KR101410685B1 - 선천적 면역을 조절함으로써 감염을 치료 및 예방하는 것을 포함하는, 면역 관련 장애를 치료 및 예방하기 위한 신규한 펩티드 - Google Patents

선천적 면역을 조절함으로써 감염을 치료 및 예방하는 것을 포함하는, 면역 관련 장애를 치료 및 예방하기 위한 신규한 펩티드 Download PDF

Info

Publication number
KR101410685B1
KR101410685B1 KR1020087010890A KR20087010890A KR101410685B1 KR 101410685 B1 KR101410685 B1 KR 101410685B1 KR 1020087010890 A KR1020087010890 A KR 1020087010890A KR 20087010890 A KR20087010890 A KR 20087010890A KR 101410685 B1 KR101410685 B1 KR 101410685B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
peptide
peptides
subject
nucleic acid
seq
Prior art date
Application number
KR1020087010890A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20080070814A (ko
Inventor
오레오라 도니니
아네트 로제크
샤논 웨인 렌츠
Original Assignee
솔리제닉스, 인크.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 솔리제닉스, 인크. filed Critical 솔리제닉스, 인크.
Publication of KR20080070814A publication Critical patent/KR20080070814A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101410685B1 publication Critical patent/KR101410685B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/64—Cyclic peptides containing only normal peptide links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • C12Q1/37—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving peptidase or proteinase
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)

Abstract

한 측면에서, 본 발명은 피검체 내의 선천적 면역을 조절하고/하거나, 선천적 면역을 조절함으로써 치료하고 예방하는 것을 포함하는, 면역 관련 장애의 치료를 위해 사용될 수 있는 신규하게 동정된 펩티드를 제공한다. 또한 펩티드와 반응하는 물질, 펩티드를 포함하는 약제학적 조성물, 펩티드를 엔코딩하는 동정된 핵산 분자, 핵산 분자를 포함하는 재조합 핵산 컨스트럭트, 재조합 핵산 컨스트럭트를 포함하는 하나 이상의 숙주 세포, 및 상기 숙주 세포를 사용하여 펩티드를 생산하는 방법을 제공한다. 본 발명은 추가로 피검체에 본 발명의 펩티드를 투여하고, 그에 따라 피검체 내에서 선천적 면역을 조절함으로써 피검체에서 감염을 치료 및/또는 예방하는 방법을 제공한다. 추가적으로, 본 발명은 피검체가 본 발명의 펩티드를 이용한 치료에 반응할 것인지 여부를 예상하는 방법을 제공한다.
DPPIV, 면역, 강화, 관절염, 암, 펩티드, 핵산

Description

선천적 면역을 조절함으로써 감염을 치료 및 예방하는 것을 포함하는, 면역 관련 장애를 치료 및 예방하기 위한 신규한 펩티드{NOVEL PEPTIDES FOR TREATING AND PREVENTING IMMUNE-RELATED DISORDERS, INCLUDING TREATING AND PREVENTING INFECTION BY MODULATING INNATE IMMUNITY}
본원과 관련된 선출원
본원은 “선천적 면역을 조절함으로써 감염을 치료 및 예방하기 위한 신규한 펩티드”라는 제목으로 2005년 10월 4일에 출원된, 미국 가출원 제 60/722,962호; 제60/722,958호; 및 제 60/722,959호에 대한 우선권을 주장하며, 상기 특허출원 모두는 참고문헌으로써 본원에 통합된다.
발명의 분야
본 발명은 선천적 면역을 조절함으로써 감염을 치료 및 예방하는 것을 포함하는, 면역 관련 장애(immunity-related disoders)를 치료 및 예방하는데 사용하기 위한 펩티드와 관련이 있다. 한 측면에서, 본 발명은 선천적 면역을 조절하기 위한 조성물 및 이의 용도와 관련이 있다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 DPPIV 활성을 감소시키는데 효과적인 신규한 펩티드 및 이의 용도를 제공한다.
발명의 배경
바이러스, 박테리아, 진균, 및 기생충을 포함하는, 다양한 미생물이 질병을 유발시킨다. 미생물의 세포들은 동물 및 식물의 세포들과는 구별되는데, 자연에서 단독으로 생존할 수 없고, 다세포 개체들의 일부로서만 존재한다. 미생물의 세포들은, 부분적으로, 미생물 및 숙주 상태에 의존하여, 병원성이거나 비병원성일 수 있다. 예를 들어, 면역저하된(immunocompromised) 숙주에서, 일반적으로 무해한 박테리아가 병원체가 될 수 있다. 숙주 세포로의 진입이 세포내 환경(intracellular milieu)에서 복제하는 박테리아 병원체의 생존에 중요하다. 세포외 위치에서 복제하는 개체들에 있어서, 숙주 세포로의 박테리아 진입의 중요성은 그다지 잘 규명되어 있지 않다.
약물 내성은 감염에 대항하기 위해 진행중인 노력에 장애가 된다. 예를 들어, 페니실린은 스태필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus)를 치료하는데 효과적이나, 상기 박테리아가 내성을 보유하기 전까지만 효과적이다. 20세기 중 두번째 반세기 내내, 반코마이신과 메티실린과 같은, 신규한 항생제가 개발되었다; 이러한 항생제들은 S. 아우레우스(S. aureus) 감염을 성공적으로 치료하였다. 그러나, 1970년대에 S. 아우레우스(S. aureus)의 메티실린-내성종이 진화하였고, 그 이후로 전세계적으로 병원에 만연되어 왔다. 더 최근에는, S. 아우레우스(S. aureus)의 반코마이신-내성종이 출현하였다.
항미생물 약물(antimicrobial drugs)에 대한 내성의 위협의 증가 및 신규한 감염성 질환의 발생으로, 신규한 치료 화합물에 대한 지속적인 요구가 존재한다. 숙주에는 작용하나, 병원체에는 작용하지 아니하는, 치료제가 바람직한데, 이러한 치료제는 병원체의 내성을 조장하지 아니하기 때문이다. 특히, 선천적 면역 시스템을 통해 숙주에 작용하는 약물이 유력한 치료제의 원천을 제공한다.
미생물에 대한 숙주 방어는 신체 및 선천적 면역시스템의 표피 장벽과 함께 시작되며, 후천적 면역 반응의 유도 시에 최고조에 달하게 된다. 숙주 선천적 면역 반응은 미생물 감염을 인지하고 이에 대항하는 고도로-보존된 메카니즘의 세트들을 포함한다. 선천적 면역의 인자들은 지속적으로 낮은 수준으로 유지되고, 자극을 받게 되면 매우 급속히 활성화된다. 선천적 면역 반응은 박테리아 병원체에 노출된 후 즉시 일어나는 사건들과 함께 시작된다. 면역글로불린 수용체 유전자들의 재배열과 같은, 후천적 면역과 관련된 사건들은 선천적 면역반응의 일부로 고려되지 아니한다.
선천적 면역반응이 대부분의 감염들을 조절하기 위한 수단이 되며, 또한 염증 반응에도 기여한다는 것을 지지하는 증거가 있다. 감염에 의해 촉발된 염증 반응이 질병 병리기작(pathogenesis)의 중추적인 구성원이 되는 것으로 알려져 있다. 선천적 면역반응에서 톨-유사 수용체(Toll-like receptors, TLRs)의 중요성도 또한 잘 규명되어 있다. TLR의 포유류 패밀리는 보존된 분자들을 인지하는데, 이러한 분자들의 다수는 미생물 병원체의 표면 상에서 발견되거나, 미생물 병원체에 의해 배출된다. 숙주의 선천적 방어을 개시시키고/시키거나 기여하는 수많은 다른 메카니즘들이 존재하는데, 이들의 특성은 그다지 잘 규명되어 있지 않다.
선천적 면역 시스템은 소정 범위의 보호 메카니즘을 제공하는데, 여기에는 표피-장벽 기능 및 사이토카인과 케모카인의 분비가 포함된다. 현재까지, 케모카인은 보존된 N-말단 시스테인 모티프의 개수에 근거하여 4개의 패밀리로 분류되었다: C, CC, CXC, 및 CX3C, 여기서 X는 비보존된 아미노산 잔기이다. CXC 케모카인은 단핵구, 활성화된 T 세포(Th1)와 NK 세포를 포함하는, CXCR3 수용체를 지니는 세포에 대하여 화학주성(chemotactic)을 나타내는 것으로 알려져 있다. 일차 인간 기도 상피세포(primary human airway epithelial cells), 및 세포주 16-HBE은 구조적으로(constitutively) CXCR3 수용체와 이의 리간드(IP-10, I-TAC, 및 MIG)를 발현한다(Kelsen et al., The chemokine receptor CXCR3 and its splice variant are expressed in human airway epithelial cells, Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol., 287:L584, 2004). 더욱이, CXCR3 리간드는 화학주성 반응과 16-HBE 세포에서 액틴 재구성을 유도한다(Kelsen et al., The chemokine receptor CXCR3 and its splice variant are expressed in human airway epithelial cells, Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol., 287:L584, 2004).
추가로, CD26 또는 아데노신 디아미나제 결합 단백질로도 알려져 있는, II형 트랜스멤브레인 세린 프로테아제 디펩티딜 펩티다제 IV(DPPIV, transmembrane serine protease dipeptidyl peptidase)는 면역 기능을 포함한 다양한 생리학적 과정의 주요 조절자(regulator)이다. CD26/DPPIV는 110-kD의 세포 표면 당단백질인데, 주로 성숙한 흉선세포, 활성화된 T-세포, B-세포, NK-세포, 대식세포, 및 상피 세포에서 발현된다. 상기 단백질은, 신호 전달(transduction) 기능 및 단백질 가수분해 기능과 같은, 2가지 이상의 기능을 지닌다(Morimoto C, Schlossman SF. The structure and function of CD26 in the T-cell immune response. Immunol. Review. 1998, 161: 55-70.). 상기 단백질의 세포내 역할 중의 하나는 케모카인 N-말단으로부터 디펩티드(dipeptides)를 절단하여 케모카인 활성을 변 형(modulation)시키는 것을 포함한다. 케모카인의 NH2 말단의 변형은 이들의 수용체에 대한 결합과 후속 반응을 위해서 뿐만 아니라, 가공된 케모카인의 수용체 특이성(specificity)을 변형시키는데에도 매우 중요하다. DPPIV 활성은 수많은 면역과 관련된 병태와 연관되어 있다.
발명의 요약
본 발명자들은 표 1에 나열 및 기재된 펩티드들 중 어느 하나의 아미노산 서열 또는 이의 유사체, 유도체, 또는 변이체를 포함하는 펩티드들이 숙주의 선천적 면역을 강화시킨다는 것을 발견하였다. 한 측면에서, 본 발명의 면역조절성(immunomodulatory) 펩티드들은 항미생물 활성은 결여되어 있는 것으로 밝혀졌으나, 감염된 숙주에서 생존을 개선시키는 활성이 있음이 입증되었다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 DPPIV 활성을 변형시키는 펩티드들을 제공한다. 한 측면에서, 본 발명은 DPPIV 활성을 감소시키는 펩티드들을 제공한다. 아직 또 다른 측면에서, 본 발명은 DPPIV 활성 및/또는 선천적 면역과 연관된 장애와 같은, 면역학적 장애의 진단, 치료, 또는 예방에 사용될 수 있는 펩티드들을 제공한다.
따라서, 한 측면에서, 본 발명은 동정된 펩티드를 제공하는데, 상기 동정된 펩티드는 표 1의 아미노산 서열 중 임의의 한 서열 또는 이의 유사체, 유도체, 또는 변이체 또는 이의 명확한 화학적 균등체 또는 상기 펩티드를 내포하는 펩티드를 포함한다. 한 구체예에서, 펩티드는 상기 펩티드를 포함하는 최대 길이가 아미노산 10개인 펩티드이다. 일예로, 동정된 펩티드는 변형된 C-말단(예를 들어, 아미드화된 C-말단) 및/또는 변형된 N-말단을 지닌다. 본 발명의 동정된 펩티드는 추가로 하나 이상의 D형 아미노산의 치환으로 변형된 표 1의 아미노산 서열을 포함한다. 동정된 펩티드는 추가로 변형된 골격(backbone)을 포함할 수 있는데, 일예로, N-말단이 아미드에서 N-메틸로 변형된다. 한 측면에서, 모 펩티드의 면역학적 활성을 보유하는 그러한 변형된 펩티드들 및 상기 활성을 보유하는 이의 명백한 화학적 균등체가 본 발명의 영역 내에 포함된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 추가로 표 1의 아미노산 서열 또는 이의 유사체, 유도체, 또는 변이체를 포함하는 동정된 펩티드와 반응하는 물질(agents)을 제공한다. 한 구체예에서, 상기 물질은 천연적으로 생성되지 않는 항체(예를 들어, 다클론 또는 단일클론 항체)이다. 한 구체예에서, 항체는 펩티드의 C-말단에 삽입된 2개의 글리신 잔기를 통해 본 발명의 펩티드에 부착된 맵스 안티젠(MAPS Antigen)을 이용하여 제조된다. 그후에, 상기 컨스트럭트는 래빗과 같은 동물에 투여될 수 있으며, 당업계에 잘 알려진 절차를 이용하여 항체가 수확될 수 있다. 한 측면에서, 그러한 물질들은 표지되거나 본 발명의 펩티드를 표지하는데 사용될 수 있다. 또 다른 측면에서, 그러한 물질들은 펩티드 활성을 변형시킬 수 있는 물질을 모니터하거나 펩티드의 양을 정량하기 위한 진단 및 스크리닝 방법에서 사용될 수 있다.
아직 또 다른 측면에서, 본 발명은 표 1의 아미노산 서열 또는 이의 유사체, 유도체, 또는 변이체를 지니거나 포함하는 동정된 펩티드를 엔코딩하는 동정된 핵산 분자를 제공한다. 발현 벡터에 작동가능하게 연결된 핵산 분자를 포함하는 재조합 핵산 컨스트럭트가 또한 제공된다.
추가의 측면에서, 본 발명은 본 발명의 재조합 핵산 컨스트럭트를 포함하는 하나 이상의 숙주 세포들을 제공한다. 표 1의 아미노산 서열 또는 이의 유사체, 유도체, 또는 변이체를 지니거나 포함하는 펩티드를 생산하기 위한 방법이 또한 제공되는데, 하기 단계에 의해 제공된다: (a) 상기 펩티드의 발현이 허용되는 조건하에서, 하나 이상의 숙주 세포를 배양하는 단계; 및 (b) 상기 하나 이상의 숙주 세포 또는 이의 배양 배지로부터 상기 펩티드를 회수하는 단계.
여전히 또 다른 측면에서, 본 발명은 약제학적으로 허용되는 담체, 희석제, 또는 부형제와 조합하여, 표 1의 아미노산 서열 또는 이의 유사체, 유도체, 또는 변이체를 지니거나 포함하는 동정된 펩티드를 함유하는 약제학적 조성물을 제공한다(약제학적으로 허용되는 염, 부가염, 또는 앞서 제시된(foregoing) 염 또는 다형체(polymorph) 중 어느 하나의 에스테르를 포함함).
또 다른 측면에서, 본 발명은 표 1의 아미노산 서열 또는 이의 유사체, 유도체, 또는 변이체 또는 이의 명백한 화학적 균등체를 지니거나 포함하는 펩티드를 피검체에 투여함으로써, 피검체에서 감염(예를 들어, 박테리아 감염)을 치료 및/또는 예방하기 위한 방법을 제공한다. 일예로, 피검체는 감염을 지니거나, 감염될 위험이 있을 수 있다. 한 구체예에서, 펩티드는 피검체에서 선천적 면역을 조절하고, 그 때문에 피검체에서 감염을 치료 및/또는 예방한다. 본 발명은 추가로 본 발명의 펩티드로 치료될 수 있는 박테리아 감염을 확인하기 위한 방법을 제공한다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 DPPIV와 관련된 병태 또는 장애를 치료 또는 예방하기 위한 방법을 제공한다.
본 발명의 방법으로 치료 및/또는 예방될 수 있는 대표적인 감염들은 박테리아에 의한 감염(예를 들어, 그램-양성 또는 그램-음성 박테리아), 진균에 의한 감염, 기생충에 의한 감염, 및 바이러스에 의한 감염을 포함한다. 본 발명의 한 구체예에서, 감염은 박테리아 감염(예를 들어, 대장균(E. coli), 클렙시엘라 뉴모니애(Klebsiella pneumoniae), 슈도모나스 애루지노사(Pseudomonas aeruginosa), 살모넬라 종(Salmonella spp.), 스태필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 스트렙토코쿠스 종(Streptococcus spp.), 및 반코마이신-내성 엔테로코쿠스(vancomycin-resistant Enterococcus)에 의한 감염)이다. 또 다른 구체예에서, 감염은 진균 감염(예를 들어, 사상균(mould), 효모, 고등 진균(higher fungus)에 의한 감염)이다. 여전히 또 다른 구체예에서, 감염은 기생충 감염(예를 들어, 지아르디아 듀오데나리스(Giardia duodenalis), 크립토스포리디움 파븀(Cryptosporidium parvum), 시클로스포라 카예타넨시스(Cyclospora cayetanensis), 및 톡소플라스마 곤디(Toxoplasma gondii)를 포함하는, 단세포 또는 다세포 기생충에 의한 감염)이다. 아직 또 다른 구체예에서, 감염은 바이러스 감염(예를 들어, AIDS, 조류 독감, 수두, 단순성 포진, 보통의 감기, 위장염, 선열(glandular fever), 인플루엔자, 홍역, 유행성 이하선염, 인두염, 폐렴, 풍진, 사스(SARS), 및 하부 또는 상부 기도 감염(예를 들어, 호흡기세포융합바이러스))과 관련된 바이러스에 의한 감염)이다.
본 발명의 방법에 따라서, 표 1의 아미노산 서열 또는 이의 유사체, 유도체, 또는 변이체를 지니거나 포함하는 펩티드는 피검체에 직접적으로(즉, 펩티드 자체를 투여함으로써) 또는 간접적으로(예를 들어, 피검체 내에서 펩티드의 발현이 허용되는 방식으로, 펩티드를 엔코딩하는 핵산 서열을 피검체에 투여함으로써) 투여될 수 있다. 본 발명의 펩티드(또는 당해 펩티드를 엔코딩하는 핵산)는 피검체에 경구적으로, 비경구적으로[예를 들어, 피내로(intradermally), 근내로(intramuscularly), 복막내로(intraperitonealy), 정맥내로, 또는 피하로(subcutaneously)], 경피로(transdermally), 비내로(intranasally), 폐투여로(예를 들어, 기관내(intratracheal) 투여로), 투여되고/되거나 삼투펌프(osmotic pump)에 의해 투여될 수 있다.
아직 또 다른 측면에서, 본 발명은 DPPIV 활성에 대하여 피검체의 진단 샘플을 분석함으로써, 표 1의 아미노산 서열 또는 이의 유사체, 유도체, 또는 변이체를 포함하는 펩티드를 이용한 치료(treatment)에 피검체가 반응할 것인지 여부를 예상하기 위한 방법을 제공하는데, 여기서, DPPIV 활성의 감소와 같은, 변형은 피검체가 펩티드에 의한 치료에 반응할 것임을 나타내는 지표가 된다. 한 측면에서, 피검체는 DPPIV와 관련된 병태 또는 장애를 지니거나 이를 지니는 것으로 의심된다.
본 발명의 추가적인 측면 및 이점은 아래에 제시한 설명을 고려하면 명백해질 것이다. 그러나, 본 발명의 상세한 설명에 기초하여 본 발명의 정신 및 영역내에서의 다양한 변경 및 변형은 당업계의 통상의 기술자에게 자명할 것이기 때문에, 비록 상세한 설명 및 특정 실시예들이 본 발명의 바람직한 구체예들을 제시하고 있지만, 단지 설명을 위한 예시로 제시된 것임을 이해하여야 한다.
도면의 간단한 설명
본 발명은 지금부터 도면과 연계하여 기술될 것이다:
도 1A 및 1B는 실시예 2에 기술된 실험의 결과를 보여준다. 생존율(%) = 비히클 대조군(트리스)과 대비한 성장 박테리아의 양(서열번호 5 및 47에 해당하는 펩티드 각각의 경우의 박테리아 생존율을 100%로 지정함); Erythr. = 에리쓰로마이신.
도 2A-2G는 실시예 3에 기술된 실험의 결과를 보여준다. 그래프는 Y축 상에 ㎖ 당 콜로니형성 유닛((CFU/㎖)을 보여주며, X축 상에 처치군(대조군 = 펩티드 없음; 서열번호 1, 4, 5, 6, 45 및 47 = 각각의 해당 아미노산 서열을 지니는 펩티드로 처치)을 보여준다. 개별 생쥐에서의 박테리아 수(count)가 제시되어 있다.
도 3A 및 3B는 실시예 4에 기술된 실험의 결과를 보여준다. 그래프는 Y축 상에 ㎖ 당 콜로니형성 유닛((CFU/㎖)을 보여주며, X축 상에 처치군(대조군 = 펩티드 없음; 서열번호 1 및 5 = 각각의 해당 아미노산 서열을 지니는 펩티드로 처치)을 보여준다. 개별 생쥐에서의 박테리아 수가 제시되어 있다.
발명의 상세한 설명
정의
본원에서 사용된 것과 같은, “DPPIV 관련 장애” 또는 “DPPIV 관련 병태(DPPIV-related condition)”또는 “DPPIV 연관 병태(DPPIV-associated condition)”는 DPPIV 활성과 서로 관련되어 있는 임의의 의학적 상태를 의미하며, 여기서 상기 단백질 활성의 변형은 상기 병태를 치료 및/또는 예방 또는 진단하는데 사용될 수 있다. 그러한 병태의 일예는 하기를 포함하나, 이에만 국한되는 것은 아니다: HIV/AIDS, 자가면역 병태, 예컨대, 류머티즘성 관절염, 다발성 경화증, 암(예를 들어, 대장 및 폐), 당뇨병, 및 그레이브 병.
용어“면역 관련 장애”는 면역 시스템의 활성화 또는 억제 둘 중 어느 하나를 통해, 피검체의 면역 시스템과 연관되어 있거나, 선천적 면역반응과 같은, 피검체 내의 면역 반응의 특정 구성원을 표적으로 삼음으로써 치료, 예방 또는 진단될 수 있는 병태이다.
본원에서 사용된 것과 같은, 용어“면역학적으로 활성인”은 선천적 면역 활성(예를 들어, 피검체내의 선천적 면역반응 또는 이의 구성원을 조절하는 활성) 또는 DPPIV 활성을 조절하는 활성을 의미한다.
본원에서 사용된 것과 같은, 예를 들어, "PPIV 활성 또는 특정 반응을 조절하는" 에서와 같이, “조절하다” 또는 “조절하는”는 조절에 관하여 활성 또는 반응의 증가 또는 감소 또는 특정 조건하에서의 활성 또는 반응의 정상치 또는 기준치(baseline level)를 포함한다.
"약제학적으로 허용되는 염"은 무독성 알칼리 금속, 알칼리 토 금속, 및 당업계에 널리 알려진 방법으로 제조되는, 나트륨, 칼륨, 리튬, 칼슘, 마그네슘, 바륨, 암모니움, 및 프로타민 아연 염을 포함하는 약제 산업에서 일반적으로 사용되는 암모니움 염을 의미한다. 상기 용어는 또한 본 발명의 화합물을 적당한 유기산 또는 무기산과 반응시킴으로써 일반적으로 제조되는, 무독성 산 부가염을 포함한다. 대표적인 염은 염화수소산, 브롬화수소산, 설페이트, 비설페이트(bisulfate), 아세테이트, 옥살레이트, 발러레이트, 올레이트, 라우레이트, 보레이트, 벤조에이트, 락테이트, 포스페이트, 토실레이트, 시트레이트, 말레이트, 푸마레이트, 석시네이트, 타르타레이트, 나프실레이트, 트리플루오로아세테이트, 및 유사염을 포함한다.
"약제학적으로 허용되는 산 부가염"은 유리 염기의 생물학적 유효성과 특성을 보유하며, 생물학적으로 또는 다른 측면으로 바람직한 그러한 염을 의미하는데, 염화수소산, 염화브롬산, 황산, 질산, 인산 등과 같은 무기산, 트리플루오로아세트산, 아세트산, 프로피온산, 플리콜산, 피루브산, 올살산, 말산, 말론산, 석신산, 말레산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 시남산, 만델산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, p-톨루엔설폰산, 살리실산 등과 같은 유기산으로 형성된다. 전구약물로서 약제학적으로 허용되는 산 부가염에 대한 상세한 설명에 관하여, 다음 참고문헌을 참조하라(Bundgaard, H., ed., (1985) Design of Prodrugs, Elsevier Science Publishers, Amsterdam).
"약제학적으로 허용되는 에스테르"는, 에스테르 결합의 가수분해시, 카르복시 산 또는 알코올의 생물학적 유효성과 특성을 보유하고 생물학적으로 또는 다른측면으로 바람직한 그러한 에스테르들을 의미한다. 전구약물로서 약제학적으로 허용되는 에스테르에 대한 설명에 관하여 번드가드의 문헌(Bundgaard, H., 전게서)을 참고하라. 그러한 에스테르는 전형적으로 상응하는 카르복시산 및 알코올으로부터 형성된다. 일반적으로, 에스테르 형성은 통상의 합성 기술을 통해 이루어질 수 있다. (참조예: March, Advanced Organic Chemistry, 3rd Ed., John Wiley & Sons, New York (1985) p. 1157 and references cited therein, and Mark et al., Encyclopedia of Chemical Technology, John Wiley & Sons, New York (1980)). 에스테르의 알코올 성분은 일반적으로 (i) 하나 이상의 이중 결합 또는 분지된(branched) 탄소 사슬을 포함하거나 포함하지 아니할 수 있는 C2-C12 지방족 알코올 또는 (ii) C7-C12 방향족 또는 헤테로방향족 알코올을 포함할 것이다. 본 발명은 또한 여기에 기술된 것과 같은 2가지 에스테르가 존재하며 동시에 이의 약제학적으로 허용되는 산 부가염이 존재하는 그러한 조성물의 사용을 고려하고 있다.
"약제학적으로 허용되는 아미드"는, 아미드 결합의 가수분해시, 카르복시산 또는 아민의 생물학적 유효성 및 특성을 보유하며 생물학적으로 또는 다른 측면에서 바람직한 그러한 아미드를 의미한다. 전구약물로서 약제학적으로 허용되는 아미드에 대한 설명에 관하여 번드가드의 문헌(Bundgaard, H., 전게서)을 참고하라. 이러한 아미드는 전형적으로 상응하는 카르복시산 및 아민으로부터 형성된다. 일반적으로, 아미드 형성은 통상의 합성 기술을 통해 이루어질 수 있다. (참조예: March, Advanced Organic Chemistry, 3rd Ed., John Wiley & Sons, New York (1985) p.1152 및 Mark et al., Encyclopedia of Chemical Technology, John Wiley & Sons, New York (1980)). 본 발명은 또한 본원에 기재한 것과 같은 2가지 아미드가 존재하며 동시에 이의 약제학적으로 허용되는 산 부가염이 존재하는 그러한 조성물의 사용을 고려하고 있다.
"약제학적으로 또는 치료학적으로 허용되는 담체"는 활성 성분들의 유효한 생물학적 활성을 저해하지 않으며, 숙주 또는 환자에게 무독한 담체 매체(medium)를 의미한다.
"입체이성질체"는 다르게 분류되는(grouped) 원자들을 지님으로써 서로 다름에도 불구하고, 동일한 분자량, 화학적 조성, 및 구성을 지니는 화합물이다. 즉, 어떤 동일한 화학 모이어티들(moieties)이 공간에서 서로 다른 배향(orientations)으로 존재하고, 그 때문에, 순수한 경우, 평면 편광을 회전시킬 수 있는 능력을 갖는다. 그러나, 몇몇 순수한 입체이성질체들은 너무나 미미한 광학 회전을 지닐 수 있어서 현재의 수단으로는 검출이 불가능하다. 본 발명의 화합물들은 하나 이상의 비대칭 탄소 원자를 지닐 수 있고, 그에 따라서 다양한 입체이성질체들을 포함할 수 있다. 면역학적으로 활성인 모든 입체이성질체들이 본 발명의 영역내에 포함된다.
본 발명의 조성물에 적용되는 것과 같은 "치료학적으로 또는 약제학적으로 유효한 양"은 요망되는 생물학적 결과를 유도하기 위한 조성물의 양이 충분하다는 것을 의미한다. 상기한 결과는 질병의 징후(signs), 증상, 또는 원인의 경감, 또는 생물학적 시스템에 대한 임의의 다른 요망되는 변형일 수 있다. 예를 들어, 본 발명에서, 결과는 전형적으로 선천적 면역반응의 강화, DPPIV 활성의 감소 및/또는 감염 또는 조직 손상에 대한 염증 반응의 조절(예컨대, 억제 또는 감소 또는 비자극(non-stimulation))을 포함할 것이다.
펩티드에서 아미노산 잔기들은 다음과 같이 축약된다: 페닐알라닌은 Phe 또는 F; 류신은 Leu 또는 L; 이소류신은 Ile 또는 I; 메티오닌은 Met 또는 M; 발린은 Val 또는 V; 세린은 Ser 또는 S; 프롤린은 Pro 또는 P; 트레오닌은 Thr 또는 T; 알 라닌은 Ala 또는 A; 티로신은 Tyr 또는 Y; 히스티딘은 His 또는 H; 글루타민은 Gln 또는 Q; 아스파라진은 Asn 또는 N; 리신은 Lys 또는 K; 아스파르트산은 Asp 또는 D; 글루탐산은 Glu 또는 E; 시스테인은 Cys 또는 C; 트립토판은 Trp 또는 W; 아르기닌은 Arg 또는 R; 글리신은 Gly 또는 G. 또한, 축약어 Nal은 1-나프틸알라닌을 나타내기 위해 사용된다; 오르니틴은 Orn 또는 O이고, Cit는 시트룰린이며, Hci는 1개 이상의 메틸렌기를 지니는 시트룰린이고, Vx는 발린x인데, 여기서 “x”는 아미노산의 골격 내에 변이(variation)를 의미하며, 아미노산 결합은 더 이상 아미드 결합은 아니나, 메틸화된 아민이며, 상기 정의는 "x”표기를 지닌 다른 아미노산에 유사하게 적용된다. 또한, 2,4-디아미노부티르산은 Dab이고; 2,3-디아미노프로피온산은 Dpr 또는 Dapa이며; N-(4-아미노부틸)-글리신은 Nlys이고; hSer은 호모세린이며; Hyp는 히드록시프롤린이고; Val(베타OH)는 히드록시발린이며; D-Pro은 3,4-디히드로프롤린(dehydroproline)이고; Pyr은 피로글루타민(고리 내에 C=O를 지니는 프롤린); 고리 상에 플루오르 치환기를 지닌 프롤린; 1,3-티아졸리딘-4-카르복시산(고리 내에 S를 지니는 프롤린); Thi는 베타-(2-티에닐)-알라닌이며; Abu는 2-아미노부티르산이고; Nva는 노르발린이며; Nle은 노르류신이고; Hol은 호모류신이며; Aib는 알파-아미노이소부티르산이다.
천연적으로 생성되는 아미노산들 만으로 구성된 펩티드들 이외에, 펩티드모방체(peptidomimetics) 또는 펩티드 유사체가 또한 제공된다. 펩티드 유사체는 주형(template) 펩티드의 특성과 유사한 특성을 지닌 비펩티드(non-peptide) 약물로서 약제 산업분야에서 일반적으로 사용된다. 이러한 유형의 비펩티드 화합물은 "펩티드 모방체(peptide mimetics)" 또는 "펩티드모방체(peptidomimetics)"로 불리운다(Fauchere, J., Adv. Drug Res. 15:29 (1986); Veber and Freidinger, TINS p. 392 (1985); 및 Evans et al., J Med. Chem. 30:1229 (1987), 상기 문헌들은 본원에서 참고문헌으로 인용된다). 치료학적으로 유용한 펩티드와 구조적으로 유사한 펩티드 모방체는 등가이거나 강화된 치료적 효과 또는 예방적 효과가 생성되도록 하기 위하여 사용될 수 있다. 일반적으로, 펩티드모방체는, 천연적으로 생성되는 수용체 결합 펩티드와 같은, 표준(paradigm) 펩티드(즉, 생물학적 또는 약리학적 활성을 지니는 펩티드)와 구조적으로 유사하나, --CH2NH--, --CH2S--, --CH2=CH2--, --CH=CH--(시스와 트랜스), --COCH2--, --CH(OH)CH2--, 및 --CH2SO--로 구성된 군에서 선택된 결합(linkage)에 의해 선택적으로 대체된 하나 이상의 펩티드 결합을 지니며, 상기 대체는 당업계에 공지되어 있으며 추가로 다음 참고문헌들에 소개되어 있는 방법에 의해 수행될 수 있다: Spatola, A. F. in Chemistry and Biochemistry of Amino Acids, Peptides and Proteins, B. Weinstein, eds., Marcel Dekker, New York, p. 267 (1983); Spatola, A. F., Vega Data (March 1983), Vol. 1, Issue 3, Peptide BACKBONE MODIFICATIONS (general review); Morley, Trends Pharm Sci (1980) pp. 463 468 (general review); Hudson, D. et al., Int J Pept Prot Res 14:177 185 (1979):(--CH2NH--, CH2CH2--); Spatola et al., Life Sci 38:1243 1249 (1986): (--CH2--S); Hann J. Chem. Soc. Perkin Trans. I 307 314 (1982):(--CH--CH--, cis and trans); Almquist et al., J Med Chem 23:1392 1398 (1980):(--COCH2--); Jennings-White et al., Tetrahedron Lett 23:2533 (1982):(--COCH2--); Szelke et al., European Application. EP 45665 CA: 97:39405 (1982):(--CH(OH)CH2); Holladay et al., Tetrahedron Lett 24:4401 4404 (1983):(--C(OH)CH2--); 및 Hruby Life Sci 31:189 199 (1982):(--CH2--S--)(상기 각각의 문헌은 본원에서 참고문헌으로 인용된다). 한 측면에서, 비펩티드 결합은 --CH2NH--이다. 그러한 펩티드 모방체들은 폴리펩티드 구체예들을 능가하는 상당한 이점을 지닐 수 있는데, 상기 이점에는, 예를 들어, 다음과 같은 것들이 포함된다: 더 경제적인 생산, 더 우수한 화학적 안정성, 강화된 약리학적 특성(반감기, 흡수, 유효성(potency), 효능 등), 변형된 특이성(예를 들어, 광범위한 생물학적 활성), 감소된 항원성 등. 펩티드모방체의 표지화(labelling)는 일반적으로 정량적 구조 활성 데이터 및/또는 분자 모델링에 의해 예상되는 펩티드모방체 상의 불간섭(non-interfering) 위치(들)에, 직접적으로 또는 스페이서(예를 들어, 아미드기)를 통해 공유결합적으로 부착되는 하나 이상의 표지들을 포함한다. 그러한 불간섭 위치들은 일반적으로 치료 효과가 생성되도록 하기 위해 펩티드모방체가 결합하는 거대분자(들)(예를 들어, 면역글로불린 수퍼패밀리 분자들)과 직접적인 접촉을 이루지 아니하는 위치들이다. 펩티드모방체의 유도체화(derivatization)(예를 들어, 표지화)는 실질적으로 펩티드모방체의 요망되는 생물학적 또는 약리학적 활성에 간섭하지 아니하여야 한다. 일반적으로, 수용체-결합 펩티드들의 펩티드모방체는 높은 친화력으로 수용체에 결합하고 검출가능한 생물학적 활성을 지닌다(즉, 하나 이상의 수용체 매개성 표현형 변화에 대해 작용적(agonistic)이거나 길항적(antagonistic)이다).
더 안정한 펩티드들을 생산하기 위하여 동일한 유형의 D-아미노산을 이용한 컨센서스 서열의 하나 이상의 아미노산들의 전체적(systematic) 치환(예를 들어, L-리신을 D-리신으로 대체)이 사용될 수 있다. 펩티드의 면역학적 활성이 유지되는 그러한 D-아미노산 치환이 바람직한 것으로 고려된다.
설명
본원에 설명한 바와 같이, 본 발명자들은 표 1에 제시되어 있는 것과 같은 아미노산 서열 또는 본원에 기재한 상기 아미노산 서열의 유사체, 유도체, 또는 변이체를 지니고/거나 포함하는 신규한 펩티드를 동정하였다. 본 발명자들은 또한 표 1의 아미노산 서열들 중 어느 하나와 아미드화된 C-말단을 지니거나 포함하는 펩티드가 선천적 면역의 강화에 치료학적 유용성을 가짐을 입증하였다. 특히, 본 발명자들은 표 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드는 S. 아우레우스(S. aureus)에 대한 항미생물 효능을 나타내지 아니하였으나, S. 아우레우스(S. aureus)로 감염된 생쥐에서 생체내 보호를 제공하였음을 확인하였다. 펩티드는 감염에 대한 숙주 반응을 강화하였고, 그 결과 박테리아 제거(clearance) 및 숙주 생존이 개선되었다. 따라서, 개시된 신규한 펩티드는 감염성 질병의 치료를 위한 치료제로 사용될 수 있다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 펩티드들은 DPPIV 활성을 감소시키는 것으로 드러났는데, 상기 DPPIV 활성은 수많은 면역 관련 장애, 예컨대, AIDS와 HIV 질환 발달(Blazquez et al. 1992; Vanham et al. 1993; Schols et al. 1998 Oravecz et al. 1995 ), 그레이브 병(Eguchi et al. 1989; Nishikawa et al. 1995), 폐암 및 대장암과 같은 암(Stecca et al. 1997), 및 당뇨병(Hinke et al. 2000; Marguet et al. 2000)과 관련이 있는 것으로 밝혀졌다. 추가로, T-세포 활성화의 표지자(indicator)로서 DPPIV는 자가면역질환, 예컨대, 류머티즘성 관절염(Nakao et al., 1989) 및 자가면역 갑상선염(Eguchi et al., 1989)과 같이 나란히 변동(fluctuation)되는 것으로 드러났다. DPPIV는 이러한 질병의 활성 수준과 상호 잘 연결되는 마커로 설명되어 왔다. 더 나아가, DPPIV는 만성적인 진행성 다발성 경화증에서 질병 경과의 표지자로서 연구되어 왔다(Constantinescu et al., 1995). 본 발명의 펩티드들은 그러한 병태들의 치료에 사용될 수 있다.
본 발명의 펩티드
따라서, 본 발명은 표 1의 아미노산 서열 또는 이들의 면역학적으로 활성인 유사체 유도체, 또는 변이체를 지니거나 포함하는 동정된 펩티드들을 제공한다. 또한 본원에서 설명한 것과 같은, 보존적 치환, 및 N 말단과 C 말단 변형 및 골격 변형과 같은, 본원에 기재된 그러한 것들을 포함하는, 본 발명의 약제학적으로 허용되는 염, 산 부가염, 및 펩티드, 유사체, 유도체, 및 변이체의 에스테르가 제공된다. 본원에서 사용된 것과 같은, 본 발명의 "동정된" 펩티드는 천연적으로 생성되는 대응부(counterpart)를 지니지 않거나 천연적으로 펩티드를 동반하는 성분들로부터 분리되거나 정제된 펩티드이다. 본 발명의 동정된 펩티드는, 예를 들어, 펩티드를 엔코딩하는 재조합 핵산의 발현에 의해 또는 화학적 합성에 의해 획득될 수 있다. 화학적으로 합성된 펩티드는, 이의 특성상, 천연적으로 이를 동반하는 성분들로부터 분리되기 때문에, 합성된 펩티드는 "동정된다".
한 측면에서, 본 발명의 동정된 펩티드는 하기 식으로 표기되는 아미노산 서열을 포함한다: “X1X2P”(서열번호 55), 여기서 X1은 K, H, R, S, T, O, Cit, Hci, Dab, Dpr, N-말단 상에 치환된 염기성 작용기를 지니는 글리신-계열(glycine based) 화합물(예를 들어, Nlys), hSer, 및 Val(베타OH)로 구성된 군에서 선택되거나, 또 다른 구체예에서, K, R, S, O, 및 Cit로 구성된 군에서 선택되거나, 또 다른 구체예에서, K, R, 및 S로 구성된 군에서 선택되거나, R이며; X2는 V, I, K, P, 및 H로 구성된 군에서 선택된다. 한 구체예에서, 본 발명의 동정된 펩티드는 서열번호 55이다. 또 다른 측면에서, 본 발명의 동정된 펩티드는 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하면서 최대 길이가 아미노산 10개인 펩티드이다. 한 구체예에서, 서열번호 55의 동정된 펩티드는 서열번호 8, 9, 26, 39, 40, 41 및 45-53이거나 상기 서열을 포함하는 최대 길이가 아미노산 10개인 동정된 펩티드이다. 또 다른 구체예에서, 서열번호 55를 포함하는 동정된 펩티드는 서열번호 44인데, 이의 최대 길이는 아미노산 13개이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 다음 식을 포함하는 동정된 펩티드를 제공한다:“X1X2X3P"(서열번호 56), 여기서 X1은 K, H, R, S, T, O, Cit, Hci, Dab, Dpr, N-말단 상에 치환된 염기성 작용기를 지니는 글리신-계열 화합물(예를 들어, Nlys), hSer, 및 Val(베타OH)로 구성된 군에서 선택되거나, 또 다른 구체예에서, K, H, R, S, T, 및 O로 구성된 군에서 선택되거나, 또 다른 구체예에서, K, H, R, S, 및 T로 구성된 군에서 선택되거나, 또 다른 구체예에서, K, H, R, S 및 O로 구성된 군에서 선택되거나, 또 다른 구체예에서, R, H, K 및 S로 구성된 군에서 선택되며; X2는 A, I, L, V, K, P, G, H, R, S, O, Dab, Dpr, Cit, Hci, Abu, Nva, 및 Nle로 구성된 군에서 선택되고 X2는 N-메틸화될 수 있거나, 또 다른 구체예에서, A, I, L, V, K, P, G, H, 및 R로 구성된 군에서 선택되며 N-메틸화될 수 있으며; X3는 I, V, 및 P로 구성된 군에서 선택되며, 한 구체예에서, X3는 N-메틸화되지 아니한다. 한 구체예에서, 동정된 펩티드는, 서열번호 1, 3-7, 10-16, 18, 21-25, 27, 28, 31-39, 42, 43, 또는 47을 내포하는, 서열번호 56을 포함하는 최대 길이가 아미노산 10개인 펩티드이거나 상기 동정된 펩티드는 서열번호 54를 포함하는 최대 길이가 아미노산 11개인 펩티드일 수 있다. 그러나, 한 구체예에서, 서열번호 56이 헥사머(hexamer)일 때, 상기 서열은 서열번호 2가 아니거나, 한 구체예에서, 서열번호 56이 펜타머(pentamer)일 때, 상기 서열은 서열번호 17은 아니다. 한 구체예에서, 본 발명의 동정된 펩티드는 서열번호 2 또는 17을 포함하는 펩티드를 배제한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 펜타머 또는 헥사머로 서열번호 56의 식을 내포하는 펩티드를 포함하는 동정된 펩티드를 제공한다. 한 구체예에서, 상기 펩티드는 면역학적으로 활성이다.
한 구체예에서, 본 발명의 동정된 펩티드는 하기 식의 펩티드를 포함한다: “aX1X2X3P”(서열번호 57), 여기서 X1, X2 및 X3는 서열번호 56에 대하여 정의된 바와 같이 정의되며, “a”는 S, P , I, R, C, T, L, V, A, G, K, H, R, O, C, M, 및 F로 구성된 군에서 선택되거나, 또 다른 구체예에서, S, P, I, R, C, T, L, V, A, G, K, H, R, O, C, 및 M으로 구성된 군에서 선택되거나, 또 다른 구체예에서, S, P, I, R, 및 C로 구성된 군에서 선택되거나, 또 다른 구체예에서, S이다. 한 구체예에서, 동정된 펩티드는 서열번호 57을 포함하거나, 상기 서열을 포함하는 최대 길이가 아미노산 10개인 펩티드이다. 또 다른 구체예에서, 동정된 펩티드는 서열번호 4, 47, 또는, 헥사머인 경우, 서열번호 39, 또는 상기 서열들을 포함하는 최대 길이가 아미노산 10개인 동정된 펩티드이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명의 동정된 펩티드는 하기 식의 펩티드를 포함한다: “X1X2X3Pb”(서열번호 58), 여기서 X1X2X3는 서열번호 56에서 정의된 것과 동일하며,“b”는 A, A*, G, S, L, F, K, C, I, V, T, Y, R, H, O, 및 M으로 구성된 군에서 선택되거나(한 구체예에서, P는 아니다), 또 다른 구체예에서, A, A*, G, S, L, F, 및 K로 구성된 군에서 선택되거나, 또 다른 구체예에서, A, A*, G, S, L, K 및 C로 구성된 군에서 선택되거나, 한 구체예에서, A, A*, G, S, L, 및 K로 구성된 군에서 선택된다. 여기서 A*는 알라닌의 D형 아미노산을 의미한다. 한 구체예에서, 동정된 펩티드는 서열번호 58을 포함하는 최대 길이가 아미노산 10개인 아미노산이 다. 한 구체예에서, 동정된 펩티드는 서열번호 5- 8, 10, 11, 13-16, 21-25, 27, 28, 31, 33-38 및 42-43이거나 상기 서열들을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 펩티드는 서열번호 58인 펩티드인데, 여기서 “b”는 P 또는 Y 또는 RIVPP(서열번호 17)가 아니거나; X3는 G 또는 RIGPA가 아니거나, X3는 Vx 또는 RIVxPA가 아니다.
한 구체예에서, 본 발명의 동정된 펩티드는 서열번호 58과 유사한 펩티드이거나 상기 펩티드를 포함하는데, 여기서 X1은 G, GG, 및 Cit로 구성된 군에서 선택되거나, 여기서“b”는 A이며, X2는 I이고, X3는 V이며, X1은 G, GG, 또는 Cit이거나, 상기 펩티드는 서열번호 19, 20 또는 36이다. 한 구체예에서, 동정된 펩티드는 서열번호 31을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 동정된 펩티드는 서열번호 58의 역서열(reverse sequence) 또는 서열번호 30을 포함한다.
한 구체예에서, 본 발명의 동정된 펩티드는 서열번호 29의 아미노산 서열을 지니는 펩티드이거나 상기 펩티드를 포함한다.
본 발명의 펩티드는 또한 다음 식을 포함하는 동정된 펩티드를 제공한다: “a1a2X1X2X3P”(서열번호 59), 여기서 X1, X2 및 X3는 서열번호 56에서 정의된 바와 같고, a1은 K, I R, H, O, L, V, A, 및 G로 구성된 군에서 선택되거나, 한 구체예에서, K 또는 I이거나, 한 구체예에서 K이고, a2는 S, P, R T, H, K, O, L, V, A, G, S, 및 I로 구성된 군에서 선택되거나, 한 구체예에서, S, P, 및 R로 구성된 군에서 선택되거나, 또 다른 구체예에서, S 및 P로 구성된 군에서 선택되거나, 또 다른 구 체예에서, P이다. 한 구체예에서, a1은 아세틸화되지 아니하거나, a1이 K일 때, K는 아세틸화되지 아니하거나 서열번호 2가 아니다. 한 구체예에서, 동정된 펩티드는 서열번호 1 또는 47이거나 이를 포함하거나 서열번호 59를 포함하는 최대 길이가 아미노산 10개인 펩티드이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명의 동정된 펩티드는 다음 식의 펩티드이거나 상기 펩티드를 포함한다: “aX1X2X3Pb”(서열번호 60), 여기서 X1, X2 및 X3는 서열번호 56에서 정의된 바와 같고, 여기서 “a”는 S, R, K, H, O, T, I, L, V, A, 및 G로 구성된 군에서 선택되거나, 또 다른 구체예에서, S, R 및 I로 구성된 군에서 선택되거나, 또 다른 구체예에서 S 및 R로 구성된 군에서 선택되며, 여기서 "b”는 A, V, I, L, G, K, H, R, O, S, T, 및 F로 구성된 군에서 선택되거나, 또 다른 구체예에서, A이다. 또 다른 구체예에서, 서열번호 60의 펩티드는 서열번호 3, 12 및 39이거나, 서열번호 60 또는 서열번호 3, 12 또는 39를 포함하는 최대 길이가 아미노산 10개인 펩티드이다.
본원에서 사용된 것과 같은, "표 1의 서열의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드" 또는 "표 1의 서열의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드"는 펩티드 그 자체, 이에 대한 명백한 화학적 균등체(예를 들어, 이성질체, 입체이성질체, 레트로 이성질체(retro isomers), 레트로-인버소 이성질체(retro-inverso isomers), 전체가 [D]형인 이성질체, 전체가 [L]형인 이성질체, 또는 이들의 [L]형 및 [D]형이 혼합된 이성질체), 내부의 보존적 치환체, 이의 전구체 형태, 이의 단백질내 가수분해적으로 가공된 형태(endoproteolytically-processed forms), 예컨대, 본 발명의 펩티드의 N 말단 또는 C 말단으로부터의 단일 아미노산의 절단 또는 본 발명의 펩티드의 면역학적으로 활성인 대사물(metabolites), 이의 약제학적으로 허용되는 염과 에스테르, 및 번역후 변형(post-translational modification)의 결과 생성되는 기타 형태를 포함한다. 최대 길이가 아미노산 10개, 9개, 8개, 7개, 6개, 5개 및 4개인 (원형, 또는 직선형, 또는 중심 모 서열로부터의 분지형) 임의의 모 서열이 또한 제공되는데, 명시된 서열이 상기 모 서열을 위한 서열이다. 당업계의 통상의 기술자는 표에 제시된 펩티드가 트리머(trimer)인 경우, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 및 4머(mer)의 서열이 될 수 있으며, 한편 표 1에 나열된 펩티드가 헥사머인 경우, 10, 9, 8, 및 7머의 서열이 될 수 있으나, 5 또는 4머는 될 수 없음을 이해할 것이다. 또한, 본 발명은 10머를 초과하는 서열(서열번호 44와 54)을 포함한다. 본 발명에 따른 펩티드의 면역학적 활성을 보유하는 그러한 변형된 펩티드가 본 발명의 영역 내에 포함된다.
추가로 본원에서 사용된 것과 같은, 본 발명의 펩티드의 "명백한 화학적 균등체"는, 본원에서 소개된 펩티드와 같이, 요망되는 동일한 활성(예를 들어, 면역학적 활성)을 보유하며, 미미한 화학적 차이를 나타내는 분자이거나, 유순한 조건하에서 본 발명의 펩티드로 전환되는 분자(예를 들어, 본 발명에 따른 펩티드의 에스테르, 에테르, 환원 생성물, 및 이의 복합체)이다.
추가적으로, 본원에서 사용된 것과 같은, "보존적 치환"은 치환된 아미노산 잔기와 기능적으로 동등한 그러한 아미노산 치환인데, 이는 상기 잔기들이 극성 또 는 입체 배열이 유사하거나 치환된 잔기와 동일한 부류(예를 들어, 소수성, 산성, 또는 염기성)에 속하기 때문이다. 본원에 정의된 것과 같은, 용어 "보존적 치환"은 선천적 면역을 강화시킬 수 있는 본 발명의 펩티드의 활성에 별로 중요치 않은 영향을 미치는 치환을 포함한다. 보존적 치환의 일예는 극성(친수성) 잔기의 다른 잔기로의 치환(예를 들어, 아르기닌/리신, 글루타민/아스파라진, 또는 트레오닌/세린); 무극성(소수성) 잔기(예를 들어, 이소류신, 류신, 메티오닌, 페닐알라닌, 티로신, 또는 발린)의 다른 잔기로의 치환; 산성 잔기(예를 들어, 아스파르트산 또는 글루탐산)의 다른 잔기로의 치환; 또는 염기성 잔기(예를 들어, 아르기닌, 히스티딘, 리신 또는 오르니틴)의 다른 잔기의 치환을 포함한다.
본원에서 사용된 것과 같은, 용어 "유사체"는 본원에 소개된 서열과 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 지니는 임의의 펩티드를 포함하는데, 상기 펩티드 내의 하나 이상의 잔기가 기능적으로 유사한 잔기로 보존적으로 치환되어 있다. "유사체"는 표 1의 아미노산 서열과 60% 또는 그 이상(바람직하게는, 70% 또는 그 이상, 80% 또는 그 이상, 85% 또는 그 이상, 90% 또는 그 이상, 95% 또는 그 이상, 또는 99%) 아미노산 서열 상동성을 지니며, 상기 표 1의 아미노산 서열의 기능적 변이체이다. 본원에서 추가로 사용된 것과 같은, 용어 "기능적 변이체"는, 본원에서 설명한 것과 같이, 선천적 면역을 강화시키거나 DPPIV 활성을 감소시킬 수 있는 활성을 나타내는 펩티드의 활성을 의미한다. "유사체"는 상동성있는 3차원 구조(conformation)을 갖는 표 1의 아미노산의 변이체를 포함한다. "유사체"는 추가로 본원에 기재된 것과 같은 유사체의 임의의 약제학적으로 허용되는 염을 포함한 다. "변이체"는 추가로 본원에 기재된 것과 같은 변이체의 임의의 약제학적으로 허용되는 염을 포함한다.
본원에서 사용된 것과 같은, "유도체"는 측쇄 작용기(functional side group)의 반응에 의해 화학적으로 유도체화되는 하나 이상의 아미노산을 지니는 본 발명의 펩티드를 의미한다. 유도체화된 대표적인 분자는 아세틸기, 아민 히드로클로라이드, 카르보벤족시기, 클로로아세틸기, 포밀기, p-톨루엔 설포닐기, 또는 t-부틸옥시카르보닐기를 부가함으로써, 펩티드 분자 내의 유리 아미노기가 염 또는 아미드를 형성하도록 유도체화된 펩티드 분자를 포함하나, 이에만 국한되는 것은 아니다. 유리 히드록실기는 O-아실 또는 O-알킬 유도체를 형성하도록 유도체화될 수 있다. 더욱이, 유리 카르복실기는 염, 에스테르(예를 들어, 메틸 및 에틸 에스테르), 또는 히드라지드를 형성하도록 유도체화될 수 있다. 따라서, "유도체"는 추가로 본원에서 설명한 것과 같이 유도체의 임의의 약제학적으로 허용되는 염을 포함한다.
본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 동정된 펩티드는 변형된 C-말단 및/또는 변형된 N-말단을 지닌다. 예를 들어, 동정된 펩티드는 아미드화된 C-말단을 지닐 수 있다. 예를 들어, 아미노 말단은 아세틸화(Ac)되거나 카르복시 말단은 아미드화(NH2)될 수 있다. 그러나, 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 펩티드는 그러한 변형이 결과적으로 요망되는 면역학적 활성의 손실을 초래하게 되는 경우에는 아세틸화되지 아니하는 것이 바람직하다. 아미노 말단 변형은 메틸화(즉, --NHCH3 또는 --NH(CH3)2), 아세틸화, 카르보벤조일기의 부가, 또는 RCOO--(여기서 R은 나프틸, 아크리디닐, 스테로이딜(steroidyl), 및 유사한 기로 구성된 군에서 선택됨)로 정의된 카르복실레이트 기능성(functionality)을 포함하는 블록킹기를 이용한 아미노 말단 블록킹을 포함한다. 카르복시 말단 변형은 유리 산을 카르복스아미드기로 대체하거나 카르복시 말단에서 락탐 고리(cyclic lactam)를 형성시켜 구조적 속박(constraints)을 도입하는 것을 포함한다.
한 구체예에서, NH의 NCH3로의 치환과 같은, 골격 치환이 이루어질 수 있다. 동정된 펩티드는 표 1의 아미노산 서열의 변형체(예를 들어, 삽입 또는 결실과 같은, 점 돌연변이, 또는 절단(truncation)) 또는 표 1의 아미노산 서열을 포함하는 변형체일 수 있다. 일예로, 펩티드는 요망되는 면역학적 활성을 보유하는 한, 하나 이상의 지점에 D형 아미노산의 삽입으로 변형된 표 1의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 특히, 프롤린 잔기의 고리 크기가 5원(members)에서 4, 6, 또는 7원으로 변화된 프롤린 유사체가 채택될 수 있다. 고리의 기들(cyclic groups)은 포화 또는 불포화될 수 있으며, 불포화된 경우, 방향족성 또는 비방향족성일 수 있다.
통상의 기술자는 20개의 유전자적으로 엔코딩된 아미노산(또는 D형 아미노산)의 천연적으로 생성되는 측쇄를 유사한 특성을 지닌 다른 측쇄, 예를 들어, 아킬, 저급 알킬, 고리 4-, 5-, 6-, 내지 7-원 알킬, 아미드, 아미드 저급, 아미드 디(저급 알킬), 저급 알콕시, 히드록시, 카르복시 및 이들의 저급 에스테르 유도체로 치환할 수 있으며, 4-, 5-, 6-, 내지 7-원 헤테로고리(heterocyclic)로 치환할 수 있다.
그러한 치환은 다음을 포함하나 반드시 이에만 한정될 필요는 없다: (1) 오르니틴, Dab[1개의 메틸렌기가 없는 오르니틴(또는 2개의 메틸렌기가 없는 리신)과 유사한, 2,4-디아미노부티르산], Dpr 또는 Dapa[2개의 메틸렌기이 없는 오르니틴(또는 3개의 메틸렌기가 없는 리신, 또는 히드록실 대신에 아미노기를 지닌 세린)과 유사한, 2,3-디아미노프로피온산], Nlys["N-말단"에 부착된 리신 측쇄를 지니는 N-(4-아미노부틸)-글리신 및 글리신의 아미노기에 부착된 아미노프로필 또는 아미노에틸기를 지니는 화합물]과 같이, 양으로 하전된 비표준(non-standard) 아미노산; (2) 천연적으로 생성되지 않는 아르가닌(arganine)과 유사한, 전하를 띠지 않는, 아미노산, 예컨대, Cit[시트룰린, 시트룰린] 및 Hci[메틸렌기를 1개 이상 지니는 시트룰린]; (3) (예를 들어, 세린과 같이) OH기를 지니는 천연적으로 생성되지 않는 비표준 아미노산, 예컨대, hSer[호모세린(메틸렌기가 1개 이상)], Hyp[히드록시프롤린], Val(베타OH)[히드록시발린], Pen[페니실라민], Val(베타SH); (4) D-Pro와 같은, 프롤린 유도체, 예컨대, 3,4-디히드로프롤린(dehydroproline), Pyr[피로글루타민(고리 내에 C=O를 지니는 프롤린)], 고리 상에 플루오르 치환기를 지니는 프롤린, 1,3-티아졸리딘-4-카르복시산(고리 내에 S를 지니는 프롤린); (5) 히스티딘 유도체, 예컨대, Thi[베타-(2-티에닐)-알라닌]; 또는 (6) 알킬 유도체, 예컨대, Abu[2-아미노부티르산(C알파 위치에 에틸기를 지님), Nva[노르발린(C알파 위치에 프로필기를 지님)], Nle[노르류신(C알파 위치에 부틸기를 지님)], Hol[호모류신(C알파 위치에 프로필기를 지님)], Aib[알파-아미노이소부티르산(메틸렌기가 없는 발린)]. 당업계의 통상의 기술자는 모 펩티드/서열의 면역학적 활성을 보유하는 그러한 치환들을 생각해낼 수 있을 것이다.
또 다른 대안적인 구체예에서, C-말단 카르복실기 또는 C-말단 에스테르는 내부 대체(internal displacement)로 카르복실기 또는 에스테르의 --OH 또는 에스테르(--OR)를 각각 N-말단 아미노기로 대체함으로써 고리화되도록 유도하여 고리 펩티드가 형성되도록 할 수 있다. 예를 들어, 펩티드 산을 만들기 위한 합성 및 절단 후, 유리 산은 용액, 예를 들어, 메틸렌 클로라이드(CH2Cl2), 디메틸 포름아미드(DMF) 혼합물 중에서, 디시클로헥실카르보디이미드(DCC)와 같은 적절한 카르복실기 활성제(activator)에 의해 활성화된 에스테르로 전환된다. 고리 펩티드는 이후 내부 대체로 N-말단 아민을 지닌 활성화된 에스테르가 된다. 중합화와 반대되는 내부 고리화(internal cyclization)가 매우 묽은 용액을 사용함으로써 증대될 수 있다. 그러한 방법들은 당업계에 잘 알려져 있다.
통상의 기술자는 프로테아제에 대한 민감성을 감소시키거나 펩티드의 구조를 제한시킬 수 있는 말단 아미노 또는 카르복실기가 존재하지 않도록 하기 위해서, 본 발명의 펩티드를 고리화시키거나 펩티드의 말단에 데스카르복시(descarboxy) 잔기를 도입할 수 있다. 본 발명의 화합물의 C-말단 작용기는 아미드, 아미드 저급 알킬, 아미드 디(저급 알킬), 저급 알콕시, 히드록시, 카르복시, 이들의 저급 에스테르 유도체, 및 이들의 약제학적으로 허용되는 염을 포함한다.
통상의 기술자는 또한 N 및/또는 C 말단 시스테인을 부가시키고 이황화 결합 또는 다른 측쇄 상호작용을 통하여 펩티드를 고리화시킴으로써 펩티드를 고리화시킬 수 있다.
통상의 기술자는 프로테아제에 대한 민감성을 감소시키거나 펩티드의 구조를 제한시킬 수 있는 말단 아미노 또는 카르복실기가 존재하지 않게 하기 위해, 본 발명의 펩티드를 고리화시키거나 펩티드의 말단에 데스아미노(desamino) 또는 데스카르복시 잔기를 도입할 수 있다.
펩티드를 제조하는 방법
본 발명은 합성적으로 생산되거나, 재조합적으로 생성되거나, 천연 세포로부터 동정된 펩티드 유사체, 유도체, 및 변이체를 포함하는 펩티드를 고려하고 있다. 본 발명의 펩티드는 당업계의 통상의 기술자에게 일반적으로 알려진 방법들(예를 들어, Modern Techniques of Peptide and Amino Acid Analysis(New York: John Wiley & Sons, 1981); 및 Bodansky, M., Principles of Peptide Synthesis (New York: Springer-Verlag N.Y., Inc., 1984)에 소개된 것과 같은 방법)에 의해 합성될 수 있다. 본 발명의 펩티드의 합성에 채용될 수 있는 방법들의 일예에는, 이에만 국한되는 것은 아니지만, 고체상 펩티드 합성, 용액 또는 액체 펩티드 합성 방법, 및 시중에 판매되고 잇는 펩티드 합성기(synthesizers) 중 임의의 것을 사용한 합성을 포함한다. 한 구체예에서, 본 발명의 펩티드는 시험관내에서, 예를 들어, 화학적 수단 또는 mRNA의 시험관내 번역에 의해 합성된다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 펩티드는 통상적인 기술 및 펩티드를 엔코딩하는 cDNA를 사용하여 재조합적으로 생산된다. 본 발명의 아미노산 서열은 추가로 커플링제 및 보호기를 포함할 수 있는데, 이들은 펩티드 서열의 합성에 사용되며, 당업계의 통상의 기술자에게 잘 알려져 있다.
본 발명의 펩티드 유사체, 유도체, 및 변이체는 당업계의 통상의 기술자에게 잘 알려져 있는 매우 광범위한 서로 다른 돌연변이유발 기술로 제조될 수 있다. 이러한 기술들은 임의의 분자 생물학 실험 매뉴얼에서 찾아 볼 수 있는데, 예를 들어, 다음의 문헌에 개시된 기술들을 포함한다: Sambrook et al., Molecular Cloning - A Laboratory Manual, 2nd ed. (Plainview, NY: Cold Spring Harbor Press, 1989); 또는 Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology (John Wiley & Sons). 또한 다수의 상업적 분자 생물 공급업자로부터 돌연변이유발 키트들을 구매할 수 있다. 방법들은 최초 아미노산 서열에서 위치 지정(site-directed), 영역 특이적(regio-specific), 또는 무작위적 돌연변이를 생성시킬 수 있다. 유사체, 유도체, 및 변이체가 생성된 후, 본원에 기재된 것과 같은, 선천적 면역을 강화시킬 수 있는 요망되는 활성과 관련하여 이들에 대해 스크리닝을 실시할 수 있다.
펩티드와 반응하는 물질
본 발명은 추가로 표 1의 아미노산 서열 또는 이의 유사체, 유도체, 또는 변이체를 포함하는 펩티드와 반응하는 물질을 제공한다. 본원에서 사용된 것과 같은, "반응하는"은 물질이 본 발명의 펩티드에 대한 친화력을 가지거나, 본 발명의 펩티드에 결합하거나, 본 발명의 펩티드에 대하여 유인(induction)된다는 것을 의미한다. 더 나아가 본원에서 사용된 것과 같은, "물질"은 단백질, 폴리펩티드, 펩티드, 핵산(DNA 또는 RNA를 포함함), 천연적으로 생성되지 않는 항체, Fab 단편, F(ab')2 단편, 분자, 화합물, 항생제, 약물, 및 이의 임의의 조합(들)을 포함한다. Fab 단편은 항체의 1가(univalent) 항원 결합 단편인데, 파파인(papain) 분해로 생성된다. F(ab')2 단편은 항체의 2가 항원 결합 단편인데, 펩신 분해로 생성된다. 바람직하게는, 본 발명의 물질은 검출 마커 또는 표지로 표지된다. 천연적으로 생성되지 않는 항체는 2개의 C-말단 글리신 잔기와 맵스(MAPS)와 같은, 또 다른 화합물과 연결된 펩티드로 생성되는 항체를 의미한다. 맵스 안티젠(MAPS Antigen)은 펩티드의 C-말단에 삽입된 2개의 글리신 잔기를 통해 본 발명의 펩티드에 부착된다. 그 후에 컨스트럭트는 동물, 예컨대, 래빗에 투여될 수 있으며, 항체는 당업계에 잘 알려진 절차를 이용하여 회수될 수 있다.
본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 펩티드와 반응하는 물질은 항체이다. 본원에서 사용된 것과 같은, 본 발명의 항체는 다클론 또는 단일클론 항체일 수 있다. 또한, 본 발명의 항체는 당업계의 통상의 기술자에게 잘 알려진 기술로 생산될 수 있다. 예를 들어, 다클론 항체는 정제된 본 발명의 펩티드로 생쥐, 래빗, 또는 래트를 면역화시킴으로써 생산될 수 있다. 그 후에 단일클론 항체는 면역화된 동물로부터 지라를 적출하고 지라 세포를 골수종(myeloma) 세포와 융합시켜 하이브리도마가 형성되게 함으로써 생산될 수 있는데, 상기 하이브리도마가, 배양물에서 자랄 때, 단일클론 항체를 생산할 것이다. 예를 들어, 다음 문헌을 참조하라: J.G.R. Hurrel, Monoclonal Hybridoma Antibodies: Techniques and Applications (Boco Raton, FL: CRC Press Inc., 1982).
본 발명의 항체는 검출 마커 또는 표지로 표지될 수 있다. 항체의 표지화는 다양한 표지화 기술 중 어느 하나를 사용하여 수행될 수 있는데, 상기 기술은 퍼옥시다제, 당업계에 공지된 화학발광 표지, 및 당업계에 공지된 방사능 표지를 포함한다. 본 발명의 검출 마커 또는 표지는, 예를 들어, 무방사능 또는 형광 마커, 예컨대, 비오틴, 플루오레세인(FITC), 아크리딘, 콜레스테롤, 또는 카르복시-X-로다민일 수 있는데, 이들은 당업계에 알려진 간편한 형광 및 다른 이미지화 기술을 사용하여 검출될 수 있다. 대안적으로, 검출 마커 또는 표지는 예를 들어, 방사능동위원소를 포함하는, 방사능 마커일 수 있다. 방사능동위원소는 검출가능한 방사선을 방출하는 임의의 동위원소, 예컨대, 35S, 32P, 125I, 3H, 또는 14C일 수 있다. 방사능동위원소에 의해 방출된 방사능은 당업계에 잘 알려진 기술들로 검출될 수 있다. 예를 들어, 방사능 동위원소로부터의 감마선 방출은 감마선 이미지화 기술, 특히 신티그래픽 이미지화(scintigraphic imaging)를 사용하여 검출될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 물질은 검출 마커 또는 표지로 표지된 고-친화성 항체이다.
동정된 핵산 분자
또한, 본 발명은, 컨주게이트된 펩티드(예를 들어, 담체-펩티드 컨스트럭트) 또는 그 외의 다른 펩티드, 또는 면역학적으로 활성있는 표 1의 펩티드를 위하여 대사되거나 절단되는 프로-펩티드를 포함하는, 표 1의 아미노산 서열 또는 이의 유 사체, 유도체, 또는 변이체를 포함하는 펩티드를 엔코딩하는 동정된 핵산 분자를 제공한다. 유전자 코드의 축퇴성으로 인하여, 본 발명의 핵산 분자는 다수의 핵산 치환을 포함하는데, 그러한 분자도 또한 본 발명의 펩티드를 엔코딩할 것이다. 본 발명은 추가로 표 1의 아미노산 서열 또는 이의 유사체, 유도체, 또는 변이체를 엔코딩하는 동정된 핵산 분자에 혼성화하는 핵산을 제공한다.
본 발명의 핵산 분자는 DNA 또는 RNA일 수 있다. 이들은 당업계의 통상의 기술자에게 알려진 다양한 기술로 제조될 수 있는데, 상기 기술은 시중에서 시판되는 합성기, 예컨대, 어플라이드 바이오시스템즈 모델 392 DNA/RNA 합성기(Applied Biosystems Model 392 DNA/RNA synthesizer)를 사용한 올리고뉴클레오티드의 자동화된 합성을 포함하나, 이에만 국한되는 것은 아니다. 또한, 본 발명의 핵산 분자는 하나 이상의 검출 마커 또는 표지로 표지될 수 있다. 핵산 분자의 표지화는 다양한 표지들 중 어느 하나에 따라(예를 들어, 방사능이 있는 표지, 예컨대, 35S, 32P, 또는 3H, 또는 방사능이 없는 표지, 예컨대, 비오틴, 플루오레세인(FITC), 아크리딘, 콜레스테롤, 또는 카르복시-X-로다민(ROX)) 당업계에 공지된 수많은 방법 중 하나(예를 들어, 닉 번역(nick translation), 말단 표지화(end labeling), 필-인 말단 표지화(fill-in end labeling), 폴리뉴클레오티드 키나아제 교환 반응(polynucleotide kinase exchange reaction), 무작위 프라이밍(random priming), 또는 SP6 폴리머라제(리보프로브 제조를 위한 폴리머라제))를 사용하여 수행될 수 있다.
본 발명은 또한 발현 벡터에 작동가능하게 연결된 본 발명의 핵산 분자를 포함하는 재조합 핵산 컨스트럭트를 제공한다. 본원에서 사용된 것과 같은, "발현 벡터"는 적당한 숙주 내에서 DNA의 발현을 유효하게 할 수 있는 적당한 조절 서열에 작동가능하게 연결된 DNA 서열을 함유하는 DNA 컨스트럭트이다. 벡터는, 예를 들어, 플라스미드, 파지 입자, 또는 잠재력있는 게놈 삽입물일 수 있다. 추가로 본원에 사용된 것과 같은, 용어 "작동가능하게 연결된"은 DNA 두 영역(regions) 사이의 기능적 관계를 설명한다. 본 발명에 사용되기에 적당한 발현 벡터는 본 발명의 펩티드를 엔코딩하는 핵산 분자에 작동가능하게 연결된 하나 이상의 발현 조절 엘리먼트(예를 들어, 오퍼레이터, 프로모터, lac 시스템, 선도 서열, 종결 코톤, 및/또는 폴리아데닐화 시그널)을 포함한다. 한 구체예에서, 발현 벡터는 진핵생물 세포에서 작동하는 진핵생물 발현 벡터(예를 들어, 레트로바이러스 벡터, 백시니아 바이러스 벡터, 아데노바이러스 벡터, 헤르페스 바이러스 벡터, 또는 계두 바이러스 벡터)이다.
일단 본 발명의 핵산 분자에 작동적으로 연결되면, 발현 벡터는, 이로만 국한되는 것은 아니지만, 전기천공(electroporation), DEAE 덱스트란(Dextran) 트랜스펙션, 인산칼슘 트랜스펙션, 리포펙션(lipofection), 1가 양이온성 리포좀 융합, 다가 양이온성 리포좀 융합, 원형질체(protoplast) 융합, 생체내 전기장의 생성, DNA-코팅된 미세분사물 폭격(microprojectile bombardment), 재조합 복제-결함 바이러스를 이용한 감염, 상동성 재조합, 바이러스 벡터, 네이키드(naked) DNA 전달, 또는 이의 임의의 조합을 포함한, 핵산 전달에 적당한 임의의 생체내 또는 생체외(ex vivo) 수단에 의해 수령체 세포로 도입될 수 있다. 핵산 전달에 적당한 재 조합 바이러스 벡터는, 이로만 국한되는 것은 아니지만, 레트로바이러스, HSV, 아데노바이러스, 아데노부속바이러스, 셈리키 삼림바이러스(Semiliki Forest 바이러스), 사이토메갈로바이러스, 및 백시니아 바이러스와 같은, 바이러스의 게놈으로부터 유래된 벡터를 포함한다.
추가로 본 발명은 본 발명의 재조합 핵산 컨스트럭트를 포함하는 하나 이상의 숙주 세포를 제공한다. 본 발명의 숙주 세포는 본원에 기재된 핵산 컨스트럭트로 형질전환된다. 숙주 세포는 진핵생물(예를 들어, 동물, 식물, 곤충, 또는 효모 세포) 또는 원핵생물(예를 들어, 대장균)일 수 있다.
또한, 본 발명은 표 1의 아미노산 서열 또는 이의 유사체, 유도체, 또는 변이체을 포함하는 펩티드를 생산하기 위한 방법을 제공한다. 상기 생산방법은 다음 단계들을 포함한다: (a) 펩티드의 발현이 허용되는 조건하에서, 본원에 기재된 것과 같은, 재조합 핵산 컨스트럭트를 포함하는 하나 이상의 숙주 세포를 배양하는 단계; 및 (b) 상기 하나 이상의 숙주 세포 또는 이의 배양 배지로부터 펩티드를 회수하는 단계. 재조합 펩티드는 조 용해체(crude lysate)로 회수될 수 있다; 재조합 펩티드는 친화력 및 면역친화력 크로마토그래피, 분별침전(differential precipitation), 겔 전기영동, 이온-교환 크로마토그래피, 등전초점(isoelectric focusing), 크기-배재 크로마토그래피, 및 유사방법을 포함하나, 이에만 국한되는 것은 아닌, 당업계에 공지된 표준 단백질 정제 절차에 의해 정제될 수 있다.
약제학적 조성물
본 발명은 추가로 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체, 희석제, 또는 부형제와 조합하여, 표 1의 아미노산 서열 또는 서열번호 1, 3-16, 또는 18-60을 포함하는 펩티드, 또는 이의 유사체, 유도체, 또는 변이체(앞서 기재한 것들 중 임의의 것의 약제학적으로 허용되는 염, 산부가 염 또는 에스테르를 포함함)를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 약제학적으로 허용되는 담체, 희석제, 또는 부형제는 조성물의 다른 성분들과 호환될 수 있으며, 이의 수령체에 해롭지 아니하다는 점에서 "허용가능"하여야 한다. 약제학적으로 허용되는 담체, 희석제, 및 부형제의 일예는, 카르복시메틸 셀룰로오스, 결정성 셀룰로오스, 글리세린, 아라비아고무, 락토오스, 스테아린산마그네슘, 메틸 셀룰로오스, 분말, 염수, 알긴산나트륨, 수크로오스, 전분, 활석, 및 그 중에서도 물을 포함하나, 이에만 국한되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물의 제형은, 본원에서 설명한 바와 같이, 단위 용량(unit dosage)으로 간편하게 제공될 수 있다.
용도
본 발명의 펩티드 선천적 면역을 강화시키는데 치료적 유용성을 지니는 것으로 밝혀졌다. 선천적 면역의 강화은 항미생물 활성(실시예 2)의 결여와 생체내 모델에서의 감염에 대한 보호(실시예 3 및 4) 및 또한 실시예 5의 DPPIV 검정에 의해 입증된다. 따라서, 본 발명은 또한 피검체에서 감염을 치료하고/하거나 예방하기 위한 방법을 제공한다. 본원에서 사용된 것과 같은, "피검체"는 새(예를 들어, 닭, 칠면조 등) 또는 포유동물(예를 들어, 소, 개, 인간, 원숭이, 생쥐, 돼지, 래트 등)이다. 한 구체예에서, 피검체는 인간이다. 피검체는 감염에 걸려 있거나 감염에 걸릴 위험을 지닐 수 있다. 일예로, 감염은 박테리아 감염일 수 있다. 본 발명의 방법으로 치료될 수 있는 미생물 감염은 박테리아에 의한 감염, 진균에 의한 감염, 기생충에 의한 감염, 및 바이러스에 의한 감염을 포함하나, 이에만 국한되는 것은 아니다.
대부분의 박테리아 병원체는 일반적인 환경, 또는 숙주의 정상적인 세균총(bacterial flora)에 존재한다. 박테리아는 (병원성 인자라고 불리우는) 상이한 메카니즘을 획득함으로써 심각한 질병을 유발시킬 수 있는 능력을 진보시켜 왔는데, 상기 메카니즘은 박테리아들이 콜로니를 형성할 수 있게 하며, 숙주 조직 내에서 유포(dissemination)될 수 있게 하고, 숙주 조직에 침투할 수 있게 한다. 이러한 병원성 인자들이 억제될 때, 박테리아는 숙주 조직 내에서 더 이상 유지될 수 없게 되고, 이에 따라, 질병을 유발할 수 없게 된다. 본 발명의 방법에 의해 치료될 수 있는 대표적인 박테리아는 대장균, 클렙시엘라 뉴모니애(Klebsiella pneumoniae), 슈도모나스 애루지노사(Pseudomonas aeruginosa), 살모넬라 종(Salmonella spp.)(예를 들어, 살모넬라 타이피무리움(Salmonella typhimurium)), 스태필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 스트렙토코쿠스 종(Streptococcus spp.) 및 반코마이신-내성 엔테로코쿠스(Enterococcus)를 포함하나, 이에만 국한되는 것은 아니다.
슈도모나스 애루지노사(Pseudomonas aeruginosa)는 이의 환경적 융통성(versatility), 민감한 개체들에서 질병을 유발하는 이의 능력, 및 항생제에 대한 이의 내성때문에 특별히 주목되는 어디에나 존재하는 그램 음성 세균이다. 상기 세균은 토양, 늪, 및 연안 해양 서식지 내에서 그리고 식물과 동물 조직 상에서 성장하는 다재다능한 개체이다. 낭포성 섬유증의 가장 심각한 합병증은 P. 애루지노자(P. aeruginosa)에 의한 호흡기 감염이다. 암 및 화상 환자는, 면역 시스템 결함을 지닌 다른 특별한 개체들이 고통을 받는 것과 마찬가지로, 공통적으로 이러한 개체에 의한 심각한 감염으로 고통받는다. 주위에 널려 있는 많은 박테리아와 달리, P. 애루지노자는 민감한 숙주에서 질병을 유발시킬 수 있는 현저한 능력을 지니고 있다.
스태필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus)는 극히 작은 클러스터로 번성하는, 직경이 약 1마이크로미터인, 구형 그램-양성 세균이다. 상기 세균은 가장 중요한 인간 병원체들 중 하나인데, 심내막염(endocarditis)으로부터 폐렴에 이르는 지역사회-획득성(community-acquired) 감염 및 원내획득성(nosocomial) 감염 둘 모두를 유발한다. 비록 S. 아우레우스(S. aureus)가 일반적으로 세포외성(extracellular) 병원체로 분류되기는 하지만, 최근의 데이터는 상기 세균이 상피 세포, 섬유아세포, 및 그 외 세포를 포함하는, 다양한 유형의 숙주 세포, 예를 들어, 전문적인 대식세포 및 비대식세포에 감염할 수 있는 능력을 지님을 밝혀내었다. 이러한 침투는 세포 표면에서의 S. 아우레우스의 부착에 의해 개시되며, 이 과정에서 스태필로코쿠스 피브로넥틴-결합 단백질이 두드러진 역할을 담당한다. 대식된(Phagocytosed) S. 아우레우스는 숙주 세포의 아폽토시스를 유발하거나 세포질내에서 수일간 생존(이는 항-스태필로코쿠스 작동자 메커니즘이 결여되어 있는 것으로 생각됨)할 수 있다.
S. 아우레우스(S. aureus)는 비관(nasal passages), 피부 표면, 및 입, 생 식기와 직장 주위의 지역에서 서식한다. S. 아우레우스는 부스럼(boils), 다래끼, 및 등창(furuncles)과 같은 피부 표면 병소를 유발할 수 있다. 더 심각한 감염증은 폐렴, 유선염, 정맥염, 수막염, 및 요로감염증; 골수염(osteomyelitis)과 심내막염을 포함하는 고질적(deep-seated) 감염증을 포함한다.
본 발명의 방법으로 치료될 수 있는 대표적인 진균은 사상균(mould), 효모, 고등 진균을 포함하나, 이에만 국한되는 것은 아니다. 모든 진균은 진핵생물이며, 이들의 세포 막 내에 스테롤(sterols)을 포함하나, 펩티도글리칸은 포함하지 아니한다. 진균 감염증, 또는 사상균병은 조직 연루의 정도 및 숙주 내로 진입하는 양상에 따라 분류된다. 면역저하된 숙주에서, 정상적으로 유순한 다양한 비병원성 진균, 또는 진균이 잠재적으로 치명적인 감염증을 유발할 수 있다.
기생충은 살아있는 다른 개체들(숙주로 알려져 있음)로부터 영양분 및 보호를 얻는 개체들이다. 이들은 동물로부터 인간으로, 인간으로부터 인간으로, 또는 인간으로부터 동물로 옮겨질 수 있다. 몇몇 기생충들은 식품매개성(food-borne) 및 수인성(water-borne) 질병의 심각한 유발원으로 대두되었다. 이들은 오염된 식품과 물의 소비를 통해, 또는 감염된 인간 또는 동물의 배설물(똥)과 접촉된 적이 있는 물질의 섭취를 통해 숙주에서 숙주로 옮겨질 수 있다. 기생충들은 감염된 인간 및 동물 숙주의 조직 및 기관 내에서 생존하고 생식하며, 종종 배설물로 배출된다. 왜소한, 단세포성, 현미경적 개체(프로토조아)로부터 좀 더 크고, 다세포성 벌레(기생충, helminths)에 이르기까지 다양한 유형의 기생충들이 존재하는데, 이들은 현미경 없이는 관찰이 불가능할 수 있다. 본 발명의 방법에 의해 치료될 수 있는 일반적인 기생충의 대표적인 예는 지아르디아 듀오데나리스(Giardia duodenalis), 크립토스포리디움 파븀(Cryptosporidium parvum), 시클로스포라 카예타넨시스(Cyclospoora cayetanensis), 및 톡소플라스마 곤디(Toxoplasma gondii)를 포함하나, 이에만 국한되는 것은 아니다.
바이러스는, 자유롭게 생존하는 세포의 많은 속성들이 결여되어 있기 때문에, 진균 및 박테리아와는 다르다. 단일한 바이러스 입자는 변화가 없는 구조이고, 상당히 안정하며 이의 일부분을 변화시키거나 대체할 수 없다. 세포와 연관될 경우에만, 바이러스는 실제로 복제할 수 있게 되며, 살아있는 시스템의 속성들 중 일부를 획득할 수 있게 된다. 바이러스는 수많은 질병을 유발할 수 있는데, 보통의 감기와 인두염(인후염, sore throat)과 같은 상부기도감염증(URTIs)을 포함한다. 본 발명의 방법에 의해 치료될 수 있는 바이러스의 다른 예에는 AIDS, 조류 독감, 수두, 단순성 포진, 보통의 감기, 위장염(특히 어린이에서의 위장염), 선열(glandular fever), 인플루엔자, 홍역, 유행성 이하선염, 인두염, 폐렴, 풍진, 사스(SARS), 및 하부 기도 감염(예를 들어, 호흡기세포융합바이러스, 또는 RSV))과 관련된 바이러스를 포함하나, 이에만 국한되는 것은 아니다.
본 발명자들은 본원에서 표 1의 아미노산 서열 또는 서열번호 1, 3-16, 18-60을 포함하는 펩티드, 또는 이의 유사체, 유도체, 또는 변이체 또는 이의 명백한 화학적 균등체가 감염의 예방 및/또는 치료에 효능을 지님을 입증하였다. 따라서, 피검체에서 감염을 치료 및/또는 예방하는 본 발명의 방법은 피검체에 표 1의 아미노산 서열 또는 서열번호 1, 3-16, 18-60을 포함하는 펩티드 또는 이의 유사체, 유도체, 또는 변이체 또는 이의 명백한 화학적 균등체를 투여하는 단계를 포함한다. 본 발명의 펩티드가 감염에 대한 치료 및/또는 예방의 유효성을 증가시키고/키거나 표적에 대한 효능을 증가시키기 위하여, 또 다른 물질과 연결되거나 항생제(예를 들어, 페니실린, 메티실린, 또는 반코마이신)과 같은, 또 다른 물질과 조합되어 투여될 수 있다는 것은 본 발명의 범위(confines) 내에 포함된다.
본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 펩티드는 표 1의 아미노산 서열 또는 서열번호 1, 3-16, 18-60, 또는 이의 유사체, 유도체, 또는 변이체 또는 이의 명백한 화학적 균등체를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 펩티드는 피검체 내의 선천적 면역을 조절하며, 그 때문에 피검체에서 감염을 치료 및/또는 예방한다. 선천적 면역반응은 병원체 조우에 대한 최전방(front line) 반응이다. 상기 면역반응은 감염성 질병의 발달을 막기 위한 복수의 메카니즘을 포함한다. 그러한 한 메카니즘은 면역 작동자 세포의 프라이밍과 모집에 관여한다.
한 구체예에서, 본 발명의 펩티드는, 염증을 억제하는 한편, 선천적 면역 또는 선천적 면역반응을 강화시킨다.
또 다른 구체예에서, 본 발명의 펩티드는 DPPIV 활성의 조절자(modulators)인 것으로 드러났다. 이들은 DPPIV 활성을 감소시키는 것으로 드러났다. 이와 동일한 맥락에서, 이들은 특별한 면역학적 병태를 치료하기 위하여 펩티드를 투여함으로써 혜택(benefits)을 얻을 수 있는 피검체를 스크리닝하는데 유용할 수 있는데, 상기 스크리닝은 DPPIV와 관련된 병태를 지니는 것으로 의심되거나 이를 지니는 피검체로부터의 샘플을 채취하는 단계, 상기 샘플을 본 발명의 펩티드 및 DDPIV 기질과 함께 인큐베이션하는 단계 및 그 후에 대조군과 비교하여 DDPIV 활성에 관한 펩티드의 효과를 모니터하는 단계를 포함하며, 여기서 활성 감소는 DPPIV와 관련된 병태를 치료하기 위하여 피검체에게 투여한 펩티드로 인한 잠재적 혜택에 관한 지표가 될 것이다. 또 다른 구체예에서, 대조군과 비교하여 펩티드 존재시의 DPPIV 활성 조절은 DPPIV와 관련된 병태에 관한 지표가 될 수 있다. 그에 따라, 본 발명의 펩티드는 DPPIV와 관련된 병태의 진단에 사용될 수 있다. 또 다른 측면에서 본 발명의 펩티드는 수많은 면역학적 장애, 예컨대, DPPIV 관련 장애의 치료에 유용할 것인데, 상기 장애에는 다음과 같은 것들이 있다: HIV/AIDS, 그레이브 병, 암(예컨대, 폐암 및 대장암), 당뇨병, 류마티즘성 관절염과 다방성 경화증과 같은 자가면역 장애.
투여
본 발명의 방법에 따라서, 본원에 기재된 것과 같은 본 발명의 펩티드는 피검체에서 감염을 치료 및/또는 예방하기 위하여 및/또는 DPPIV와 관련된 병태를 치료 또는 예방하기 위하여 유효한 양으로(예를 들어, 치료학적 유효량), 직접적으로 피검체에게 투여될 수 있다. 유사하게, 본원에 기재된 것과 같은 펩티드는, 피검체 내에서 펩티드의 발현이 허용되는 방식으로 그리고 감염을 치료 및/또는 예방하는데 유효한 양으로, 펩티드를 엔코딩하는 핵산 서열을 피검체에게 투여됨으로써, 간접적으로 피검체에 투여될 수 있다.
더 나아가, 본 발명의 펩티드, 또는 상기 펩티드를 엔코딩하는 핵산 분자는 피검체에서 감염을 치료하는데 유효한 양으로 피검체에게 투여될 수 있다. 본원에 서 사용된 것과 같은, 어구 "감염을 치료하는데 유효한"은 감염(세균, 진균, 기생충, 바이러스 등에 의한 감염)으로부터 초래되는 임상적 손상 또는 증상을 완화기키거나 최소화하는데 유효하다는 것을 의미한다. 예를 들어, 피검체가 병원균으로 감염된 경우, 미생물 감염을 치료하는데 유효한 펩티드(또는 상기 펩티드를 엔코딩하는 핵산)의 양은 두통, 뻣뻣한 목, 식욕 감퇴, 메스꺼움, 구토, 설사, 복통(abdominal discomfort), 급성 신부전증(acute renal failure), 여러 장기(organs)에서의 허혈성 손상의 변동 발현(changing manifestations), 발열, 및 혈소판감소증을 포함하나, 이에만 국한되는 것은 아닌, 미생물 감염에 따른 증상을 완화시키거나 최소화할 수 있는 양이다. 피검체에서 감염을 치료하는데 유효한 펩티드(또는 상기 펩티드를 엔코딩하는 핵산)의 양은 각 경우의 특별한 인자들에 따라 달라질 것인데, 상기 인자에는 피검체의 체중 및 피검체의 병태의 심각성이 포함된다. 펩티드(또는 상기 펩티드를 엔코딩하는 핵산)의 적절한 양은 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 유사하게, DPPIV와 관련된 병태를 치료하는데 유효한 양은 당업계의 통상의 기술자에게 공지된 다수의 유사한 인자에 따라 달라질 수 있다.
유사하게, 본 발명의 방법에서, 본 발명의 펩티드, 또는 상기 펩티드를 엔코딩하는 핵산 분자는 피검체에서 감염을 예방하는데 유효한 양으로, 감염이 악화(developing)될 위험이 있는 피검체에 투여될 수 있다. 본원에서 사용된 것과 같은, 어구 "감염을 예방하는데 유효한"은 감염(세균, 진균, 기생충, 바이러스 등에 의한 감염)의 결과 초래되는 임상적 손상 또는 징후의 악화 또는 발현을 방해하 거나 예방하는데 유효하다는 의미를 포함한다. 피검체에서 감염을 예방하는데 유효한 펩티드(또는 상기 펩티드를 엔코딩하는 핵산)의 양은 각각의 경우의 특별한 인자들에 따라 달라질 것인데, 상기 인자에는 피검체의 성별, 체중 및 피검체의 병태의 심각성, 병태의 성격, 감염 부위, 및 투여 방식이 포함된다. 펩티드(또는 상기 펩티드를 엔코딩하는 핵산)의 적절한 양은 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본원에 기재된 것과 같은, 본 발명의 펩티드, 또는 상기 펩티드를 엔코딩하는 핵산 서열은 공지된 절차에 의해 인간 또는 동물 피검체에 투여될 수 있는데, 상기 절차에는 경구 투여, 비경구 투여(예를 들어, 근막(epifascial), 피막내(intracapsular), 피내(intracutaneous), 진피내(intradermal), 근육내(intramuscular), 안와내(intraorbital), 복강내(intraperitoneal), 척수강내(intraspinal), 흉골내(intrasternal), 혈관내의(intravascular), 정맥내(intravenous), 실질(parenchymatous), 또는 피하(subcutaneous) 투여), 경피(transdermal) 투여, 비내(intranasal) 투여, 폐(pulmonary) 투여(예를 들어, 기관내(intratracheal) 투여), 및 삼투 펌프(osmotic pump)에 의한 투여가 포함된다. 한 구체예에서, 투여 방법은 정맥내 또는 피하 주사에 의한, 비경구 투여이다.
경구 투여의 경우, 펩티드(또는 상기 펩티드를 엔코딩하는 핵산)의 제형은 캡슐, 정제, 분말 또는 액체로 제공될 수 있다. 제형은 통상적인 첨가물, 예컨대, 락토오스, 만니톨, 옥수수 전분, 또는 감자 전분을 지닐 수 있다. 제형은 또한 결합제(binders), 예컨대, 결정성 셀룰로오스, 셀룰로오스 유도체, 아카시아, 옥수수 전분, 또는 젤라틴과 함께 제공될 수 있다. 추가적으로, 제형은 붕괴제(disintegrators), 예컨대, 옥수수 전분, 감자 전분, 또는 소디움 카르복시메틸셀룰로오스와 함께 제공될 수 있다. 제형은 추가로 2가 염기성 무정형 칼슘포스페이트 또는 나트륨 전분 글리코레이트와 함께 제공될 수 있다. 마지막으로, 제형은 윤활제(lubricants), 예컨대, 활석 또는 스테아린산마그네슘과 함께 제공될 수 있다.
비경구 투여의 경우, 펩티드(또는 상기 펩티드를 엔코딩하는 핵산)는 정제 수용액과 함께 혼합될 수 있는데, 상기 수용액은 피검체의 혈액과 등장액인 것이 바람직하다. 그러한 제형은, 수용액을 생산하기 위하여, 생리학적으로 적합한 물질, 예컨대, 염화나트륨, 글리신 등을 함유하는 물에 고체 활성 성분을 용해시키고, 그런 다음 상기 용액을 정제함으로써 제조될 수 있다. 제형은 단일 용량 또는 다중 용량 용기, 예컨대, 밀봉된 앰플 또는 바이얼로 제공될 수 있다. 제형은 또한 본원에 기재된 것과 같은 여러 전달방법들 중 임의의 방법을 포함하는, 임의의 주사 방식으로 전달될 수 있다.
경피 투여의 경우, 펩티드(또는 상기 펩티드를 엔코딩하는 핵산)은 피부 투과 강화제(skin penetration enhancers), 예컨대, 폴리에틸렌 글리콜, 이소프로판올, 올레산, N-메틸피롤리돈 등과 혼합될 수 있는데, 상기 강화제들은 펩티드 또는 핵산의 투과성을 증가시키고, 펩티드 또는 핵산이 피부를 통해 투과되어 혈류로 진입케 한다. 강화제 및 펩티드 또는 핵산의 조성물은, 겔 형상의 조성물을 제공하기 위하여, 추가로 중합체성 물질, 예컨대, 에틸셀룰로오스, 히드록시프로필 셀룰 로오스, 에틸렌/비닐아세테이트, 폴리비닐 피롤리돈 등과 혼합될 수도 있는데, 상기 조성물은 염화메틸렌과 같은 용매에 용해되고, 바람직한 점도를 위하여 증발되며, 그런 다음 패치를 제공하기 위하여 백킹제(backing material)에 적용될 수 있다. 펩티드 또는 핵산은 감염이 집중되어 있을 수 있는 피검체 상의 부위 또는 상기 부위 근처에, 경피적으로 투여될 수 있다. 대안적으로, 펩티드 또는 핵산은, 전신성 투여를 달성하기 위하여, 영향받은 지역을 벗어난 부위에 경피적으로 투여될 수 있다.
비내 투여(예를 들어, 코 스프레이) 및/또는 폐 투여(흡입에 의한 투여)의 경우, 에어로졸 제형을 포함하는, 펩티드 또는 핵산의 제형은 당업계의 통상의 기술자에게 잘 알려진 절차에 따라 제조될 수 있다. 에어로졸 제형은 고체 입자 또는 액체(수용성 또는 비수용성)를 포함할 수 있다. 네뷸라이저(Nebulizers)(예를 들어, 제트 네뷸라이저, 초음파 네뷸라이저 등) 및 아토마이저(atomizers)가 용액으로부터 에어로졸을 생산하기 위해 사용될 수 있다(예를 들어, 에탄올과 같은 용매를 사용함); 정량식 흡입기(metered-dose inhalers)와 건조분말 흡입기가 소형 입자 에어로졸을 발생시키는데 사용될 수 있다. 바람직한 에어로졸 입자 크기는 제트-밀링, 분무 건조(spray drying), 및 임계점 응축(critical-point condensation)을 포함하나, 이에만 국한되는 것은 아닌, 당업계에 공지된 수많은 방법들 중 임의의 한 방법을 채용함으로써 획득될 수 있다.
비내 투여를 위한 약제학적 조성물은 고체 제형(예를 들어, 조립 분말)일 수 있고, 부형제(예를 들어, 락토오스)를 함유할 수 있다. 고체 제형은 비관을 통한 급속 흡입을 이용하여, 코에 끼워진 분말 용기로부터 투여될 수 있다. 비내 투여 조성물은 또는 코 스프레이 또는 점비액(nasal drops)과 같은 수용액 또는 유성(oily) 용액을 포함할 수 있다. 분무기와 함께 사용되는 경우, 펩티드 또는 핵산의 제형은 수용액과, 부형제, 완충액, 등장제, 보존제, 또는 계면활성제와 같은 추가의 물질을 포함할 수 있다. 코 스프레이는, 예를 들어, 펩티드 또는 핵산의 현탁액 또는 용액을 압력하에서 노즐을 통해 분무되게 함으로써, 제조될 수 있다.
폐 투여를 위한 펩티드 또는 핵산의 제형은 흡입 기구에 의해 전달되는데 적합한 형태로 제공될 수 있는, 폐 또는 부비동(sinuses)의 하부 기도에 도달하는데 효과적인 입자 크기를 지닐 수 있다. 폐 점막을 포함하는, 점성 표면을 통한 흡수의 경우, 본 발명의 제형은, 예를 들어, 생체활성(bioactive) 펩티드, 다수의 초미세(submicron) 입자, 점막고착성(mucoadhesive) 거대분자 및/또는 지속적인 수용성 상(aqueous continuous phase)을 포함하는, 에멀젼을 포함할 수 있다. 점막 표면을 통한 흡수는 에멀전 입자의 점막고착을 통해 이루어 질 수 있다.
정량식 흡입 기구와 함께 사용하기 위한 약제학적 조성물은 비수용성 매질 중의 현탁액으로써 펩티드 또는 핵산을 함유하는 미세하게 분할된 분말을 포함할 수 있다. 예를 들어, 펩티드 또는 핵산은 혼합물로서(예를 들어, 액화(liquefied), 응축된 기체로서) 용기(예를 들어, 캐니스터) 내에 저장된 계면활성제(예를 들어, 솔비탄 트리올레이트(sorbitan trioleate), 쏘야 레시틴(soya lecithin), 또는 올레산)의 도움으로 추진체중에 현탁될 수 있다. 정량식 흡입기는 전형적으로 추진제 기체(예를 들어, 클로로플루오로카본, 히드로클로로플루오로 카본, 히드로플루오로카본, 또는 히드로카본)을 사용한다. 흡입기는 숨을 들이마시는 동안 충동작용(actuation)을 필요로 한다. 예를 들어, 정량 밸브의 충동작용은 혼합물이 에어로졸로 방출될 수 있게 한다. 건조 분말 흡입기는 혼합된 분말의 숨-충동작용(breath-actuation)을 이용한다.
본 발명의 펩티드 또는 핵산은 삼투 미니펌프 또는 다른 시한설정방출(timed-release) 기구로부터 방출되거나 전달될 수 있다. 간단한 삼투 미니펌프로부터의 방출 속도는 방출 오리피스(orifice) 내에 배치된 미세다공성, 신속 반응(fast-response) 겔로 조절될 수 있다. 삼투 미니펌프는 펩티드 또는 핵산의 방출, 또는 표적 전달에 유용할 것이다.
본원에 기재된 방법들에 따라서, 본 발명의 펩티드는 피검체에 펩티드 그 자체를 도입하거나, 펩티의 발현이 허용되는 방식으로 피검체에 펩티드를 엔코딩하는 핵산을 도입함으로써 피검체에 투여될 수 있다. 따라서, 본 발명의 한 구체예에서, 피검체 내의 감염은 본 발명에 따른 펩티드의 소정 양을 피검체에게 투여함으로써 치료 또는 예방될 수 있다. 본 발명의 추가 구체예에서, 피검체 내의 감염은, 피검체 내에서 펩티드의 발현이 허용되는 방식으로, 본 발명의 펩티드를 엔코딩하는 핵산 서열을 피검체에게 투여함으로써 치료 또는 예방될 수 있다.
본 발명의 펩티드는, 예를 들어, 주사 및 수혈(transfusion)을 포함하는, 단백질 및 다른 약물의 도입을 위해 사용되는 공지된 기술들에 의해 피검체에 투여되거나 도입될 수 있다. 감염이 피검체 신체의 특정 부위에 집중되는 경우, 주사 또는 몇몇 다른 수단에 의해(예를 들어, 펩티드를 혈액 또는 다른 체액 내로 도입함 으로써) 그러한 부위로 직접적으로 치료학적 펩티드를 도입하는 것이 바람직할 수 있다. 사용되는 펩티드의 양은, 위에 기재한 바와 같이, 피검체에서 감염을 치료 및/또는 예방하는데 효과적인 양이며, 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명의 방법에서, 펩티드는, 펩티드의 발현이 허용되는 방식으로, 펩티드를 엔코딩하는 핵산을 충분한 수의 피검체 세포로 도입함으로써 피검체에 투여되거나 도입될 수 있다. 치료학적 펩티드를 엔코딩하는 핵산의 양은, 위에 기재한 것과 같이, 피검체에서 감염을 치료 및/또는 예방하는데 효과적인 양으로 펩티드를 생산하게 될 양이다. 이러한 양은 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명의 펩티드를 엔코딩하는 핵산은 전기충격, DEAE 덱스트란 트랜스펙션, 인산칼슘 트랜스펙션, 리포펙션, 1가양이온(monocationic) 리포좀 융합, 다가양이온(polycationic) 리포좀 융합, 원형질체 융합, 생체내 전기장의 생성, DNA로 코팅된 미세분사물 폭격, 재조합 복제 결함 바이러스를 이용한 주입, 상동성 재조합, 생체내 유전자 치료, 생체외 유전자 치료, 바이러스 벡터, 네이키드 DNA 전달, 또는 이의 임의의 조합을 포함하나, 이에만 국한되는 것은 아닌, 당업계에 공지된 관용적인 절차를 이용하여 피검체에 도입될 수 있다. 유전자 치료에 적당한 재조합 바이러스 벡터는 레트로바이러스, HSV, 아데노바이러스, 아데노부속바이러스, 셈리키 삼림 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 및 백시니아 바이러스와 같은 바이러스의 게놈으로부터 유래된 벡터를 포함하나, 이에만 국한되는 것은 아니다.
본 발명의 펩티드를 엔코딩하는 핵산은, 세포 내에서 치료학적 펩티드의 발현이 달성되도록, 관용적인 절차를 이용하여, 시험관내 조건에서 적당한 세포로 도입될 수 있다는 것은 본 발명의 정의 내에 포함된다. 그 후에 펩티드를 발현하는 세포는 생체 내에서 감염을 치료 및/또는 예방하기 위하여 피검체로 도입될 수 있다. 상기한 생체외 유전자 치료 접근에서, 세포가 피검체로부터 적출되고, DNA 기술을 통해 치료학적 펩티드를 엔코딩하는 핵산이 통합되며, 이후 피검체로 재도입되는 것이 바람직하다.
또한 본 발명의 펩티드, 또는 상기 펩티드를 엔코딩하는 핵산을 함유하는 제형은 추가로 약제학적으로 허용되는 담체, 희석제, 또는 부형제와 결합되며, 그에 의한 약제학적 조성물을 포함할 수 있음은 본 발명의 범위 내에 포함된다. 본 발명의 약제학적 조성물 및 대표적인 담체, 희석제 및 부형제는 위에 기재되어 있다
본 발명의 제형은 약제학 분야에 잘 알려진 방법들로 제조될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 펩티드, 또는 상기 펩티드를 엔코딩하는 핵산은, 현탁액 또는 용액으로써, 담체, 희석제, 또는 부형제와 결합될 수 있다. 선택적으로, 하나 이상의 보조 성분(예를 들어, 완충액, 감미제(flavoring agents), 표면 활성 물질, 기타 물질)이 첨가될 수도 있다. 담체의 선택은 투여 경로에 따라 달라질 것이다. 약제학적 조성물은, 감염을 치료 및/또는 예방하기 위하여, 본 발명의 펩티드, 또는 상기 펩티드를 엔코딩하는 핵산 분자를 피검체에 투여하는데 유용할 것이다. 펩티드 또는 핵산은 약제학적 조성물이 투여되는 피검체에서 감염을 치료 및/또는 예방하는데 유효한 양으로 제공된다. 이러한 양은, 위에 기재한 것과 같이, 통상 의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
진단법 및 스크리닝 검정법
본 발명은 선천적 면역 병태, 또는 DPPIV와 관련된 병태를 지니는지 의심되는 피검체를 진단하기 위한 방법, 피검체가 표 1에 나열된 것과 같은 본 발명의 펩티드, 또는 이의 유사체, 유도체 또는 변이체를 이용한 처치에 반응할 것인지 여부를 예상하기 위한 방법, 및 본 발명의 펩티드의 면역학적 효과를 조절(예를 들어, 강화, 저해 또는 모방)할 수 있는 물질을 스크리닝하기 위한 방법을 제공한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명은 본 발명의 펩티드 또는 표 1에 나열된 펩티드의 면역학적으로 활성있는 유사체, 유도체, 및 변이체를 스크리닝하는 방법 또는 이의 면역학적으로 활성있는 변이(modifications)에 대해 스크리닝하는 방법을 제공한다.
한 구체예에서, 선천적 면역과 관련된 병태와 같은, 면역학적 장애를 지닌 환자가 본 발명의 펩티드를 치용한 처치에 반응할 것인지 여부를 예상하기 위한 방법은 피검체로부터 생물학적 샘플을 획득하는 단계, 본 발명의 펩티드를 상기 샘플에 투여하는 단계, 및 양성 및/또는 음성 대조군을 비교하여, DPPIV와 관련된 병태에 관한 DPPIV, 감염에 대한 염증성 바이오마커, 세포 생존율 또는 박테리아 부하(load)와 같은, 병태의 지표인 사전결정된 마커의 레벨을 모니터하는 단계를 포함한다. 양성 대조군은 공지의 면역학적 병태를 지닌 피검체로부터의 샘플일 수있다. 음성 대조군은 펩티드를 투여하지 아니한 동일 피검체로부터의 샘플일 수 있다. 대조군과 비교하여 펩티드가 활성, 마커의 레벨, 또는 세포 생존율을 조절한다면, 피검체는 그러한 면역학적 장애를 지닐 수 있고 펩티드를 이용한 처치로부터 혜택을 얻을 수 있다.
더 특별히, 본 발명의 한 측면에서, 피검체가 DPPIV와 관련된 병태를 지니는 것으로 의심된다면, 상기 병태에 대한 마커로서 DPPIV 활성을 모니터링하는 것이 적절할 것이다. 한 측면에서, 대조군과 비교하여 DPPIV 활성의 감소는 피검체가 펩티드를 이용한 처치에 반응할 것임을 나타내는 지표가 될 것이다. 대안적으로, 피검체가 감염을 지니거나 감염을 지녔던 것으로 의심된다면, 환자로부터 샘플을 수득하고 난 다음, 펩티드의 투여 후 환자로부터의 샘플과 비교하여 병원체 부하 또는 세포 생존력에 대해 상기 샘플을 모니터링하는데, 이때 펩티드 투여 후 환자에서 펩티드 부하가 더 적거나 세포 생존력이 더 높다면, 이는 피검체가 펩티드 처치로부터 혜택을 얻을 수 있거나 면역학적 장애를 지닌다는 지표이다.
또 다른 구체예에서, 펩티드 또는 표 1의 펩티드의 변이(modification) 또는 다른 물질이 본 발명의 펩티드와 동일한 면역학적 활성을 지니는지 여부를 알아내고자 한다면, 샘플(물질로 감염된 생쥐로부터 또는 공지된 DPPIV와 관련된 병태를 지닌 생쥐로부터의)에 대한, 공지의 조절 효과를 지니는 레퍼런스 펩티드와 비교하여 DPPIV 활성에 대한 펩티드의 효과를 모니터하거나, 상기 샘플에서 상기 감염 또는 DPPIV와 관련된 병태를 유발하고 난 다음, 상기 펩티드가 상기 감염 또는 DPPIV와 관련된 병태의 발달을 조절하거나 억제하였는지 여부를 모니터하면서, 예방, 샘플로의 펩티드 또는 물질의 투여, 또는 면역반응을 모니터할 수 있다. 상기 샘플은 동물 모델일 수 있는데, 여기서 병태 또는 감염의 유도는 윤리기준에 따라서 허용된 동물 모델에서 행해지고, 그런 다음 동물 또는 동물의 적절한 생물학적 샘플 이 펩티드 효과에 대해 스크리닝된다.
본 발명은 추가로 피검체가 미생물 감염에 대한 처치에 반응할 수 있는지 여부를 예상하는 방법을 제공하는데, 여기서 상기 처치는 피검체에 표 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 이의 유사체, 변이체, 또는 변이체를 투여하는 단계를 포함한다. 상기 방법은 하나 이상의 바이오마커(예컨대, 염증성 바이오마커)에 대하여 피검체의 진단 샘플을 검정하는 단계를 포함하는데, 여기서 하나 이상의 바이오마커(예컨대, 염증성 바이오마커)의 존재는 피검체가 처치에 반응할 수 있음을 나타내는 지표이다.
본원에서 사용된 것과 같은, "바이오마커" 또는 "마커"는 상태(예를 들어, 면역 상태, 감염, 염증 상태, DPPIV와 관련된 병태, 선천적 면역 상태)와 관련되어 있는 것으로 알려져 있거나, 관련이 있는 것으로 인식된, 임의의 적당한 바이오마커이며, 면역 반응, 선천적 면역반응, 염증, 및/또는 DPPIV와 관련된 병태, 장애, 또는 질병을 모니터하는데 사용될 수 있는, 유전자로부터 유래한 임의의 분자(예를 들어, 유전자의 전사체), 유전자로부터 유래한 센스(코딩) 또는 안티센스(논-코딩) 프로브 서열, 또는 유전자의 부분 또는 전장 길이 번역 생성물, 또는 이에 대한 항체를 포함한다.
본 발명의 방법에 따라서, 피검체의 진단 샘플은 시험관내 또는 생체내에서 검정될 수 있다. 검정이 시험관내에서 수행될 때, 피검체로부터의 진단 샘플은 표준 절차를 이용하여 적출될 수 있다. 진단 샘플은 조직일 수 있는데, 이에는 임의의 근육 조직, 피부 조직, 또는 연 조직이 포함되며, 이는 표준 생검(biopsy)에 의 해 적출될 수 있다. 또한, 진단 샘플은 혈액, 타액, 혈청, 또는 소변을 포함하는, 체액일 수 있다. 피검체 또는 환자는 박테리아 감염 또는 DPPIV와 관련된 병태와 같은 다른 면역학적 장애를 지니는 것으로 알려져 있거나, 박테리아 감염 또는 박테리아 감염 또는 선천적 면역 병태 또는 DPPIV와 관련된 병태와 같은, 다른 면역학적 병태를 지니는 것으로 의심되거나 박테리아 감염 또는 선천적 면역 병태 또는 DPPIV와 관련된 병태와 같은, 다른 면역학적 병태를 지니지 아니하는 것으로 여겨질 수 있다.
본 발명의 방법에 따라서, 피검체의 진단 샘플은 하나 이상의 바람직한 마커의 발현에 관하여 검정될 수 있다. 본원에서 사용된 것과 같은, "발현"은 염증 마커 유전자의 하나 이상의 mRNA 전사체로의 전사, 또는 하나 이상의 mRNA의 마커 단백질로의 번역을 의미한다. 따라서, 진단 샘플은 마커 단백질, 마커 cDNA, 또는 마커 mRNA에 대하여 검정함으로써 마커 발현에 대하 검정될 수 있다. 마커의 적절한 형태는 본원에서 논의된 특별한 기술에 기초하여 명백해질 것이다.
검정될 단백질은 당업계에 공지된 표준 방법을 이용하여 피검체 또는 환자의 진단 샘플로부터 동정 및 정제될 수 있는데, 상기 방법은 조직으로부터의 추출(예를 들어, 단백질을 용해시키는 세제를 이용한 추출)(필요한 경우, 뒤이어 컬럼 상에서 친화력 정제), 크로마토그래피(예를 들어, FPLC와 HPLC), 면역침전법(관심있는 염증 마커에 대한 항체를 이용함), 및 침전법(예를 들어, 이소프로판올 및 트리졸(Trizol)과 같은 시약을 사용함)을 포함하나, 이에만 국한되는 것은 아니다. 단백질의 동정 및 정제는 전기영동(예를 들어, SDS-폴리아클리아미드 겔 상에서의 전 기영동) 후 이루어질 수 있다. 진단 샘플은 마커 단백질(전구체, 단백질내 가수분해로 가공된 형태, 및 번역 후 변형에 따라 얻어지는 다른 형태를 포함함)의 발현 형태에 대하여 검정될 수 있는 것으로 고려된다. 핵산은 당업계의 통상의 기술자에게 공지된 표준 기술을 사용하여 진단 샘플로부터 동정될 수 있다.
본 발명의 방법에 따라서, 피검체의 진단 샘플은, 당업계에 용이하게 결정된 검정 및 검출 방법(예를 들어, 면역학적 기술, 혼성화 분석, 형광 이미지화 기술, 및/또는 방사능 검출)뿐만 아니라, 본원에 기재한 임의의 검정 및 검출 방법(예를 들어, 면역침전법, 웨스턴 블랏 분석 등)을 사용하여, 마커 발현에 대하여 검정될 수 있고, 마커 발현은 진단 샘플 내에서 검출될 수 있다. 예를 들어, 피검체의 진단 샘플은 염증 마커와 반응하는 물질을 사용하여 마커 발현에 대하여 검정될 수 있다. 본원에서 사용된 것과 같은, "반응하는"은 물질이 마커에 대하여 친화력을 지니거나, 이에 결합하거나, 이에 유도된다는 것을 의미한다. 추가로 본원에서 사용된 것과 같은, "물질"은 단백질, 폴리펩티드, 펩티드, 핵산(DNA 또는 RNA를 포함함), 항체, Fab 단편, F(ab')2 단편, 분자, 화합물, 항생제, 약물, 및 이의 임의의 조합(들)을 포함한다. 바람직하게는, 본 발명의 물질은, 본원에 기재된 기술에 따라서, 검출 마커 또는 표지로 표지된다. 본 발명의 한 구체예에서, 마커와 반응하는 물질은 항체이다.
본 발명의 물질이 바람직한 마커와 반응하는 항체인 경우, 피검체로부터 채취한 진단 샘플은 리간드로서 고체 지지체(예를 들어, 비드, 겔, 또는 플레이트 형 태의 불용성 유기 중합체)에 부착된, 마커에 대한 항체를 함유하는 친화력 컬럼을 통과함으로써 정제될 수 있다. 고체 지지체에 부착된 항체는 컬럼의 형태로 사용될 수 있다. 적당한 고체 지지체의 일예는 아가로스, 셀룰로오스, 덱스트란, 폴리아크릴아미드, 폴리스티렌, 세파로즈, 및 다른 불용성 유기 중합체를 포함하나, 이에만 국한되는 것은 아니다. 마커에 대한 항체는, 요망되는 경우, 추가로 스페이서 분자를 통해 고체 지지체에 부착될 수 있다. 물질 및 항체의 결합을 보장하기 위한 적절한 결합 조건(예를 들어, 온도, pH, 및 염 농도)은 당업계의 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 바람직한 구체예에서, 마커에 대한 항체는 세파로즈 4B(Sepharose 4B)와 같은, 세파로즈 컬럼에 부착된다.
추가적으로, 물질이 항체인 경우, 피검체의 진단 샘플은, 표준 면역학 검출 기술에 따라서, 마커와 면역반응하는 하나 이상의 항체를 이용한 결합 연구를 통해 면역학적 마커의 발현에 대하여 검정될 수 있다. 예를 들어, 친화성 컬럼으로부터 용리된 마커 단백질은 ELISA 검정, 웨스턴 블랏 분석, 유세포 분석(flow cytometry), 또는 항원-항체 상호작용을 이용한 임의의 다른 면역염색 방법을 적용받게 된다. 바람직하게는, 진단 샘플은 웨스턴 블랏팅을 이용하여 마커 발현에 대해 검정된다.
대안적으로, 피검체의 진단 샘플은 피검체로부터 채취된 진단 샘플로부터 추축된 핵산에 대한 혼성화 분석을 이용하여 마커 발현에 대해 검정될 수 있다. 본 발명의 상기 방법에 따라, 혼성화 분석은 mRNA의 노던 블랏 분석을 이용하여 수행될 수 있다. 이 방법은 또한 마커를 엔코딩하는 핵산에 혼성화되는 하나 이상의 핵산 프로브를 이용하여 DNA에 대한 서던 블랏 분석을 실행함으로써 행해질 수 있다. 핵산 프로브는 당업계의 통상의 기술자에게 알려져 있는 다양한 기술로 제조될 수 있는데, 상기 기술에는 다음의 기술들이 포함되나, 이에만 국한되는 것은 아니다: -마커 핵산의 제한효소 절단; 및 어플라이드 바이오시스템즈 모델 392 DNA/RNA 합성기와 같은, 시중에서 시판되고 있는 올리고뉴클레오티드 합성기를 이용한, 마커 핵산의 뉴클레오티드 서열의 선택된 부분에 상응하는 서열을 지닌 올리고뉴클레오티드의 자동화 합성.
본 발명에서 사용된 핵산 프로브는 DNA 또는 RNA일 수 있으며, 길이가 뉴클레오티드 약 8개로부터 염증-마커 핵산의 전장 길이까지 다를 수 있다. 또한, 본 발명의 핵산 프로브는 하나 이상의 검출 마커 또는 표지로 표지될 수 있다. 핵산 프로브의 표지화는 본원에 기재된 임의의 방법들을 포함하는, 당업계에 공지된 수많은 방법들 중 어느 하나를 이용하여 이루어질 수 있다. 마커 핵산의 사이한 지역 또는 중첩 지역에 상응하는, 2개 이상의 핵산 프로브들(또는 프라이머들)의 조합물이 또한 마커의 발현에 대하여 진달 샘플을 검정하는데 이용될 수 있는데, 예를 들어, PCR 또는 PCR 또는 RT-PCR을 이용한다.
본 발명의 방법에서 피검체의 진단 샘플 내의 마커 발현의 정도를 측정하거나 정량하기 위한 검정에 뒤이어 마커 발현의 검출이 이루어 질 수 있다. 그러한 검정은 당업계의 통상의 기술자에게 잘 알려져 있고, 면역조지화학/면역세포화학, 유세포분석, 질량분석, 웨스턴 블랏 분석, 또는 마커 단백질의 양을 측정하기 위한 ELISA를 포함할 수 있다. 예를 들어, 면역조직화학 검정을 이용하기 위하여, 조직 의 조직학적(파라핀에 담겨져 보관된(paraffin-embedded)) 부분이 슬라이드 상에 놓여지고, 그런 다음 머커에 대한 항체와 함께 인큐베이션될 수 있다. 그런 다음 슬라이드는 2차 항체(1차 항체에 대한)와 함께 인큐베이션될 수 있는데, 상기 2차 항체는, 조직 부분에 존재하는 마커에 대한 가시화를 가능케 하기 위하여, 안료 또는 다른 열량측정시스템(calorimetric system)(예를 들어, 형광색소, 방사능 물질, 또는 높은 전자-주사 성능을 지닌 물질)에 태그(tag)된다.
본 발명은 하기 실시예들에서 설명되는데, 실시예들은 본 발명의 이해를 돕기위해 제시된 것이며, 본 발명은 어떤 식으로든 실시예들에 뒤이은 특허청구범위에 규정된 것과 같은 본 발명의 영역내로 국한되는 것으로 해석되어서는 아니된다.
실시예
실시예 1 - 펩티드 합성
표 1의 펩티드들을 고체상 펩티드 합성 기술을 이용하여 합성하였다.
필요한 Fmoc-보호된 아미노산 모두를 요망되는 펩티드 1밀리몰(mmole)에 대하여 3배의 몰 과량(molar excess)으로 계량하였다. 그 후에 3mMol의 용액을 제조하기 위하여 아미노산들을 디메틸포름아미드(DMF)(7.5㎖) 중에서 용해시켰다. 레진 교체를 고려하여 적절한 양의 링크 아미드 MBHA 레진(Rink amide MBHA resin)을 계량하였다. 그런 다음 레진을 자동화 합성기 반응 용기로 옮기고 디클로메탄(DCM)과 함께 15분간 미리 담갔다.
레진에 DMF(30㎖) 중의 25% 피페리딘을 첨가하고 20분간 혼합시켜 레진을 탈보호시켰다. 레진의 탈보호 후, 3mMol의 아미노산 용액을 4mMol의 2-(1H-벤지트리 아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로니움 학사플루오로포스페이트(HBTU) 및 8mMol의 N,N-디이소프로필에틸아민(DIEPA)과 혼합하여 첫번째 커플링을 실시하였다. 레진에 첨가하기 전에 용액을 5분간 미리활성화(pre-activate)시켰다. 아미노산을 45분간 커플링되도록 하였다.
커플링 후, 레진을 완전히 DMF 및 디메틸아세트아미드(DMA)로 헹구었다. 부착된 Fmoc-보호된 아미노산을 위에 기재한 방식과 동일한 방식으로 탈보호시키고 그 다음 아미노산을 동일한 커플링 계획(scheme) AA:HBTU:DIEPA을 이용하여 부착시켰다.
합성 완료 후, 트리플루오로아세트산(TFA) 97.5% 및 물 2.5%를 함유하는 절단 칵테일을 사용하여 레진으로부터 펩티드가 떨어져 나오게 하였다. 레진을 절단 칵테일 중에서 1½ 시간 동안 적셨다. 그 후에 용액을 흡인여과기(Buchner funnel)를 사용하여 중력에 의해 여과시키고, 여과물을 50㎖ 원심분리 튜브에 수집하였다. 펩티드를 냉각시킨 디에틸 에테르를 이용하여 침전시킴으로써 동정하였다. 원심분리 및 디에틸 에테르 제거(decanting) 후, 진공 데시케이터에서 2시간 동안 건조시키기 전에 조 펩티드를 한번 더 디에틸 에테르로 세척하였다. 그 후에 펩티드를 탈이오화된 물(10㎖)에 용해시키고, -80℃에서 동결시키고 동결건조시켰다. 그런 다음 HPLC 정제를 위한 건조된 펩티드를 준비하였다.
이러한 펩티들의 친수성 특성으로 인하여, 디에틸 에테르 펩티드 동정은 성과가 좋지 못하였다. 따라서, 클로로포름 추출이 요구되었다. TFA를 증발시키고, 그 결과 생성된 펩티드 잔기를 10% 아세트산(15㎖)에 용해시켰다. 클로로포름(30 ㎖)으로 2회 아세트산 펩티드 용액을 세척하여 상기 용액으로부터 불순물 및 오물(scavengers)을 제거하였다. 그런 다음 수용성 펩티드 용액을 -80℃에서 동결시키고 동결건조시켜 그 결과 HPLC 정제를 위해 준비된 분말화된 펩티드를 얻었다.
펩티드 서열번호 33 및 34 각각은 1개의 N-메틸 아미노산을 함유하였다. 이 커플링은 RV를 함유한 레진 내에 N-메틸 아미노산, PyBroP 및 N-히드록시벤조트리아졸·H2O(HOBt) 및 DIEPA 용액를 모두 다같이 혼합함으로써 수행되었다. 45분 동안 커플링되도록 한 후, 그런 다음 커플링이 확실하게 완료되도록 하기 위해 N-메틸 아미노산을 재차 커플링시켰다. N-메틸 아미노산 후에 수해된 커플링은 완전하게 완료되지 않는다는 것이 관찰되었다. 따라서, HBTU 대신에 N,N,N',N'-테트라메틸-O-(7-아카벤조트리아졸-1-일)우로니움 헥사플루오로포스페이트(HATU)을 사용하여 이 커플링을 수행하였다. 이것은 여전히 총 순도의 30-40%로 집계되는 2개의 불순물을 전형적으로 함유한 조 펩티드가 획득되는 결과를 초래하였다. 근접하여 용리되는 불순물로부터 순수한 펩티드 피크를 분리시키기 위해 변형된 HPLC 조건 하에서 펩티드를 정제하였다.
실시예 2 - 비-항미생물 활성
박테리아(S. 아우레우스 25923)를 펩티드(200μM), 비히클(트리스), 또는 항생제(에리쓰로마이신; 120㎍/㎖)을 포함하는 웰에 파종하였다. 박테리아를 2시간 동안 성장시켰다. 그 후에, WST-1 열량측정 생존율 검정기(제품목록 번호: 1 644 807; Roche Diagnostics)을 이용하여 박테리아 생존율을 결정하였다. DMEM와 DMEM+WST-1가 백그라운드 대조군으로써 포함되었다. 도 1A 및 1B에 도시된 바와 같이, 서열번호 5와 47의 펩티드는, 항생제 대조군과 비교하여, 명백하게 활성의 결여를 나타내었다.
실시예 3 - 생체내 보호
생쥐를 복막내(IP) 주입을 통해 S. 아우레우스 25923로 감염시켰다. 4시간 경과 후, 서열번호 1, 4, 5, 6, 45, 및 47의 펩티드를 투여하였는데, IP 주입을 통해 서열번호 1의 경우, 12mg/kg와 24mg/kg(도 2A and 2B), 서열번호 5의 경우, 9.6mg/kg(도 2C), 서열번호 47의 경우, 13mg/kg(도 2D), 서열번호 4의 경우, 12mg/kg(도 2E), 서열번호 6의 경우, 9mg/kg(도 2F), 및 서열번호 45의 경우, 13mg/kg(도 2G)을 투여하였다. 감염 24시간 경과 후, 살아있는 동물들을 절명시키고, 복막내 세척액(lavage fluid)을 도말하여 펩티드 처치 및 이의 부재시에 잔여 박테리아 수(㎖ 당 # 콜로니 형성 단위(CFU/㎖))를 결정하였다.
본 연구에서 죽은 동물들은 임의의 동물의 가장 많은 박테리아 수를 할당받았다. 서열번호 1, 4, 5, 6, 45, 및 47의 펩티드는, 도 2A-2G에 도시된 바와 같이, 대조군에 비하여, 명백한 보호효과가 입증되었다.
실시예 4 - 생체내 예방적 보호
감염 24시간 이전에, 펩티드를 IP 주입을 통해 12mg/kg(서열번호 1, 도 3A)와 11.5mg/kg(서열번호 5, 도 3B)로 투여하였다. 그 후에 IP 주입을 통해 S. 아우레우스 25923를 생쥐에 감염시켰다. 감염 24시간 경과 후, 살아있는 동물들을 절명시키고, 복막내 세척액을 도말하여 펩티드 처치 및 이의 부재시에 잔여 박테리아 수(㎖ 당 # 콜로니 형성 단위(CFU/㎖))를 결정하였다.
본 연구에서 죽은 동물들은 임의의 동물의 가장 많은 박테리아 수를 할당받았다. 서열번호 1 및 5의 펩티드는 명백한 보호효과가 입증되었다(0마리 생쥐 절명(펩티드 처치군) 대 2마리 생쥐 절명(대조군)). 도 3A-3B을 참조하라.
본 발명자들에 의해 획득된 결과들은 실시예 1-4의 실험들과 연계하여 아래에서 논의된다:
본 발명자들은 표 2에 제시된 그러한 아미노산 서열 또는 본 발명의 일부로서 본원에 기재된 것과 같은 아미노산 서열을 지니는 펩티드가 선천적 면역을 강화시킬 수 있다는 것을 밝혀내었다. 특히, 서열번호 1, 4, 5, 6, 45, 및 47의 펩티드들은, 생체내 모델에서 입증된 것과 같이, 감염에 대한 예방 및 보호 활성을 가지고 있었다((도 2와 실시예 3; 도 3과 실시예 4). 그러나, 서열번호 5 및 47의 펩티드는, 실시예 1과 도 1에 도시된 바와 같이, 항미생물 활성이 결여되어 있었다. 따라서, 서열번호 5 및/또는 47을 통한, 선천적 면역의 조절은 이러한 펩티드들이 감염성 질환의 치료를 위한 치료제로서 사용될 수 있다는 것을 시사한다.
실시예 5 - 생쥐 혈액을 이용한 혈장 DPPIV 활성 검정
ICR 생쥐로부터 심장 천자(cardiac puncture)로 생쥐 혈액을 채취하고 헤파린처리된 혈액 수집 튜브에 수집하였다. 수마리의 생쥐로부터 얻은 혈액을 모으고 300㎕ 앨리쿼트(aliquots)로 나누었다. 펩티드를 아세테이트로 완충된 염수(pH 5.5)에 용해시켜 농도가 9 mM가 되게 하였다. 이 표준 용액 30㎕ 중에 혈액 300㎕를 첨가하고, 재현탁시키켜 혼합하였다(혈액의 농도 0.82mM). 대조군의 경우, 30 ㎕ 블랭크 아세테이트로 완충된 살린을 300㎕의 혈액에 첨가하였다. 각각의 펩티드 그룹은 3개를 1개조로(triplicate)로 제조하였고, 반면 대조군은 6개의 복제물(replicates)로 제조하였다. 밀폐된 마이크로튜브안의 샘플을 2시간 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 4000rcf로 원심분리하여 샘플로부터 혈장을 분리하였다. 혈장을 DPPIV 검정을 위한 96-웰 검정 플레이트에 옮겼다. 95㎕의 혈장에 5㎕의 DPPIV 기질 글리-프로-p-니트로아닐리드(탈이온화된 물 중에서 16mM)를 첨가하여 검정을 개시하고 UV(405nm) 흡광도의 증가를 20분 이상의 시간 간격으로 모니터하였다. 글리-프로-p-니트로아닐리드의 효소적 절단에 의한 p-니트로아닐린의 생성 속도가 DPPIV의 활성으로 받아들여졌다(Durinx C et al., (2001) “Reference values for plasma dipeptidyl-peptidase IV activity and their association with other laboratory parameters”. Clin Chem Lab Med. 39(2):155-9.)
결과는 표 1에서 확인할 수 있다. DPPIV의 활성에 관한 펩티드의 효과를 관찰하였다. 결과는 살린 대조군(100%로 설정됨)과 대비하여, 표준화되고, 평준화된, 활성(%)로서 제시된다. 100% 활성 미만의 어떠한 것도 DPPIV 활성에서의 감소를 의미한다.
본 발명의 한 측면에서, 약, 또는, 한 구체예에서, 25% 이상(즉, 약 75%까지)의 DPPIV 활성의 감소가 활성이 있는 것으로 간주되었다. 당업계의 통상의 기술자는 바람직한 수중의 활성이 사용된 펩티드에 따라 달라질 수 있음을 이해할 것이다.
고찰
II형 트랜스멤브레인 세린 프로테아제 디펩티딜 펩티다제 IV(DPPIV)(CD26 또는 아데노신 디아미나제 결합 단백질로도 공지되어 있음)는 면역 기능을 포함하는 다양한 생리학적 과정의 주요 조절자이다. CD26/DPPIV는 주로 성숙한 흉선세포, 활성화된 T-세포, B-세포, NK-세포, 대식세포 및 상피 세포에서 발현되는 110-kD의 세포 표면 당단백질이다. 상기 단백질은 2가지 이상의 기능, 신호 전달 기능 및 단백질가수분해 기능을 보유한다(Morimoto C, Schlossman SF. The structure and function of CD26 in .-. The T-cell immune response. Immunol. Review. 1998, 161: 55-70.). 이 단백질의 세포내 역할 중의 하나는 케모카인 N-말단으로부터 디펩티드를 절단함으로써 케모카인 활성의 조절에 관여한다. 케모카인의 NH2 말단의 변형은 이들의 수용체에 대한 결합과 후속 반응을 위해서 뿐만 아니라, 가공된 케모카인의 수용체 특이성을 변형시키기 위해서도 매우 중요하다. 더욱이, 가용성 rCD26은 T 세포의 내피세포관통 이동(transendothelial migration)을 강화시키고, 한편 단핵구의 이주(migratory) 반응을 감소시킨다는 것이 입증되었다[Oravecz, T. et al., (1997), Regulation of the recepto specificity and formation of the chemokine RANTES (regulated on activation, normal T cell expressed and secreted) by dipeptydyl peptidase IV (CD26)-mediated cleavage. J. Exp. Med. 186:1865-1872; Iwata, S., et al., (1999) CD26/dipeptidyl peptidase IV differentially regulates the chemotaxis of T cell and monocyte toward RANTES: possible mechanism for the switch from innate to acquired immune response. Int. Immunol. 11:417-426). 이러한 결과들은 CD26/DPPIV가 T 세포와 단핵구의 화학주성 반응을 차별적으로 조절하며, 선천적 면역반응에서 후천적 면역반응으로의 교체(switch)에 관여한다는 것을 시사한다. 이와 같은 맥락에서, DPPIV의 활성에서의 감소는, 선천적 면역반응과 대식세포 이주 반응을 촉진하여, 그에 따라 반대 효과를 지닐 것이다. 또한 DPPIV 효소 활성의 약리학적 억제가 RA에 대한 실험 래트 모델에서 관절염의 진행을 감소시킬 수 있었다는 것도 보고되었는데(Tanaka S et al., Anti-arthritic effects of the novel dipeptidyl peptidase IV inhibitors TMC-2A and TSL-225. Immunopharmacology 1998, 40:21-26; Tanaka S, et al.,: Suppression of arthritis by the inhibitors of dipeptidyl peptidase IV. Int J Immunopharmacol 1997, 19:15-24), 이는 DPPIV-활성의 감소가 일부 상황에서 염증을 완화시킬 수 있다는 것을 제시한다. 종합하면, 상기 항-염증 역할 및 DPPIV의 케모카인 활성 조절은 DPPIV를 이러한 활성에 관한 신규한 화합물을 스크리닝하기 위한 훌륭한 분자가 되게 한다.
CD26/DPPIV는 AIDS와 HIV 질환 발달(Blazquez et al. 1992; Vanham et al. 1993; Schols et al. 1998 Oravecz et al. 1995), 그레이브 병(Eguchi et al. 1989; Nishikawa et al. 1995), 암(Stecca et al. 1997) 및 당뇨병(Hinke et al. 2000; Marguet et al. 2000)와 같은, 다양한 질병의 병리에 관여한다.
추가로, T-세포 활성화에 대한 표지자로서 CD26은 류머티즘성 관절염(Nakao et al., 1989)과 자가면역 갑상선염(Eguchi et al., 1989)과 같은 몇몇 자가면역질 환과 나란히 변동되는 것으로 밝혀졌다. CD26은 이러한 질환들의 활성 레벨과 연계가 잘 되어 있는 마커로서 소개되었다. 더욱이, 만성 진행성 다발성 경화증에서 질병 진행의 표지자로서 연구되었다(Constantinescu et al., 1995).
본 발명의 펩티드는 이들이 DPPIV의 활성을 감소시킬 수 있다는 것이 입증되었다. 이와 같은 입장에서, 이들은 DPPIV와 관련되어 있거나 연관되어 있는 병태와 같은, 특정 면역학적 병태의 치료에 사용될 수 있고, 한 측면에서, 선천적 면역 및 폐혈증에 이르게 하는 염증과 같은, 염증을 조절할 수 있다.
앞서 기재한 본 발명은 명확 및 이해를 위한 목적으로 다소 상세하게 기재되었으나, 개시사항을 해석하여, 당업계의 통상의 기술자는 첨부된 특허청구범위의 본 발명의 진실한 영역으로부터 벗어남이 없이 형태 및 세부사항에서의 다양한 변형이 이루어질 수 있다는 것을 이해할 것이다.
Figure 112008032251690-pct00001
Figure 112008032251690-pct00002
표 1의 계속
표 1의 주석 1:
X1은 K, H, R, S, T, O, Cit, Hci, Dab, Dpr, 및 N-말단 상에 치환된 염기성 작용기를 지니는 글리신계 화합물(예를 들어, Nlys, hSer, Val(베타OH))로 구성된 군에서 선택된다.
X2는 V, I, K, P, 및 H로 구성된 군에서 선택된다.
서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 최대 길이가 아미노산 10개인 동정된 펩티드를 포함한다.
표 1의 주석 2:
여기서 X1은 K, H, R, S, T, O, Cit, Hci, Dab, Dpr, 및 N-말단 상에 치환된 염기성 작용기를 지니는 글리신계 화합물(예를 들어, Nlys), hSer, Val(베타OH))로 구성된 군에서 선택되며, X2는 A, I, L, V, K, P, G, H, R, S, O, Dab, Dpr, Cit, Hci, Abu, Nva, 및 Nle로 구성된 군에서 선택되며, X2는 N-메틸화될 수 있으며, X3는 I, V, 및 P로 구성된 군에서 선택되며, 한 구체예에서, X3는 N-메틸화되지 아니한다. 한 구체예에서, 동정된 펩티드는 최대 길이가 아미노산 10개인 아미노산 서열일 수 있으나, 서열번호 2 또는 17은 아니다.
표 1의 주석 3:
여기서 X1, X2 및 X3는 서열번호 56에서 정의된 바와 같이 정의되며, “a”는 S, P, I, R, C, T, L, V, A, G, K, H, R, O, C, M, 및 F로 구성된 군에서 선택되거나 상기 서열을 포함하는 최대 길이가 아미노산 10개인 동정된 펩티드이다.
표 1의 주석 4:
여기서 X1X2X3P는 서열번호 56에서 정의된 바와 같으며, “b”는 A, A*,G, S, L, F, K, C, I, V, T, Y, R, H, O, 및 M으로 구성된 군에서 선택되나, 한 구체예에서, P는 아니다. 한 구체예에서, 동정된 펩티드는 서열번호 58을 포함하나 서열번호 17을 불포함하는 최대 길이가 아미노산 10개인 펩티드이다.
표 1의 주석 5:
여기서 X1, X2 및 X3는 서열번호 56에서 정의된 바와 같으며, “a1”은 K, I R, H, O, L, V, A, 및 G로 구성된 군에서 선택되며, “a2”는 S, P, R T, H, K, O, L, V, A, G, S, 및 I로 구성된 군에서 선택된다. 한 구체예에서, “a1”은 아세틸화되지 아니하거나, a1이 K인 경우, K는 아세틸화되지 아니하거나 서열번호 2가 아니다. 한 구체예에서, 동정된 펩티드는 서열번호 59를 포함하는 최대 길이가 아미노산 10개인 펩티드를 포함한다.
표 1의 주석 6:
여기서 X1, X2 및 X3는 서열번호 56에서 정의된 바와 같으며, “a”는 S, R, K, H, O, T, I, L, V, A, 및 G로 구성된 군에서 선택되며, “b”는 A, V, I, L, G, K, H, R, O, S, T, 및 F로 구성된 군에서 선택되거나 서열번호 60을 포함하는 최대 길이가 아미노산 10개인 펩티드이다.
인용된 참고문헌
Figure 112008032251690-pct00003
Figure 112008032251690-pct00004
SEQUENCE LISTING <110> Inimex Pharmaceuticals, Inc. <120> NOVEL PEPTIDES FOR TREATING AND PREVENTING IMMUNE-RELATED DISORDERS, INCLUDING TREATING AND PREVENTING INFECTION BY MODULATING INNATE IMMUNITY <130> 190476-382091 <140> N/A <141> 2006-10-04 <150> US 60/722,962 <151> 2005-10-04 <150> US 60/722,958 <151> 2005-10-04 <150> US 60/722,959 <151> 2005-10-04 <160> 60 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 1 Lys Ser Arg Ile Val Pro 1 5 <210> 2 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa is equal to Acetylated K <400> 2 Xaa Ser Arg Ile Val Pro 1 5 <210> 3 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 3 Ser Arg Ile Val Pro Ala 1 5 <210> 4 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 4 Ser Arg Ile Val Pro 1 5 <210> 5 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 5 Arg Ile Val Pro Ala 1 5 <210> 6 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 6 Lys Ile Val Pro Ala 1 5 <210> 7 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa is equal to D- Amino Acid of Ala <400> 7 Arg Ile Val Pro Xaa 1 5 <210> 8 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 8 Arg Val Pro Ala 1 <210> 9 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 9 Arg Ile Pro Ala 1 <210> 10 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa is equal to Ala -OH <400> 10 Arg Ile Val Pro Xaa 1 5 <210> 11 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 11 Arg Ala Val Pro Ala 1 5 <210> 12 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 12 Arg Arg Ile Val Pro Ala 1 5 <210> 13 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 13 Arg Lys Val Pro Ala 1 5 <210> 14 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 14 Arg Ile Val Pro Lys 1 5 <210> 15 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 15 Arg Pro Val Pro Ala 1 5 <210> 16 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 16 Arg Ile Pro Pro Ala 1 5 <210> 17 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 17 Arg Ile Val Pro Pro 1 5 <210> 18 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 18 Arg Ile Val Pro Gly Gly Ala 1 5 <210> 19 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 19 Gly Gly Ile Val Pro Ala 1 5 <210> 20 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 20 Gly Ile Val Pro Ala 1 5 <210> 21 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 21 Arg Gly Val Pro Ala 1 5 <210> 22 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 22 Arg Ile Val Pro Gly 1 5 <210> 23 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 23 Arg Ile Val Pro Ser 1 5 <210> 24 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 24 Arg Ile Val Pro Leu 1 5 <210> 25 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 25 Arg His Val Pro Ala 1 5 <210> 26 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 26 Arg Ile Pro Val Ala 1 5 <210> 27 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 27 Arg Val Ile Pro Ala 1 5 <210> 28 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 28 Arg Ile Ile Pro Ala 1 5 <210> 29 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 29 Ala Val Pro Ile Arg 1 5 <210> 30 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 30 Ala Pro Val Ile Arg 1 5 <210> 31 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 31 Arg Ile Val Pro Ala 1 5 <210> 32 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 32 Cys Arg Ile Val Pro Ala Cys 1 5 <210> 33 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Xaa is equal to I with an NMe backbone <400> 33 Arg Xaa Val Pro Ala 1 5 <210> 34 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa is equal to A with an N-methylated backbone <400> 34 Arg Ile Val Pro Xaa 1 5 <210> 35 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 35 Arg Ile Val Pro Phe 1 5 <210> 36 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 36 Cit Ile Val Pro Ala 1 5 <210> 37 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 37 Arg Leu Val Pro Ala 1 5 <210> 38 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 38 His Ile Val Pro Ala 1 5 <210> 39 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 39 Ile Arg Arg Val Pro Ala 1 5 <210> 40 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> <400> 40 Ala Arg Val Pro Ala 1 5 <210> 41 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 41 Ile Arg Val Pro Ala 1 5 <210> 42 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 42 Orn Ile Val Pro Ala 1 5 <210> 43 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 43 Ser Ile Val Pro Ala 1 5 <210> 44 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 44 Val Ser Ile Ile Lys Pro Ala Arg Val Pro Ser Leu Leu 1 5 10 <210> 45 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 45 Lys Pro Ala Arg Val Pro Ser 1 5 <210> 46 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 46 Arg Val Pro Ser Leu Leu 1 5 <210> 47 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 47 Lys Pro Arg Ala Val Pro 1 5 <210> 48 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 48 Pro Ala Arg Val Pro 1 5 <210> 49 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 49 Ile Arg Val Pro 1 <210> 50 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 50 Arg Val Pro Ser 1 <210> 51 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 51 Arg Val Pro 1 <210> 52 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 52 Pro Ser Val Pro Gly Ser 1 5 <210> 53 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 53 Gly Leu Lys His Pro Ser 1 5 <210> 54 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <400> 54 Arg Ile Val Pro Ala Ile Pro Val Ser Leu Leu 1 5 10 <210> 55 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa is selected from the group consisting of K, H, R, S, T, O, Cit, Hci, Dab, Dpr, or glycine based compounds with basic functional groups substituted on the N-terminal. <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Xaa is selected from the group consisting of V, I, K, P, and H. <400> 55 Xaa Xaa Pro 1 <210> 56 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa is selected from the group consisting of K, H, R, S, T, O, Cit, Hci, Dab, Dpr, or glycine based compounds with basic functional groups substituted on the N-terminal. <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Xaa is selected from the group consisting of A, I, L, V, K, P, G, H, R, S, O, Dab, Dpr, Cit, Hci, Abu, Nva, Nle and where Xaa can be N-methylated. <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa is selected from the group consisting of I, V, P. <400> 56 Xaa Xaa Xaa Pro 1 <210> 57 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa is selected from the group consisting of S, P , I, R, C, T, L, V, A, G, K, H, R, O, C, M, and F. <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Xaa is selected from the group consisting of K, H, R, S, T, O, Cit, Hci, Dab, Dpr, or glycine based compounds with basic functional groups substituted on the N-terminal. <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa is selected from the group consisting of A, I, L, V, K, P, G, H, R, S, O, Dab, Dpr, Cit, Hci, Abu, Nva, Nle and where Xaa can be N-methylated. <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa is selected from the group consisting of I, V, P. <400> 57 Xaa Xaa Xaa Xaa Pro 1 5 <210> 58 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa is selected from the group consisting of K, H, R, S, T, O, Cit, Hci, Dab, Dpr, or glycine based compounds with basic functional groups substituted on the N-terminal. <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Xaa is selected from the group consisting of A, I, L, V, K, P, G, H, R, S, O, Dab, Dpr, Cit, Hci, Abu, Nva, Nle and where Xaa can be N-methylated. <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa is selected from the group consisting of I, V, P. <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa is selected from the group consisting of A, A*,G, S, L, F, K, C, I, V, T, Y, R, H, O, and M, wherein A* denotes D amino acid of A. <400> 58 Xaa Xaa X3 Pro Xaa 1 5 <210> 59 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa is selected from the group consisting of K, I,R, H, O, L, V, A, and G. <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Xaa is selected from the group consisting of S, P, R, T, H, K, O, L, V, A, G, S, I. <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa is selected from the group consisting of K, H, R, S, T, O, Cit, Hci, Dab, Dpr, or glycine based compounds with basic functional groups substituted on the N-terminal. <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa is selected from the group consisting of A, I, L, V, K, P, G, H, R, S, O, Dab, Dpr, Cit, Hci, Abu, Nva, Nle and where Xaa can be N-methylated. <220> <221> misc_feature <222> (5)..(5) <223> Xaa is selected from the group consisting of I, V, P. <400> 59 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Pro 1 5 <210> 60 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> IMMUNOLOGICAL PEPTIDE <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> Xaa is selected from the group consisting of S, R, K, H, O, T, I, L, V, A, and G. <220> <221> misc_feature <222> (2)..(2) <223> Xaa is selected from the group consisting of K, H, R, S, T, O, Cit, Hci, Dab, Dpr, or glycine based compounds with basic functional groups substituted on the N-terminal. <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa is selected from the group consisting of A, I, L, V, K, P, G, H, R, S, O, Dab, Dpr, Cit, Hci, Abu, Nva, Nle and where Xaa can be N-methylated. <220> <221> misc_feature <222> (4)..(4) <223> Xaa is selected from the group consisting of I, V, P. <220> <221> misc_feature <222> (6)..(6) <223> Xaa is selected from the group consisting of A, V, I, L, G, K, H, R, O, S, T, and F. <400> 60 Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa 1 5

Claims (35)

  1. 서열번호 1, 4, 5, 6, 45 및 47로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 구성되는, 동정된 펩티드.
  2. 제 1항에 있어서, 변형된 C-말단 및/또는 변형된 N-말단을 갖는, 동정된 펩티드.
  3. 제 2항에 있어서, 변형된 C-말단을 갖는, 동정된 펩티드.
  4. 제 3항에 있어서, 아미드화된 C-말단을 갖는, 동정된 펩티드.
  5. 제 1항에 있어서, 하나 이상의 D형 아미노산의 치환에 의해 변형된, 서열번호 1, 4, 5, 6, 45 및 47로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 구성되는 동정된 펩티드.
  6. 제 1항의 펩티드와 반응하는 항체.
  7. 삭제
  8. 제 6항에 있어서, 단일클론 항체인 항체.
  9. 제 1항의 펩티드를 엔코딩하는 동정된 핵산 분자.
  10. 발현벡터에 작동가능하게 연결된 제 9항의 핵산 분자를 포함하는 재조합 핵산 컨스트럭트.
  11. 제 10항의 재조합 핵산 컨스트럭트를 포함하는 하나 이상의 숙주 세포.
  12. 서열번호 1, 4, 5, 6, 45 및 47로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 구성되는 펩티드를 생산하기 위한 방법으로서,
    (a) 상기 펩티드의 발현이 허용되는 조건하에서, 제 11항의 하나 이상의 숙주 세포를 배양하는 단계; 및
    (b) 상기 하나 이상의 숙주 세포 또는 이의 배양 배지로부터 상기 펩티드를 회수하는 단계를 포함하는 방법.
  13. 삭제
  14. 삭제
  15. 삭제
  16. 삭제
  17. 삭제
  18. 삭제
  19. 삭제
  20. 삭제
  21. 삭제
  22. 삭제
  23. 삭제
  24. 삭제
  25. 삭제
  26. 삭제
  27. 삭제
  28. 삭제
  29. 삭제
  30. 삭제
  31. 삭제
  32. 제 1항에 있어서, 면역학적 활성을 갖는, 동정된 펩티드.
  33. 제 32항에 있어서, 최대 10개의 아미노산으로 구성되는, 동정된 펩티드.
  34. 삭제
  35. 삭제
KR1020087010890A 2005-10-04 2006-10-04 선천적 면역을 조절함으로써 감염을 치료 및 예방하는 것을 포함하는, 면역 관련 장애를 치료 및 예방하기 위한 신규한 펩티드 KR101410685B1 (ko)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US72296205P 2005-10-04 2005-10-04
US72295905P 2005-10-04 2005-10-04
US72295805P 2005-10-04 2005-10-04
US60/722,962 2005-10-04
US60/722,958 2005-10-04
US60/722,959 2005-10-04
PCT/CA2006/001650 WO2007038876A1 (en) 2005-10-04 2006-10-04 Novel peptides for treating and preventing immune-related disorders, including treating and preventing infection by modulating innate immunity

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20080070814A KR20080070814A (ko) 2008-07-31
KR101410685B1 true KR101410685B1 (ko) 2014-06-24

Family

ID=37905947

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020087010890A KR101410685B1 (ko) 2005-10-04 2006-10-04 선천적 면역을 조절함으로써 감염을 치료 및 예방하는 것을 포함하는, 면역 관련 장애를 치료 및 예방하기 위한 신규한 펩티드

Country Status (22)

Country Link
US (2) US8124721B2 (ko)
EP (6) EP2447368A3 (ko)
JP (2) JP2009509552A (ko)
KR (1) KR101410685B1 (ko)
CN (1) CN101351554B (ko)
AU (1) AU2006299682B2 (ko)
BR (1) BRPI0616936B8 (ko)
CA (1) CA2625183C (ko)
CY (1) CY1118840T1 (ko)
DK (2) DK2236608T3 (ko)
ES (1) ES2609520T3 (ko)
HK (1) HK1128728A1 (ko)
HU (1) HUE031989T2 (ko)
IL (1) IL190601A (ko)
LT (1) LT2236608T (ko)
MX (1) MX2009003636A (ko)
MY (1) MY157947A (ko)
PL (1) PL2236608T3 (ko)
PT (1) PT2236608T (ko)
RU (2) RU2507213C2 (ko)
SI (1) SI2236608T1 (ko)
WO (1) WO2007038876A1 (ko)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2447368A3 (en) * 2005-10-04 2012-12-26 Inimex Pharmaceuticals Inc. Novel peptides for treating and preventing immune-related disorders, including treating and preventing infection by modulating innate immunity
SG175573A1 (en) * 2006-10-04 2011-11-28 Inimex Pharmaceuticals Inc Novel peptides for treating and preventing immune-related disorders, including treating and preventing infection by modulating innate immunity
WO2014169274A2 (en) * 2013-04-12 2014-10-16 Yale University Modified proteins and methods of use thereof
US11311598B2 (en) * 2013-09-13 2022-04-26 Soligenix, Inc. Peptides and analogs for use in the treatment of oral mucositis
MY177930A (en) 2013-09-13 2020-09-28 Soligenix Inc Novel peptides and analogs for use in the treatment of oral mucositis
WO2015061682A2 (en) * 2013-10-24 2015-04-30 Soligenix, Inc. Novel peptides and analogs for use in the treatment of macrophage activation syndrome
KR20180084793A (ko) * 2015-10-16 2018-07-25 알사니스 바이오사이언시스 게엠베하 폐렴 간균(Klebsiella pneumoniae)을 타겟으로 하는 살균성 단일클론 항체
MA52150A (fr) * 2017-03-16 2020-01-22 Microsintesis Inc Compositions et procédés faisant intervenir des molécules probiotiques
WO2024038888A1 (ja) * 2022-08-19 2024-02-22 森永乳業株式会社 組成物

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005025607A1 (en) 2002-12-02 2005-03-24 The University Of British Columbia Methods of stimulating innate immunity using cationic peptides
WO2006038208A2 (en) 2004-07-12 2006-04-13 Medical Research Fund Of Tel Aviv Sourasky Medical Center Agents capable of downregulating an msf-a - dependent hif-1α and use thereof in cancer treatment

Family Cites Families (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NO812612L (no) 1980-08-06 1982-02-08 Ferring Pharma Ltd Enzym-inhibitorer.
IL107026A0 (en) 1992-09-16 1993-12-28 Univ Tennessee Res Corp Antigen of hybrid m protein and carrier for group a streptococcal vaccine
US5916872A (en) * 1996-07-24 1999-06-29 Intrabiotics Pharmaceuticals, Inc. Cyclic peptides having broad spectrum antimicrobial activity
US20030176357A1 (en) * 1998-10-06 2003-09-18 Pospisilik Andrew J. Dipeptidyl peptidase IV inhibitors and their uses for lowering blood pressure levels
US7504490B1 (en) * 1998-10-16 2009-03-17 Oscient Pharmaceuticals Corporation Nucleic acid and amino acid sequences relating to Apergillus fumigatus for diagnostics and therapeutics
CN1433470A (zh) * 1999-10-29 2003-07-30 启龙股份公司 奈瑟球菌的抗原性肽
GB9929464D0 (en) * 1999-12-13 2000-02-09 Proteom Ltd Complementary peptide ligande generated from the human genome
IL134830A0 (en) 2000-03-01 2001-05-20 Chay 13 Medical Res Group N V Peptides and immunostimulatory and anti-bacterial pharmaceutical compositions containing them
US20090062512A1 (en) * 2000-10-10 2009-03-05 Hildebrand William H Comparative ligand mapping from MHC class I positive cells
FR2825095B1 (fr) * 2001-05-28 2003-09-26 Dev Des Antigenes Combinatoire Dispositif de presentation de polypeptides, utilisable comme "puce" pour la detection miniaturisee de molecules
MXPA03010762A (es) 2001-05-31 2005-03-07 Univ Princeton Peptidos enlazantes de iap y ensayos para identificar los compuestos que enlazan el iap.
US7368421B2 (en) * 2001-06-27 2008-05-06 Probiodrug Ag Use of dipeptidyl peptidase IV inhibitors in the treatment of multiple sclerosis
EP1399470A2 (en) 2001-06-27 2004-03-24 Probiodrug AG Dipeptidyl peptidase iv inhibitors and their uses as anti-cancer agents
US20030130199A1 (en) * 2001-06-27 2003-07-10 Von Hoersten Stephan Dipeptidyl peptidase IV inhibitors and their uses as anti-cancer agents
GB0125445D0 (en) * 2001-10-23 2001-12-12 Ferring Bv Protease Inhibitors
NZ533721A (en) * 2001-12-03 2007-12-21 Univ British Columbia Peptides and their use for treating inflammatory conditions
EP2157101B1 (en) 2002-01-31 2014-09-24 Andromeda Bio Tech Ltd. HSP peptides and analogs for modulation of immune responses via antigen presenting cells
US8535672B2 (en) * 2002-04-04 2013-09-17 Yissum Research Development Of The Hebrew University Of Jerusalem Broad-spectrum in-vivo effective superantigen toxin antagonists based on the interaction between CD28 and the superantigen and uses thereof
US7618788B2 (en) * 2002-05-10 2009-11-17 Millipore Corporation Proteome epitope tags and methods of use thereof in protein modification analysis
SE0201863D0 (en) 2002-06-18 2002-06-18 Cepep Ab Cell penetrating peptides
US20040037809A1 (en) 2002-06-28 2004-02-26 Nastech Pharmaceutical Company Inc. Compositions and methods for enhanced mucosal delivery of interferon beta
EP1578432A4 (en) 2002-10-03 2008-07-30 Epimmune Inc HLA BINDING PEPTIDES AND USES THEREOF
CN101113173A (zh) 2003-09-12 2008-01-30 诺和酶股份有限公司 合成的抗微生物多肽
WO2005038000A2 (en) * 2003-10-17 2005-04-28 Pecos Labs, Inc. T cell epitopes useful in mycobacterium tuberculosis vaccine and as diagnostic tools and methods for identifying same
CN101124261A (zh) 2004-03-01 2008-02-13 派普特拉医药有限公司 酪蛋白衍生肽及其治疗用途
WO2006005190A1 (en) 2004-07-14 2006-01-19 Inimex Pharmaceuticals Inc. Method of screening for protection from microbial infection
EP1626059A1 (en) 2004-08-09 2006-02-15 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Angiogenic and immunologic applications of anti-CD160 specific compounds obtainable from mAb CL1-R2
CA2629751A1 (en) 2004-11-12 2006-05-18 The University Of British Columbia Antimicrobial peptides
WO2006114478A1 (en) 2005-04-26 2006-11-02 Karyon-Ctt Ltd Diagnostic and therapeutic agents
EP2447368A3 (en) 2005-10-04 2012-12-26 Inimex Pharmaceuticals Inc. Novel peptides for treating and preventing immune-related disorders, including treating and preventing infection by modulating innate immunity
SG175573A1 (en) 2006-10-04 2011-11-28 Inimex Pharmaceuticals Inc Novel peptides for treating and preventing immune-related disorders, including treating and preventing infection by modulating innate immunity

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005025607A1 (en) 2002-12-02 2005-03-24 The University Of British Columbia Methods of stimulating innate immunity using cationic peptides
WO2006038208A2 (en) 2004-07-12 2006-04-13 Medical Research Fund Of Tel Aviv Sourasky Medical Center Agents capable of downregulating an msf-a - dependent hif-1α and use thereof in cancer treatment

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Infection and Immunity, Vol. 72, pp. 1470-1478 (2004.03.31.) *

Also Published As

Publication number Publication date
RU2008115390A (ru) 2009-11-10
IL190601A (en) 2014-08-31
EP1931779A1 (en) 2008-06-18
CN101351554A (zh) 2009-01-21
EP2076596A1 (en) 2009-07-08
EP1931779A4 (en) 2009-07-29
RU2009117490A (ru) 2010-11-10
JP2012223199A (ja) 2012-11-15
ES2609520T3 (es) 2017-04-20
LT2236608T (lt) 2017-03-27
EP2447367B1 (en) 2018-12-05
US20090246217A1 (en) 2009-10-01
US9416157B2 (en) 2016-08-16
EP2236608A2 (en) 2010-10-06
EP2236608A3 (en) 2010-12-29
AU2006299682B2 (en) 2013-09-05
EP2076596A4 (en) 2010-07-21
US20130224231A1 (en) 2013-08-29
EP2447369A3 (en) 2012-09-05
US8124721B2 (en) 2012-02-28
DK2236608T3 (en) 2017-02-20
JP2009509552A (ja) 2009-03-12
PL2236608T3 (pl) 2017-06-30
EP2447368A3 (en) 2012-12-26
BRPI0616936B1 (pt) 2021-02-02
PT2236608T (pt) 2017-03-01
AU2006299682A1 (en) 2007-04-12
CN101351554B (zh) 2016-05-18
KR20080070814A (ko) 2008-07-31
SI2236608T1 (sl) 2017-03-31
WO2007038876A1 (en) 2007-04-12
BRPI0616936B8 (pt) 2021-05-25
CA2625183C (en) 2019-09-03
EP2236608B1 (en) 2016-12-07
RU2507213C2 (ru) 2014-02-20
EP2447368A2 (en) 2012-05-02
EP2447367A3 (en) 2013-01-02
EP2447369A2 (en) 2012-05-02
MY157947A (en) 2016-08-30
DK2447367T3 (en) 2019-02-18
EP2447367A2 (en) 2012-05-02
HK1128728A1 (zh) 2009-11-06
IL190601A0 (en) 2008-11-03
CY1118840T1 (el) 2018-01-10
CA2625183A1 (en) 2007-04-12
MX2009003636A (es) 2009-04-22
JP5780600B2 (ja) 2015-09-16
HUE031989T2 (en) 2017-08-28
BRPI0616936A2 (pt) 2011-07-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101410685B1 (ko) 선천적 면역을 조절함으로써 감염을 치료 및 예방하는 것을 포함하는, 면역 관련 장애를 치료 및 예방하기 위한 신규한 펩티드
US8791061B2 (en) Peptides for treating and preventing immune-related disorders, including treating and preventing infection by modulating innate immunity
US5654276A (en) Peptides and compounds that bind to the IL-5 receptor
US5668110A (en) Peptides and compounds that bind to the IL-5 receptor
EP1733231B1 (en) Peptides and peptidomimetics binding to cd23
US5683983A (en) Peptides and compounds that bind to the IL-5 receptor
DK1781315T3 (en) PEPTIDE INHIBITORS FOR MEDIATION OF stress responses
WO2011103458A2 (en) Compositions and methods for using and identifying antimicrobial agents
MX2008004255A (en) Novel peptides for treating and preventing immune-related disorders, including treating and preventing infection by modulating innate immunity
CN101578368A (zh) 包括通过调节先天免疫治疗和预防感染在内的治疗和预防免疫相关疾病的新型肽

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
N231 Notification of change of applicant
E902 Notification of reason for refusal
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20170609

Year of fee payment: 4

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20190611

Year of fee payment: 6