의 관능적 특성분석을 위하여 미생물을 분리한 영양배지에서 7일간 28℃ 에서 배양한 후 평가를 실시하였다. 하기에 박테리아를 영양배지에서 배양하는 과정을 기술하였다.

① 순수분리배양 된 미생물을 액체영양배지에 접종한다.

② 접종된 배지를 28℃ 에서 5-7일간 배양한다.

③ 고체영양배지에 액체배지에서 배양된 균체를 100㎕ 취하여 접종한다.

④ 접종한 균체를 spreader를 이용하여 골고루 퍼지게 한다.

⑤ 패트리디쉬를 밀봉하여 28℃ 에서 10일간 배양한다.

(2) 알루미늄 핀 배지에서의 관능 평가

사각형 크기의 알루미늄 핀을 멸균 처리하였고, 이를 먼지 및 영양 배지에 Dipping 시켰다. 이 후 박테리아를 접종하여 상기 영양배지에서의 단계 ② - ④에 기재된 조건과 동일하게 하여 배양시킨 후 평가를 실시하였고 이를 하기 표 8에 관능 평가 결과를 기재하였다.

① 항균제가 처리된 알루미늄 핀 : 에바코어의 주재료인 알루미늄위에 항균 코팅까지 한 것으로 양산되는 시중에서 구매가 충분히 가능한 에바코어 완제품의 코팅이다.

② 항균제 처리가 되지않은 친수코팅처리만 된 알루미늄 핀: 에바코어의 코팅 공정 중 친수 공정 만을 거친 알루미늄 핀이다. 보통은 친수 공정과 항균공정이 동시에 이루어진다. 항균성 코팅핀과 항균성이 없는 코팅핀을 비교하기 위해 특별히 제작한 것이다. 에바코어는 경량화를 위해 알루미늄 핀으로 제작되지만 동 재질steel 재질등 다양한 금속으로도 제조가 가능하다.

NO.	항균제핀	무항균제핀	16S rRNA
1	무취	무취	Methylobacterium aquaticum HKMC-1
2	무취	무취	Methylobacterium brachiatum HKMC-2
3	무취	무취	Methylobacterium platani HKMC-3
4	무취	무취	Acinetobacter johnsonii HKMC-4
5	무취	무취	Bacillus vietnamensis HKMC-5
6	무취	무취	Brevibacillus invocatus HKMC-6
7	무취	무취	Deinococcus ficus HKMC-7
8	무취	무취	Leifsonia soli HKMC-8
9	무취	무취	Pseudomonas nitroreducens HKMC -9
10	무취	무취	Sphingomonas aquatilis HKMC-10
11	무취	무취	Methylobacterium komagatae HKMC-11

알루미늄 항균제핀 및 무항균제핀에서 모두 상기 11종의 미생물을 접종하여 배양한 결과 모두 무취인 결과가 나타났다. 상기 무취 미생물의 활용분야는 금속 재질에 관계없이 에어컨의 에바코어에 서식하는 미생물에 의한 악취를 방지할 목적으로 충분히 사용될 수 있다.

한국미생물보존센터(국외) KCCM11325P 20121114 한국미생물보존센터(국외) KCCM11326P 20121114 한국미생물보존센터(국외) KCCM11327P 20121114 한국미생물보존센터(국외) KCCM11328P 20121114 한국미생물보존센터(국외) KCCM11329P 20121114 한국미생물보존센터(국외) KCCM11330P 20121114 한국미생물보존센터(국외) KCCM11331P 20121114 한국미생물보존센터(국외) KCCM11332P 20121114 한국미생물보존센터(국외) KCCM11333P 20121114 한국미생물보존센터(국외) KCCM11334P 20121114 한국미생물보존센터(국외) KCCM11335P 20121114

<110> Hyundai Motor Company <120> Methylobacterium brachiatum for Odorless Bioflim-Coated Evaporator Core and uses thereof <160> 11 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 1411 <212> DNA <213> Methylobacterium aquaticum HKMC-1 <220> <221> rRNA <222> (1)..(1411) <223> 16S rRNA <400> 1 cagagcgaac gctggcggca ggcttaacac atgcaagtcg agcgggccct tcggggtcag 60 cggcagacgg gtgagtaacg cgtgggaacg tgcccttcgg ttcggaataa ctcagggaaa 120 cttgagctaa taccggatac gcccttatgg ggaaaggctt gactgccgaa ggatcggccc 180 gcgtctgatt agctagttgg tgaggttacg gctcaccaag gcgacgatca gtagctggtc 240 tgagaggatg atcagccaca ctgggactga gacacggccc agactcctac gggaggcagc 300 agtggggaat attggacaat gggggcaacc ctgatccagc catgccgcgt gagtgatgac 360 ggccttaggg ttgtaaagct ctttctccgg gacgataatg acggtaccgg aggaataagc 420 cccggctaac ttcgtgccag cagccgcggt aatacgaagg gggctagcgt tgctcggaat 480 cactgggcgt aaagggcgcg taggcggctg atttagtcga gggtgaaagc ccgtggctca 540 accacggaat ggccttcgat actggttggc ttgagaccgg aagaggacag cggaactgcg 600 agtgtagagg 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brachiatum HKMC-2 <220> <221> rRNA <222> (1)..(1416) <223> 16S rRNA <400> 2 ggctgagaga gaacgggggg ggcaggttta acacatacaa gtagagggga cctttggggg 60 tcagcggcgg acgggtgagt aacgcgtggg aacgtgccct ctggttcgga ataactcagg 120 gaaacttgag ctaataccgg atacgccctt ttggggaaag gcttgctgcc ggaggatcgg 180 cccgcgtctg attagctagt tggtgaggta acggctcacc aaggcgacga tcagtagctg 240 gtctgagagg atgatcagcc acactgggac tgagacacgg cccagactcc tacgggaggc 300 agcagtgggg aatattggac aatgggcgca agcctgatcc agccatgccg cgtgagtgat 360 gaaggcctta gggttgtaaa gctcttttat ccgggacgat aatgacggta ccggaggaat 420 aagccccggc taacttcgtg ccagcagccg cggtaatacg aagggggcta gcgttgctcg 480 gaatcactgg gcgtaaaggg cgcgtaggcg gcgttttaag tcgggggtga aagcctgtgg 540 ctcaaccaca gaatggcctt cgatactggg acgcttgagt atggtagagg ttggtggaac 600 tgcgagtgta gaggtgaaat tcgtagatat tcgcaagaac accggtggcg aaggcggcca 660 actggaccat tactgacgct gaggcgcgaa agcgtgggga gcaaacagga ttagataccc 720 tggtagtcca cgccgtaaac gatgaatgcc agctgttggg gtgcttgcac ctcagtagcg 780 cagctaacgc 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gaggaacacc gatggcgaag gcaggtttct ggacagaagg tgacgctgag gcgcgaaagt 720 gtggggagcg aaccggatta gatacccggg tagtccacac cctaaacgat gtacgttggc 780 ctatggcagg atgctgtcat gggcgaagct aacgcgataa acgtaccgcc tgggaagtac 840 ggccgcaagg ttgaaactca aaggaattga cgggggcccg cacaagcggt ggagcatgtg 900 gtttaattcg aagcaacgcg aagaacctta ccaggtcttg acatcccaag aacctcccag 960 agatgggagg gtgcccctcg gggaacttgg agacaggtgc tgcatggctg tcgtcagctc 1020 gtgtcgtgag atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa cccttgcctt tagttgccag 1080 cacttcgggt gggcactcta gagggactgc cggtgaaagc cggaggaagg cggggatgac 1140 gtctagtcag catggtcctt acgacctggg cgacacacgt gctacaatgg atggtacaac 1200 gcgcagccag cccgcgaggg tgagcgaatc gctgaaagcc atccccagtt cagatcggag 1260 tctgcaactc gactccgtga agttggaatc gctagtaatc gcgggtcagc ataccgcggt 1320 gaatacgttc ccgggccttg tacacaccgc ccgtcacacc atgggagtac gttgcagttg 1380 aaaccgccgg gagccgcaag gcaggcgtct agactgtggc gcatgactgg ggtgaagtcg 1440 ta 1442 <210> 8 <211> 1455 <212> DNA <213> Leifsonia soli HKMC-8 <220> <221> rRNA 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agctaacgca ttaagcgccc 840 cgcctgggga gtacggccgc aaggctaaaa ctcaaaggaa ttgacggggg cccgcacaag 900 cggcggagca tgcggattaa ttcgatgcaa cgcgaagaac cttaccaagg cttgacatat 960 acgagaacgg gccagaaatg gtcaactctt tggacactcg taaacaggtg gtgcatggtt 1020 gtcgtcagct cgtgtcgtga gatgttgggt taagtcccgc aacgagcgca accctcgttc 1080 tatgttgcca gcgcgtaatg gcgggaactc ataggagact gccggggtca actcggagga 1140 aggtggggat gacgtcaaat catcatgccc cttatgtctt gggcttcacg catgctacaa 1200 tggccggtac aaagggctgc aataccgtaa ggtggagcga atcccaaaaa gccggtctca 1260 gttcggattg aggtctgcaa ctcgacctca tgaagtcgga gtcgctagta atcgcagatc 1320 agcaacgctg cggagaatac ctacccgggc cttgtacaca ccgcccgtca agtcatgaaa 1380 gtcggtaaca cccgaagcca ttggcccaac ccttgtggag ggagctgtcc aaggtgggat 1440 cggtgattac cagtt 1455 <210> 9 <211> 1471 <212> DNA <213> Pseudomonas nitroreducens HKMC-9 <220> <221> rRNA <222> (1)..(1471) <223> 16S rRNA <400> 9 ggctcagatt gaacgctggc ggcaggccta acacatgcaa gtcgagcgga tgagtggagc 60 ttgctccatg attcagcggc ggacgggtga gtaatgccta ggaatctgcc tggtagtggg 120 ggacaacgtt tcgaaaggaa cgctaatacc gcatacgtcc tacgggagaa agcaggggac 180 cttcgggcct tgcgctatca gatgagccta ggtcggatta gctagttggt ggggtaaagg 240 cctaccaagg cgacgatccg taactggtct gagaggatga tcagtcacac tggaactgag 300 acacggtcca gactcctacg ggaggcagca gtggggaata ttggacaatg ggcgaaagcc 360 tgatccagcc atgccgcgtg tgtgaagaag gtcttcggat tgtaaagcac tttaagttgg 420 gaggaagggc agtaagttaa taccttgctg ttttgacgtt accaacagaa taagcaccgg 480 ctaacttcgt gccagcagcc gcggtaatac gaagggtgca agcgttaatc ggaattactg 540 ggcgtaaagc gcgcgtaggt ggtttggtaa gatggatgtg aaatccccgg gctcaacctg 600 ggaactgcat ccataactgc ctgactagag tacggtagag ggtggtggaa tttcctgtgt 660 agcggtgaaa tgcgtagata taggaaggaa caccagtggc gaaggcgacc acctggactg 720 atactgacac tgaggtgcga aagcgtgggg agcaaacagg attagatacc ctggtagtcc 780 acgccgtaaa cgatgtcgac tagccgttgg gatccttgag atcttagtgg cgcagctaac 840 gcgataagtc gaccgcctgg ggagtacggc cgcaaggtta aaactcaaat gaattgacgg 900 gggcccgcac aagcggtgga gcatgtggtt taattcgaag caacgcgaag aaccttacct 960 ggccttgaca tgtccggaac cttgcagaga tgcgagggtg ccttcgggaa tcggaacaca 1020 ggtgctgcat ggctgtcgtc agctcgtgtc gtgagatgtt gggttaagtc ccgtaacgag 1080 cgcaaccctt gtccttagtt accagcacgt tatggtgggc actctaagga gactgccggt 1140 gacaaaccgg aggaaggtgg ggatgacgtc aagtcatcat ggcccttacg gccagggcta 1200 cacacgtgct acaatggtcg gtacagaggg ttgccaagcc gcgaggtgga gctaatccca 1260 taaaaccgat cgtagtccgg atcgcagtct gcaactcgac tgcgtgaagt cggaatcgct 1320 agtaatcgtg aatcagaatg tcacggtgaa tacgttcccg ggccttgtac acaccgcccg 1380 tcacaccatg ggagtgggtt gctccagaag tagctagtct aaccgcaagg gggacggtta 1440 ccacggagtg attcatgact ggggtgaagt c 1471 <210> 10 <211> 1421 <212> DNA <213> Sphingomonas aquatilis HKMC-10 <220> <221> rRNA <222> (1)..(1421) <223> 16S rRNA <400> 10 ggctcagaac gaacgctggc ggcatgccta acacatgcaa gtcgaacgag atcttcgggt 60 ctagtggcgc acgggtgcgt aacgcgtggg aatctgccct ttggttcgga ataacagttg 120 gaaacgactg ctaataccgg atgatgacga aagtccaaag atttatcgcc agaggatgag 180 cccgcgtagg attagctagt tggtgtggta aaggcgcacc aaggcgacga tccttagctg 240 gtctgagagg atgatcagcc acactgggac tgagacacgg cccagactcc tacgggaggc 300 agcagtgggg aatattggac aatgggcgaa agcctgatcc agcaatgccg cgtgagtgat 360 gaaggcctta gggttgtaaa gctcttttac ccgggatgat aatgacagta ccgggagaat 420 aagctccggc taactccgtg ccagcagccg cggtaatacg gagggagcta gcgttgttcg 480 gaattactgg gcgtaaagcg cacgtaggcg gctttgtaag ttagaggtga aagcctggag 540 ctcaactcca gaactgcctt taagactgca tcgcttgaat ccaggagagg tgagtggaat 600 tccgagtgta gaggtgaaat tcgtagatat tcggaagaac accagtggcg aaggcggctc 660 actggactgg tattgacgct gaggtgcgaa agcgtgggga gcaaacagga ttagataccc 720 tggtagtcca cgccgtaaac gatgataact agctgtccgg ggacttggtc tttgggtggc 780 gcagctaacg cattaagtta tccgcctggg gagtacggcc gcaaggttaa aactcaaatg 840 aattgacggg ggcctgcaca agcggtggag catgtggttt aattcgaagc aacgcgcaga 900 accttaccag cgtttgacat gtccggacga tttccagaga tggatctctt cccttcgggg 960 actggaacac aggtgctgca tggctgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt 1020 cccgcaacga gcgcaaccct cgcctttagt taccatcatt tagttgggga ctctaaagga 1080 accgccggtg ataagccgga ggaaggtggg gatgacgtca agtcctcatg gcccttacgc 1140 gctgggctac acacgtgcta caatggcggt gacagtgggc agcaaactcg cgagagtgcg 1200 ctaatctcca aaagccgtct cagttcggat tgttctctgc aactcgagag catgaaggcg 1260 gaatcgctag taatcgcgga tcagcatgcc gcggtgaata cgttcccagg ccttgtacac 1320 accgcccgtc acaccatggg agttgggttc acccgaaggc gttgcgctaa ctcgcaagag 1380 aggcaggcga ccacggtggg cttagcgact ggggtgaagt c 1421 <210> 11 <211> 1419 <212> DNA <213> Methylobacterium komagatae HKMC-11 <220> <221> rRNA <222> (1)..(1419) <223> 16S rRNA <400> 11 ggctcagagc gaacgctggc ggcaggctta acacatgcaa gtcgagcggg cctttcgggg 60 tcagcggcgg acgggtgagt aacgcgtggg aacgtgcctt ctggttcgga ataactcagg 120 gaaacttgag ctaataccgg atacgccctt ttggggaaag gtttactgcc ggaagatcgg 180 cccgcgtctg attagctagt tggtggggta acggcctacc aaggcgacga tcagtagctg 240 gtctgagagg atgatcagcc acactgggac tgagacacgg cccagactcc tacgggaggc 300 agcagtgggg aatattggac aatgggcgca agcctgatcc agccatgccg cgtgagtgat 360 gaaggcctta gggttgtaaa gctcttttat ccgggacgat aatgacggta ccggaggaat 420 aagccccggc taacttcgtg ccagcagccg cggtaatacg aagggggcta gcgttgctcg 480 gaatcactgg gcgtaaaggg cgcgtaggcg gtcttttaag tcgggggtga aagcctgtgg 540 ctcaaccaca gaattgcctt cgatactggg agacttgagt tcggaagagg ttggtggaac 600 tgcgagtgta gaggtgaaat tcgtagatat tcgcaagaac accggtggcg aaggcggcca 660 actggtccga cactgacgct gaggcgcgaa agcgtgggga gcaaacagga ttagataccc 720 tggtagtcca cgccgtaaac gatgaatgcc agccgttggg gggcttgcct ctcagtggcg 780 cagctaacgc tttgagcatt ccgcctgggg agtacggtcg caagattaaa actcaaagga 840 attgacgggg gcccgcacaa gcggtggagc atgtggttta attcgaagca acgcgcagaa 900 ccttaccatc ctttgacatg gcgtgttacc cagagagatt tggggtccac ttcggtggcg 960 cgcacacagg tgctgcatgg ctgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc 1020 gcaacgagcg caacccacgt cctcagttgc catcattgag ttgggcactc tggggagact 1080 gccggtgata agccgcgagg aaggtgtgga tgacgtcaag tcctcatggc ccttacggga 1140 tgggctacac acgtgctaca atggcggtga cagtgggaag cgaacccgcg aggggaagca 1200 aatctccaaa agccgtctca gttcggattg cactctgcaa ctcgagtgca tgaaggcgga 1260 atcgctagta atcgtggatc agcatgccac ggtgaatacg ttcccgggcc ttgtacacac 1320 cgcccgtcac accatgggag ttggtcttac ccgacggcgc tgcgccgacc cgcgagggga 1380 gcaggcgacc acggtagggt cagcgactgg ggtgaagtc 1419

Claims (15)

1. 삭제
2. 삭제
3. 삭제
4. 삭제
5. 블로워 및 에바코어를 포함하는 냉방장치에 있어서,
   상기 에바코어에는 슈도모나스 나이트로리듀센스(Pseudomonas nitroreducens)가 바이오필름으로 코팅되어 냉방장치 내 냄새를 유발시키지 않는 것을 특징으로 하는 무취 에바코어.
   
6. 청구항 5에 있어서, 상기 슈도모나스 나이트로리듀센스가 바이오필름으로 코팅된 에바코어는 상기 슈도모나스 나이트로리듀센스 이외에 메틸로박테리움 아쿠아티쿰(Methylobacterium aquaticum), 메틸로박테리움 브라키아툼(Methylobacterium brachiatum), 메틸로박테리움 플래타니(Methylobacterium platani), 아시네토박터 존스니(Acinetobacter johnsonii), 바실러스 베트나멘시스(Bacillus vietnamensis), 브레비바실러스 인보카투스(Brevibacillus invocatus), 데이노코쿠스 피쿠스(Deinococcus ficus), 레이프소니아 솔리(Leifsonia soli), 스핑고모나스 아쿠아틸리스(sphingomonas aquatilis) 및 메틸로박테리움 코마가태(Methylobacterium komagatae)로 구성된 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 미생물을 추가적으로 포함하여 코팅시키는 것을 특징으로 하는 냉방장치 내 냄새를 유발시키지 않는 무취 에바코어.
   
7. 청구항 5에 있어서, 상기 에바코어는 그 재질이 알루미늄, 알루미늄 합금, 동 또는 동 합금인 것을 특징으로 하는 냉방장치 내 냄새를 유발시키지 않는 무취 에바코어.
   
8. 청구항 5에 있어서, 상기 슈도모나스 나이트로리듀센스 바이오필름은 냄새를 유발시키는 미생물의 번식을 억제시키는 것으로 냄새를 유발시키지 않는 것을 달성하는 것을 특징으로 하는 냉방장치 내 냄새를 유발시키지 않는 무취 에바코어.
   
9. 청구항 5에 있어서, 상기 슈도모나스 나이트로리듀센스가 바이오필름으로 코팅된 에바코어는 상기 슈도모나스 나이트로리듀센스 이외에 메틸로박테리움 아쿠아티쿰(Methylobacterium aquaticum), 메틸로박테리움 브라키아툼(Methylobacterium brachiatum), 메틸로박테리움 플래타니(Methylobacterium platani), 아시네토박터 존스니(Acinetobacter johnsonii), 바실러스 베트나멘시스(Bacillus vietnamensis), 브레비바실러스 인보카투스(Brevibacillus invocatus), 데이노코쿠스 피쿠스(Deinococcus ficus), 레이프소니아 솔리(Leifsonia soli), 스핑고모나스 아쿠아틸리스(sphingomonas aquatilis) 및 메틸로박테리움 코마가태(Methylobacterium komagatae)로 구성된 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 미생물을 추가적으로 포함하여 코팅시킨 바이오필름은 냄새를 유발시키는 미생물의 번식을 억제시키는 것으로 냄새를 유발시키지 않는 것을 달성하는 것을 특징으로 하는 공조장치 내 냄새를 유발시키지 않는 무취 에바코어.
   
10. 삭제
11. 삭제
12. 삭제
13. 블로워 및 에바코어를 포함하는 냉방장치에 있어서,
    상기 냉방장치에 슈도모나스 나이트로리듀센스(Pseudomonasnitroreducens)를 코팅함으로서 냉방장치 내 냄새를 유발하지 않는 것을 특징으로 하는 무취 바이오필름.
    
14. 청구항 13에 있어서, 상기 무취 바이오필름은 상기 슈도모나스 나이트로리듀센스 이외에 메틸로박테리움 아쿠아티쿰(Methylobacterium aquaticum), 메틸로박테리움 브라키아툼(Methylobacterium brachiatum), 메틸로박테리움 플래타니(Methylobacterium platani), 아시네토박터 존스니(Acinetobacter johnsonii), 바실러스 베트나멘시스(Bacillus vietnamensis), 브레비바실러스 인보카투스(Brevibacillus invocatus), 데이노코쿠스 피쿠스(Deinococcus ficus), 레이프소니아 솔리(Leifsonia soli), 스핑고모나스 아쿠아틸리스(sphingomonas aquatilis) 및 메틸로박테리움 코마가태(Methylobacterium komagatae)로 구성된 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 미생물을 추가적으로 포함하여 코팅시키는 것을 특징으로 하는 무취 바이오필름.
    
15. 청구항 13에 있어서, 상기 슈도모나스 나이트로리듀센스 바이오필름은 냄새를 유발시키는 미생물의 번식을 억제시키는 것으로 냄새를 유발시키지 않는 것을 달성하는 것을 특징으로 하는 무취 바이오필름.
    

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