KR101118230B1 - Composition for Anti-influenza virus activity - Google Patents

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Abstract

본 발명은 바나바, 산국 및 오레가노 중에서 하나 이상 선택되는 식물 추출물을 포함하는 항-인플루엔자바이러스 활성을 가지는 식물 추출물 및 상기 조성물을 투여하여 인플루엔자바이러스 감염 질환을 예방 또는 치료하는 방법에 관한 것이다. The present invention relates to a plant extract having an anti-influenza virus activity comprising a plant extract selected from at least one selected from banaba, country of origin and oregano, and a method for preventing or treating an influenza virus infection disease by administering the composition.

인플루엔자바이러스, 항바이러스제 Influenza Viruses, Antivirals

Description

항-인플루엔자바이러스 조성물{Composition for Anti-influenza virus activity} Composition for anti-influenza virus

본 발명은 바나바, 산국 및 오레가노 중에서 하나 이상 선택되는 식물 추출물을 포함하는 항-인플루엔자바이러스 활성을 가지는 식물 추출물 및 상기 조성물을 투여하여 인플루엔자바이러스 감염 질환을 예방 또는 치료하는 방법에 관한 것이다. The present invention relates to a plant extract having an anti-influenza virus activity comprising a plant extract selected from at least one selected from banaba, country of origin and oregano, and a method for preventing or treating an influenza virus infection disease by administering the composition.

인플루엔자바이러스(Influenza virus)는 올소믹스비리데(Orthomyxoviridae)과에 속하는 바이러스로 독감을 수반한다.Influenza virus is a virus belonging to the family Orthomyxoviridae and carries the flu.

독감은 주로 겨울철에 발생하는 호흡기질환 중에서 가장 많은 수를 차지하는 질병으로 주된 증상은 호흡기질환이지만 그 영향은 온몸에 미친다. 급성 발열, 오한, 몸살, 식용감퇴, 두통, 근육통, 요통의 증상을 나타내며 심한 가래나 기침, 콧물, 눈의 충혈 등의 증세를 보이기도 하며 설사를 수반하기도 한다. 독감에 걸리면 정상인도 수일간 정상적인 생활이 거의 불가능하며 노약자의 경우는 더욱 증세가 심하며 사망까지 갈 수 있는 질병이다. 독감의 원인바이러스는 인플루엔자바이러스로 인플루엔자바이러스는 A, B, C 형으로 나뉘어지고 있으며 이 중 A형과 B형이 사람에게 빈번하게 감염되는 형이다. 특히 A형 바이러스의 혈청형은 혈구응집소와 뉴라미니데이즈 단백질의 아미노산 배열의 차이에 따라 결정된다. A형 인플루엔자바이러스의 혈구응집소(H)는 16개의 다른 아형이 존재하며 뉴라미디데이즈 효소(N)는 9개의 다른 아형이 존재하는데 혈구응집소 단백질 아형과 뉴라미니데이즈 단백질 아형의 조합이 어떻게 이루어지는 가에 따라 새로운 변이형이 결정되며(예;H1N1) 또한 숙주의 면역체계에 적응도에 따라서도 새로운 변이형이 나올 수도 있다(Yuen KY & Wong SSY., 2005. Hong Kong Med. 11;189-199). 그러나 혈구응집소 단백질 16개 아형과 뉴라미니데이즈 단백질 9개 아형이 모두 사람에게 감염되는 것은 아니고 혈구응집소 단백질 3개 아형(H1, 2, 3)과 뉴라미니데이즈 단백질 2개 아형(N1, 2)이 사람에게 감염될 수 능력을 가지고 있는 것으로 알려져 있으나 닭이나 오리 등의 조류에서 발견되는 H5N1 형도 사람에게 감염되는 수도 있다 (Ligon BL 2005. Semin Pediatr. Infect Dis 16:325-335). 따라서 인플루엔자바이러스의 새로운 변이종의 빈번한 발생은 백신의 효용성을 낮추고 있을 뿐만 아니라 백신은 조류독감 같은 인체에 감염능력을 가진 새로운 독감바이러스에 대처할 수 없다. 그래서 독감바이러스에 대처할 수 있는 다양한 치료제의 개발이 필요하다. 인플루엔자바이러스의 증식을 억제하는 약제는 2 가지 형태가 있다. 하나는 아만타딘(amantadine)으로 1964년 Dupont 사에 의해 개발된 M이온 채널 억제제로서 1980년까지 인플루엔자 A형 바이러스 감염을 치료하는데 사용되었으며 구역질, 졸음, 만 성적 불면증을 초래한다 (LongJK., Mossad SB., Goldman MP. 2000. Cleve Clin J. med. 67:92-95). 이후 아만타딘보다 부작용이 적은 리만타딘(rimantadine)이 개발되었으나 리만타딘 역시 부작용 발생률이 높은 편이다 (Jefferson 외 4인 2004. Cochrane Database Syst. Rev. (3): CD001169). 두 번째 형태 약제는 뉴라미니데이즈 효소 저해제 기능을 가진 약제로 자나미비르 (zanamivir)와 오셀타미비르 (osetamivir) 등이 인플루엔자바이러스 치료제로 사용되고 있다(Dreitlein WB., Maratos J., Brocavich. 2001. Clin Ther. 23:327-355). 자나미비르는 글락소웰컴사에서 리렌자 (Relenza) 라는 상표로 판매하고 있으며 흡입형으로 되어 있어 코로 약제 가루를 흡입하도록 되어 있으며, 오셀타미비르는 로쉬사에서 타미플루 (Tamiflu) 라는 명칭으로 판매하고 있고 amnatadine과 같이 구강 복용제로 사용하고 있다. 리렌자는 호흡하는데 문제가 생길 수 있어 천식은 악화될 가능성이 있으며 타미플루는 구역질, 구토 등의 부작용이 발생하고 있다 (McNicholl 과 McNicholl. 2001. Ann, Pharmacother. 35(1):57-70). The flu is the most common disease of the respiratory disease that occurs during the winter season. The main symptom is respiratory disease, but the effect is on the whole body. Acute fever, chills, body aches, loss of food, headache, muscle pain, low back pain symptoms, severe sputum, cough, runny nose, eye redness, etc. may also be accompanied by diarrhea. Influenza is nearly impossible for normal people to live normally for a few days, and the elderly are more serious and can cause death. The virus that causes influenza is influenza virus. Influenza viruses are divided into types A, B, and C. Among them, types A and B are frequently infected with humans. In particular, serotypes of type A viruses are determined by differences in the amino acid sequence of hemagglutinin and neuraminidase proteins. The hemagglutinin (H) of influenza A virus has 16 different subtypes and the neuramididases enzyme (N) has 9 different subtypes.How does the combination of hemagglutinin protein and neuraminidase protein subtypes work? New variants are determined (e.g. H1N1) and new ones may also be present depending on the host's adaptability to the immune system (Yuen KY & Wong SSY., 2005. Hong Kong Med. 11; 189-199). . However, not all 16 subtypes of hemagglutinin protein and 9 subtypes of neuraminidase protein are infected with humans, but 3 subtypes of hemagglutinin protein (H1, 2, 3) and 2 subtypes of neuraminidase protein (N1, 2) It is known to have the ability to infect humans, but H5N1, which is found in birds such as chickens and ducks, can also infect humans (Ligon BL 2005. Semin Pediatr. Infect Dis 16: 325-335). Thus, the frequent incidence of new mutants of influenza virus not only reduces the efficacy of the vaccine, but also prevents the vaccine from coping with new flu viruses that have the potential to infect humans such as avian influenza. Therefore, the development of various treatments to cope with the flu virus is necessary. There are two types of drugs that inhibit the growth of influenza viruses. One is amantadine, an M-ion channel inhibitor developed by Dupont in 1964, used to treat influenza type A virus infections until 1980, resulting in nausea, drowsiness, and chronic insomnia (LongJK., Mossad SB. , Goldman MP. 2000. Cleve Clin J. med. 67: 92-95). Since then, rimantadine has been developed with fewer side effects than amantadine, but rimantadine also has a high incidence of side effects (Jefferson et al., 2004. Cochrane Database Syst. Rev. (3): CD001169). The second type of drug has a function of neuraminidase enzyme inhibitor, and zanamivir and oseamimivir are used to treat influenza virus (Dreitlein WB., Maratos J., Brocavich. 2001. Clin Ther. 23: 327-355). Janamivir is sold under the trademark Relenza by Glaxowelcome Inc. and is inhaled to inhale the powder in the nose. Oseltamivir is sold by Rosh under the name Tamiflu and is sold by amnatadine. It is also used as a mouthwash. Relenza may cause breathing problems, which may make asthma worse and Tamiflu has side effects such as nausea and vomiting (McNicholl and McNicholl. 2001. Ann, Pharmacother. 35 (1): 57-70).

따라서 독성과 부작용이 적은 인플루엔자바이러스에 대한 항바이러스제의 개발이 적인 항바이러스제의 개발은 필요하다. Therefore, it is necessary to develop an antiviral agent that is effective in developing an antiviral agent for influenza virus with low toxicity and side effects.

천연식물 중에서 인플루엔자바이러스를 억제할 수 있는 활성 탐색은 오래전부터 여러 연구자에 의하여 진행되어 왔으나 (Etkind PR, Krug RM., 1975. J. Virol. 16:1464-1475; Nagata K., Sakagami H., Harada H., Nonoyama M., Ishihama A., Konno K., 1990. Antiviral Res. 13:11-21; Harada H., Sakagami H., Nagata K., Oh-Hara T., Kawazoe Y., Ishihama A., Hata N., Terada H., Konno K., 1991. Antiviral Res. 15:41-49;Nakayama M., Suzuki K., Toda M., Okubo S., Hara Y., Shimamura T.,1993. Antiviral Res. 21:289-299; Nagai T., Moriguchi R., Suzuki Y., Tomimori T., Yamada H., 1995. Antiviral Res. 26:11-25; Turan K., Nagata K., Kuru A., 1996. Biochem Biophys Res Commun 225:22-26; Kobayashi M., Davis SM., Utsunomiya T., Pollard RB., Suzuki F. 1999. Am J Clin med 27:53-62; Merten OW., Manuguerra JC., Hannoum C., van der Werf S. 1999. Dev. Biol. Stand. 98:23-27; Mantani N., Andoh T., Kawamata H., Terasawa K., Ochiai H. Antiviral Res. 44:193-200; Badmaev V., Nowakowski M. 2000. Phytother Res. 14:245-249; Rajbhandari M., Wegner U., Julich M., Schopke T., Mentel R. 2001. J Ethnop-harmacol. 74:251-255. Mantani N., Imanishi N., Kawamata H., Terasawa K., Ochiai H. 2001. Planta Med. 67:240-243; Imanishi N., Tiji Y., Katada Y., Maruhashi M., Konosu S., Mantani N., Terasawa K., Ochiai H. 2002. Microbiol Immunol. 46:491-494;Weiss EI., Houri-Haddad Y., Greenbaum E., Hochman N., Of다 I., Z마묘-Rones Z. 2005. Antiviral Res. 66:9-12) 일부 식물의 경우, 항바이러스 활성을 가지고 있음이 보고 되었으나(Kinghorn AD (1994) The discovery of drugs from higher plants. Biotechnology, 26 : 81-108.; Patrick L (1999) Hepatitis C: epidemiology and review of complementary/alternative medicine treatments. Altern Med Rev., 4(4) : 220-38), 식물 추출물이 기존의 항바이러스제보다 효능이 뛰어나지 않아 바이러스 감염 치료에 적용되는 사례는 아직까지 없었다. The search for activity that can suppress influenza virus in natural plants has long been conducted by several researchers (Etkind PR, Krug RM., 1975. J. Virol. 16: 1464-1475; Nagata K., Sakagami H., Harada H., Nonoyama M., Ishihama A., Konno K., 1990. Antiviral Res. 13: 11-21; Harada H., Sakagami H., Nagata K., Oh-Hara T., Kawazoe Y., Ishihama A., Hata N., Terada H., Konno K., 1991.Antiviral Res. 15: 41-49; Nakayama M., Suzuki K., Toda M., Okubo S., Hara Y., Shimamura T., 1993.Antiviral Res. 21: 289-299; Nagai T., Moriguchi R., Suzuki Y., Tomimori T., Yamada H., 1995.Antiviral Res. 26: 11-25; Turan K., Nagata K., Kuru A., 1996. Biochem Biophys Res Commun 225: 22-26; Kobayashi M., Davis SM., Utsunomiya T., Pollard RB., Suzuki F. 1999. Am J Clin med 27: 53-62; Merten OW. , Manuguerra JC., Hannoum C., van der Werf S. 1999. Dev. Biol.Stand. 98: 23-27; Mantani N., Andoh T., Kawamata H., Terasawa K., Ochiai H. Antiviral Res. 44: 193-200; Badmaev V., Nowakow ski M. 2000. Phytother Res. 14: 245-249; Rajbhandari M., Wegner U., Julich M., Schopke T., Mentel R. 2001. J Ethnop-harmacol. 74: 251-255. Mantani N., Imanishi N., Kawamata H., Terasawa K., Ochiai H. 2001. Planta Med. 67: 240-243; Imanishi N., Tiji Y., Katada Y., Maruhashi M., Konosu S., Mantani N., Terasawa K., Ochiai H. 2002. Microbiol Immunol. 46: 491-494; Weiss EI., Houri-Haddad Y., Greenbaum E., Hochman N., Ofda I., Z Mahon-Rones Z. 2005. Antiviral Res. 66: 9-12) Some plants have been reported to have antiviral activity (Kinghorn AD (1994) The discovery of drugs from higher plants.Biotechnology, 26: 81-108 .; Patrick L (1999) Hepatitis C Altern Med Rev., 4 (4): 220-38), has not yet been applied to the treatment of viral infections because plant extracts are not as effective as conventional antiviral agents in epidemiology and review of complementary / alternative medicine treatments.

이에, 본 발명자들은 인플루엔자바이러스에 대하여 우수한 항바이러스 활성을 갖는 새로운 생약재를 찾고자 노력한 결과, 바나바, 산국, 오레가노의 추출물, 또는 이의 배합물을 포함하는 조성물이 인플루엔자바이러스에 대하여 증식 억제능을 가지고 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.Accordingly, the present inventors have tried to find a new herbal medicine having excellent antiviral activity against influenza virus, and as a result, by confirming that the composition comprising a banaba, country of origin, oregano extract, or a combination thereof has a proliferation inhibitory effect against influenza virus The present invention has been completed.

본 발명의 하나의 목적은 바나바, 산국 및 오레가노 중에서 하나 이상 선택되는 식물 추출물을 포함하는 항-인플루엔자바이러스 조성물을 제공하기 위함이다.One object of the present invention is to provide an anti-influenza virus composition comprising a plant extract selected from at least one of banaba, acid and oregano.

본 발명의 또 다른 목적은 바나바, 산국 및 오레가노 중에서 하나 이상 선택되는 식물 추출물을 개체에게 투여하여 인플루엔자바이러스 감염 질환을 예방 또는 치료하는 방법을 제공하기 위함이다.Another object of the present invention is to provide a method for preventing or treating an influenza virus infection disease by administering to a subject a plant extract selected from at least one of banaba, acid and oregano.

하나의 양태로서, 본 발명은 바나바, 산국 및 오레가노 중에서 하나 이상 선택되는 식물 추출물을 포함하는 항-인플루엔자바이러스 조성물을 제공하기 위함이다.In one aspect, the present invention is to provide an anti-influenza virus composition comprising a plant extract selected from at least one of banaba, country of origin and oregano.

본 발명의 목적상 바이러스는 독감의 주원인 병원체인 인플루엔자바이러스이다. 인플루엔자바이러스는 올소믹소비리데과에 속하는 대표적인 바이러스로, 단쇄 음성 RNA를 게놈으로 가지며 호흡기질환을 일으키는 바이러스다. 인플루엔자바이 러스는 A,B,C 형으로 분류되며 인플루엔자바이러스 A, B, C 형은 각각 혈구응집소(hemmaglutinin: HA)와 뉴라미니데이즈(neuraminidase: NA)에 의해 다양한 아형 (subtype) 및 변이형을 가진다. 인플루엔자바이러스 B와 C가 인간에게만 감염되는 것으로 알려진 것에 비하여 인플루엔자바이러스 A는 인간뿐만 아니라 조류(닭,오리, 거위, 칠면조 등), 돼지,말 등에도 감염되는 것으로 알려졌다. For the purposes of the present invention, the virus is an influenza virus, which is the main pathogen of the flu. Influenza virus is a typical virus belonging to the oligomyxoviride family, and has a short-chain negative RNA in its genome and causes respiratory diseases. Influenza viruses are classified into types A, B, and C. Influenza viruses A, B, and C are classified into various subtypes and variants by hemagmaglutinin (HA) and neuraminidase (NA), respectively. Have Influenza virus A and C are known to infect only humans, whereas influenza virus A is known to infect not only humans but also birds (chicken, ducks, geese, turkeys, etc.), pigs and horses.

본 발명에서 용어, “항-인플루엔자바이러스(anti-influenza virus) 활성"이란 상기 인플루엔자바이러스, 보다 구체적으로 인플루엔자바이러스 A, B, C의 다양한 아형과 변이형의 입자 생성을 억제하는 능력, 즉 숙주세포에서 인플루엔자바이러스의 형성 및/또는 복제를 효과적으로 억제하는 능력을 의미한다. 본 발명에서 제공하는 조성물은 바이러스 복제(replication) 또는 증식(proliferation) 등에 필요한 기작을 방해하여 항바이러스 활성을 가진다.As used herein, the term “anti-influenza virus activity” refers to the ability to inhibit the production of particles of various subtypes and variants of the influenza virus, more specifically influenza viruses A, B, and C, ie, host cells. It means the ability to effectively inhibit the formation and / or replication of influenza virus in. The composition provided in the present invention has antiviral activity by interfering with the mechanism necessary for viral replication or proliferation.

본 발명에서 용어, "추출물"은 식물로부터 분리된 활성성분, 여기서는 인플루엔자바이러스에 대한 항바이러스 활성을 가지는 물질을 의미하며, 물 또는 알콜(예: 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등) 등의 유기 용매를 이용하는 추출 과정에 의하여 제조된다. 추출물은 수 또는 유기용매 추출액, 이의 건조 분말 또는 이를 이용하여 제형화된 모든 형태를 포함한다.As used herein, the term "extract" means an active ingredient isolated from a plant, here a substance having antiviral activity against influenza virus, and an organic solvent such as water or alcohol (for example, methanol, ethanol, propanol, butanol, etc.). It is prepared by an extraction process using. Extracts include water or organic solvent extracts, dry powders thereof or any form formulated therewith.

본 발명에서 용어, “바나바(Lagerstroemia speciosa Pars)”는 천연, 잡종 또는 변종 바나바의 줄기, 잎, 꽃을 모두 포함하나 바람직하게는 바나바 잎을 의미한다. 바나바의 알콜 추출물이나 수 추출물을 인플루엔자바이러스에 대한 항바이러스 조성물로 사용할 수 있다. As used herein, the term “Lagerstroemia speciosa Pars” includes all stems, leaves, and flowers of natural, hybrid, or varieties of Banaba, but preferably refers to Banaba leaves. Banaba alcohol extract or water extract can be used as an antiviral composition against influenza virus.

바나바는 혈당조절능이 있어서 당뇨병 질환에 치료효과가 있다고 보고되었고(Judy WV 등, 2003, J Ethnopharmacol), 대한민국 특허출원 10-2004-0070652에는 당뇨병 치료 효과를 가지는, 바나바 추출물, 호로파 추출물 및 여주 추출물을 고체 발효시킨 발효물을 유효 성분으로 함유하는 혈당강하용 약학적 조성물에 대해 기재하고 있다. 그러나, 바나바에서 항바이러스 활성, 특히 인플루엔자바이러스에 대한 항바이러스 활성을 살펴본 예는 아직까지 없다. 본 발명의 바나바의 수추출물은 인플루엔자바이러스 A에 대해서는 약 67.10%, 인플루엔자바이러스 B에 대해서는 약 53.07%의 유의성 있는 억제능(%)을 가짐을 확인할 수 있었다. Barnabas has been reported to have a therapeutic effect on diabetic diseases due to its glycemic control ability (Judy WV et al., 2003, J Ethnopharmacol), and Korean Patent Application No. 10-2004-0070652 has a barnabas extract, fenugreek extract and bitter extract It describes a pharmaceutical composition for hypoglycemic containing fermented product obtained by solid fermentation as an active ingredient. However, there have been no examples of antiviral activity, particularly antiviral activity against influenza virus, in Banaba. Banaba water extract of the present invention was found to have a significant inhibition (%) of about 67.10% for influenza virus A, about 53.07% for influenza virus B.

본 발명에서 용어, “산국(Chrysanthemum boreale Makino.)”은 천연, 잡종 또는 변종 산국의 줄기, 잎, 꽃을 모두 포함하나 바람직하게는 산국의 꽃을 의미한다. 산국의 물과 알콜 추출물을 인플루엔자바이러스에 대한 항바이러스 조성물로 사용할 수 있다. In the present invention, the term “Chrysanthemum boreale Makino.” Includes all stems, leaves, and flowers of natural, hybrid, or mutant country, but preferably means a flower of a country. Water and alcohol extracts from the country of origin can be used as antiviral compositions against influenza virus.

한국특허 출원 10-2000-0006958는 산국으로부터 고혈압 치료제인 큐맘브린 A를 제조하는 방법 및 고혈압 치료제로서의 그의 용도에 대하여 기재하고 있다. 한국특허 출원 10-2002-0023335는 산국으로부터 병원성 그람양성세균, 그람음성세균 및 진균의 생장을 저해할 수 있는 휘발성 추출물과 이를 효율적으로 추출, 정제하는 방법 및 그 추출물에 유효성분을 함유하는 항균 및 항진균용 조성물을 기술하고 있다. 산국에서 항바이러스 활성은 일부 연구자들에 의해서 레트로바이러스에 대한 항바이러스 활성은 보고된 바 있으나(Lee JS., Kim HJ., Lee YS., 2003. Planta Med. 69:859-861; Wang Hk., Xia Y., Yang ZY., Natschke SL., Lee KH. 1998. Adv. Exp. Med. Biol. 439:191-225; Hu CQ., Chen., Shi Q., Kilkuskie RE., Cheng YC., Lee KH J Nat Prod. 57:42-51), 인플루엔자바이러스에 대한 항바이러스 활성을 살펴본 예는 아직까지 없었다. 본 발명의 산국의 메탄올 추출물은 인플루엔자바이러스 A에 대해서는 약 42.44%, 인플루엔자바이러스 B에 대해서는 약 70.32%의 유의성 있는 억제능(%)을 가짐을 확인할 수 있었다. Korean Patent Application No. 10-2000-0006958 describes a method for producing cumambrine A, a hypertension therapeutic agent, and its use as a hypertension therapeutic agent from a country of origin. Korean Patent Application No. 10-2002-0023335 discloses a volatile extract capable of inhibiting the growth of pathogenic Gram-positive bacteria, Gram-negative bacteria and fungi from a country of origin, a method for efficiently extracting and purifying them, and an antibacterial agent containing an active ingredient in the extract and An antifungal composition is described. Antiviral activity in some countries has been reported by some researchers for retroviruses (Lee JS., Kim HJ., Lee YS., 2003. Planta Med. 69: 859-861; Wang Hk. , Xia Y., Yang ZY., Natschke SL., Lee KH. 1998. Adv.Exp. Med. Biol. 439: 191-225; Hu CQ., Chen., Shi Q., Kilkuskie RE., Cheng YC. , Lee KH J Nat Prod. 57: 42-51), there have been no examples of antiviral activity against influenza virus. Methanol extract of the acid country of the present invention was found to have a significant inhibitory ability (%) of about 42.44% for influenza virus A, about 70.32% for influenza virus B.

본 발명에서 용어, “오레가노(Origanum vulgare L.)”는 천연, 잡종 또는 변종 오레가노의 줄기, 잎, 꽃을 모두 포함하나 바람직하게는 오레가노의 잎과 줄기를 의미한다. 오레가노의 물과 알콜 추출물을 인플루엔자바이러스에 대한 항바이러스 조성물로 사용할 수 있다. As used herein, the term “Origanum vulgare L.” includes all stems, leaves, and flowers of natural, hybrid or mutant oregano, but preferably means leaves and stems of oregano. Water and alcohol extracts of oregano can be used as antiviral compositions for influenza virus.

오레가노는 주로 차, 육류, 생선요리 등에 향료로 다양하게 쓰이고 있으나 생화학적 활성에 대한 연구는 많지 않다. Goun 등(Goun E., Cunningham., Solodnikov., Krasnykch O., Miles H. 2002. Fitoteripia 73:692-694)이 동동 식물에서 일부 성분이 항트롬빈 활성이 높음을 보고하였으며, Sokemen 등 (Skemen M., Serkedjieva J., Daferera D., Gulluce M., Polissiou M., Tepe B., Akpulat HA., Sahin F., Sokemen A. 2004. J Agric. Food Chem 52:3309-3312) 이 항바이러스 활성을 다른 오레가노 종 식물 (origanum acutidens)에서 헤르페스 심플렉스 바이러스와 인플루엔자바이러스에 대한 항바이러스 활성을 조사한 결과 항바이러스 효능은 매우 낮거나 거의 없었다고 보고하였다. 본 발명의 오레가노의 메탄올 추출물은 인플루엔자바이러스 A에 대해서는 약 108%의 유의성 있는 억제능(%)을 가짐을 확인할 수 있었다. Oregano is mainly used as a fragrance for tea, meat and fish, but there is not much research on biochemical activity. Goun et al. (Goun E., Cunningham., Solodnikov., Krasnykch O., Miles H. 2002. Fitoteripia 73: 692-694) reported that some components have high antithrombin activity in the same plant, and Sokemen et al. (Skemen M , Serkedjieva J., Daferera D., Gulluce M., Polissiou M., Tepe B., Akpulat HA., Sahin F., Sokemen A. 2004. J Agric.Food Chem 52: 3309-3312). The antiviral activity of herpes simplex virus and influenza virus in other origanum acutidens was reported to be very low or very low. The methanol extract of oregano of the present invention was confirmed to have a significant inhibitory activity (%) of about 108% against influenza virus A.

인플루엔자바이러스에 대하여 유효한 억제능을 보이는 것으로 확인된 본 발명의 바나바, 산국 또는 오레가노 추출물은 단독 사용하거나 둘 이상의 성분을 배합하여 사용할 수 있다. 선택된 성분의 배합비는 다양하게 조절될 수 있다. 배합 사용할 경우에는 개개 성분들을 배합하여 추출하거나 개개 성분들로부터 각각 추출한 후 혼합할 수 있으며, 바람직하게는 최적의 조건에서 추출한 후 혼합할 수 있다. Banaba, acid or oregano extract of the present invention, which has been shown to exhibit an effective inhibitory effect against influenza virus, may be used alone or in combination of two or more components. The blending ratio of the selected components can be adjusted in various ways. In the case of compounding use, the individual components may be combined and extracted, or each component may be extracted and mixed. Preferably, the components may be mixed and then extracted under optimum conditions.

본 발명의 바나바, 산국, 오레가노의 추출물, 또는 이의 배합물을 포함하는 조성물은 약효를 증가시키지는 않으나 약재 조성물에 통상 사용되어 냄새, 맛, 시각 등을 향상시킬 수 있는 추가성분을 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 비타민B1, B2, B6, C, E, 니아신, 카르니친, 베타인, 엽산 판토텐산, 비오틴, 아연, 철, 칼슘, 크롬, 마그네슘, 이들의 혼합물 등의 무기, 유기 첨가물들을 추가로 포함할 수 있다.The composition comprising the extract of barnabas, country of origin, oregano, or a combination thereof of the present invention does not increase the efficacy but may include additional ingredients that are commonly used in pharmaceutical compositions to improve odor, taste, vision, and the like. In addition, the composition of the present invention is inorganic, such as vitamins B 1 , B 2 , B 6 , C, E, niacin, carnitine, betaine, folate pantothenic acid, biotin, zinc, iron, calcium, chromium, magnesium, mixtures thereof, and the like. It may further comprise organic additives.

본 발명의 조성물에 포함되는 바나바, 산국, 또는 오레가노는 물 또는 유기 용매를 사용하여 추출하여 바로 사용될 수 있으나 보다 바람직하게는 추출액을 여과하고 여과액을 건조하여 사용한다.Banaba, acid, or oregano included in the composition of the present invention can be used immediately by extracting with water or an organic solvent, but more preferably, the extract is filtered and the filtrate is dried.

바람직한 본 발명의 추출물 제조 과정은 약재를 분쇄하는 단계; 용매로 추출하는 단계; 추출액을 여과하는 단계; 및 여과액을 건조시키는 단계를 포함한다. Preferred extract preparation process of the present invention comprises the steps of grinding the medicine; Extracting with a solvent; Filtering the extract; And drying the filtrate.

추출 용매로는, 물 또는 알콜 등의 유기 용매를 사용하며 생약의 유효성분이 파괴되지 않거나 최소화된 조건에서 진행하고 열추출 또는 냉침 추출한다. 여과는 추출액으로부터 부유하는 고체 입자를 제거하는 과정으로, 면, 나일론 등을 이용하여 입자를 걸러내거나 냉동여과법, 원심분리법 등을 사용할 수 있으나 이에 제한되지 않는다. 여액을 건조하는 단계는 동결건조, 진공건조, 열풍건조, 분무건조, 감압건조, 분무건조, 포말건조, 고주파건조, 적외선건조 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 건조공정을 통하여 수분함량을 10% 이하로 줄일 수 있으며, 또한 건조 전에 여과액을 농축기에 넣고 수분함량을 줄이는 공정을 추과할 수 있다. 경우에 따라, 최종 건조된 추출물을 분쇄하는 공정을 추가할 수도 있다.As the extraction solvent, water or an organic solvent such as alcohol is used, and the active ingredient of the herbal medicine is not destroyed or proceeds under minimized conditions and is extracted by heat extraction or cold extraction. Filtration is a process of removing the suspended solid particles from the extract, it may be used to filter the particles using cotton, nylon, etc., or freezing, centrifugal separation, etc. may be used, but is not limited thereto. Drying the filtrate includes, but is not limited to, lyophilization, vacuum drying, hot air drying, spray drying, reduced pressure drying, spray drying, foam drying, high frequency drying, infrared drying, and the like. Through the drying process, the water content can be reduced to 10% or less, and the process of reducing the water content can be carried out by placing the filtrate in the concentrator before drying. If desired, a process of grinding the final dried extract may be added.

수 추출하는 경우, 본 발명의 조성물의 성분들을 물에 가하여 50℃ 내지 70℃ 에서, 30분 내지 2시간 정도 가열 하는 것이 바람직하다. 높은 온도에서 가열하는 경우 시간은 줄어들지만 유효성분이 파괴되어 손실될 수 있고, 상기 온도 보다 낮은 온도에서 가열하게 되면 혼합물의 유효성분이 완전하게 추출되지 않으므로 온도 조절과 시간을 적절하게 조절하는 것이 중요하다. 본 발명의 구체적인 실시에서는 바나바를 60℃에서 1시간 가열하여 추출하였고, 불용성 물질을 원심분리하여 여과하였으며 상등액을 동결건조시켜 수추출물을 제조하였다In the case of water extraction, it is preferable to add the components of the composition of the present invention to water and heat at 50 ° C to 70 ° C for 30 minutes to 2 hours. When heating at a high temperature, the time is reduced, but the active ingredient is destroyed and can be lost. When heating at a temperature lower than the temperature, it is important to control the temperature and time properly because the active ingredient of the mixture is not completely extracted. In a specific embodiment of the present invention, the barnabas were extracted by heating at 60 ° C. for 1 hour, the insoluble material was filtered by centrifugation, and the supernatant was lyophilized to prepare a water extract.

유기 용매를 사용하여 추출하는 경우, 메탄올, 에탄올, 이소프로탄올, 부탄올, 에틸렌, 아세톤, 에테르, 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, DMF(N,N-디메틸포름아미드), DMSO(디메틸설폭사이드) 등을 이용하여 실온에서 또는 가온하여 유기 용매로 추출할 수 있다. 추출하는 유기 용매에 따라 약제의 유효성분의 추출 정도와 손실 정도가 차이가 날 수 있으므로, 알맞은 유기 용매를 선택하여 사용하도록 한다. 바람직하게는 20℃ 내지 30℃에서, 12시간 내지 48시간 정도 방치하여 추출한다. 본 발명의 구체적인 실시에서는 오레가노와 바나바를 메탄올을 사용하여 실온에서 24시간 방치하여 추출하였다. 이어서, whatman 여과지를 사용하여 불용성 물질을 여과하였으며, 여과액을 감압 건조시켜 유기용매 추출물을 제조하였다.When extracted using an organic solvent, methanol, ethanol, isoprotanol, butanol, ethylene, acetone, ether, hexane, chloroform, ethyl acetate, DMF (N, N-dimethylformamide), DMSO (dimethyl sulfoxide), etc. Can be extracted with an organic solvent at room temperature or by heating. Depending on the organic solvent to be extracted, the degree of extraction and loss of the active ingredient of the drug may vary, so select an appropriate organic solvent. Preferably extracted at 20 ℃ to 30 ℃, left for about 12 hours to 48 hours. In a specific embodiment of the present invention, oregano and banaba were extracted by using methanol for 24 hours at room temperature. Subsequently, the insoluble material was filtered using whatman filter paper, and the filtrate was dried under reduced pressure to prepare an organic solvent extract.

상기 방법으로 제조된 본 발명의 조성물을 개체에게 투여하여 인플루엔자바이러스에 감염된 개체를 치료 또는 예방할 수 있다. 본 발명의 조성물을 투여할 수 있는 개체는 인플루엔자바이러스에 감염될 수 있는 모든 숙주, 예들 들어, 인간, 조류(닭, 오리, 거위, 칠면조 등), 돼지,말 등을 모두 포함한다. 다양한 개체에서의 인플루엔자바이러스 감염 질환의 예방 및 치료를 위하여 본 발명의 조성물은 약학적 조성물, 사료 조성물, 식품 조성물 등의 다양한 형태로 제조될 수 있다.The composition of the present invention prepared by the above method can be administered to an individual to treat or prevent an individual infected with influenza virus. Individuals who can administer the compositions of the present invention include all hosts that may be infected with influenza virus, such as humans, birds (chicken, ducks, geese, turkeys, etc.), pigs, horses, and the like. The composition of the present invention can be prepared in various forms such as pharmaceutical compositions, feed compositions, food compositions and the like for the prevention and treatment of influenza virus infection diseases in various individuals.

구체적인 양태로서, 바나바, 산국 및 오레가노 중에서 하나 이상 선택되는 식물 추출물을 포함하는 항-인플루엔자바이러스 조성물은 약학적 조성물로 제공된다.In a specific embodiment, an anti-influenza virus composition comprising a plant extract selected from at least one of banaba, acid and oregano is provided as a pharmaceutical composition.

본 발명의 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있다. 약제학적으로 허용되는 담체는 경구 투여시에는 결합제, 활탁제, 붕해제, 부형제, 가용화제, 분산제, 안정화제, 현탁화제, 색소, 향료 등을 사용할 수 있으며, 주사제의 경우에는 완충제, 보존제, 무통화제, 가용화제, 등장제, 안정화제 등을 혼합하여 사용할 수 있으며, 국소 투여용의 경우에는 기제, 부형제, 윤활제, 보존제 등을 사 용할 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물의 제형은 상술한 바와 같은 약제학적으로 허용되는 담체와 혼합하여 다양하게 제조될 수 있다. 예를 들어, 경구 투여시에는 정제, 트로키, 캡슐, 엘릴시르, 서스펜션, 시럽, 웨이퍼 등의 형태로 제조할 수 있으며, 주사제의 경우에는 단위 투약 앰플 또는 다수회 투약 형태로 제조할 수 있다. The composition of the present invention may comprise a pharmaceutically acceptable carrier. Pharmaceutically acceptable carriers can be used as oral administration binders, suspending agents, disintegrants, excipients, solubilizers, dispersants, stabilizers, suspending agents, pigments, flavorings, etc., in the case of injections, buffers, preservatives, analgesic Topical agents, solubilizers, isotonic agents, stabilizers and the like can be mixed and used. For topical administration, bases, excipients, lubricants, preservatives and the like can be used. The formulation of the pharmaceutical composition of the present invention may be prepared in various ways by mixing with a pharmaceutically acceptable carrier as described above. For example, in the case of oral administration, it may be prepared in the form of tablets, troches, capsules, elesir, suspensions, syrups, wafers, etc., and in the case of injections, may be prepared in unit dosage ampoules or multiple dosage forms.

또 다른 구체적인 양태로서, 바나바, 산국 및 오레가노 중에서 하나 이상 선택되는 식물 추출물을 포함하는 항-인플루엔자바이러스 조성물은 식품(또는 건강기능식품) 조성물로 제공된다.In another specific embodiment, an anti-influenza virus composition comprising a plant extract selected from at least one of banaba, acid and oregano is provided as a food (or nutraceutical) composition.

본 발명의 식품 조성물은 본 발명의 미생물 또는 이의 배양물 외에 적절한 담체 및 부형제 또는 보조 유효 성분 등과의 혼합에 의하여 분말제, 과립제, 정제, 캡슐제 또는 드링크제의 형태로 제형화 될 수 있다. 본 발명의 식품 조성물의 제형에 사용되기에 적합한 담체, 부형제 및 희석제에는 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아검, 인산칼슘, 알긴산염, 트래거캔스 고무, 젤라틴, 규산칼슘, 미세결정질 셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로오스, 물, 시럽, 메틸셀룰로오스, 메틸 및 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 스테아르산마그네슘 또는 광유 등이 포함된다. 본 발명의 식품 조성물의 제품화를 위하여 윤활제, 습윤제, 유화제 및 현탁화제, 방부제, 감미제 또는 향미제를 추가로 더 포함할 수 있다.The food composition of the present invention may be formulated in the form of powder, granules, tablets, capsules or drinks by mixing with a suitable carrier and excipients or auxiliary active ingredients in addition to the microorganisms or cultures thereof of the present invention. Suitable carriers, excipients and diluents for use in the formulation of the food compositions of the invention include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, starch, acacia gum, calcium phosphate, alginate, tragacanth rubber, gelatin, calcium silicate , Microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, cellulose, water, syrup, methylcellulose, methyl and propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate or mineral oil and the like. Lubricants, wetting agents, emulsifiers and suspending agents, preservatives, sweeteners or flavoring agents may be further included for the commercialization of the food composition of the present invention.

또 다른 구체적인 양태로서, 바나바, 산국 및 오레가노 중에서 하나 이상 선택되는 식물 추출물을 포함하는 항-인플루엔자바이러스 조성물은 사료 조성물로 제 공된다.In another specific embodiment, an anti-influenza virus composition comprising a plant extract selected from at least one of banaba, country of origin and oregano is provided as a feed composition.

본 발명의 사료 조성물은 발효사료, 배합사료, 펠렛 형태 및 사일레지 등의 형태로 제조될 수 있다.Feed composition of the present invention can be prepared in the form of fermented feed, compound feed, pellet form and silage and the like.

또 다른 양태로서, 본 발명은 상기 조성물을 인플루엔자바이러스의 감염이 의심되는 개체에게 투여하여 인플루엔자바이러스 감염 질환을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다.In another aspect, the present invention provides a method for preventing or treating an influenza virus infection disease by administering the composition to a subject suspected of being infected with influenza virus.

본 발명에서 용어, “인플루엔자바이러스 감염 질환”이란 인플루엔자바이러스의 감염으로 유발되는 질환을 일컫으며, 부비강염, 발작적 천식, 중이염, 낭성 섬유종, 기관지염, 폐렴, 설사 등을 예시할 수 있다(Pitkaranta 와 Hayden, 1998. Ann. Med.). In the present invention, the term "influenza virus infection disease" refers to a disease caused by an influenza virus infection, and may exemplify sinusitis, seizure asthma, otitis media, cystic fibrosis, bronchitis, pneumonia, diarrhea, etc. (Pitkaranta and Hayden, Ann. Med. 1998.

본 발명에서 용어, “개체”란 인플루엔자바이러스에 이미 감염되었거나 감염될 수 있는 인간을 포함한 모든 동물을 의미하고 본 발명의 추출물을 포함하는 조성물을 개체에게 투여함으로써, 상기 질환을 효과적으로 예방 및 치료할 수 있다. 예들 들어, 본 발명의 조성물로 다양한 인플루엔자바이러스 아형 또는 변이형의 인간 인플루엔자바러스로 감염된 인간을 치료할 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물로 다양한 인플루엔자바이러스 아형 또는 변이형의 조류 인플루엔자바이러스로 감염된 인간을 치료할 수 있다. 또한, 다양한 인플루엔자바이러스 아형 또는 변이형의 조류 인플루엔자바이러스로 감염된 닭 또는 돼지를 치료할 수 있다. 본 발명의 조성물을 기존의 인플루엔자바이러스 감염 질환 치료제와 병행하여 투여할 수 있다. As used herein, the term “individual” means all animals including humans already infected with or capable of being infected with influenza virus, and by administering to a subject a composition comprising an extract of the present invention, the disease can be effectively prevented and treated. . For example, the compositions of the present invention can treat humans infected with various influenza virus subtypes or variants of human influenza varus. In addition, the compositions of the present invention can treat humans infected with various influenza virus subtypes or variants of avian influenza virus. It is also possible to treat chickens or pigs infected with various influenza virus subtypes or variants of avian influenza virus. The composition of the present invention can be administered in parallel with existing influenza virus infection disease therapeutics.

본 발명에서 용어, "예방"이란 조성물의 투여에 의해 인플루엔자바이러스 감염을 억제시키거나 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미한다. 본 발명에서 용어, "치료"란 조성물의 투여에 의해 인플루엔자바이러스 감염에 의한 증세가 호전되거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미한다. As used herein, the term "prevention" means any action that inhibits or delays the influenza virus infection by administration of a composition. As used herein, the term "treatment" means any action that improves or advantageously changes the symptoms caused by influenza virus infection by administration of the composition.

상기 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 또한 제약 조성물은 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다. The route of administration of the composition may be administered via any general route as long as it can reach the desired tissue. Intraperitoneal administration, intravenous administration, intramuscular administration, subcutaneous administration, intradermal administration, oral administration, intranasal administration, pulmonary administration, rectal administration, but is not limited thereto. The pharmaceutical composition can also be administered by any device in which the active agent can migrate to the target cell.

본 발명의 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다.The composition of the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount.

용어 "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 감염된 바이러스 종류, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. The term “pharmaceutically effective amount” means an amount sufficient to treat a disease at a reasonable benefit / risk ratio applicable to medical treatment, with an effective dose level of the individual type and severity, age, sex, type of virus infected, drug Activity, sensitivity to drug, time of administration, route of administration and rate of release, duration of treatment, factors including concurrent use of drugs, and other factors well known in the medical arts. The compositions of the present invention may be administered as individual therapeutic agents or in combination with other therapeutic agents and may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents. And single or multiple administrations. Taking all of the above factors into consideration, it is important to administer an amount that can obtain the maximum effect in a minimum amount without side effects, and can be easily determined by those skilled in the art.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제공한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 본 발명이 하기의 실시예에 의하여 제한되는 것은 아니다.Hereinafter, preferred examples are provided to aid in understanding the present invention. However, the following examples are merely provided to more easily understand the present invention, and the present invention is not limited by the following examples.

참조예Reference Example 1: 수용성 추출물의 제조 1: Preparation of Water Soluble Extract

경남농업기술원 약용식물 재배포에서 채취한 산국의 꽃, 허브랜드(주)에서 수확한 오레가노 잎과 줄기), 외국에서 직수입한 바나바의 잎을 생초 중량의 25%가 될 때까지 건조시킨 다음 믹서로 갈아서 분말로 만들었다. 각 식물 분말은 각각의 중량에 대해 증류수 10배량을 넣어 60 ℃에서 1 시간동안 중탕하고 12000 rpm으로 20 분간 원심분리하여 불용성 물질을 제거하고 상등액을 동결건조시켜 수용성 추출물을 제조하였다.Flowers from the country of origin obtained from the redistribution of medicinal plants of Gyeongnam Agricultural Research Institute, oregano leaves and stems harvested from Herb Land Co., Ltd. Made into powder. Each plant powder was added with 10 times the amount of distilled water for each weight, and the mixture was bathed at 60 ° C. for 1 hour, centrifuged at 12000 rpm for 20 minutes to remove insoluble materials, and the supernatant was lyophilized to prepare a water-soluble extract.

참조예Reference Example 2 : 메탄올 추출물의 제조 2: Preparation of Methanol Extract

경남농업기술원 약용식물 재배포에서 채취한 산국의 꽃, 허브랜드(주)에서 수확한 오레가노 잎과 줄기, 외국에서 직수입한 바나바의 잎을 생초 중량의 25%가 될 때까지 건조시킨 다음 믹서로 갈아서 분말로 만들었다. 각 식물 분말은 각각의 중량에 대해 메탄올 10배량을 넣어 실온에서 24시간 방치한 후에 whatman 여과지로 여과하여 불용성 물질을 제거하고 여과된 액은 감압추출기로 건조하여 메탄올 추출 물액을 제조하였다.Flowers from the country of origin obtained from redistribution of medicinal plants of Gyeongnam Agricultural Research Institute, oregano leaves and stems harvested from Herb Land Co., Ltd., and leaves of banana bar imported directly from foreign countries until dry to 25% of raw vinegar weight, and then ground with a mixer Made with. Each plant powder was added with 10 times the amount of methanol for each weight, and left at room temperature for 24 hours, followed by filtration with whatman filter paper to remove insoluble materials, and the filtered solution was dried using a vacuum extractor to prepare a methanol extract.

참조예Reference Example 3: 대조군으로 사용된 항바이러스제 3: antiviral agent used as control

각 식물 추출물의 바이러스 증식 억제능을 비교측정하기 위하여 현재 항바이러스제로 사용되는 있는 약제인 리바비린(Ribavirin), 아만타딘(amantadine), 아시클로비르(acyclovir), 아지도티미딘(azidothymidine)를 Sigma사로부터 구입하였으며 라미뷰딘(lamivudine) 은 한국글락소웰컴사로부터 구입하여 세포 배양용액에 희석하여 사용하였다.Ribavirin, amantadine, acyclovir and azidothymidine, which are currently used as antiviral agents, can be purchased from Sigma to compare the antiviral growth of each plant extract. Lamivudine (lamivudine) was purchased from Glaxowelcome Korea, and diluted in cell culture solution.

참조예Reference Example 4: 바이러스의 배양 4: cultivation of virus

본 실험에 사용된 인플루엔자바이러스는 인플루엔자바이러스 A 형(A/WS/33)과 B형(B/Lee/40)를 대상으로 하였으며, 각 인플루엔자바이러스는 MDCK세포에 감염시켜서 증식하였다. MDCK세포는 소아태아혈청이 10% 포함된 MEM 배지를 사용하여 37 ℃ 배양기에서 배양하였으며 바이러스 증식배양 및 항바이러스능 측정에 사용된 배지는 혈청이 없는 배지에 트립신의 농도가 1ug/ml로 조정된 배양배지를 사용하였다.Influenza viruses used in this experiment were influenza virus type A (A / WS / 33) and type B (B / Lee / 40), and each influenza virus was infected by MDCK cells and expanded. MDCK cells were cultured in a 37 ° C. incubator using MEM medium containing 10% of pediatric serum. The medium used for virus growth and antiviral activity was adjusted to 1 ug / ml in serum-free medium. Culture medium was used.

실시예Example 1: 바이러스  1: virus 억제능과Inhibitory ability 세포독성능Cytotoxic activity 분석 analysis

상기 참조예 1에서 얻은 각 식물 추출물의 인플루엔자바이러스에 대한 바이 러스 증식억제능을 측정하기 위해서, MDCK세포를 2x104 개의 세포를 96 웰 플레이트(well plates) 의 각 웰에 넣고 24시간 배양하였다. 24시간 후에 각 웰의 배양 상등액을 제거하고 인플루엔자바이러스 감염용액을 각 웰에 넣은 다음, 각 식물 추출물을 50ug/ml의 농도 또는 0.1, 1, 10, 100ug/ml 의 농도가 되도록 각 웰에 투여하였다. 48-72 시간 후에 바이러스 감염반응을 중지시키고 각 추출물의 바이러스 증식 억제능 측정과 세포독성능 측정방법은 한국특허 출원 10-2004-0111298에 따라 실시하였다. 각 웰의 배양 상등액을 제거하고 웰에 남아있는 세포를 70% 아세톤 용액 100㎕로 고정하고 SRB(sulforhodamine B) 용액 100㎕을 각 웰에 가하여 세포단백질을 염색시켰다. 세포단백질과 결합하지 않은 SRB 염색제를 세척하여 제거한 후 10mM 트리스 용액(pH 10.5) 100㎕를 각 웰에 가하여 세포와 결합되어 있는 염색제를 용해시켜서 565nm에서 EIA reader로 각 웰의 흡광도를 측정하는 방법으로 수행하였다. 각 처리군은 바이러스를 처리하지 않은 군(A), 수용성 추출물만을 처리한 군(B), 바이러스만을 처리한 군(C), 바이러스와 수용성 추출물을 같이 처리한 군(D)으로 표기하였고 각각 식물추출물의 비교세포성장률(%)과 식물추출물의 바이러스에 대한 증식억제능을 감염후 세포생존률(%)으로 계산하였다. 결과에 대한 통계는 동일한 조건에서 수행한 3번의 실험결과 수치에 대한 평균값과 표준편차로 계산한 값을 제시하였다. In order to measure the virus proliferation inhibitory activity against influenza virus of each plant extract obtained in Reference Example 1, 2 × 10 4 cells of MDCK cells were placed in each well of 96 well plates and incubated for 24 hours. After 24 hours, the culture supernatant of each well was removed and the influenza virus infection solution was added to each well, and each plant extract was administered to each well to a concentration of 50 ug / ml or 0.1, 1, 10, 100 ug / ml. . After 48-72 hours, the virus infection reaction was stopped, and the virus growth inhibition and cytotoxicity of each extract were measured according to Korean Patent Application 10-2004-0111298. The culture supernatant of each well was removed, the cells remaining in the wells were fixed with 100 μl of 70% acetone solution, and 100 μl of sulfohodamine B (SRB) solution was added to each well to stain the cell proteins. After washing and removing the SRB staining agent that is not bound to the cell protein, 100μl of 10mM Tris solution (pH 10.5) is added to each well to dissolve the dye bound to the cells, and the absorbance of each well is measured by EIA reader at 565nm. Was performed. Each treatment group was labeled as virus-free (A), water-only extract (B), virus-only (C), and virus and water-soluble extracts (D). Comparative cell growth rate (%) of the extract and the growth inhibition of the plant extract against the virus was calculated as post-infection cell survival rate (%). The statistics on the results were calculated from the mean and standard deviation of three experimental results under the same conditions.

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기존 항바이러스제 Existing Antiviral Agents 투여 에Dosing on 따른 세포  According to the cell 생존률Survival rate 분석 analysis

기존 항바이러스제로 사용되는 5 종의 약제(리바비린, 아시클로비르, 아만타딘, 라미뷰딘, 아지도티미딘)을 50ug/ml의 투여농도에서 MDCK 세포에 대하여 세포 영향을 분석한 결과 리바비린, 아시클로비르, 라미뷰딘, 아지도티미딘 투여에 따른 세포 생존률은 99.50±4.85%, 95.21±4.35%, 105.84±4.32%, 102.29±7.74%으로 세포 증식에 영향을 미치지 않았으나, 아만타딘은 48.71±6.41%로 세포의 증식을 저해하는 것으로 나타나서 세포에 투여시 부작용이 나타남을 확인하였다(표 1). As a result of analyzing the cellular effect on MDCK cells at 50 ug / ml, five kinds of drugs (ribavirin, acyclovir, amantadine, lamividin, azithrothymidine) used as antiviral agents, were analyzed as ribavirin, acyclovir, Cell viability of lamivudine and azithrothymidine was 99.50 ± 4.85%, 95.21 ± 4.35%, 105.84 ± 4.32%, 102.29 ± 7.74%, which did not affect cell proliferation, but amantadine was 48.71 ± 6.41%. It was shown to inhibit the side effects when administered to the cell was confirmed (Table 1).

기존 항바이러스제의 인플루엔자바이러스에 대한 Conventional Antiviral Agents for Influenza Viruses 항바이러스능Antiviral activity 분석 analysis

기존 항바이러스제로 사용되는 5 종의 약제(리바비린, 아시클로비르, 아만타딘, 라미뷰딘, 아지도티미딘)을 50ug/ml의 투여농도에서 인플루엔자바이러스 A 형과 B형에 대한 증식억제능을 분석한 결과에서 리바비린은 인플루엔자바이러스 A형 과 B형에 대해서 90.54±3.61%, 96.48±1.091%의 탁월한 억제능을 나타내었으며 아만타딘은 인플루엔자바이러스 A형에만 43.88±4.85%에만 효능을 나타내었고 인플루엔자바이러스 B형에 대해서는 억제효능을 발휘하지 못하였다. 이는 Englund (Englund JA 2002. Semin Pediatr Infect Disease 13:120-128)가 서술한 내용과 일치하였다. 그밖에 HIV 치료제로 사용되는 아시클로비르와 아지도티미딘은 인플루엔자바이러스 A형과 B형에 대해서 0.00±4.05%와 0.00±19.44%, 6.78±4.96% 와 0.00±13.66%를 나타내어 억제효능을 나타내지 못하였다. B 형 간염 바이러스 억제제로 사용되는 라미뷰딘도 인플루엔자바이러스 A형과 B형에 대해서 7.44±2.84%와 0.99±11.41%로 억제효능을 나타내지 못하였다(표 1). Analysis of proliferation inhibitory activity against influenza A and B in 50ug / ml doses of 5 drugs (ribavirin, acyclovir, amantadine, lamividin, azithrothymidine) used as antiviral agents Ribavirin showed an excellent inhibitory activity against influenza virus types A and B, 90.54 ± 3.61% and 96.48 ± 1.091%, and amantadine was effective against influenza virus type A only 43.88 ± 4.85% and inhibitory effect against influenza virus type B. Could not exert. This is consistent with what Englund (Englund JA 2002. Semin Pediatr Infect Disease 13: 120-128) described. In addition, acyclovir and azithrothymidine, which are used for the treatment of HIV, showed 0.00 ± 4.05%, 0.00 ± 19.44%, 6.78 ± 4.96%, and 0.00 ± 13.66% against influenza viruses A and B. It was. Lamivudine, used as a hepatitis B virus inhibitor, did not show inhibitory effects against influenza viruses A and B at 7.44 ± 2.84% and 0.99 ± 11.41% (Table 1).

식물 추출물의 인플루엔자바이러스에 대한 Plant Extracts against Influenza Virus 항바이러스능Antiviral activity 분석 analysis

3종의 식물 추출물을 50ug/ml의 투여농도에서 인플루엔자바이러스 A 형과 B형에 대한 증식억제능을 분석한 결과에서 바나바 추출물은 인플루엔자바이러스 A형과 B형 모두에 대해서 67.10±10.51%, 53.07±5.42%의 유의성있는 억제능을 나타내었으며 산국은 인플루엔자바이러스 A형과 B형에 대해서 42.44±7.04%, 70.32±18.98%의 억제능을 나타내어 인플루엔바이러스 A형과 B형에 모두 억제능을 나타내었지만 인플루엔자바이러스 B형에 보다 강력한 억제능을 발휘하였다. 오레가노추출물은 0.1, 1, 10, 100ug/ml 의 농도에서 인플루엔자바이러스 A형에 대하여 0.00±7.79%, 0.46±9.95%, 3.81±8.43%, 108.88±0.97%의 억제능을 나타내어 100ug/ml의 농도에서는 인플루엔자바이러스 A형의 활성을 완전히 억제하였다. 바나바 (50ug/ml), 산국(50ug/ml), 오레가노(100ug/ml) 추출물을 세포에 투여하였을 때, 세포 생존률은 86.16±4.80%, 85.31±19.48%, 100.91%로 세포의 증식에 매우 낮은 영향을 미치거나 영향을 전혀 미치지 아니하였다.As a result of analyzing the proliferation inhibitory activity against influenza virus A and B at the concentration of 50 ug / ml, three kinds of plant extracts were 67.10 ± 10.51% and 53.07 ± 5.42 for both influenza virus type A and B. % Showed significant inhibitory activity against the influenza virus type A and B, 42.44 ± 7.04% and 70.32 ± 18.98% against the influenza virus type A and B. Influenza virus type B and B. It showed a more powerful inhibitory effect. Oregano extract exhibited 0.00 ± 7.79%, 0.46 ± 9.95%, 3.81 ± 8.43%, and 108.88 ± 0.97% of inhibitory activity against influenza virus A at concentrations of 0.1, 1, 10, and 100 ug / ml. Influenza virus type A activity was completely inhibited. When banaba (50ug / ml), country (50ug / ml), oregano (100ug / ml) extracts were administered to the cells, the cell viability was 86.16 ± 4.80%, 85.31 ± 19.48%, 100.91%, which was very low for cell proliferation. There was no impact or no impact.

따라서, 본 발명에서는 바나바의 수용성 추출물, 산국 추출물, 오레가노 추출물들이 인플루엔자바이러스에 대하여 새로운 억제효능을 갖고 있음을 밝혀냈으며 항바이러스제로 사용되는 아만타딘의 효능과 비교하여 우수한 인플루엔자바이러스 억제효능을 보임으로써 이들 3종의 식물 추출물들이 산업적으로 유용한 가치를 가지고 있음을 확인하였다.Therefore, in the present invention, it was found that the water-soluble extracts, the extracts of the barberry, and the oregano extracts had new inhibitory effects against influenza virus, and showed an excellent influenza virus inhibitory effect compared to the efficacy of amantadine used as an antiviral agent. Plant extracts of the species were found to have industrial useful value.

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본 발명의 바나바, 산국, 오레가노의 추출물 또는 이의 배합물을 포함하는 조성물은 감기 등의 호흡기질환을 유발하는 주원인 바이러스인 인플루엔자바이러스 감염을 효과적으로 예방 및 치료할 수 있으며, 독성 및 부작용이 적다는 장점이 있다.The composition comprising the extract of barnabas, acid, oregano or a combination thereof of the present invention can effectively prevent and treat influenza virus infection, which is a virus that causes respiratory diseases such as colds, and has less toxicity and side effects.

Claims (8)

바나바, 산국 및 오레가노 중에서 하나 이상 선택되는 식물 추출물을 포함하는 항-인플루엔자바이러스 조성물.An anti-influenza virus composition comprising a plant extract selected from at least one of banaba, country of origin and oregano. 제1항에 있어서, 바나바 추출물이 수 추출물인 조성물. The composition of claim 1 wherein the Banaba extract is a water extract. 제1항에 있어서, 산국 추출물이 알콜 추출물인 조성물. The composition of claim 1, wherein the acid extract is an alcohol extract. 제1항에 있어서, 오레가노 추출물이 알콜 추출물인 조성물. The composition of claim 1 wherein the oregano extract is an alcohol extract. 제1항에 있어서, 인플루엔자바이러스가 A형 또는 B형 인플루엔자바이러스인 조성물.The composition of claim 1, wherein the influenza virus is influenza A or B virus. 제1항의 조성물을 인간 이외의 동물에게 투여하여 인플루엔자바이러스 감염 질환을 예방 또는 치료하는 방법.A method of preventing or treating an influenza virus infection disease by administering the composition of claim 1 to an animal other than a human. 제6항에 있어서, 인플루엔자바이러스가 A형 또는 B형인 방법.7. The method of claim 6, wherein the influenza virus is type A or type B. 제6항에 있어서, 인플루엔자바이러스 감염 질환이 부비강염, 천식, 중이염, 낭성 섬유종, 기관지염, 폐렴 또는 설사인 방법.The method of claim 6, wherein the influenza virus infection disease is sinusitis, asthma, otitis media, cystic fibroma, bronchitis, pneumonia or diarrhea.
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