KR101270183B1 - 비페닐 화합물의 결정형 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르 및 이들의 약제학적으로 허용 가능한 용매화물의 결정형을 제공한다. 상기 결정형은 유리염기, 또는 디포스페이트, 모노설페이트, 또는 디옥살레이트 염과 같은 염일 수 있다. 본 발명은 또한 이러한 결정형 화합물을 포함하는 또는 이러한 결정형 화합물을 이용하여 제조된 약제학적 조성물; 상기 결정형 화합물을 제조하는 방법 및 중간체; 그리고 폐질환을 치료하기 위해 이러한 화합물을 이용하는 방법을 제공한다.

Description

비페닐 화합물의 결정형{Crystalline forms of a biphenyl compound}
본 발명은 폐 질환을 치료하는데 유용한 것으로 기대되는 비페닐 화합물 및 그 용매화물의 신규 결정형에 관한 것이다. 본 발명은 또한 결정형 화합물을 포함하거나 그러한 화합물로부터 제조되는 약제학적 조성물, 그러한 결정형 화합물을 제조하는 방법 및 중간체, 그리고 폐 질환을 치료하기 위해 그러한 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다.
Mammen 등에게 통상적으로 양도된 미국특허공개 2005/0203133은 만성폐쇄성폐질환(COPD)과 같은 폐 질환을 치료하는데 유용한 것으로 기대되는 신규한 비페닐 화합물을 개시하고 있다. 특히, 화합물 비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르는 무스카린 수용체 길항제 또는 항콜린 작용을 갖는 것으로 이 출원에 구체적으로 기재되어 있다.
상기 비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르는 하기 화학식 I와 같다:
Figure 112007072428712-pct00001
화학식 I의 화합물은 상업적으로 시판되는 AutoNom 소프트웨어(MDL, San Leandro, California)를 이용하여 명명되었다.
폐 또는 호흡기 질환을 치료하는데 유용한 치료제는 흡입에 의해 호흡기로 직접적으로 유익하게 투여된다. 이와 관련하여, 여러 유형의 약물의 흡입 장치가 흡입에 의해 치료제를 투여하기 위해 개발되었으며, 이러한 흡입 장치로는 건조분말 흡입기(DPI), 정량 흡입기(MDI), 및 네불라이저 흡입기가 있다. 그러한 장치에 사용하기 위해 약제학적 조성물 및 제제를 제조할 경우, 흡습성 및 조해성 모두를 나타내지 않고 상대적으로 높은 융점(전형적으로 150℃ 보다 큰 융점)을 가져 물질이 유의적인 분해 없이 미분화될 수 있는 치료제의 결정형을 갖도록 하는 것이 매우 바람직하다.
화학식 I의 화합물은 어떠한 결정형도 이전에 보고된 바 없다. 따라서, 허용 가능한 수준의 흡습성 및 상대적으로 높은 융점을 갖는 화학식 I의 화합물의 안정하며 비조해성인 결정형이 필요하다.
발명의 요약
본 발명은 비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르(화학식 I)의 결정형을 제공한다. 상기 결정형은 유리 염기, 디포스페이트, 모노설페이트, 또는 디옥살레이트 염과 같은 약제학적으로 허용 가능한 염, 또는 그러한 염의 약제학적으로 허용 가능한 용매화물일 수 있다.
놀랍게도, 본 발명의 결정형은 대기의 수분에 노출되는 경우 조차도 조해성이 아닌 것으로 밝혀졌다. 또한, 본 발명의 결정형은 허용 가능한 수준의 흡습성 및 약 70℃가 넘는 허용 가능한 융점을 갖는다. 예를 들어, 디포스페이트염은 약 150℃ 융점을 갖는다.
다른 용도 중에서도, 화학식 I의 화합물의 결정형은 폐 질환을 치료하는데 유용성을 갖는 것으로 기대되는 약제학적 조성물을 제조하는데 유용하다. 따라서, 본 발명의 일 측면은 치료학적으로 유효한 양의 화학식 I의 화합물의 결정형 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 측면은 화학식 I의 화합물의 결정형을 하나 이상의 다른 치료제와 함께 포함하는 조성물에 관한 것이다. 따라서, 일 측면에서 본 발명은 (a) 치료학적으로 유효한 양의 화학식 I의 화합물의 결정형 및 약제학적으로 허용 가능한 담체; 및 (b) 코르티코스테로이드 같은 스테로이드성 항염증제; β2 아드레날린 수용체 작용제; 포스포디에스터라제-4 억제제; 또는 이들의 조합으로부터 선택된 치료학적으로 유효한 양의 약물을 포함하는 조성물에 관한 것이며, 상기 결정형 및 상기 약물은 함께 또는 분리되어 제제화된다. 상기 약물이 분리되어 제제화될 경우, 약제학적으로 허용 가능한 담체가 포함될 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면은 화학식 I의 화합물의 결정형을 포함하는 등장성 식염 수용액을 포함하고, 상기 용액은 약 4 내지 6 범위의 pH를 갖는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 특정 구현예에서, 수성 네불라이저 제제는 시트레이트 완충제로 약 pH 5로 완충화된다. 또 다른 특정 구현예에서, 수성 네불라이저 제제는 비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르를 유리 염기의 등가로 약 0.5 mg/mL 함유한다.
일 구현예에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물의 결정형 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 함유하는 건조 분말 흡입기를 포함하는 약물 전달 장치를 제공한다.
화학식 I의 화합물은 무스카린 수용체 길항제 활성을 갖는다. 따라서, 화학식 I의 화합물의 결정형은 천식 및 만성 폐쇄성 폐질환과 같은 폐질환을 치료하는데 유용하다. 따라서, 본 발명의 또 다른 측면은 환자에게 치료학적으로 유효한 양의 화학식 I의 화합물의 결정형을 투여하는 것을 포함하는 폐질환을 치료하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 또 다른 측면은 환자에게 기관지 확장을 생성하는 양의 화학식 I의 화합물의 결정형을 투여하는 것을 포함하는 환자에게 기관지 확장을 생성시키는 방법에 관한 것이다. 일 구현예에서, 상기 화합물은 흡입 투여한다. 본 발명은 또한 치료학적으로 유효한 양이 화학식 I의 화합물의 결정형을 환자에게 투여하는 것을 포함하는 만성 폐쇄성 폐질환 또는 천식을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명의 또 다른 측면은 치료학적으로 유효한 양의 화학식 I의 화합물의 결정형을 포유류에게 투여하는 것을 포함하는 포유류의 무스카린 수용체를 길항하는 방법에 관한 것이다.
본 발명은 또한 화학식 I의 화합물의 결정형을 제조하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 비페닐-2-일카르밤산 l-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-l-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르의 결정성 염 또는 결정성 유리 염기를 형성시키는 것을 포함하는 화학식 I의 화합물을 정제하는 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 본 명세서에 기재된 방법에 의해 제조되는 생성물에 관한 것이다.
본 발명은 또한 미분화 형태의 화학식 I의 화합물의 결정형; 그리고 미분화된 화학식 I의 화합물의 결정형 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 또한 치료에 또는 의약으로서 사용하기 위한 화학식 I의 화합물의 결정형에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 의약의 제조를 위한; 특히, 폐 질환을 치료하기 위한 또는 포유류의 무스카린 수용체를 길항하기 위한 의약의 제조를 위한 화학식 I의 화합물의 결정형의 용도에 관한 것이다.
발명의 상세한 설명
본 발명은 비페닐-2-일카르밤산 l-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-l-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르의 결정형을 제공한다. 상기 결정형은 유리염기, 디포스페이트, 모노설페이트, 또는 디옥살레이트 염과 같은 약제학적으로 허용 가능한 염, 또는 그러한 염의 약제학적으로 허용 가능한 용매화물일 수 있다. 특정 구현예에서, 상기 결정형은 디포스페이트 염이다.
정의
본 발명의 화합물, 조성물, 방법, 및 제조방법을 설명할 때, 하기 용어는 달리 나타내지 않으면 다음과 같은 의미를 갖는다.
용어 "용매화물"은 용질, 즉 화학식 I의 결정성 화합물의 하나 이상의 분자 및 하나 이상의 용매 분자에 의해 형성된 복합체 또는 응집체를 의미한다. 이러한 용어는 또한 물과의 포접 화합물을 포함한 포접 화합물을 포함한다. 대표적인 용매로는 예를 들어, 물, 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, 아세트산 등이 있다. 용매가 물일 경우, 형성되는 용매화물은 수화물이다.
용어 "결정형 I"는 불활성 희석제로서 용매 혼합물의 일부로서 물을 사용하는 방법에 의해 제조되는 결정형 유리 염기를 의미한다. 용어 "결정형 Ⅱ"는 불활성 희석제로서 유기용매 혼합물을 사용하는, 즉, 물을 사용하지 않는 방법에 의해 제조되는 결정성 유리 염기를 말한다.
용어 "치료학적으로 유효한 양"이란 치료가 필요한 환자에게 투여될 경우 치료에 영향을 미치기에 충분한 양을 의미한다. 예를 들어, 무스카린 수용체를 길항하기 위해 치료학적으로 유효한 양이란 원하는 길항 효과를 이루는 양이다. 유사하게, 폐질환을 치료하기에 치료학적으로 유효한 양이란 하기한 바와 같은 질병의 예방, 완화, 억제, 또는 경감일 수 있는 원하는 치료 결과를 달성하는 양이다.
본 명세서에 사용된 용어 "치료하는 것" 또는 "치료"는 포유류(특히, 인간)와 같은 환자의 질병 또는 의학적 상태를 치료하거나 치료를 의미하며, 이러한 치료는
(a) 질병 또는 의학적 상태의 발생을 예방하는 것, 즉 그러한 질병 또는 의학적 상태에 걸리거나 미리 노출될 위험에 있는 것으로 여겨지는 환자의 예방적 치료;
(b) 질병 또는 의학적 상태를 완화시키는 것, 즉 그러한 질병 또는 의학적 상태를 제거하거나 퇴화를 유발하는 것;
(c) 질병 또는 의학적 상태를 억제하는 것, 즉 그러한 질병 또는 의학적 상태를 갖는 환자의 질병 또는 의학적 상태의 진행을 늦추거나 억제하는 것; 또는
(d) 질병 또는 의학적 상태를 갖는 환자의 질병 또는 의학적 상태의 증상을 경감시키는 것을 포함한다.
용어 "약제학적으로 허용 가능한"이란 생물학적으로 또는 다른 방식으로 바람직하지 않은 것이 아닌 물질을 말한다. 예를 들어, "약제학적으로 허용 가능한 담체"란 조성물에 통합되어 조성물의 다른 성분과 함께 바람직하지 않은 생물학적 효과를 유발하거나 해로운 방식으로 상호작용하는 것을 유발하는 것 없이 환자에게 투여될 수 있는 물질을 말한다. 그러한 약제학적으로 허용 가능한 물질은 전형적으로 독성학적 시험 및 제조 시험에 요구되는 표준 조건에 부합하며 미국 FDA가 적절한 불활성 성분으로서 인정한 물질을 포함한다.
용어 "단위 제형"은 환자에게 투여하기에 적절한 물리학적으로 분리된 단위, 즉 단독으로 또는 하나 이상의 추가적인 단위와 조합하여 원하는 치료 효과를 생성시키는 것으로 계산된 미리 결정된 양의 본 발명이 화합물을 함유하는 각각의 단위를 말한다. 예를 들어, 그러한 단위 제형은 캅셀, 정제, 환제 등일 수 있다.
합성
본 발명의 결정성 화합물은 하기 설명한 바와 같이, 그리고 실시예에서와 같이 용이하게 입수 가능한 물질로부터 합성할 수 있다. 특정 방법 상의 조건(즉, 반응 온도, 시간, 반응물의 몰비, 용매, 압력 등)이 주어진다고 하더라도, 달리 언급하지 않는다면 다른 방법의 조건들이 또한 사용될 수 있다. 일반적으로, 반응은 적절한 불활성 희석제에서 수행되며, 예를 들어 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, 이소부탄올, 에틸 아세테이트, 아세토니트릴, 디클로로메탄, 메틸 t-부틸 에테르 등, 및 이들의 조합을 포함하지만, 이에 한정되지 않고, 전형적으로는 물을 함유한다. 임의의 상기 반응이 완료될 때, 상기 결정성 화합물은 침전, 농축, 원심분리 등과 같은 임의의 종래의 수단에 의해 반응 혼합물로부터 분리될 수 있다.
본 발명에 이용되는 비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르는 상업적으로 입수 가능한 출발물질 및 실시예에 기재된 방법을 이용하는 시약으로부터 용이하게 제조할 수 있거나, Mammen 등에게 양도된 미국특허공개 2005/0203133에 기재된 방법을 이용하여 용이하게 제조할 수 있다.
본 발명의 방법에 기재된 몰 비는 당업자가 이용가능한 다양한 방법에 의해 용이하게 결정할 수 있다. 예를 들어, 그러한 몰비는 1H NMR에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 택일적으로는, 원소 분석 및 HPLC 방법을 이용하여 몰비를 결정할 수 있다.
디포스페이트 염 결정
본 발명의 디포스페이트 염은 전형적으로 화학식 I의 화합물의 몰당량 당 약 1.8 내지 2.2 몰당량의 포스페이트를 함유하며; 화학식 I의 화합물의 몰당량 당 약 1.9 내지 2.1 몰당량의 포스페이트를 포함한다.
일반적으로, 화학식 I의 화합물 또는 약제학적으로 허용 가능한 그의 용매화물의 결정성 디포스페이트 염은 비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르를 인산과 함께 접촉시킴으로써 제조할 수 있다. 예를 들어, 상기 에스테르를 희석된 인산 수용액과 접촉시켜 무정형의 디포스페이트 염을 형성시킬 수 있고, 그런 다음 불활성의 희석제와 접촉시킨다.
무정형의 디포스페이트 염을 제조하기 위해, 상기 에스테르를 전형적으로 인산 수용액 중에 용해하고, 물로 희석하고, 동결건조에 의해 분리한다. 일반적으로, 이러한 반응은 약 24℃와 같은 약 0 내지 30℃ 범위의 온도에서 수행한다. 상기 에스테르의 mg의 1 M 인산의 ㎕에 대한 비는 약 1:3.5를 포함한 약 1:3 내지 약 1:4이다. 그런 다음, 그 결과 생성된 무정형 디포스페이트 염을 전형적으로 약 15 mg/mL 내지 약 25 mg/mL의 불활성 희석제와 접촉시킨다. 일반적으로, 이러한 반응은 약 60℃와 같은 약 50 내지 70℃ 범위의 온도에서 수행한다.
특정 구현예에서, 상기 에스테르 500 mg을 물 5 mL 및 1M 인산 1.5 mL에 넣는다. pH를 추가의 1M 인산(2.1 몰당량에 상당)으로 약 pH 5.3으로 조정한다. 투명한 용액을 여과하고, 동결시키고, 동결건조하여 무정형의 디포스페이트 염을 생성시킨다. 그 결과 생성되는 무정형 디포스페이트 염을 이소프로판올:아세토니트릴(1:1) 용액에 부가한 다음, 물을 부가한다. 이러한 반응에서, 무정형 디포스페이트 염의 mg의 이소프로판올:아세토니트릴의 mL에 대한 비율은 약 2:1을 포함한 약 2:0.9 내지 약 2:2 이다.
택일적으로, 결정성 디포스페이트 염은 상기 에스테르를 약 2.0 내지 2.1 몰당량의 인산과 접촉시킴으로써 제조할 수 있다. 일반적으로, 이러한 반응은 약 50℃와 같은 약 40 내지 60℃ 범위의 온도에서 불활성 희석제 중에서 수행한다. 특정 구현예에서는, 상기 에스테르를 이소프로판올:아세토니트릴(1:1) 용액에 부가한 다음, 물을 부가한다. 가열 후, 인산을 부가한다. 이 반응에서, 에스테르의 g의 인산의 mL에 대한 비율은 약 5:16을 포함한 약 5:14 내지 약 5:18 이다.
결정성 디포스페이트 염을 제조하기 위한 상기 두 가지 제조방법 모두는 별도의, 덜 안정한, 디포스페이트 결정형의 형성을 유발할 수 있다. 도 6 및 도 7은 각각 이러한 덜 안정한 결정형에 대한 PXRD 패턴 및 DSC 기록을 나타낸다. 보다 안정한 디포스페이트 결정형이 우세한 형태이기는 하지만; 덜 안정한 디포스페이트 결정형이 존재할 경우, 용매 혼합물 중에서의 물 함량을 증가시키고, 약 2 내지 약 65 시간 동안, 전형적으로는 약 2 시간 동안, 약 50℃ 내지 약 70℃, 전형적으로는 약 60℃로 재가열시킨 다음, 서서히 교반하면서 밤새 실온으로 냉각시킴으로써 보다 안정한 결정으로 용이하게 전환될 수 있다.
모노설페이트 염 결정
본 발명의 모노설페이트 염은 화학식 I의 화합물의 몰당량 당 약 0.8 내지 1.2 당량의 설페이트를 함유하며; 예를 들어, 화학식 I의 화합물의 몰당량 당 약 0.9 내지 1.1 당량의 설페이트를 포함한다.
화학식 I의 화합물 또는 약제학적으로 허용 가능한 그의 용매화물의 결정성 모노설페이트 염은 비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르를 황산과 함께 접촉시킴으로써 제조할 수 있다. 예를 들어, 상기 에스테르를 1N 황산 수용액과 접촉시켜 모노설페이트 염을 형성시킬 수 있고, 그런 다음 불활성의 희석제와 접촉시킨다.
상기 모노설페이트 염을 제조하기 위해, 상기 에스테르를 1:1 아세토니트릴:물 중에 용해하고, 황산 수용액으로 희석하고, 물로 희석한 다음, 동결건조에 의해 유리시킨다. 일반적으로, 이러한 반응은 약 24℃와 같은 약 0 내지 30℃ 범위의 온도에서 수행한다. 상기 에스테르의 mg의 1 N 황산 수용액 mL에 대한 비는 약 350 mg/mL를 포함한 약 325 mg/mL 내지 약 285 mg/mL 이다. 특정 일 구현예에서, 상기 에스테르 442 mg을 1:1 아세토니트릴:물 5 mL 중에 넣고, pH를 모니터링 하면서 1N 황산 1.45 mL를 서서히 부가한다. 그런 다음, 상기 pH를 약 pH 3.3으로 조정한다. 투명한 용액을 여과하고, 동결시키고, 동결건조하여 모노설페이트 염을 생성시킨다. 그런 다음, 그 결과 생성되는 모노설페이트 염을 약 10 mg/mL 내지 약 20 mg/mL의 불활성 희석제와 접촉시킨다. 일 구현예에서, 이러한 반응은 제 1 온도에서 수행한 다음 더 낮은 제 2 온도에서 수행하고, 두 개의 온도 모두는 약 60℃ 내지 70℃와 같은 약 50℃ 내지 80℃ 범위이다. 특정 구현예에서, 상기 모노설페이트 염을 이소프로판올:아세토니트릴(10:1) 용액에 부가한다. 이러한 반응에서, 모노설페이트 염의 mg의 이소프로판올:아세토니트릴의 mL에 대한 비율은 약 15:1을 포함한 약 15:3 내지 약 15:0.8 이다.
또 다른 구현예에서, 이러한 반응은 제 1 온도에서 수행한 다음, 두 개의 더 낮은 온도 주기에서 수행한다. 제 1 온도는 약 70℃와 같은 약 50 내지 80℃ 범위이다. 제 1의 더 낮은 온도 주기는 약 60℃ 내지 약 30℃의 범위이다. 제 2의 더 낮은 온도 주기는 약 40℃ 내지 30℃ 범위이다. 특정 구현예에서, 모노설페이트 염을 이소프로판올:아세토니트릴(10:1) 용액에 부가한다. 이 반응에서, 모노하이드레이트 염 mg의 이소프로판올:아세토니트릴의 mL에 대한 비율은 약 161:9를 포함한 약 161:7 내지 약 161:11이다.
디옥살레이트 염 결정
본 발명의 디옥살레이트 염은 전형적으로 화학식 I의 화합물의 몰당량 당 약 1.8 내지 2.2 몰당량의 옥살레이트를 함유하며; 화학식 I의 화합물의 몰당량 당 약 1.9 내지 2.1 몰당량의 옥살레이트를 포함한다.
비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르 또는 약제학적으로 허용 가능한 그의 용매화물의 결정성 디옥살레이트 염은 비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르를 옥살산과 접촉시킴으로써 제조할 수 있다. 예를 들어, 상기 에스테르를 1M 옥살산 수용액과 접촉시켜 디옥살레이트 염을 형성시킬 수 있고, 그런 다음 불활성의 희석제와 접촉시킨다.
상기 디옥살레이트 염을 제조하기 위해, 상기 에스테르를 1:1 아세토니트릴:물 중에 용해하고, 옥살산 수용액으로 희석하고, 물로 희석한 다음, 동결건조에 의해 유리시킨다. 일반적으로, 이러한 반응은 약 24℃와 같은 약 0 내지 30℃ 범위의 온도에서 수행한다. 상기 에스테르의 mg의 1 M 옥살산 수용액 mL에 대한 비는 약 300 mg/mL를 포함한 약 320 mg/mL 내지 약 280 mg/mL 이다. 특정 일 구현예에서, 상기 에스테르 510 mg을 1:1 아세토니트릴:물 5 mL 중에 넣고, pH를 모니터링 하면서 1M 옥살산 수용액 1.7 mL를 서서히 부가한다. 상기 pH를 약 pH 3.0으로 조정한다. 투명한 용액을 여과하고, 동결시키고, 동결건조하여 디옥살레이트 염을 생성시킨다.
일 구현예에서, 그런 다음 그 결과 생성된 디옥살레이트 염을 약 5 mg/mL 내지 약 15 mg/mL의 불활성 희석제와 접촉시킨다. 일반적으로, 이러한 반응은 약 60℃와 같은 약 50℃ 내지 70℃ 범위의 온도에서 수행한다. 특정 구현예에서, 상기 디옥살레이트 염을 이소프로판올:물(94:6) 용액에 부가한다. 이러한 반응에서, 디옥살레이트 염의 mg의 이소프로판올:물의 mL에 대한 비율은 약 10:1을 포함한 약 10:0.8 내지 약 10:3 이다.
결정성 디옥살레이트 염은 또한 상기 에스테르의 결정성 디옥살레이트 염의 종자 결정을 형성시키는 단계(상기 나타낸 바와 같이 합성), 상기 에스테르를 옥살산과 접촉시킴으로써 디옥살레이트 염을 형성시킨 다음 그 염을 불활성 희석제 중에서 용해하여 용액을 형성시키는 단계; 및 상기 종자 결정을 상기 용액에 부가하는 단계에 의해 제조될 수 있다.
일 구현예에서, 디옥살레이트 염을 전형적으로 약 5 mg/mL 내지 약 15 mg/mL의 불활성 희석제와 접촉시킨다. 일반적으로, 이러한 반응은 약 60℃와 같은 약 50 내지 70℃ 범위의 제 1 온도에서 수행한다. 그런 다음, 상기 혼합물을 약 4℃와 같은 약 3 내지 10℃ 범위의 제 2 온도로 냉각시킨다. 그런 다음, 상기 에스테르의 결정성 디옥살레이트 염의 종자 결정을 부가한다. 특정 구현예에서, 상기 디옥살레이트 염을 이소프로판올:물(94:6)의 용액에 부가한다. 이 반응에서, 디옥살레이트 염의 mg의 이소프로판올:물의 mL에 대한 비는 약 150:13을 포함한, 약 150:10 내지 약 150:16 이다.
유리염기 결정
비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르 또는 약제학적으로 허용 가능한 그의 용매화물의 결정성 유리염기는 비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르를 불활성 희석제와 접촉시킴으로써 제조할 수 있다.
일 형태의 결정성 유리 염기(I 형)를 제조하기 위해, 상기 에스테르를 전형적으로 약 5 mg/mL 내지 약 15 mg/mL의 불활성 희석제와 접촉시킨다. 일반적으로, 이러한 반응은 약 25℃와 같은 약 20 내지 30℃ 범위의 온도에서 수행한다. 특정 구현예에서, 상기 에스테르를 물:아세토니트릴(1:1) 용액에 부가한다. 이 반응에서, 상기 에스테르의 mg의 물:아세토니트릴의 mL에 대한 비율은 약 100:0.5를 포함한 약 100:0.3 내지 약 100:1이다. 택일적으로, 상기 반응은 약 25℃와 같은 약 20 내지 30℃ 범위의 수행한 다음, 약 4℃와 같은 약 3 내지 10℃ 범위의 제 2 온도로 냉각시킬 수 있다.
결정성 유리 염기는 또한 결정성 유리 염기의 종자 결정을 형성시키는 단계(상기 기재한 바와 같이 합성), 상기 에스테르를 불활성 희석제와 접촉시킴으로써 결정성 유리 염기를 형성시키고 그 결과 형성된 결정성 에스테르를 용해하여 용액을 형성시키는 단계, 및 상기 종자 결정을 상기 용액에 부가하는 단계에 의해 제조할 수 있다.
일 구현예에서, 상기 에스테르를 전형적으로 불활성 희석제 약 5 mg/mL 내지 약 15 mg/mL와 접촉시킨다. 일반적으로, 이러한 반응은 약 60℃와 같은 약 50 내지 70℃ 범위의 제 1 온도에서 수행한다. 그런 다음, 상기 혼합물을 약 4℃와 같은 약 3 내지 10℃ 범위의 제 2 온도로 냉각시킨다. 그런 다음, 상기 에스테르의 결정성 유리 염기의 종자 결정을 부가한 다음, 여러 번의 가열 및 냉각의 주기를 수행한다. 제 1 가열 주기는 예를 들어, 약 30 내지 40℃로 한 다음, 약 50℃로 하고, 그런 다음 실온으로 냉각시킨다. 제 2, 제 3, 및 제 4 가열 주기는 상기 샘플을 약 60℃와 같은 약 50 내지 70℃ 범위의 온도로 가열한 다음, 실온으로 냉각시키는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 에스테르를 물:아세토니트릴(1:1)의 용액에 부가한다. 이 반응에서, 상기 에스테르의 mg의 상기 아세토니트릴 및 물의 mL에 대한 비는 약 230:0.2을 포함한, 약 230:0.1 내지 약 230:0.5이다.
유리 염기의 또 다른 결정형(Ⅱ 형)을 제조하기 위해, 상기 에스테르를 전형적으로 약 200 mg/mL 내지 약 100 mg/mL의 불활성 희석제와 접촉시킨다. 일반적으로, 이러한 반응은 약 25℃와 같은 약 20 내지 30℃ 범위의 온도에서 수행한다. 특히 적절한 불활성 희석제는 아세토니트릴 및 메틸 t-부틸 에테르의 조합이다. 특정 구현예에서, 비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르를 아세토니트릴에 부가한 다음, 메틸 t-부틸 에테르 및 부가적인 아세토니트릴을 부가한다. 이 반응에서, 상기 에스테르의 mg의 아세토니트릴:메틸 t-부틸 에테르의 mL에 대한 비율(1:2 용액)은 약 70:0.45를 포함한 약 200 mg/mL 내지 약 100 mg/mL 이다.
결정의 특징
다른 장점 중에서도, 결정성의 화학식 I의 화합물을 형성시키는 것은 화학식 I의 화합물을 정제하는데 유용하다. 예를 들어, 상기 결정성 디포스페이트 염은 96%가 넘는 순도, 그리고 전형적으로는 98%가 넘는 순도를 갖는다.
분말 X-선 회절(PXRD) 분야에 잘 알려져 있는 바와 같이, PXRD 스펙트럼의 상대적인 피크 높이는 샘플 제조 및 기구의 기하학적 형태(instrument geometry)에 관한 수많은 인자에 의존하지만, 피크의 위치는 기계적인 세부사항에 상대적으로 민감하지 않다. 따라서, 일 구현예에서, 본 발명의 결정성 화합물은 소정의 피크 위치를 갖는 PXRD 패턴을 갖는 것을 특징으로 한다.
일 구현예에서, 화학식 I의 화합물의 결정성 디포스페이트 염은 PXRD 패턴이 6.4±0.2, 7.6±0.2, 8.6±0.2, 13.7±0.2, 15.0±0.2, 19.4±0.2, 21.6±0.2, 22.1±0.2, 22.9±0.2, 및 23.7±0.2로부터 선택된 2θ의 값에서 두 개 이상의 회절 피크를 갖는 것이 특징이다. 특정 일 구현예에서, 이 결정형은 15.0±0.2, 19.4±0.2, 21.6±0.2, 및 23.7±0.2의 2θ의 값에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는 것이 특징이다. 또 다른 일 구현에에서, 결정성 디포스페이트 염은 피크 위치가 도 1에 나타낸 패턴의 피크 위치와 실질적으로 일치하는 PXRD 패턴을 갖는 것이 특징이다. 도 1에서의 PXRD 패턴 및 도 6에 도시된 바와 같은 덜 안정한 디포스페이트 염의 PXRD 패턴과의 차이를 보면 알 수 있다.
일 구현예에서, 화학식 I의 화합물의 결정성 모노설페이트 염은 PXRD 패턴이 7.7±0.2, 8.4±0.2, 8.8±0.2, 12.6±0.2, 13.7±0.2, 14.1±0.2, 15.3±0.2, 16.0±0.2, 19.7±0.2, 20.6±0.2, 23.0±0.2, 및 24.4±0.2로부터 선택된 2θ의 값에서 두 개 이상의 회절 피크를 갖는 것이 특징이다. 특정 일 구현예에서, 이 결정형은 12.6±0.2, 19.7±0.2, 23.0±0.2, 및 24.4±0.2의 2θ의 값에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는 것이 특징이다. 또 다른 일 구현에에서, 결정성 모노설페이트 염은 피크 위치가 도 8에 나타낸 패턴의 피크 위치와 실질적으로 일치하는 PXRD 패턴을 갖는 것이 특징이다.
일 구현예에서, 화학식 I의 화합물의 결정성 디옥살레이트 염은 PXRD 패턴이 7.7±0.2, 8.7±0.2, 13.5±0.2, 14.0±0.2, 14.8±0.2, 15.4±0.2, 15.8±0.2, 19.4±0.2, 22.9±0.2, 23.3±0.2, 및 24.6±0.2로부터 선택된 2θ의 값에서 두 개 이상의 회절 피크를 갖는 것이 특징이다. 특정 일 구현예에서, 이 결정형은 8.7±0.2, 14.0±0.2, 19.4±0.2, 및 22.9±0.2의 2θ의 값에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는 것이 특징이다. 또 다른 일 구현에에서, 결정성 디옥살레이트 염은 피크 위치가 도 13에 나타낸 패턴의 피크 위치와 실질적으로 일치하는 PXRD 패턴을 갖는 것이 특징이다.
일 구현예에서, 화학식 I의 화합물의 결정성 유리 염기(I 형)는 PXRD 패턴이 4.7±0.2, 9.6±0.2, 12.7±0.2, 13.7±0.2, 16.7±0.2, 17.4±0.2, 18.5±0.2, 19.4±0.2, 20.8±0.2, 21.4±0.2, 24.2±0.2, 및 25.6±0.2로부터 선택된 2θ의 값에서 두 개 이상의 회절 피크를 갖는 것이 특징이다. 특정 일 구현예에서, 이 결정형은 4.7±0.2, 18.5±0.2, 20.8±0.2, 및 25.6±0.2의 2θ의 값에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는 것이 특징이다. 또 다른 일 구현에에서, 결정성 유리 염기(I 형)는 피크 위치가 도 18에 나타낸 패턴의 피크 위치와 실질적으로 일치하는 PXRD 패턴을 갖는 것이 특징이다.
일 구현예에서, 화학식 I의 화합물의 결정성 유리 염기(Ⅱ 형)는 PXRD 패턴이 4.6±0.2, 9.3±0.2, 12.9±0.2, 13.6±0.2, 14.0±0.2, 14.6±0.2, 16.5±0.2, 18.6±0.2, 19.1±0.2, 20.9±0.2, 22.1±0.2, 22.7±0.2, 및 25.7±0.2로부터 선택된 2θ의 값에서 두 개 이상의 회절 피크를 갖는 것이 특징이다. 특정 일 구현예에서, 이 결정형은 4.6±0.2, 18.6±0.2, 22.1±0.2, 및 22.7±0.2의 2θ의 값에서의 회절 피크를 포함하는 PXRD 패턴을 갖는 것이 특징이다. 또 다른 일 구현에에서, 결정성 유리 염기(Ⅱ 형)는 피크 위치가 도 23에 나타낸 패턴의 피크 위치와 실질적으로 일치하는 PXRD 패턴을 갖는 것이 특징이다.
또 다른 일 구현예에서, 화학식 I의 화합물의 결정성 디포스페이트 염은 DSC 기록이 도 2에 나타낸 바와 같이 약 154.4℃에서 최대 흡열 열 흐름을 나타내는 것이 특징이다. 도 2에서의 DSC 기록과 도 7에 도시된 덜 안정한 디포스페이트 염의 DSC 기록 간의 차이를 주목해보면 알 수 있다. 안정한 결정성 디포스페이트 염의 DSC 기록(도 2)는 약 154.4℃에서 상대적으로 날카로운 피크가 나타나는 전형적인 상대적 저온 전이를 나타낸다. 반면에, 불안정한 결정성 디포스페이트염의 DSC 기록(도 7)은 약 150.3℃에서 훨씬 더 작은 용융 전이 전에 뚜렷한 쇼울더(shoulder)를 나타낸다.
유사하게, 화학식 I의 화합물의 결정성 모노설페이트 염은 DSC 기록이 도 10에 나타낸 바와 같이 약 76.5℃에서 최대 흡열 열 흐름을 나타내는 것이 특징이고; 결정성 디옥살레이트 염은 DSC 기록이 도 15에 나타낸 바와 같이 약 73.7℃에서 최대 흡열 열 흐름을 나타내는 것이 특징이고; 결정성 유리 염기(I 형)는 DSC 기록이 도 19에 나타낸 바와 같이 약 102.7℃에서 최대 흡열 열 흐름을 나타내는 것이 특징이며; 결정성 유리 염기(Ⅱ 형)는 DSC 기록이 도 24에 나타낸 바와 같이 약 98.6℃에서 최대 흡열 열 흐름을 나타내는 것이 특징이다.
본 발명의 결정성 화합물은 허용 가능한 중간 정도 수준의 흡습성을 갖는 가역적 흡착/탈착(sorption/desorption) 프로파일을 갖는 것으로 입증되었다: 화학식 I의 화합물의 결정성 디포스페이트 염은 90% 이하의 상대습도에 노출될 때 2% 미만의 중량 증가를 나타내고; 결정성 모노설페이트 염은 90% 이하의 상대습도에 노출될 때 3% 미만의 중량 증가를 나타내고; 결정성 유리 염기(I 형)는 90% 이하의 상대습도에 노출될 때 6% 미만의 중량 증가를 나타내며; 결정성 유리 염기(Ⅱ 형)는 90% 이하의 상대습도에 노출될 때 4% 미만의 중량 증가를 나타낸다.
추가적으로, 본 발명의 결정성 화합물은 상승된 온도 및 습도에 노출 시 안정한 것으로 밝혀졌다. 예를 들어, 40℃ 및 75% 상대습도에서 1 달간 저장한 후에, 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)에 의해 분석한 결과, 본 발명의 결정성 화합물의 검출 가능한 화학적 분해가 나타나지 않았다(즉, 0.5% 미만의 화학적 분해).
본 발명의 결정성 화합물의 이러한 특성을 하기 실시예에서 더욱 설명한다.
약제학적 조성물 및 제제
결정성의 화학식 I의 화합물은 전형적으로 약제학적 조성물 또는 제제의 형태로 환자에게 투여된다. 그러한 약제학적 조성물은 흡입, 경구, 경비, 국소(경피 포함), 및 주사 투여방법을 포함하지만, 이에 한정되지 않는 임의의 허용 가능한 투여 경로에 의해 환자에게 투여될 수 있다. 그러나, 일단 본 발명의 결정성 염이 제제화되면, 그것은 더 이상 결정형이 아닐 수 있다는 것, 즉 그 염은 적절한 담체 중에 용해될 수 있다는 것을 당업자가 알 것이다.
따라서, 일 구현예에서, 본 발명은 결정성의 비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르 또는 약제학적으로 허용 가능한 그의 용매화물, 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 상기 약제학적 조성물은 필요하다면, 다른 치료제 및/또는 제제화제를 더 함유할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 전형적으로 활성성분으로서 치료학적으로 유효한 양의 결정성의 비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르 또는 약제학적으로 허용 가능한 그의 용매화물을 함유한다. 전형적으로, 그러한 약제학적 조성물은 약 0.01 내지 약 95 중량%의 활성성분을 함유할 것이며; 이러한 예로는 약 0.01 내지 약 10 중량%와 같은 약 0.01 내지 약 30 중량%가 있다.
임의의 종래의 담체 또는 부형제는 본 발명의 약제학적 조성물에 사용될 수 있다. 특정 담체 또는 부형제의 선택, 또는 담체나 부형제의 조합은 구체적인 환자 또는 의학적 상태나 질병 상태의 종류를 치료하기 위해 사용되는 투여방법에 따라 달라질 것이다. 이와 관련하여, 특정 투여방법을 위한 적절한 약제학적 조성물의 제조는 약제학 분야에 공지되어 있는 기술의 범위 내에 있다. 또한, 그러한 조성물의 구성성분은 예를 들어, Sigma, P.O. Box 14508, St. Louis, MO 63178로부터 상업적으로 입수 가능하다. 더욱 설명하기 위해, 종래의 제제화 기술은 Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (2000); 및 H.C. Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7th Edition, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (1999)에 기재되어 있다.
약제학적으로 허용 가능한 담체로서 작용할 수 있는 물질의 대표적인 예는 락토오스, 글루코오스, 및 수크로오스와 같은 당; 옥수수 전분 및 감자 전분과 같은 전분; 소듐 카르복시메틸셀룰로오스, 에틸 셀룰로오스, 및 셀룰로오스 아세테이트와 같은 셀룰로오스 및 그 유도체; 분말 트라가칸트; 맥아; 젤라틴; 탈크; 코코아버터 및 좌제 왁스와 같은 부형제; 땅콩유, 면실유, 홍화유, 참기름, 올리브유, 옥수수유, 및 대두유와 같은 오일; 프로필렌 글리콜과 같은 글리콜; 글리세린, 솔비톨 만니톨, 및 폴리에틸렌글리콜과 같은 폴리올; 에틸 올레에이트 및 에틸 라우레이트와 같은 에스테르; 아가; 수산화마그네슘 및 수산화알루미늄과 같은 완충제; 알긴산; 파이로젠이 없는 물; 등장 식염수; 링거 용액; 에틸 알콜; 포스페이트 완충용액; 클로로플루오로카본 및 하이드로플루오로카본과 같은 압축 추진 기체; 및 약제학적 조성물에 이용되는 다른 비독성의 적합한 물질을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 약제학적 조성물은 전형적으로 본 발명의 화합물을 약제학적으로 허용 가능한 담체 및 하나 이상의 선택적인 성분과 함께 완전하고 긴밀하게 혼합하거나 블렌딩함으로써 제조된다. 필요하거나 바람직하다면, 그런 다음 그 결과 형성되는 균질한 블렌딩되 혼합물을 종래의 방법 및 기구를 이용하여 정제, 캅셀, 환제, 캐니스터, 카트리지, 디스펜서 등으로 형태를 만들거나 로딩시킬 수 있다.
일 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 흡입 투여에 적절하다. 흡입 투여에 적절한 약제학적 조성물은 전형적으로 에어로졸 또는 분말의 형태일 것이다. 그러한 조성물은 일반적으로 네불라이저 흡입기, 정량 흡입기(MDI), 건조분말 흡입기(DPI), 또는 유사한 전달 장치와 같은 잘 알려진 전달 장치를 이용하여 투여한다.
본 발명의 특정 구현예에서, 활성성분을 포함하는 약제학적 조성물은 네불라이저 흡입기를 이용하여 흡입에 의해 투여한다. 그러한 네불라이저 장치는 전형적으로 활성성분을 포함하는 약제학적 조성물을 환자의 호흡기로 전달되는 연무로서 스프레이 하도록 유발하는 높은 속도의 공기 흐름을 생성시킨다. 따라서, 네불라이저 흡입기에서 사용하기 위해 제제화 시, 활성성분을 전형적으로 적절한 담체에 용해하여 용액을 형성시킨다. 적절한 네불라이저 장치는 예를 들어, PARI GmbH(Starnberg, German)로부터 상업적으로 입수 가능하다. 다른 네불라이저 장치는 Respimat(Boehringer Ingelheim)을 포함하며, 그것은 예를 들어 Lloyd 등에게 허여된 미국특허 6,123,068 및 WO 97/12687(Eicher 등)에 기재되어 있으며, 이 문헌들은 전체가 참고로 본 명세서에 통합되어 있다.
네불라이저 흡입기에 사용하기 위한 대표적인 약제학적 조성물은 화학식 I의 결정성 화합물 또는 약제학적으로 허용 가능한 그의 용매화물을 약 0.05 ㎍/mL 내지 약 10 mg/mL 포함하는 수용액을 포함한다. 일 구현예에서, 수성 제제는 등장이다. 일 구현예에서, 수성 제제는 시트레이트 완충제로 약 pH 5로 완충화 된다. 또 다른 특정 구현예에서, 수성 제제는 비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르를 유리 염기 등가량으로 약 0.1 mg/mL 내지 약 1.0 mg/mL 함유한다.
본 발명의 또 다른 특정 구현예에서, 활성 약물을 포함하는 약제학적 조성물을 DPI를 이용하여 흡입에 의해 투여한다. 그러한 DPI는 전형적으로 흡입 시 환자의 공기 흐름에 분산되는 자유 유동성 분말로서 활성 약물을 투여한다. 자유 유동성 분말을 이루기 위해, 활성 약물을 전형적으로 락토오스 또는 전분과 같은 적절한 부형제와 함께 제제화한다. 미분화는 결정 크기를 폐 전달에 적절한 크기로 감소시키는 통상적인 방법이다. 전형적으로, 활성 약물은 적절한 담체와 함께 미분화하고 조합하여, 흡입 가능한 미분화된 입자의 현탁을 형성하며, 여기에서 "미분화된 입자" 또는 "미분화된 형태"는 입자의 약 90% 이상이 약 10 ㎛ 미만의 직경을 갖는 것을 의미한다. 원하는 입자 크기를 얻을 수 있기만 하면, 미세 제분(fine milling), 쵸핑(chopping), 크러슁(crushing), 연마(grinding), 제분(milling), 스크리닝, 분쇄(trituraton), 분말화(pulverization) 등과 같은 입자 크기를 감소시키는 다른 방법이 또한 이용될 수 있다.
DPI에 사용하기 위한 대표적인 약제학적 조성물은 약 1 ㎛ 내지 약 100 ㎛의 입자 크기를 갖는 건조 락토오스 및 결정성의 화학식 I의 화합물 또는 약제학적으로 허용 가능한 이들의 용매화물의 미분화된 입자를 포함한다. 그러한, 건조 분말 제제는 예를 들어, 락토오스를 활성약물과 조합한 다음, 그 구성성분들을 건조 블렌딩함으로써 제조될 수 있다. 택일적으로, 필요하다면, 상기 활성약물은 부형제 없이 제제화될 수도 있다. 그런 다음, 약제학적 조성물을 전형적으로 건조 분말 디스펜서에, 또는 건조 분말 전달 장치에 사용되는 흡입 카트리지 또는 캅셀에 로딩한다.
DPI 전달 장치의 예는 Diskhaler(GlaxoSmithKline, Research Triangle Park, NC; 예를 들어, Newell 등에게 허여된 U.S. 특허 5,035,237 참조); Diskus (GlaxoSmithKline; 예를 들어 Davies 등에게 허여된 미국특허. 6,378,519 참조); Turbuhaler (AstraZeneca, Wilmington, DE; 예를 들어 Wetterlin에게 허여된 미국특허 4,524,769 참조); Rotahaler (GlaxoSmithKline; 예를 들어 Hallwroth 등에게 허여된 U.S. 특허 4,353,365 참조) 및 Handihaler(Boehringer Ingelheim)을 포함한다. 적절한 DPI 장치의 추가적인 예가 Casper 등에게 허여된 미국특허 5,415,162, Evans에게 허여된 미국특허 5,239,993, 및 Armstrong 등에게 허여된 미국특허 5,715,810 및 상기 특허에 인용된 참고문헌에 기재되어 있다. 상기 언급한 특허의 개시는 전체가 참고로 본 명세서에 통합되어 있다.
본 발명의 또 다른 특정 구현예에서, 활성 약물을 포함하는 약제학적 조성물은, 전형적으로 측정된 양의 활성 약물 또는 약제학적으로 허용 가능한 그의 염 또는 용매화물 또는 입체이성질체를 압축 추진 기체를 이용하여 배출하는 MDI를 이용하여 흡입에 의해 투여한다. 따라서, MDI를 이용하여 투여되는 약제학적 조성물은 액화된 추진체 중의 활성 약물의 용액 또는 현탁액을 포함한다. 임의의 적절한 액화 추진체로는 CCl3F와 같은 클로로플루오로카본, 1,1,1,2-테트라플루오로에탄(HFA 134a) 및 1,1,1,2,3,3,3-헵타플루오로-n-프로판(HFA 227)과 같은 하이드로플루오로알칸(HFAs) 등이 사용될 수 있다. 오존층에 영향을 주는 클로로플루오로카본에 대한 우려로 인해, HFAs를 함유하는 제제가 일반적으로 바람직하다. HFA 제제의 부가적인 선택적 구성성분은 에탄올 또는 펜탄과 같은 공용매, 및 소르비탄 트리올레에이트, 올레산, 레시틴, 및 글리세린과 같은 계면활성제를 포함한다. 예를 들어, Purewal 등에게 허여된 미국특허 5,225,183, EP 0717987 A2 (Minnesota Mining and Manufacturing Company), 및 WO 92/22286 (Minnesota Mining and Manufacturing Company)를 참조하고, 상기 특허 문헌의 개시는 전체가 참고로 본 명세서에 통합된다.
정량 흡입기에 사용하기 위한 대표적인 약제학적 조성물은 약 0.01 내지 5 중량%의 결정성의 화학식 I의 화합물 또는 약제학적으로 허용 가능한 그의 용매화물; 약 0 내지 20 중량%의 에탄올; 및 약 0 내지 5 중량%의 계면활성제를 포함하며, 나머지는 HFA 추진체이다.
그러한 조성물은 전형적으로 활성 약물, 에탄올(존재한다면), 및 계면활성제(존재한다면)를 함유하는 적절한 용기에 냉각되거나 가압된 하이드로플루오로알칸을 가함으로써 제조된다. 현탁액을 제조하기 위해, 활성 약물은 미분화된 다음, 추진체와 함께 조합한다. 그런 다음, 상기 제제를 정량 흡입기 장치의 일부를 형성하는 에어로졸 캐니스터에 로딩한다. 특히 HFA 추진체와 함께 사용하기 위해 개발된 정량 흡입기 장치의 예는 Marecki에게 허여된 미국특허 6,006,745 및 Ashurst 등에게 허여된 미국특허 6,143,277에 기재되어 있다. 택일적으로, 현탁제 제제는 활성약물의 미분화된 입자 상에 계면활성제 코팅을 분무건조함으로써 제조될 수 있다. 예를 들어, WO 99/53901(Glaxo Group Ltd.) 및 WO 00/61108(Glaxo Group Ltd)를 참조하면 된다. 상기 언급된 특허 및 특허공개의 개시는 전체가 참고로 본 명세서에 통합된다.
흡입 가능한 입자, 그리고 흡입 투여를 위해 적절한 제제 및 장치를 제조하는 방법의 추가적인 예를 위해서는, Gao 등에게 허여된 미국특허 6,268,533, Trofast에게 허여된 미국특허 5,983,956; Briggner 등에게 허여된 미국특허 5,874,063; 및 Jakupovic 등에게 허여된 미국특허 6,221,398; 그리고, WO 99/55319 (Glaxo Group Ltd.) 및 WO 00/30614 (AstraZeneca AB)를 참조하면 되며; 상기 특허문헌의 개시는 전체가 참고로 본 명세서에 통합된다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 경구투여에 적절하다. 적절한 경구 투여용 약제학적 조성물은 캅셀, 정제, 환제, 로젠지, 카켓, 당의정, 산제, 과립제의 형태; 또는 수성 또는 비수성 액체 중의 용액 또는 현탁액으로서; 또는 수중유나 유중수 액체 유제로서; 또는 엑릭실제 또는 시럽제 등의 형태일 수 있으며, 각각 활성성분으로서 기결정된 양의 본 발명의 염을 함유한다. 상기 약제학적 조성물은 단위 제형 중에 포장될 수 있다.
고체 제형(즉, 캅셀, 정제, 환제 등으로서)으로 경구 투여하는 것을 의도할 경우, 본 발명의 약제학적 조성물은 전형적으로 활성성분으로서 본 발명의 결정성 화합물 및 소듐 시트레이트 또는 디칼슘 포스페이트와 같은 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함할 것이다. 선택적으로 또는 택일적으로, 그러나 고체 제형은 또한, 전분, 락토오스, 수크로오스, 글루코오스, 만니톨, 및/또는 실리식산(silicic acid)과 같은 충전제 또는 증량제; 카르복시메틸셀룰로오스, 알기네이트, 젤라틴, 폴리비닐 피롤리돈, 수크로오스, 및/또는 아카시아와 같은 결합제; 글리세롤과 같은 습윤제; 아가-아가, 탄산칼슘, 감자 또는 타피오카 전분, 알긴산, 소정의 실리케이트, 및/또는 탄산나트륨과 같은 붕해제; 파라핀과 같은 용해 지연제; 4급 암모늄 화합물과 같은 흡수 촉진제; 세틸 알콜 및/또는 글리세롤 모노스테아레이트와 같은 습윤제; 카올린 및/또는 벤토나이트 클레이와 같은 흡습제; 탈크, 스테아린산 칼슘, 스테아린산 마그네슘, 고체 폴리에틸렌 글리콜, 소듐 라우릴 설페이트, 및/또는 이들의 혼합물과 같은 활택제; 착색제; 및 완충제를 포함할 수 있다.
이형제, 습윤제, 코팅제, 감미제, 풍미제 및 방향제, 보존제, 및 항산화제 또한 본 발명의 약제학적 조성물에 존재할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 항산화제의 예는 아스코르브산, 시스테인 염산, 소듐 바이설페이트, 소듐 메타바이설페이트, 소듐 설파이트 등과 같은 수용성 항산화제; 아스코르빌 팔미테이트, 부틸화 히드록시아니솔(BHA), 부틸화 히드록시톨루엔(BHT), 레시틴, 프로필 갈레이트, 알파-토코페롤 등과 같은 지용성 항산화제; 시트르산, 에틸렌디아민 테트라아세트산(EDTA), 솔비톨, 타르타르산, 인산 등과 같은 금속 킬레이팅제를 포함한다. 정제, 캅셀, 환제 등을 위한 코팅제는 셀룰로오스 아세테이트 프탈레이트(CAP), 폴리비닐 아세테이트 프탈레이트(PVAP), 히드록시프로필 메틸셀룰로오스 프탈레이트, 메타크릴산-메타크릴산 에스테르 코폴리머, 셀룰로오스 아세테이트 트리멜리테이트(CAT), 카르복시메틸 에틸 셀룰로오스(CMEC), 히드록시프로필 메틸 셀룰로오스 아세테이트 석시네이트(HPMCAS) 등과 같은 장용성 코팅제로 사용되는 것을 포함한다.
바람직하다면, 본 발명의 약제학적 조성물은 예를 들어, 다양한 비율로 히드록시프로필메틸셀룰로오스를 이용하여, 또는 다른 폴리머 매트릭스, 리포좀, 및/또는 마이크로스피어를 이용하여 활성성분의 서방출 또는 제어방출을 제공하도록 제제화할 수 있다.
또한, 본 발명의 약제학적 조성물은 선택적으로 불투명화제(opacifying agent)를 함유할 수 있으며, 활성성분을 위장관의 소정의 부분에서만 또는 그 부분에서 우선적으로, 또는 지연된 방식으로 방출하도록 제제화할 수 있다. 사용될 수 있는 이식 조성물의 예는 폴리머 물질 및 왁스를 포함한다. 상기 활성성분은 또한 적절하다면, 하나 이상의 상기 부형제와 함께 마이크로캡슐화된 형태일 수 있다.
적절한 경구투여용 액상 제형은 실례로서, 약제학적으로 허용 가능한 유제, 마이크로유제, 용액, 현탁제, 시럽제, 및 엘릭실제를 포함한다. 그러한 액체 제형은 전형적으로 활성성분, 및 예를 들어, 물 또는 다른 용매와 같은 불활성 희석제, 에틸 알콜, 이소프로필 알콜, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알콜, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 오일(특히 면실유, 땅콩유, 옥수수유, 배아유, 올리브유, 피마자유, 및 참기름), 글리세롤, 테트라하이드로퓨릴 알콜, 폴리에틸렌글리콜, 및 소르비탄의 지방산 에스테르, 또는 이들의 혼합물을 포함한다. 현탁제는 상기 활성성분 이외에 예를 들어, 에톡실화 이소스테아릴 알콜, 폴리옥시에틸렌 솔비톨, 및 소르비탄 에스테르, 미세결정 셀룰로오스, 알루미늄 메타하이드록사이드, 벤토나이트, 아가-아가 및 트라가칸트, 및 이들의 혼합물과 같은 현탁화제를 함유할 수 있다.
본 발명의 결정성 화합물은 또한 공지된 경피 전달 시스템 및 부형제를 이용하여 경피로 투여할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 화합물은 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 모노라우레이트, 아자사이클로알칸-2-온 등과 같은 투과촉진제와 함께 혼합되어, 패치 또는 유사한 전달 시스템으로 통합될 수 있다. 겔화제, 유화제, 및 완충화제를 포함한 부가적인 부형제는 바람직하다면 그러한 경피 조성물에 이용될 수 있다.
본 발명의 결정성 화합물은 또한 다른 치료제와 함께 병용 투여될 수 있다. 이 병용 요법은 본 발명의 화합물을 하나 이상의 제 2 약물과 함께 조합하여 이용할 수 있으며, 함께 제제화하거나(예: 단일제제로서 함께 포장), 또는 별도로 제제화할 수 있다(예: 분리된 단위 제형으로서 포장). 여러 약물을 함께 동일한 제제에 제제화하는 방법 또는 분리된 단위 제형에 제제화하는 방법은 당해 기술분야에 잘 알려져 있다.
추가적인 치료제(들)는 다른 기관지 확장제(예: PDE3 억제제, 아데노신 2b 조절제, 및 β2 아드레날린 수용체 작용제); 항염증제(예: 코르티코스테로이드와 같은 스테로이드성 항염증제; 비스테로이등성 항염증제(NSAIDs), 및 PDE4 억제제); 다른 무스카린 수용체 길항제(즉, 항콜린제); 항감염제(예: 그람 양성 및 그람 음성 항생제 또는 항바이러스제); 항히스타민제; 프로테아제 억제제; 및 들신경 차단제(예; D2 작용제 및 뉴로키닌 조절제)로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 특정 구현예는 (a) 약제학적으로 허용 가능한 담체 및 치료학적으로 유효한 양의 화학식 I의 화합물의 결정형; 및 (b) 약제학적으로 허용 가능한 담체 및 치료학적으로 유효한 양의, 코르티코스테로이드와 같은 스테로이등성 항염증제; β2 아드레날린 수용체 작용제; 포스포디에스터라제-4 억제제; 또는 이들의 조합으로부터 선택된 약물을 포함하며; 상기 화학식 I의 화합물 및 상기 약물은 함께 또는 분리되어 제제화되는 조성물에 관한 것이다. 또 다른 구현예에서, (b)는 약제학적으로 허용 가능한 담체 및 치료학적으로 유효한 양의 β2 아드레날린 수용체 작용제와 스테로이드성 항염증제이다. 제 2 약물은 약제학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물의 형태로 이용될 수 있으며, 적절하다면 선택적으로는 순수한 입체이성질체로서 이용될 수 있다.
본 발명의 결정성 화합물과 조합하여 이용될 수 있는 대표적인 β2-아드레날린 수용체 작용제로는 살메테롤, 살부타몰, 포르모테롤, 살메파몰, 페노테롤, 터부탈린, 알부테롤, 이소에타린, 메타프로테레놀, 비톨테롤, 피르부테롤, 레발부테롤 등, 또는 약제학적으로 허용 가능한 이들의 염 등이 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 다른 β2-아드레날린 수용체 작용제로는 WO 02/066422(Glaxo Group Ltd.)에 기재되어 있는 3-(4-{[6-{(2R)-2-히드록시-2-[4-히드록시-3-(히드록시메틸)-페닐]에틸}아미노)-헥실]옥시}부틸)벤젠술폰아미드, 3-(-3-{[7-({(2R)-2-히드록시-2-[4-히드록시-3-(히드록시메틸)페닐]에틸}-아미노)헵틸]옥시}-프로필)벤젠술폰아미드 및 관련 화합물; WO 02/070490 (Glaxo Group Ltd.)에 기재되어 있는 3-[3-(4-{[6-([(2R)-2-히드록시-2-[4-히드록시-3-(히드록시메틸)페닐]에틸}아미노)헥실]옥시}부틸)-페닐]이미다졸리딘-2,4-디온 및 관련 화합물; WO 02/076933 (Glaxo Group Ltd.)에 기재된 3-(4-{[6-({(2R)-2-[3-(포밀아미노)-4-히드록시페닐]-2-히드록시에틸}아미노)헥실]옥시}부틸)-벤젠술폰아미드, 3-(4-{[6-({(2S)-2-[3-(포밀아미노)-4-히드록시페닐]-히드록시에틸}아미노)헥실]옥시}부틸)-벤젠술폰아미드, 3-(4-{[6-({(2R/S)-2-[3-(포밀아미노)-4-히드록시페닐-2-히드록시에틸}아미노)헥실]옥시}부틸)-벤젠술폰아미드, N-(t-부틸)-3-(4-{[6-({(2R)-2-[3-(포밀아미노)-4-히드록시페닐]-2-히드록시에틸}아미노)헥실]-옥시}부틸)벤젠술폰아미드, N-(t-부틸)-3-(4-{[6-({(2S)-2-[3-(포밀아미노)-4-히드록시페닐]-2-히드록시에틸}아미노)-헥실]옥시}부틸)-벤젠술폰아미드, N-(t-부틸)-3-(4-{[6-({(2R/S)-2-[3-(포밀아미노)-4-히드록시페닐]-2-히드록시에틸}아미노)헥실]-옥시}부틸)벤젠술폰아미드 및 관련 화합물; WO 03/024439 (Glaxo Group Ltd.)에 기재된 4-{(lR)-2-[(6-{2-[(2,6-디클로로벤질옥시}헥실)아미노]-l-히드록시에틸}-2-(히드록시메틸)페놀 및 관련 화합물; Moran 등에게 허여된 미국특허 6,576,793에 기재된 N-{2-[4-((R)-2-히드록시-2-페닐에틸아미노)페닐]에틸}-(R)-2-히드록시-2-(3-포름아미도-4-히드록시페닐)에틸아민 및 관련 화합물; Moran 등에게 허여된 미국특허 6,653,323에 기재되어 있는 N-{2-[4-(3-페닐-4-메톡시페닐)아미노페닐에틸}-(R)-2-ㅎ히드록시-2-(8-히드록시-2(lH)-퀴놀리논-5-일)에틸아민 및 관련 화합물; 약제학적으로 허용 가능한 이들의 염을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 특정 구현예에서, β2-아드레날린 수용체 작용제는 N-{2-[4-((R)-2-히드록시-2-페닐에틸아미노)페닐]에틸}-(R)-2-히드록시-2-(3-포름아미도-4-히드록시페닐)에틸아민의 결정성 모노하이드로클로라이드 염이다. 이용될 경우, β2-아드레날린 수용체 작용제는 치료학적으로 유효한 양으로 약제학적 조성물에 존재할 것이다. 전형적으로, β2-아드레날린 수용체 작용제는 투여 당 약 0.05 ㎍ 내지 500 ㎍을 제공하기에 충분한 양으로 존재할 것이다. 상기 언급한 특허 및 출원공개의 개시는 전체가 참고로 본 명세서에 통합되어 있다.
본 발명의 결정성 화합물과 조합하여 사용될 수 있는 대표적인 스테로이드성 항염증제는 메틸 프레드니솔론, 프레드니솔론, 덱사메타손, 플루티카손 프로피오네이트, 6α,9α,-디플루오로-17α-[(2-퓨라닐 카보닐)옥시-11β-히드록시-16α-메틸-3-옥소안드로스타-1,4-디엔-17β-카르보티오산 S-플루오로메틸 에스테르, 6α,9α,-디플루오로-llβ-히드록시-16α-메틸-3-옥소-17α-프로피오닐옥시-안드로스타-1,4-디엔-17β-카르보티오산 에스테르, 베클로메탄손 에스테르(예: 17-프로피오네이트 에스테르 또는 17,21-디프로피오네이트 에스테르), 부데소나이드, 플루니솔리드, 모메타손 에스테르(예: 퓨로에이트 에스테르), 트리암시놀론 아세토나이드, 로플레포나이드, 시클레소나이드, 부틱소코르트 프로피오네이트, RPR-106541, ST-126 등, 또는 약제학적으로 허용 가능한 이들의 염을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 이용될 경우, 스테로이드성 항염증제는 치료학적으로 유효한 양으로 약제학적 조성물에 존재할 것이다. 전형적으로, 스테로이드성 항염증제는 투여 당 약 0.05 ㎍ 내지 500 ㎍을 제공하기에 충분한 양으로 존재할 것이다.
예시적인 조합은 화학식 I의 화합물 또는 그의 용매화물의 결정형을, β2-아드레날린 수용체 작용제로서 살메테롤 및 스테로이드성 항염증제로서 플루티카손 프로피오네이트와 함께 병용투여 하는 것이다. 또 다른 예시적인 조합은 화학식 I의 화합물 또는 그의 용매화물의 결정형을, β2-아드레날린 수용체 작용제로서 N-{2-[4-((R)-2-히드록시-2-페닐에틸아미노)페닐]에틸}-(R)-2-히드록시-2-(3-포름아미도-4-히드록시페닐)에틸아민의 결정성 모노하이드로클로라이드 염 및 스테로이드성 항염증제로서 6α,9α,-디플루오로-17α-[(2-퓨라닐카보닐)옥시-11β-히드록시-16α-메틸-3-옥소안드로스타-1,4-디엔-17β-카르보티오산 S-플루오로메틸 에스테르와 함께 병용투여 하는 것이다. 앞서 나타낸 바와 같이, 이러한 약물은 함께 또는 분리하여 제제화될 수 있다.
다른 적절한 조합은 예를 들어, 다른 항염증제을 포함하며, 이러한 항염증제는 예를 들어 NSAIDs(예: 소듐 크로모글리케이트, 네도크로밀 소듐, 그리고 테오필린과 같은 포스포디에스터라제(PDE) 억제제, PDE4 억제제, 및 혼합 PDE3/PDE4 억제제); 류코트리엔 길항제(예: 몬테루카스트); 류코트리엔 합성 억제제; iNOS 억제제; 트립타제 및 엘라스타제 억제제와 같은 프로테아제 억제제; 베타-2 인테그린 길항제 및 아데노신 수용체 작용제 또는 길항제(예: 아데노신 2a 작용제); 사이토카인 길항제(예: 인터류킨 항체(αIL 항체)와 같은 케모카인 길항제, 특히 αIL-4 요법, αIL-13 요법, 또는 이들의 조합); 또는 사이토카인 합성 억제제가 있다.
본 발명의 결정성 화합물과 조합하여 사용될 수 있는 대표적인 포스포디에스터라제-4(PDE4) 억제제 또는 혼합 PDE3/PDE4 억제제는 cis 4-시아노-4-(3-시클로펜틸옥시-4-메톡시페닐)시클로헥산-1-카르복실산, 2-카르보메톡시-4-시아노-4-(3-시클로프로필메톡시-4-디플루오로메톡시페닐시클로헥산-1-온; cis-[4-시아노-4-(3-시클로프로필메톡시-4-디플루오로메톡시페닐)시클로헥산-1-올]; cis-4-시아노-4-[3-(시클로펜틸옥시)-4-메톡시페닐]시클로헥산-l-카르복실산 등 또는 약제학적으로 허용가능한 이들의 염을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 다른 대표적인 PDE4 또는 혼합 PDE4/PDE3 억제제는 AWD-12-281(elbion); NCS-613(INSERM); D-4418 (Chiroscience and Schering-Plough); CI-1018 또는 PD-168787(Pfizer); WO99/16766에 기재된 벤조디옥솔 화합물(Kyowa Hakko); K-34(Kyowa Hakko); V-11294A(Napp); 로플루미라스트(Byk-Gulden); WO99/47505에 기재된 프탈라지논 화합물(Byk-Gulden); 푸마펜트린(Byk-Gulden, 현 Altana); 아로필린(Almirall-Prodesfarma); VM554/UM565(Vernalis); T-440(Tanabe Seiyaku); 및 T2585(Tanabe Seiyaku)을 포함한다.
본 발명의 결정성 화합물과 조합하여 이용될 수 있는 대표적인 무스카린 수용체 길항제(즉, 항콜린제)는 아트로핀, 아트로핀 설페이트, 아트로핀 옥사이드, 메틸아트로핀 니트레이트, 호마트로핀 하이드로브로마이드, 히요시아민(d,l) 하이드로브로마이드, 스코폴라민 하이드로브로마이드, 이프라트로피움 브로마이드, 옥시트로피움 브로마이드, 티오트로피움 브로마이드, 메탄텔린, 프로판텔린 브로마이드, 아니소트로핀 메틸 브로마이드, 크리디늄 브로마이드, 코피롤레이트(Robinul), 이소프로파마이드 요오다이드, 메펜졸레이트 브로마이드, 트리디헥세틸 클로라이드(Pahilone), 헥소시클리움 메틸설페이트, 시클로펜톨레이트 하이드로클로라이드, 트로픽아미드, 트리헥시페니딜 하이드로클로라이드, 피렌제핀, 텔렌제핀, AF-DX 116, 및 메톡트라민 등, 또는 약제학적으로 허용 가능한 이들의 염; 또는 염으로서 열거된 상기 화합물에 대해서는 약제학적으로 허용 가능한 이들의 다른 택일적인 염을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 결정성 화합물와 조합하여 사용될 수 있는 대표적인 항히스타민제(즉, H1-수용체 길항제)는 카르비녹사민 말레에이트, 클레마스틴 퓨마레이트, 디페닐히드라민 하이드로클로라이드, 및 디멘히드리네이트와 같은 에탄올아민; 피릴아민 아멜레이트, 트리펠렌아민 하이드로클로라이드, 및 트리펠렌아민 시트레이트와 같은 에틸렌디아민; 클로르페니라민 및 아크리바스틴과 같은 알킬아민; 히드록시진 하이드로클로라이드, 히드록시진 파모에이트, 시클리진 하이드로클로라이드, 시클리진 락테이트, 메클리진 하이드로클로라이드, 및 세티리진 하이드로클로라이드와 같은 피페라진; 아스테미졸, 레보카바스틴 염산, 로라타딘 또는 그의 탈카보에톡시 유사체, 테르페나딘, 및 펙소페나딘 염산과 같은 피페리딘; 아젤라스틴 염산 등, 또는 약제학적으로 허용 가능한 이들의 염; 또는 염으로서 열거된 상기 화합물에 대해서는 약제학적으로 허용 가능한 이들의 다른 택일적인 염을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다.
달리 나타내지 않는다면, 본 발명의 결정성 화합물과 조합하여 투여되는 다른 치료제의 예시적인 적절한 투여량은 약 0.05 ㎍/일 내지 100 mg/일의 범위이다.
하기 제제는 본 발명의 대표적인 약제학적 조성물, 및 예시적인 제조방법을 설명한다. 하나 이상의 제 2 약물은 선택적으로 본 발명이 결정성 화합물(주된 활성약물)과 함께 제제화될 수 있다. 택일적으로, 제 2 약물(들)은 주된 활성 약물과 분리되어 제제화되어 동시에 또는 순차적으로 병용투여할 수 있다. 예를 들어, 일 구현예에서, 단일 건조 분말 제제는 본 발명의 결정성 화합물 및 하나 이상의 제 2 약물 모두를 포함하도록 제조될 수 있다. 또 다른 일 구현예에서, 한 제제는 본 발명의 결정성 화합물을 함유하도록 제제화되고 분리된 제제(들)가 제 2 약물(들)을 함유하도록 제조된다. 그런 다음, 그러한 건조 분말 제제는 분리된 별도의 블리스터 팩에 포장되어 단일 DPI로 투여될 수 있다.
예시적인 흡입 투여용 건조 분말 제제
본 발명의 결정성 화합물 0.2 mg을 미분화한 다음, 락토오스 25 mg과 함께 블렌딩한다. 그런 다음, 블렌딩된 혼합물을 젤라틴 흡입 카트리지에 로딩한다. 카트리지의 내용물을 분말 흡입기를 이용하여 투여한다.
예시적인 건조 분말 흡입기에 의한 투여를 위한 건조 분말 제제
미분화된 본 발명의 결정성 화합물(활성 약물)의 락토오스에 대한 벌크 제제 비율을 1:200으로 갖는 건조 분말을 제조한다. 상기 분말을 투여 당 약 10 ㎍ 내지 100 ㎍의 활성 약물을 투여할 수 있는 건조 분말 흡입 장치에 팩킹한다.
예시적인 정량 흡입기에 의한 투여를 위한 제제
본 발명의 결정성 화합물(활성 약물) 5 중량% 및 레시틴 0.1 중량%를 함유하는 현탁제를 평균 크기가 10 ㎛ 미만인 미분화된 활성 약물 10 g을 탈염수 200 mL에 레시틴 0.2 g을 녹여서 형성된 용액에 분산시킴으로써 제조한다. 상기 현탁제를 분무 건조하고, 그 결과 생성되는 물질을 1.5 ㎛ 미만의 평균 직경을 갖는 입자로 미분화한다. 상기 입자를 가압 1,1,1,2-테트라플루오로에탄을 갖는 카트리지에 로딩한다.
택일적으로는, 활성 약물 5 중량%, 레시틴 0.5 중량%, 및 트레할로오스 0.5 중량%를 함유하는 현탁제를 10 ㎛ 미만의 평균 크기를 갖는 미분화된 입자로서 활성약물 5 g을 탈염수 100 mL에 트레할로오스 0.5 g 및 레시틴 0.5 g 용해시켜 형성되는 콜로이드 용액에 분산시킴으로써 제조한다. 상기 현탁제를 분무 건조하고, 그 결과 생성되는 물질을 1.5 ㎛ 미만의 평균 직경을 갖는 입자로 미분화한다. 상기 입자를 가압 1,1,1,2-테트라플루오로에탄을 갖는 캐니스터에 로딩한다.
네불라이저에 의한 투여를 위한 예시적인 수성 에어로졸 제제
본 발명의 결정성 화합물(활성 약물) 0.5 mg을 시트르산으로 산성화된 0.9% 염화나트륨 용액 1 mL 중에 용해함으로써 약제학적 조성물을 제조한다. 상기 혼합물을 활성 약물이 용해될 때까지 교반하고 소니케이션 처리한다. 그 용액의 pH를 NaOH를 서서히 부가함으로써 3 내지 8 범위의 값(전형적으로 약 5)으로 조정한다.
경구투여를 위한 예시적인 경질 젤라틴 캅셀 제제
하기 구성성분들을 완전히 블렌딩한 다음, 경질 젤라틴 캅셀에 로딩한다: 본 발명의 결정성 화합물 250 mg, 락토오스(분무건조) 200 mg, 및 스테아린산 마그네슘 10 mg, 캅셀당 조성물의 총량은 460 mg.
경구투여를 위한 예시적인 현탁 제제
하기 구성성분들을 혼합하여, 현탁제 10 mL 당 활성성분 100 mg을 함유하는 현탁제를 형성시킨다.
Figure 112007072428712-pct00002
예시적인 주사 제제
하기 성분들을 블렌딩하고, 0.5 N HCl 또는 0.5 N NaOH를 이용하여 pH를 4 ± 0.5로 조정한다.
Figure 112007072428712-pct00003
유용성
화학식 I의 화합물은 무스카린 수용체 길항 활성가지며, 그러므로 화학식 I의 화합물의 결정형은 무스카린 수용체에 의해 매개되는 의학적 상태, 즉 무스카린 수용체 길항제로 치료 시 완화되는 의학적 상태를 치료하는데 유용하다. 그러한 의학적 상태는, 예를 들면, 만성 폐쇄성 폐질환(예: 만성 및 숨가쁜 기관지염 및 폐기종), 천식, 폐 섬유증, 알레르기성 비염, 비루 등과 같은 가역적인 기도 폐색과 연관된 질병을 포함한 폐 이상 또는 폐질환을 포함한다. 무스카린 수용체 길항제로 치료할 수 있는 다른 의학적 상태는 과활동성 방광 또는 배뇨근 과활동성, 및 이들의 증상과 같은 비뇨생식기 질환; 과민성 대장 증후군, 게실병, 이완불능증, 위장관 과운동 이상 및 설사와 같은 위장관계 질환; 동서맥과 같은 심장 부정맥; 파킨슨병; 알츠하이머병과같은 인지 장애; 월경통 등이다.
따라서, 일 구현예에서, 본 발명은 환자에게 치료학적으로 유효한 양의 결정성 비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르 또는 약제학적으로 허용 가능한 그의 용매화물을 투여하는 것을 포함하는 폐질환을 치료하는 방법에 관한 것이다. 폐 질환을 치료하기 위해 사용할 경우, 본 발명의 결정성 화합물은 전형적으로 하루에 여러 번, 하루에 한 번, 또는 일 주에 한 번 흡입에 의해 투여될 것이다. 일반적으로, 폐 질환을 치료하기 위한 투여량은 약 10 ㎍/일 내지 200 ㎍/일의 범위일 것이다.
흡입에 의해 투여할 경우, 본 발명의 결정성 화합물은 전형적으로 기관지 확장을 생성시키는 효과를 가질 것이다. 따라서, 또 다른 일 구현예에서, 본 발명은 환자에게 기관지 확장을 생성시키는 양의 결정성 비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르 또는 약제학적으로 허용 가능한 그의 용매화물을 투여하는 것을 포함하는 기관지 확장을 생성시키는 방법에 관한 것이다. 일반적으로, 기관지 확장을 생성시키기 위한 치료학적으로 유효한 양의 투여량은 약 10 ㎍/일 내지 200 ㎍/일의 범위일 것이다.
일 구현예에서, 본 발명은 환자에게 치료학적으로 유효한 양의 결정성 비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르 또는 약제학적으로 허용 가능한 그의 용매화물을 투여하는 것을 포함하는 만성 폐쇄성 폐질환 또는 천식을 치료하는 방법에 관한 것이다. COPD 또는 천식을 치료하기 위해 사용될 경우, 본 발명의 염은 전형적으로 하루에 여러 번 투여, 하루에 한 번 투여로 흡입에 의해 투여될 것이다. 일반적으로, COPD 또는 천식을 치료하기 위한 투여량은 약 10 ㎍/일 내지 200 ㎍/일의 범위일 것이다. COPD는 본 명세서에서, 만성 폐쇄성 기관지염 및 폐기종을 포함한다(예를 들어, Barnes, Chronic Obstructive Pulmonary Disease, N Engl J Med 343:269-78 (2000)).
폐 질환을 치료하는데 사용될 경우, 본 발명의 결정성 화합물은 선택적으로 치료제와 함께 투여한다. 따라서, 특정 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물 및 방법은 치료학적으로 유효한 양의 β2-아드레날린 수용체 작용제, 코르티코스테로이드, 비스테로이드성 항염증제, 또는 이들의 조합을 더 포함할 것이다.
또 다른 일 구현예에서, 본 발명의 결정성 화합물은 생물학적 시스템 및 포유류, 구체적으로 마우스, 랫트, 기니아피그, 토끼, 개, 돼지, 인간 등과 같은 포유류에서 무스카린 수용체를 길항하는데 이용된다. 이러한 구현예에서, 치료학적으로 유효한 양의 화학식 I의 결정성 화합물을 포유류에게 투여한다. 바람직하다면, 그런 다음, 무스카린 수용체를 길항하는 효과를 종래의 방법 및 장치를 결정할 수 있다.
본 발명의 결정성 화합물의 특징 및 유용성은 당업자에게 잘 알려진 다양한 in vitro 및 in vivo 어세이를 이용하여 입증할 수 있다. 예를 들어, 대표적인 어세이는 하기 실시예에 더욱 자세하게 기재되어 있다.
본 발명의 다양한 측면을 첨부된 도면을 참고하여 상세히 설명한다.
도 1은 비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르(화학식 I의 화합물)의 결정성 디포스페이트 염의 분말 X-선 회절(PXRD) 패턴을 나타낸다. 도 2는 이러한 결정성 염의 시차주사열량계(DSC) 기록을 나타낸다. 도 3은 이러한 결정성 염의 열중량분석(TGA) 기록을 나타낸다. 도 4는 이러한 결정성 염의 동역학적 수분 흡수(DMS) 기록을 나타낸다. 도 5는 이러한 결정성 염의 현미경 관찰 이미지을 나타낸다. 도 6 및 도 7은 각각 보다 낮은 안정형의 결정성 디포스페이트 염의 PXRD 패턴 및 DSC 기록을 나타낸다.
도 8은 화학식 I의 화합물의 결정성 모노설페이트 염의 PXRD 패턴을 나타낸다. 이러한 결정성 염은 또한 도 9의 TGA 기록, 도 10의 DSC 기록, 도 11의 DMS 기록, 및 도 12의 현미경 관찰 이미지를 갖는 것을 특징으로 한다.
도 13은 화학식 I의 화합물의 결정성 디옥살레이트 염의 PXRD 패턴을 나타낸다. 이러한 결정성 염은 또한 도 14의 TGA 기록, 도 15의 DSC 기록, 도 16의 DMS 기록, 및 도 17의 현미경 관찰 이미지를 갖는 것을 특징으로 한다.
도 18은 화학식 I의 화합물의 결정성 유리염기의 I형의 PXRD 패턴을 나타낸다. 이러한 결정성 유리염기는 또한 도 19의 DSC 기록, 도 20의 TGA 기록, 도 21의 DMS 기록, 및 도 22의 현미경 관찰 이미지를 갖는 것을 특징으로 한다.
도 23은 화학식 I의 화합물의 결정성 유리염기의 Ⅱ형의 PXRD 패턴을 나타낸다. 이러한 결정성 유리염기는 또한 도 24의 DSC 기록, 도 25의 TGA 기록, 및 도 26의 DMS 기록을 갖는 것을 특징으로 한다.
하기 제조 및 실시예는 본 발명의 특정 구현예를 설명하기 위해 제공된다. 그러나, 이러한 특정 구현예는 달리 구체적으로 나타내지 않는다면 어떤 식으로든 본 발명의 범위를 한정하기 위한 것이 아니다. 하기 약어는 달리 나타내지 않는다면 하기 의미를 가지며, 본 명세서에 사용되었지만 하기 정의되지 않은 다른 모든 약어는 표준적인 의미를 갖는다:
AC 아데닐릴 사이클라제
ACh 아세틸콜린
ACN 아세토니트릴
BSA 소혈청 알부민
cAMP 3'-5' 시클릭 아데노신 모노포스페이트
CHO 중국 햄스터 난소
cM5 복제된 침팬지 M5 수용체
DCM 디클로로메탄(즉, 메틸렌 클로라이드)
DIPEA N,N-디이소프로필에틸아민
dPBS Dulbecco's 인산 완충 식염수
DMSO 디메틸 술폭시드
EDC 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카보디이미드
EDTA 에틸렌디아민테트라아세트산
FBS 우태아 혈청
FLIPR 형광측정 영상 플레이트 리더(fluorometric imaging plate reader)
HBSS Hank's 완충 염용액
HEPES 4-(2-히드록시에틸)-1-피페라진에탄술폰산
hM1 클로닝된 인간 M1 수용체
hM2 클로닝된 인간 M2 수용체
hM3 클로닝된 인간 M3 수용체
hM4 클로닝된 인간 M4 수용체
hM5 클로닝된 인간 M5 수용체
HOBT N-히드록시벤조트리아졸
HPLC 고성능 액체 크로마토그래피
IPA 이소프로판올
MCh 메틸콜린
MTBE 메틸 t-부틸 에테르
TFA 트리플루오로아세트산
본 명세서에 사용되었지만 정의되지 않은 임의의 다른 약어는 그것의 표준적이고, 일반적으로 받아들여지고 있는 의미를 갖는다. 달리 나타내지 않는다면, 시약, 물질, 및 용매는 상업적 공급업체(Sigma-Aldrich, Fluka 등)으로부터 구입하였으며 추가적인 정제과정 없이 사용하였다
달리 나타내지 않는다면, HPLC 분석은 3.5 미크론 입자 크기를 갖는 Zobrax Bonus RP 2.1 x 50 mm 컬럼(Agilent)이 구비된 Agilent(Palo Alto, CA) 시리즈 1100 기구를 이용하여 수행하였다. UV 흡광을 214 nm에서 검출하였다. 이용된 이 동상은 다음과 같았다(부피 기준): A는 ACN(2%), 물(98%), 및 TFA(0.1%)이고; B는 아세토니트릴(90%), 물(10%), 및 TFA(0.1%) 이다. HPLC 10-70 데이터를 6 분의 경사로(잔여물은 A 임) 10 내지 70% B를 0.5 mL/분의 유속으로 하여 획득하였다. 유사하게, HPLC 5-35 데이터 및 HPLC 10-90 데이터를 5 분의 경사로 5 내지 35%의 B; 또는 10 내지 90%의 B를 이용하여 획득하였다
액체 크로마토그래피 중량 분석법(LCMS) 데이터를 Applied Biosystems(Foster City, CA) Model API-150EX 기구를 가지고 획득하였다. LCMS 10-90 데이터를 5 분의 경사로 10 내지 90% 이동상 B를 이용하여 획득하였다.
제조 1
비페닐-2- 일카르밤산 피페리딘-4-일 에스테르
비페닐-2-이소시아네이트(97.5 g, 521 mmol) 및 4-히드록시-N-벤질피페리딘(105 g, 549 mmol)을 70℃에서 12 시간동안 함께 가열하였다. 그런 다음, 그 반응 혼합물을 50℃로 냉각하고 에탄올(1 L)를 부가한 다음, 6M HCl(191 mL)를 서서히 부가하였다. 그런 다음, 그 결과 생성된 혼합물을 주변온도로 냉각하고 암모늄 포르메이트(98.5 g, 1.56 mol)를 부가한 다음, 질소 기체를 그 용액을 통해 20 분동안 격렬하게 버블링 하였다. 그런 다음, 활성화된 탄소 상의 팔라듐(Pd/C)(20 g, 10 중량% 건조 기준)을 부가하고, 그 반응 혼합물을 40℃에서 12 시간동안 가열한 다음, Celite 패드를 통해 여과하였다. 그런 다음, 용매를 감압 하에서 제거하고, 1M HCl(40 mL)를 조 잔사에 부가하였다. 그런 다음, 혼합물의 pH를 10 N NaOH 를 이용하여 pH 12로 조정하였다. 수층을 에틸 아세테이트(2 x 150 mL)로 추출하고, 유기층을 건조하고(황산마그네슘), 여과하고, 용매를 감압 하에서 건조하여 표제 중간체 화합물 155 g을 생성시켰다(수율 100%). HPLC(10-70) Rt = 2.52; m/z: [M+H+] C10H20N2O2의 계산치: 297.15, 실측치: 297.3.
제조 2
N-벤질-N- 메틸아미노아세트알데히드
3구 2 L 플라스크에 N-벤질-N-메틸에탄올아민(30.5 g, 0.182 mol), DCM(0.5 L), DIPEA(95 mL, 0.546 mol), 및 DMSO(41 mL, 0.728 mol)을 가하였다. 아이스배쓰를 이용하여, 혼합물을 약 -10℃로 냉각하고, 삼산화황 피리딘 복합체(87 g, 0.546 mol)을 5 분 간격으로 4 번으로 나누어 부가하였다. 그 반응 혼합물을 -10℃에서 2 시간동안 교반하였다. 아이스 배쓰를 제거하기 전에, 그 반응 혼합물을 물을 부가함으로써 급냉시켰다. 수층을 분리하고 유기층을 물(0.5 L) 및 함수(0.5 L)로 세척한 다음, 황산마그네슘으로 건조하고 여과하여 표제 화합물을 생성시켰으며, 추가의 정제 과정 없이 사용하였다.
제조 3
비페닐-2- 일카르밤산 1-[2-( 벤질메틸아미노 )에틸]피페리딘-4-일 에스테르
DCM(0.5 L) 중에 제조 2의 생성물을 함유하는 2 L 플라스크에, 제조 1의 생성물(30 g, 0.101 mol)을 부가한 다음, 소듐 트리아세톡시보로하이드라이드(45 g, 0.202 mol)을 부가하였다. 그 반응 혼합물을 밤새 교반한 다음, 격렬히 교반하면서 1 N 염산(0.5 L)를 부가하여 급냉하였다. 3 개의 층이 관찰되었으며, 수층을 제거하였다. 1 N NaOH(0.5 L)로 세척한 후에, 균질한 유기층을 획득한 다음, 그것을 NaCl 표준 수용액(0.5 L)로 세척하고, 황산마그네슘으로 건조하고, 여과한 다음, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔사를 최소량의 이소프로판올에 용해하고, 그 용액을 0℃로 냉각시켜 고체를 형성시키고, 그 고체를 수집하고 차가운 이소프로판올로 세척하여 표제 화합물 42.6 g을 생성시킴으로써, 정제하였다(수율 95%). MS m/z: [M+H+] C28H33N3O2의 계산치: 444.3, 실측치: 444.6. Rf=3.5l 분 (10-70 ACN:H2O, 역상 HPLC).
제조 3A
비페닐-2- 일카르밤산 1-[2-( 벤질메틸아미노 )에틸]피페리딘-4-일 에스테르
N-벤질-N-메틸 에탄올아민을 메실화한 다음, 알킬화 반응에서 비페닐-2-일카르밤산 피페리딘-4-일 에스테르와 반응시켜 표제 화합물을 제조하였다.
500 mL 플라스크(반응기 플라스크)에, N-벤질-N-메틸에탄올아민(24.5 mL), DCM(120 mL), NaOH(80 mL; 30 중량%) 및 테트라부틸암모늄 클로라이드를 넣었다. 반응 내내 저속으로 혼합하면서, 그 혼합물을 -10℃로 냉각하고(냉각 배쓰), DCM (30 mL) 및 메실 클로라이드(15.85 mL)를 채운 부가 깔대기를 장착하여 30 분동안 일정한 속도로 적가하였다. 부가는 발열반응이었고, 온도를 -10℃로 다시 평형시 키는 동안 교반을 15 분간 계속하였다. 그 반응을 최소 10 분간유지하여, 과량의 메실 클로라이드의 충분한 가수분해가 확실히 이루어지도록 하였다.
250 mL 플라스크에 비페닐-2-일카르밤산 피페리딘-4-일 에스테르(26 g; 제조 1에 기재된 바와 같이 제조) 및 DCM(125 mL)를 넣고, 실온에서 15 분간 교반하고, 그 혼합물을 10℃로 냉각하여 슬러리를 형성시켰다. 그런 다음, 그 슬러리를 부가 깔대기를 통해 반응기 플라스크에 넣었다. 냉각 배쓰를 제거하고 반응 혼합물을 5℃로 가온하였다. 그 혼합물을 분별 깔대기에 옮기고, 층이 안정되도록 하고, 수층을 제거하였다. 유기층을 반응기 플라스크에 옮기고, 교반을 재개하고, 혼합물을 실온으로 유지하고, 반응을 HPLC로 총 3.5 시간동안 모니터링 하였다.
그 반응 플라스크에 NaOH(1M 용액; 100 mL)를 넣고, 교반하고, 층이 안정되도록 하였다. 유기층을 분리하고, 세척하고(NaCl 표준 용액), 그 부피를 진공 하에서 부분적으로 감소시키고, 반복적인 IPA 세척을 수행하였다. 고체를 수집하고, 대기 건조 하였다(25.85 g, 98% 순도). 모액을 추가로 처리함으로써(부피 감소, IPA, 냉각) 추가로 고체를 획득하였다.
제조 4
비페닐-2- 일카르밤산 1-(2- 메틸아미노에틸 )피페리딘-4-일 에스테르
Parr 수소화 플라스크에 제조 3의 생성물(40 g, 0.09 mol) 및 에탄올(0.5 L)를 가하였다. 그 플라스크를 질소 기체로 플러싱(flushing)하고, 활성탄소 상의 팔라듐(Pd/C)(15 g, 10 중량%(건조 기준), 37% 중량/중량)을 아세트산(20 mL)와 함 께 부가하였다. 그 혼합물을 3 시간동안 수소 분위기(~ 50 psi) 하에서 계속해서 Parr 수소화기(hydrogenator) 상에 두었다. 그런 다음, 그 혼합물을 여과하고 에탄올로 세척하였다. 여액을 농축하고 잔사를 최소량의 DCM 중에 용해하였다. 이소프로필 아세테이트(10 부피)를 서서히 부가하여 고체를 형성시키고, 그것을 수집하여 표제 화합물 22.0 g을 생성시켰다(70% 수율). MS m/z: [M+H+] C21H27N3O2의 계산치:354.2, 실측치: 354.3. Rf=2.96 분 (10-70 ACN:H2O, 역상 HPLC).
제조 5
베페닐 -2- 일카르밤산 1-(2-[(4- 포밀벤조일 ) 메틸아미노 ]에틸}피페리딘-4-일 에스테르
3 구 1 L 플라스크에 4-카르복시알데히드(4.77 g, 31.8 mmol), EDC(6.64 g, 34.7 mmol), HOBT(1.91 g, 31.8 mmol), 및 DCM(200 mL)를 넣었다. 혼합물이 균질할 때, DCM(100 mL) 중의 제조 4의 생성물(10 g, 31.8 mmol)의 용액을 서서히 부가하였다. 그 반응 혼합물을 실온에서 약 16 시간동안 교반한 다음, 물(1 x 100 mL), 1 N HCl(5x 60 mL), 1N NaOH(1 x 100 mL), 함수 (1 x 50 mL)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조하고, 여과한 다음, 농축하여 표제 화합물 12.6 g을 생성시켰다(92% 수율; HPLC 기준으로 85% 순도). MS m/z: [M+H+] C29H31N3O4 계산치: 486.2, 실측치:486.4. Rf=3.12 분 (10-70 ACN:H2O, 역상 HPLC).
실시예 1
비페닐-2- 일카르밤산 1-(2-{[4-(4- 카바모일피페리딘 -1- 일메틸 ) 벤조일 ] 메틸아미노 }에틸)피페리딘-4-일 에스테르
Figure 112007072428712-pct00004
3 구 2 L 플라스크에 이소니페코타미드(5.99 g, 40.0 mol), 아세트산(2.57 mL), 황산나트륨(6.44 g), 및 이소프로판올(400 mL)를 부가하였다. 반응 혼합물을 아이스 배쓰로 0-10℃로 냉각하고, 이소프로판올(300 mL) 중의 비페닐-2-카르밤산 1-(2-[(4-포밀벤조일)메틸아미노]에틸}피페리딘-4-일 에스테르(11 g, 22.7 mmol; 제조 5에 기재된 바와 같이 제조)의 용액을 서서히 부가하였다. 그 반응 혼합물을 실온에서 2 시간동안 교반한 다음, 0-10℃로 냉각하였다. 소듐 트리아세톡시보로하이드라이드(15.16 g, 68.5 mmol)을 나누어서 부가하고, 이 혼합물을 실온에서 16 시간동안 교반하였다. 그런 다음, 그 반응 혼합물을 감압 하에서 농축하여 약 50 mL의 부피로 하고, 이 혼합물을 1 N HCl(200 mL)을 이용하여 pH 3으로 산성화 하였다. 그 결과 생성된 혼합물을 1 시간동안 실온에서 교반한 다음, DCM(3 x 250 mL)으로 추출하였다. 그런 다음, 수상을 아이스 배쓰를 이용하여 0-5℃로 냉각하고, 50% NaOH 수용액을 부가하여 혼합물의 pH를 10으로 조정하였다. 그런 다음, 이 혼 합물을 이소프로필 아세테이트(3 x 300 mL)로 추출하고, 합한 유기층을 물(100 mL), 함수 (2 x 50 mL)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조하고, 여과하고 농축하여 표제 화합물 10.8 g을 생성시켰다(80% 수율, MS m/z: [M+H+] C35H43N5O4 계산치: 598.3, 실측치: 598.6, Rf= 2.32 분 (10-70 ACN:H2O, 역상 HPLC).
실시예 2
비페닐-2- 일카르밤산 1-(2-{[4-(4- 카바모일피페리딘 -1- 일메틸 ) 벤조일 ] 메틸아미노 }에틸)피페리딘-4-일 에스테르의 결정성 디포스페이트 염
비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르 500 mg(96% 순수 물질 0.826 mmol; 실시예 1에 기재된 바와 같이 제조)를 물 5 mL 및 1M 인산 1.5 mL에 넣었다. 1 M 인산 0.25 mL(2.1 몰당량에 상당)를 부가하여 pH를 약 5.3으로 조정하였다. 그 투명한 용액을 0.2 미크론 필터를 통해 여과하고, 냉동하고, 동결건조하여 무정형의 디포스페이트 염을 생성시켰다.
상기 무정형의 디포스페이트 염을 IPA:ACN(1:1) 2 mL에 용해하였다. 물 0.1 mL를 부가하고 그 혼합물을 교반하면서 60℃로 가열하였다. 상기 고체의 거의 대부분을 용해하였다. 상기 현탁액을 밤새 교반하면서 주위온도로 냉각시켰다. 그 결과 생성되는 결정을 여과에 의해 수집하고 20 분동안 공기건조하여 표제 화합물(18.5 mg, 93% 수율)을 백색의 결정성 고체로서 생성시켰다. 평광 현미경으로 조사 시, 상기 결정은 약간의 브리프린전스(briefringence)를 나타내었다.
실시예 3
비페닐-2- 일카르밤산 1-(2-{[4-(4- 카바모일피페리딘 -1- 일메틸 ) 벤조일 ] 메틸아미노 }에틸)피페리딘-4-일 에스테르의 결정성 디포스페이트 염
비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르 5.0 g(유리염기; 실시예 1에 기재된 바와 같이 제조)를 IPA:ACN (1:1) 800 mL와 합하였다. 물 4.0 mL를 부가하고, 그 혼합물을 교반하면서 50℃로 가열하여 투명한 용액을 형성시켰다. 여기에 1 M 인산 16 mL를 50℃에서 적가하였다. 그 결과 생성된 불투명한 용액을 5 시간동안 50℃에서 교반한 다음, 밤새 서서히 교반하면서 냉각하여 주위 온도로 하였다. 그 결과 생성된 결정을 여과에 의해 수집하고 1 시간동안 공기 건조한 다음, 18 시간동안 진공 하에 두어, 표제 화합물(5.8 g, 75% 수율)을 백색의 결정성 고체(HPLC에 의한 순도 98.3%)로서 생성시켰다.
실시예 4
비페닐-2- 일카르밤산 1-(2-{[4-(4- 카바모일피페리딘 -1- 일메틸 ) 벤조일 ] 메틸아미노 }에틸)피페리딘-4-일 에스테르의 결정성 모노설페이트 염
비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르 442 mg(96% 순수물질 0.739 mmol; 실시예 1에 기재된 바와 같이 제조)를 H2O:ACN (1:1) 5 mL에 넣고, pH를 모니터링 하면서 1N 황산 1.45 mL를 서서히 부가하였다. pH를 약 pH 3.3으로 조정하였다. 그 투명한 용액을 0.2 미크론 필터를 통해 여과하고, 냉동한 다음, 동결건조하여 모노설페이트 염을 생성시켰다.
모노설페이트 염 30.3 mg을 IPA:ACN(10:1) 1.65 mL에 용해하였다. 그 바이얼을 미리 예열된 60℃의 수조에서 30 분간 두어서 그 현탁액을 가열하였다. 점성의 물질이 형성되었고, 가열 온도를 30 분간 70℃로 올렸다. 물질이 점성으로 남아있기 때문에, 가열 온도를 60℃로 낮추고, 그 혼합물을 추가로 1 시간동안 가열하였다. 가열 전원을 끄고, 그 혼합물을 실온으로 냉각하였다. 4 일 후에, 고체 물질이 생성되었으며, 그 샘플을 추가로 9 일간 더 정치시켰다. 그런 다음, 그 고체를 여과하고, 1 시간동안 진공펌프를 이용하여 건조하여 표제 화합물을 생성시켰다(23 mg, 76% 수율).
실시예 5
비페닐-2- 일카르밤산 1-(2-{[4-(4- 카바모일피페리딘 -1-일 메틸 ) 벤조일 ] 메틸아미노 }에틸)피페리딘-4-일 에스테르의 결정성 모노설페이트 염
비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르 모노설페이트 염(실시예 4에 기재된 바와 같이 제조) 161 g을 IPA:ACN(10:1) 8.77 mL에 용해하였다. 그 현탁액을, 바이얼을 70℃로 미리 예열된 수조에 1.5 시간동안 둠으로써 가열하였다. 오일 방울이 5 분 이 내에 형성되었다. 가열 온도를 60℃로 낮추고, 그 혼합물을 추가로 1.5 시간동안 가열한 다음, 50℃에서 40 분간 가열하고, 40℃에서 40 분간 가열하고, 30℃에서 45 분간 가열하였다. 가열 전원을 끄고, 그 혼합물을 천천히 실온으로 냉각시켰다. 다음 날, 그 물질을 현미경으로 관찰한 결과, 침상 및 판상을 나타내었다. 그런 다음, 그 물질을 2 시간동안 40℃에서 가열하고, 30 분동안 35℃에서 가열한 다음, 30 분동안 30℃에서 가열하였다. 가열 전원을 끄고, 그 혼합물을 서서히 실온으로 냉각시켰다. 그런 다음, 그 고체를 여과하고, 1 시간동안 진공펌프를 이용하여 건조시켜 표제 화합물을 생성시켰다(117 mg, 73% 수율).
실시예 6
비페닐-2- 일카르밤산 1-(2-{[4-(4- 카바모일피페리딘 -1-일 메틸 ) 벤조일 ] 메틸아미노 }에틸)피페리딘-4-일 에스테르의 결정성 디옥살레이트 염
비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르 510 mg(96% 순수물질 0.853 mmol; 실시예 1에 기재된 바와 같이 제조)를 H2O:ACN (1:1) 5 mL에 넣고, pH를 모니터링 하면서 1 M 옥살산 수용액 1.7 mL을 서서히 부가하였다. 그 pH를 pH 3.0으로 조정하였다. 그 투명한 용액을 0.2 미크론 필터를 통해 여과하고, 냉동한 다음, 동결건조하여 디옥살레이트 염을 생성시켰다.
디옥살레이트 염 31.5 mg을 94%IPA/6%H2O 2.76 mL에 용해하였다. 그 혼합물을 미리 예열된 60℃의 수조에서 2.5 시간동안 교반하였다. 25 분 후에, 샘플 모 두가 용액 상태가 되었다. 가열 전원을 끄고, 그 혼합물을 실온으로 냉각시켰다. 다음 날, 소량의 점성의 물질이 존재하였다. 그 바이얼을 4℃에서 냉장보관 하였다. 4 일 후에, 점성의 물질이 여전히 존재하였다. 그런 다음, 그 바이얼을 실온에 두고 1 달 후에 관찰하였다. 물질이 고체화 되었고, 현미경으로 관찰 시 결정성인 것으로 관찰되었다. 그런 다음, 그 고체를 여과하고, 1 시간동안 진공펌프를 이용하여 건조하여 표제 화합물을 생성시켰다(20 mg, 63.5 % 수율).
실시예 7
비페닐-2- 일카르밤산 1-(2-{[4-(4- 카바모일피페리딘 -1-일 메틸 ) 벤조일 ] 메틸아미노 }에틸)피페리딘-4-일 에스테르의 결정성 디옥살레이트 염
상기 디옥살레이트 염(실시예 6에 기재된 바와 같이 제조) 150 mg을 94%IPA/6%H2O 13.1 mL에 용해하였다. 그 혼합물을 60℃로 미리 예열된 수조에 2.5 시간동안 교반하였다. 가열 전원을 끄고, 그 혼합물을 천천히 실온으로 냉각시켰다. 그 바이얼을 4℃에서 냉장보관 하였다. 6 일 후에, 유상 물질이 바이얼의 측면에 결정인 것으로 보이는 것과 함께 관찰되었다. 그런 다음, 그 바이얼을 실온에 도달되도록 하고, 그 시점에서 종자(실시예 6에서 제조된 결정성 물질)를 부가하고 16 일 동안 정치시켰다. 이러는 동안, 보다 많은 결정이 용액으로부터 석출되는 것으로 관찰되었다. 그런 다음, 그 고체를 여과하고 14 시간동안 진공펌프를 이용하여 건조시켜 표제 화합물을 생성시켰다(105 mg, 70% 수율).
실시예 8
비페닐-2- 일카르밤산 1-(2-{[4-(4- 카바모일피페리딘 -1-일 메틸 ) 벤조일 ] 메틸아미노 }에틸)피페리딘-4-일 에스테르의 결정성 유리염기 (I 형)
비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르 109 mg(실시예 1에 기재된 바와 같이 제조)를 H2O:ACN (1:1) 0.56 mL에 용해하였다. 그 현탁액을 바이얼(입구에 캡이 느슨하게 장착)에 두어서 더 느린 증발이 이루어지도록 하였다. 비록 질소가 증발을 위해 사용되지 않았고 주위 환경에만 사용었지만, 그 바이얼을 질소 흐름 환경 하에서 두었다. 1 일 이내에 침전물이 눈에 보였으며, 그것은 현미경 하에서 결정형인 것으로 관찰되었다. 그런 다음, 그 고체를 고진공 라인에 두어 모든 용매를 제거하여, 표제 화합물을 생성시켰다. 정량적 회수 결과, HPLC로 97.8%의 순도를 나타내었다.
택일적인 방법에서, H2O:ACN (1:1)(약 350 mg/mL)에 녹인 후에, 그 바이얼을 5℃에서 저장하자, 침전물이 2 일째에 가시화되었다. 그 고체를 여과하고, 물로 헹구고, 고진공 하에서 밤새 건조하였다. 회수율은 55% 였으며, 고체는 98.2%의 순도를 가지고, 액체는 92.8%의 순도를 갖는 것으로 나타났다.
실시예 9
비페닐-2- 일카르밤산 1-(2-{[4-(4- 카바모일피페리딘 -1-일 메틸 ) 벤조일 ] 메틸아미노 }에틸)피페리딘-4-일 에스테르의 결정성 유리염기 (I 형)
비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아 미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르 50.4 mg(실시예 1에 기재된 바와 같이 제조)를 H2O:ACN (1:1) 0.144 mL에 용해하였다. 그 현탁액을 바이얼(입구에 캡이 느슨하게 장착)에 두어서 더 느린 증발이 이루어지도록 하였다. 그 바이얼을 4℃에서 6 일동안 냉장보관 하였다. 침전물이 2 일 후에 가시화 되었다. 그 고체를 여과하고, 고진공 라인에 두어 모든 용매를 제거하여, 표제 화합물을 백색의 고체로서 생성시켰다(27.8 mg, 55.2% 수율).
실시예 10
비페닐-2- 일카르밤산 1-(2-{[4-(4- 카바모일피페리딘 -1-일 메틸 ) 벤조일 ] 메틸아미노 }에틸)피페리딘-4-일 에스테르의 결정성 유리염기 (I 형)
비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르 230 mg(실시예 1에 기재된 바와 같이 제조)를 약한 열을 이용하여 H2O:ACN (1:1) 0.2 mL에 용해하였다. 그런 다음, 그 혼합물을 70℃ 수조에서 2 시간동안 가열하였다. 가열 전원을 끄고, 그 혼합물을 실온으로 냉각시킨 다음, 4℃에서 1 시간동안 냉장보관 하였다. 그런 다음, 물 50 ㎕를 부가한 다음(오일 방출), ACN 10 ㎕를 부가하여 샘플을 용액으로 다시 돌렸다. 실온에서 서서히 교반하면서, 종자(실시예 8에서 제조된 결정 물질)를 부가하였다. 결정이 형성되기 시작하였고, 그 혼합물을 서서히 교반하면서 밤새 두었다. 다음날, 가열 냉각 사이클을 적용하였다(30℃에서 10 분간, 40℃에서 10 분간, 그런 다음 50℃에서 20 분간). 가열 전원을 끄고, 그 혼합물을 서서히 교반하면서 밤새 냉각 시켰다. 그 다음날, 제 2 가열/냉각 사이클을 적용하였다(60℃에서 1 시간, 70℃에서 용해되는 것으로 관찰). 가열 전원을 끄고, 그 혼합물을 서서히 교반하면서 밤새 냉각시켰다. 그 다음날, 결정이 나타났으며 제 3 가열/냉각 사이클을 적용하였다(60℃에서 3 시간). 가열 전원을 끄고, 그 혼합물을 서서히 교반하면서 밤새 냉각시켰다. 그 다음날, 가열/냉각 사이클을 적용하였다(60℃에서 3 시간, 서서히 냉각, 그런 다음 60℃에서 3 시간). 가열 전원을 끄고, 그 혼합물을 서서히 교반하면서 밤새 냉각시켰다. 3 일 후, 고체를 여과하고 고진공 라인에 두어 모든 용매를 제거하여 표제 화합물을 생성시켰다.
실시예 11
비페닐-2- 일카르밤산 1-(2-{[4-(4- 카바모일피페리딘 -1-일 메틸 ) 벤조일 ] 메틸아미노 }에틸)피페리딘-4-일 에스테르의 결정성 유리염기 (Ⅱ 형)
비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르(실시예 1에 기재된 바와 같이 제조) 70 mg을 ACN 0.1 mL에 용해하였다. MTBE 0.3 mL를 부가한 후에, 상기 용액이 탁하게 변했다. 추가로 ACN 50 ㎕를 부가하여 용액을 투명하게 하였다(155 mg/mL ACN:MTBE = 1:2). 그 혼합물을 바이얼에 넣고 뚜껑을 닫았다. 다음날, 결정이 관찰되었다. 그런 다음, 그 고체를 여과하고, 고진공 라인에 두어 모든 용매를 제거하여 표제 화합물을 생성시켰다.
실시예 12
분말 X-선 회절
분말 X-선 회절 패턴을 Cu Kα(30.0 kV, 15.0 mA) 방사선 조사를 이용하여 Rigaku 회절장치(diffractometer)로 획득하였다. 분석은 2 내지 45° 범위에 걸쳐 0.03°의 단계 크기로 분당 3°의 계속적인 스캔 모드로 작동하는 측각기로 수행하였다. 샘플을 석영 표본 홀더 상에 분말 물질의 박막으로서 제조하였다. 기구를 실리콘 표본 물질을 이용하여 캘리브레이션 하였다.
실시예 2의 디포스페이트 염 샘플의 PXRD 패턴은 그 물질이 결정형이라는 것을 나타내었다. 실시예 3의 결정성 디포스페이트 염 샘플의 대표적인 PXRD 패턴을 도 1에 나타내었다. 실시예 4의 모노설페이트 염 샘플에 대한 PXRD 패턴은 그 물질이 결정성인 것을 나타내었다. 실시예 5의 결정성 모노설페이트 염 샘플의 대표적인 PXRD 패턴을 도 8에 나타내었다. 실시예 6의 디옥살레이트 염 샘플의 PXRD 패턴은 물질이 결정성인 것을 나타내었다. 실시예 7의 결정성 디옥살레이트 염 샘플의 대표적인 PXRD 패턴을 도 13에 나타내었다. 실시예 8 및 9의 유리염기(I 형)의 샘플의 PXRD 패턴은 물질이 결정성인 것을 나타내었다. 실시예 10의 유리 염기(I 형)의 샘플의 대표적인 PXRD 패턴을 도 18에 나타내었다. 실시예 11의 유리 염기(Ⅱ 형)의 샘플의 대표적인 PXRD 패턴을 도 23에 나타내었다.
실시예 13
열 분석
Thermal Analyst 제어기가 구비된 TA Instruments Model Q-10을 이용하여 시차 주사 열량법(DSC)을 수행하였다. 데이터를 수집하고, TA Instruments Thermal Solutions 소프트웨어를 이용하여 분석하였다. 약 1-4 mg의 샘플을 정확하게 칭량 하여 뚜껑이 달린 알루미늄 팬에 두었다. 상기 샘플을 주위 온도로부터 약 300℃까지 10 ℃/분의 선형 가열 램프를 이용하여 평가하였다. DSC 셀을 사용하는 동안 건조 질소로 퍼지하였다.
실시예 3의 결정성 디포스페이트 염의 샘플의 대표적인 DSC 기록은 도 2에 나타낸 바와 같이, 약 63.8℃ 및 154.3℃에서 두 개의 전이를 나타내었다. 이러한 DSC 기록은 이러한 결정성 디포스페이트 염이 우수한 약 154.3℃에서 융점을 갖고, 150℃ 미만에서는 열분해를 나타내지 않는 허용 가능한 것 내지 우수한 열 안정성을 갖는다는 것을 입증한다. 상기 DSC 기록은 약 135℃에서 흡열 열 흐름의 개시를 나타내었다.
실시예 4의 모노설페이트 염의 대표적인 DSC 기록은 약 57℃ 및 73.2℃에서 두 개의 전이를 나타내었다. 실시예 5의 결정성 모노설페이트 염의 샘플의 대표적인 DSC 기록은 도 10에 나타난 바와 같이, 76℃에서 전이를 나타내었으며, 이는 이러한 결정성 모노설페이트 염이 약 76.5℃에서 용융 피크를 갖는다는 것을 입증한다.
실시예 6의 결정성 디옥살레이트 염 샘플의 대표적인 DSC 기록은 69.2℃ 및 122.8℃에서 두 개의 전이를 나타내었다. 실시예 7의 결정성 디옥살레이트 염 샘플의 대표적인 DSC 기록은 도 15에 나타난 바와 같이 73℃에서 전이를 나타내었다. 이러한 DSC 기록은 이러한 결정성 디옥살레이트 염이 약 73.7℃에서 용융 피크를 갖는다는 것을 입증한다.
실시예 8의 결정성 유리 염기(I 형) 샘플의 대표적인 DSC 기록은 90.4℃에서 전이를 나타내었다. 실시예 9의 결정성 유리 염기(I 형) 샘플의 DSC 기록은 86.1℃ 및 103.6℃에서 두 개의 전이를 나타내었다. 실시예 10의 결정성 유리 염기(I 형) 샘플의 대표적인 DSC 기록은 도 19에 나타난 바와 같이, 폐쇄된 팬(83.9℃ 및 102.1℃)에서 두 개의 전이를 나타내었지만, 개방된 팬(초기 피크는 물 및/또는 용매로 인한 것이다)에서는 102.5℃에서 하나의 전이를 나타낸다. 이러한 DSC 기록은 이러한 결정성 유리 염기가 약 102.7℃에서 용융 피크를 갖고, 80℃ 미만에서는 열분해를 나타내지 않는 탁월한 열 안정성을 갖는다는 것을 입증한다. 상기 DSC 기록은 약 90℃에서 흡열 열 흐름의 개시를 나타내었다.
실시예 11의 결정성 유리염기(Ⅱ형) 샘플의 대표적인 DSC 기록은 도 24에 나타난 바와 같이 98.6℃에서 전이를 나타내었으며, 이는 이 결정성 유리 염기가 약 98.6℃에서의 용융 피크를 갖고 75℃ 미만에서는 열분해가 나타나지 않는 열 안정성을 갖는다는 것을 입증한다. 상기 DSC 기록은 또한 약 75℃에서 흡열 열 흐름의 개시를 나타내었다.
열중량 분석(TGA)을 고해상도능을 갖는 TA Instruments Model Q-50 모듈을 이용하여 수행하였다. 데이터를 TA Instruments Thermal Solutions 소프트웨어를 이용하여 분석하였다. 약 10 mg의 샘플을 백금 팬 상에 두고, 주위온도로부터 300℃의 고해상도 가열 속도로 스캐닝 하였다. 저울과 용광로 챔버를 사용하는 동안 질소 흐름으로 퍼징하였다.
실시예 3의 결정성 디포스페이트 염의 샘플의 대표적인 TGA 기록은 도 3에 나타난 바와 같이, 155℃ 미만의 온도에서 용매 및/또는 물(8.2%)의 손실을 나타내 었다.
실시예 4의 결정성 모노설페이트 염의 샘플의 TGA 기록은 116℃ 미만의 온도에서 용매 및/또는 물(12.6%)의 손실을 나타내었다. 실시예 5의 결정성 모노설페이트 염의 샘플의 대표적인 TGA 기록은 도 9에 나타난 바와 같이, 150℃ 미만의 온도에서 용매 및/또는 물(13.7%)의 손실을 나타내었다.
실시예 6의 결정성 디옥살레이트 염의 샘플의 TGA 기록은 125℃ 미만의 온도에서 용매 및/또는 물(15.4%)의 손실을 나타내었다. 실시예 7의 결정성 디옥살레이트 염의 샘플의 대표적인 TGA 기록은 도 14에 나타난 바와 같이, 125℃ 미만의 온도에서 용매 및/또는 물(12.7%)의 손실을 나타내었다.
실시예 8의 결정성 유리염기(I 형)의 샘플의 TGA 기록은 75℃ 미만의 온도에서 용매 및/또는 물(7.3%)의 손실을 나타내었다. 실시예 9의 결정성 유리염기(I 형)의 샘플의 TGA 기록은 70℃ 미만의 온도에서 용매 및/또는 물(5.2%)의 손실을 나타내었다. 실시예 10의 결정성 유리염기(I 형)의 샘플의 대표적인 TGA 기록은 도 20에 나타난 바와 같이, 98℃ 미만의 온도에서 용매 및/또는 물(3.8%)의 손실을 나타내었다.
실시예 11의 결정성 유리염기(Ⅱ 형)의 샘플의 대표적인 TGA 기록은 도 25에 나타난 바와 같이, 98℃ 미만의 온도에서 용매 및/또는 물(3.0%)의 손실을 나타내었다.
이러한 TGA 기록은 본 발명의 결정성 화합물이 실온 내지 적당히 상승된 온도(예: 75-150℃)에서 소량의 중량을 소실하며 이는 잔여 수분 또는 용매의 소실과 일치한다는 것을 나타낸다.
실시예 14
동역학적 수분 흡수 평가
동역학적 수분 흡수(DMS) 평가(수분 흡착-탈착 프로파일로서 공지)를 VTI 기압 미량천칭, SGA-100 시스템(VTI Corp., Hialeah, FL33016)을 이용하여 수행하였다. 약 10 mg의 샘플 사이즈를 이용하고 수분을 분석 개시시 주위 값에서 세팅하였다. 전형적인 DMS 평가는 세 가지의 스캔: 주위 내지 2% 상대습도(RH), 2% RH 내지 90% RH, 5% RH/단계의 스캔 속도로 90% 내지 5% RH. 중량은 2 분마다 측정하였으며, 샘플의 중량이 5 개의 연속적인 시점에서 0.01% 이내로 안정할 경우 RH를 다음 값(+/- 5% RH)으로 변경시켰다.
실시예 3의 결정성 디포스페이트 염의 샘플의 대표적인 DMS 기록은, 도 4에 나타난 바와 같이 2-90% RH에 노출 시 3.3%의 중량 상승을 나타내고 40-75% RH의 습도 범위에서 0.6% 중량 상승을 갖는 낮은 흡습성의 가역적인 흡착/탈착 프로파일을 나타내었다.
실시예 5의 결정성 모노설페이트 염 샘플의 대표적인 DMS 기록은 도 11에 나타난 바와 같이 2-90% RH에 노출 시 10%의 중량 상승을 나타내고 40-75% RH의 습도 범위에서 1.8% 중량 상승을 갖는 낮은 흡습성의 가역적인 흡착/탈착 프로파일을 나타내었다.
실시예 7의 결정성 디옥살레이트 염 샘플의 대표적인 DMS 기록은 도 16에 나타난 바와 같이 2-90% RH에 노출 시 5.3 %의 중량 상승을 나타내고 40-75% RH의 습 도 범위에서 1.1% 중량 상승을 갖는 낮은 흡습성의 가역적인 흡착/탈착 프로파일을 나타내었다.
실시예 10의 결정성 유리염기(I 형) 샘플의 대표적인 DMS 기록은 도 21에 나타난 바와 같이 2-90% RH에 노출 시 10%의 중량 상승을 나타내고 40-75% RH의 습도 범위에서 1.2% 중량 상승을 갖는 낮은 흡습성의 가역적인 흡착/탈착 프로파일을 나타내었다.
실시예 11의 결정성 유리염기 샘플의 대표적인 DMS 기록은 도 26에 나타난 바와 같이 2-90% RH에 노출 시 9%의 중량 상승을 나타내고 40-75% RH의 습도 범위에서 1.3% 중량 상승을 갖는 낮은 흡습성의 가역적인 흡착/탈착 프로파일을 나타내었다.
이러한 DMS 기록은 본 발명의 결정성 화합물이 낮은 흡습성의 가역적인 흡착/탈착 프로파일을 갖는다는 것을 입증한다. 본 발명의 결정성 화합물은 광범위한 습도 범위에 노출 시 허용 가능한 중량 상승을 갖는다. 상기 가역적 수분 흡착/탈착 프로파일은 본 발명이 결정성 화합물이 허용 가능한 흡습성을 가지며 조해성이 아니라는 것을 입증한다.
실시예 15
고체 상태 안정성 평가
실시예 3의 결정성 디포스페이트 염 샘플을 각각 약 1-2 mg을 -20℃(밀폐 용기) 및 40℃/75%RH(개방 및 밀폐 용기)에서 여러 3 mL 보로실리케이트 바이얼에 저장하였다. 특정 간격에서, 대표적인 바이얼의 전체 함량을 하기 HPLC 방법에 따라 분석하였다.
컬럼: Xterra Ms C18, 4.6 x 250 mm, 5 ㎛(Part No. 186000494); 이동상 A: 0.1 M NH4Ac, pH 7.0; 이동상 B: 100% AcN; 유속: 1 mL/분; 주사 부피: 10 ㎕; 검출기: 240 nm; 경사-시간(분)(% 이동상 B): 0.0(8); 5.00(28); 22.00(42); 30.00(100); 35.00(100); 35.10(8); 및 45.00(8). 샘플을 pH 5의 10 mM 시트레이트 완충식염수 중에 0.5 mg/mL 스탁 용액으로서 제조하였다.
실시예 3의 결정성 디포스페이트 염의 경우, 샘플의 최초 순도는 HPLC 면적 분석에 따르면 98.3%로 결정되었다. 6 주동안의 저장 후에, 모든 조건 하에서 저장된 샘플의 경우, 검출 가능한 화학적 순도의 변화가 없었으며, 관찰 가능한 물질의 외관 변화가 없었으며, DSC 및 TGA에 의한 분석은 검출 가능한 차이를 나타내지 않았다.
실시예 16
원소 분석
본 발명의 결정성 화합물의 샘플의 하기 원소 백분율은 Flash EA 1112 원소 분석기(CE Elantech, Lakewood, NJ)를 이용하여 연소 분석에 의해 결정하였다.
실시예 5의 결정성 모노설페이트 염의 경우, 탄소 52.88%, 수소 7.10%, 질소 8.81%, 산소 27.17%, 및 황 4.03%(기대치); 탄소 52.11%, 수소 6.90%, 질소 8.42%, 산소 24.94%, 및 황 4.06%(결과치)인 것으로 나타났다.
실시예 7의 결정성 디옥살레이트 염의 경우, 탄소 54.54%, 수소 60.57% , 질 소 8.15%, 및 산소 30.74%(기대치); 탄소 56.33%, 수소 6.90%, 질소 8.22%, 및 산소 26.32%(결과치)인 것으로 나타났다.
실시예 17
미분화
실시예 3의 결정성 디포스페이트 염의 샘플 13 g을 제트 밀로 미분화하여 현미경으로 관찰 시 브리프린전스를 갖는 자유 유동성의 백색 분말 8.7 g을 생성시켰다(회수율 67%). 미분화 전의 결정성 디포스페이트는 HPLC 면적 백분율로 결정 시 초기 순도가 98.1% 인 것으로 나타났다. 미분화 물질의 순도는 동일하였다. 미분화 전의 물질의 수분 함량은 6.54 중량% 였으며, 미분화된 물질의 수분 함량은 6.23 중량% 였다.
미분화 과정 동안 새로운 문제점이 발견되지 않았다. 입자 크기 분포는 다음과 같았다:
Figure 112007072428712-pct00005
분말 X-선 회절 패턴, TGA, DSC, DMS, 화학적 순도, 키랄 순도, 및 수분 함량에서 미분화 물질의 비미분화 물질에 대한 유의적인 변화가 관찰되지 않았다. 예를 들어, 실시예 14에서 알 수 있는 바와 같이, 실시예 3의 결정성 디포스페이트 염의 샘플의 대표적인 DSC 기록은 40-75% RH의 습도 범위에서 0.6% 중량 증가를 나타낸 반면에, 미분화된 물질은 상기 습도 범위에서 0.7% 중량 증가를 나타내었다.
실시예 18
흡입 용액 안정성
pH 5의 10 mM 시트레이트 완충 식염수 중에 0.5 mg/mL 유리 염기 등가량(실시예 3에 기재된 바와 같이 제조된 결정성 디포스페이트 염을 이용)의 용액을 제조하였다. 결정성 염의 용해도는 상기 완충 용액에서 40 mg/mL의 유리 염기 등가량보다 더 컸다. 40℃/75% RH에서 한 달간 저장한 후에 0.5% 미만의 분해가 관찰되었다.
어세이 1
라디오 리간드 결합 어세이
세포 발현으로부터의 멤브레인 제조
hM 1 , hM 2 , hM 3 및 hM 4 무스카린 수용체 서브타입
복제된 인간 hM1, hM2, hM3 및 hM4 무스카린 수용체 서브타입을 안정적으로 발현하는 CHO 세포주는 각각 10% FBS 및 250 ㎍/mL 제네티신이 보강된 HAM's F-12로 구성된 배지 중에 컨플루언시에 가까워지도록 배양하였다. 상기 세포를 5% CO2, 37℃ 배양기 중에 배양시키고, dPBS 중의 2 mM EDTA로 채취하였다. 세포를 650 x g에서 5 분간의 원심분리에 의해 수집하고, 세포 펠렛을 -80℃에서 냉동 건조하거 나 막을 즉시 제조하였다. 멤브레인 제조를 위해서는, 세포 펠렛을 용해 완충액 중에 다시 현탁시키고 Polytron PT-2100 조직 붕괴기(Kinematica AG; 20 초 x 2 파열)로 균질화 하였다. 조 막을 4℃에서 40,000 x g에서 15 분간 원심분리 하였다. 그런 다음, 멤브레인 펠렛을 재현탁 완충액으로 재현탁하고, Polytron 조직 붕괴기로 다시 균질화 하였다. 멤브레인 현탁액의 단백질 농도를 Lowry, O. et al., Journal of Biochemistry 193:265(1951)에 기재된 방법에 의해 결정하였다. 모든 멤브레인을 80℃에서 분액 별로 냉동하거나 즉시 이용하였다. 제조된 hM5 수용체 멤브레인의 분액을 Perkin Elmer로부터 직접적으로 입수하였으며, 사용할 때까지 -80℃에서 저장하였다.
무스카린 수용체에 대한 라디오리간드 결합 어세이
서브타입 hM 1 , hM 2 , hM 3 hM 4 및 hM 5
라디오리간드 결합 어세이를 총 어세이 부피가 100 ㎕ 중에서 96-웰 마이크로적정 플레이트에서 수행하였다. hM1, hM2, hM3, hM4, 또는 hM5 무스카린 서브타입 중 어느 하나를 안정적으로 발현하는 CHO 세포 멤브레인을 어세이 완충액 중에 희석하여 다음과 같은 특정 표적 단백질 농도(㎍/웰)로 희석하였다: hM1의 경우 10 ㎍, hM2의 경우 10-15 ㎍, hM3의 경우 10-20 ㎍, hM4의 경우 10-20 ㎍, 그리고 hM5의 경우 10-12 ㎍. 상기 멤브레인을 어세이 플레이트 부가 전에 Polytron 조직 붕괴기를 이용하여(10 초) 간단하게 균질화하였다. 라디오리간드의 KD 값을 결정하기 위한 포화 결합 연구는 0.001 nM 내지 20 nM 범위 농도의 L-[N-메틸-3H]스코폴라민 메틸 클로라이드([3H]-NMS)(TRK666, 84.0 Ci/mmol, Amersham Pharmacia Biotch, Buckinghamshire, England)를 이용하여 수행하였다. 시험 화합물의 Ki 값을 결정하기 위한 치환 어세이를 1 nM 및 11개의 서로 다른 시험 화합물 농도에서 [3H]-NMS로 수행하였다. 시험 화합물을 우선 희석 완충액 중에 400 μM의 농도로 희석한 다음, 최종 농도가 10 pM 내지 100 μM이 될 때까지 희석 완충액으로 5x로 계열 희석하였다. 어세이 플레이트로의 부가 순서 및 부피는 다음과 같다: 25 ㎕ 라디오리간드, 25 ㎕ 희석 시험 화합물, 및 50 ㎕ 멤브레인. 어세이 플레이트를 37℃에서 60 분간 배양하였다. 결합 반응은 1% BSA로 예비 처리된 GF/B 유리섬유 필터 플레이트(Perkin Elmer Inc., Wellesley, MA)를 통한 신속한 여과에 의해 종결시켰다. 필터 플레이트를 세척 완충액(HEPES 10 mM)으로 3 회 세척하여 미결합 방사성 활성을 제거하였다. 그런 다음, 플레이트를 공기 건조하고, 50 ㎕ Microscint-20 liquid 신틸레이션(scintillation) 유체(Perkin Elmer Inc., Wellesley, MA)를 각각의 웰에 부가하였다. 그런 다음, 그 플레이트를 PerkinElmer Topcount 액체 신틸레이션 카운터(Perkin Elmer Inc., Wellesley, MA)에서 계수하였다. 결합 데이터를 일 부위 경쟁 모델을 이용하는 GrpahPad Prism Software 팩키지(GraphPad Software, Inc., San Die해, CA)로 비선형 회귀 분석법에 의해 분석하였다. 시험 화합물의 Ki 값을 Cheng-Prusoff 식을 이용하여 방사성 리간드의 관찰된 IC50 값 및 KD 값으로부터 계산하였다(Cheng Y; Prusoff W. H. Biochemical Pharmacology 22(23): 3099- 108 (1973)). 기하평균 및 95% 신뢰도 구간을 결정하기 위해 Ki 값을 pKi 값으로 변환시켰다. 그런 다음, 이러한 요약 통계를 데이터 보고를 위해 Ki 값으로 다시 전환시켰다.
이러한 어세이에서, 더 낮은 Ki 값은 시험 화합물이 테스트하는 수용체에 대해 더 높은 결합 친화도를 갖는다는 것을 나타낸다. 화학식 I의 화합물은 이러한 또는 유사한 어세이에서 시험할 경우, M3 무스카린 수용체 서브타입에 대해 약 5 nM 미만의 Ki 값을 갖는 것으로 밝혀졌다.
어세이 2
무스카린 수용체 기능적 효능 어세이
cAMP 축적의 작용제-매개 억제의 차단
이러한 어세이에서, 시험 화합물의 기능적 효능을 hM2 수용체를 발현하는 CHO-K1 세포에서 포스콜린-매개 cAMP 축적의 옥소트레모린-억제를 차단하는 시험 화합물의 능력을 측정함으로써 결정하였다.
cAMP 어세이는 제조사의 지시사항에 따라 125I-cAMP와 함께 Flashplate 아데닐릴 사이클라제 활성화 어세이 시스템(MEN SMP004B, PerkinElmer Life Science Inc., Boston, MA)을 이용하는 방사성 면역 어세이 포맷에서 수행하였다.
상기 세포 배양 및 멤브레인 제조 섹션에 기재된 바와 같이, 세포를 dPBS로 1 회 세척하고 트립신-EDTA 용액(0.05% 트립신/0.53 mM EDTA)으로 세척하였다. 떼어낸 세포를 dPBS 50 mL 중에서 5 분동안 650 x g에서 원심분리에 의해 2회 세척하였다. 그런 다음, 세포 펠렛을 10 mL dPBS에서 재현탁하고, 세포를 Coulter Z1 Dual Particle Counter(Beckman Coulter, Fullerton, CA)로 계수하였다. 세포를 5 분동안 650 x g에서 다시 원심분리하고, 자극 완충액 중에서 재현탁하여 1.6 x 106 - 2.8 x 106 세포/mL의 어세이 농도로 하였다. 시험 화합물을 우선 희석 완충액(1 mg/mL BSA(0.1%)가 보강된 dPBS) 중에서 400 μM의 농도로 용해한 다음, 희석 완충액으로 계열 희석하여 최종 몰농도가 100 μM 내지 0.1 nM 범위가 되도록 하였다. 옥소트로메트린을 유사한 방식으로 희석하였다.
AC 활성의 옥소트레모린 억제를 측정하기 위해, 25 ㎕ 포스콜린(dPBS 중에서 희석하여 최종 농도 25 μM), 희석된 옥소트레모린 25 ㎕, 및 세포 50 ㎕를 작용제 어세이 웰에 부가하였다. 옥소트레모린-억제 AC 활성을 차단하는 시험 화합물의 능력을 측정하기 위해, 25 ㎕ 포스콜린 및 옥소트레모린(dPBS 중에 희석하여 각각 25 μM 및 5 μM 최종 농도), 25 ㎕의 희석된 시험 화합물, 및 50 ㎕의 세포를 남아 있는 어세이 웰에 부가하였다.
반응을 37℃에서 10 분간 배양하고, 100 ㎕ 아이스-냉 검출 완충액의 부가에 의해 중지시켰다. 플레이트를 밀봉하고, 실온에서 밤새 배양하고, 다음날 아침 PerkinElmer TopCount 액체 신틸레이션 카운터(Perkin Elmer Inc., Wellesley, MA) 에서 계수하였다. 생성된 cAMP의 양을 제조사의 사용자 매뉴얼에 기재된 바와 같이 샘플에서 관찰되는 계수 및 cAMP 표준물질에 기초하여 계산하였다. 데이터를 비선형 회귀분석법, 일-부위 경쟁 식을 이용하는 GraphPad Prism Software 팩키지(GraphPad Software, Inc., San Diego, CA)로 비선형 회귀 분석법에 의해 분석하였다. 옥소트레모린 농도의 EC50-반응 곡선 및 KD 및 [L]로서의 옥소트레모린 어세이 농도 각각을 이용하여 Ki 값을 계산하기 위해 Cheng-Prusoff 식을 이용하여 계산하였다. 기하평균 및 95% 신뢰 구간을 결정하기 위해 Ki 값을 pKi 값으로 변환시켰다. 그런 다음, 이러한 요약 통계를 데이터 보고를 위해 Ki 값으로 다시 전환시켰다.
이러한 어세이에서, 더 낮은 Ki 값은 시험 화합물이 테스트하는 수용체에 대해 더 높은 기능적 활성을 갖는다는 것을 나타낸다. 화학식 I의 화합물은 이러한 또는 유사한 어세이에서 시험할 경우, hM2 수용체를 발현하는 CHO-K1 세포에서 포스콜린-매개 cAMP 축적의 오소트레모린 억제의 차단에 대해 약 5 nM 미만의 Ki 값을 갖는 것으로 밝혀졌다.
작용제-매개 [ 35 S] GTP γS-결합의 차단
제 2의 기능적 어세이에서, 시험 화합물의 기능적 효능을 hM2 수용체를 발현하는 CHO-K1 세포에서 옥소트레모린-자극 [35S]GTPγS-결합을 차단하는 시험 화합물 의 능력을 측정함으로써 결정할 수 있다.
사용 시, 냉동된 멤브레인을 해동한 다음 어세이 완충액 중에 희석하여 최종 표적 조직 농도가 웰당 5-10 ㎍의 단백질이 되도록 하였다. 상기 멤브레인을 간단하게 Polytron PT-2100 조직 붕괴기를 균질화한 다음, 어세이 플레이트에 부가하였다. 작용제 옥소트레모린에 의한 [35S]GTPγS 결합의 자극을 위한 EC90 값(최대 반응의 90%가 되기 위한 유효 농도)를 각각의 실험에서 결정하였다.
옥소트레모린-자극 [35S]GTPγS 결합을 억제하는 시험 화합물의 능력을 결정하기 위해, 다음을 96 웰 플레이트의 각각의 웰에 부가하였다:[35S]GTPγS(0.4 nM)을 갖는 어세이 완충액 25 ㎕, 옥소트레모린(EC90) 및 GDP(3 μM) 25 ㎕, 희석된 시험 화합물 25 ㎕, 및 hM2 수용체를 발현하는 CHO 세포 멤브레인 25 ㎕. 그런 다음, 어세이 플레이트를 37℃에서 60 분간 배양하였다. 어세이 플레이트를 PerkinElmer 96-웰 하비스터(harvester)를 이용하여 1% BSA-예비처리된 GF/B 필터를 통해 여과하였다. 그 플레이트를 3 x 3 초동안 아이스-냉 세척 완충액으로 세척한 다음, 공기 건조 또는 진공 건조 하였다. Microscint-20 신틸레이션 액체(50 ㎕)를 각각의 웰에 부가하고, 각각의 플레이트를 밀봉하고 톱카운터(PerkinElmer) 상에서 방사능을 계수하였다. 비선형 회귀, 일-부위 경쟁 식을 이용하는 GraphPad Prism Software 팩키지(GraphPad Software, Inc., San Diego, CA)를 이용하여 데이터를 비선형 회귀 분석법에 의해 분석하였다. KD 및 리간드 농도 [L] 각각으로서의 어세이에서 시험 화합물 및 옥소트레모린 농도에 대한 농도-반응 곡선의 IC50 값을 이용하여 Ki를 계산하기 위해, Cheng-Prusoff 식을 이용하여 Ki 값을 계산하였다.
이러한 어세이에서, 더 낮은 Ki 값은 시험 화합물이 시험 수용체에서의 더 높은 기능적 활성을 갖는다는 것을 나타낸다. 화학식 I의 화합물은 이러한 또는 유사한 어세이에서 시험할 경우 hM2 수용체를 발현하는 CHO-K1 세포에서 옥소트레모린-자극 [35S]GTPγS-결합의 차단에 대해 약 5 nM 미만의 Ki 값을 갖는 것으로 밝혀졌다.
FLIPR 어세이에 의한 작용제-매개 칼슘 방출의 차단
Gq 단백질에 결합하는 무스카린 수용체 서브타입(M1, M3, 및 M5 수용체)는 작용제가 수용체에 결합할 겨우 포스포리파제 C(PLC) 경로를 활성화시킨다. 그 결과, 활성화된 PLC는 포스파틸 이노시톨 디포스페이트(PIP2)를 디아실글리세롤(DAG) 및 포스파티딜-1,4,5-트리포스페이트(IP3)로 가수분해하고, 그 결과 세포 내 저장소, 즉 조면소포체 및 근소포체으로부터 칼슘을 방출시킨다. FLIPR(Molecular Devices, Sunnyvale, CA) 어세이는 유리 칼슘이 결합할 때 형광을 발생시키는 칼슘 민감성 염료(Fluo-4AM, Molecular Probes, Eugene, OR)를 이용함으로써 이러한 세포 내 칼슘의 증가를 이용한다. 이러한 형광 발생은, 인간 M1 및 M3, 그리고 침팬지 M5 수용체를 갖는 클로닝된 세포 단일층으로부터의 형광의 변화를 검출하는 FLIPR에 의해 실시간으로 측정한다. 길항제 효능은 세포 내 칼슘의 작용제-매개 증가를 억제하는 길항제의 능력에 의해 결정할 수 있다.
FLIPR 칼슘 자극 어세이를 위해, 어세이를 수행하기 전날 밤에 hM1, hM3, 및 cM5 수용체를 안정적으로 발현하는 CHO 세포를 96-웰 FLIPR 플레이트에 접종하였다. 성장 배지를 제거하기 위해, 접종된 세포를 FLIPR 완충액(칼슘 및 마그네슘이 없는 HBSS 중의 10 mM HEPES, pH 7.4, 2 mM 염화칼슘, 2.5 mM 프로베네시드)으로 Cellwash(MTX Labsystems, Inc.)에 의해 2 회 세척하고, FLIPR 완충액 50 ㎕/웰을 남겨두었다. 그런 다음, 세포를 37℃, 5% 이산화탄소에서 40 분동안 4μM FLUO-4AM(2X 용액을 제조하였다) 50 ㎕/웰 중에서 배양하였다. 염료 배양 기간 이후에, 세포를 FLIPR 완충액으로 2 회 세척하고, 최종 부피 50 ㎕/웰의 최종 부피를 남겼다.
길항제 효능을 결정하기 위해, 길항제 효능을 EC90 농도에서의 옥소트레모린 자극에 대해 이후에 측정할 수 있도록 하기 위해, 옥소트레모린에 대한 세포내 Ca2 + 방출의 투여량-의존 자극을 우선 결정한다. 세포를 우선 화합물 희석 완충액과 함께 20 분동안 배양한 다음, 작용제를 부가하고 FLIPR을 수행하였다. 옥소트레모린의 EC90 값은 식 ECF = ((F/100-F)^1/H)*EC50과 함께, 하기 FLIPR 측정 및 데이터 환원 섹션에 상술된 방법에 따라 생성된다. 3 x ECF의 옥소트레모린 농도는 옥소트레모린 EC90 농도를 길항제 억제 어세이 플레이트에서의 각각의 웰에 부가하도록 자극 플레이트에서 제조하였다.
FLIPR에 사용된 파라미터는 0.4 초의 노출 길이, 0.5 watt의 레이저 강도, 488 nm의 여기 파장, 및 550 nm의 방출 파장이다. 기저선은 작용제를 부가하기 전 10 초동안 형광의 변화를 측정함으로써 결정하였다. 작용제 자극 이후에, FLIPR은 연속적으로 1.5 분동안 0.5 내지 1 초마다 형광의 변화를 계속해서 측정하여 최대 형광 변화를 캡쳐하였다.
형광의 변화는 각각의 웰에 대해 최대 형광 - 기저선 형광으로서 표현한다. 원 데이터를 S 자형 용량-반응의 빌트-인 모델을 이용하는 GraphPad Prism(GraphPad Software, Inc., San Diego, CA)로 비선형 회귀에 의해 약물 농도의 로그값에 대해 분석하였다. 길항제 Ki 값은 Cheng-Prusoff 식(Cheng & Prusoff, 1973)에 따라 KD로서의 옥소트레모린 EC50 값 및 리간드 농도에 대한 옥소트레모린 EC90을 이용하는 Prism에 의해 결정하였다(Cheng & Prusoff, 1973).
이러한 어세이에서, 더 낮은 Ki 값은 시험 화합물이 시험하는 수용체에서 더 높은 기능적 활성을 갖는다는 것을 나타낸다. 화학식 I의 화합물은 이러한 또는 유사한 어세이에서 시험할 경우 hM3 수용체를 안정적으로 발현하는 CHO세포에서 작용제-매개 칼슘 방출의 차단을 위해 약 5 nM 미만의 Ki 값을 갖는 것으로 밝혀졌다.
어세이 3
아세틸콜린-유도 기관지수축의 기니아피그 모델에서의 기관지 보호 지속시간 결정
이러한 in vivo 어세이는 무스카린 수용체 길항 활성을 나타내는 시험 화합물의 기관지 보호 효과를 평가하기 위해 이용되었다. 250 내지 350 g 범위의 여섯 마리의 수컷 기니아피그(Duncan-Hartley(HsdPoc:DH) Harlan, Madison, WI)들의 그룹들을 개별적으로 케이지 카드에 의해 식별하였다. 연구 내내, 동물들을 음식 및 물에 자유롭게 접근하도록 하였다.
전 몸체를 투여 챔버(R&S 몰드, San Carlos, CA)에 노출시켜서 시험 화합물을 10 분마다 흡입에 의해 투여하였다. 에어로졸이 자동적으로 중앙 매니폴드(manifold)로부터 6 개의 개별적인 챔버에 전달되도록 투여 챔버를 배열하였다. 기니아피그를 시험 화합물의 에어로졸 또는 매체(WFI)의 에어로졸에 노출시켰다. 이러한 에어로졸을 22 psi 압력의 혼합 기체(CO2 = 5%, O2 = 21%, 및 N2 = 74%)에 의해 추진되는 LC Star 네불라이저 세트(Model 22F51, PARI Respiratory Equipment, Inc. Midlothian, VA)를 이용하여 수용액으로부터 제조하였다. 이러한 작동 기압에서 네불라이저를 통한 기체 흐름은 약 3 L/분이었다. 생성된 에어로졸은 양압에 의해 챔버로 추진되었다. 에어로졸화된 용액의 전달 동안 희석 공기를 전혀 사용하지 않았다. 10 분간의 분무 동안, 약 1.8 mL의 용액이 분무 되었다. 이것은 채워진 네불라이저의 분무 전 및 분무 후의 중량을 비교함으로써 중량적으로 측정되었다.
흡입에 의해 투여되는 시험 화합물의 기관지 보호 효과를 투여 후 1.5, 24, 48, 및 72 시간에 전신체적 용적기록계(whole body plethysmography)을 이용하여 평가하였다.
폐 평가 개시 45 분 전에, 각각의 기니아피그를 케타민(43.75 mg/kg), 크실라진(3.50 mg/kg), 및 아세프로마진(1.05 mg)의 근육주사로 마취하였다. 수술 부위를 면도하고 70% 알콜로 세척한 후에, 목의 배면부의 2-3 cm 중간선 절개를 수행하였다. 그런 다음, 경정맥을 분리하고 식염수로 채워진 폴리에틸렌 카테터(PE-50, Becton Dickinson, Sparks, MD)로 캐뉼레이션하여 식염수 중의 ACh(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)의 정맥 내 주입을 가능하게 하였다. 그런 다음, 기관을 자유롭게 절단하고 14 G 테플론 튜브(#NE-014, Small Parts, Miami Lakes, FL)로 캐뉼레이션 하였다. 필요하다면, 마취를 상기 마취 혼합물의 부가적인 근육내 주사에 의해 유지하였다. 마취의 깊이를 모니터링 하고 동물이 발의 조임에 반응하거나 호흡 속도가 100 숨/분 보다 높을 경우 조정하였다.
일단 캐뉼레이션이 완료되면, 상기 동물을 용적기록계(#PLY3114, Buxco Electronics, Inc., Sharon, CT)에 두고, 식도 압력 캐뉼라(PE-160, Becton Dickinson, Sparks, MD)를 삽입하여 폐 추진 압력(압력)을 측정하였다. 테플론 기관 튜브를 용적기록계의 입구에 부착시켜 기니아피그가 챔버 외부로부터 실내 공기를 호흡할 수 있도록 하였다. 그런 다음, 챔버를 밀봉하였다. 가열 램프를 이용하여 체온을 유지하고, 기니아피그의 폐를 10 mL 캘리브레이션 주사기(#5520 시리즈, Hans Rudolph, Kansas City, MO)를 이용하여 공기 4 mL로 3회 팽창시켜, 하부 기도가 붕괴되지 않고 동물이 과다호흡을 겪지 않도록 하였다.
일단 탄성(compliance)을 위해 기저 값이 0.3 - 0.9 mL/cm H2O의 범위 내에 있고 저항에 대해 초당 0.1 - 0.199 cm H2O/mL의 범위 내에 있는지가 결정되면, 폐 평가를 개시하였다. Buxco 폐 평가 컴퓨터 프로그램은 폐 값의 수집 및 유도를 가능하게 한다.
이러한 프로그램의 시작은 실험 프로토콜 및 데이터 수집을 개시한다. 각각의 호흡으로 용적 기록계 내에서 일어나는 시간에 따른 부피의 변화를 Buxco 압력 변환기에 의해 측정하였다. 시간의 경과에 따른 이러한 신호를 통합함으로써, 흐름의 평가를 각각의 호흡에 대해 계산하였다. 이러한 신호는, Sensym 압력 변환기(#TRD4100)을 이용하여 수집되는 폐 추진 압력 변화와 함께, Buxco(MAX 270) 전치 증폭기를 경유하여 데이터 수집 인터페이스(#'s SFT3400 및 SFT3813)에 연결되었다. 모든 다른 폐 파라미터는 이러한 두 개의 입력으로부터 유래되었다.
기저값을 5 분동안 수집한 다음, 기니아피그에게 ACh를 투여하였다. ACh(0.1 mg/mL)를 하기 투여량 및 하기 실험 개시 시로부터 처방된 시간에서 주사기 펌프(sp210iw, World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL)로부터 1 분동안 정맥 내 주입 하였다: 5 분에 1.9 ㎍/분, 10 분에 3.8 ㎍/분, 15 분에 7.5 ㎍/분, 20 분에 15.0 ㎍/분, 25 분에 30 ㎍/분, 그리고 30 분에 60 ㎍/분. 폐저항 또는 폐탄성이 각각의 ACh 투여 후에 3 분에 기저 값으로 돌아오지 않는다면, 기니아피그의 폐를 10 mL 캘리브레이션 주사기로부터 공기 4 mL로 3 회 팽창시켰다. 기록된 폐의 파라미터는 호흡 빈도(호흡/분), 탄성(mL/cm H2O) 및 폐 저항(초당 cm H2O/mL)를 포함하였다. 폐 기능 측정이 이러한 프로토콜의 35 분에 완료된 후, 기니아피그를 용적측정계로부터 제거하고 이산화탄소 질식으로 안락사시켰다.
상기 데이터를 하기 방법 중 하나 또는 둘 모두를 이용하여 평가하였다.
(a) 폐 저항(RL, 초당 cm H2O/mL)을 "압력 변화"의 "흐름 변화"에 대한 비율로부터 계산한다. ACh(60 ㎍/분, IH)에 대한 RL 반응은 매체(vehicle) 및 시험 화합물에 대하여 계산하였다. 각각의 처리 전에서의 매체-처리된 동물에서의 평균 ACh 반응을 계산하고, 그것을 각각의 시험 화합물 투여량에서의 각각의 처리 전 시간에서의 ACh 반응의 %억제를 계산하는데 이용하였다. 기관지보호 ID50(ACh(60 ㎍/분) 기관지 수축 반응을 50% 억제하는데 필요한 투여량)을 평가하기 위해 'RL'에 대한 억제 투여량-반응 곡선을 윈도우 버젼 3.00의 GraphPad Prism(GraphPad Software, SanDiego, California)을 이용하여 4 개의 파라미터의 로그 식에 맞추었다. 사용된 식은 다음과 같다:
Y = Min + (Max-Min)/(1+10(( log ID50 -X)*기울기))
상기 X는 투여량의 로그이고, Y는 반응(RL의 ACh 유도 증가의 %억제)이다. Y는 Min에서 시작하여 S자 형태로 점근적으로 Max에 접근한다.
(b) 기저선 폐저항의 두 배를 유발하는데 필요한 ACh 또는 히스타민의 함량으로 정의되는 양 PD2는 하기 식(American Thoracic Society. Guidelines for methacholine and execise challenge testing - 1999. Am J Respir Crit Care Med. 161: 309-329 (2000)에 기재된 PC20 값을 계산하는데 이용되는 식으로부터 유래)을 이용하여 ACh 또는 히스타민 투여 범위에 걸친 흐름 및 압력으로부터 유래된 폐 저항값을 이용하여 계산하였다:
Figure 112007072428712-pct00006
상기 식에서, C1은 C2 이전의 ACh 또는 히스타민의 농도이고; C2는 폐 저항(RL)의 최소 2 배 증가를 유발하는 ACh 또는 히스타민의 농도이고; R0은 기저선 RL 값이고; R1은 C1 이후의 RL 값이며; R2는 C2 이후의 RL 값이다. 유효 투여량은 50 ㎍/mL의 ACh 투여량에 대한 기관지 수축 반응을 기저선 폐저항의 2 배로 제한하는 투여량(PD2 (50))으로서 정의된다.
상기 데이터의 통계학적 분석을 양수검정 Students t-test를 이용하여 수행하였다. P-값<0.05는 유의적인 것으로 인정된다. 일반적으로, 이러한 어세이에서 투여 후 1.5 시간에 ACh-유도 기관지 수축에 대해 약 200 ㎍/mL 미만의 PD2 (50)을 갖는 시험 화합물이 바람직하다. 화학식 I의 화합물은 이러한 또는 유사한 어세이에서 시험 시, 투여 후 1.5 시간에 ACh-유도 기관지 수축에 대해 약 200 ㎍/mL 미만의 PD2 (50)을 갖는 것으로 예상된다.
어세이 4
흡입 기나아피그 타액 분비 어세이
200-350 g의 체중이 나가는 기니아피그(Charles River, Wilmington, MA)를 도착 후 3일 이상 집단 안의 기니아피그 무리에 적응시켰다. 시험 화합물 또는 매체를 파이 모양의 투여 챔버에서 흡입(IH)에 의해 10 분의 시간동안 투여하였다(R&S Molds, San Carlos, CA). 시험 용액을 멸균수에 용해하고, 투여 용액 5.0 mL로 채워진 네불라이저를 이용하여 전달하였다. 기니아피그를 흡입 챔버에 30분동안 가두었다. 이 시간동안, 기니아피그를 약 110 평방 cm의 면적에 가두었다. 이러한 공간은 동물들이 자유롭게 회전하고, 자신의 위치를 복원하며, 손질하는 것을 허용하는데 적절하다. 20 분 동안의 적응 후에, 기니아피그를 22 psi의 압력으로 하우스 공기에 의해 추진된, LS Star Nebulizer Set(Model 22F51, PARI Respiratory Equipment, Inc. Midlothian, VA)에서 생산된 에어로졸에 노출시켰다. 분무가 완료될 때, 기니아피그를 치료 후 1.5, 6, 12, 24, 48, 또는 72 시간에 평가하였다.
기니아피그를 케타민 43.75 mg/kg, 크실라진 3.5 mg/kg, 및 아세프로마진 1.05 mg/kg의 혼합물을 0.88 mL/kg 부피로 근육내 주사(IM)으로, 시험하기 1 시간 전에 마취하였다. 동물을 20도 경사진 가열된(37℃) 담요에 그 머리를 경사의 아래쪽으로 향하게 하고 배를 위로 향하게 하여 배치하였다. 4-ply 2x2 인치 거즈 패드(Nu-Gauze General-use sponges, Johnson and Johnson, Arlington, TX)를 기니아피그의 입에 삽입하였다. 5 분 후에, 무스카린 작용제 필로카르핀(3.0 mg/kg, SC)을 투여하고, 거즈 패드를 즉시 버리고 새로 미리-중량이 측정된 거즈 패드로 교체하였다. 타액을 10 분동안 수집하고, 그 시점에서 그 거즈 패드의 중량을 측정하고 축적된 타액의 양(mg)을 결정하기 위해 그 무게 차이를 기록하였다. 매체 및 각각의 시험 화합물의 투여량을 투여받은 동물에서 수집된 타액의 평균량을 계산하였다. 매체 그룹의 평균을 100% 타액으로 하였다. 결과를 결과 평균을 이용하여 계산하였다(n= 3 이상). 신뢰 구간(95%)를 양방향 ANOVA를 이용하여 각각의 시점에서 각각의 투여량에 대해 평가하였다. 이러한 모델은 Rechter, "Estimation of anticholinergic drug effects in mice by antagonism against pilocarpine-induced slaivation" Ata Pharmacol Toxicol 24:243-254 (1996)에 기재된 방법의 변경된 버젼이다.
각각의 치료전 시간에서의 매질-치료 동물의 타액 평균중량을 계산하여 각각의 투여량에서 해당 치료전 시간에서의 타액 분비의 %억제를 계산하는데 이용하였다. 억제-투여량 반응 데이터를 항타액분비촉진 ID50(피로카르핀 유발 타액분비의 50%을 억제하기 위해 필요한 투여량)을 평가하기 위해 GraphPad Prism, 윈도우 버젼 3.00을 이용하여 4 개의 파라미터 로그 식에 맞추었다. 하기 식을 이용하였다:
Y = Min + (Max-Min)/(1+10(( log ID50 -X)*기울기))
상기 X는 투여량의 로그이고, Y는 반응(타액분비의 %억제)이다. Y는 Min에서 시작하여 S자 형태로 점근적으로 Max에 접근한다.
항타액분비촉진 ID50의 기관지보호 ID50에 대한 비율을 시험 화합물의 명백한 폐 선택 지수를 계산하는데 이용하였다. 일반적으로 약 5 보다 큰 명백한 폐 선택 지수를 갖는 화합물이 바람직하다. 화학식 I의 화합물은 이러한 또는 유사한 어세이에서 시험 시 약 5보다 큰 명백한 폐-선택 지수를 갖는 것으로 기대되었다.
어세이 5
의식이 있는 기니아피그에서의 메타콜린 -유도 감압 반응
체중이 200 g 내지 300 g인 건강한 성체 Sprague-Dawley 기니아피그(Harlan, Indianapolis, IN)를 이 연구에 사용하였다. 이소플루란 마취(효과가 있는) 하에서, 동물에 통상적인 경동맥 및 경정맥 카테터(PE-50 튜빙)를 설치하였다. 상기 카테터를 피하 터널을 이용하여 견갑하 부위로 외부에 노출시켰다. 모든 수술 절개를 4-0 Ethicon Silk로 봉합하고, 카테터를 헤파린(1000 유닛/mL)으로 고정(lock)하였다. 각각의 동물에게 수술 마지막에 부프레노르핀(0.05 mg/kg, IM) 뿐만 아니라, 식염수를 투여하였다(3 mL, SC). 동물들을 우리에 돌려보내기 전에 가열 패드에서 회복되도록 하였다.
수술 후 약 18 내지 20 시간 후에, 동물들의 무게를 측정하고 각각의 동물의 경동맥 카테터를 동맥압을 기록하기 위한 변환기에 연결하였다. 동맥압 및 심박속도를 Biopac MP-100 Acquisition System을 이용하여 기록하였다. 동물들을 20 분동안 적응하고 안정되도록 하였다.
각각의 동물에게 MCh(0.3 mg/kg, IV)를 경정맥 라인을 통해 투여하고, 심혈관 반응을 10 분간 모니터링 하였다. 그런 다음, 동물을 전신 투여 챔버에 넣고, 전신 투여 챔버를 시험 화합물 또는 매체 용액을 함유하는 네불라이저에 연결하였다. 3 L/분의 속도로 흡입 가능한 공기 및 5% 이산화탄소의 기체 혼합물을 이용하 여 용액을 10 분간 분무하였다. 그런 다음, 그 동물을 전신 챔버에서 빼 내고, 그들의 각각의 우리에 돌려보냈다. 투여 후 1.5 및 24 시간에, 동물을 다시 MCh(0.3 mg/kg, IV0로 투여하고 혈액 동역학적 반응을 결정하였다. 그런 다음, 동물을 페노바르비탈 소듐(150 mg/kg, IV)으로 안락사시켰다.
MCh는 평균 동맥압(MAP)을 감소시키고 심장 박동을 감소시킨다(서맥). MAP(감압 반응)에서의 기저선으로부터의 피크 감소를 각각의 MCh 투여에 대해 측정하였다(IH 투여 전 및 후). MCh 반응에 대한 치료 효과를 대조군 감압 반응의 %억제로서 표현하였다. 치료 및 치료전 시간의 효과를 시험하기 위해, 적절한 post-hoc 테스트와 함께 양방향 ANOVA를 이용하였다. MCh에 대한 감압 반응은 매체로 흡입 투여한 이후 1.5 시간 및 24 에는 상대적으로 변하지 않는 것으로 기대되었다.
항-감압 ID50의 기관지보호 ID50에 대한 비율을 시험 화합물의 명백한 폐 선택 지수를 계산하는데 이용하였다. 일반적으로 약 5 보다 큰 명백한 폐 선택지수를 갖는 화합물이 바람직하다. 화학식 I의 화합물은 이러한 또는 유사한 어세이에서 시험 시 약 5보다 큰 명백한 폐-선택 지수를 갖는 것으로 기대되었다.
본 발명은 특정 측면 또는 그들의 구현예를 참조하여 설명하였지만, 당업자는 본 발명의 진정한 요지 및 범위를 벗어나지 않고 다양한 변화가 이루어질 수 있고 균등물이 치환될 수 있다고 이해할 것이다. 부가적으로, 적용 가능한 특허 규칙에 의해 허용되는 정도로, 본 명세서에 인용된 모든 문헌, 특허, 및 특허 출원은 각 문헌이 본 명세서에 참고로 개별적으로 통합되는 것처럼 동일한 정도로 전체가 참고로 본 명세서에 통합된다.

Claims (56)

  1. 분말 X-선 회절 패턴이 6.4±0.2, 7.6±0.2, 8.6±0.2, 13.7±0.2, 15.0±0.2, 19.4±0.2, 21.6±0.2, 22.1±0.2, 22.9±0.2, 및 23.7±0.2의 2θ의 값에서 회절 피크를 갖는 비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르 디포스페이트 또는 약제학적으로 허용 가능한 그의 용매화물의 결정형.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 제 1 항에 있어서, 분말 X-선 회절 패턴의 피크 위치가 하기 패턴의 피크 위치와 일치하는 것을 특징으로 하는 결정형:
    Figure 112012093503614-pct00033
    .
  6. 제 1 항에 있어서, 시차주사열량계 기록이 154.5℃에서 최대 흡열 열 흐름(maximum endothermic heat flow)을 나타내는 것을 특징으로 하는 결정형.
  7. 제 1 항에 있어서, 시차주사열량계 기록이 하기 나타낸 것과 일치하는 것을 특징으로 하는 결정형:
    Figure 112012093503614-pct00034
    .
  8. 분말 X-선 회절 패턴이 7.7±0.2, 8.4±0.2, 8.8±0.2, 12.6±0.2, 13.7±0.2, 14.1±0.2, 15.3±0.2, 16.0±0.2, 19.7±0.2, 20.6±0.2, 23.0±0.2, 및 24.4±0.2의 2θ의 값에서 회절 피크를 갖는 비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르 모노설페이트 또는 약제학적으로 허용 가능한 그의 용매화물의 결정형.
  9. 삭제
  10. 삭제
  11. 제 8 항에 있어서, 분말 X-선 회절 패턴의 피크 위치가 하기 패턴의 피크 위치와 일치하는 것을 특징으로 하는 결정형:
    Figure 112012093503614-pct00035
    .
  12. 제 8 항에 있어서, 시차주사열량계 기록이 76.5℃에서 최대 흡열 열 흐름을 나타내는 것을 특징으로 하는 결정형.
  13. 제 8 항에 있어서, 시차주사열량계 기록이 하기 나타낸 것과 일치하는 것을 특징으로 하는 결정형:
    Figure 112012093503614-pct00036
    .
  14. 분말 X-선 회절 패턴이 7.7±0.2, 8.7±0.2, 13.5±0.2, 14.0±0.2, 14.8±0.2, 15.4±0.2, 15.8±0.2, 19.4±0.2, 22.9±0.2, 23.3±0.2, 및 24.6±0.2의 2θ의 값에서 회절 피크를 갖는 비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르 디옥살레이트 또는 약제학적으로 허용 가능한 그의 용매화물의 결정형.
  15. 삭제
  16. 삭제
  17. 제 14 항에 있어서, 분말 X-선 회절 패턴의 피크 위치가 하기 패턴의 피크 위치와 일치하는 것을 특징으로 하는 결정형:
    Figure 112012093503614-pct00037
    .
  18. 제 14 항에 있어서, 시차주사열량계 기록이 73.7℃에서 최대 흡열 열 흐름을 나타내는 것을 특징으로 하는 결정형.
  19. 제 14 항에 있어서, 시차주사열량계 기록이 하기 나타낸 것과 일치하는 것을 특징으로 하는 결정형:
    Figure 112012093503614-pct00038
    .
  20. 분말 X-선 회절 패턴이 4.7±0.2, 9.6±0.2, 12.7±0.2, 13.7±0.2, 16.7±0.2, 17.4±0.2, 18.5±0.2, 19.4±0.2, 20.8±0.2, 21.4±0.2, 24.2±0.2, 및 25.6±0.2의 2θ의 값에서 회절 피크를 갖는 비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르 유리 염기 또는 약제학적으로 허용 가능한 그의 용매화물의 결정형.
  21. 삭제
  22. 삭제
  23. 제 20 항에 있어서, 분말 X-선 회절 패턴의 피크 위치가 하기 패턴의 피크 위치와 일치하는 것을 특징으로 하는 결정형:
    Figure 112012093503614-pct00039
    .
  24. 제 20 항에 있어서, 시차주사열량계 기록이 102.7℃에서 최대 흡열 열 흐름을 나타내는 것을 특징으로 하는 결정형.
  25. 제 20 항에 있어서, 시차주사열량계 기록이 하기 나타낸 것과 일치하는 것을 특징으로 하는 결정형:
    Figure 112012093503614-pct00040
    .
  26. 분말 X-선 회절 패턴이 4.6±0.2, 9.3±0.2, 12.9±0.2, 13.6±0.2, 14.0±0.2, 14.6±0.2, 16.5±0.2, 18.6±0.2, 19.1±0.2, 20.9±0.2, 22.1±0.2, 22.7±0.2, 및 25.7±0.2의 2θ의 값에서 회절 피크를 갖는 비페닐-2-일카르밤산 1-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-1-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르 유리 염기 또는 약제학적으로 허용 가능한 그의 용매화물의 결정형.
  27. 삭제
  28. 제 26 항에 있어서, 분말 X-선 회절 패턴의 피크 위치가 하기 패턴의 피크 위치와 일치하는 것을 특징으로 하는 결정형:
    Figure 112012093503614-pct00041
    .
  29. 제 26 항에 있어서, 시차주사열량계 기록이 98.6℃에서 최대 흡열 열 흐름을 나타내는 것을 특징으로 하는 결정형.
  30. 제 26 항에 있어서, 시차주사열량계 기록이 하기 나타낸 것과 일치하는 것을 특징으로 하는 결정형:
    Figure 112012093503614-pct00042
    .
  31. 제 1 항, 제 5 항 내지 제 8 항, 제 11 항 내지 제 14 항, 제 17 항 내지 제 20 항, 제 23 항 내지 제 26 항, 및 제 28 항 내지 제 30 항 중 어느 한 항의 결정형 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 기관지 확장용 약제학적 조성물.
  32. 삭제
  33. 삭제
  34. 삭제
  35. 삭제
  36. 삭제
  37. 삭제
  38. 제 31 항에 있어서, 상기 조성물은 흡입 투여용으로 제제화되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  39. 제 31 항에 있어서, 상기 담체는 4 내지 6 범위의 pH를 갖는 등장성 식염수 용액인 것을 특징으로 하는 조성물.
  40. 제 39 항에 있어서, 시트레이트 완충제를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성 물.
  41. 제 31 항의 조성물을 함유하는 건조 분말 흡입기.
  42. 미분화된 형태의, 제 1 항, 제 5 항 내지 제 8 항, 제 11 항 내지 제 14 항, 제 17 항 내지 제 20 항, 제 23 항 내지 제 26 항, 및 제 28 항 내지 제 30 항 중 어느 한 항의 결정형.
  43. 제 42 항의 결정형 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 기관지 확장용 약제학적 조성물.
  44. 제 43 항에 있어서, 상기 담체는 락토오스인 것을 특징으로 하는 조성물.
  45. 비페닐-2-일카르밤산 l-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-l-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르를 인산과 접촉시키는 단계를 포함하는 제 1 항의 결정형을 제조하는 방법.
  46. 비페닐-2-일카르밤산 l-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-l-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르를 황산과 접촉시키는 단계를 포함하는 제 8 항의 결정형을 제조하는 방법.
  47. 비페닐-2-일카르밤산 l-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-l-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르를 옥살산과 접촉시킴으로써 비페닐-2-일카르밤산 l-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-l-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르의 결정성 디옥살레이트 염의 종자 결정을 형성시키는 단계;
    비페닐-2-일카르밤산 l-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-l-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르를 옥살산과 접촉시킴으로써 비페닐-2-일카르밤산 l-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-l-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르의 디옥살레이트 염을 형성시키고, 상기 염을 불활성 희석제 중에서 용해하여 용액을 형성시키는 단계; 및
    상기 종자 결정을 상기 용액에 부가하는 단계를 포함하는,
    제 14 항의 결정형을 제조하는 방법.
  48. 비페닐-2-일카르밤산 l-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-l-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르를 불활성 희석제와 접촉시킴으로써 결정성 유리 염기의 종자 결정을 형성시키는 단계;
    비페닐-2-일카르밤산 l-(2-{[4-(4-카바모일피페리딘-l-일메틸)벤조일]메틸아미노}에틸)피페리딘-4-일 에스테르를 불활성 희석제와 접촉시킴으로써 결정성 유리 염기를 형성시키고, 그 결과 생성된 결정성 에스테르를 용해하여 용액을 형성시키는 단계; 및
    상기 종자 결정을 상기 용액에 부가하는 단계를 포함하는,
    제 20 항의 결정형을 제조하는 방법.
  49. 제 1 항, 제 5 항 내지 제 8 항, 제 11 항 내지 제 14 항, 제 17 항 내지 제 20 항, 제 23 항 내지 제 26 항, 및 제 28 항 내지 제 30 항 중 어느 한 항의 결정형 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 폐질환 치료용 약제학적 조성물.
  50. 제 42 항의 결정형 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 폐질환 치료용 약제학적 조성물.
  51. 삭제
  52. 삭제
  53. 삭제
  54. 삭제
  55. 삭제
  56. 제 50 항에 있어서, 만성 폐쇄성 폐질환 또는 천식을 치료하기 위한 것을 특징으로 하는 조성물.
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