KR101436614B1 - 금속 기반 이온성 액체를 이용한 금속 단백질 재접힘 방법 - Google Patents

금속 기반 이온성 액체를 이용한 금속 단백질 재접힘 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 금속 기반 이온성 액체를 이용하여 금속 단백질을 재접힘하는 방법에 관한 것으로, 본 발명에 따른 금속 단백질 재접힘 방법은 단백질 재접힘 버퍼에 사용되는 이온성 액체의 음이온 부분에 금속을 포함하는 화학종을 사용하여, 재접힘 공정의 공정시간과 온도를 최적화함으로써 금속 단백질의 재접힘 효율을 더욱 향상시킴으로, 금속 단백질을 대량으로 생산 또는 회수하는 공정에 유용하게 이용될 수 있다.

Description

금속 기반 이온성 액체를 이용한 금속 단백질 재접힘 방법{Method for refolding of metallo protein with metal-based ionic liquid}
본 발명은 금속 기반 이온성 액체를 이용한 금속 단백질의 재접힘 방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 시트레이트 버퍼용액에 금속 기반 이온성 액체를 가하여 얻어지는 단백질 재접힘 버퍼를 이용하여 금속 단백질의 재접힘 효율을 향상시키는 방법에 관한 것이다.
유전자 재조합 기술이 발달함에 따라 산업적으로 유용한 단백질의 생산을 위한 목적으로 미생물을 이용한 재조합 단백질 형태의 유용 유전자 산물을 효율적으로 생산하기 위한 기술이 많이 연구되고 있다. 이러한 재조합 단백질 생산을 위해 이용되는 숙주로는 대장균, 효모, 동물세포, 곤충세포 등이 있으며, 그 중 대장균은 다양한 발현 벡터의 응용 가능성, 높은 발현, 저렴한 생산 단가 등의 장점으로 인해 재조합 단백질 생산을 위한 숙주로 가장 널리 이용되고 있으나, 재조합 단백질을 과다 발현할 경우 대부분의 재조합 단백질에서 접힘이 제대로 이루어지지 못하는 문제점을 가지고 있다.
세포내에는 단백질의 접힘을 관장하는 기관이 존재하지만, 유전자 재조합 기술을 통한 외래 단백질이 과다 발현되면, 세포내 단백질 접힘을 수행하는 기관이 제 역할을 다하지 못하게 된다. 따라서, 단백질 본연의 3차구조로 접힘되지 못한 접힘 중간체 사이에 노출된 소수성 잔기들 간의 비공유성 결합에 의해 접힘 과정이 비정상적인 경로로 진행되어 내포체들이 형성되게 된다. 내포체(inclusion body)란 단백질의 비활성형의 응집체로 단백질 접힘이 제대로 이루어지지 못하여 단백질 본연의 올바른 단백질 3차 구조가 형성되지 않아서 생기는 균체내의 비수용성의 침전물을 뜻하는 것으로, 재조합 단백질 생산 과정 중에 발생하는 이러한 내포체들은 재접힘이라는 추가적인 공정을 통해 단백질 본연의 올바른 3차 구조와 단백질의 활성을 회복할 수 있다.
내포체로부터 활성형의 단백질을 얻기 위한 재접힘 공정은 변성제(denaturant)를 이용한 내포체의 가용화 단계와 변성제 제거 공정으로 구성된다. 변성제는 단백질의 재접힘 과정 중 재접힘 중간체들 사이의 소수성 잔기의 소수성 결합을 약화시키는 역할을 가짐으로써 내포체를 가용화 시킬 수 있다. 변성제로는 요소와 구아니딘 하이드로클로라이드(guanidine hydrochloride)가 주로 사용된다. 변성제를 사용하여 내포체를 가용화 시킨 후, 첨가된 변성제를 단계적으로 제거함으로 단백질의 3차 구조를 회복하는 것으로 알려져 있다. 변성제의 제거 방법에 따라 희석, 투석, 탈염 등의 방법이 사용되고 있으며, 가장 일반적으로 이용되고 있는 단백질 재접힘 방법은 희석법이 있으나, 과량의 버퍼, 커다란 반응기, 낮은 수율 및 무작위적인 이황화결합 등의 단점을 가지고 있다. 이러한 희석법의 단점을 극복하기 위한 연구로 분자 샤페론을 이용하여 내포체 형성을 방지 및 이황화 결합을 포함하는 단백질의 재접힘 경우 시스테인, 글루타치온과 같은 산화환원체가 첨가제로 사용되어 단백질의 재접힘 효율 증가 등을 들 수 있다.
모든 효소의 약 1/3 정도는 그 활성을 나타내기 위하여 특정 금속이온이 필요한 것으로 알려져 있다. 금속이온과 효소의 상호작용은 편의상 금속효소(metalloenzyme)와 금속-효소 복합체(metal-enzyme complex)로 나눌 수 있다. 금속 효소는 금속이온이 단백질의 특정 위치에 강력하게 결합하여 그 일부를 만들고 있기 때문에 생리적 조건하에서는 쉽게 해리되지 않는 반면, 금속-효소 복합체는 효소활성을 나타내기 위해서 특정 금속이온을 필요로 하지만, 효소의 금속이온의 결합이 약하기 때문에 쉽게 해리된다. 금속-효소 복합체를 만드는 금속은 나트륨(Na+), 칼륨(K+), 칼슘(Ca2 +), 마그네슘(Mg2 +) 같은 알칼리금속 및 알칼리토금속 이온, 망간(Mn2 +), 철(Fe2 +), 코발트(Co2 +), 니켈(Ni2 +), 구리(Cu2 +), 아연(Zn2 +) 등의 전이 금속 이온이 있다.
한편, 이온성 액체는 양이온과 음이온의 이온결합으로 이루어진 물질로서 일반적으로 180℃ 이상의 고온에서 녹는 반면 100℃ 이하의 넓은 온도범위에서 액체로 존재하며 고온에서도 안정적인 특징을 지니고 있는 것으로, 0에 가까운 증기압을 지니기 때문에 기존의 유기용매를 대체할 차세대 친환경용매로서 주목을 받고 있다. 이런 이온성 액체를 단백질의 재접힘 효율 증가를 위한 첨가제로 적용한 연구결과가 발표되고 있다. 예를 들어 단백질 3차구조 내 이황화결합을 포함하는 라이소자임의 재접힘에 있어 황을 포함하는 이온성 액체를 적용하여 변성된 단백질의 내포체 형성을 방지함으로써 희석법에 의하여 100%의 재접힘 효율을 달성(Bae et al. 2012. Science China Chemistry. 55(8) 1657-1662) 하였으며, 금속 단백질인 락케이즈 (laccase)의 재접힘을 위한 재접힘 버퍼에 구리를 첨가제로 사용하여 재접힘 효율을 향상시킨 연구가 보고된 바 있다(Salony et al. 2008. Biochimica et Biophysica Acta. 1784(2) 259-268). 그러나 단백질 재접힘 공정에 사용되는 재접힘 버퍼에 있어서 요소와 금속 단백질의 재접힘에 첨가되는 금속이온을 완전히 대체한 금속 기반 이온성 액체를 사용할 경우, 상온에서 이온성 액체는 기화되지 않고 100℃에서도 끓지 않기 때문에 물로부터 손쉽게 분리할 수 있다. 따라서 재접힘 공정 후 이온성 액체를 손쉽게 회수하여 재활용할 수 있을 것으로 기대된다.
본 발명에서는 이온성 액체의 음이온 부분을 금속 이온을 포함한 음이온으로 한정하고, 또한 재접힘 공정의 공정시간을 최적화함으로써 금속 단백질의 재접힘 효율을 더욱 향상시킬 수 있는 것을 확인한 것이다.
한국등록특허 제074813호에는 "이온성 액체를 이용하여 단백질을 재접힘 시키는 방법"이 개시되어 있으며, 한국등록특허 제1063347호에는 "이온성 액체를 이용한 이황화 결합을 포함하는 단백질의 재접힘 방법"이 개시되어 있으나, 본 발명에서와 같이 금속 기반 이온성 액체를 이용한 금속 단백질 재접힘에 관해서는 밝혀진 바가 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 이온성 액체의 음이온 부분을 금속 이온을 포함한 음이온으로 한정하고, 또한 재접힘 공정의 공정시간을 최적화함으로써 금속 단백질의 재접힘 효율을 향상시킬 수 있는 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 시트레이트 버퍼용액에 금속 기반 이온성 액체를 가하여 얻어지는 단백질 재접힘 버퍼를 이용하여 금속 단백질을 재접힘시키는 방법을 제공한다.
본 발명에서는 단백질 재접힘 버퍼에 사용되는 이온성 액체의 음이온 부분으로 금속을 포함하는 화학종을 사용하여, 재접힘 공정의 공정시간을 최적화함으로써 금속 단백질의 재접힘 효율을 더욱 향상시키므로 금속 단백질을 대량으로 생산 또는 회수하는 공정에 유용하게 이용될 수 있다.
도 1은 이온성 액체의 종류 및 재접힘 공정시간에 따른 금속 단백질 재접힘 효율을 나타낸다. 락케이즈 및 라이소자임 단백질 시료에 3가지 종류의 이온성 액체(1-에틸-3-메틸이미다졸륨 트리클로로커퍼레이트, 1-에틸-3-메틸이마다졸륨 메틸설페이트, 1-에틸-3-메틸이미다졸륨 테트라플루오로보레이트)를 포함하는 단백질 재접힘 버퍼에 따른 시간별(0-16시간) 금속 단백질 재접힘 효율을 백분율로 나타내었다.
도 2는 재접힘 온도에 따른 금속 단백질의 재접힘 효율을 나타낸다. 1-에틸-3-메틸이미다졸륨 트리클로로커퍼레이트를 포함하는 단백질 재접힘 버퍼 및 락케이즈 단백질 시료를 4℃, 25℃ 또는 37℃로 처리하여 시간별(0-16시간) 금속 단백질의 재접힘 효율을 백분율로 나타내었다.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 시트레이트 버퍼용액에 금속 기반 이온성 액체를 가하여 얻어지는 단백질 재접힘 버퍼를 이용하여 금속 단백질을 재접힘시키는 방법에 있어서, 이온성 액체의 양이온 부분의 화학종과 음이온 부분의 화학종을 적절하게 선택하고, 재접힘 공정의 공정시간과 온도를 최적화시킴으로써, 금속 단백질의 재접힘 효율을 향상시키는 이온성 액체를 이용한 금속 단백질 재접힘 방법을 제공한다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 방법에서, 상기 금속 단백질은 라케이즈(laccase) 일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 방법에서, 상기 이온성 액체는 바람직하게는 1-에틸-3-메틸이미다졸륨 트리클로로커퍼레이트 ([EMIm][CuCl3]) 또는 1-에틸-3-메틸이미다졸륨 트리플루오로커퍼레이트 ([EMIm][CuF3]) 일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 방법에서, 상기 이온성 액체의 양이온 부분은 치환되는 알킬기의 탄소 수가 2인 이미다졸륨인 것이 바람직하며, 음이온 부분은 트리클로로커퍼레이트([CuCl3]), 트리플루오로커퍼레이트([CuF3]) 등과 같은 구리를 포함하는 화학종이 바람직하나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 방법에서, 상기 재접힘 공정은 5~7시간 동안 수행되도록 조절하는 것이 바람직하며, 가장 바람직하게는 6시간이다. 만약, 상기 공정시간이 5시간 미만이면 재접힘된 금속 단백질보다 재접힘 과정 중에 있는 금속 단백질의 비율이 높으므로 전체적으로 낮은 재접힘 효율을 보이는 문제가 있고, 7시간을 초과하는 경우에는 금속 단백질의 안정성이 떨어져 결과적으로 활성을 잃는 금속 단백질의 비율이 증가하는 문제가 있다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 방법에서, 상기 재접힘 온도는 23~27℃ 일 수 있으며, 바람직하게는 25℃이다. 만약, 재접힘 온도가 23℃보다 낮으면 재접힘에 오랜 시간이 소요되는 문제가 있으며, 27℃보다 높으면 금속 단백질의 안정성이 떨어져 시간에 따라 금속 단백질의 활성이 급격히 감소하는 문제가 있다.
본 발명에 따른 금속 단백질 재접힘 방법은 이온성 액체의 종류 및 재접힘 공정시간에 따른 금속 단백질 재접힘 효율을 측정한 실험결과로부터 이온성 액체의 양이온 부분으로 소수성이 작은 화학종, 예를 들면 치환되는 알킬기의 탄소 수가 2인 이미다졸륨을, 음이온 부분으로 구리를 포함하는 화학종, 예를 들면 트리클로로커퍼레이트, 트리플루오로커퍼레이트 등을 사용하고, 25℃의 재접힘 온도에서, 공정시간을 6 시간으로 최적화함으로써 금속 단백질의 재접힘 효율을 더욱 향상시킬 수 있음을 알 수 있다 (실험예 1, 도 1 및 도 2 참조).
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
재료 및 방법
1. 단백질 시료
단백질 시료로는 용해 및 환원된 금속 단백질을 사용하기 위하여 6M 요소, 32mM DTT 및 1 mM EDTA를 포함하는 10mM의 시트레이트 버퍼(citrate buffer, pH 5.5) 용액에 락케이즈 (1㎎/㎖)를 6시간 동안 상온에서 방치한 용액을 단백질 재접힘 버퍼로 100배 희석하여 최종 농도 0.01㎎/㎖ 으로 희석하여 실험에 사용하였다. 또한, 대조군으로서 라이소자임을 사용하였다.
2. 금속 단백질 재접힘 실험
이온성 액체의 종류 및 재접힘 공정시간에 따른 금속 단백질 재접힘 효율을 알아보기 위하여 하기의 실험을 수행하였다. 단백질 재접힘 버퍼로는 대조군으로 10mM 시트레이트(citrate, pH 5.5)에 1.5M 요소를 포함하는 버퍼를 사용하였으며, 실험군으로는 3가지 종류의 이온성 액체 (10mM 시트레이트 버퍼(citrate buffer, pH 5.5)에 0.2% (부피%)의 1-에틸-3-메틸이미다졸륨 트리클로로커퍼레이트([EMIm][CuCl3]), 1-에틸-3-메틸이미다졸륨 메틸설페이트([EMIm][MS]) 또는 에틸-3-메틸이미다졸륨 테트라플루오로보레이트([EMIm][BF4]))를 포함하는 버퍼를 이용하였으며, 단백질 시료로는 락케이즈 또는 라이소자임을 이용하였다. 금속 단백질 재접힘 실험은 4℃, 25℃ 또는 37℃에서 16시간 동안 수행하였다.
3. 금속 단백질 재접힘 효율
락케이즈 단백질의 재접힘 되는 효율을 측정하기 위해서, 100mM 아세트산나트륨(pH 4.5) 버퍼에 ABTS가 0.5mM이 되도록 용해하여 420㎚ 흡광도의 증가를 상온에서 16시간 동안 측정하였으며, 라이소자임의 활성은 0.06M 인산칼륨(pH 6.2) 버퍼에 M.lysodeikticus를 0.25 ㎎/㎖가 되도록 용해하여 450㎚ 흡광도의 감소를 상온에서 16시간 동안 측정하였다
실시예 1. 이온성 액체 의 종류 및 재접힘 공정시간에 따른 금속 단백질 재접힘 효율
락케이즈 단백질 시료를 1-에틸-3-메틸이미다졸륨 트리클로로커퍼레이트([EMIm][CuCl3])를 포함하는 단백질 재접힘 버퍼를 사용하여 금속 단백질 재접힘 실험을 수행한 결과 재접힘 효율이 90% 이상으로 대조군보다 현저히 높았으며, 시간에 따른 단백질 재접힘 효율은 6시간에 가장 높았다(도 1). 이것은 공정시간이 6시간 미만이면 재접힘된 금속 단백질보다 재접힘 과정 중에 있는 금속 단백질의 비율이 높으므로 전체적으로 낮은 재접힘 효율을 보이는 문제가 있고, 6시간을 초과하는 경우에는 금속 단백질의 안정성이 떨어져 결과적으로 활성을 잃는 금속 단백질의 비율이 증가하는 문제가 있기 때문이다.
또한, 락케이즈 단백질 시료를 3 가지 종류의 이온성 액체인 1-에틸-3-메틸이미다졸륨 트리클로로커퍼레이트 ([EMIm][CuCl3]), 1-에틸-3-메틸이미다졸륨 메틸설페이트 ([EMIm][MS]) 또는 1-에틸-3-메틸이미다졸륨 테트라플루오로보레이트 ([EMIm][BF4])로 사용한 결과 이온성 액체의 음이온 부분이 메틸설페이트(MS)나 테트라플루오로보레이트(BF4)인 경우보다 트리클로로커퍼레이트(CuCl3)인 경우에 단백질 재접힘 효율이 월등히 높은 것을 알 수 있으며, 특히 이온성 액체의 음이온 부분이 트리클로로커퍼레이트(CuCl3)인 경우 대조군보다 3배 이상 단백질 재접힘 효율이 높은 것을 알 수 있었다(도 1).
실시예 2. 단백질 시료에 따른 금속 단백질 재접힘 효율
이온성 액체의 음이온 부분이 트리클로로커퍼레이트(CuCl3)인 경우에 단백질 재접힘 효율을 락케이즈 단백질과 라이소자임 단백질을 사용하여 살펴본 결과, 락케이즈 단백질 시료에 비해 라이소자임 단백질 시료를 사용하였을때, 재접힘 효율이 상대적으로 낮게 나타났으며(도 1), 이것은 1-에틸-3-메틸이미다졸륨 트리클로로커퍼레이트 ([EMIm][CuCl3])이 금속 단백질의 재접힘에 특이적으로 이용될 수 있음을 나타낸다.
실시예 3. 재접힘 온도에 따른 금속 단백질 재접힘 효율
재접힘 온도에 따른 금속 단백질의 재접힘 효율을 알아보기 위하여 하기의 실험을 수행하였다. 이온성 액체의 음이온 부분이 트리클로로커퍼레이트(CuCl3)일 때, 4℃, 25℃ 또는 37℃의 온도에서 금속 단백질 재접힘 실험을 수행한 결과 25℃에서 약 90%의 재접힘 효율을 나타내었으며, 이는 4℃ 또는 37℃에 비해 높은 단백질 재접힘 효율을 나타내었다(도 2). 그러므로, 재접힘 온도가 25℃인 경우에 단백질 재접힘 효율이 가장 높음을 알 수 있었다. 또한, 4℃의 경우 시간에 따른 금속 단백질의 활성 감소폭이 크진 않으나 재접힘에 많은 시간이 소요되며, 37℃의 경우 재접힘 소요 시간은 짧으나 금속 단백질의 활성이 오래 지속되지 않는 단점을 보였다. 따라서 재접힘 시 25℃의 온도 조건을 사용할 경우 금속 단백질의 재접힘 효율을 더욱 향상시킬 수 있음을 알 수 있었다.

Claims (6)

  1. 시트레이트(citrate) 버퍼용액에 이온성 액체를 가하여 얻어지는 단백질 재접힘 버퍼를 이용하여 금속 단백질을 재접힘시키는 방법에 있어서,
    상기 이온성 액체는 1-에틸-3-메틸이미다졸륨 트리클로로커퍼레이트 ([EMIm][CuCl3])를 사용하되, 재접힘 공정을 4~8시간 동안 수행함으로써, 금속 단백질의 재접힘 효율을 향상시키는 것을 특징으로 하는 이온성 액체를 이용한 금속 단백질 재접힘 방법.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 제1항에 있어서, 상기 재접힘 공정은 5~7시간 동안 수행하는 것을 특징으로 하는 이온성 액체를 이용한 금속 단백질 재접힘 방법.
  6. 제1항에 있어서, 상기 재접힘 공정은 23~27℃로 수행하는 것을 특징으로 하는 이온성 액체를 이용한 금속 단백질 재접힘 방법.
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Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100594548B1 (ko) * 1997-12-25 2007-05-14 아지노모토 가부시키가이샤 화장품 조성물

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