KR101141194B1

KR101141194B1 - 폐경기 증상의 예방 또는 치료용 식물성에스트로겐 조성물

Info

Publication number: KR101141194B1
Application number: KR1020080134157A
Authority: KR
Inventors: 김재수; 곽보연; 이권택; 이재경
Original assignee: (주)내츄럴엔도텍
Priority date: 2008-12-26
Filing date: 2008-12-26
Publication date: 2012-07-09
Also published as: KR20100076206A

Abstract

본 발명은 신남산(cinnamic acid), 산지사이드 메틸에스테르(Shanzhiside methylester) 또는 이의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 폐경기 증상의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은 우수한 에스트로겐 활성을 나타내며, 에스트로겐 감소에 의해 유발되는 전폐경, 폐경 및 후폐경 시기에서의 각종 폐경기 증상의 치료 또는 예방에 유용하다.

폐경기, 에스트로겐, 신남산, 산지사이드 메틸에스테르

Description

폐경기 증상의 예방 또는 치료용 식물성에스트로겐 조성물{Phytoestrogenic Compositions for Preventing or Treating Symptoms Associated with Menopause}

본 발명은 폐경기 관련 증상의 예방 또는 치료용 식물성 에스트로겐 조성물에 관한 것이다.

에스트로겐은 난소 내의 난포에서 분비되는 호르몬으로서, 생식기를 발육시키고 그 기능을 나타내도록 하여 제2차 성징을 발달시키며 자궁 발육?내막 증식, 젖샘 발육, 규칙적 월경 등을 촉진한다. 에스트로겐은 난소 이외에도 태반을 비롯하여 부신피질이나 정소로부터 소량 분비되는데, 에스트론, 에스트라디올 및 인체에서 볼 수 있는 에스트리올 등 3 종류의 스테로이드가 알려져 있다.

에스트로겐은 아로마티제이션 (Aromatization)이라는 효소적 과정을 통해 남성 호르몬 전구체로부터 생성된다. 폐경기 이전의 여성에게 가장 많으면서 강력한 에스트로겐인 17 베타-에스트라디올 (E2)은 난포를 만들어내면서 합성되고, 혈액으로 분비되어 부분적으로 성 호르몬 결합 글로불린 (sex hormone binding globulin) 과 결합하여 몸 전체의 세포로 흐르게 된다. 에스트라디올 대사의 주요 경로는 약한 에스트로겐인 에스트론 (E1)으로 가역 산화된 후 에스트리올 (E3)로 변하는 것이다. 에스트론은 안드로겐의 전구물질인 안드로스테네디온 (androstenedione)의 아로마티제이션을 통해 말초 조직에서 생성된다. 상기 화합물들은 설페이트와 글루코로나이드 (glucuronide) 형태로 대사된 후 배설된다 (Lievertz RW. Pharmacology and pharmacokinetics of estrogen. Am J Obstet Gynecol 156:1289-1293(1987)). 아로마티제이션은 지방 조직에서 일어나므로, 지방 조직이 많은 사람은 에스트로겐이 더 많게 된다. 에스트라디올과 에스트론은 간에서 대사되어 매우 약한 에스트로겐 화합물인 에스트리올로 될 수 있다 (Anderson F. Kinetics and pharmacology of estrogens in pre- and postmenopausal women. Int J Fertil 38(suppl 1):53-64(1993)). 에스트라디올 및 에스트론 이외의 다른 에스트로겐 대사물들도 에스트로겐 작용이 있다. 따라서, 에스트로겐과 그 대사물들의 복합체가 여성에게 있어서 전체적인 에스트로겐 효과를 결정짓는다.

에스트라디올 및 에스트론의 피크 농도는 각각 200-400 pg/㎖ 및 170-200 pg/㎖로서, 배란기에서 얻어진 후 월경 초기에 각각 최저 농도인 40-60 pg/㎖ 및 40-60 pg/㎖로 떨어진다.

폐경 전의 에스트라디올/에스트론 비율은 일반적으로 1보다 크다 (Odonnell MB. Pharmacokinetic and pharmacologic variation between different estrogen products. J Clin Pharmacol 35(suppl):18S-24S(1995)). 폐경 후에는 부신 안드로스테네디온의 전환으로부터 생기는 에스트론이 가장 많은 에스트로겐이 된다.

에스트로겐의 보다 복잡한 작용으로는 2-히드록시화를 통한 대사 경로가 있는데, 이를 통해 카테콜레스테로겐이 형성된다. 이 과정은 말초 조직보다는 뇌와 같은 중추 신경계에서 훨씬 중요하다. 에스트로겐은 카테콜아민 대사를 변경시켜 그 효과를 낼 수 있다 (Lievertz RW. Pharmacology and pharmacokinetics of estrogen. Am J Obstet Gynecol 156:1289-1293(1987)). 카테콜아민은 아드레날린의 전구체인 도파민 수용체, 알파 1-아드레날린 수용체 및 세로토닌 수용체와 상호작용하기 때문에 중요하다. 또한, 에스트로겐의 히드록시 유도체들은 다른 작용을 한다. 예컨대, 4-히드록시 에스트로겐은 에스트로겐 작용을 하나, 2-히드록시 에스트로겐은 그렇지 않다. 그러나, 에스트라디올의 2-히드록시 유도체는 에스트로겐 작용 뿐만 아니라, 카테콜아민 작용도 한다 (Lievertz RW. Pharmacology and pharmacokinetics of estrogen. Am J Obstet Gynecol 156:1289-1293(1987)). 이것은 에스트로겐이 중추 신경계에 영향을 미치는 메커니즘을 부분적으로 설명한다.

에스트로겐의 주요 생리 작용은 유선, 자궁, 난소를 포함한 생식 조직의 성장, 분화 및 작용 등에 영향을 미치는 것이다(Kuiper GGJM, Carlsson B, Grandien K, et al. Comparison of the ligand binding specificity and transcript tissue distribution of estrogen receptors alpha and beta. Endocrinology 138:863-870(1997)). 에스트로겐은 자궁 내막, 자궁 근육, 질 및 요도 상피의 성장을 자극한다. 또한, 생식기의 혈관 흐름을 원활히 하고, 자궁선 분비를 증가시키며, 프로게스테론과 황체형성 호르몬 수용체의 발현을 유도한다. 에스트로겐은 여성 생식 기관과 제2차 성징 발현 외에도, 골격 성장과 발달, 여성의 지방 분배, 지질 대사 등에 영향을 준다. 또한, 피부와 콜라겐 조직, 뉴런, 심혈관계 등에 작용한다.

에스트로겐이 결핍되면, 혈관 운동 불안정으로 인하여 일과성 열감과 같은 증상이 일어나며, 장기적으로는 비뇨 생식기의 퇴화, 골다공증, 치아 손상, 동맥경화증, 관상 심장질환 등이 일어나고, 치매의 위험이 있다 (Maddox RW, Carson DS, Barnes CL. Estrogens and postmenopausal women. U S Pharmacist 23:141-150(1998); 및 Guyton AC, Hall JE. Textbook of Medical Physiology. 9th ed. Philadelphia: W.B. Saunders, 1996).

폐경기 이후, 여성들은 난소 기능이 저하되면서 에스트로겐의 분비 부족으로 인한 안면홍조, 우울증 등의 각종 폐경기 증상을 경험하는데, 폐경기 이후 에스트로겐의 생성이 줄어든 여성의 체내에 인위적으로 에스트로겐을 투여함으로써 질병 발생 위험을 감소시키는 방법이 호르몬 대체 요법이다.

폐경기 여성들에게 에스트로겐을 투여하면, 혈관 운동과 비뇨 생식기 질환을 덜어주고 골다공증 예방과 관리가 가능하며, 심혈관계 질환의 위험을 줄일 수 있다 (Maddox RW, Carson DS, Barnes CL. Estrogens and postmenopausal women. U S Pharmacist 23:141-150(1998)).

그러나, 이러한 호르몬 대체 요법은 암 유발 유전자의 활성을 증가킴으로써 유방암 및 자궁암 등의 발병 위험을 높일 수도 있다는 문제점이 있다.

기존의 에스트로겐 대체제는 천연 및 합성 제품이 있는데, 예컨대, 동물성 천연 제품인 말의 오줌으로부터 제조된 프레마린은 임상적 실험에서 에스트라디올과 에스트론 농도를 월경기 정도로 높여주는 것으로 나타났다 (Stumpf PG. Pharmacokinetics of estrogen. Obstet Gynecol 75(suppl):9S-14S(1990)). 그러나, 이것은 수십년간 보고된 수많은 부작용으로 인해, Women's Health Initiative (WHI)라는 대규모 Multi-center 임상시험을 16,000명의 폐경기 여성을 대상으로 8년간 실시하기로 하였으나, 심각한 부작용으로 말미암아 5년만에 종료하였으며, 이에 따라, FDA에서 2003년 이 호르몬 의약품에 대해 경고 문구를 넣도록 조치하기에 이르렀다. WHI 임상결과를 보면, 유방암 26%, 심장마비 29%, 졸도가 44% 증가하였고, 혈액응고가 2배 증가하는 등의 심각한 부작용이 보고되었다 (Journal of the American Medical Association, July 2002). NAMS(북미폐경학회)에서는 "호르몬병합요법을 관상동맥질환의 일차나 이차 예방 목적으로 사용해서는 절대로 안된다"며 “에스트로겐 단독 요법도 확실한 연구 자료가 나올 때까지는 사용하지 말아야 할 것"이라고 강력히 권고했다.

한편, 대두, 대추야자, 석류 등과 같은 식물은 비스테로이드성 식물 화합물인 식물성 에스트로겐을 함유한다. 이러한 식물성 에스트로겐은 동근 (agonist) 및/또는 길항근 (antagonist) 역할을 한다(Barrett J. Phytoestrogens: friends or foes? Environ Health Perspect 104:478-482(1996)).

또한, 화학적으로 변경된 것으로는 17 베타-에스트라디올, 에스트론 및 에스트로겐 설페이트 등이 있다. 이러한 합성 에스트로겐은 경구용 피임약으로 널리 사용되나, 호르몬 대체 요법으로는 거의 사용되지 않는다.

요컨대, 에스트로겐은 나이가 듦에 따라 분비량이 적어지고 그 분비 패턴의 변화는 노화의 추세와 직접적인 상관성을 지니며, 호르몬 대체제의 복용을 통해 전 반적인 폐경기 증상에 대한 대처가 가능하지만 기존의 호르몬 대체제는 부작용이 심하다는 문제점이 있다.

본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.

본 발명자들은 에스트로겐 대체제로서의 유효성분을 발굴하기 위하여 다양한 천연 화합물에 대하여 에스트로겐 활성(estrogenecity)을 분석하였다. 그 결과, 다른 천연 화합물들보다 신남산 및 산지사이드 메틸에스테르가 에스트로겐 특이 ALP(Alkaline Phosphatase)를 유효하게 증가시킴으로써 식물성 에스트로겐 활성이 있음을 확인하여 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서 본 발명의 목적은 폐경기 증상의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적은 폐경기 증상의 예방 또는 치료용 식품 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 폐경기 증상의 예방 또는 치료 방법을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.

본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 (a) 신남산(cinnamic acid), 산지사이드 메틸에스테르(Shanzhiside methylester) 또는 이의 혼합물의 약제학적 유효 량; 및 (b) 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 폐경기 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 신남산(cinnamic acid), 산지사이드 메틸에스테르(Shanzhiside methylester) 또는 이의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 폐경기 질환의 예방 또는 치료용 식품 조성물을 제공한다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상기 본 발명의 약제학적 조성물을 객체(subject)에 투여하는 단계를 포함하는 폐경기 질환의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상기 본 발명의 식품 조성물을 객체(subject)에 투여하는 단계를 포함하는 폐경기 질환의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.

본 발명자들은 에스트로겐 대체제로서의 유효성분을 발굴하기 위하여 다양한 천연 화합물에 대하여 에스트로겐 활성(estrogenecity)을 분석하였다. 그 결과, 다른 천연 화합물들보다 신남산 및 산지사이드 메틸에스테르가 에스트로겐 특이 ALP(Alkaline Phosphatase)를 유효하게 증가시킴으로써 식물성 에스트로겐 활성이 있음을 확인하였다.

본 발명자들에 의해 폐경기 질환 치료제로서 스크리닝된 신남산은 하기 화학식 1로 표시될 수 있다.

화학식 1

신남산은 백색 결정성 산으로서 133℃의 용융점 및 300℃의 비등점을 갖는 화합물이다. 종래 기술에 따르면 신남산은 향료, 합성 인디고 및 약품에 이용되고 있다.

본 발명에 따르면, 신남산은 화학적으로 합성된 것 또는 천연물로부터 유래된 것을 사용할 수 있다. 예컨대, 신남산은 시나몬(cinnamon) 오일, 발삼, 시버터 및 백하수오(Cynanchum wilfordii)와 같은 천연물로부터 분리하여 본 발명에 적용될 수 있다.

또한, 신남산은 페닐알라닌을 출발물질로 하고 페닐알라닌 암모니아-라이에이즈(phenylalanine ammonia-lyase) 효소를 이용하여 생합성적으로 얻을 수도 있다.

본 발명에서 또 다른 유효성분으로서의 산지사이드 메틸에스테르는 다음 화학식 2로 표시될 수 있다:

화학식 2

산지사이드 메틸에스테르는 이리도이드 배당체(iridoid glycoside) 천연화합물로서, 간독성, 스트레스 및 면역결핍 증상을 치료할 수 있는 것으로 알려져 있다(WO 2003/080087).

본 발명에 따르면, 산지사이드 메틸에스테르는 화학적으로 합성된 또는 천연물로부터 유래된 것을 사용할 수 있다. 예컨대, 신남산은 Mussaenda pubescens, Phlomis spinidens, Lamium purpureum, Phlomis umbrosa 및 Scoparia ericacea와 같은 천연물로부터 분리하여 본 발명에 적용될 수 있다.

본 발명에서 유효 성분으로 사용되는 신남산과 산지사이드 메틸에스테르는 종래의 에스트로겐 대체제에 비해서도 우수한 에스트로겐 활성을 나타낸다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물은 유효성분으로서 신남산과 산지사이드 메틸에스테르의 혼합물을 포함한다. 하기의 실시예에서 입증된 바와 같이, 신남산과 산지사이드 메틸에스테르의 혼합물은 개별 화합물과 비교하여 상승적인(synergistic) 에스트로겐 활성을 발휘한다.

본 발명의 조성물이 약제학적 조성물로 제조되는 경우, 본 발명의 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 본 발명의 약제학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 바람직하게는 경구 투여 방식으로 적용된다.

본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다.

본 명세서에서 용어 “약제학적 유효량”은 상술한 약리학적 효능을 발휘하는 데 충분한 양을 의미한다. 본 발명의 약제학적 조성물에 포함된 생리활성물질인 신남산 또는 산지사이드 메틸에스테르의 투여량은 성인 기준으로 0.001-10000 ㎎/kg 범위 내이다.

본 발명의 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식 을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액, 시럽제 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 산제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.

본 발명의 조성물이 식품 조성물로 제조되는 경우, 유효성분으로서 신남산 또는 산지사이드 메틸에스테르뿐만 아니라, 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 향미제를 포함한다. 상술한 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스, 올리고당 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 사이클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 향미제로서 천연 향미제 [타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등]) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다.

예컨대, 본 발명의 식품 조성물이 드링크제로 제조되는 경우에는 신남산 또는 산지사이드 메틸에스테르 이외에 구연산, 액상과당, 설탕, 포도당, 초산, 사과산, 과즙, 두충 추출액, 대추 추출액, 감초 추출액 등을 추가로 포함시킬 수 있다.

신남산 및 산지사이드 메틸에스테르 중 하나 이상을 포함하는 본 발명의 조성물은 폐경기 관련 다양한 증상의 예방 또는 치료에 유용하다.

본 명세서에서 용어 “폐경기 관련 증상”은 전폐경(perimenopausal), 폐경기 및 후폐경(postmenopausal) 시기에 발생되는 에스트로겐의 감소에 의해 유발되는 모든 증상을 의미한다. 전폐경은 실제적인 폐경이 시작되기 전의 시기이다. 이 전폐경 시기에서 에스트로겐의 생성이 불규칙하게 되며, 여성의 가임능력이 크게 감소한다. 전폐경은 몇 개월 또는 몇 년 동안 지속될 수 있다. 이 전폐경 시기에서도 갱년기(climacteric) 증상이 나타난다.

상기 폐경기 증상은 성교통증, 질건조증(vaginal dryness), 수면 장애(sleep disorder), 집중력 이상(mental awareness problem), 관절통, 근골격 질환, 소화불량, 요실금, 피로, 혈관 운동 난조로 인한 신열, 안면 홍조, 야간의 발한, 심계항진(palpitations), 우울증, 불안증(anxiety) 및 과민성(irritability) 등의 갱년기(climacteric) 증상을 포함한다. 한편, 더 나아가서 에스트로겐이 부족해지면 나타나는 심각한 질환이나 현상들인 골다공증, 비뇨생식기계 질환, 심혈관계 질환, 치매, 치아손실 및 피부 콜라겐 손실 등을 포함할 수 있다.

본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:

(i) 본 발명의 조성물은 천연물-유래 화합물인 신남산 또는 산지사이드 메틸에스테르를 유효성분으로 포함하며 우수한 에스트로겐 활성을 나타낸다.

(ii) 본 발명의 조성물은 에스트로겐 감소에 의해 유발되는 전폐경, 폐경 및 후폐경 시기에서의 각종 폐경기 증상의 치료 또는 예방에 유용하다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

실시예

실시예 1: 시료의 준비

신남산(cinnamic acid)은 Sigma-Aldrich(미국)에서 구입하였고, 산지사이드 메틸에스테르(Shanzhiside methylester)는 Chemos GmbH(독일)에서 구입하였다. 실험군 1은 신남산, 실험군 2는 산지사이드 메틸 에스테르, 실험군 3은 신남산과 산지사이드 메틸 에스테르를 중량비로 1:1로 혼합한 것이다.

실시예 2: 에스트로겐 활성의 분석

본 발명 화합물의 효과를 검증하기 위하여, 에스트로겐 활성(estrogenecity)을 측정하는 대표적인 방법인 비-생식 트랙 타겟 조직 반응(Non-reproductive tract target tissue response) 시험을 하였다. 보다 구체적으로, 조골세포(osteoblast cell)인 SaOS-2 세포는 에스트로겐과 안티에스트로겐에 의해 에스트로겐-특이 ALP(alkaline phosphatase) 유도가 각각 증가 및 감소하며(Nasu, M., Sugimoto, T., Kaji, H. and Chihara,K. (2000) Estrogen modulates osteoblast proliferation and function regulated by parathyroid hormone in osteoblastic SaOS-2 cells: role of insulin-like growth factor (IGF)-1 and IGF-binding protein-5. J. Endocrinol. 167, 305-31), 특히 간헐적인 에스트로겐 처리에 의해 미네랄화 골 노듈(mineralized bone nodule)의 형성이 증가하는 것으로 보고되었다(Rao, L.G., Liu, L.J., Murray, T.M., McDemott, E. and Zhang,X. (2003) Estrogen added intermittently, but not continuously, stimulates differentiation and bone formation in SaOS-2 cells. Biol. Pharm. Bull. 26(7), 936-94).

이러한 관점에서, 본 연구에서는 SaOS-2 세포를 이용하여 상기 실시예 1의 실험군들의 화합물에 대하여 에스트로겐 활성을 분석하였다.

SaOS-2 세포주는 한국세포주은행(KTCC)으로부터 구입하여 실험에 사용하였다. 10% FBS(fetal bovine serum) 및 1% 페니실린-스트렙토마이신이 첨가된 DMEM-high glucose/F12 supplement 배지(Gibco, Carlsbad, USA)를 사용하여 SaOS-2 세포를 37℃, 5% CO_2,95% 공기 조건에서 T-75 cm² 세포 플라스크에서 배양하였다. 에스트로겐-특이 ALP의 유도 정도를 측정하기 위하여, SaOS-2 세포주를 96-웰 플레이트에 3 x 10⁴ cells/웰 밀도로 분주하여 24시간 경과 후, 페놀 레드가 포함되지 않은 DMEM/F12에 1% 페니실린-스트렙토마이신, 1% 소듐 파이루베이트, 1% NEAA(non-essential amino acids, Hyclone, USA)와 10% 차콜-덱스트란 스트립트 FBS(CDFBS, Hyclone, USA)이 첨가된 새로운 배지로 교체하고, 17β-에스트라디올(E₂, Sigma-Aldrich, USA) 1 nM과 농도별(5 μmol, 20 μmol, 50 μmol 및 100 μmol)로 신남산, 산지사이드 메틸에스테르 및 이들의 복합물을 처리한 후 48 시간 동안 배양하였다. 48시간 배양된 각 웰에 세포 라이시스 완충액(100 mM Tris, 100 mM NaCl, 1 mM EDTA)를 50 ㎕씩 떨어뜨린 후, 30 mM의 p-나이트로페닐 포스페이트(Merk, Germany) 150 ㎕를 첨가하여 잘 흔들어주고, 405 nm에서 10분간 50초 간격으로 흡광도를 측정하였다. ALP 유도 정도는 다음과 같이 계산하였다: %유도 = [(Slope_시료)/(Slope_{17β-에스트라디올})] x 100.

SaOS-2 세포에서 신남산, 산지사이드 메틸에스테르 및 이들의 복합물의 에스트로겐-특이 ALP 유도효과는 도 1에 나타나 있다. 도 1에서 control은 음성대조군이고, 물질을 처리한 그래프에서 막대 그래프는 각각 왼쪽부터 시료 5 μmol, 20 μmol, 50 μmol 및 100 μmol에 해당하는 것이다. 각각의 물질은 ALP 유도효과를 나타내었고, 신남산과 산지사이드 메틸에스테르 복합물의 ALP 유도효과가 개별 물질에 비해 훨씬 우수하였다.

따라서 SaOS-2 세포를 이용한 비-생식 트랙 타겟 조직 반응 시험 결과를 종합해볼 때, 신남산 및 산지사이드 메틸에스테르는 에스트로겐 활성이 우수하며, 더욱이 이 두 물질의 복합물은 각각의 물질과 비교하여 상승적인 에스트로겐 활성이 있음을 알 수 있다.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현 예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

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도 1은 에스트로겐-특이 ALP(alkaline phosphatase) 유도능을 분석한 결과를 보여주는 그래프이다. Control은 음성 대조군이고, E2는 17β-에스트라디올 처리군이며, C+S는 신남산과 산지사이드 메틸에스테르의 1:1 복합물을 처리한 군이다.

Claims

(a) 신남산(cinnamic acid), 산지사이드 메틸에스테르(Shanzhiside methylester) 또는 이의 혼합물의 약제학적 유효량; 및 (b) 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 폐경기 증상의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물로, 상기 폐경기 증상은 성교통증, 질건조증(vaginal dryness), 수면 장애(sleep disorder), 집중력 이상(mental awareness problem), 관절통, 근골격 질환, 소화불량, 요실금, 피로, 혈관 운동 난조로 인한 신열, 안면 홍조, 야간의 발한, 심계항진(palpitations), 우울증, 불안증(anxiety) 및 과민성(irritability)으로 구성된 군으로부터 선택되는 갱년기(climacteric) 증상인 것을 특징으로 하는 폐경기 증상의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
신남산(cinnamic acid), 산지사이드 메틸에스테르(Shanzhiside methylester) 또는 이의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 폐경기 증상의 개선용 식품 조성물.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 조성물은 에스트로겐 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 조성물은 신남산과 산지사이드 메틸에스테르의 혼합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.