KR101358718B1 - Cosmetic composition which has ricinus communis l. extract and sophora japonica flower extract as active components, and improves cellulite - Google Patents

Cosmetic composition which has ricinus communis l. extract and sophora japonica flower extract as active components, and improves cellulite Download PDF

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Abstract

본 발명은 피마자 추출물 및 괴화 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물 및 이소쿼시트린을 포함하는 화장료 조성물에 대한 것이다. 본 발명의 화장료 조성물은 셀룰라이트의 개선 및 바디 슬리밍에 뛰어난 효과가 있다. The present invention relates to a cosmetic composition comprising a castor extract and a lump extract as an active ingredient and a cosmetic composition comprising isoquacitrine. The cosmetic composition of the present invention has an excellent effect on the improvement of cellulite and body slimming.

Description

피마자 추출물 및 괴화 추출물을 유효성분으로 포함하며, 셀룰라이트 개선 효과가 있는 화장료 조성물{COSMETIC COMPOSITION WHICH HAS RICINUS COMMUNIS L. EXTRACT AND SOPHORA JAPONICA FLOWER EXTRACT AS ACTIVE COMPONENTS, AND IMPROVES CELLULITE} COSMETIC COMPOSITION WHICH HAS RICINUS COMMUNIS L. EXTRACT AND SOPHORA JAPONICA FLOWER EXTRACT AS ACTIVE COMPONENTS, AND IMPROVES CELLULITE}

본 발명은 셀룰라이트 개선 효과 및 슬리밍 효과가 있는 화장료 조성물 및 그 제조 방법에 대한 것이다.
The present invention relates to a cosmetic composition having a cellulite improving effect and a slimming effect and a manufacturing method thereof.

최근 들어 생활수준의 향상으로 피부 미용에 대한 관심과 기대가 증가하면서, 여성들의 화장품 특히 기능성 미용제품에 대한 관심이 날로 고조되고 특수한 기능을 부여하는 슬리밍 제품에 대한 관심도 계속 증가되고 있다.
Recently, as interests and expectations for skin care have increased due to improved living standards, women's interest in cosmetics, especially functional beauty products, has been increasing day by day and interest in slimming products that give special functions is also increasing.

셀룰라이트(cellulite)는 여성의 피부 및 피하 지방에서 주로 발생하며, 과도한 지방과 노폐물의 축적으로 인한 순환장애로 인하여 거친 오렌지 껍질 같이 울퉁불퉁한 피부가 되는 현상이다. 셀룰라이트 발생원인은 단순한 비만과는 차이가 있으나 근본적으로는 지방세포의 증가나 비대에 원인이 있으므로 지방세포 내의 지방을 분해하여 배출시켜 주는 것이 궁극적으로 날씬하고 매끈한 몸매를 만드는데 도움을 줄 수 있다.
Cellulite occurs mainly in women's skin and subcutaneous fat, and is a phenomenon that becomes rough skin like rough orange peel due to circulatory disorder due to accumulation of excess fat and waste products. The cause of cellulite is different from mere obesity, but it is basically caused by the increase or hypertrophy of fat cells, so the breakdown and release of fat in fat cells can ultimately help to create a slim and smooth body.

본 발명자들은 셀룰라이트 개선 및 바디 슬리밍 효과가 있는 화장료 조성물에 대하여 연구하던 중, 특정 식물 추출물 또는 이소쿼시트린을 피부에 도포시 셀룰라이트 개선 및 바디 슬리밍 효과가 좋은 것을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
The present inventors, while studying the cosmetic composition having a cellulite improvement and body slimming effect, confirmed that the cellulite improvement and body slimming effect is good when applying a specific plant extract or isoquacitrin to the skin and completed the present invention.

본 발명의 목적은 셀룰라이트 개선 효과 및 슬리밍 효과가 있는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
An object of the present invention is to provide a cosmetic composition having a cellulite improving effect and a slimming effect.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 피마자 추출물 및 괴화 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.
In order to achieve the above object, the present invention provides a cosmetic composition comprising the castor extract and lump extract as an active ingredient.

또한 본 발명은 이소쿼시트린을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.
In another aspect, the present invention provides a cosmetic composition comprising isoquacitrin as an active ingredient.

본 발명의 화장료 조성물은 셀룰라이트 개선 및 슬리밍 효과가 있어 미용상 탁월한 효능을 보인다.
Cosmetic composition of the present invention has a cellulite improvement and a slimming effect shows excellent cosmetic beauty.

도 1은 플라보노이드의 지방세포 저해능을 측정한 결과이다.
도 2는 HEK 293-TOP 세포를 이용하여 플라보노이드의 Wnt/β-catenin 신호전달 촉진능을 확인한 결과이다.
도 3은 3T3-L1 세포를 이용하여 플라보노이드의 Wnt/β-catenin 신호전달 촉진능을 확인한 결과이다.
도 4는 식물 추출물들의 추출물의 Wnt/β-catenin 신호전달 촉진능을 확인한 결과이다.
1 is a result of measuring the adipocyte inhibitory ability of flavonoids.
Figure 2 is a result confirming the Wnt / β-catenin signaling promoting ability of the flavonoids using HEK 293-TOP cells.
Figure 3 shows the results of confirming the Wnt / β-catenin signaling promoting ability of the flavonoids using 3T3-L1 cells.
4 is a result confirming the Wnt / β-catenin signaling promoting ability of the extract of the plant extracts.

본 발명은 특정 식물 추출물을 유효성분으로 포함하며, 셀룰라이트 개선 효과가 있는 화장료 조성물을 제공한다.
The present invention includes a specific plant extract as an active ingredient, provides a cosmetic composition having an effect of improving cellulite.

또한 본 발명은 이소쿼시트린을 포함하며, 셀룰라이트 개선 효과가 있는 화장료 조성물을 제공한다.
In another aspect, the present invention provides a cosmetic composition comprising isoquacitrin, and has a cellulite improving effect.

또한 본 발명은 이소쿼시트린을 화장료 베이스에 첨가하는 단계를 포함하는 셀룰라이트 개선 효과가 있는 화장료 조성물의 제조 방법을 제공한다.
In another aspect, the present invention provides a method for producing a cosmetic composition having a cellulite improving effect comprising the step of adding isoquacitrin to the cosmetic base.

또한 본 발명은 식물 추출물을 화장료 베이스에 첨가하는 단계를 포함하는 셀룰라이트 개선 효과가 있는 화장료 조성물의 제조 방법을 제공한다.
The present invention also provides a method for producing a cosmetic composition having a cellulite improving effect comprising the step of adding a plant extract to the cosmetic base.

이하, 본 발명을 자세히 설명한다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명의 화장료 조성물은 피부에 도포하여 사용하는 것이다. 바람직하게는 본 발명의 화장료 조성물은 경피 흡수용 화장료 조성물이다.
The cosmetic composition of the present invention is applied to the skin and used. Preferably the cosmetic composition of the present invention is a cosmetic composition for transdermal absorption.

본 발명의 화장료 조성물은 식물 추출물을 포함할 수 있으며, 상기 식물은 피마자, 괴화, 초피나무, 측백나무, 칡, 해당화, 건지황, 지모, 편축, 해금사 등이다. 바람직하게는 본 발명의 식물은 피마자 및/또는 괴화이다. The cosmetic composition of the present invention may include a plant extract, the plant is castor, lumps, bark wood, cypress, 칡, glycolysis, dried geolji, jimo, short axis, haegeum. Preferably the plant of the invention is castor and / or lumped.

본 발명의 식물 추출물은 식물의 전초를 이용할 수도 있고 식물을 부위별로 이용할 수도 있다. 예컨대 식물의 잎, 줄기, 줄기껍질(수피), 목질부, 열매, 뿌리, 지상부, 지하부, 전초 등을 이용할 수 있다.
The plant extract of the present invention may use the outpost of the plant or the plant may be used for each part. For example, the leaves, stems, stem bark (bark) of the plant, wood, fruit, root, ground, underground, outpost can be used.

본 발명의 식물 추출물은 열수 추출 또는 탄소수 3 이하의 저가 알코올로 추출하여 제조할 수 있다. 상기 탄소수 3 이하의 저가 알코올은 메탄올인 것이 바람직하나 이에 제한되는 것은 아니다.
The plant extract of the present invention can be prepared by hot water extraction or extraction with a lower alcohol having 3 or less carbon atoms. The lower alcohol having 3 or less carbon atoms is preferably methanol, but is not limited thereto.

본 발명의 화장료 조성물은 셀룰라이트 개선 효과가 있다. 상기 셀룰라이트 개선 효과란 셀룰라이트의 부피가 작아지는 것, 셀루라이트의 높이가 낮아지는 것, 셀룰라이트가 제거되는 것, 셀룰라이트 및 그 주위가 편평하여지는 것 등을 가리킨다.
The cosmetic composition of the present invention has cellulite improving effect. The cellulite improvement effect refers to a decrease in the volume of the cellulite, a decrease in the height of the cellulite, a removal of cellulite, and a flattening of the cellulite and its surroundings.

본 발명의 화장료 조성물은 피부가 매끈하여지는 효과가 있다. 이는 피하의 지방세포 및 그 주위의 노폐물, 수분 등이 뭉쳐 피부가 울퉁불퉁하여지는 것을 저해, 방지하는데 따른 효과이며, 이로써 셀룰라이트가 생기는 것을 예방할 수도 있다.
The cosmetic composition of the present invention has an effect of smooth skin. This is an effect of inhibiting and preventing the skin from becoming uneven due to aggregation of subcutaneous adipocytes and surrounding waste water and moisture, thereby preventing cellulite from being formed.

한편 본 발명의 화장료 조성물은 바디 슬리밍 효과가 있다. 바디 슬리밍이란 지방이 피하에 고르게 분포하지 않아 울퉁불퉁하게 보이는 바디 라인에 있어, 지방이 고르게 재분포되도록 촉진하는 것, 신체 또는 신체의 일부분의 부피를 감소시키는 것, 붓기를 제거하여 결과적으로 신체 또는 신체의 일부분의 부피를 감소시키는 것, 국소비만 상태의 개선, 지방 세포 내의 지방을 분해하여 배출시켜 주는 것, 지방 세포 내의 트리글리세라이드 및 체액 축적을 감소시키는 것 등을 의미한다.
Meanwhile, the cosmetic composition of the present invention has a body slimming effect. Body slimming refers to promoting the redistribution of fat evenly in the bumpy body line that is not uniformly distributed under the skin, reducing the volume of the body or part of the body, Reducing the volume of a portion of the fat cells, improving localized obesity, dissolving fat in adipocytes, reducing triglycerides and body fluid accumulation in adipocytes, and the like.

또한 본 발명의 화장료 조성물은 피부 탄력 증진에 효과적이며, 비만 개선 효과가 있다.
In addition, the cosmetic composition of the present invention is effective in improving skin elasticity, and has an effect of improving obesity.

본 발명의 화장료 조성물은 남성용 화장료 또는 여성용 화장료 모두에 적용될 수 있다. 그러나 셀룰라이트가 여성에게 잘 생기는 점을 감안할 때 본 발명의 화장료 조성물은 여성용 화장료 조성물로 이용하는 것이 유용하다. 또한 임신부의 호르몬 변화로 인한 셀룰라이트 발생을 예방하기 위하여, 본 발명의 화장료 조성물을 이용할 수도 있다.
The cosmetic composition of the present invention can be applied to both men's cosmetics and women's cosmetics. However, considering that cellulite is well-tolerated by women, it is useful to use the cosmetic composition of the present invention as a cosmetic composition for women. The cosmetic composition of the present invention may also be used to prevent the development of cellulite due to hormonal changes in the pregnant woman.

본 발명의 화장료 조성물은, 당업계의 통상적으로 제조되는 어떠한 제형에도 제조될 수 있으며 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 젤, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한 본 발명의 화장료 조성물은 유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 스프레이 또는 파우더 제형으로 제조될 수도 있다.
The cosmetic composition of the present invention may be prepared in any formulations conventionally produced in the art and may be formulated into a solution, suspension, emulsion, paste, gel, cream, lotion, powder, soap, surfactant- containing cleansing oil, powder foundation , An emulsion foundation, a wax foundation and a spray, but is not limited thereto. The cosmetic composition of the present invention may also be formulated as a softening agent, a nutritional lotion, a nutritional cream, a massage cream, an essence, an eye cream, a cleansing cream, a cleansing foam, a cleansing water, a pack, a spray or a powder.

본 발명의 화장료 조성물은 유효성분의 피부 흡수율이 시간당 0.01 μg/cm2 내지 150 μg/cm2이다. 바람직하게는 본 발명의 화장료 조성물은 피부 흡수율이 시간당 0.1 μg/cm2 내지 100 μg/cm2이며, 더욱 바람직하게는 시간당 1.0 μg/cm2 내지 50 μg/cm2이다. 피부 흡수율이 시간당 0.01 μg/cm2 미만인 경우 셀룰라이트 개선 효과가 미비하며, 피부 흡수율이 시간당 150 μg/cm2를 초과하는 경우 유효성분 투여량에 비하여 셀룰라이트 개선능/바디 슬리밍 효과의 증가 효과가 미비하여 경제적이지 못하다. 상기 유효성분은 식물 추출물이며, 바람직하게는 이소쿼시트린일 수 있다.
In the cosmetic composition of the present invention, the skin absorption rate of the active ingredient is 0.01 μg / cm 2 to 150 μg / cm 2 per hour. Preferably the cosmetic composition of the present invention has a skin absorption rate of 0.1 μg / cm 2 to 100 μg / cm 2 per hour, more preferably 1.0 μg / cm 2 to 50 μg / cm 2 per hour. When the skin absorption rate is less than 0.01 μg / cm 2 per hour, the cellulite improvement effect is insignificant, and when the skin absorption rate exceeds 150 μg / cm 2 per hour, the cellulite improving ability / body slimming effect is increased compared to the active ingredient dose. Inadequate and uneconomical The active ingredient is a plant extract, preferably isoquacitrin.

본 발명의 화장료 조성물은 이소쿼시트린 함량이 일반적인 화장료 조성물에비하여 높다.
The cosmetic composition of the present invention has a high isoquacitrine content as compared to a general cosmetic composition.

본 발명의 이소쿼시트린은 화합물, 즉 화학식 1의 화합물, 그 유도체 또는 이들의 염의 형태로 화장료 조성물 내에 첨가될 수 있다. 또한 본 발명의 이소쿼시트린은 이소쿼시트린을 포함하는 추출물의 형태로 화장료 조성물 내 첨가될 수도 있다. 상기 추출물은 식물 추출물일 수 있다. 즉, 상기 식물 추출물은 피마자 추출물, 괴화 추출물, 초피나무 추출물, 측백나무 추출물, 칡 추출물, 해당화 추출물, 건지황 추출물, 지모 추출물, 편축 추출물 및 해금사 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 추출물일 수 있다.
Isoquacitrin of the present invention may be added to cosmetic compositions in the form of a compound, i.e., a compound of formula (1), a derivative thereof or a salt thereof. In addition, the isoquacitrine of the present invention may be added in the cosmetic composition in the form of an extract containing isoquacitrin. The extract may be a plant extract. That is, the plant extract may be one or more extracts selected from the group consisting of castor extract, lump extract, bark tree extract, cypress extract, 칡 extract, glycolysis extract, dried huangji extract, hairy extract, shrunken extract and haegeum extract.

Figure 112011043968253-pat00001
Figure 112011043968253-pat00001

본 발명의 화장료 조성물은 효과적인 경피 흡수를 위하여 피부 침투 촉진제를 포함할 수 있다. 상기 피부 침투 촉진제는 당 업계에서 화장료 조성물에 사용하는 일반적인 피부 침투 촉진제면 되고, 특별히 제한되는 것은 아니다. 예컨대 본 발명의 피부 침투 촉진제는 디메틸 설폭사이드, oleic acid 등 지방산/에스테르 화합물, 리모넨(limonene) 등이 될 수 있다.
The cosmetic composition of the present invention may contain a skin penetration promoter for effective transdermal absorption. The skin penetration promoting agent is not particularly limited so long as it is a general skin penetration promoting agent used in the cosmetic composition in the art. For example, the skin penetration promoter of the present invention may be a fatty acid / ester compound such as dimethylsulfoxide, oleic acid, limonene, and the like.

또한 본 발명의 화장료 조성물을 이용 시에는 충격파, 이온삼투요법, 전기침공법, 미세침요법 등 물리적 방법을 병용하여 경피 흡수를 촉진할 수도 있다.
When the cosmetic composition of the present invention is used, transdermal absorption may be promoted by using physical methods such as shock waves, iontophoresis, electrical invasion, and microinfiltration.

이하, 본 발명을 다음의 실시예 및 실험예에 의해 보다 상세하게 설명한다. 단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 발명의 범위가 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to the following examples and experimental examples. However, the following examples and experimental examples are intended to illustrate the contents of the present invention, but the scope of the invention is not limited by the examples and the experimental examples.

<식물 추출물의 제조><Production of Plant Extracts>

초피나무의 잎과 줄기, 측백나무의 수피 및 줄기, 칡의 수피, 해당화 줄기, 피마자 줄기 및 전초 각각 건조 (음지, 실온, 약 5일)한 후 분쇄하였다. 이들 30 ~ 40 g에 메탄올 200ml를 가하여, 메탄올 추출 (HPLC Methanol, 50 ℃, 1500psi, 20분, DIONEX Corporation, ASE300 ACCELERATED SOLVENT EXTRACOR)하고 시료 tube에 용액을 분주하여 Biotron corporation, Modul spin 40으로 농축(45℃, 감압, 24시간)한 후 추출된 시료를 저온 보관하였다.
The leaves and stems of the bark tree, the bark and stems of the cypress tree, the bark of the larvae, the stem of persimmon, the castor stem, and the outpost, respectively, were dried (shape, room temperature, about 5 days) and then ground. 200 ml of methanol was added to these 30-40 g, methanol extracted (HPLC Methanol, 50 ° C, 1500psi, 20 minutes, DIONEX Corporation, ASE300 ACCELERATED SOLVENT EXTRACOR), and the solution was dispensed into a sample tube and concentrated to Biotron corporation, Modul spin 40 ( 45 ℃, reduced pressure, 24 hours) and then extracted samples were stored at a low temperature.

한편, 건지황, 괴화, 지모, 편축 및 해금사는 전초를 이를 각각 건조(음지, 실온, 약 5일)한 후 분쇄하였다. 이들 분쇄시료 0.1kg에 물 2L를 가하여, 약탕기(대웅약탕기)를 사용하여 2.5 시간 동안 열수 추출한 후 여과 및 12시간 동안 동결 건조하였다(Biotron corporation, Vaccum free dryer cleanvac 8).
On the other hand, Guanjihwang, lumps, jimo, uniaxial and Haegeumsa dried outposts (grain, room temperature, about 5 days), and then crushed. 2 L of water was added to 0.1 kg of these milled samples, followed by hot water extraction using a yaktanggi (Daewoong yaktanggi) for 2.5 hours, filtered and freeze-dried for 12 hours (Biotron corporation, Vaccum free dryer cleanvac 8).

<실시예 1 내지 7의 제조>Preparation of Examples 1 to 7

하기 표 1의 성분을 갖는 화장료 베이스를 제조하였다. 그리고, 하기 표 2의 성분을 표 1의 정제수 100 중량부에 대하여 1.0 중량부 혼합하여, 화장료 조성물 시료를 제조하였다(실시예 1 내지 7). 예컨대, 실시예 1은 표 1의 화장료 베이스에, 피마자 전초 추출물 1.0 중량부를 첨가한 것이고, 실시예 2는 표 1의 화장료 베이스에 괴화 추출물 1.0 중량부를 첨가한 것이다. 또한 실시예 3은 표 1의 화장료 베이스에 피마자 추출물 및 괴화 추출물을 동량으로 합쳐서 총 1.0 중량부 첨가한 것이다. 이때, 상기 식물 추출물들은 상기 <식물 추출물의 제조>에서 제조한 추출물들로 사용하였다.
To prepare a cosmetic base having the ingredients of Table 1 below. And 1.0 weight part of components of Table 2 were mixed with respect to 100 weight part of purified water of Table 1, and the cosmetic composition sample was produced (Examples 1-7). For example, Example 1 adds 1.0 part by weight of castor starch extract to the cosmetic base of Table 1, and Example 2 adds 1.0 part by weight of lump extract to the cosmetic base of Table 1. In addition, Example 3 is a total of 1.0 parts by weight of the castor extract and lump extract in the same amount to the cosmetic base of Table 1 added. At this time, the plant extracts were used as extracts prepared in the <preparation of plant extracts>.

Figure 112011043968253-pat00002
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Figure 112011043968253-pat00003
Figure 112011043968253-pat00003

<실험예 1> 지방세포 저해능 측정Experimental Example 1 Measurement of Adipocyte Inhibitory Activity

인간 전구지방세포주인 3T3-L1 세포 (한국세포주은행)는 10% 우태아혈청(fetal bovine serum, FBS), 스트렙토마이신이 함유된 DMEM (Dulbeco’s Modified Eagle’s Medium) 배양액을 사용하여 37℃, 5% CO2가 유지되는 배양기에서 배양하였다. 세포가 confluent 상태가 되면 트립신-EDTA로 처하여 계대배양하였다. 세포의 분화를 유도하기 위하여 세포밀도가 3.3 x 103 cell/㎠ 가 되도록 현탁액 용액을 만들어 12 웰 플레이트에 분주하여 2차 배양하였다. 세포가 confluent해지면 5 ug/ml 인슐린, 0.25 Μm 덱사메타존(dexamethazone), 0.5 mM IBMX (isobutylmethylxanthine)가 함유된 10% FBS-DMEM 배양액으로 교환하여 분화를 유도하였다. 분화배지 처리 후 약 10일이 지나면 90% 이상이 지방세포로 분화된다.
Human precursor fat cell line 3T3-L1 cells (Korea Cell Line Bank) were treated with DMEM (Dulbeco's Modified Eagle's Medium) containing 10% fetal bovine serum (FBS) and streptomycin at 37 ° C and 5% CO. The cells were cultured in an incubator maintained at 2 . When cells became confluent, they were subcultured with trypsin-EDTA. In order to induce differentiation of the cells, a suspension solution was prepared so as to have a cell density of 3.3 × 10 3 cells / cm 2, and the cells were second cultured by dispensing into 12 well plates. When cells became confluent, differentiation was induced by exchanging with 10% FBS-DMEM medium containing 5 ug / ml insulin, 0.25 Μm dexamethasone zone, and 0.5 mM IBMX (isobutylmethylxanthine). About 10 days after the differentiation medium treatment, more than 90% of the cells differentiate into adipocytes.

분화된 지방세포를 1x106 cells/well로 60mm dish에 24시간 배양시킨 후 HBSS(Hanks’ balanced salt solution)로 한차례 세척하고 FBS를 넣지 않은 배지로 교환한 후, 루틴(Rutin), 퀘르세틴(Quercetin), 이소쿼시트린(Isoquercitrin), 이소함네틴(Isohamnetin)을 각각 50 uM 씩 첨가하여 24시간 반응시켰다. 24시간 반응 후 배지를 걷어내고 PBS로 두 차례 세척한 뒤 미리 차갑게 만들어 둔 10% 포름알데히드가 함유된 PBS 1ml을 넣고 1시간 동안 고정시킨 후 PBS를 이용하여 세 차례 세척하였다. 0.7% Oil red O 용액 (Muto Chemical, Tokyo. Japan)을 넣고 2 시간동안 반응시칸 후 세포를 관찰하였으며 이 때 붉은색으로 염색된 것이 지방세포이다.
Differentiated adipocytes were incubated in 60 mm dish for 24 hours at 1x10 6 cells / well, washed once with HBSS (Hanks' balanced salt solution), exchanged with medium without FBS, Rutin, Quercetin , Isoquercitrin and Isohamnetin were each added 50 uM and reacted for 24 hours. After the reaction for 24 hours, the medium was removed, washed twice with PBS, and then, 1 ml of PBS containing 10% formaldehyde, which had been made cold, was fixed for 1 hour, and washed three times with PBS. After adding 0.7% Oil red O solution (Muto Chemical, Tokyo. Japan) and reacting for 2 hours, the cells were observed. At this time, the cells were stained red.

그 결과, 이소쿼시트린을 첨가한 군이 가장 지방이 감소된 것을 확인할 수 있었다(도 1).
As a result, it was confirmed that the fat was reduced the group to which isoquacitrine was added (FIG. 1).

<실험예 2> 플라보노이드의 Wnt/β-catenin 신호전달 촉진능
Experimental Example 2 Flavonoids Promote Wnt / β-catenin Signaling

HEK 293-TOP cells (3 x 104)을 96-well plate에 seeding하고 10% FBS를 포함하는 DMEM에서 하루동안 배양하였다. 세포에 시료로, 하이페로사이드(Hyperoside), 루틴(Rutin), 퀘르세틴(Quercetin), 이소쿼시트린(Isoquercitrin), 이소함네틴(Isorhamnetin), 하이페린(Hyperin), 쿼시트린 하이드레이트(Quercitrin Hydrate), 다이제인(Daidzein), 제니스타인(Genistein), 타닌산(tannic acid)를 각각 10 μM 및 50 μM 씩 처리하고, 24 시간 동안 배양한 후, total cell lysate를 well 당 25 μL 1Ⅹ reporter lysis buffer (Promega, Madison, WI)를 넣어 lysis하여 수득하였다. 대조군으로는 시료 미처리군을 사용하였다. Reporter activity는 well 당 25 μL의 luciferin(USB, Cleveland, OH)을 넣어 Microplate Luminometer (BMG Labtech, Offenburg, Germany)를 이용하여 측정하였다.
HEK 293-TOP cells (3 × 10 4) were seeded in 96-well plates and incubated in DMEM containing 10% FBS for one day. As a sample to cells, Hyroside, Rutin, Quercetin, Isoquercitrin, Isorhamnetin, Hyperin, Quercitrin Hydrate, 10 μM and 50 μM of Daidzein, Genistein, and tannic acid, respectively, were incubated for 24 hours, and then total cell lysate was 25 μL 1Ⅹ reporter lysis buffer per well (Promega, Madison, WI) was obtained by lysis. A sample untreated group was used as a control. Reporter activity was measured using a microplate luminometer (BMG Labtech, Offenburg, Germany) with 25 μL of luciferin (USB, Cleveland, OH) per well.

그 결과, Wnt/b-catenin pathway의 activator인 1mM VPA가 reporter activity를 크게 올렸고, 다이제인, 제니스타인 및 이소쿼시트린이 효과가 좋았으며, 특히 이소쿼시트린이 가장 높은 효과를 나타냈다(도 2).
As a result, 1mM VPA, an activator of the Wnt / b-catenin pathway, greatly increased the reporter activity, and didzeyne, Zenithine and isoquacitrine were effective, and isoquacitrine showed the highest effect (FIG. 2). .

<실험예 3> 플라보노이드의 Wnt/β-catenin 신호전달 촉진능Experimental Example 3 Flavonoids Promote Wnt / β-catenin Signaling

3T3-L1 세포를 4% PFA로 RT에서 15분 동안 고정시켰다. Permeabilization을 위해 세포에 0.1% Triton X-100을 RT에서 15분 동안 처리했다. 세포를 5% BSA, 1% NGS로 RT에서 30분 동안 blocking하고, mouse anti-β-catenin antibody (BD transduction laboratory, 1:100) 4 ℃에서 overnight으로 incubation하였다. Cell을 PBS로 washing한 후, Alexa 488-conjugated anti-mouse antibody로 RT에서 1시간 동안 double staining하였다. DAPI로 counterstaining하고 mounting 후 confocal microscope(LSM510 META)로 signal을 detection하였다. 세포에 VPA(Valproic acid), 루틴(Rutin), 퀘르세틴(Quercetin), 이소쿼시트린(Isoquercitrin) 및 이소함네틴(Isohamnetin)을 각각 50 μM씩 처리한 후 48시간 뒤에 β-catenin level을 immunocytochemistry를 통해 확인하였다. 한편, 대조군, 즉 양성 대조군으로는 Wnt/β-catenin pathway의 activator로 잘 알려 있는 LiCl 처리군을 사용하였다.
3T3-L1 cells were fixed for 15 minutes at RT with 4% PFA. Cells were treated with 0.1% Triton X-100 for 15 minutes at RT for permeabilization. Cells were blocked with 5% BSA, 1% NGS for 30 min at RT, and incubated overnight at 4 ° C. with mouse anti-β-catenin antibody (BD transduction laboratory, 1: 100). The cells were washed with PBS and then double stained with Alexa 488-conjugated anti-mouse antibody for 1 hour at RT. After counterstaining with DAPI and mounting, signals were detected with a confocal microscope (LSM510 META). Cells were treated with 50 μM of VPA (Valproic acid), Rutin, Quercetin, Isoquercitrin, and Isohamnetin, respectively, and 48 hours later, β-catenin level was measured through immunocytochemistry. Confirmed. On the other hand, a control group, that is, a positive control group was used LiCl treatment group well known as an activator of the Wnt / β-catenin pathway.

그 결과, 대조군에서, β-catenin level이 nucleus와 cytosol에서 많이 증가하였다. 또한 처리한 플로보노이드 중에서는 이소쿼시트린이 가장 β-catenin level이 높았다(도 3).
As a result, β-catenin level was increased in nucleus and cytosol. Also, among the treated flavonoids, isoquacitrine had the highest β-catenin level (FIG. 3).

<실험예 4> 추출물의 Wnt/β-catenin 신호전달 촉진능Experimental Example 4 Wnt / β-catenin Signaling Promoting Activity of the Extract

HEK 293-TOP cells (3 x 104)을 96-well plate에 seeding하고 10% FBS를 포함하는 DMEM에서 하루동안 배양하였다. 세포에 시료로, 상기 <추출물의 제조>에서 제조한 초피나무(잎, 줄기), 측백나무(수피), 측백나무(줄기), 칡(수피), 피마자(줄기), 피마자(전초), 해당화(줄기), 건지황, 괴화, 지모, 지모(초), 편축 및 해금사의 추출물들을 각 웰 당 1 μg/ml이 되도록 처리하고, 24 시간 동안 배양한 후, total cell lysate를 well 당 25 μL 1Ⅹ reporter lysis buffer (Promega, Madison, WI)를 넣어 lysis하여 수득하였다. 대조군으로는 시료 미처리군을 사용하였다. Reporter activity는 well 당 25 μL의 luciferin(USB, Cleveland, OH)을 넣어 Microplate Luminometer (BMG Labtech, Offenburg, Germany)를 이용하여 측정하였다.
HEK 293-TOP cells (3 × 10 4 ) were seeded in 96-well plates and incubated in DMEM containing 10% FBS for one day. As a sample to the cells, the bark (leaf, stem), cypress (bark), cypress (stem), 칡 (bark), castor (stem), castor (outpost), corresponding to the production of the extract (Stem), dried Guhwang, chrysanthemum, hairy, chymo (herb), shrunk and haegeum extracts were treated to 1 μg / ml per well, incubated for 24 hours, and then total cell lysate was 25 μL 1 당 reporter per well. It was obtained by lysis in lysis buffer (Promega, Madison, Wis.). A sample untreated group was used as a control. Reporter activity was measured using a microplate luminometer (BMG Labtech, Offenburg, Germany) with 25 μL of luciferin (USB, Cleveland, OH) per well.

그 결과, 초피나무(잎, 줄기), 측백나무(수피), 측백나무(줄기), 칡(수피), 피마자(줄기), 피마자(전초), 해당화(줄기), 건지황, 괴화, 지모, 지모(초), 편축 및 해금사 추출물들이 reporter activity이 상대적으로 50 % 이상 증가한 것으로 나타났다(실험샘플 형광발현수치 / 무처리 형광발현수치 × 100= 증가율(%))(표 3 및 도 4).
As a result, bark (leaf, stem), cypress (bark), cypress (stem), 줄 (bark), castor (stem), castor (outpost), persimmon (stem), dried yellow, lump, zyme, jimo (Sec), shrunk and haegeum extracts showed a relative increase in reporter activity by more than 50% (experimental sample fluorescence value / untreated fluorescence value × 100 = increase rate (%)) (Table 3 and Figure 4).

Figure 112011043968253-pat00004
Figure 112011043968253-pat00004

<실험예 5> 식물 추출물 중 이소쿼시트린의 함량 분석Experimental Example 5 Analysis of Isoquacitrine Content in Plant Extracts

Wnt/β-catenin 신호전달 촉진능이 높은 것으로 나타난 상기 13 종의 식물추출물에 대하여 정량용 이소쿼시트린 표준품(Sigma, 11793)을 가지고 각각 0.186ug/ml, 0.744ug/ml, 1.86ug/ml, 3.72ug/ml 및 9.30ug/ml의 메탄올 용액을 만들어 다음의 HPLC 조건에서 시험하여 검량선을 구하고 검량선으로부터 이소쿼시트린의 함량을 구하였다.
The above 13 plant extracts, which showed high Wnt / β-catenin signaling promoting ability, were 0.186ug / ml, 0.744ug / ml, 1.86ug / ml, 3.72 with quantitative isoquacitrin standard (Sigma, 11793), respectively. ug / ml and 9.30 ug / ml methanol solutions were prepared and tested under the following HPLC conditions to obtain a calibration curve and to determine the content of isoquacitrin from the calibration curve.

본 시험에서는 식물추출물의 특성상 다수의 미지 성분이 많이 검출되는 점을 고려하여 검액에서 검출된 이소쿼시트린 피크에 대해서는 3D 입체데이터로부터 해당 피크의 UV 스펙트럼을 추출하여 이소쿼시트린 표준품의 UV 스펙트럼과 함께 비교하여 검증하였다.
Considering the fact that many unknown components are detected due to the nature of plant extracts, this test extracts the UV spectrum of the peak from 3D stereoscopic data with the UV spectrum of the isoquacitrin standard. Verification was made by comparison.

HPLC 조건HPLC conditions

Detector : PDA Detector (λ 260nm)Detector: PDA Detector (λ 260nm)

Column : CAPCELL PAK, UG-120, 4.6*250mm, 5umColumn: CAPCELL PAK, UG-120, 4.6 * 250mm, 5um

Mobile phase A : 0.1% H3PO4 in H2O/Acetonitrile(85:15)Mobile phase A: 0.1% H 3 PO 4 in H 2 O / Acetonitrile (85:15)

B : 0.1% H3PO4 in AcetonitrileB: 0.1% H 3 PO 4 in Acetonitrile

Gradient : 0min 0%B → 35min 70%B, maintain 10min         Gradient: 0min 0% B → 35min 70% B, maintain 10min

Flow rate : 0.8ml/min
Flow rate: 0.8ml / min

그 결과, 피마자(전초)의 이소쿼시트린의 함량이 1.01 %로 가장 높았으며, 괴화(생약)의 이소쿼시트린 함량은 0.11 %로 나타났다.
As a result, the isoquacitrine content of castor (outpost) was the highest (1.01%), and the isoquacitrine content of the lumped (medicinal) was 0.11%.

<실험예 6> 인체피부 일차자극 첩포를 통한 피부 안전성 실험Experimental Example 6 Skin Safety Experiment through Primary Stimulation Patch of Human Skin

몇 가지 추출물의 고농도에 대한 피부자극성 평가는 피부 첩포시험 (Closed Patch-test)을 통하여 실시하였으며, 그 대상은 20 ~ 40대의 건강한 성인 20명을 대상으로 하였으며 시험 방법은 다음과 같다.
Skin irritation evaluation of high concentrations of several extracts was carried out through a closed patch-test. The subjects of this study were 20 healthy adults in their 20s to 40s.

표 1의 화장료 베이스에 상기 <식물 추출물의 제조>에서 제조한 추출물들(샘플)을 하기 표 4에 따라 첨가하여 시료를 제조하였다. 이때, 표 5의 샘플을 표 1의 정제수 100 중량부에 대하여 각각 1.0 중량부씩 첨가하였다. 한편, 대조군으로 사용한 식염수는 NaCl을 0.9 % 포함하였다.
Samples were prepared by adding extracts (samples) prepared in the <Preparation of Plant Extracts> to the cosmetic base of Table 1 according to Table 4 below. At this time, 1.0 parts by weight of the sample of Table 5 was added to 100 parts by weight of purified water of Table 1, respectively. Meanwhile, the saline solution used as a control contained 0.9% of NaCl.

각각의 시료를 25 μL씩 취하여 IQ 체임버에 담아 등에 부착시키고 24 시간 경과 후 제거한 다음, 30분 경과 후, 그리고 48시간 후에 피부의 부작용, 가려움과 홍반, 부종 등을 수치화하여 평균 자극성 판정 범위를 하기 <식 1>에 의거 계산하였다. 판정자는 해당 실험 10년 이상인 전문 연구원이 실시하였다.
Take 25 μL of each sample, place it in an IQ chamber, attach it to the back, remove it after 24 hours, and after 30 minutes and 48 hours, quantify the side effects, itching and erythema, edema, etc. It calculated based on <Equation 1>. The judges were conducted by a professional researcher who was more than 10 years of the experiment.

<식 1><Formula 1>

평균 자극성 판정 범위={Σ(평가기준수치 × 해당평가수치의 인원수)/(총 피험자 수 × 최고평가기준수치)} ×100
Average stimulus judgment range = {Σ (evaluation standard number X number of people of corresponding evaluation value) / (total number of subjects X highest evaluation standard value)} × 100

평가기준수치Evaluation Criteria

+++ 2+++ 2

++ 1.5++ 1.5

+ 1.0+ 1.0

+- 0.5+-0.5

- 0
- 0

피부자극 판정 범위Skin irritation judgment range

1 최소자극(10 이하)1 Minimum stimulation (10 or less)

2 온화한 자극(10 초과-20 미만)2 mild irritation (greater than 10-less than -20)

3 보통 자극(20 초과-30 미만)3 Moderate stimulation (greater than 20-less than -30)

4 심한 자극(30 이상)
4 severe irritation (over 30)

그 결과, 1 중량부 함량에서 서로 비슷한 자극을 나타냈으며 식염수와 유의한 결과가 아닌 피부 일차 자극 반응이 나타나 피부 외용제로서 안전한 물질임이 확인되었다(표 4).
As a result, they showed similar stimuli at 1 parts by weight, and showed a primary skin irritation response, which was not a significant result with saline, indicating that it was a safe substance for external application of skin (Table 4).

Figure 112011043968253-pat00005
Figure 112011043968253-pat00005

<실험예 7> 셀룰라이트 개선능 및 바디 슬리밍 효과Experimental Example 7 Cellulite Improvement and Body Slimming Effect

BMI(Body Mass Index)가 23~25인 20~30대 성인 여성 중 다른 대사성 이상이 발견되지 않은 여성 40명 (각 군당 20명)을 대상으로 8주 동안 매일 아침과 저녁 하루 2회 허벅지 부위에 상기 <실시예 1 내지 7의 제조>에서 제조한 실시예 1 내지 7의 시료를 사용하게 한 후 8주 동안 사용 전, 사용 후 피하지방 두께를 측정하여 비교함으로써 슬리밍 효과여부를 판단하였다. 이때, 대조군으로는 표 1의 화장료 베이스만을 사용한 군을 설정하였으며, 본 실험에 참여한 피험자는 시험기간 동안 규칙적인 생활과 일정한 식생활을 유지하도록 관리되었다. 측정 방법은 자 (ruler)를 이용하여 줄어든 길이 (ΔL = L12 - L0)를 측정하였으며, 결과는 student's t-test를 이용하여 나타내었다.
Forty women in their twenties and thirties with a BMI (Body Mass Index) of 23 to 25 who had no other metabolic abnormalities detected (20 in each group) were applied to the thigh area twice daily, morning and evening, for eight weeks. After using the samples of Examples 1 to 7 prepared in <Preparation of Examples 1 to 7> before and after use for 8 weeks, by measuring the subcutaneous fat thickness after use to determine the slimming effect. At this time, the control group was set to the group using only the cosmetic base of Table 1, subjects were administered to maintain a regular life and a regular diet during the test period. As a measuring method, a reduced length (ΔL = L 12 -L 0 ) was measured using a ruler, and the result was expressed using a student's t-test.

그 결과, 실시예 1, 실시예 2, 실시예 3 및 실시예 7의 슬리밍 효과가 좋았으며, 특히 실시예 7의 효과가 좋았다. 반면, 다른 실험군 및 대조군에서는 허벅지 둘레의 유의한 변화가 관찰되지 않았다(표 5).
As a result, the slimming effect of Example 1, Example 2, Example 3, and Example 7 was favorable, and the effect of Example 7 was especially favorable. In contrast, no significant changes in thigh circumference were observed in other experimental and control groups (Table 5).

Figure 112011043968253-pat00006
Figure 112011043968253-pat00006

한편, 실시예 1 내지 7 및 대조군 처리시, 셀룰라이트에 미치는 영향을 알아보기 위해서 초음파를 이용하여 피하 지방층의 두께 (단위: mm)를 Dermascan-C를 이용해 측정하였고, 얻어진 수치는 student's t-test를 통하여 사용 전후를 비교하여 통계적 유의성을 분석하였다.
Meanwhile, in Examples 1 to 7 and the control treatment, the thickness of the subcutaneous fat layer (in mm) was measured using Dermascan-C using ultrasound to determine the effect on cellulite, and the obtained value was student's t-test. Statistical significance was analyzed by comparing before and after use.

그 결과, 실시예 1 및 실시예 2를 사용 시 제일 효과적으로 셀룰라이트를 완화할 수 있었으며, 실시예 7도 유의한 효과를 보였다.As a result, cellulite was most effectively alleviated when using Examples 1 and 2, and Example 7 also showed a significant effect.

Claims (10)

피마자 추출물을 유효성분으로 포함하며, 셀룰라이트 예방 및 개선 효과가 있는 화장료 조성물.
Cosmetic composition comprising castor extract as an active ingredient, cellulite prevention and improvement effect.
제 1항에 있어서,
괴화 추출물, 초피나무 추출물, 측백나무 추출물, 칡 추출물, 해당화 추출물, 건지황 추출물, 지모 추출물, 편축 추출물 및 해금사 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
The method of claim 1,
Cosmetic composition, characterized in that it further comprises one or more selected from the group consisting of lump extract, chopsticks extract, cypress extract, 칡 extract, glycolysis extract, dried Guangjihwang extract, jimo extract, uniaxial extract and haegeum extract.
제 1항에 있어서,
괴화 추출물, 초피나무 추출물, 측백나무 추출물, 칡 추출물, 해당화 추출물, 건지황 추출물, 지모 추출물, 편축 추출물 및 해금사 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 셋 이상을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
The method of claim 1,
Cosmetic composition, characterized in that it further comprises at least three selected from the group consisting of lump extract, bark tree extract, cypress extract, 칡 extract, glycolysis extract, geonjihwang extract, jimo extract, uniaxial extract and haegeum extract.
제 1항에 있어서,
상기 피마자 추출물은 이소쿼시트린을 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
The method of claim 1,
The castor extract is a cosmetic composition, characterized in that it comprises isoquacitrin.
제 1항에 있어서,
국소적으로 도포하는 피부 슬리밍용 화장료 조성물인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
The method of claim 1,
A cosmetic composition, which is a cosmetic composition for skin slimming to be applied topically.
제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 추출물들은 열수 추출 또는 탄소수 3 이하의 저가 알코올로 추출한 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
4. The method according to any one of claims 1 to 3,
The extract is a cosmetic composition, characterized in that extracted with hot water extraction or lower alcohol of 3 or less carbon atoms.
제 1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은 유효성분의 피부 흡수율이 0.01 μg/cm2 내지 500 μg/cm2인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
The method of claim 1,
The cosmetic composition is a cosmetic composition, characterized in that the skin absorption of the active ingredient is 0.01 μg / cm 2 to 500 μg / cm 2 .
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