KR101384686B1 - Egfr 표적 치료제에 대한 폐암의 치료 반응성을 예측하는 방법 - Google Patents

Egfr 표적 치료제에 대한 폐암의 치료 반응성을 예측하는 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR101384686B1
KR101384686B1 KR1020130060659A KR20130060659A KR101384686B1 KR 101384686 B1 KR101384686 B1 KR 101384686B1 KR 1020130060659 A KR1020130060659 A KR 1020130060659A KR 20130060659 A KR20130060659 A KR 20130060659A KR 101384686 B1 KR101384686 B1 KR 101384686B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
lung cancer
ant2
egfr
cancer
treatment
Prior art date
Application number
KR1020130060659A
Other languages
English (en)
Inventor
김철우
장지영
고현정
김용구
Original Assignee
주식회사 바이오인프라
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 주식회사 바이오인프라 filed Critical 주식회사 바이오인프라
Priority to KR1020130060659A priority Critical patent/KR101384686B1/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101384686B1 publication Critical patent/KR101384686B1/ko
Priority to PCT/KR2014/004754 priority patent/WO2014193159A1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/6851—Quantitative amplification
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57423—Specifically defined cancers of lung
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • G01N33/6857—Antibody fragments
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6884—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids from lung
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/106—Pharmacogenomics, i.e. genetic variability in individual responses to drugs and drug metabolism
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis

Abstract

본 발명은, 표피성장인자 수용체(EGFR)를 표적으로 하는 약물에 대하여 비소세포 폐암 환자의 반응성 유무를 예측하여, 획득내성 환자의 치료효과를 높이는 방법에 관한 것이다. 본 발명에 의하면, 폐암 환자가 약물 치료제에 반응할 것인지의 여부를 미리 예측할 수 있어, 내성으로 인한 낮은 치료 성공율의 문제를 해결하는 동시에, 항암제 예후를 추정하고 향후의 치료방침을 결정하는데 유용하다.

Description

EGFR 표적 치료제에 대한 폐암의 치료 반응성을 예측하는 방법{METHOD OF PREDICTING RESPONSIVENESS OF LUNG CANCER TREATMENT TO ＥＧＦＲ TARGETING AGENT}
본 발명은, 표피성장인자 수용체(Epidermal Growth Factor Receptor; EGFR)를 표적으로 하는 약물에 대하여 비소세포 폐암 환자의 반응성 유무를 예측하는 방법에 관한 것이다.
보다 상세하게는, ANT2(Adenine Nucleotide Translocator 2) 단백질 또는 mRNA의 발현 증가를 확인함으로써 표피성장인자 수용체(Epidermal Growth Factor Receptor; EGFR) 표적 약물에 내성을 보이는 비소세포 폐암 환자를 식별 또는 예측하는 방법에 관한 것이다.
암을 치료하는 방법은 크게 수술, 방사선 치료, 항암화학요법, 그리고 생물학적 치료법 등으로 나눌 수 있다. 이 중 수술이나 방사선치료가 용이하지 않는 환자(전체 암 환자의 약 50%)와 이미 암이 전이된 환자들은 주로 화학요법으로 치료한다. 항암화학요법에 사용되는 약제의 경우 다양한 종류의 암 세포주 및 동물 종양 모델을 이용한 효능평가를 통해 항암효과를 갖는 성분을 분리해내기 위한 노력이 계속되고 있다.
이와 같이, 항암화학요법제는 점점 더 많이 개발되고 아울러 처치하는 요법도 복잡해지고 있지만 아직까지 만족할만한 효과적인 치료법은 나타나고 있지 않다. 항암화학요법을 이용한 암 치료에 있어서 장애가 되는 요소 중의 하나는 항암제내성이다. 항암제에 대한 약제내성은 암세포를 죽일 수 있는 혈중농도에 도달할 수 있는 양의 항암제를 투여했음에도 불구하고 암세포가 죽지 않는 경우를 말한다. 항암제내성은 환자 개개에 따라 다를 수 있으며 심지어 같은 조직으로부터 유래된 종양들 사이의 유전적 차이 등을 포함한 다양한 인자들에 의해 유발될 수 있다.
항암제 내성 기작은 일반적으로 세포외적 내성과 세포내적 내성으로 크게 분류될 수 있다. 세포외적 내성은 환자에 따라 특이적으로 심한 부작용을 나타내 충분한 농도의 항암제를 투여하지 못한 경우나, 경구용 항암제를 투여했을 때처럼 장내 흡수가 비정상적으로 저하된 경우에, 환자의 암세포가 in vitro에서 암세포를 죽일 수 있는 농도에 노출되지 못했기 때문에 항암제에 대해 내성을 보일 수 있다. 또는 충분한 혈중농도에는 도달했으나 암 조직으로의 혈류분포가 좋지 않거나 생리학적으로 혈관과 암 조직 사이에 장벽(blood-tissue barrier)이 있음으로 해서 약물이 조직 내로 침투가 되지 못하는 부위(pharmacologic sanctuary)에 암세포가 존재하는 경우처럼, 궁극적으로 암세포가 충분한 농도의 항암제에 노출되지 못할 때에도 항암제 내성 현상을 보인다.
이처럼 암 환자의 항암제 내성의 획득 여부를 판단함으로써 특정 항암제에 대한 치료 반응성과 효과를 예측하는 것은 암 환자 치료방침을 정하는데 매우 중요하다. 대표적인 예로, 유방암 치료제인 라파티닙(lapatinib)은 HER2 단백질의 수치가 높고 (HER2 양성) EGRF 단백질의 수치가 낮은 경우에 치료효과가 있는 것으로 밝혀진 바 있다. 그러나 전이성의 HER2 음성 유방암은 라파티닙에 반응을 하지 않아 라파티닙이 효과가 없는 것으로 드러났다. 이러한 연구결과를 참고하면, 일단 유방암 환자들은 치료를 받기 전에 정확한 검사를 통하여 HER2 음성인지 혹은 양성인지를 확실히 밝혀야 적절한 치료를 선택할 수 있음을 알 수 있다.
폐암은 전세계적으로 암 사망의 주원인이며, 폐암세포의 종류에 따라 비소세포(non-small cell) 폐암과 소세포(small cell) 폐암으로 나눌 수 있다. 폐암의 약 80%가 비소세포 폐암으로 분류되며, 선암종(adenocarcinoma), 편평세포암종(squamous cell carcinoma), 및 대세포암종(large cell carcinoma)이 이에 속한다. 또한, 비소세포 폐암은 일반적으로 소세포 폐암 보다 다른 기관으로의 전이가 느리다.
표피성장인자 수용체(EGFR)는 약 170kDa의 막단백질(transmembrane protein)로서 상피세포의 표면에서 발현된다. EGFR은 세포주기 조절인자인 티로신 키나제(tyrosine kinase) 군에 속하며, 세포외 도메인에 리간드(EGF 또는 TGF-α)가 결합하면 활성화되어 세포내 티로신 키나제 도메인의 자가 인산화 반응을 유도하고, 결국 신호전달경로를 통하여 세포증식 및 성장을 촉진하게 된다. 성장인자수용체 기능의 조절에 영향을 주거나, 수용체, 리간드의 과다발현을 유발하는 유전자 변형이 일어나면 발암으로 이어질 수 있다.
EGFR은, 종양유전자(oncogene)인 erbB 또는 ErbB1의 단백질 산물이다. erbB 또는 ErbB1은 수많은 암 발생에 있어 중요 인자로 알려진 원발암유전자(protooncogenes)인 ERBB 군의 하나이다. 폐암을 포함하여, 유방암, 방광암, 위암 등에서 EGFR의 발현이 증가되는 것이 관찰되었다. ERBB 종양유전자 군은 구조적으로 연관된 4개의 transmembrane 수용체들, 즉, EGFR, HER-2/neu(erbB2), HER-3(erbB3), 및 HER-4(erbB4)를 암호화하고 있다.
폐암, 유방암, 방광암, 위암 등의 상피세포암을 치료하기 위하여 다양한 EGFR 표적 약물이 개발되었으며, 특히 게피티닙(Gefitinib)(AstraZeneca UK Ltd., 상표명 "IRESSA")와 얼로티닙(Erlotinib)(Genentech, Inc. & OSI Pharmaceuticals, Inc., 상표명 "TARCEVA")이 대표적인 약물이다. 게피티닙(Gefitinib)과 얼로티닙(Erlotinib)은 퀴나졸린계 화합물로서, EGFR의 티로신 키나제 활성을 저해하여 인산화를 억제함으로써 세포성장을 막는다.
이들 표적 치료제들이 매우 유효한 약물임에도, 계속 사용시 치료효과들에 대하여 내성을 나타내거나, 측정가능한 정도의 반응을 보이지 않는 문제가 있다. 실제, 비소세포 폐암 환자들의 약 10% 정도만이 이들 약물에 반응성을 보이고 있다.
이에, 본 발명자들은 암 환자의 항암제 내성 여부를 판단하여 특정 항암제에 대한 치료 반응성과 효과의 예측방법을 제공하고자 예의 노력한 결과, 본 발명을 완성하게 되었다.
구체적으로, 본 발명의 목적은 폐암 환자의 게피티닙 치료에 대하여 ANT2를 신규의 내성 예측 바이오마커로 제공하는 것이다.
그러나, 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
본 발명은, 폐암조직 샘플에서 ANT2 단백질 또는 mRNA의 발현량을 확인하는 단계를 포함하는, 표피성장인자 수용체(EGFR)를 표적으로 하는 약물에 대하여 비소세포 폐암 환자의 반응성 유무를 예측하는 방법을 제공한다.
본 발명의 일 구체예로, 상기 방법의 약물은 게피티닙(gefitinib) 또는 얼로티닙(erlotinib)인 것을 특징으로 한다.
본 발명의 다른 구체예로, 상기 ANT2 단백질의 발현량은 면역조직화학염색, ANT2 mRNA의 발현량은 qRT-PCR을 이용하여 확인하는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 또 다른 구체예로, 상기 면역조직화학염색은 항-ANT2 항체를 이용하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 의하면, 폐암 환자가 약물 치료제에 반응할 것인지의 여부를 미리 예측할 수 있어, 내성으로 인한 낮은 치료 성공율의 문제를 해결할 수 있다.
또한, 본 발명에 의하면, 폐암을 치료하는데 사용된 약물에 환자가 반응적일지의 여부를 결정하여, 항암제 예후를 추정하고 향후의 치료방침을 정할 수 있다.
도 1은, 폐암 조직 샘플에서 ANT2 단백질의 발현정도를 확인하기 위해 면역조직화학염색(IHC)을 실시한 결과이며, 폐암 환자의 게피티닙 치료에 대하여 ANT2를 신규의 내성 예측 바이오마커로 이용할 수 있음을 확인하였다.
본 발명은 대부분의 암 세포에서 높은 발현을 나타내며, 특히 항암제 내성을 획득한 암 세포에서는 더욱 높은 발현을 나타내는 ANT2의 발현 정도가, 항암제 내성의 획득 여부를 판단하고 특정 항암제에 대한 치료 반응성과 효과를 예측하는 좋은 기준 인자가 될 것으로 기대하고, 폐암 환자의 폐암 조직을 대상으로 ANT2 면역조직화학염색(ANT2 단백질), qRT-PCR(ANT2 mRNA)을 실시하여, 항암제 치료 반응성과 ANT2 발현 정도, 그리고 항암제 내성을 획득하기 전과 후의 ANT2 발현 정도를 비교하였다.
이 때, 연구 대상으로 정한 암 환자는 폐암치료제인 게피티닙(gefitinib)으로 치료를 진행한 폐암 환자군이다. 폐암은 전세계적으로 암 사망율 1위인 매우 치명적인 암이다. 폐암의 대부분을 차지하는 비소세포폐암은 조기 진단이 거의 불가능하며, 조기에 원격전이를 잘하여 사망률이 높다. 폐암 1기에 발견되어 수술적인 치료를 받았어도 약 40%-50% 정도의 환자가 재발하여 사망에 이른다. 주된 치료제는 고식적인 항암제를 사용하며, 최근 표적 치료제로 게피티닙(gefitinib), 엘로티닙(erlotinib) 등의 상피세포성장인자수용체(Epidermal Growth Factor Receptor;EGFR)-표적 치료제들이 많이 사용되고 있다. 이러한 표적 치료제는 종양에 특정 바이오마커(biomarker)가 발현하고 있을 때에만 좋은 효과를 거둘 수 있기때문에, 예측 바이오마커(predictive biomarker)를 발굴하는 것은 당업계의 초미의 관심사이다.
특히 게피티닙은 폐암 치료제로서 매우 중요한 약제로 EGFR 돌연변이가 있는 폐암 환자에 사용할 경우 매우 효과적이지만, 모든 환자에서 평균 6-8개월 후에 획득 내성이 생기고 결국 사망하게 된다. 현재까지 획득 내성기전으로 밝혀진 것으로 T790M gatekeeper mutation과 MET oncogene의 amplification이 있다. 이러한 기전이 밝혀지고 획득 내성이 생긴 환자에게 이에 대한 억제제를 사용함으로써 내성을 극복할 수 있는 방안을 제시해주고 있으며, 따라서 획득 내성 기전을 밝히는 것은 게피티닙 치료 실패 후 후속 치료제 개발을 위해 필수적인 연구이다.
본 발명은 ANT2를 신규의 내성 예측 바이오마커로 이용한다. 이때, 아데닌 뉴클레오티드 트랜스로케이터(adenine nucleotide translocator, ANT)는 미토콘드리아 내막(inner membrane, IM)에 존재하는 효소로서 외막(outer membrane, OM)의 VDAC(voltage dependent anion channel)를 통하여 세포질로부터 미토콘드리아 내부로 ADP를 전달(import)하고 전자전달계(electron transfer chain system)를 거쳐 생성되는 ATP를 세포질로 방출(export)하는 기능을 수행하는 효소로 알려져 있다.
세포의 에너지 대사에 필수적인 역할을 수행하는 ANT는 3종의 유사체(isoform)인 ANT1, ANT2 및 ANT3가 알려져 있으며 이 중에서 특히 ANT2는 정상세포에서는 그 발현이 낮지만 암세포 또는 증식능이 높은 세포에서는 매우 높게 발현되는 특징을 가지고 있는데 이는 혐기성 상태(anaerobic condition)에서의 해당(glycolysis)반응과 밀접한 관련이 있으며, 또한 최근에는 새로운 암 치료의 표적으로 제시된 바 있다.
본 발명은 면역조직화학염색을 이용하여 ANT2 단백질의 발현 증가를 확인함으로써 폐암환자의 약물 반응성을 예측할 수 있다. 이때, "면역조직화학염색(immunohistochemistry)"이란, 항원-항체 반응을 이용하여 세포의 단백질 발현 양상을 분석하는 방법이다. 종양세포가 특정 항원 단백질을 발현하는 경우 이에 대한 상보적인 항체로 반응시키면 이 항체는 상보적인 항원에만 특이적으로 결합하게 되고, 이 항원-항체 결합 산물을 2차 항체로 처리하여 반응을 증폭시키고 발색시켜 현미경으로 관찰하면, 종양세포가 항원을 발현하는지(양성) 또는 발현하지 않는지(음성)를 객관적으로 판단할 수 있다.
이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 하기 실시예는 본 발명의 일례일 뿐, 본 발명이 하기 실시예에 한정된 것은 아니다.
[실시예]
실시예 1 : 폐암 조직에서 ANT2 단백질에 대한 면역조직화학염색
폐암 환자군에서 게피티닙에 대한 치료 효과와 내성획득 유무에 대한 자료가 확보된 환자 조직을 대상으로, ANT2 단백질에 대한 면역조직화학염색(IHC)을 실시하였다. 구체적인 방법은 다음과 같다.
1-1. 폐암 조직의 준비
서울대학교병원에서 10명의 폐암 환자로부터 폐암 조직을 외과적으로 제거한 후 분석때까지 액체질소에 보관하였다.
1-2. 조직 슬라이드의 제조
상기 폐암 조직을 파라핀 포매 블록으로 만든 후, 마이크로톰을 이용하여 4μm 두께로 잘라 유리슬라이드상에 붙여 조직 슬라이드를 제조하였다. 이때, 슬라이드를 드라이오븐(dry oven)에서 65℃, 1시간동안 두어 조직이 떨어지지 않게 하였다. 그 다음, 크실렌과 알코올로 40분간 탈파라핀 과정을 거쳤다.
1-3. 면역조직화학염색의 전처리
상기 준비된 조직 슬라이드에 대하여, ANT2 단백질 항원을 노출시키기 위해 microwave를 5분간 3번 쪼였다. 그 다음, 조직 내에 존재하는 내인성 인자인 혈액을 제거하기 위해 3% H2O2 를 15분간 처리한 후, 항체의 비특이적 결합을 막기 위해 정상 혈청으로 1시간 동안 블록킹(blocking)을 실시하였다.
1-4. 면역조직화학염색
면역에 사용된 1차 항체는 항-ANT2 항체(Creative BioMart, Cat No. CAB4666MH, 1:100 dilution) 이며, 수세 과정 없이 상기　1차 항체를 실온에서 1시간 동안 처리하였다. 이후, 수세를 한 다음 2차 항체를(biotinylated antibody) 및 streptavidin enzyme complex를 20분간 처리하여 수세를 한 다음 DAB로 발색을 하고, 발색여부를 현미경으로 확인하였다. Mayer Hemtoxylin으로　대조 염색후에 다시 수세 및 건조시켜 permount로 봉입하였다.
그 결과, 하기 표 1 및 도 1에 나타낸 바와 같이, 항암제의 치료 반응성이 높은 환자 그룹의 조직에서는 비교적 ANT2 발현이 낮음을 확인하였고, 항암제의 치료 반응성이 낮은 환자 그룹의 조직에서는 ANT2 발현이 높음을 확인하였다. 뿐만 아니라, 초기에는 치료 반응성이 좋았으나 치료 후 항암제 내성을 획득하여 치료 반응성이 낮아진 환자의 경우에, 치료 후 ANT2 발현이 현저히 증가되어 있음을 할 수 있다. 병리번호 S05-25201와 S07-2403는 동일 환자로 게피티닙에 대한 내성을 갖기 전 후의 조직으로 분석하였다.
병리번호 성별 나이 장기 진단 이상
유전자		 유전자 변이
상세내용		 gefinitib치료결과 ANT2
발현
S09-32238 F 48 Lung Adenocarcinoma EGFR 1. Microdeletion of exon 19 (p. Leu747_Thr751 del)
2. Missense mutation of exon 20 (p. Thr790Met)		 Poor response Positive
S10-38640 M 83 Lung Adenocarcinoma EGFR Microdeletion mutation of exon 19 (p. Leu 747_Thr 751 del) Poor response Positive
S06-25259 F 61 Lung Adenocarcinoma EGFR Microdeletion mutation of exon 19 (p. Glu746_Ala750 del) Poor response Positive
S10-13449 F 56 Lymph node Metastatic adenocarcinoma
(from lung)		 EGFR Microdeletion mutation of exon 19 (p. Glu746_Ala750 del) Poor response Positive
S06-17674 M 45 Lung Adenocarcinoma EGFR Microdeletion mutation of exon 19 (p. Glu746_Ala750 del) Poor response Positive
S08-45627 M 42 Lung Adenocarcinoma EGFR Microdeletion mutation of exon 19 (p. Glu746_Ala750 del) Poor response Positive
S05-25201 M 40 Lung Adenocarcinoma EGFR Microdeletion mutation of exon 19 (p. Glu746_Ala750 del) Good response Negative
S07-2403 M 41 Lung Adenocarcinoma EGFR Microdeletion mutation of exon 19 (p. Glu746_Ala750 del) Poor response Positive
S07-19185 F 61 Lung Adenocarcinoma EGFR Missense mutation of exon 21(p. L858R) Good response Negative
S06-19173 F 73 Lung Adenocarcinoma EGFR Missense mutation of exon 21(p. L858R) Good response Negative
S07-47639 F 55 Lung Adenocarcinoma EGFR Microdeletion mutation of exon 19 (P. Glu746_Ser752 del InsVal) Good response Negative

Claims (5)

  1. 하기의 단계를 포함하는, 표피성장인자 수용체(Epidermal Growth Factor Receptor; EGFR)를 표적으로 하는 약물에 대하여 비소세포 폐암 환자의 반응성을 예측하는 방법:
    폐암조직 샘플에서 ANT2(Adenine Nucleotide Translocator 2) 단백질 또는 mRNA의 발현량을 확인하는 단계, 및
    대조군에 비하여 ANT2의 발현이 높을 경우, EGFR을 표적으로 하는 약물에 대하여 비소세포 폐암 환자의 반응성이 낮을 것으로 판단하는 단계.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 약물은 게피티닙(gefitinib) 또는 얼로티닙(erlotinib)인 것을 특징으로 하는 방법.
  3. 제 1 항에 있어서, 상기 ANT2 단백질의 발현량은 면역조직화학염색을 이용하여 확인하는 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 제 3 항에 있어서, 상기 면역조직화학염색은 항-ANT2 항체를 이용하는 것을 특징으로 하는 방법.
  5. 제 1 항에 있어서, 상기 ANT2 mRNA의 발현량은 qRT-PCR을 이용하여 확인하는 것을 특징으로 하는 방법.
KR1020130060659A 2013-05-28 2013-05-28 Egfr 표적 치료제에 대한 폐암의 치료 반응성을 예측하는 방법 KR101384686B1 (ko)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020130060659A KR101384686B1 (ko) 2013-05-28 2013-05-28 Egfr 표적 치료제에 대한 폐암의 치료 반응성을 예측하는 방법
PCT/KR2014/004754 WO2014193159A1 (ko) 2013-05-28 2014-05-28 Egfr 표적 치료제에 대한 폐암의 치료 반응성을 예측하는 방법

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020130060659A KR101384686B1 (ko) 2013-05-28 2013-05-28 Egfr 표적 치료제에 대한 폐암의 치료 반응성을 예측하는 방법

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR101384686B1 true KR101384686B1 (ko) 2014-04-21

Family

ID=50657514

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020130060659A KR101384686B1 (ko) 2013-05-28 2013-05-28 Egfr 표적 치료제에 대한 폐암의 치료 반응성을 예측하는 방법

Country Status (2)

Country Link
KR (1) KR101384686B1 (ko)
WO (1) WO2014193159A1 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101872624B1 (ko) * 2016-12-27 2018-06-28 (주) 바이오인프라생명과학 Alk 표적 치료제에 대한 폐암의 치료 반응성을 예측하는 방법

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100087482A1 (en) 2005-02-03 2010-04-08 Haber Daniel A Method for Treating Gefitinib Resistant Cancer
US20120095029A1 (en) 2010-10-15 2012-04-19 Hoffmann-La Roche Inc. Ipp complex as marker for erlotinib treatment
JP2012524280A (ja) 2009-04-17 2012-10-11 オーエスアイ・ファーマシューティカルズ，エルエルシー 上皮成長因子受容体キナーゼ阻害剤に対する抗がん反応を予測するための生物学的マーカー
KR20130011379A (ko) * 2011-07-21 2013-01-30 주식회사 바이오인프라 Ａｄｅｎｉｎｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｏｒ 2 발현 또는 활성 억제제를 이용한 폐암 치료 방법

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101335034B1 (ko) * 2011-08-25 2013-12-02 주식회사 바이오인프라 유방암 진단을 위한 엑소좀 내의 ＡＮＴ2 ｍＲＮＡ의 이용방법

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100087482A1 (en) 2005-02-03 2010-04-08 Haber Daniel A Method for Treating Gefitinib Resistant Cancer
JP2012524280A (ja) 2009-04-17 2012-10-11 オーエスアイ・ファーマシューティカルズ，エルエルシー 上皮成長因子受容体キナーゼ阻害剤に対する抗がん反応を予測するための生物学的マーカー
US20120095029A1 (en) 2010-10-15 2012-04-19 Hoffmann-La Roche Inc. Ipp complex as marker for erlotinib treatment
KR20130011379A (ko) * 2011-07-21 2013-01-30 주식회사 바이오인프라 Ａｄｅｎｉｎｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｏｒ 2 발현 또는 활성 억제제를 이용한 폐암 치료 방법

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101872624B1 (ko) * 2016-12-27 2018-06-28 (주) 바이오인프라생명과학 Alk 표적 치료제에 대한 폐암의 치료 반응성을 예측하는 방법

Also Published As

Publication number Publication date
WO2014193159A1 (ko) 2014-12-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Masubuchi et al. Clinicopathological significance of androgen receptor, HER2, Ki-67 and EGFR expressions in salivary duct carcinoma
Micke et al. C‐erbB‐2 expression in small‐cell lung cancer is associated with poor prognosis
Komoto et al. HER2 overexpression correlates with survival after curative resection of pancreatic cancer
Furuya et al. Correlation of L‐type amino acid transporter 1 and CD98 expression with triple negative breast cancer prognosis
Li et al. The AKT inhibitor AZD5363 is selectively active in PI3KCA mutant gastric cancer, and sensitizes a patient-derived gastric cancer xenograft model with PTEN loss to Taxotere
Ducker et al. Incomplete inhibition of phosphorylation of 4E-BP1 as a mechanism of primary resistance to ATP-competitive mTOR inhibitors
Hegde et al. Delineation of molecular mechanisms of sensitivity to lapatinib in breast cancer cell lines using global gene expression profiles
Gurtner et al. Diverse effects of combined radiotherapy and EGFR inhibition with antibodies or TK inhibitors on local tumour control and correlation with EGFR gene expression
Chen et al. Expression and prognostic significance of p21-activated kinase 6 in hepatocellular carcinoma
Hsieh et al. The AXL receptor tyrosine kinase is associated with adverse prognosis and distant metastasis in esophageal squamous cell carcinoma
Suzuki et al. Higher pAkt expression predicts a significant worse prognosis in glioblastomas
Ferguson et al. Profiles of brain metastases: prioritization of therapeutic targets
Minuti et al. MET deregulation in breast cancer
Deguchi et al. PTEN loss is associated with a poor response to trastuzumab in HER2-overexpressing gastroesophageal adenocarcinoma
Oh et al. Phase II trial of dacomitinib in patients with HER2-positive gastric cancer
US8338456B2 (en) Cut-point in PTEN protein expression that accurately identifies tumors and is predictive of drug response to a pan-ErbB inhibitor
Wang et al. High expression of EGFR predicts poor survival in patients with resected T3 stage gastric adenocarcinoma and promotes cancer cell survival
Montgomery et al. EGFR, p53, IDH-1 and MDM2 immunohistochemical analysis in glioblastoma: therapeutic and prognostic correlation
Liang et al. Expression of ribosome‐binding protein 1 correlates with shorter survival in Her‐2 positive breast cancer
Takahashi et al. Serum level of hepatocyte growth factor is a novel marker of predicting the outcome and resistance to the treatment with trastuzumab in HER2-positive patients with metastatic gastric cancer
Ito et al. PTK6 regulates growth and survival of endocrine therapy-resistant ER+ breast cancer cells
WO2014165855A9 (en) Systems and methods for facilitating diagnosis, prognosis and treatment of cancer based on detection of her3 activation
Cacciola et al. UbcH10 expression can predict prognosis and sensitivity to the antineoplastic treatment for colorectal cancer patients
Yamaguchi et al. Rac1 activation in human breast carcinoma as a prognostic factor associated with therapeutic resistance
Grana et al. Epidermal growth factor receptor autocrine signaling in RIE-1 cells transformed by the Ras oncogene enhances radiation resistance

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
A302 Request for accelerated examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20170412

Year of fee payment: 4

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20180405

Year of fee payment: 5

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20190408

Year of fee payment: 6