KR101177997B1 - 인산칼슘 시멘트와 콜라겐의 마이크로입자형 전달체의 제조방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 인산칼슘 시멘트와 콜라겐의 마이크로입자형 전달체를 제조하는 방법에 관한 것으로, 구체적으로 1) 탄산칼슘을 디칼슘 포스페이트 무수물과 반응시켜 알파형 트리칼슘 포스페이트를 제조하는 단계; 2) 상기 알파형 트리칼슘 포스페이트를 콜라겐을 함유한 5%의 디소디움 하이드로젠 포스페이트 용액과 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계; 3) 상기 혼합물을 오일에 첨가한 후 교반하여 콜라겐을 함유한 인산칼슘 시멘트를 제조하는 단계; 4) 상기 인산칼슘 시멘트를 세척 및 건조시키는 단계를 포함하는 인산칼슘 시멘트와 콜라겐의 마이크로입자형 전달체의 제조방법을 제공한다.

Description

인산칼슘 시멘트와 콜라겐의 마이크로입자형 전달체의 제조방법{PREPARATION METHOD OF MICROSPHERE CARRIER OF CALCIUM PHOSPHATE CEMENT WITH COLLAGEN}

본 발명은 새로운 골 충진제 및 약물 전달용 인산칼슘 시멘트와 콜라겐의 마이크로입자형 전달체의 제조방법에 관한 것이다.

골은 주로 콜라겐과 같은 생체고분자 및 (Ca, Mg, Na, M)₁₀(PO₄, CO₃, HPO₄)₆ (OH, Cl)₂에 가까운 카보네이트 하이드록시아파타이트라는 유기 성분의 복합체이다.

인산칼슘 물질, 주로 하이드록시아파타이트(HA), 베타-트리칼슘 포스페이트(β-TCP), BCP(HA와 β-TCP와의 다양한 HA/β-TCP 비의 혼합물로 이루어짐)는 골 회복, 증가 또는 대체용 생체재료(biomaterial)로서 시판되고 있다. 인산칼슘 물질은 골 미네랄과의 조성의 유사성, 생활성, 골전도성 및 뼈와 독특하게 강한 계면을 형성할 수 있는 장점이 있다.

최근에는 인산칼슘 시멘트(calcium phosphate cement; CPC)가 골다공증 등과 같이 뼈의 결손결함의 충진제로 사용되거나 손상된 뼈의 대체물 및 접착용 등으로 널리 사용되고 있다.

인산칼슘 시멘트는 인산칼슘계 입자들이 주성분인 분말과 인산염과 같은 경화를 촉진하는 물질을 함유한 수용액으로 구성되는 소재로, 시술 시 두 성분을 혼합하여 고점도의 액상 상태로 적용시키면 적용 부위에서 두 성분들의 화학 반응에 의해 인산칼슘 화합물이 침전되어 경화됨으로써, 손상된 뼈 및 뼈, 또는 뼈 및 임플란트 사이의 빈 공간을 채워주어 둘 사이를 고정하고 안정화시켜 주는 골대체재의 한 형태이다.

한편, 인산칼슘 시멘트는 인체 내 조직과의 융합성이 우수하여 시술 후 일정기간이 경과된 후에는 거의 대부분이 인체 내 조직에 흡수되거나 일체화가 되어서 생체 적합성이 우수한 것으로 알려져 있다. 또한, 인산칼슘 시멘트는 손상 위치와 형태에 따라 다양하게 적용할 수 있는 유연성의 이점이 있다. 따라서, 주입 가능한 인산칼슘 시멘트를 도입하면, 시멘트의 처리와 이동이 매우 향상되고, 새로운 인산칼슘 시멘트 적용 분야가 가능하게 된다.

종래에는 다양한 이식용 소재가 골 수복이나 회복 및 골 증대에 이용되어 왔다. 가장 널리 이용되는 이식용 소재는 자가조직 이식용 골, 합성 고분자 및 비활성 금속 등이다. 이러한 소재를 사용하는 의료 프로토콜(표준지침)은 환자의 통증, 수술중 감염 위험, 생체적합성 부족, 고비용, 또한 삽입된 하드웨어가 추후 뼈를 손상시킬 수 있는 위험 등 심각한 문제점이 있다.

골 대체물질로 폴리메틸메타크릴레이트(PMMA) 계열이 많이 사용되어 왔으며, 상기 PMMA의 골 시멘트는 고체 이식재를 사용할 필요가 없어 유리하나, 몇가지 단점도 있다. 메타크릴레이트 및 메타크릴산은 생체 조직에 자극성이 있는 것으로 알려져 있으며, PMMA 시멘트는 체내에서 경화될 경우 유리 라디칼이 발생하여 주변 조직을 손상시킬 수도 있다. 더욱이 상기 물질의 중합반응은 고발열성이므로 경화시 방출된 열이 조직을 손상시킬 수도 있고, 생분해되지 않는 문제점이 있다. 따라서, 상기와 같은 문제점을 해결하기 위해서는 종래의 골수복 기술의 대안으로 이용될 수 있는 신규의 골 대체물을 개발하는 것이다.

이에, 본 발명자는 새로운 골 대체물질로 콜라겐을 함유한 인산칼슘 시멘트의 제조방법을 연구한 결과, 인산칼슘 시멘트와 콜라겐의 마이크로입자형 전달체를 제조함으로써, 종래 기술에 비해 생체적합성이 우수하고 뼈의 재생속도를 촉진시킬 수 있어 골 충진제 또는 약물 전달체 등으로 유용하게 적용할 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

본 발명은 인산칼슘 시멘트와 콜라겐의 마이크로입자형 전달체의 제조방법을 제공하기 위한 것으로, 생체적합성이 우수하고, 뼈의 재생속도를 촉진시킬 수 있어 골 충진제 또는 약물 전달체 등으로 이용할 수 있는 새로운 골 대체물질을 제공하기 위한 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 하나의 양태로서, 인산칼슘 시멘트와 콜라겐의 마이크로입자형 전달체의 제조방법에 있어서, 1) 탄산칼슘을 디칼슘 포스페이트 무수물과 반응시켜 알파형 트리칼슘 포스페이트를 제조하는 단계; 2) 상기 알파형 트리칼슘 포스페이트를 콜라겐을 함유한 5%의 디소디움 하이드로젠 포스페이트 용액과 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계; 3) 상기 혼합물을 오일에 첨가한 후 교반하여 콜라겐을 함유한 인산칼슘 시멘트를 제조하는 단계; 4) 상기 인산칼슘 시멘트를 세척 및 건조시키는 단계를 포함하는 인산칼슘 시멘트와 콜라겐의 마이크로입자형 전달체 및 콜라겐으로 구성되는 마이크로입자의 제조방법을 제공한다.

본 발명에서 사용되는 용어 "시멘트"란, 분말형 고체상 및 액상의 혼합으로 얻은 페이스트의 경화체를 의미한다. 상기 시멘트의 "경화"는 실온 혹은 체온에서 인위적인 처리 없이 행해진 페이스트의 자발적 경화를 의미하며, 이때의 페이스트는 고체상과 액상을 혼합한 결과로 얻어진 것이다.

본 발명에서 사용되는 용어 "인산칼슘 시멘트"는 분말형 고체상이 인산칼슘 화합물 혹은 칼슘 및/또는 인산염 화합물의 혼합물로 구성되는 시멘트를 의미한다.

상기 인산칼슘 시멘트(calcium phosphate cement; CPC)는 인산칼슘계 입자들이 주성분인 분말과 인산염과 같은 경화를 촉진하는 물질을 함유한 수용액으로 구성되는 소재로, 시술 시 두 성분을 혼합하여 고점도의 액상 상태로 적용시키면 적용 부위에서 두 성분들의 화학 반응에 의해 인산칼슘 화합물이 침전되어 경화됨으로써, 손상된 뼈 및 뼈, 또는 뼈 및 임플란트 사이의 빈 공간을 채워주어 둘 사이를 고정하고 안정화시켜 주는 골 대체물질의 한 형태이다.

본 발명에서 사용되는 용어 "마이크로입자(microsphere)"는 1 mm 미만의 직경, 바람직하게는 150 내지 250 μm의 직경, 보다 바람직하게는 80 내지 200 μm의 직경을 갖는 균질 고분자 매트릭스에 의해 형성되는 미세입자를 의미한다.

본 발명에서 상기 단계 1)은, 탄산칼슘(calcium carbonate; CaCO₃)을 디칼슘 포스페이트 무수물(dicalcium phosphate anhydrous; CaHPO₄)과 반응시켜 알파형 트리칼슘 포스페이트(α-tricalcium phosphate; α-TCP)를 제조하는 단계를 의미한다.

구체적으로, 상기 단계 1)은 탄산칼슘과 디칼슘 포스페이트 무수물을 1400 내지 1500℃의 온도에서 반응시켜 냉각한 후 진공상태에서 분쇄하여 알파형 트리칼슘 포스페이트를 수득한다.

본 발명에서 상기 단계 2)는, 상기 알파형 트리칼슘 포스페이트를 콜라겐을 함유한 5%의 디소디움 하이드로젠 포스페이트(disodium hydrogen phosphate; Na₂HPO₄) 용액과 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계를 의미한다.

구체적으로, 상기 단계 2)는 제조된 알파형 트리칼슘 포스페이트와 콜라겐을 함유한 5%의 디소디움 하이드로젠 포스페이트 용액을 0.5 내지 2.0:1의 중량비로 반응시켜 혼합물을 수득할 수 있다.

이때 상기 알파형 트리칼슘 포스페이트와 콜라겐을 다양한 비율로 혼합함으로써 다양한 크기의 마이크로입자를 얻을 수 있다. 또한, 상기 알파형 트리칼슘 포스페이트와 콜라겐의 혼합 비율은 1:1인 것이 바람직하다.

본 발명에서 상기 단계 3)은, 상기 혼합물을 오일에 첨가한 후 교반하여 콜라겐을 함유한 인산칼슘 시멘트를 제조하는 단계를 의미한다.

구체적으로, 상기 단계 3)은 상기 혼합물 0.1~10 ml를 오일 배스 5~100 ml에 첨가한 후 교반하여 수행한다. 이때 상기 오일은 올리브 오일을 사용할 수 있으며, 상기 알파형 트리칼슘 포스페이트와 콜라겐을 1:1로 혼합 후 교반함으로써 40분 이내에 구형태의 마이크로입자를 수득할 수 있다.

상기 교반 시간은 10분 내지 2시간 동안 수행한다. 또한, 상기 교반 속도는 200 내지 1000 rpm으로 수행한다.

본 발명에서 상기 단계 4)는, 상기 인산칼슘 시멘트를 세척 및 건조시키는 단계를 의미한다.

구체적으로, 상기 단계 3)은 반응 후 마이크로입자를 완전히 세척하고 건조하여 인산칼슘(calcium phosphate cement; CPC) 및 콜라겐으로 구성되는 마이크로입자(구 형태)를 수득할 수 있다.

상기 인산칼슘 및 콜라겐으로 구성되는 마이크로입자를 광학 현미경(optical microscopy; OM)으로 분석한 결과, CPC/콜라겐 비율을 증가시켰을 때 평균 마이크로입자의 크기가 160 ㎛에서 320 ㎛로 증가한 것을 확인할 수 있었다(1(a), (b)).

또한, 인산칼슘 및 콜라겐으로 구성되는 마이크로입자를 생체모방용액(simulated body fluid; SBF)에서 1~7일 동안 배양시켜 에너지 분광기(Energy dispersive spectroscopy; EDS)로 측정한 결과, Ca/P의 몰비가 1.508에서 1.668로 증가된 것을 확인하였다. 이를 통해 상기 마이크로입자가 하이드록시아파타이트(hydroxyapatite; HA)와 유사한 미세결정을 형성하는 것을 확인할 수 있었다(3(d)).

본 발명에 따른 인산칼슘 및 콜라겐으로 구성되는 마이크로입자에 세포를 성장시켜 골 생성 반응을 확인한 결과, 마이크로입자의 표면 밑에 잘 부착되었고, 마이크로입자 표면은 비세포 유체(acellular fluid) 상태에서 관찰된 것과 유사하게 아파타이트 나노결정으로 변형된 것을 확인할 수 있었다(도 4(a)~(c)).

본 발명에 따른 인산칼슘 시멘트와 콜라겐의 마이크로입자형 전달체는 뼈와 유사한 콜라겐을 함유하고 있고, 뼈의 재생속도를 촉진시킬 수 있어 골 충진제 및 골 대체제로 유용하게 사용될 수 있다. 또한, 본 발명의 인산칼슘 시멘트와 콜라겐의 마이크로입자형 전달체는 생체적합성이 우수하여 약물 전달체로 사용될 수 있으며, 생체 내에 원하는 부위에 안전하고 효과적으로 전달할 수 있다. 나아가 본 발명의 인산칼슘 시멘트와 콜라겐의 마이크로입자형 전달체는 약물 전달체 뿐만 아니라 골 치료, 골 증강, 골 재형성, 골 재생 및 골다공증 치료와 관련된 치과, 정형외과, 성형외과 및 신경외과 등에 유용하게 사용될 수 있다.

도 1(a)은 다양한 CPC/콜라겐 비율에 따른 인산칼슘 및 콜라겐으로 구성되는 마이크로입자의 크기 분포를 나타낸 광학 현미경 스펙트럼을 나타낸 것이며, 도 1(b)은 마이크로입자의 크기를 나타낸 광학 현미경 스펙트럼을 나타낸 것이다.
도 2(a)는 0.8, (b)은 1.0 및 (c)은 1.2의 각각 다른 CPC/콜라겐 비율에 따른 인산칼슘 및 콜라겐으로 구성되는 마이크로입자의 주사전자현미경 사진을 나타낸 것이다.
도 3(a)은 1일, (b)는 3일 및 (c)는 7일 동안 생체모방용액(SBF)에 침지시켜 배양한 인산칼슘 및 콜라겐으로 구성되는 마이크로입자 표면의 주사전자현미경 사진이며, 도 3(d)은 생체모방용액에서 7일 동안 배양시킨 후의 인산칼슘 및 콜라겐으로 구성되는 마이크로입자의 EDS 스펙트럼 사진을 나타낸 것이다.
도 4(a)~(c)는 3일, 4(d), (e)는 7일 동안 인산칼슘 및 콜라겐으로 구성되는 마이크로입자에 세포를 성장시킨 후의 세포의 부착 및 성장 사진을 나타낸 것이다.

이하，본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 더욱 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐，실시예에 의하여 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

실시예 1 : 알파형 트리칼슘 포스페이트의 제조

탄산칼슘(calcium carbonate; CaCO₃)과 디칼슘 포스페이트 무수물(dicalcium phosphate anhydrous; CaHPO₄)을 혼합한 후 약 1400℃에서 열처리하여 냉각하였다. 냉각한 분말을 진공상태에서 분쇄하고 100 μm 이하로 여과하여 알파형 트리칼슘 포스페이트(α-tricalcium phosphate; α-TCP)를 제조하였다.

실시예 2 : 인산칼슘 시멘트( CPC )-콜라겐의 제조

상기 실시예 1에서 제조된 α-TCP 분말을 1.4 ㎎/ml 농도에서 콜라겐을 함유한 5%의 디소디움 하이드로젠 포스페이트(disodium hydrogen phosphate; Na₂HPO₄) 용액과 다양한 비율(0.8:1, 0.9:1, 1:1, 1.1:1 및 1.2:1)로 혼합하였다.

상기 혼합물의 α-TCP과 콜라겐의 비율을 1:1로 혼합한 후 혼합물 1 ml를 오일 배스(올리브 오일 60 ml)에 첨가하여 약 380 rpm 속도에서 1시간 동안 교반하였다. 교반 후 마이크로입자를 완전히 세척하고 건조하여 인산칼슘(calcium phosphate cement; CPC) 및 콜라겐으로 구성되는 마이크로입자(구 형태)를 제조하였다.

실시예 3 : 인산칼슘 시멘트( CPC )-콜라겐의 골 생성

상기 실시예 2에서 제조된 인산칼슘 및 콜라겐으로 구성되는 마이크로입자가 단일막으로 퍼지도록 96 웰 플레이트의 각 웰에 넣었다. 세포는 β-글리세롤 포스페이트(β-glycerol phosphate) 10 mM과 L-아스코르빈산(L-ascorbic acid) 50 g/ml를 포함하는 골모세포 배양액(osteogenic medium; OM)에 2×10³ cell/wall의 밀도에서 성장시켰고, 37℃에서 95% CO₂의 인큐베이터에서 3~7일 동안 배양시켰다.

상기 배양 후, 마이크로입자로 성장된 세포 형상을 글루탈알데히드(glutaraldehyde) 2.5% 샘플에 10분 동안 고정하여 측정하였다. 에탄올 50%, 70%, 95% 및 100%로 단계별로 건조시켰고, 헥사메틸다이실라잔(Hexamethyldisilazane, HMDZ)으로 처리한 다음 금으로 코팅하였다.

실험예 1 : 광학 현미경 분석

상기 실시예 2에서 제조된 인산칼슘 및 콜라겐으로 구성되는 마이크로입자의 형상을 알아보기 위해 광학 현미경(Optical microscopy; OM, Motic사)으로 분석하였고, 얻어진 결과를 도 1에 나타내었다.

도 1(a)은 다양한 CPC/콜라겐 비율에 따른 인산칼슘 및 콜라겐으로 구성되는 마이크로입자의 크기 분포를 나타낸 광학 현미경 스펙트럼이며, 도 1(b)은 마이크로입자의 크기를 나타낸 광학 현미경 스펙트럼이다.

상기 콜라겐을 함유한 CPC 마이크로입자의 제조 과정 동안에 복합체 구형은 몇 분 이내에 경화되었고, 수백 ㎛ 크기의 마이크로입자는 실험에서 사용된 모든 구성에서 유화(emulsification) 방법을 통해 제조하였다.

도 1(a), (b)에 나타낸 바와 같이, CPC/콜라겐 비율을 0.8~1.2로 반응시켜 제조한 인산칼슘 및 콜라겐으로 구성되는 마이크로입자의 크기를 측정한 결과, CPC/콜라겐 비율을 증가시켰을 때 평균 마이크로입자의 크기는 160 ㎛에서 320 ㎛로 증가한 것을 확인하였다. 상기 CPC 분말을 더 추가하였을 때, 마이크로입자의 크기가 증가된 것을 확인할 수 있었다.

실험예 2 : 주사전자현미경 분석

상기 실시예 2에서 제조된 인산칼슘 및 콜라겐으로 구성되는 마이크로입자의 형상 및 구조를 알아보기 위해 주사전자현미경(Scanning electron microscopy; SEM, Hitachi사)으로 분석하였고, 얻어진 결과를 도 2 및 도 3에 나타내었다.

도 2(a)는 0.8, (b)은 1.0 및 (c)은 1.2의 각각 다른 CPC/콜라겐 비율에 따른 인산칼슘 및 콜라겐으로 구성되는 마이크로입자의 주사전자현미경 사진이다.

도 2(a), (b), (c)에 나타낸 바와 같이, 모든 입자는 구형으로 성장하였고, 소수의 ㎛의 크기를 갖는 CPC 입자의 존재를 나타내는 표면 구조는 둘레에 기공을 나타내는 공간을 갖는 것을 확인할 수 있었다.

도 3(a)은 1일, (b)은 3일 및 (c)은 7일 동안 생체모방용액(SBF)에 침지시켜 배양한 인산칼슘 및 콜라겐으로 구성되는 마이크로입자 표면의 주사전자현미경 사진이다.

도 3(a), (b), (c)에 나타낸 바와 같이, 콜라겐의 섬유 형태는 CPC 마이크로입자의 빈 공간을 채우기 위해 입자와 연결되는 것을 확인하였고, 콜라겐이 기공 부분을 감소시키는 만큼 CPC 입자가 콜라겐과 연결되는 것을 확인할 수 있었다.

실험예 3 : 에너지 분광기 분석

상기 실시예 2에서 제조된 인산칼슘 및 콜라겐으로 구성되는 마이크로입자를 생체모방용액(simulated body fluid; SBF)에서 배양시켰을 때 마이크로입자의 형상을 알아보기 위해 에너지 분광기(Energy dispersive spectroscopy; EDS)를 이용하여 Ca/P의 몰비를 측정하였고, 얻어진 결과를 도 3(d)에 나타내었다.

상기 콜라겐을 함유한 CPC 마이크로입자를 정적 상태하에 37℃에서 다른 시간대로 2.5 mM Ca^{2 +}, 142 mM Na⁺, 1.5 mM Mg^{2 +}, 5.0 mM K⁺, 125.0 mM Cl^-, 27.0 mM HCO₃ ^-, 1.0 mM HPO₄ ^{2 -} 및 0.5 mM SO₄ ^{2 -}를 포함하는 생체모방용액(simulated body fluid; SBF)에 침지시켰다.

도 3(d)은 생체모방용액에서 7일 동안 배양시킨 후의 인산칼슘 및 콜라겐으로 구성되는 마이크로입자의 EDS 스펙트럼 사진으로 배양시킨 결과, 상기 마이크로입자의 Ca/P 비율이 1.508에서 1.668로 증가된 것을 확인하였다. 이를 통해 상기 마이크로입자가 하이드록시아파타이트(hydroxyapatite; HA)와 유사한 미세결정을 형성하는 것을 확인할 수 있었다.

또한, 상기 마이크로입자를 1~7일 동안 배양시킨 결과, 마이크로입자의 결정 크기가 증가된 것을 확인할 수 있었고, 콜라겐을 함유한 CPC 마이크로입자는 결정과 같은 골 무기물의 형성에 생체활성적이고, 세포를 형성하는 뼈를 부착 및 성장시키기 위해 적합한 기질 상태를 제공하는 것을 확인할 수 있었다.

실험예 4 : 인산칼슘 시멘트( CPC )-콜라겐의 골 생성 측정

상기 실시예 3에서 형성된 인산칼슘 및 콜라겐으로 구성되는 마이크로입자의 골 생성 반응을 알아보기 위해 Preosteoblast(MC3T3-E1)를 사용하여 분석하였고, 얻어진 결과를 도 4에 나타내었다.

도 4(a)~(c)는 3일, 4(d), (e)는 7일 동안 인산칼슘 및 콜라겐으로 구성되는 마이크로입자에 세포를 성장시킨 후의 세포의 부착 및 성장 사진을 나타낸 사진으로 3일 후 세포가 CPC-콜라겐 마이크로입자의 표면 밑에 잘 부착된 것을 확인하였고, 마이크로입자 표면은 비세포 유체(acellular fluid) 상태에서 관찰된 것과 유사하게 아파타이트 나노결정으로 변형된 것을 확인할 수 있었다.

7일째, 세포는 구형 기질에 더 길게 늘어졌으며, 몇몇의 뭉침을 확인하였고, 특히 교원성 기질(collageneous) 섬유인 다수 섬유 성분들이 세포의 기반을 구성하는 것을 확인할 수 있었다.

Claims (5)

1) 탄산칼슘을 디칼슘 포스페이트 무수물과 반응시켜 알파형 트리칼슘 포스페이트를 제조하는 단계;
2) 상기 알파형 트리칼슘 포스페이트를 콜라겐을 함유한 5%의 디소디움 하이드로젠 포스페이트 용액과 혼합하여 혼합물을 제조하는 단계;
3) 상기 혼합물을 오일에 첨가한 후 교반하여 콜라겐을 함유한 인산칼슘 시멘트를 제조하는 단계;
4) 상기 인산칼슘 시멘트를 세척 및 건조시키는 단계를 포함하는 인산칼슘 시멘트와 콜라겐의 마이크로입자형 전달체의 제조방법.

제1항에 있어서, 상기 단계 1)의 반응 온도는 1400 내지 1500℃인 것을 특징으로 하는 인산칼슘 시멘트와 콜라겐의 마이크로입자형 전달체의 제조방법.

제1항에 있어서, 상기 단계 2)는, 제조된 알파형 트리칼슘 포스페이트와 콜라겐을 함유한 5%의 디소디움 하이드로젠 포스페이트 용액을 0.5 내지 2.0:1의 중량비로 반응시킨 것을 특징으로 하는 인산칼슘 시멘트와 콜라겐의 마이크로입자형 전달체의 제조방법.

제1항에 있어서, 상기 단계 3)의 교반 시간은 10분 내지 2시간인 것을 특징으로 하는 인산칼슘 시멘트와 콜라겐의 마이크로입자형 전달체의 제조방법.

제1항에 있어서, 상기 단계 3)의 교반 속도는 200 내지 1000 rpm인 것을 특징으로 하는 인산칼슘 시멘트와 콜라겐의 마이크로입자형 전달체의 제조방법.

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