KR101104095B1 - 신규한 아르코박터 및 이의 용도 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 35~40℃의 온도와 호기 조건에서 배양 가능한 신규한 아르코박터(Arcobacter spp.) 및 이의 용도에 관한 것으로, 보다 자세하게는 35~40℃의 온도와 호기 조건에서 배양 가능한, 신규한 아르코박터 부처리(Arcobacter butzleri CAU090014), 아르코박터 스키로위(Arcobacter skirrowii CAU090017), 아르코박터 크라이에어로필러스(Arcobacter cryaerophilus CAU090029) 및 이의 용도에 관한 것이다.
37℃, 호기조건, 아르코박터 부처리, 아르코박터 스키로위, 아르코박터 크라이에어로필러스

Description

신규한 아르코박터 및 이의 용도{Novel arcobacter spp. and usage thereof}
본 발명은 35~40℃의 온도와 호기 조건에서 배양 가능한 신규한 아르코박터(Arcobacter spp.) 및 이의 용도에 관한 것으로, 보다 자세하게는 35~40℃의 온도와 호기 조건에서 배양 가능한, 신규한 아르코박터 부처리(Arcobacter butzleri CAU090014), 아르코박터 스키로위(Arcobacter skirrowii CAU090017), 아르코박터 크라이에어로필러스(Arcobacter cryaerophilus CAU090029) 및 이의 용도에 관한 것이다.
Family Campylobacteriaceae에 속하는 아르코박터(Arcobacter spp.)는 최초에는 15℃ 호기성 조건에서 생육이 가능한 내기성(aerotolerant) 캠필로박터(Campylobacter)로 보고되었다(Skirrow et al., BMJ. 2, 9-11, 1977). 그러나, 이는 전체 세포 단백질과 세포의 지방산을 SDS-PAGE(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis와 DNA 혼성화(hybridization)로 분석한 결과 캠필로박터와는 다르다는 것이 증명됨으로써 내기성 캠필로박터 균주를 아르코박터(Arcobacter spp.)로 재분류하였다(Pugina et al., Microbial Ecology Health and Disease. 4(Suppl.):S94, 1991). 아르코박터는 0.2~0.9 ㎛의 폭과 1~3 ㎛의 길이를 가지는 작은 박테리아로, 그람-음성이고, 포자를 형성하지 않으며, curved rods와 같은 형태적 특징을 가지고 있다(Ho et al., FEMS Immunol Med Microbiol, 50, 51-58, 2007; Manke et al., http://www.micro.iastate.edu/ugrad/mbacteria-in-pore.html, 1996; Snelling et al., Lett Appl Microbiol. 42, 7-14, 2006). 일반적으로 아르코박터(Arcobacter spp.)는, 37℃ 이상의 온도조건에서 잘 생육하는 캠필로박터(Campylobacter spp.)와 달리 15℃에서부터 30℃까지의 낮은 온도 조건에서도 잘 생육하는 것으로 알려져 있다. 또한, 미호기조건에서만 증식을 하는 캠필로박터와 달리 아르코박터는 미호기조건과 호기조건에서도 잘 증식할 수 있어 좋은 대조를 나타낸다(Johnson et al., J Food Prot. 62, 456-462, 1999).
아르코박터(Arcobacter spp.)는 현재까지 아르코박터 부처리(Arcobacter butzleri), 아르코박터 크라이에어로필러스(Arcobacter cryaerophilus), 아르코박터 스키로위(Arcobacter skirrowii), 아르코박터 나이트로피지리스(Arcobacter nitrofigilis), 아르코박터 시바리우스(Arcobacter cibarius), 아르코박터 할로필러스(Arcobacter halophilus), 아르코박터 마이틸리(Arcobacter mytili)와 같이 총 7개의 종이 알려져 있다. 그 중에서 아르코박터 부처리, 아르코박터 크라이에어로필러스, 아르코박터 스키로위는 주로 사람이나 동물의 장 내용물 및 분변에서 검출되고, 식중독을 일으키는 병원체로 알려지고 있으며, 그 중에서도 가장 빈번하게 검출되는 아르코박터 부처리(Arcobacter butzleri)가 식품위생학적 중요성을 가진다(Houf et al., Int J Syst Evol Microbiol 55, 713-717, 2005). 아르코박터 시 바리우스는 닭의 사체에서 검출되었는데 식중독 발생과의 상관성이 의심되고 있으나, 식중독을 일으킨 사례는 분명하지 않다(Houf et al., Int J Syst Evol Microbiol, 55, 713-717, 2005). 아르코박터 나이트로피지리스는 주로 식물의 뿌리에서 발견되는 질소고정 세균으로, 식중독과의 연관성은 아직까지 알려진 바가 없다(McClung et al., Int J Syst Evol Microbiol, 33, 605-612, 1983). 아르코박터 할로필러스는 염분이 함유된 물에서 검출되었는데, 식중독 발생에는 관여하지 않는 것으로 알려지고 있다(McClung et al., Int J Syst Evol Microbiol, 33, 605-612, 1983; Donachie et al., Int J Syst Evol Microbiol, 55, 1271-1277, 2005). 아르코박터 마이틸리는 최근 새롭게 발견된 종으로 홍합과 염분이 함유된 물에서 검출되었다는 보고가 있다(Collado et al., Int J Syst Evol Microbiol, 59, 1391-1396, 2009).
이 중 아르코박터 부처리(A. butzleri)는 식품과 환경에서 가장 빈번하게 검출되는 균주로서, 닭, 오리, 거위 등과 같은 가금류, 돈육, 우육, 우유 등에서 발견되었으며(Atabay et al., J Appl Microbiol. 83, 619-626, 1997; Ho et al., International Journal of Food Microbiology. 31, 223-229, 2008; Houf et al., Int J Food Microbiol, 71, 189-196, 2001; Kabeya et al., Int J Food Microbiol, 90, 303-308, 2004; Phillips et al., Trends Food Sci Technol 12, 263-275, 2001. ; Pianta et al., Cienc Rural, 37, 171-174, 2007; Scullion et al., J Food Prot. 69, 1986-1990, 2006), 저수지, 우물 등과 같은 지표수 및 식수에서도 확인된 바 있다(Jacob et al., Zentralbi Hyg Umweltmed, 193, 557-562, 1993; Morita et al., Microbiol Immunol. 48, 527-533, 2004; Pejchalova., J Food Prot. 71, 719-727, 2008).
아르코박터(Arcobacter spp.)는 기존에 잘 알려진 식중독 병원체인 캠필로박터(Campylobacter spp.)와 형태적으로 매우 유사한 특성을 갖고 있으면서도, 산소요구도 및 배양온도와 같이 배양조건에 대한 차이가 크다. 따라서 아르코박터에 대한 표준 분리배양법도 아직까지 확립되지 못하고 있다. 기존에 보고된 논문에 따르면 배지, 배양첨가물 여부, 온도 및 기체요구도 등에 따른 다양한 분리배양법이 보고되고 있으나, 분리효율이 낮은 문제점이 있다. 기존에 보고된 바에 따르면 아르코박터는 세균이 일반적으로 잘 자라는 37℃ 조건보다는 15~25℃와 같이 낮은 온도에서 잘 자라고 분리되며, 미호기조건에서 잘 분리된다고 보고되고 있다. 이러한 미호기조건과 낮은 배양온도 때문에 일반적으로 잘 증식하는 세균성 병원체와 달리 별도의 분리배양 조건을 필요로 하는 제한점이 있다.
특히 아르코박터 분리 배양을 위하여 매우 다양한 종류의 배지가 사용되었는데, 렙토스피라, 캠필로박터, 브루셀라 등의 분리 배양에 사용되는 EMJH P-80, CVA agar, brucella agar, blood agar 또는 JM agar/JM broth 등이 알려져 있다. 이렇게 다양한 배지의 종과 배양 첨가물의 여부에 따라 분리율의 차이가 커서 이를 확인할 수 있는 배양법의 표준화 및 식중독 관련 아르코박터 균주 제공이 요구되고 있다.
본 발명자는 일반적인 미생물 배양 온도와 조건인 37℃의 온도와 호기 조건에서 배양 가능한 아르코박터를 동정하고, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
본 발명의 한 목적은 35~40℃의 온도와 호기 조건에서 배양 가능한 아르코박터를 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적은 상기 아르코박터의 구성성분에 대한 항체를 제공하는데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 아르코박터의 구성성분에 특이적으로 결합하는 제제를 포함하는 아르코박터 검출용 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 아르코박터 또는 이의 구성성분에 대한 항체를 포함하는 식중독 예방 및 치료용 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명의 한 관점은, 35~40℃의 온도, 바람직하게는 37℃의 온도와 호기 조건에서 배양 가능한 아르코박터(arcobacter spp.)에 관한 것이다.
본 발명의 일 실시예에서는, 육류 시료의 균질액을 증균배지［(Arcobacter Broth (Cat No. CMO965, Oxoid, England)]에 첨가하고 37℃에서 48시간 배양한 후 단일 균주를 분리하기 위하여 증균배양이 끝난 유제를 분리배지[Agar Technical(Cat No. LP0013, Oxoid, England)이 1.2% 첨가된 Arcobacter agar]에 접종하고 48시간 배양하였다. 분리 배양시에는, 호기 또는 미호기 배양조건을 사용 하였으며, 배양 온도도 25℃ 또는 37℃를 유지하였다. 37℃의 온도와 호기 조건에서 배양 가능한 아르코박터 미생물의 집락을 확인할 수 있었다(도 1 참조).
상기 분리된 아르코박터 미생물의 종을 확인하기 위하여 아르코박터 부처리, 아르코박터 스키로위, 아르코박터 크라이에어로필러스 각각에 특이적인 프라이머를 이용하여 Multiplex PCR를 실시한 결과, 본 발명에서 분리된 미생물이 아르코박터 부처리, 아르코박터 스키로위, 아르코박터 크라이에어로필러스임을 확인하였다(도 2 참조).
본 발명에서 분리된, 35~40℃의 온도와 호기 조건에서 배양 가능한 아르코박터 부처리(A. butzleri CAU090014), 아르코박터 스키로위(A. skirrowii CAU090017), 아르코박터 크라이에어로필러스(A. cryaerophilus CAU090029)는 KACC(Korean Agricultural Culture Collection, 한국농업미생물자원센터)에 기탁하고, 각각 기탁번호 KACC91489P, KACC91490P, KACC91491P를 부여받았다.
본 발명의 다른 관점은, 본 발명에 따른 아르코박터의 구성성분에 대한 항체에 관한 것이다. 상기 구성성분은 아르코박터를 구성하는 임의의 물질로서, 바람직하게는 펩타이드, 단백질, 핵산, 탄수화물 및 지질과 같은 생체 고분자 화합물이고, 특히 바람직하게는 단백질이다.
본 발명에서 항체는 단클론 또는 다클론 항체이고, 면역학적으로 활성인 단편(예를 들어, Fab 또는 (Fab)2 단편), 항체 중쇄, 인간화 항체, 항체 경쇄, 유전자 조작된 단일쇄 Fν 분자, 키메릭 항체 등일 수 있다.
다클론 항체는 항원을 동물에 주사하고 동물로부터 채혈하여 항체를 포함하는 혈청을 수득하는 방법에 의해 생산할 수 있다. 이러한 항체는 말, 소, 염소, 양, 개, 닭, 칠면조, 토끼, 마우스 또는 래트와 같은 여러 온혈 동물을 이용하여 제조할 수 있다.
단클론 항체도 공지된 융합방법 (fusion method) (Kohler and Milstein, European J. Immnunol. 6:511-519 1976), 재조합 DNA 방법 (미국특허 제4816567호) 및 파지 항체 라이브러리 (Clackson et al., Nature, 352, 624-628, 1991; Marks et al., J. Mol. Biol. 222, 58:1-597, 1991) 기술을 이용하여 제조할 수 있다.
본 발명의 다른 관점은, 본 발명에 따른 아르코박터의 구성성분에 특이적으로 결합하는 제제를 포함하는 아르코박터 검출용 조성물에 관한 것이다.
한 양태로서, 상기 제제는 아르코박터의 구성성분에 대한 항체이다. 본 발명의 검출용 조성물은 항체 이외에 면역학적 분석에 사용되는 당업계에 공지된 시약을 추가로 포함할 수 있다. 상기에서 면역학적 분석은 항원과 항체의 결합을 측정할 수 있는 있는 방법이라면 모두 포함될 수 있다. 이러한 방법들은 당 분야에 공지되어 있으며 예를 들어, 면역세포화학 및 면역조직화학, 방사선 면역 분석법(radioimmunoassays), 효소결합면역법(ELISA: Enzyme Linked Immunoabsorbent assay), 면역 블롯(immunoblotting), 파아르 분석법(Farr assay), 면역침강, 라텍스 응집, 적혈구 응집, 비탁계법, 면역확산법, 카운터-전류 전기영동법, 단일 라디 칼 면역확산법, 면역크로마토그래피법, 단백질 칩 및 면역형광법이 있다.
면역학적 분석에 사용되는 시약으로는 검출 가능한 신호를 생성할 수 있는 표지, 용해제, 세정제가 포함된다. 또한, 표지물질이 효소인 경우에는 효소활성을 측정할 수 있는 기질 및 반응 정지제를 포함할 수 있다.
또한, 본 발명의 검출용 조성물은 감별의 신속도 및 편리성을 높이기 위해, 적합한 담체 또는 지지체상에 공지된 다양한 방법을 이용하여 고정화된 상태로 제공될 수 있다(Antibodies: A Labotory Manual, Harlow ＆ Lane; Cold SpringHarbor, 1988). 바람직하게는, 본 발명의 검출용 조성물은 키트 또는 마이크로어레이 형태로 제공될 수 있다.
본 발명의 또 다른 관점은, 본 발명의 아르코박터 또는 이의 구성성분에 대한 항체를 포함하는 식중독 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다. 한 양태로서, 본 발명의 아르코박터를 포함하는 식중독 예방용 조성물은 백신 조성물일 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 현탁액의 형태 또는 동결건조형으로 제조될 수 있으며 이를 위해 약학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있다. 약학적으로 허용되는 담체로는 안정화제, 보존제 및 완충제 등이 있다. 적절한 안정화제로는 예를 들면, SPGA, 탄수화물(예, 솔비톨, 만니톨, 전분, 수크로즈, 덱스트란, 글루타메이트 또는 글루코스), 단백질(건조 유청, 알부민 또는 카제인) 또는 이의 분해 산물이 있다. 적절한 완충제로는, 예컨대 알칼리 금속 포스페이트 등이 있다. 적절한 보존제로는 티메로살, 머티올레이트 및 젠타마이신 등이 있다. 희석 제로는 물, 수성 완충제(예, 완충 염수), 알코올 및 폴리올(예, 글리세롤) 등이 있다.
또한, 본 발명의 백신 조성물에는 항원-특이적 면역 반응을 증가시킬 수 있는 당업계에 공지된 보조제를 추가로 포함할 수 있다. 이러한 보조제의 예로는 오일-유탁액, 알루미늄 히드록사이드 또는 알루미늄 포스페이트와 같은 알루미늄 염 또는 겔, 사포닌, 카르보폴류와 같은 폴리아크릴산을 주성분으로 하는 중합체, 비-이온계 블록 중합체, 아브리딘 및 DDA와 같은 지방산 아민, 덱스트란 설페이트 및 DEAE 덱스트란과 같은 덱스트란을 주성분으로 하는 중합체, 생물분해성 미소캡슐, 리포좀, MDP 및 LPS와 같은 세균의 면역자극제, 글루칸 등을 포함한다(Altman and Dixon, Advances in Veterinary Science and Comparative Medicine, Vol. 33, 301-343, 1989).
본 발명의 약학 조성물의 투여는 근육 내 주사, 피하 주사 등의 주사로 투여할 수 있으며, 비강내, 기관내 경구, 피부, 경피/내피 또는 피내 투여에 의해 투여될 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 백신 조성물의 예방학적으로 유효한 투여량은 병원균에 연속 노출 시에도 특이적이고 충분한 면역 반응을 생성하여 예방될 수 있는 양일 수 있으며, 백신 접종할 동물의 종류나 연령에 따라 달라질 수 있으며 당해 기술분야의 전문가에 의해 결정될 수 있다.
본 발명에서 분리된 아르코박터 부처리(A. butzleri CAU090014), 아르코박터 스키로위(A. skirrowii CAU090017), 아르코박터 크라이에어로필러스(A. cryaerophilus CAU090029)는 일반 미생물의 배양 조건인 35~40℃의 온도와 호기 조건에서 분리 배양이 가능하다.
따라서, 본 발명의 아르코박터는 배양물의 확보가 용이하여 진단시약 및 예방 제제 개발에 효과적으로 활용될 수 있다.
이하, 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
<실시예 1: 미생물의 분리 배양>
본 발명의 발명자들은 시판 육류 샘플을 구매하여 냉장 조건하에서 최단시간 이내에 운송하고 24시간 이내에 분리배양을 수행하였다. 각각의 샘플 5g씩을 무균적으로 채취하여 멸균 펩톤수(Catalog Number, 218071, BD Difco, USA)로 10배 희석을 하였으며, stomacher (Interscience, bagMixer® St Nom France)로 120 rpm, 2분 조건에서 균질액을 제조하였다(Hamill et al., J. Food Prot, 71, 850-854, 2008).
아르코박터(Arcobacter spp.) 배양을 위한 증균배지로는 Arcobacter Broth(Cat No. CMO965, Oxoid, England)를 구매하여 사용하였고, 분리배지로는 Arcobacter Broth에 Agar Technical(Cat No. LP0013, Oxoid, England)을 1.2% 첨가하여 제조한 Arcobacter agar를 사용하였다. Arcobacter Broth와 Arcobacter agar는 CAT(cefoperazone, amphotericin B, teicoplanin) Selective Supplement(Cat No. SR0174E, Oxoid, England)를 첨가하여 샘플에 포함된 오염균을 억제할 수 있지만, 아르코박터의 배양까지도 억제되기 때문에 본 실시예에서는 CAT selective supplement를 사용하지 않았다. 그러나 보통 세균보다 아르코박터의 크기가 작은 점을 감안하여 0.45 ㎛ 시린지 필터를 사용함으로써 아르코박터의 분리배양이 용이하게 하였다.
증균배지 10ml에 100 ㎕의 균질액을 첨가하고 37℃에서 48시간 세균배양기에서 배양하였으며, 단일 균주를 분리하기 위하여 증균배양이 끝난 유제를 Arcobacter agar에 접종하고 세균배양기에서 48시간 배양하였다. 아르코박터의 효과적인 분리 배양 조건을 확립하기 위하여 호기 또는 미호기 배양조건을 사용하였으며, 배양 온도도 25℃와 37℃를 비교함으로써 최적화하고자 하였다. 미호기 조건을 형성하기 위하여 anaerobic jar(Cat. no. J-45, Damarus, jakarta, Indonesia)와 CampyPak(Cat No. 271045, BD BBL, sparks, U.S.A.)을 사용하였다. 위 방법을 사용하여 Arcobacter agar의 표면에 백색에서 회백색을 띠며 직경 1mm 내외의 특이적인 집락(colony)을 확인할 수 있었으며, 집락의 형태는 비교적 납작한 구형을 띠며 변연부는 매끈한 형태를 띠고 있었다(도 1).
실시예 2: 분리 미생물의 확인
평판배지에 자란 아르코박터의 균체를 멸균수에 부유시키고 100℃, 10분간 가열하여 DNA를 추출하였다. 이 후 원심기에서 8000 rpm에서 2분간 원심분리하여 침전물을 제외한 상층액을 DNA 주형으로 사용하였다. 분리된 미생물의 아르코박터(Arcobacter spp.) 종을 확인하기 위하여 선행연구에서 알려진 Multiplex PCR을 이용하였다(Houf et al., FEMS Microbiol. Lett. 193, 89-94, 2000). Multiplex PCR에 사용된 프라이머는 아르코박터의 16S rRNA와 23S rRNA 서열 부위에서 디자인된 5개의 프라이머이며, Bioneer에 의뢰 및 제작하여 사용하였다(표 1).
Figure 112009056900777-pat00001
총 반응액의 용량은 20㎕로 하였고, 반응물의 조성은 3차 멸균수 7㎕, 2.5mM dNTP 2㎕, 10X Reaction Buffer(Tris pH 9.0, 15 mM MgCl2) 2㎕, 25pmol 프라이머 (ARCO, BUTZ, SKIR, CRY1, CRY2) 각각 1 ㎕, 1U Top polymerase(20 mM Tris-HCl, 0.5 mM EDTA, 1 mM DTT, 100 mM KCl, Stabilizers, 50% Glycerol pH 8.0) 1㎕, DNA 주형 3㎕로 하였다. 반응액은 MJ Mini personal Thermal Cycler로 94℃에서 5분간 반응시킨 후, 94℃ 45초, 61℃ 45초, 72℃ 45초 조건으로 35회 반응시켰으며, 마지막으로 72℃에서 10분간 반응시켰다.
0.1 ㎕/㎖ 에티듐 브로마이드가 포함된 1x Tris acetate EDTA (TAE buffer) 1% 아가로스 겔을 제작하여 전기영동에 사용하였다. 전기영동은 PowerPac 300(Bio-Rad, city, U.S.A.)을 이용하여 100V 50분간 수행하고, UV illuminator로 관찰하고, Launch DocIT LS program으로 분석하여 도 2와 같은 결과를 얻었다.
현재까지 아르코박터(Arcobacter spp.) 검사에 사용되는 생화학적 동정 검사는 제한적으로 알려져 있어, Multiplex PCR을 이용하여 본 발명에 제시된 미생물을 확인하였다. 확인된 아르코박터종 미생물은 공지된 바와 같이 그람 음성이고 카탈라제(catalase) 양성반응을 나타내었다. 또한, 15℃, 1.5% NaCl 조건에서 배양되었으나, 42℃, 1.5% NaCl 조건에서는 생육하지 못하였으며, H2S는 형성하지 않아 기존에 보고된 균주의 특성과 동일하였다. 그러나, 본 발명에서 제시된 아르코박터 부처리(A. butzleri CAU090014), 아르코박터 스키로위(A. skirrowii CAU090017), 아르코박터 크라이에어로필러스(A. cryaerophilus CAU090029)는 닭의 적혈구(Chicken RBC)를 이용한 hemagglutination assay(HA test)에서 혈구응집반응을 나타내지 않은 특징이 있었다.
본 발명에서 분리된 아르코박터 부처리(A. butzleri CAU090014), 아르코박터 스키로위(A. skirrowii CAU090017), 아르코박터 크라이에어로필러스(A. cryaerophilus CAU090029)는 KACC(Korean Agricultural Cullture Collection, 한국농업미생물자원센터)에 기탁하고, 각각 기탁번호 KACC91489P, KACC91490P, KACC91491P를 부여받았다.
미생물 진단 및 검출 시약제조, 예방약 제조, 살균제 시험 등을 수행하기 위한 미생물 균주가 요구되는데, 본 발명에서 확보한 미생물 3종은 이러한 응용산업에 필수적인 요소이다. 따라서 아르코박터 3종을 활용한 미생물 관련 산업에 다양하게 응용될 수 있으므로 이에 대한 응용, 변형, 수정 등이 특허청구범위에 속함은 당연한 것이다.
도 1은 Arcobacter agar에서 배양된 아르코박터 부처리((A. butzleri CAU090014)를 나타낸 것이다.
도 2는 Multiplex PCR을 이용하여 아르코박터 종을 확인한 결과를 나타낸 것이다(M: 100bp DNA Marker, 1: Arcobacter butzleri CAU090014, 2: Arcobacter skirrowii CAU090017, 3: Arcobacter cryaerophilus CAU090029).
<110> Chung-Ang University Industry-Academy Cooperation Foundation <120> Novel arcobacter spp. and usage thereof <160> 6 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 1 cgtattcacc gtagcatagc 20 <210> 2 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 2 cctggacttg acatagtaag aatga 25 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 3 tgctggagcg gatagaagta 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 4 aacaacctac gtccttcgac 20 <210> 5 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 5 cctggacttg acatagtaag aatga 25 <210> 6 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 6 ggcgatttac tggaacaca 19

Claims (7)

1) 아르코박터(Arcobacter spp.)배양 배지로써, 세포페라존(cefoperazone), 암포테리신 B(amphotericin B), 테이코플라닌(teicoplanin) 미첨가 배지를 제조하는 단계; 및
2) 상기 배지에서 35~40℃ 의 온도로 아르코박터를 배양하는 단계; 를 포함하는 35~40℃의 온도와 호기 조건에서 배양 가능한 아르코박터(Arcobacter spp.)의 분리 검출 방법.
제 1항에 있어서, 상기 온도는 37℃인 것을 특징으로 하는 아르코박터의 분리 검출 방법.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 아르코박터는 아르코박터 부처리(Arcobacter butzleri CAU090014; KACC91489P) 또는 아르코박터 스키로위(Arcobacter skirrowii CAU090017; KACC91490P) 또는 아르코박터 크라이에어로필러스(Arcobacter cryaerophilus CAU090029; KACC91491P) 중 어느 하나인 것을 특징으로 하는 아르코박터의 분리 검출 방법.
35~40℃의 온도와 호기 조건에서 배양 가능한 아르코박터 스키로위(Arcobacter skirrowii CAU090017; KACC91490P)
제4항의 아르코박터 스키로위(Arcobacter skirrowii CAU090017; KACC91490P)배양 상등액.
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