KR101428873B1

KR101428873B1 - Cosmetic composition comprising Phryma leptostachya var. asiatica Hara extract for skin whitening and improving skin wrinkle.

Info

Publication number: KR101428873B1
Application number: KR1020120136038A
Authority: KR
Inventors: 임창진; 김경훈
Original assignee: 강원대학교산학협력단
Priority date: 2012-11-28
Filing date: 2012-11-28
Publication date: 2014-08-12
Also published as: KR20140068487A

Abstract

본 발명은 파리풀 추출물의 기능성 화장료 조성물에 관한 것으로, 자세하게는 파리풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백 또는 피부 주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 파리풀 추출물은 피부에 부작용을 일으키지 않는 안정한 특징이 있고, 티로시나아제 활성을 저해하는 기작을 통하여 멜라닌 생성을 억제함으로써 미백 효과를 가지며, 히알루로니다아제 활성을 저해함으로써 피부 주름생성 및 노화를 방지할 수 있으므로, 이를 유효성분으로 포함하는 본 발명의 조성물은 피부에 자극을 일으키지 않는 피부 미백 및 주름 개선을 위한 기능성 화장품의 소재로 사용될 수 있을 것이다. The present invention relates to a functional cosmetic composition of Paraliptera extract. More particularly, the present invention relates to a cosmetic composition for skin whitening or skin wrinkle improvement comprising Paraliptera extract as an active ingredient. The paraliptha extract of the present invention has a stable characteristic that does not cause adverse effects on the skin, has a whitening effect by inhibiting melanin production through a mechanism of inhibiting tyrosinase activity, inhibits hyaluronidase activity, The composition of the present invention containing it as an active ingredient may be used as a material for functional cosmetics for whitening skin and improving wrinkles that do not cause skin irritation.

Description

A cosmetic composition for skin whitening and wrinkle improvement, comprising as an active ingredient an extract of Paraliptera. {Cosmetic composition comprising Phryma leptostachya var. asiatica Hara extract for skin whitening and improving skin wrinkle.

본 발명은 파리풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 기능성 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 파리풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부미백 및 주름개선 기능을 갖는 기능성 화장료 조성물에 관한 것이다. More particularly, the present invention relates to a functional cosmetic composition having a skin whitening and wrinkle-improving function, which comprises an extract of Paralgmula as an active ingredient.

피부는 외부 자극으로부터 우리 몸을 보호해주는 인체 최전방의 방어 장기이며, 미적인 관점에서도 그 관심이 점점 높아지고 있다. 이에 따라 다양한 기능성 화장품에 대한 연구가 활발한데, 그 중에서도 주름완화 및 미백기능에 대한 다양한 기능성 화장품들이 출시되고 있는 실정이다. Skin is the frontal defense body of the human body that protects our body from external stimuli, and its interest is increasing from an aesthetic point of view. Accordingly, various functional cosmetics have been actively researched. Among them, various functional cosmetics for wrinkle reduction and whitening function are being marketed.

피부 노화는 그 원인에 따라 크게 내적 노화와 외적 노화의 두 가지로 구분되는데, 내적 노화(intrinsic aging)는 연령이 증가함에 따라 생체의 생리적인 기능이 저하되어 자연적으로 유발되는 노화 현상(aging process)이고, 외적 노화 (extrinsic aging)는 자외선(UV), 건조한 공기 (dry air), 활성 산소종(reactive oxygen species) 및 스트레스 등의 외적 요인에 의해 발생하는 노화 현상이다. 이런 요인들에 의해 피부 노화가 진행되면, 피부 표면에 주름이 생성된다. Skin aging can be classified into two categories: internal aging and external aging. Intrinsic aging is an aging process in which physiological functions of the body are lowered with age, Extrinsic aging is an aging phenomenon caused by external factors such as ultraviolet (UV), dry air, reactive oxygen species and stress. When these factors cause aging of the skin, wrinkles are formed on the surface of the skin.

주름의 생성 원인으로는 여러 가지가 보고되고 있는데, 우선 피부가 과다한 자외선에 노출되면 피부 구성성분인 콜라겐(Collagen) 분해가 촉진되어 피부가 탄력을 잃고 주름이 생성될 수 있다. 또한, 피부가 과도한 온도변화 및 습도저하나 바람 등에 의해 지나치게 건조해지면 외부에 대한 방어벽으로서의 피부 기능이 저하되어 주름이 생기기도 한다. 그리고, 피부가 활성 산소종이나 자유 라디칼에 노출되면 산화 작용에 의해 과산화 지질이 생성되고 그로 인해 콜라겐 등의 피부 구성 단백질이 변형되어 주름이 생성될 수 있다. Several causes of wrinkles have been reported. Exposure to excessive ultraviolet rays of the skin promotes collagen degradation, which is a component of the skin, and the skin may lose elasticity and wrinkles. In addition, if the skin becomes excessively dry due to excessive temperature change, humidity reduction, wind or the like, skin function as a barrier against the outside may be deteriorated and wrinkles may occur. When the skin is exposed to active oxygen species or free radicals, lipid peroxidation is produced by the oxidative action, and the skin constituent proteins such as collagen are deformed and wrinkles can be formed.

한편, 피부 노화가 일어나면 피부의 각질화가 일어나고, 표피세포의 융합속도가 점차 느려지며, 표피세포층은 얇게 되고, 각질층은 두껍게 되며, 진피층과의 경계선은 직선으로 된다. 진피에서는 섬유아세포(human skin fibroblast)가 노화됨으로써 섬유질과 기질의 생산성이 저하되고, 세포내 과산화물 수치가 급격히 증가하며, 각종 오염물질과 스트레스 등에 영향을 받게 되어 세포의 기능을 원활히 수행할 수 없게 되고 세포의 대사활성이 저하되며, 그 결과 기능적, 구조적 손상으로 주름이 생기게 되고 이로 인해 피부노화가 촉진된다. 따라서 이러한 외부적 요인과 내부적 요인에 의한 피부노화나 주름 발생을 억제하고자 다양한 화장품 조성물이 연구되고 있는 실정이다.On the other hand, when skin aging occurs, keratinization of the skin occurs, the fusion rate of epidermal cells gradually decreases, the epidermal cell layer becomes thin, the stratum corneum becomes thick, and the boundary line with the dermal layer becomes straight. In the dermis, the aging of the human skin fibroblast deteriorates the productivity of the fibrous material and the substrate, increases the peroxide level in the cell rapidly, is affected by various contaminants and stresses, The metabolism activity of the cells is lowered, resulting in wrinkles due to functional and structural damage, thereby promoting skin aging. Therefore, various cosmetic compositions have been studied to suppress skin aging and wrinkles caused by external factors and internal factors.

한편, 피부에 자외선이 조사되면 피부 중 멜라노사이트가 활성화되어 효소 티로시나제 및 TRP1, TRP2의 작용에 의해 멜라닌 생성이 촉진된다. 생성된 멜라닌은 피부 중에 침착되어 "검버섯", "주근깨"로 발전하는데, 이것을 방지하기 위하여 다양한 화장품 조성물이 함유된 미백 화장품이 사용되고 있다. 또한, 자외선은 피지, 세포막 등의 산화를 촉진하여 각종 피부장애를 일으키는 것으로 밝혀지고 있으며, 특히 최근 오존층 파괴에 따른 자외선의 증가로 보다 효과적인 피부 산화 방지책이 요구되는 실정이다.On the other hand, when ultraviolet rays are irradiated on the skin, melanocytes in the skin are activated, and the production of melanin is promoted by the action of enzyme tyrosinase and TRP1 and TRP2. The resulting melanin is deposited in the skin to develop into "black spot" and "freckle ", and whitening cosmetics containing various cosmetic compositions are used to prevent this. In addition, it has been found that ultraviolet rays promote oxidation of sebum, cell membrane and the like to cause various skin disorders. In particular, recently, an increase in ultraviolet rays due to destruction of the ozone layer is required to more effectively prevent skin oxidation.

종래 알려진 미백 효과를 나타내는 성분은 아스코르브산인산에스테르염, 하이드로퀴논 유도체, 태반 추출물, 코지산, 엘라그산 등이 있으며, 이들 성분을 배합한 화장품 조성물이 일반적이다. 특히 근래에는 태반 추출물을 이용한 미백 화장품이 각광받고 있으나, 이런 태반 추출물은 그 공급량이 한정적이고 윤리적인 문제와 결합하여 그 사용이 제한적이다. 따라서, 신규하고 효과적인 미백 성분의 개발에 대한 관심이 집중되고 있다.Ingredients exhibiting a known whitening effect include ascorbic acid phosphoric acid ester salt, hydroquinone derivative, placenta extract, kojic acid, and elastase, and cosmetic compositions containing these components are common. Especially in recent years, whitening cosmetics using placenta extract have been attracting attention, but the use of such placenta extracts is limited due to limited supply and ethical problems. Therefore, attention is focused on the development of new and effective whitening ingredients.

최근에는 식물에 함유된 폴리페놀 등에 높은 미백 효과가 있는 것으로 보고되어 있으며, 이를 사용하는 화장품 조성물이 제안되고 있다. 또한, 플라바논류, 하이드록시플라본류의 미백 효과에 대해서도 이미 개시되어 있다. 그러나, 이들 미백 성분은 그 효과가 다소 미비하고 보존시 문제점이 있으며, 미백 효과 이외에 주름 방지 효과 및 노화 방지 효과를 충분히 발휘하지 못하는 실정이다. 특히 화학성분이 함유된 기능성 화장품의 경우 피부 자극을 유발하여 민감성 피부에 적합하지 않은 문제점이 있는바, 피부에 자극이 적고 친환경적인 천연 식물 유래의 기능성 화장품에 대한 관심이 집중되고 있다. Recently, it has been reported that there is a high whitening effect on polyphenols and the like contained in plants, and cosmetic compositions using the same have been proposed. In addition, whitening effects of flavanones and hydroxyflavones have already been disclosed. However, these whitening ingredients are somewhat ineffective and have a problem in storage, and in addition to the whitening effect, the wrinkle preventing effect and the anti-aging effect can not be sufficiently exhibited. In particular, functional cosmetics containing chemical components cause skin irritation, which is not suitable for sensitive skin, and attention is focused on functional cosmetics derived from natural plants that are less irritating to skin and environmentally friendly.

한편, 파리풀(Phryma leptostachya var. asiatica Hara)은 파리풀과의 여러해살이풀로서 우리나라 각처의 산과 들에서 나는 다년생 초본이다. 생육환경은 반그늘 혹은 양지의 토양이 비옥한 곳에서 자라며 키는 약 70이고, 잎은 길이가 7~9, 폭이 4~7로 잎자루가 길며 양면 특히 맥 위에 털이 많고 가장자리에 톱니가 있으며 넓은 난형이고 마주난다. 유독식물로서 뿌리의 즙을 종이에 먹여서 파리를 죽이기 때문에 파리풀이라고 하며, 뿌리 또는 포기 전체를 짓찧어서 종기옴 벌레 물린 데 등에 붙이면 해독하는 효능이 있다. 한국, 일본, 중국, 히말라야 산맥, 동시베리아 등지에 분포한다.Meanwhile, Phryma I have leptostachya . asiatica Hara) is a perennial herb which is a perennial herb that lives in the mountains and branches of various places in Korea. The growth environment grows in semi-shade or sunny soil fertile, about 70 in height, 7 ~ 9 in length, 4 ~ 7 in width, long petiole, hairy on both sides, especially veins, It is facing. It is a poisonous plant. It feeds the juice of roots to paper and kills flies, so it is called parapul. It has the effect of decrypting if it is stuck on the root or the abdomen and stuck on the bumblebee. It is distributed in Korea, Japan, China, Himalayas, eastern Siberia.

이러한 파리풀은 종래에 유충제거제, 살충제, 구충제 및 해독제로서 사용되어져 왔다. 또한 파리풀에서 분리된 리그난 성분(phrymarolins Ⅰ, Ⅱ, haedoxan A)이 천연 살충 효과가 있는 것으로 알려져 있으며, 우르솔릭산은 몇몇 쥣과 및 인간 암세포에 세포독성을 갖는다는 정도가 보고되고 있을 뿐이다.Such flies have conventionally been used as larval removers, pesticides, repellents and antidotes. In addition, the lignan components (phrymarolins Ⅰ, Ⅱ, haedoxan A) isolated from the flies are known to have a natural insecticidal effect, and the degree of the toxicity of the ergolic acid has been reported to some cytokines and human cancer cells.

이에 본 발명자들은 생체에 부작용이 없으면서 피부 미백 및 주름 개선 효과가 우수한 화장품 제조를 위한 새로운 소재로 천연물질을 모색하던 중, 파리풀 추출물에 주목하여 그 기능을 실험해 본 결과, 파리풀의 에탄올 추출물이 티로시나아제의 시험관내 활성을 효과적으로 억제하여 미백 효과를 나타내고, 히알우로니다아제의 활성도 현저히 억제하여 주름 개선 기능이 있음을 발견함으로써 본 발명을 완성하였다.Accordingly, the inventors of the present invention have focused on the extract of Paraliptera as a new material for the production of cosmetics having excellent skin whitening and wrinkle-reducing effect without any adverse effect on the living body, The present invention has been accomplished by discovering that the whitening effect is effectively inhibited by the in vitro activity of cinacalcet, and the activity of hyaluronidase is markedly suppressed to improve the wrinkle.

1. 일본 공개특허공보 제(평)6-16531호1. Japanese Unexamined Patent Publication (Kokai) No. 6-16531 2. 일본 공개특허공보 제(평)10-101543호2. Japanese Laid-Open Patent Publication No. 10-101543

따라서 본 발명의 목적은 생체에 부작용이 없으면서 피부 미백 및 주름 개선 효능이 있는 기능성 화장료 조성물을 제공하는 것이다.Accordingly, it is an object of the present invention to provide a functional cosmetic composition which has no side effects on the living body and has whitening and wrinkle-reducing effects.

상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위해서, 본 발명은 파리풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.In order to accomplish the object of the present invention, the present invention provides a cosmetic composition for skin whitening comprising an extract of Paraliptera as an active ingredient.

또한, 본 발명은 파리풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.Further, the present invention provides a cosmetic composition for improving skin wrinkles comprising Paraliptera extract as an active ingredient.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 파리풀 추출물은 건조된 파리풀 뿌리의 70% 에탄올 추출물일 수 있다. In one embodiment of the present invention, the lupine extract may be a 70% ethanol extract of dried lupine root.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 파리풀 추출물은 티로시나아제의 활성을 억제 또는 저해하여 멜라닌 생성을 억제할 수 있다. In one embodiment of the present invention, the Paraliptera extract may inhibit melanin production by inhibiting or inhibiting the activity of tyrosinase.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 파리풀 추출물은 히알루로니다아제의 활성을 억제 또는 저해하고, 항산화 활성을 통해 피부 노화를 억제할 수 있다. In one embodiment of the present invention, the Paraliptera extract may inhibit or inhibit the activity of hyaluronidase and inhibit skin aging through antioxidant activity.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 파리풀 추출물은 조성물 총 중량 대비 0.0001 내지 20 중량%로 포함될 수 있다. In an embodiment of the present invention, the Paraliptera extract may be contained in an amount of 0.0001 to 20% by weight based on the total weight of the composition.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 조성물은 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지 크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 립스틱, 메이컵 베이스, 파운데이션, 프레스파우더 및 루스파우더로 이루어진 군으로부터 선택된 1종으로 제형화 될 수 있다.In one embodiment of the present invention, the composition may be a skin lotion, a skin softener, a skin toner, an astringent, a lotion, a milk lotion, a moisturizing lotion, a nutrition lotion, a massage cream, a nutritive cream, And may be formulated into one selected from the group consisting of a pack, a soap, a shampoo, a cleansing foam, a cleansing lotion, a cleansing cream, a body lotion, a body cleanser, a latex, a lipstick, a makeup base, a foundation, a press powder and a loose powder .

또한, 본 발명은 상기 본 발명에 따른 화장료 조성물을 인간의 피부에 적용하여 피부노화방지, 피부주름개선 또는 피부미백 효과를 갖는 것을 특징으로 하는 화장방법을 제공한다.The present invention also provides a cosmetic method, wherein the cosmetic composition according to the present invention is applied to human skin to prevent skin aging, improve skin wrinkles or skin whitening effect.

도 1은 본 발명의 파리풀 추출물(PLE) 농도에 따른 티로시나아제에 대한 모노옥시제나아제(A) 및 옥시다아제(B)의 억제 활성을 보여주는 그래프이다.
도 2는 본 발명의 파리풀 추출물(PLE) 농도에 따른 히알루로니다아제 억제 활성을 보여주는 그래프이다.
도 3은 본 발명의 파리풀 추출물(PLE) 농도에 따른 DPPH 라디칼 소거 활성을 보여주는 그래프이다.
도 4는 본 발명의 파리풀 추출물(PLE) 농도에 따라 마우스 대식세포(RAW264.7 세포)에서 활성산소종(ROS) 소거 수준을 보여주는 그래프이다(Cont: LPS 및 파리풀 추출물을 처리하지 않은 무처리군, 200: 본 발명의 파리풀 추출물을 200ug/ml로 처리한 후 LPS를 처리하지 않은 실험군).
도 5는 본 발명의 파리풀 추출물(PLE) 농도에 따라 마우스 대식세포(RAW264.7 세포)에서 산화질소(NO) 생성 억제 정도를 나타내는 그래프이다(Cont: LPS 및 파리풀 추출물을 처리하지 않은 무처리군, 200: 본 발명의 파리풀 추출물을 200ug/ml로 처리한 후 LPS를 처리하지 않은 실험군).
도 6는 본 발명의 파리풀 추출물(PLE) 농도에 따라 마우스 대식세포(RAW264.7 세포)에서 iNOS 및 COX-2 발현 억제 정도를 나타내는 웨스턴 블랏 결과이다.
도 7은 본 발명의 파리풀 추출물(PLE) 농도에 따라 마우스 대식세포(RAW264.7 세포)에서 MMP-2 및 MMP-9의 활성 정도를 자이모그래피(zymorgraphy)를 통해 분석한 것이다.1 is a graph showing the inhibitory activity of monoxoxygenase (A) and oxidase (B) against tyrosinase according to the concentration of Paraliptera extract (PLE) of the present invention.
2 is a graph showing hyaluronidase inhibitory activity according to the concentration of Paraliptera extract (PLE) of the present invention.
3 is a graph showing DPPH radical scavenging activity according to the concentration of Paraliptera extract (PLE) of the present invention.
FIG. 4 is a graph showing the level of reactive oxygen species (ROS) eradication in mouse macrophages (RAW264.7 cells) according to the concentration of Paraliptera extract (PLE) of the present invention (Cont: , 200: Experimental group treated with LPS at 200 ug / ml of Paraliptera extract of the present invention).
FIG. 5 is a graph showing the degree of inhibition of nitric oxide (NO) production in mouse macrophages (RAW264.7 cells) according to the concentration of Paraliptera extract (PLE) of the present invention (Cont: , 200: Experimental group treated with LPS at 200 ug / ml of Paraliptera extract of the present invention).
FIG. 6 is a Western blotting result showing the degree of suppression of iNOS and COX-2 expression in mouse macrophages (RAW264.7 cells) according to the concentration of Paraliptera extract (PLE) of the present invention.
FIG. 7 is a graph showing the activity of MMP-2 and MMP-9 in mouse macrophages (RAW264.7 cells) according to the concentration of Paraliptera extract (PLE) of the present invention through zymography.

본 발명자들은 피부 노화를 방지하고, 피부의 주름을 개선하며 피부 미백 효과를 증진시킬 수 있는 새로운 화장품 소재를 연구하던 중, 파리풀 추출물이 이러한 기능을 갖고 있음을 확인하였다.The inventors of the present invention have found that the extract of Paraliptera has the function of preventing the aging of the skin, improving the wrinkles of the skin and improving the skin whitening effect while studying new cosmetic materials.

따라서 본 발명은 본 발명은 파리풀에서 추출한 파리풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 기능성 화장료 조성물을 제공함에 그 특징이 있다.Accordingly, the present invention is characterized in that a functional cosmetic composition comprising Paraliptera extract extracted from Paralipto as an active ingredient is provided.

특히 본 발명자들은 천연물질로부터 유래되어 인체에 안정하면서도, 탁월한 미백효과와 항노화 효과를 나타낼 수 있는 소재를 찾고자 모색하던 중, 파리풀 추출물에 주목하였으며 파리풀 추출물이 미백 효과와 주름개선 효과를 가지고 있는지 실험을 통해 확인하였다.Particularly, the present inventors sought to find a material derived from a natural substance that is stable to the human body and exhibited excellent whitening effect and antiaging effect. The inventors of the present invention paid attention to the extract of Paraliptera, and examined whether the parallae extract had a whitening effect and a wrinkle- Respectively.

즉, 본 발명의 일실시예에 따르면, 본 발명의 파리풀 추출물이 티로시나아제를 농도 의존적으로 저해하는 활성이 있는 것으로 나타났다(도 1 참조).That is, according to one embodiment of the present invention, the Paraliptera extract of the present invention has an activity of inhibiting tyrosinase in a concentration-dependent manner (see FIG. 1).

한편, 멜라닌은 피부에 존재하는 색소로 자외선 등 외부의 자극으로부터 신체를 보호하는 중요한 기능을 한다. 하지만 이것이 과잉 생성되어 침착되면 기미나 주근깨 등을 형성시켜 피부 외관상 문제를 야기할 수 있으며 나아가 피부노화를 촉진시키고 피부암을 유발할 수 있기 때문에 멜라닌 과잉생성을 억제할 수 있는 물질의 경우 미백제품으로 사용이 가능하다. On the other hand, melanin is a pigment present in the skin and plays an important role in protecting the body from external stimuli such as ultraviolet rays. However, when it is overproduced and deposited, it forms spots and freckles, which can cause problems in appearance of the skin. Further, since it can promote skin aging and cause skin cancer, a substance which can inhibit melanin excess production can be used as a whitening product It is possible.

피부의 색소침착은 자외선이나 염증 등의 자극에 의해 야기되며 또 유전적 요인이나 호르몬, 식품 등과 화학물질 등의 인자에 의해서도 발생된다고 알려져 있다. 멜라닌의 생합성 과정은 피부 멜라닌세포 (melanocyte)가 관여한다. 즉, 멜라닌의 생합성은 멜라노솜 (melanosome) 이라고 불리는 특수한 형태의 멜라닌세포 내 소 기관에서 일어나는데 이 멜라노솜 내에서 멜라닌의 생성에서는 티로시나제 (tyrosinase)라는 효소가 가장 중요한 역할을 한다. 이 효소의 작용에 의해 티로신(tyrosine)은 도파(dopa)로 전환되며 이것이 일련의 산화과정을 통해 도파퀴논(dopaquinone)이 생성되고 다시 도파크롬(dopachrome)으로 변환됨으로서 최종적으로 흑갈색인 멜라닌을 형성하게 된다. 이 멜라닌 색소형성에 관여하는 단백질 유전자는 티로시나제(tyrosinase), TRP-1(tyrosinase related protein-1), TRP-2, ERK(Extracellular signal-regulated kinases)와 이러한 멜라닌 합성 전자 발현을 조절하는 주요 전사인자인 MITF(Microphthalmia-associated transcription factor)의 발현이 중요한 멜라닌 합성과정으로서 역할을 한다. Skin pigmentation is caused by stimuli such as ultraviolet rays or inflammation, and it is also known to be caused by factors such as genetic factors, hormones, foods, and chemicals. The process of biosynthesis of melanin involves melanocytes in the skin. In other words, the biosynthesis of melanin occurs in a special form of melanosomes in the small intestine of melanocytes called melanosomes. The enzyme tyrosinase plays an important role in the production of melanin in the melanosome. Tyrosine is converted to dopa by the action of this enzyme, which is converted to dopachrome by the formation of dopaquinone through a series of oxidation processes and ultimately forms melanin, a black brown color. do. Protein genes involved in melanin pigment formation include tyrosinase, tyrosinase related protein-1 (TRP-1), TRP-2 and ERK (Extracellular signal-regulated kinases) and major transcription factors The expression of MITF (Microphthalmia-associated transcription factor) plays an important role in melanin synthesis.

따라서 티로시나제 활성을 억제하는 본 발명의 파리풀 추출물의 경우 피부의 색소 침착을 예방하고 피부의 미백 효과를 위한 용도로 사용될 수 있다.Therefore, the Paraliptera extract of the present invention which inhibits tyrosinase activity can be used for prevention of skin pigmentation and for skin whitening effect.

또한, 본 발명의 다른 일실시예에 따르면, 본 발명의 파리풀 추출물이 히알루로니다아제의 활성을 농도 의존적으로 저해하는 활성이 있는 것으로 조사되었다.(도 2 참조).In addition, according to another embodiment of the present invention, it has been found that the Paraliptera extract of the present invention has an activity of inhibiting hyaluronidase activity in a concentration-dependent manner (see FIG. 2).

참고로 히알루로니다아제(Hyaluronidase)는 히알루론산(hyaluronic acid)을 가수분해하는 효소로서 히알루론산은 피부의 보습 기능에 있어서 중요한 작용을 하는 물질로 다량의 수분을 함유할 수 있는 능력을 가지고 있어 피부에서 히알루론산이 감소되면 피부가 건조해지는 원인이 될 수 있으며 주름을 초래하는 원인이 된다.Hyaluronidase is an enzyme that hydrolyzes hyaluronic acid. Hyaluronic acid is a substance that plays an important role in the moisturizing function of the skin. It has the ability to contain a large amount of water, Reduced hyaluronic acid in the skin may cause the skin to dry and cause wrinkles.

따라서 상기와 같은 결과를 통해, 본 발명의 파리풀 추출물은 히알루로니다아제(Hyaluronidase)를 억제하는 활성을 가지고 있어 피부 보습을 유지시킬 수 있게 하며, 나아가 피부 주름 생성을 억제시킬 수 있다.Therefore, through the above results, the paraliptera extract of the present invention has an activity of inhibiting hyaluronidase, so that skin moisturization can be maintained, and further, skin wrinkle formation can be suppressed.

또한, 본 발명의 다른 일실시예에서는 본 발명의 파리풀 추출물이 DPPH 라디칼을 소거하는 활성을 가지며, 세포 내 활성산소종도 효과적으로 감소시켜 강력한 항산화 활성을 가지는 것으로 나타났다. 뿐만 아니라, 본 발명의 파리풀 추출물은 산화질소(NO) 생산 억제 활성, iNOS 및 COX-2 유도 억제 활성 및 MMP-9 활성 억제 활성 측정을 통하여 항염 활성을 가지는 것으로 확인되었다.In another embodiment of the present invention, the Paraliptera extract of the present invention has an activity of scavenging DPPH radicals, effectively reducing intracellular reactive oxygen species and having a strong antioxidative activity. In addition, it was confirmed that the Paraliptera extract of the present invention has anti-inflammatory activity through the inhibition of nitric oxide (NO) production, iNOS and COX-2 induction inhibitory activity and MMP-9 activity inhibition activity.

이와 같은 결과를 통해, 본 발명자들은 본 발명의 파리풀 추출물이 피부 미백 효과, 항주름 효과, 항노화 효과, 항산화 효과 및 항염증 효과를 모두 가지고 있다는 것을 실험적으로 입증하였다.Through these results, the present inventors have experimentally proved that the Paraliptera extract of the present invention has both skin whitening effect, anti wrinkle effect, anti-aging effect, antioxidative effect and anti-inflammatory effect.

그러므로 본 발명은 파리풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 기능성 화장료 조성물로서, 피부 미백용 화장료 조성물, 피부 주름 개선용 화장료 조성물, 항노화 화장료 조성물 및 피부 보습용 화장료 조성물을 제공할 수 있다.Therefore, the present invention can provide a cosmetic composition for skin whitening, a cosmetic composition for improving skin wrinkles, an anti-aging cosmetic composition, and a cosmetic composition for skin moisturizing, as a functional cosmetic composition containing Paraliptera extract as an active ingredient.

본 발명에 따른 파리풀 추출물은 당업계에 공지된 추출 및 분리하는 방법을 사용하여 천연으로부터 추출 및 분리하여 수득한 것을 사용할 수 있으며, 본 발명에서 정의된‘추출물’은 적절한 용매를 이용하여 파리풀로부터 추출한 것이며, 예를 들어, 파리풀의 조추출물, 극성용매 가용 추출물 또는 비극성용매 가용 추출물을 모두 포함한다. 바람직하게는 파리풀의 뿌리에서 추출한 추출물일 수 있다.The extract of Paraliptera according to the present invention can be obtained by extracting and isolating from nature using an extraction and separation method known in the art, and the 'extract' defined in the present invention can be obtained by extracting from Paralipus using an appropriate solvent For example, crude extracts of Paraliptera, polar solvent-soluble extracts, or non-polar solvent-soluble extracts. Preferably, it may be an extract extracted from the root of the parrot.

상기 파리풀로부터 추출물을 추출하기 위한 적절한 용매로는 약학적으로 허용되는 유기용매라면 어느 것을 사용해도 무방하며, 물 또는 유기용매를 사용할 수 있으며, 이에 제한되지는 않으나, 예를 들어, 정제수, 메탄올(methanol), 에탄올(ethanol), 프로판올(propanol), 이소프로판올(isopropanol), 부탄올(butanol) 등을 포함하는 탄소수 1 내지 4의 알코올, 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane) 및 시클로헥산(cyclohexane) 등의 각종 용매를 단독으로 혹은 혼합하여 사용할 수 있다. 바람직하게는 에탄올(주정)을 사용할 수 있으며, 보다 바람직하게는 70% 에탄올을 사용하는 것이 좋다.As an appropriate solvent for extracting the extract from the mugwort, any pharmaceutically acceptable organic solvent may be used, and water or an organic solvent may be used. Examples of the solvent include, but are not limited to, purified water, methanol acetone, ether, benzene, chloroform (such as methanol, ethanol, propanol, isopropanol, and butanol) chloroform, ethyl acetate, methylene chloride, hexane, and cyclohexane may be used alone or in combination. It is preferable to use ethanol (alcohol), more preferably 70% ethanol.

추출 방법으로는 열수추출법, 냉침추출법, 환류냉각추출법, 용매추출법, 수증기증류법, 초음파추출법, 용출법, 압착법 등의 방법 중 어느 하나를 선택하여 사용할 수 있다. 또한, 목적하는 추출물은 추가로 통상의 분획 공정을 수행할 수도 있으며, 통상의 정제 방법을 이용하여 정제될 수도 있다. 본 발명의 파리풀 추출물의 제조방법에는 제한이 없으며, 공지되어 있는 어떠한 방법도 이용될 수 있다.As the extraction method, any one of the methods such as hot water extraction method, cold extraction method, reflux cooling extraction method, solvent extraction method, steam distillation method, ultrasonic extraction method, elution method and compression method can be selected and used. In addition, the desired extract may be further subjected to a conventional fractionation process or may be purified using a conventional purification method. There is no limitation on the method for producing the Paraliptera extract of the present invention, and any known method can be used.

예를 들면, 본 발명의 조성물에 포함되는 파리풀 추출물은 상기한 열수 추출 또는 용매 추출법으로 추출된 1차 추출물을, 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조할 수 있다. 또한 상기 1차 추출물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography), 박층 크로마토그래피(thin layer chromatography), 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography) 등과 같은 다양한 크로마토그래피를 이용하여 추가로 정제된 분획을 얻을 수도 있다.For example, the Paraliptera extract contained in the composition of the present invention can be prepared into a powdery state by an additional process such as vacuum distillation, freeze-drying, spray drying, or the like, with the primary extract extracted by the hot water extraction or solvent extraction method described above . Further, the primary extract can be further purified by using various chromatographies such as silica gel column chromatography, thin layer chromatography, high performance liquid chromatography and the like, You can get it.

따라서 본 발명에 있어서 파리풀 추출물은 추출, 분획 또는 정제의 각 단계에서 얻어지는 모든 추출액, 분획 및 정제물, 그들의 희석액, 농축액 또는 건조물을 모두 포함하는 개념이다.Therefore, the Paraliptera extract in the present invention is a concept including all the extract, fraction and purified product obtained in each step of extraction, fractionation or purification, and a diluted solution, concentrate or dried product thereof.

본 발명의 일실시예에 따른 파리풀 추출물을 제조하는 방법을 조금 더 구체적으로 살펴보면 다음과 같다.The method for producing the Paralipteroptera extract according to one embodiment of the present invention will be described in more detail as follows.

본 발명에서는 건조된 파리풀 뿌리를 분쇄하여 분말화한 후, 상기 분말에 70% 에탄올을 첨가하여 실온에서 일주일동안 추출한 다음, 이러한 에탄올 추출물을 진공에서 증발시켜 건조된 파우더로 제조하는 과정을 거쳐 파리풀 추출물을 수득할 수 있다. In the present invention, the dried parchment roots are pulverized and pulverized, and then 70% ethanol is added to the powder. The powder is extracted at room temperature for one week, and then the ethanol extract is evaporated under vacuum to prepare dried powder. Can be obtained.

한편, 본 발명의 조성물이 화장품 조성물로 제조되는 경우, 본 발명의 조성물은 상술한 파리풀 추출물 뿐만 아니라, 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.When the composition of the present invention is manufactured from a cosmetic composition, the composition of the present invention may contain components commonly used in cosmetic compositions as well as the above-mentioned lotus extract, and examples thereof include antioxidants, stabilizers, Vitamins, pigments and flavoring agents, and carriers.

또한, 본 발명의 조성물은 상술한 파리풀 추출물 이외에, 파리풀 추출물과 반응하여 피부보호 효과를 손상시키지 않는 한도에서 종래부터 사용되어오던 유기 자외선 차단제를 혼합하여 사용할 수도 있다.In addition, the composition of the present invention may be used in combination with an organic UV blocking agent that has been used in the past so long as it does not impair the skin protecting effect by reacting with the Paraliptera extract in addition to the Paraliptera extract described above.

유기 자외선 차단제로는 글리세릴파바, 드로메트리졸트리실록산, 드로메트리졸, 디갈로일트리올리에이트, 디소듐페닐디벤즈이미다졸테트라설포네이트, 디에칠헥실부타미도트리아존, 디에칠아미노하이드록시벤조일헥실벤조에이트, 디이에이-메톡시신나메이트, 로우손과 디하이드록시아세톤의 혼합물, 메칠렌비스-벤조트리아졸릴테트라메칠부틸페놀, 4-메칠벤질리덴캠퍼, 멘틸안트라닐레이트, 벤조페논-3(옥시벤존),벤조페논-4, 벤조페논-8(디옥시페벤존), 부틸메톡시디벤조일메탄, 비스에칠헥실옥시페놀메톡시페닐트리아진, 시녹세이트, 에칠디하이드록시프로필파바, 옥토크릴렌, 에칠헥실디메칠파바, 에칠헥실메톡시신나메이트, 에칠헥실살리실레이트, 에칠헥실트리아존, 이소아밀-p-메톡시신나메이트, 폴리실리콘-15(디메치코디에칠벤잘말로네이트), 테레프탈릴리덴디캠퍼설포닉애씨드 및 그 염류, 티이에이-살리실레이트 및 아미노벤조익애씨드(파바)로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 사용할 수 있다.Organic UV protectors include, but are not limited to, glyceryl paraben, drometrizol trisiloxane, drometrizole, dipaloyyl trioleate, disodium phenyldibenzimidazole tetrasulfonate, diethylhexylbutamidotriazone, Benzoylhexyl benzoate, di-methoxy cinnamate, a mixture of Rawson and dihydroxyacetone, methylenebis-benzotriazolyltetramethylbutylphenol, 4-methylbenzylidene camphor, menthyl anthranilate, benzophenone- Benzophenone-3 (oxybenzone), benzophenone-4, benzophenone-8 (dioxyphenylbenzene), butylmethoxydibenzoylmethane, bishexylhexyloxyphenol methoxyphenyltriazine, synoxate, Octyl-p-methoxycinnamate, polysilicon-15 (dimethicone-ethylbenzylphthalate, ethylhexylmethoxycinnamate, ethylhexylmethoxycinnamate, ethylhexylsalicylate, ethylhexyltriazone, isoamyl- Yeah Bit), terephthalic ylidene dikaem peoseol sulphonic Acid and their salts, tea yieyi - may be used salicylate and at least one member selected from the group consisting of amino-benzo ripening Acid (paba).

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 본 발명의 화장료 조성물은 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.In addition, the cosmetic composition of the present invention may be prepared in any form conventionally produced in the art, and examples thereof include solutions, suspensions, emulsions, pastes, gels, creams, lotions, powders, soaps, surfactants- Containing cleansing, oil, powder foundation, emulsion foundation, wax foundation and spray, but is not limited thereto. More specifically, the cosmetic composition of the present invention can be manufactured in the form of a soft lotion, a nutritional lotion, a nutritional cream, a massage cream, an essence, an eye cream, a cleansing cream, a cleansing foam, a cleansing water, a pack, a spray or a powder.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a paste, cream or gel, an animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tracant, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc or zinc oxide may be used as the carrier component .

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.When the formulation of the present invention is a solution or an emulsion, a solvent, a dissolving agent or an emulsifying agent is used as a carrier component, and examples thereof include water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, , 3-butyl glycol oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol or sorbitan fatty acid esters.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.In the case where the formulation of the present invention is a suspension, a carrier such as water, a liquid diluent such as ethanol or propylene glycol, a suspending agent such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, Cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tracant, etc. may be used.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로 플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.When the formulation of the present invention is a powder or a spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used as a carrier component. In the case of a spray, in particular, / Propane or dimethyl ether.

본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a surfactant-containing cleansing, the carrier component may include aliphatic alcohol sulfate, aliphatic alcohol ether sulfate, sulfosuccinic acid monoester, isethionate, imidazolinium derivative, methyltaurate, sarcosinate, fatty acid amide ether Alkylamido betaine, aliphatic alcohol, fatty acid glyceride, fatty acid diethanolamide, vegetable oil, lanolin derivative, or ethoxylated glycerol fatty acid ester.

또한, 본 발명은 파리풀 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 인간의 피부에 적용하여 피부노화방지, 피부주름개선 또는 피부미백 효과를 갖는 것을 특징으로 하는 화장방법을 제공할 수 있다.In addition, the present invention can provide a cosmetic method comprising applying a cosmetic composition comprising an extract of Paraliptera as an active ingredient to human skin to prevent skin aging, improve skin wrinkles or skin whitening effect.

본 발명의 화장 방법은 본 발명의 화장료 조성물을 이용하는 모든 화장 방법을 일컫는다. 즉, 화장료 조성물을 이용하는 당업계에 공지된 모든 방법이 본 발명의 화장 방법에 속한다.The cosmetic process of the present invention refers to all cosmetic processes using the cosmetic composition of the present invention. That is, all methods known in the art using a cosmetic composition belong to the cosmetic method of the present invention.

본 발명의 화장료 조성물은 단독 또는 중복하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.The cosmetic composition of the present invention may be used alone or in combination, or may be used in combination with other cosmetic compositions other than the present invention. The cosmetic composition according to the present invention may be used according to a conventional method of use, and may be used in a number of times depending on the skin condition or taste of the user.

본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 제형 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클렌징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비 함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.
When the cosmetic composition of the present invention is a soap, a surfactant-containing cleansing formulation or a surfactant-free cleansing formulation, it may be applied to the skin and then wiped off, washed or rinsed with water. The surfactant-containing cleansing formulation may be a cleansing foam, a cleansing water, a cleansing towel and a cleansing pack. The surfactant-free cleansing formulation may be a cleansing cream, , Cleansing lotion, cleansing water and cleansing gel, but is not limited thereto.

이하 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. It will be apparent to those skilled in the art that these embodiments are merely illustrative of the present invention and that the scope of the present invention is not limited to these embodiments.

<< 실시예Example >>

시약reagent

비타민 C, 대장균 리포폴리사카라이드(LPS, natural, purify≥97%), 젤라틴 및 그리스시약은 Sigma-Aldrich Chemical Co.(St. Louis, MO, USA)로부터 구입하였다. 소듐 도데실 설페이트(SDS: Sodium dodecyl sulfate), 류펩틴(leupeptin), 페닐메타노설포닐 플로라이드(PMSF: phenylmethanosulfonyl fluoride), 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), HEPES, 및 2,7-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA)는 Sigma-Aldrich Chemical Co.(St. Louis, MI, USA)로부터 구입하였다. Dulbeccos modified Eagles medium (DMEM), fetal bovine serum (FBS) 및 penicillin-streptomycin은 Gibco-BRL (Gaithersburg, MD, USA)로부터 구입하였다. 또한, L-tyrosine, L-DOPA, mushroom tyrosinase, Hyaluronic acid, agarose, hyaluronidase, aqueous cetylpyridinium chloride 역시 Sigma-Aldrich Chemical Co.(St. Louis, MO, USA)로부터 구입한 것을 사용하였다. 모든 다른 화합물은 시약 등급 또는 기준 이상인 것을 사용하였으며, 모든 실험은 적어도 3번 반복 수행하였다.
Vitamin C, E. coli lipopolysaccharide (LPS, natural, purify? 97%), gelatin and grease reagents were purchased from Sigma-Aldrich Chemical Co. (St. Louis, Mo., USA). Sodium dodecyl sulfate (SDS), leupeptin, phenylmethanosulfonyl fluoride (PMSF), 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), HEPES, and 2,7 -dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA) was purchased from Sigma-Aldrich Chemical Co. (St. Louis, MI, USA). Dulbecco's modified Eagles medium (DMEM), fetal bovine serum (FBS) and penicillin-streptomycin were purchased from Gibco-BRL (Gaithersburg, MD, USA). L-tyrosine, L-DOPA, mushroom tyrosinase, hyaluronic acid, agarose, hyaluronidase and aqueous cetylpyridinium chloride were also purchased from Sigma-Aldrich Chemical Co. (St. Louis, Mo., USA). All other compounds were used with reagent grade or above, and all experiments were repeated at least 3 times.

통계처리Statistical processing

실험결과는 평균±표준편차로 표기하였고, 그 결과들의 통계 분석하기 위하여 unpaired Student's t-test를 수행하였다. p 값이 0.05 미만일 때 통계적으로 유의하다고 판단하였다. IC50 값은 dose/response linear regression plots으로 부터 계산되었다.
Experimental results were expressed as mean ± SD. Unpaired Student's t-test was performed to analyze the results. A p-value <0.05 was considered statistically significant. IC50 values were calculated from dose / response linear regression plots.

<< 실시예Example 1> 1>

파리풀Paraplu 추출물 제조 Extract preparation

파리풀 추출물을 제조하기 위하여, 먼저 건조된 파리풀 뿌리를 분쇄하여 분말화한 후, 상기 파리풀 뿌리 분말에 70% 에탄올을 가하여 상온에서 일주일 동안 추출하였다. 상기 70% 에탄올 파리풀 추출물은 진공에서 증발시키는 과정을 통해 감압 농축하여 건조된 파우더로 제조한 후 하기 실험에서 파리풀 추출물을 70%의 에탄올에 녹여 시료로 사용하였다. 이때, 파리풀 에탄올 추출물의 수득율은 13.1%이었다.In order to prepare the Lycopersicon esculentum extract, first dried Lycoris spp. Was pulverized and pulverized. Then, 70% ethanol was added to the Lycopersicum sp. Powder and extracted at room temperature for one week. The 70% ethanol paraffin extract was concentrated under reduced pressure through a process of evaporation under vacuum. The dried paraffin powder was dissolved in 70% ethanol and used as a sample in the following experiment. At this time, the yield of ethanol extract of paraffin was 13.1%.

참고로 상기 건조된 파리풀 뿌리는 2010년 8월 제주도의 지역 마트에서 구입하여 사용하였으며, 식물 동정은 춘천 강원대학교 생물과학부, 유기억 교수로부터 확인받았다. 본 발명의 상기 파리풀 추출물 시료는 강원대학교 자연과학대학 생활과학과 식물표본관에 보관하여 승인번호로 KWNU56570을 부여받았다.
For the reference, the dried parchment root was purchased from the local mart in Jeju Island in August, 2010. The plant identification was confirmed by Chungcheon Kangwon National University, Department of Biological Sciences and Professor Hwang, The paraliptera extract sample of the present invention was stored in the herbarium of the Department of Living Science, Kangwon National University and received KWNU56570 as an approval number.

<< 실시예Example 2> 2>

세포 배양Cell culture

마우스 대식세포주로서 RAW264.7 세포는 American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA)에서 수득하였으며, 10% 열 블활성화된 FBS, 25 mM HEPES (pH 7.5), 100 units/ml 페니실린 및 100 μg/ml 스트렙토마이신을 포함하는 DMEM 배지에서 배양되었다. RAW264.7 세포들은 5×10⁵ 세포 밀도로 플레이트에 분주한 후 37℃에서 24시간 동안 전배양한 후, 5% CO₂를 포함하는 항온기에서 배양하여 실험에 이용하였다.
RAW264.7 cells as mouse macrophage lines were obtained from the American Type Culture Collection (Manassas, Va., USA) and incubated with 10% heat-inactivated FBS, 25 mM HEPES (pH 7.5), 100 units / ml penicillin and 100 μg / ml And cultured in DMEM medium containing streptomycin. RAW 264.7 cells were plated at a density of 5 × 10 ⁵ cells, preincubated at 37 ° C. for 24 hours, and cultured in a thermostat containing 5% CO ₂ .

<< 실험예Experimental Example 1> 1>

파리풀Paraplu 추출물( extract( PLEPLE )의 )of 타이로시나제Tyrosinase (( TyrosinaseTyrosinase ) 저해활성을 통한 피부 미백 효과 분석) Inhibitory Effect of Skin Whitening Effect Analysis

티로시나아제는 멜라닌 색소의 생성을 촉진하는 효소로, 그 활성을 억제하면 멜라닌 색소의 생성이 저해되어 피부의 미백효과를 나타낸다. 따라서 피부 미백 효과를 나타내는 미백 성분의 중요한 기작 중의 하나가 멜라닌 색소를 생성하는 멜라노사이트에서 티로시나아제의 활성을 억제하는 것이다.Tyrosinase is an enzyme that promotes the production of melanin pigment. If its activity is inhibited, the production of melanin pigment is inhibited, and the skin whitening effect is shown. Therefore, one of the important mechanisms of the whitening component that exhibits the skin whitening effect is to inhibit the activity of tyrosinase in the melanocyte producing melanin pigment.

즉, 티로시나아제는 구리를 포함하고 있는 효소로 주로 멜라닌 색소 생성에 관여하는데, 멜라닌의 생합성 과정에서 모노옥시제나아제 활성에 의해 L-tyrosine을 L-DOPA로 히드록실화하거나 산화 활성에 의해 L-DOPA를 dopaquinone으로 산화시키는 과정에 관여한다. That is, tyrosinase is an enzyme containing copper and mainly involved in the production of melanin pigment. In the biosynthesis of melanin, L-tyrosine is hydroxylated by L-DOPA by monooxygenase activity or L It is involved in the process of oxidizing DOPA to dopaquinone.

이에 본 발명자들은 상기 <실시예 1>을 통해 제조된 본 발명의 파리풀 추출물이 in vitro에서 피부 미백 효과를 나타내는지 확인하기 위하여 파리풀 추출물의 티로시나아제 활성 억제 효과를 조사하였다.The present inventors have found that the phryma extract of the present invention prepared via the <Example 1> in In vitro inhibition of tyrosinase activity was investigated in order to determine whether it exhibited skin whitening effect.

이를 위해 모노옥시제나아제(monooxygenase(cresolase)) 활성 분석을 위한 기질로는 L-tyrosine을 사용하였고, 옥시다아제(oxidase(catecholase)) 활성 분석을 위한 기질로는 L-DOPA를 사용하였다.L-tyrosine was used as a substrate for the monooxygenase (cresolase) activity assay and L-DOPA was used as an oxidase (catecholase) activity assay.

티로시나아제(Tyrosinase)의 monooxygenase(cresolase) 활성은 당업계에 공지된 방법에 따라 96 well plate reader를 이용한 도파크롬(dopachrome) 방법으로 측정하였다. 효소 반응은 1.5mM L-tyrosine 및 100units/ml mushroom tyrosinase를 포함한 0.1M 인산칼륨 버퍼(pH 6.7) 상에서 37℃ 온도로 수행하였다. 혼합물은 기질을 첨가하기 전 15분간 전처리 반응시켰고, 흡광도 변화는 490 nm에서 측정하였다.The monooxygenase (cresolase) activity of tyrosinase was measured by a dopachrome method using a 96-well plate reader according to a method known in the art. Enzyme reactions were performed at 37 ° C in 0.1 M potassium phosphate buffer (pH 6.7) containing 1.5 mM L-tyrosine and 100 units / ml mushroom tyrosinase. The mixture was pretreated for 15 min before addition of the substrate and the absorbance change was measured at 490 nm.

Tyrosinase의 L-DOPA 산화 활성 역시 당업계에 공지된 방법에 따라 분광광도측정법에 따라 수행하였다. 0.04mM 인산 칼륨 버퍼(pH6.8), 0.5mM L-DOPA, 6units/ml mushroom tyrosinases를 포함하는 각 반응 혼합물은 37℃에서 반응시키고, 흡광도 변화는 plate reader를 이용하여 475nm에서 측정하였다.
The L-DOPA oxidative activity of tyrosinase was also determined by spectrophotometry according to methods known in the art. Each reaction mixture containing 0.04 mM potassium phosphate buffer (pH 6.8), 0.5 mM L-DOPA and 6 units / ml mushroom tyrosinases was reacted at 37 ° C and the absorbance change was measured at 475 nm using a plate reader.

그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이, 파리풀 추출물은 처리한 농도에 의존적으로 티로시나아제의 모노옥시제나아제 및 옥시다아제 활성을 억제하는 것으로 나타났다. 특히 30ug/ml의 농도로 파리풀 추출물을 처리한 군의 경우 티로시나아제의 모노옥시제나아제 활성을 약 26.9%까지 감소시켰으며(도 1A), 옥시다아제 활성은 약 45.2%까지 감소시켰다. As a result, as shown in Fig. 1, it was shown that the Paraliptera extract inhibited tyrosinase monooxygenase and oxidase activity depending on the treated concentration. In particular, in the case of the group treated with the extract of Paraliptera at a concentration of 30 ug / ml, the activity of tyrosinase was reduced to about 26.9% (FIG. 1A), and the oxidase activity was reduced to about 45.2%.

또한, 파리풀 추출물의 티로시나아제에 대한 모노옥시제나아제 및 옥시다아제 활성에 대한 IC₅₀은 각각 9.0ug 및 11.6ug으로 확인되었으며, 양성 대조군으로 사용한 β-Arbutin의 티로시나아제에 대한 모노옥시제나아제 및 옥시다아제 활성의 IC₅₀은 각각 0.9mg/ml과 18.5mg/ml로 확인되었다. In addition, the IC _{50 values} for the monooxygenase and oxidase activity for tyrosinase of Paralichthys olivaceus extract were found to be 9.0 ug and 11.6 ug, respectively, and the amounts of monooxygenase and β-arbutin for tyrosinase, which were used as a positive control, The IC ₅₀ activity of oxydase activity was found to be 0.9 mg / ml and 18.5 mg / ml, respectively.

상기 결과를 통하여 본 발명자들은 본 발명의 파리풀 추출물이 멜라닌 생성과정에서 티로시나아제의 활성을 저해함으로써 멜라닌 생합성을 억제할 수 있으므로, 미백을 위한 화장료 조성물로 사용할 수 있음을 알 수 있었다. From the above results, the inventors of the present invention have found that the paraliptera extract of the present invention can inhibit melanin biosynthesis by inhibiting tyrosinase activity during melanin production, and thus can be used as a cosmetic composition for whitening.

<< 실험예Experimental Example 2> 2>

파리풀Paraplu 추출물의 Extract 히알루로니다아제Hyaluronidase 활성 억제를 통한 항노화 효과 분석 Analysis of anti-aging effects through inhibition of activity

히알루로니다아제(Hyaluronidase)는 히알루론산(hyaluronic acid)을 가수분해하는 효소이다. 히알루론산은 피부의 보습 기능에 있어서 중요한 작용을 하는 물질로 다량의 수분을 함유할 수 있는 능력을 가지고 있어 피부에서 히알루론산이 감소되면 피부가 건조해지는 원인이 될 수 있다. Hyaluronidase is an enzyme that hydrolyzes hyaluronic acid. Hyaluronic acid is a substance that plays an important role in the moisturizing function of the skin and has the ability to contain a large amount of water, which may cause the skin to dry out if hyaluronic acid is reduced in the skin.

따라서 본 발명자들은 파리풀 추출물이 히알루로니다아제 활성에 미치는 영향을 조사하기 위해 히알루론산(HA, Streptococcus equi)을 물에 용해하여 그 농도가 8mg/ml이 되도록 하고, 초음파(sonication) 처리한 후 -20℃에서 보관하였다. 또한, 아가로오즈(agarose)는 0.3M 인산염 나트륨 버퍼(sodium phosphate buffer, pH 7)에 전자레인지에서 용해하고 사용 전 온도가 55℃로 유지되도록 하였다. Therefore, in order to investigate the effect of hyaluronic acid extract on hyaluronidase activity, the present inventors conducted a sonication treatment in which hyaluronic acid (HA, Streptococcus equi ) was dissolved in water to have a concentration of 8 mg / ml, And stored at 20 ° C. The agarose was also dissolved in 0.3 M sodium phosphate buffer (pH 7) in a microwave oven to maintain the pre-use temperature at 55 ° C.

상기 히알루론산을 미리 55℃로 예열하고, 상기 아가로오즈(agarose)와 혼합하여 히알루론산 최종 농도 0.8mg/ml, 아가로오스 최종농도 0.8%(w/v)이 되도록 하였다. 상기 히알루론산-아가로오즈 혼합액(100ul)을 마이크로플레이트에 분주하고, 각 웰에 0.3M 인산염 나트륨 버퍼(sodium phosphoate buffer, pH)에 용해된 히알루로니다아제 100ul 및 본 발명의 파리풀 추출물을 농도별로 첨가하여 혼합하고, 37℃에서 1 시간 동안 반응시켰다. 반응 후, 효소 샘플을 제거하고, 각 웰에 10%(w/v)의 aqueous cetylpyridinium chloride(100ul)로 채운 후 상온에서 30분간 반응시키고 plate reader를 이용하여 595nm 흡광도에서 측정하였다.The hyaluronic acid was preheated to 55 ° C in advance and mixed with the agarose to obtain a hyaluronic acid final concentration of 0.8 mg / ml and an agarose final concentration of 0.8% (w / v). The hyaluronic acid-agarose mixed solution (100 ul) was dispensed into a microplate and 100 ul of hyaluronidase dissolved in 0.3 M sodium phosphoate buffer (pH) And the mixture was reacted at 37 DEG C for 1 hour. After the reaction, enzyme samples were removed and each well was filled with 10% (w / v) aqueous cetylpyridinium chloride (100 ul), reacted at room temperature for 30 minutes, and assayed at 595 nm absorbance using a plate reader.

그 결과, 파리풀 추출물의 농도 의존적으로 효소 활성이 억제되는 것으로 나타났고, 특히 10ug/ml의 농도에서는 60%에 달하는 높은 억제 효과를 나타내었다. 이를 통해 본 발명자들은 파리풀 추출물이 우수한 피부 보습 효과를 가질 수 있다는 것을 알 수 있었다.
As a result, it was shown that the enzyme activity was inhibited depending on the concentration of mugwort extract. Especially, at the concentration of 10 ug / ml, the inhibitory effect was as high as 60%. Thus, the inventors of the present invention have found that the Paraliptera extract has excellent skin moisturizing effect.

<< 실험예Experimental Example 3> 3>

파리풀Paraplu 추출물의 항산화 효과 측정 Determination of antioxidative effect of extract

피부가 활성 산소종이나 자유 라디칼에 노출되면 산화 작용에 의해 과산화 지질이 생성되고 그로 인해 콜라겐 등의 피부 구성 단백질이 변형되어 피부 노화가 일어난다. When the skin is exposed to reactive oxygen species or free radicals, lipid peroxidation is produced by the oxidative action, and the skin constituent protein such as collagen is transformed and skin aging occurs.

따라서, 본 발명자들은 상기 <실시예 1>을 통해 제조된 본 발명의 파리풀 추출물의 항산화 효과를 확인하기 위하여, DPPH 라디칼 소거활성, 세포 내 활성산소종(ROS) 소거활성을 측정하였다.
Therefore, in order to examine the antioxidative effect of the Paraliptera extract prepared in Example 1, the present inventors measured DPPH radical scavenging activity and ROS scavenging activity.

<3-1> <3-1> DPPHDPPH 라디칼Radical 소거 활성 Scavenging activity

DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) 분석은 항산화 물질의 전자공여능으로 인해 방향족 화합물 및 방향족 아민류에 의해 환원되어 자색이 탈색되는 정도를 지표로 하여 항산화 능력을 측정하는 방법이다. 이 실험에서 양성대조군으로는 항산화 효능이 잘 알려진 비타민 C를 사용하였다.DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) analysis is a method of measuring antioxidative capacity by reducing the amount of purple color by an aromatic compound and an aromatic amine due to the electron donating ability of the antioxidant as an index. Vitamin C, a well - known antioxidant, was used as a positive control in this experiment.

먼저 상기 실시예 1을 통해 제조된 본 발명의 파리풀 추출물(시료)을 에탄올에 녹여 최종 농도가 0, 10, 50, 200μg/ml이 되도록 정량하여 96 웰 플레이트에 각 시료를 100μL씩 주입하고, 동시에 0.04mM DPPH 용액 100μL을 넣어 총량이 200μL가 되도록 하였다. 상기 혼합액은 37℃에서 30분간 반응시킨 후 490nm에서 흡광도를 측정하였다. First, 100 μL of each sample was injected into a 96-well plate at a final concentration of 0, 10, 50, or 200 μg / ml by dissolving the paraliptera extract (sample) of the present invention prepared in Example 1 in ethanol 100 μL of a 0.04 mM DPPH solution was added to make a total amount of 200 μL. The mixed solution was reacted at 37 ° C for 30 minutes and absorbance was measured at 490 nm.

그 결과 도 3에서 나타낸 바와 같이, 본 발명의 파리풀 추출물은 농도 의존적으로 DPPH 라디칼 소거능을 갖는다는 사실을 알 수 있었다. 특히 본 발명의 추출물의 DPPH 라디칼 소거능은 양성 대조군인 비타민 C 처리군과 유사한 수준으로 나타났으며, 이를 통해 본 발명의 파리풀 추출물이 강력한 항산화 활성을 가지는 것을 확인할 수 있었다.
As a result, as shown in FIG. 3, it was found that the Paraliptera extract of the present invention had DPPH radical scavenging ability in a concentration-dependent manner. In particular, the DPPH radical scavenging activity of the extract of the present invention was similar to that of the vitamin C treatment group, which is a positive control, and thus it was confirmed that the Paraliptera extract of the present invention has a strong antioxidative activity.

<3-2> 세포 내 <3-2> Intracellular 활성산소종Active oxygen species (( ROSROS ) 소거활성 측정) Measurement of scavenging activity

본 발명의 파리풀 추출물이 세포 내에서 발생하는 활성산소종(ROS)을 소거하는 활성이 있는지 확인하기 위하여, 마우스 대식세포(RAW264.7 세포)에 본 발명의 추출물을 전처리한 후, LPS를 처리하여 대식세포 내 ROS 수준을 측정하였으며, 이때 세포 내 활성산소종 측정은 DCFH-DA(2',7'-dichlorodihydrofluorescin diacetate) assay를 이용하였다. DCFH-DA는 세포 내 활성산소종과 반응하여 형광물질인 DCF(dichlorofluorescein)을 만들어 내는 것으로 이 시약을 세포 속에 넣어 발생하는 형광을 측정함으로써 세포 내의 활성산소종을 측정할 수 있다. In order to confirm whether the extract of the present invention had activity of scavenging ROS generated in cells, the extract of the present invention was pretreated with mouse macrophages (RAW264.7 cells), treated with LPS ROS levels were measured in the macrophages, and DCFH-DA (2 ', 7'-dichlorodihydrofluorescin diacetate) assay was used to measure intracellular reactive oxygen species. DCFH-DA reacts with reactive oxygen species in the cell to produce DCF (dichlorofluorescein). By measuring the fluorescence generated by introducing the reagent into the cell, active oxygen species in the cell can be measured.

자세하게는 마우스 대식세포(RAW264.7 세포) 5.0×10⁵에 본 발명의 추출물을 다양한 농도별로(0, 10, 50, 200μg/ml) 처리하여 전배양한 후, 1μg/ml 농도의 LPS를 24시간 동안 처리하였다. 그 다음 5μM의 DCFH-DA를 첨가하여 37℃에서 30분 동안 반응시켰다. 상기 과정을 거친 세포들을 수득하여 세포 내 활성산소종 수준의 지표인 DCF를 유세포분석기를 이용하여 분석하였다. 활성산소종 수준은 arbitrary unit으로써 나타내었다.Specifically, the extract of the present invention was treated with various concentrations (0, 10, 50, and 200 μg / ml) of the extracts of mouse macrophages (RAW264.7 cells) (5.0 × 10 ⁵ ) Lt; / RTI > Then, 5 μM of DCFH-DA was added and reacted at 37 ° C. for 30 minutes. The cells thus obtained were analyzed and analyzed for DCF, an indicator of the level of active oxygen species in the cell, using a flow cytometer. The level of reactive oxygen species is expressed as an arbitrary unit.

그 결과 도 4에서 나타낸 바와 같이, 대식세포에 LPS만을 처리한 실험군(세포 내 활성산소종 수준이 8.2배 증가)과 비교하여 본 발명의 파리풀 추출물을 처리한 실험군에서 농도 의존적으로 활성산소종 수준이 감소되는 것을 알 수 있었다. 자세하게는 본 발명의 파리풀 추출물을 10, 50, 200ug/ml로 각각 처리한 실험군에서 99.6%, 79.1% 및 25.6% 까지 활성산소종 수준이 감소되는 것으로 나타났다. 이를 통해 본 발명의 파리풀 추출물이 LPS로 자극된 대식세포에서 활성산소종을 효과적으로 감소시켜 강력한 항산화 활성을 가지는 것을 확인할 수 있었다. 참고로 도 4에서 Cont는 LPS 및 파리풀 추출물을 처리하지 않은 무처리군이며, 200은 본 발명의 파리풀 추출물을 200ug/ml로 처리한 후 LPS를 처리하지 않은 실험군을 의미한다.
As a result, as shown in FIG. 4, in the experimental group treated with the Paraliptera extract of the present invention, the level of reactive oxygen species was determined in a concentration-dependent manner as compared with the experimental group (the intracellular reactive oxygen species level was increased 8.2 times) Respectively. In detail, the levels of active oxygen species were reduced to 99.6%, 79.1% and 25.6% in the experimental group treated with 10, 50 and 200 ug / ml of the extract of the present invention, respectively. Thus, it was confirmed that the Paraliptera extract of the present invention effectively scavenges reactive oxygen species in macrophages stimulated with LPS, and thus has a strong antioxidative activity. In FIG. 4, Cont is the untreated group treated with LPS and Paraliptera extract, and 200 indicates the experimental group treated with Paraliptera extract of the present invention at 200 ug / ml and not treated with LPS.

<< 실험예Experimental Example 4> 4>

본 발명의 The 파리풀Paraplu 추출물의 항염증 활성 측정 Determination of anti-inflammatory activity of extract

상기 실시예 1을 통해 제조된 본 발명의 파리풀 추출물의 항염증 효과를 확인하기 위하여, 산화질소(NO) 생산 억제 활성, iNOS 및 COX-2 유도 억제 활성 및MMP-9 활성 억제 활성을 측정하였다.
In order to examine the anti-inflammatory effect of the Paraliptera extract prepared in Example 1, nitric oxide (NO) production inhibitory activity, iNOS and COX-2 induction inhibitory activity and MMP-9 activity inhibitory activity were measured.

<4-1> 산화질소(<4-1> Nitric oxide ( NONO ) 생산 억제 활성) Production inhibitory activity

산화질소(NO)는 중요한 세포 내 전염증 매개인자로서, 수퍼옥사이드라디칼과 반응하여 과산화아질산 이온(peroxynitrite anion, ONOO-)을 생산하며, 이렇게 생산된 과산화아질산 이온은 염증 활성을 유도하고 관절염, 궤양성대장염, 전신홍반루푸스과 같은 다양한 병리학적 조건을 야기하는 것으로 알려져 있다. 따라서 산화질소(NO) 생산 억제 기작을 통하여 염증 반응을 억제할 수 있다.Nitric oxide (NO) is an important intracellular proinflammatory mediator, which reacts with a superoxide radical to produce peroxynitrite anion (ONOO-). The nitrite peroxide thus produced induces inflammatory activity and causes arthritis, ulcers It is known to cause a variety of pathological conditions such as chronic colitis and systemic lupus erythematosus. Therefore, the inflammatory reaction can be inhibited by a mechanism of inhibiting nitric oxide (NO) production.

본 실험에서는 마우스 대식세포(RAW264.7 세포)에 본 발명의 추출물을 전처리한 후, LPS를 처리하여 아질산염(산화질소의 지표) 수준을 측정하였으며, 이때 아질산염은 배지 내에서 그리스시약을 기초로 한 colorimetric assay를 이용하여 측정하였다. 산화질소(NO)의 기질인 L-arginine은 L-citrulline과 일산화질소로 변하는데, 이는 빠르게 안정된 이산화질소, 아질산염, 질산염으로 변한다. 그리스 시약은 아질산염과 화학 반응하여 보라색의 아조염을 형성하고 이것은 일산화질소의 농도와 일치하기 때문에, 아조염의 농도로부터 아질산염의 농도를 측정하여 540 nm에서 그 최대 흡수정도를 측정하여 구할 수 있다.In this experiment, the extract of the present invention was pretreated with mouse macrophages (RAW264.7 cells) and the level of nitrite (indicator of nitric oxide) was measured by treating with LPS, wherein the nitrite was detected in the medium colorimetric assay. L-arginine, a substrate for nitric oxide (NO), turns into L-citrulline and nitrogen monoxide, which quickly turns into stable nitrogen dioxide, nitrite, and nitrate. The Greek reagent chemically reacts with nitrite to form a purple azo salt, which is consistent with the concentration of nitrogen monoxide, and can be determined by measuring the nitrite concentration from the concentration of the azo salt and measuring its maximum absorption at 540 nm.

자세하게는 마우스 대식세포(RAW264.7 세포)를 96 웰 플레이트에 5.0×10⁵ cells/well로 분주하여 배양한 다음, 본 발명의 파리풀 추출물을 농도별(0, 10, 50, 200 ug/ml)로 처리한 후, 1ug/ml 농도의 LPS를 처리하여 37, 5% CO₂ 인큐베이터에서 24시간 배양하고, 산화질소(NO) 양은 그리스시약으로 측정하였다. 즉, 세포배양액 100ul와 6mg/ml 농도의 그리스 시약 100ul을 혼합하여 반응시킨 후, 아질산염(NO2-)을 540 nm에서 ELISA microplate reader (Tecan, USA)로 흡광도를 측정하였다. Sodium nitrite (NaNO2)로 흡광도를 측정하여 표준곡선을 얻은 후, NO의 농도를 산출하였다.In detail, mouse macrophages (RAW264.7 cells) were divided into 96-well plates at a density of 5.0 × 10 ⁵ cells / well and cultured. The extracts of Paraliptera according to the present invention were added at concentrations of 0, 10, 50 and 200 μg / ml, , Treated with LPS at a concentration of 1 ug / ml, cultured in a 37, 5% CO ₂ incubator for 24 hours, and the amount of NO (NO) was measured with a grease reagent. In other words, absorbance of nitrite (NO2-) was measured at 540 nm with an ELISA microplate reader (Tecan, USA) after mixing 100 μl of the cell culture solution and 100 μl of the grease reagent at the concentration of 6 mg / ml. Absorbance was measured with sodium nitrite (NaNO2) to obtain a standard curve, and the concentration of NO was calculated.

그 결과 도 5에서 나타낸 바와 같이, 대식세포에 LPS만을 처리한 실험군(아질산염 함량이 6.5배 증대)과 비교하여 본 발명의 파리풀 추출물을 처리한 실험군에서 농도 의존적으로 아질산염 수준이 감소되는 것을 알 수 있었다. 자세하게는 본 발명의 파리풀 추출물을 10, 50, 200ug/ml로 각각 처리한 실험군에서 94.9%, 54.8% 및 25.7% 까지 아질산염 수준이 감소되는 것으로 나타났다. 이를 통해 본 발명의 파리풀 추출물이 RAW264.7 대식세포에서 LPS에 의해 유도된 산화질소(NO) 생성을 효과적으로 감소시켜 강력한 항염증 활성을 가지는 것을 확인할 수 있었다. 참고로 도 4에서 Cont는 LPS 및 파리풀 추출물을 처리하지 않은 무처리군이며, 200은 본 발명의 파리풀 추출물을 200ug/ml로 처리한 후 LPS를 처리하지 않은 실험군을 의미한다.
As a result, as shown in FIG. 5, it was found that the nitrite level was decreased in a concentration-dependent manner in the experimental group treated with the Paraliptera extract of the present invention as compared with the experimental group (the nitrite content was increased 6.5 times) treated with LPS alone . In detail, nitrite levels were reduced to 94.9%, 54.8% and 25.7% in the experimental group treated with 10, 50 and 200 ug / ml of the extract of Paraliptera according to the present invention. Thus, it was confirmed that the Paraliptera extract of the present invention effectively inhibited the production of LPS-induced nitric oxide (NO) in RAW 264.7 macrophages, thus having strong anti-inflammatory activity. In FIG. 4, Cont is the untreated group treated with LPS and Paraliptera extract, and 200 indicates the experimental group treated with Paraliptera extract of the present invention at 200 ug / ml and not treated with LPS.

<4-2> <4-2> iNOSiNOS 및 And COXCOX -2 발현 유도 억제 활성-2 expression-inducing inhibitory activity

상기 실시예<4-1>에서는 본 발명의 파리풀 추출물이 RAW264.7 대식세포에서 LPS에 의해 유도된 산화질소(NO) 생성을 효과적으로 감소시킬 수 있음을 확인하였는바, 본 실험에서는 이러한 NO 생성 억제가 iNOS 발현 유도 억제를 통해 이루어지는 것인지를 확인하기 위하여 웨스턴 블랏으로 분석하였다. 또한 본 실험에서는 파리풀 추출물이 염증매개유전자인 프로스타글란딘(prostaglandin)을 합성하는 효소인 COX-2의 발현을 억제할 수 있는지 여부도 웨스턴 블랏을 통해 분석하였다.In Example <4-1>, it was confirmed that the extract of Parikapuga according to the present invention can effectively reduce the production of LPS-induced nitric oxide (NO) in RAW264.7 macrophages. In this experiment, Gt; iNOS < / RTI > expression induction was inhibited by Western blotting. In addition, Western blot analysis was also conducted to determine whether the extract of Paraliptera can inhibit the expression of COX-2, an enzyme that synthesizes prostaglandin, an inflammatory mediator.

iNOS는 inducible nitric oxide synthase의 약어로서 유도성 NOS라고 불리며, 병원균의 세포막 성분인 리포폴리사카라이드 (lipopolysaccharide: LPS), IL-1, TNF-a와 같은 사이토카인, 방사선 등의 면역 자극제에 의해 세포가 활성화될 때에만 여러 세포에서 많은 양이 발현되어 산화질소(NO) 생성을 유도하고, 이렇게 생성되는 산화질소는 염증발현이나 숙주방어기전 등에 작용하는 것으로 알려져 있다. 또한 COX-2는 혈관 내피 세포 및 혈관벽을 구성하는 평활근 세포, 점막하에 존재하는 선세포, 상피세포 등에서 발현되는 원암유전자의 하나로 염증매개유전자인 프로스타글란딘(prostaglandin)을 합성하는 효소로서, 아라키돈산을 프로스타노이드로 변환시켜 발열, 피로, 상피파열, 염증 및 여러 알러지 증상을 심화시키는 것으로 알려져 있다. iNOS is an abbreviation for inducible nitric oxide synthase. It is called inducible NOS. It is induced by immunostimulants such as lipopolysaccharide (LPS), cytokine such as IL-1 and TNF-a, Is activated only when a large amount is expressed in many cells to induce nitric oxide (NO) production. It is known that nitric oxide produced in such a manner acts on inflammation expression, host defense, and the like. In addition, COX-2 is an enzyme that synthesizes prostaglandin, an inflammatory mediator gene, which is one of the original cancer genes expressed in vascular endothelial cells, smooth muscle cells constituting blood vessel wall, subcutaneous subepithelial cells and epithelial cells. It is known to convert to nodal to exacerbate fever, fatigue, epithelial rupture, inflammation and various allergic symptoms.

RAW264.7 세포들은 파리풀추출물의 존재(10, 50, 200ug/ml) 또는 미존재 하에서 24시간 동안 LPS(1ug/ml)를 처리하여 배양한 후 차가운 인산완충식염수(PBS)로 두 번 세척하였다. 그 후 세포들을 20 mM HEPES (pH 7.9), 100 mM KCl, 300 mM NaCl, 10 mM EDTA, 1% SDS, 1 mM PMSF, 1 ug/ml leupeptin and 1 1ug/ml pepstatin을 포함하는 버퍼로 용해하였다. 면역블로팅을 위하여, 항-iNOS synthase(anti-iNOS; Transduction Laboratories, Lexington, KY, USA), 항-cyclooxygenase-2 (anti-COX-2; Transduction Laboratories, Lexington, KY, USA), 및 항-베타 엑틴 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) 항체들은 사용하였다.RAW264.7 cells were treated with LPS (1 ug / ml) for 24 h in the presence or absence (10, 50, 200 ug / ml) of L. parvum extract, and then washed twice with cold phosphate buffered saline (PBS). The cells were then lysed with buffer containing 20 mM HEPES (pH 7.9), 100 mM KCl, 300 mM NaCl, 10 mM EDTA, 1% SDS, 1 mM PMSF, 1 ug / ml leupeptin and 1 ug / ml pepstatin . (Anti-iNOS; Transduction Laboratories, Lexington, KY, USA), anti-COX-2 (Transduction Laboratories, Lexington, KY, USA) Beta-actin (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) antibodies were used.

그 결과 도 6에서 나타낸 바와 같이, 본 발명의 파리풀 추출물을 처리한 실험군에서 iNOS 발현이 농도 의존적으로 억제되는 것을 알 수 있었으며, 특히 파리풀 추출물의 처리 농도가 50 및 200ug/ml인 실험군에서, iNOS 유도가 완전히 억제되는 것으로 나타났다. 따라서 이를 통해 LPS로 자극된 대식세포에서의 NO 생산 억제는 iNOS의 유도 억제를 통해 이루어지는 것을 확인할 수 있었다. 또한 본 발명의 파리풀 추출물을 처리한 실험군에서 COX-2 발현도 억제되는 것을 알 수 있었다(상기 iNOS 발현 억제와 유사 수준). As a result, as shown in FIG. 6, iNOS expression was suppressed in a concentration-dependent manner in the experimental group treated with the Paralipto extract of the present invention. In particular, in the experimental group treated with the Paraliptera extract of 50 and 200 ug / ml, iNOS induction Was completely suppressed. Therefore, it was confirmed that inhibition of NO production in macrophages stimulated with LPS was induced by inhibition of iNOS induction. In addition, COX-2 expression was also inhibited in the experimental group treated with the Paralipto extract of the present invention (similar to the inhibition of iNOS expression).

따라서 이를 통해 본 발명의 파리풀 추출물의 항염증 활성이 iNOS 및 COX-2 발현 억제라는 기작을 통하여 이루어지는 것을 확인할 수 있었다.
Therefore, it was confirmed that the anti-inflammatory activity of the Paraliptera extract of the present invention is inhibited by iNOS and COX-2 expression inhibition.

<4-3> <4-3> MMPMMP 억제 활성 Inhibitory activity

세포외기질(extracellular matrix: ECM)의 여러 가지 성분을 분해하는데 중요한 역할을 하는 매트릭스 메탈로프로디나아제(Matrix metalloproteinase: MMP)는 염증 반응, 신생혈관형성 및 조직 재구성을 조절한다. MMPs 중에서, 특히 MMP-9는 각질세포, 파골세포, 호산구, 대식세포와 같은 다양한 세포주에서 발현되는 92kDa gelatinase B로서 타입 IV 콜라겐에 특이적으로 작용하여 염증, 뇌졸증, 종양생장 및 전이와 같은 질환에서 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다.Matrix metalloproteinase (MMP), which plays an important role in the degradation of various components of the extracellular matrix (ECM), regulates inflammation, neovascularization and tissue remodeling. Among the MMPs, MMP-9 is 92 kDa gelatinase B, which is expressed in various cell lines such as keratinocytes, osteoclasts, eosinophils, and macrophages, and specifically acts on type IV collagen to treat diseases such as inflammation, stroke, tumor growth and metastasis It is known to play an important role.

본 실험에서는 파리풀 추출물이 MMP-2 또는 MMP-9의 활성에 미치는 영향을 알아보기 위해 자이모그래피(zymorgraphy)를 실시하였다. 자세하게는 RAW264.7 세포들을 본 발명의 파리풀추출물의 존재(10, 50, 200ug/ml) 또는 미존재 하에서 24시간 동안 LPS(1μg/ml)를 처리하여 배양한 후 인산 완충액을 이용하여 세포를 3회 세척하였다. 각각의 실험군의 배양배지를 채취하여 세포에서 배지 내로 분비되어진 MMP-2와 MMP-9 단백질 활성을 측정하였다. 준비한 세포 용해물(30μg 단백질)시료는 standard laemmli acrylamide polymerization mixture(8%)에 1mg/ml의 젤라틴을 첨가하여 만든 젤 상에서 비 환원 조건 하에 전기영동하였다. 전기영동이 끝난 젤은 detergent solution(2.5% Triton X-100)을 15분간 두 번씩 처리하여 젤상에 남아있는 SDS를 제거하였다. 그 후 젤은 substrate buffer(50mM Tris-HCl, 5mM CaCl₂, NaN3)로 37℃에서 24시간 동안 반응시켰다. 젤은 0.1% 코마지 염색(Coomassie Brilliant Blue R-25 solution)을 실시하여 MMP-2 및 MMP-9의 활성을 측정하였다.In this experiment, zymography was performed to investigate the effect of Paraliptera extract on the activity of MMP-2 or MMP-9. In detail, RAW264.7 cells were treated with LPS (1 μg / ml) for 24 hours in the absence (10, 50, 200 ug / ml) of the extract of the present invention or 10 μg / ml of the extract of the present invention and the cells were cultured in phosphate buffer Lt; / RTI > The culture medium of each experimental group was collected and the activity of MMP-2 and MMP-9 protein secreted into the culture medium was measured. The prepared cell lysate (30 μg protein) was electrophoresed under non-reducing conditions on a gel made by adding 1 mg / ml of gelatin to a standard laemmli acrylamide polymerization mixture (8%). After the electrophoresis, the detergent solution (2.5% Triton X-100) was treated for 15 minutes twice to remove the SDS remaining on the gel. The gel was then reacted with substrate buffer (50 mM Tris-HCl, 5 mM CaCl ₂ , NaN 3) for 24 hours at 37 ° C. The activity of MMP-2 and MMP-9 was measured by applying 0.1% Coomassie Brilliant Blue R-25 solution to the gel.

그 결과 도 7에서 나타낸 바와 같이, 본 발명의 파리풀 추출물을 처리한 실험군에서 MMP2의 젤라틴 용해 활성은 변화되지 않은 반면, MMP-9의 젤라틴 용해 활성이 억제되는 것을 알 수 있었다. 이를 통해 본 발명의 파리풀 추출물이 LPS로 자극된 대식세포에서 MMP-9를 특이적으로 하향 조절할 수 있는 것을 확인할 수 있었다.
As a result, as shown in FIG. 7, it was found that the gelatin lytic activity of MMP2 was not changed but the gelatin lytic activity of MMP-9 was inhibited in the experimental group treated with Paraliptera extract of the present invention. Thus, it was confirmed that the Paraliptera extract of the present invention can specifically down-regulate MMP-9 in LPS-stimulated macrophages.

이하, 본 발명의 화장품 제형예로서 본 발명의 유효성분인 파리풀 추출물을 함유하는 화장수, 에센스, 바디 클린저 등을 예시하고자 한다. 그러나, 본 발명의 화장료의 제형이 반드시 상기 제형에 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, cosmetic formulations, essences, body cleansers and the like containing parchment extract as an effective ingredient of the present invention are exemplified as cosmetic formulations of the present invention. However, the formulation of the cosmetic of the present invention is not necessarily limited to the above-mentioned formulations.

[[ 제형예Formulation Example 1] 스킨로션 1] Skin Lotion

하기와 같은 성분 및 함량을 첨가하여 스킨로션을 통상의 방법에 따라 제조하였다.A skin lotion was prepared according to a conventional method by adding the following ingredients and contents.

파리풀 추출물 - 2.0 중량 %, 1,3-부틸렌글리콜 - 5.2 중량 %, 올레일알코올 - 1.5 중량 %, 에탄올 - 3.2 중량 %, 폴리솔베이트 20 - 3.2 중량 %, 벤조페논9 - 2.0 중량 %, 카르복실비닐폴리머 - 1.0 중량 %, 글리세린 - 3.5 중량 %, 향 - 미량, 방부제 - 미량, 정제수 - 잔량 %
2.0% by weight of Lycopersicon esculentum extract, 5.2% by weight of 1,3-butylene glycol, 1.5% by weight of oleyl alcohol, 3.2% by weight of ethanol, 3.2% by weight of polysorbate 20, 1.0% by weight of carboxyvinyl polymer, 3.5% by weight of glycerin, flavor-trace, preservative-trace, purified water-balance,

[[ 제형예Formulation Example 2] 에센스 2] essence

하기와 같은 성분 및 함량을 첨가하여 에센스를을 통상의 방법에 따라 제조하였다.Essences were prepared according to a conventional method by adding the following ingredients and contents.

파리풀 추출물 - 2.0 중량 %, 세토스테아릴 알코올 - 1.0 중량 %, 글리세릴모노스테아레이트 - 0.8 중량 %, 소르비탄모노스테아레이트 - 0.3 중량 %, 포로필파라벤 - 0.1 중량 %, 폴리솔베이트 60 - 1.0 중량 %, 미네랄오일 - 5.0 중량 %, 사이크로메치콘 - 3.0 중량 %, 디메치콘 - 0.5 중량 %, 알란토인 - 0.1 중량 %, 글리세린 - 5.0 중량 %, 알코올 - 2 중량 %, 프로필렌글리콜 - 3.0 중량 %, 향 - 미량, 방부제 - 미량, 정제수 - 잔량 %
1.0% by weight of cetyl alcohol extract, 1.0% by weight of cetostearyl alcohol, 0.8% by weight of glyceryl monostearate, 0.3% by weight of sorbitan monostearate, 0.1% 0.1% by weight of allantoin, 5.0% by weight of glycerin, 2% by weight of alcohol, 3.0% by weight of propylene glycol, 3% by weight of propylene glycol, Fragrance - trace amount, preservative - trace amount, purified water - residual amount%

[[ 제형예Formulation Example 3] 3] 바디body 클린저Cleanser

하기와 같은 성분 및 함량을 첨가하여 바디 클린저를 통상의 방법에 따라 제조하였다.A body cleanser was prepared according to a conventional method by adding the following components and contents.

파리풀 추출물 - 2.0 중량%, 알킬에텔당산염 (30%) - 30.0 중량%, 알킬에텔설포석신산염 (30%) - 20.0 중량%, 알킬아미도베타인 (30%) - 5.0 중량%, 프로필렌글리콜 - 5.0 중량%, 베타인 - 5.0 중량%, 라우라미드디이에이 - 4.0 중량%, 셀룰로스검 - 0.05 중량%, 가수분해단백질 - 0.1 중량%, 구연산 - 미량, NaCl - 미량, 향 - 미량, 방부제 - 미량, 정제수 - 잔량%
(30%), alkylether sulfosuccinate (30%) - 20.0 wt%, alkylamidobetaine (30%) - 5.0 wt%, propylene glycol 5.0% by weight of glucose, 5.0% by weight of betaine, 4.0% by weight of laura medicament, 0. 05% by weight of cellulose gum and 0.1% by weight of hydrolyzed protein, citric acid, trace amounts of NaCl, - trace, purified water - balance%

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.The present invention has been described with reference to the preferred embodiments. It will be understood by those skilled in the art that various changes in form and details may be made therein without departing from the spirit and scope of the invention as defined by the appended claims. Therefore, the disclosed embodiments should be considered in an illustrative rather than a restrictive sense. The scope of the present invention is defined by the appended claims rather than by the foregoing description, and all differences within the scope of equivalents thereof should be construed as being included in the present invention.

Claims

A cosmetic composition for whitening skin comprising an alopeco malax extract as an active ingredient.

A cosmetic composition for improving the wrinkles of skin comprising an extract of Paraliptera as an active ingredient.

3. The method according to claim 1 or 2,
The cosmetic composition according to claim 1, wherein the extract is a 70% ethanol extract of dried parchment root.

The method according to claim 1,
Wherein said paraliptera extract inhibits or inhibits the activity of tyrosinase to inhibit melanin production.

3. The method of claim 2,
The cosmetic composition for improving skin wrinkles is characterized by inhibiting or inhibiting the activity of hyaluronidase and inhibiting skin aging through antioxidant activity.

3. The method according to claim 1 or 2,
The cosmetic composition according to claim 1, wherein the extract is contained in an amount of 0.0001 to 20% by weight based on the total weight of the composition.

3. The method according to claim 1 or 2,
The composition may be in the form of a skin lotion, a skin softener, a skin toner, an astringent, a lotion, a milk lotion, a moisturizing lotion, a nutrition lotion, a massage cream, a nutrition cream, a moisturizing cream, a hand cream, Wherein the composition is one selected from the group consisting of a cleansing lotion, a cleansing cream, a body lotion, a body cleanser, an emulsion, a lipstick, a makeup base, a foundation, a press powder and a loose powder.

A cosmetic method, wherein the cosmetic composition of claim 1 or 2 is applied to human skin to prevent skin aging, improve skin wrinkles or skin whitening effect.