KR101349746B1

KR101349746B1 - 용안육 추출물을 포함하는 백반증 치료 또는 예방용 조성물

Info

Publication number: KR101349746B1
Application number: KR1020110047922A
Authority: KR
Inventors: 김은기; 신정현; 박상주
Original assignee: 인하대학교 산학협력단
Priority date: 2011-05-20
Filing date: 2011-05-20
Publication date: 2014-01-16
Also published as: KR20120129576A

Abstract

본 발명은 용안육(Longanae Arillus) 추출물을 포함하는 백반증 치료 또는 예방용 조성물에 관한 것으로서, 구체적으로 본 발명의 용안육 추출물은 비활성 멜라노블라스트(melanoblast)에서 티로시나아제(tyrosinase) 활성화 및 멜라닌 생성의 유도, 및 표피 조직으로의 세포이동을 촉진시킴으로써 탈색 부위의 색소 재침착을 유도하는 백반증 치료 또는 예방용 약학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은 세포 독성이 없을 뿐만 아니라 멜라노블라스트의 분화 및 이동을 촉진하므로 백반증의 치료 또는 예방에 유용하게 사용할 수 있다.

Description

용안육 추출물을 포함하는 백반증 치료 또는 예방용 조성물{Composition comprising extracts of Longanae Arillus for prevention and treatment of vitiligo}

본 발명은 식물 추출물을 유효 성분으로 함유하는 백반증(vitiligo) 치료 또는 예방용 약학적 조성물에 관한 것이다.

백반증은 멜라닌세포 (melanocytes)의 소실에 의해 피부에 다양한 크기와 모양이 탈색반점이 나타나는 후천성 탈색소 질환이다. 백반증은 세계인구의 0.1% - 0.2%로 다양하게 발생하고 환자에게는 미용학적으로 문제가 될 수 있으며, 대인 관계에 있어서 어려움을 유발하는 등 정식적으로 심각한 문제를 야기시킬 수 있다. 조직학적으로 백반증의 탈색된 부위에는 표피의 멜라닌세포의 손실이 나타나고 그 원인은 아직 확실히 알려지지 않았으나, 자가면역적, 신경학적, 자가파괴, 스트레스, 바이러스 가설 등이 논의되고 있다.

백반증 치료에는 여러 가지 방법이 사용되고 있다. 탈색 부위를 지닌 백반증 환자는 종종 8-methoxypsoralen (8-MOP)와 ultraviolet (UV) A radiation (PUVA therapy)로 성공적으로 치료가 된다. 이 치료법은 모낭이 집중된 부위에서 색소 재침착이 잘 일어나고 색소 재침착은 천천히 일어난다. 모낭이 집중된 부위의 색소 재침착 패턴을 보면 모낭 말단의 멜라닌세포 전구체인 멜라노블라스트(멜라닌아세포, melanoblast)의 존재가 존재한다. 백반증 환자는 표피의 멜라닌세포의 활성은 잃었지만 모낭의 외부 모근초의 멜라노블라스트 세포는 영향을 받지 않는다. 이와 같이 비활성 멜라닌세포의 존재는 백반증 환자의 색소 재침착을 유도하는 가능성으로서 제시되고 있다. 효과적인 치료제는 비활성 멜라노블라스트를 표피 가까이에 존재하는 외부 모근초의 표면에 따라 분화, 증식 그리고 이동을 촉진시키는 물질로 제시되고 있다. 멜라노블라스트는 비탈색 세포로 멜라닌세포의 선구물질로 정의된다. 멜라노블라스트는 티로시나아제가 결핍되었고 DOPA 염색이 되지 않거나 멜라닌을 생성한다. 따라서 멜라노블라스트는 멜라닌세포로 분화하는데 천연물의 효과와 그 메커니즘의 특성을 이해하는데 이상적인 모델로서 제공된다.

용안육(Lonaganae Arillus) (도 1)은 무환자나무과(Sapindaceae)의 상록교목이고 열매의 용안의 과육을 말한다. 즉 과육같이 보이는 투명한 가종피(arillus)이며 마르면 검은 갈색인 용안육(Lonaganae Arillus)이다. 주로 중국, 동남아 지역에 분포, 자생한다.

본 발명자들은 모낭 말단의 비활성 멜라노블라스트를 백반증 환자의 색소 재침착을 유도하는데 이용할 수 있을 것이라는 점에 착안하여, 비활성 멜라노블라스트를 분화, 증식 및 이동을 촉진시키는 물질을 개발하여 백반증 치료를 위한 효과적인 치료제로 사용하고자 하였다. 이에, 본 발명자는 한국에서 자생인 식물자원중 400 여종에서 선별한 용안육의 추출물이 비활성 멜라노블라스트에서 티로시나아제 활성화, 멜라닌 생성의 유도, 및 표피 조직으로의 세포이동을 촉진시킴으로써 백반증 치료에 효과가 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 식물 추출물을 유효 성분으로 함유하는 백반증(vitiligo) 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 식물 추출물을 유효 성분으로 함유하는 백반증(vitiligo) 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 식물 추출물을 유효 성분으로 함유하는 백반증(vitiligo) 예방 또는 개선용 피부 외용제를 제공하는 것이다.

본 발명의 또다른 목적은 식물 추출물을 유효 성분으로 함유하는 백반증(vitiligo) 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 용안육(Longanae Arillus) 추출물을 유효성분으로 함유하는 백반증(vitiligo) 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 용안육(Longanae Arillus) 추출물을 유효성분으로 함유하는 백반증의 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 용안육(Longanae Arillus) 추출물을 유효성분으로 함유하는 백반증의 예방 또는 개선용 피부 외용제를 제공한다.

아울러, 본 발명은 용안육(Longanae Arillus) 추출물을 유효성분으로 함유하는 백반증의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본 발명의 용안육(Longanae Arillus) 추출물은 세포 독성이 없을 뿐만 아니라 멜라노블라스트(melanoblast)의 분화 및 이동을 촉진하므로 백반증(vitiligo)의 예방 또는 치료에 유용하게 사용할 수 있다.

도 1은 용안육(Longanae Arillus)의 모습을 나타내는 그림이다.
도 2는 용안육(Longanae Arillus) 추출물을 마우스 멜라노블라스트(melanoblast) 세포주 Melb-a에 처리하여 세포 생존에 미치는 영향(생존력, viability)을 나타낸 그림이다.
Neg Control ; 음성 대조군으로서 DMSO 처리,
α-MSH ; 양성 대조군으로서 α-MSH(alpha-melanocyte stimulating hormone) 처리,
L. Arillus ; 실험군으로서 용안육 처리.
도 3은 용안육 추출물에 의한 멜라노블라스트의 멜라닌 생성을 세포색으로 확인한 결과를 나타낸 그림이다.
도 4는 용안육 추출물에 의한 멜라노블라스트의 티로시나아제 활성화를 확인한 결과를 나타낸 그림이다.
도 5는 용안육 추출물이 멜라노블라스트 이동에 미치는 영향을 확인한 그림이다. A는 막을 통과한 멜라노블라스트를 현미경으로 관찰한 사진이다. B는 막을 통과한 멜라노블라스트의 숫자를 측정한 그래프이다.
Neg Control ; 음성 대조군으로서 DMSO 처리,
α-MSH ; 양성 대조군으로서 α-MSH(alpha-melanocyte stimulating hormone) 처리,
L. Arillus ; 실험군으로서 용안육 처리.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명은 용안육(Longanae Arillus) 추출물을 유효성분으로 함유하는 백반증(vitiligo) 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

상기 용안육 추출물은 하기의 단계들을 포함하는 제조방법에 의해 제조되는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.

1) 용안육에 추출용매를 가하여 추출하는 단계;

2) 단계 1)의 추출물을 식힌 후 여과하는 단계;

3) 단계 2)의 여과한 추출물을 감압농축하는 단계; 및

4) 단계 3)의 농축된 추출물을 건조 분말화하는 단계.

상기 방법에 있어서, 단계 1)의 용안육는 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다.

상기 조성물에 있어서 상기 추출물은 물, C₁ 내지 C₂의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출하는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 상기 C₁ 내지C₂의 저급 알코올은 메탄올 또는 에탄올인 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 방법에 있어서, 단계 3)의 감압농축은 진공감압 농축기 또는 진공회전 증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 단계 4)의 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.

상기 조성물에 있어서 상기 추출물은 멜라노블라스트의 분화를 유도하는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 조성물에 있어서 상기 추출물은 멜라노블라스트의 이동을 촉진하는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 구체적인 실시예에서 용안육 추출물을 melb-a에 처리하여 세포의 생존에 미치는 영향을 확인한 결과, 용안육 추출물은 세포 독성 없이 대조군에 대비하여 멜라노블라스트를 현저하게 증식시켰다(도 2).

또한 본 발명의 구체적인 실시예에서 용안육 추출물이 멜라노블라스트의 분화에 미치는 효과를 확인하였다. 용안육 추출물을 처리하지 않은 음성 대조군은 멜라노블라스트의 색이 하얀 상태이고 100%로 보여진다. 반면 α-MSH와 10 μM 용안육 (Longanae Arillus) 추출물에서는 각각 190 %와 165 %의 결과로 멜라닌을 유도한 결과로 보여진다(도 2). 그리고 세포 색 또한 멜라노블라스트 의 분화에 효과가 있음을 보여주고 있다(도 3). 또한 세포 내 티로시나아제 분석을 통하여 용안육 추출물이 티이로시나아제 유도에 미치는 영향을 보았다. 그 결과 a-MSH 와 용안육 (Longanae Arillus) 추출물을 처리했을 때 세포 내 티로시나아제를 유도시켰고 처리하지 않은 melb-a 세포에서는 티로시나아제 활성을 발견하지 못했다(도 4).

아울러 본 발명의 구체적인 실시예에서 용안육 (Longanae Arillus) 추출물의 멜라노블라스트의 이동에 미치는 효과를 보기 위해 트랜스웰 이동 분석(Transwell migration assay)를 수행하였다. 용안육(Longanae Arillus) 추출물을 처리한 필터 아래 면의 이동한 멜라노블라스트의 수가 음성 대조군에 비해 130 % 증가하였고, 양성 대조군인 α-MSH를 처리한 멜라노블라스트는 135% 증가하였다(도 5). 이 결과는 용안육 (Longanae Arillus) 추출물이 멜라노블라스트의 이동을 촉진시키는 것을 보여준다.

상기 용안육는 채취한 것, 양식한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있으며, 상기 용안육 추출물을 제조하는 방법은 초임계 추출, 아임계 추출, 고온 추출, 고압 추출 또는 초음파 추출법 등의 추출장치를 이용한 방법 등 당업계의 통상적인 추출방법을 사용할 수 있다. 가온하며 환류 추출 또는 상온에서 추출하는 것이 바람직하나 이에 한정하는 것은 아니다. 아울러 추출 회수는 1 내지 5회인 것이 바람직하며, 3회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.

또한, 상기 용안육 추출물은 바람직하게는 건조된 용안육을 물, C₁~C₄의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 추출물일 수 있으며, 보다 바람직하게는 C₁~C₄의 알코올로 추출한 추출물일 수 있고, 가장 바람직하게는 메탄올 또는 에탄올로 추출한 추출물일 수 있다. 일례로 용안육의 건조물을 적당한 크기로 분쇄하여 추출용기에 넣고 C₁~C₄의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 메탄올 또는 에탄올을 넣고 용액을 끓이며 환류 추출한 후, 일정시간 방치한 다음 거름종이 등으로 여과하여 알코올 추출물을 얻을 수 있다. 추출 시간은 2 내지 12시간인 것이 바람직하며, 3 내지 5시간인 것이 가장 바람직하다. 이후에 농축 또는 동결건조 등의 방법을 추가적으로 거칠 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 광산란제, 항산화제 및 자외선 차단제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 성분을 추가로 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물이 적용될 수 있는 개체는 척추동물이고 바람직하게는 포유동물이며, 그보다 바람직하게는 쥐, 토끼, 기니아피크, 햄스터, 개, 고양이와 같은 실험동물이고, 가장 바람직하게는 침팬지, 고릴라와 같은 유인원류 동물이다.

또한, 본 발명의 약학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으나 비경구 투여(예를 들어, 도포 또는 정맥 내, 피하, 복강 내 주사)가 바람직하며, 특히 도포가 더욱 바람직하다.

경구투여를 위한 고형제제에는 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 연질캅셀제, 환 등이 포함된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 에어로졸 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제로는 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 멸균된 수용액, 액제, 비수성용제, 현탁제, 에멀젼, 시럽, 좌제, 에어로졸 등의 외용제 및 멸균 주사제제의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 바람직하게는 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용 약학적 조성물을 제조하여 사용할 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다. 국소 투여의 조성물은 임상적 처방에 따라 무수형 또는 수성형일 수 있다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

상기 약학조성물은 투여를 위해서 상기 기재한 유효성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 제조할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형 등으로 제제화할 수 있다. 더 나아가 당분야의 적정한 방법으로 또는 Remington's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화 할 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 통상적으로 사용되는 부형제, 붕해제, 감미제, 활택제, 향미제 등을 추가로 포함할 수 있다. 상기 붕해제로는 전분글리콜산나트륨, 크로스포비돈, 크로스카멜로스나트륨, 알긴산, 카르복시메틸셀룰로오스 칼슘, 카르복시 메틸셀룰로오스 나트륨, 키토산, 구아검, 저치환도히드록시프로필셀룰로오스, 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 폴라크릴린 칼륨 등이 있다. 또한, 본 발명에 따른 약학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 첨가제를 더 포함할 수 있으며, 이때 약제학적으로 허용가능한 첨가제로는 전분, 젤라틴화 전분, 미결정셀룰로오스, 유당, 포비돈, 콜로이달실리콘디옥사이드, 인산수소칼슘, 락토스, 만니톨, 엿, 아라비아고무, 전호화전분, 옥수수전분, 분말셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 오파드라이, 전분글리콜산나트륨, 카르나우바 납, 합성규산알루미늄, 스테아린산, 스테아린산마그네슘, 스테아린산알루미늄, 스테아린산칼슘, 백당, 덱스트로스, 소르비톨, 탈크 등이 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 약제학적으로 허용가능한 첨가제는 상기 약학적 조성물에 대해 0.1~90 중량부 포함되는 것이 바람직하다.

본 발명의 약학적 조성물의 바람직한 투여량은 체내에서 활성성분의 흡수도, 불활성화율 및 배설속도, 환자의 연령, 성별 및 상태, 치료할 질병의 중증 정도에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 경구 투여제의 경우 일반적으로 성인에게 1일에 체중 1 kg당 본 발명의 약학적 조성물을 1일 0.0001 내지 100 ㎎/㎏으로, 바람직하게는 0.001 내지 100 ㎎/㎏으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 백반증 치료용 약학적 조성물은 상기 용안육 추출물에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.

본 발명은 용안육(Longanae Arillus) 추출물을 유효성분으로 함유하는 백반증의 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

상기 화장료 조성물은, 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.

또한, 상기 화장료 조성물은 본 발명의 용안육 추출물에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.

본 발명의 용안육 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 있어서, 통상적으로 함유되는 화장료 조성물에 본 발명의 추출물이 1 내지 15 중량%, 바람직하게는 2 내지 10 중량%의 양으로 첨가될 수 있다.

본 발명은 용안육(Longanae Arillus) 추출물을 유효성분으로 함유하는 백반증의 예방 또는 개선용 피부 외용제를 제공한다.

상기 피부 외용제에 있어서 상기 추출물은 멜라노블라스트의 분화를 유도하는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 피부 외용제에 있어서 상기 추출물은 멜라노블라스트의 이동을 촉진하는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

백반증을 효과적으로 치료하기 위해서는 적합한 외용제형을 선택하는 것이 중요하다. 백반증을 치료하기 위해 용안육 추출물을 적당히 희석하여 피부에 직접 도포할 수도 있으며, 본 발명의 백반증 치료용 약학적 조성물이 환부에 효과적으로 적용될 수 있도록 연고제로 제조할 수 있다. 상기 연고제는 본 발명의 백반증 치료용 약학적 조성물을 무기물질과 배합한 다음, 이를 지용성 기제로 코팅하여 제조한다. 상기 무기물질은 항균성, 소염효과, 표피재생 효과 등이 우수한 소재를 사용하는 것이 바람직하고, 이들의 구체적인 예로는 산화아연, 탄산아연, 산화철 등이 있다. 또한, 수용성 물질인 본 발명의 백반증 치료용 약학적 조성물을 안전하게 함침 할 수 있는 세라믹 담체를 추가로 사용하는 것이 바람직하다. 상기 세라믹 담체로는 제올라이트, 활석, 석고, 모려분 및 이들의 혼합물이 바람직하게 사용된다. 이러한 세라믹 담체는 수용성 성분의 함침성이 우수하여 피부에 수용성 성분의 공급을 원활히 할 수 있다.

본 발명은 용안육(Longanae Arillus) 추출물을 유효성분으로 함유하는 백반증의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.

상기 건강기능식품에 있어서 상기 추출물은 멜라노블라스트의 분화를 유도하는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 건강기능식품에 있어서 상기 추출물은 멜라노블라스트의 이동을 촉진하는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 건강기능식품은 용안육 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 용안육 추출물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.

본 발명의 건강 음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 설탕과 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 0.01 ~ 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ~ 0.03 g 이다.

상기 외에 본 발명의 용안육 추출물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 용안육 추출물은 천연 과일 주스, 과일 주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부당 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하 실시예를 통해 본 발명의 내용을 보다 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

용안육 ( Longanae Arillus ) 추출물의 제조

용안의 과육(Lonaganae Arillus)를 그늘에서 건조한 뒤, 적당한 크기로 세절하여 추출용기에 용안육 100 g과 물 600 ㎖을 가하여 환류 냉각 추출한 다음, 거름종이로 여과하여 추출물을 얻었다. 이후 용매를 감압 농축 및 건조하여 1.2 g의 추출물을 수득하였다.

용안육 ( Longanae Arillus ) 추출물이 멜라노블라스트의 생존력에 미치는 효과

<2-1> 멜라노블라스트 세포주 배양

Melb-a(멜라노블라스트)는 Functional Genomics Cell Bank (London, UK), Welcome Trust에서 구입하여 사용하였다. Melb-a는 37 ℃, 10 % CO² 항온기에서 배양하였으며, 1 % 페니실린(pecicilline; Invitrogen Corp (CA, USA))/스트렙토마이신(streptomycin; Invitrogen Corp (CA, USA))을 첨가한 RPMI 1640 배지에 성장 촉진을 위하여 20 nM PDBu(Phorbol12,13-dibutyrate; Sigma Chemical Co. (St Louis, USA)), 1 ng/㎖ bFGF (Murine FGF (Fibroblast growth factor)- basic; PeproTech), 5 % 우태아 혈청(Fetal bovine serum; Invitrogen Corp (CA, USA)), 및 2 nM L-글루타민을 첨가한 배지로 계대 배양하였다.

세포는 트립신/에틸렌디아민 테트라아세트산(trypsin-EDTA; Invitrogen Corp (CA, USA))를 처리한 후, 침전시키고 complete RPMI 1640 배지(Invitrogen Corp (CA, USA))를 첨가하여 세포를 현탁시킨다. 살아있는 세포의 수는 trypan blue exclusion 방법과 혈구계수기(hemocytometer)를 이용하여 측정하였고, 10 ㎝ 세포 배양 디쉬에 complete RPMI 1640 배지를 넣고 2 x 10⁴세포/디쉬의 농도로 접종하였다.

<2-2> 생존력 분석

Melb-a 세포 (4 x 10³세포/웰)을 96 웰 플레이트에 200 ㎕씩 넣은 후, 37 ℃, 10 % CO² 항온기에서 24 시간 전배양 시키고 부착된 세포에 시험 시료가 포함된 동일 양의 배양액을 첨가한 후, 배양 4 일 동안 이틀마다 교환하였다(총 시료를 두 번 처리). 96 시간 후, 배양된 세포에 5 ㎎/㎖ MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide); Sigma Chemical Co. (St Louis, USA)) 시약을 처리하여 형성된 포르마잔(formazan)을 DMSO로 녹인 후 ELISA 마이크로플레이트 리더 540 ㎚에서 ELISA 마이크로플레이트 리더로 측정하여 대조군과 비교하였다.

용안육 추출물을 melb-a에 처리하여 세포의 생존에 미치는 영향을 확인한 결과, 용안육 추출물은 세포 독성 없이 대조군에 대비하여 멜라노블라스트를 현저하게 증식시켰다(도 2).

용안육 추출물이 멜라노블라스트의 분화에 미치는 효과

<3-1> Cell Differentiation assay / melanin assay

멜라노블라스트는 티로시나아제 촉매 기능이 멈추어 있는 비색소 세포로, 멜라노블라스트를 분화를 멜라닌 함량을 이용하여 측정할 수 있다.

Melb-a 세포 (6 x 10⁴세포/㎖)을 12 웰 플레이트에 1 ㎖씩 넣은 후, 37 ℃, 10 % CO² 항온기에서 24 시간 전배양 시키고 배양액을 제거하여 DMSO로 녹인 10 μM N6를 RPMI 1640 배지에 처리를 하였다. 음성 대조군으로 DMSO를 처리하였고, 양성 대조군으로 α-MSH를 처리하였다. 배지는 4 일 동안 이틀마다 교환하였다(총 시료를 두 번 처리). 96 시간 후, 배양액을 제거하여 PBS(phosphate buffered saline; Invitrogen Corp (CA, USA)) 1 ㎖씩 첨가하여 2 번 세척을 한 후, trypsin-EDTA를 첨가하여 세포를 수거한다. 수거한 세포는 1.5 ㎖ 에펜도르프 튜브에 옮겨 닮아 원심분리를 이용하여 세포 펠렛을 얻어낸다. 이와 같이 수거한 각각의 세포에 10 % DMSO가 들어있는 1N NaOH 용액 100 ㎕씩 넣어주고 현탁시켜 80 ℃에서 1 시간 동안 반응시킨다. 반응하여 용해된 세포 내의 멜라닌은 플레이트 리더를 이용하여 405 ㎚ 파장에서 대조군과 비교하여 측정하였다.

샘플을 처리하지 않은 세포는 하얀 상태이고 100%로 보여진다. 반면 α-MSH와 10 μM 용안육 (Longanae Arillus) 추출물에서는 각각 190 %와 165 %의 결과로 멜라닌을 유도한 결과로 보여진다(도 2). 그리고 세포 색 또한 멜라노블라스트 의 분화에 효과가 있음을 보여주고 있다(도 3).

<3-2> 세포 내 티로시나아제 활성 분석( Cellular tyrosinase assay )

세포 내 티로시나아제 분석을 통하여 용안육 추출물이 티이로시나아제 유도에 미치는 영향을 보았다.

세포 내 티로시나아제 활성은 DOPA 산화 활성을 측정하여 분석되었다. Melb-a 세포는 2 × 10⁴세포／디쉬의 농도로 60 디쉬에 접종하였다. 24시간 전배양 시키고 부착된 세포에 시험 시료가 포함된 동일한 양의 배양액을 첨가한 후, 배양 4 일 동안 이틀마다 교환하였다(총 시료를 두 번 처리). 96 시간 후, 세포를 차가운 PBS로 세척한 후 스크래퍼를 사용하여 디쉬로부터 세포를 분리하여 1.5 ㎖ 에펜도르프 튜브에 옮겨 담아 원심분리를 통해 세포를 침전시킨 후, 상등액을 제거하였다. 침전된 세포에 용해 완충액(0.1 M phosphate buffer, pH 6.8, 1 %(w/v) Triton X-100) 100 ㎕를 첨가하여 4 ℃의 소니케이터에서 30 분 동안 반응시켰다. 13000 rpm에서 10 분간 원심분리를 실시하여 세포 파편 등을 제거하고, 시료 내의 단백질의 정량은 Bio-Rad 단백직 분석 키트를 사용하여 측정하였다. 추출한 단백질은 96 웰 플레이트에 넣고 PBS에 녹인 2.5 mM L-DOPA(3,4-dihydroxy-L-phenyl-alanine; Sigma Chemical Co. (St Louis, USA))를 첨가한 후, 37 ℃ 배양기에 1 시간 동안 반응시킨 후, 475 ㎚에서 ELISA 리더로 측정하여 대조군과 비교하였다.

그 결과 a-MSH 와 용안육 (Longanae Arillus) 추출물을 처리했을 때 세포 내 티로시나아제를 유도시켰고 처리하지 않은 melb-a 세포에서는 티로시나아제 활성을 발견하지 못했다(도 4).

용안육 추출물이 멜라노블라스트의 이동에 미치는 효과

용안육 (Longanae Arillus) 추출물의 멜라노블라스트의 이동에 미치는 효과를 보기 위해 트랜스웰 이동 분석(Transwell migration assay)를 수행하였다.

세포의 이동은 트랜스웰 세포 배양 챔버를 이용하여 측정되었다. 트랜스웰 세포 배양 챔버(Costar 3422)는 0.8 ㎛의 폴리비닐피롤리돈이 없는 폴리카보네이트 필터(polyvinylpyrroliodone-free polycarbonate filter)가 있고 filter에 1 % 젤라틴(gelatin)으로 코팅하였다. 코팅한 cell insert를 굳힌 후, 챔버의 아래에 혈청이 포함되지 않은 RPMI 배지 600 ㎕를 첨가하고 챔버 위에 melb-a 세포 (2 x 10⁶세포/㎖)를 100 ㎕ 접종하고 24 시간 동안 배양된다. 24 시간 후, 필터를 오려내어 메탄올로 고정시킨다. 그리고 헤마톡실린(hematoxylin)과 에오신(eosin)으로 염색한 후, 필터 위의 이동되지 않은 세포를 제거하기 위해 면봉으로 닦아낸다. 이동된 세포를 보기 위해 필터의 아래 부분을 현미경으로 보았으며, 세포의 수를 측정하기 위해 필터를 사등분하여 현미경으로 40 배 확대하여 보았고 그 평균값을 구하였다. 실험은 각각의 조건에서 3번 반복 수행하였다.

용안육(Longanae Arillus) 추출물을 처리한 필터 아래 면의 이동한 멜라노블라스트의 수가 음성 대조군에 비해 130 % 증가하였고, 양성 대조군인 α-MSH를 처리한 멜라노블라스트는 135% 증가하였다(도 5). 이 결과는 용안육 (Longanae Arillus) 추출물이 멜라노블라스트의 이동을 촉진시키는 것을 보여준다.

< 제조예 1> 약학적 제제의 제조

<1-1> 산제의 제조

용안육 추출물 2 g

유당 1 g

상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

<1-2> 정제의 제조

용안육 추출물 100 ㎎

옥수수전분 100 ㎎

유 당 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

<1-3> 캡슐제의 제조

용안육 추출물 100 ㎎

옥수수전분 100 ㎎

유 당 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

<1-4> 환의 제조

용안육 추출물 1 g

유당 1.5 g

글리세린 1 g

자일리톨 0.5 g

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1 환 당 4 g이 되도록 제조하였다.

<1-5> 과립의 제조

용안육 추출물 150 ㎎

대두 추출물 50 ㎎

포도당 200 ㎎

전분 600 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 30 % 에탄올 100 ㎎을 첨가하여 섭씨 60 ℃에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.

<제조예 2> 연고제제

<2-1> 지용성(W/O 제형) 연고

용안육 추출물 0.01-10.0%

스테아릴 알콜 7.0%

스테아린산 2.2%

스쿠알렌 3.4%

옥틸두오데칸올 5.0%

올리브유 6.0%

글리세린모노하우릴 지방산 에스텔 10.0%

이소프로필 아디페이트 2.0%

테고 0.3%

카복실비닐폴리머 3.0%

프로필렌 글리콜 5.0%

코직산 0.05%

알파-케토글루타민산 0.2%

시스테인 0.2%

파라벤류 0.3%

멸균 정제수 또는 0.02M 인산 또는 완충용액 잔량

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 지용성 연고를 제조하였다.

<2-2> 친수성(O/W형) 연고

용안육 추출물 0.01-10.0%

백색바세린 25.0%

스테아릴알콜 20.0%

프로필렌글리콜 12.0%

프로필렌미스스틴산 0.1%

소디움 글리세린 모노라우렐 0.2%

폴리옥시에틸렌경화피마자유 4.0%

베타인 함유 양이온성 유화제 0.2%

모노스테아린산글리세린에스텔 0.1%

파라옥시안식향산프로필 0.1%

정제수 잔량

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 친수성 연고를 제조하였다.

<2-3> 크림

용안육 추출물 0.01-10.0%

유동파라핀 6.0%

스쿠알란 4.0%

소르비탄세스퀴올레이트 0.5%

폴리솔베이트 60 1.5%

밀랍 10.0%

카프필릭/카프릭프리글리세라이드 5.0%

부틸렌글리콜 6.0%

프리에탄올아민 3.0%

방부제 2.0%

향료 미량

정제수 잔량

상기의 조성으로 용안육 추출물을 함유하는 크림을 통상의 방법에 따라 제조할 수 있었다.

< 제조예 3> 식품의 제조

본 발명의 용안육 추출물을 포함하는 식품들을 다음과 같이 제조하였다.

<3-1> 밀가루 식품의 제조

본 발명의 용안육 추출물 0.5~5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하였다.

<3-2> 스프 및 육즙( gravies )의 제조

본 발명의 용안육 추출물 0.1~5.0 중량부를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.

<3-3> 그라운드 비프(ground beef)의 제조

본 발명의 용안육 추출물 10 중량부를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.

<3-4> 유제품( dairy products )의 제조

본 발명의 용안육 추출물 5~10 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.

<3-5> 선식의 제조

현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.

검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.

본 발명의 용안육 추출물을 진공 농축기에서 감압농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.

상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 용안육 추출물을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.

곡물류(현미 30 중량부, 율무 15 중량부, 보리 20 중량부),

종실류(들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부, 검정깨 7 중량부),

용안육 추출물(3 중량부),

영지(0.5 중량부),

지황(0.5 중량부)

< 제조예 4> 음료의 제조

<4-1> 건강음료의 제조

액상과당(0.5 %), 올리고당(2 %), 설탕(2 %), 식염(0.5 %), 물(75 %)과 같은 부재료와 본 발명의 용안육 추출물 5 g을 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 제조하였다.

<4-2> 야채 주스의 제조

본 발명의 용안육 추출물 5 g을 토마토 또는 당근 주스 1,000 에 가하여 야채 주스를 제조하였다.

<4-3> 과일 주스의 제조

본 발명의 용안육 추출물 1 g을 사과 또는 포도 주스 1,000 에 가하여 과일 주스를 제조하였다.

Claims

용안육(Longanae Arillus)의 물 추출물을 유효성분으로 함유하는 백반증(vitiligo) 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
삭제
삭제
제 1항에 있어서, 상기 추출물은 멜라노블라스트(melanoblast)의 분화를 유도하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 추출물은 멜라노블라스트의 이동을 촉진하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
용안육(Longanae Arillus)의 물 추출물을 유효성분으로 함유하는 백반증의 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
용안육(Longanae Arillus)의 물 추출물을 유효성분으로 함유하는 백반증의 예방 또는 개선용 피부 외용제.
용안육(Longanae Arillus)의 물 추출물을 유효성분으로 함유하는 백반증의 예방 또는 개선용 건강기능식품.