KR101055376B1 - 퇴행성 신경계 질환에 대한 저항성을 가지는 ｃｉｉａ 형질전환 마우스 - Google Patents
퇴행성 신경계 질환에 대한 저항성을 가지는 ｃｉｉａ 형질전환 마우스 Download PDFInfo
- Publication number
- KR101055376B1 KR101055376B1 KR1020080117434A KR20080117434A KR101055376B1 KR 101055376 B1 KR101055376 B1 KR 101055376B1 KR 1020080117434 A KR1020080117434 A KR 1020080117434A KR 20080117434 A KR20080117434 A KR 20080117434A KR 101055376 B1 KR101055376 B1 KR 101055376B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- ciia
- delete delete
- mouse
- protein
- seq
- Prior art date
Links
- 101000649938 Mus musculus Vacuolar protein sorting-associated protein 28 homolog Proteins 0.000 title claims abstract description 64
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 title abstract description 6
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 title description 6
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 title description 3
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 title description 2
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 230000016273 neuron death Effects 0.000 claims abstract description 12
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 claims abstract description 4
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 16
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims description 10
- 102100021519 Hemoglobin subunit beta Human genes 0.000 claims description 8
- 108091005904 Hemoglobin subunit beta Proteins 0.000 claims description 8
- 210000002161 motor neuron Anatomy 0.000 claims description 7
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 claims description 5
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 claims description 5
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 claims description 4
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 claims description 3
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 2
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 claims 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 claims 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 15
- 238000010171 animal model Methods 0.000 abstract description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 9
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 abstract description 7
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 abstract description 7
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 abstract description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 18
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 14
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 13
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 12
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 8
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 7
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 7
- 101001018196 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 5 Proteins 0.000 description 6
- 102100033127 Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 5 Human genes 0.000 description 6
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 5
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 5
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 5
- 102220020162 rs397508045 Human genes 0.000 description 5
- 102000008221 Superoxide Dismutase-1 Human genes 0.000 description 4
- 108010021188 Superoxide Dismutase-1 Proteins 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 4
- 208000014644 Brain disease Diseases 0.000 description 3
- 102000006771 Gonadotropins Human genes 0.000 description 3
- 108010086677 Gonadotropins Proteins 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 239000002622 gonadotropin Substances 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)-N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C(=O)NCCC(N1CC2=C(CC1)NN=N2)=O VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 2
- 102000011022 Chorionic Gonadotropin Human genes 0.000 description 2
- 108010062540 Chorionic Gonadotropin Proteins 0.000 description 2
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 2
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 2
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 2
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 2
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 2
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 229940084986 human chorionic gonadotropin Drugs 0.000 description 2
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 2
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 230000000324 neuroprotective effect Effects 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 210000003101 oviduct Anatomy 0.000 description 2
- 230000016087 ovulation Effects 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 229960004509 serum gonadotrophin Drugs 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 102000010565 Apoptosis Regulatory Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010063104 Apoptosis Regulatory Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000282817 Bovidae Species 0.000 description 1
- 241000282832 Camelidae Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 101000834253 Gallus gallus Actin, cytoplasmic 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 108020005350 Initiator Codon Proteins 0.000 description 1
- 208000032382 Ischaemic stroke Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- NIPNSKYNPDTRPC-UHFFFAOYSA-N N-[2-oxo-2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 NIPNSKYNPDTRPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CCNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 101001009851 Rattus norvegicus Guanylate cyclase 2G Proteins 0.000 description 1
- 101000702488 Rattus norvegicus High affinity cationic amino acid transporter 1 Proteins 0.000 description 1
- 108020005091 Replication Origin Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 229940124639 Selective inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 108090000925 TNF receptor-associated factor 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100034779 TRAF family member-associated NF-kappa-B activator Human genes 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- ZHAFUINZIZIXFC-UHFFFAOYSA-N [9-(dimethylamino)-10-methylbenzo[a]phenoxazin-5-ylidene]azanium;chloride Chemical compound [Cl-].O1C2=CC(=[NH2+])C3=CC=CC=C3C2=NC2=C1C=C(N(C)C)C(C)=C2 ZHAFUINZIZIXFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XLIJUKVKOIMPKW-BTVCFUMJSA-N [O].OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O Chemical compound [O].OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O XLIJUKVKOIMPKW-BTVCFUMJSA-N 0.000 description 1
- 238000001994 activation Methods 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009402 cross-breeding Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 1
- CUHVTYCUTYWQOR-UHFFFAOYSA-N formaldehyde Chemical compound O=C.O=C CUHVTYCUTYWQOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000003208 gene overexpression Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 201000010901 lateral sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 208000005264 motor neuron disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 208000023516 stroke disease Diseases 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 210000003708 urethra Anatomy 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
- A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
- C12N2015/8527—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic for producing animal models, e.g. for tests or diseases
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
본 발명은 CIIA 단백질이 과발현되는 형질전환 동물 및 상기 형질전환 동물의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명의 CIIA를 발현하는 형질전환 마우스는 신경세포사멸에 대한 저항성이 현저히 우수하므로, 퇴행성 신경계질환의 치료제 개발을 위한 동물모델로서 널리 활용될 수 있을 것이다.
CIIA, 형질전환 마우스, 근위축측삭경화증(ALS), 허혈(ischemia)
Description
본 발명은 CIIA를 과발현시켜 신경세포사멸을 억제시키기 위한 방법에 관한 것으로 구체적으로 CIIA 단백질이 과발현되는 형질전환 동물 및 상기 형질전환 동물의 제조방법에 관한 것이다.
다양한 스트레스에 의한 apoptosis 과정에 ASK1 관련되어 있음이 보고된 바 있다. 선행연구에서 본 발명가들은 ASK1의 활성을 인위적으로 올릴 수 있는 환경 (UV light, H2O2, coexpression of TRAF2)에서 CIIA의 역할을 규명하였다 (Cho et al., 2003). 293 세포주에 인위적으로 CIIA 유전자를 농도별로 과발현시킨 그룹과 대조군에 ASK1의 활성을 증가는 자극을 가한 후 ASK1 활성 정도를 정량적으로 비교해본 결과 농도의존적으로 CIIA 유전자가 과발현된 그룹에서 ASK1의 활성을 억제하였다. 또한 ASK1의 단계적 활성화 과정 중에 하나로 제시된 바 있는 동형결합체(homo-oligomerization) 역시 CIIA에 의해 억제됨을 보였다. 이상의 결과로, CIIA 단백질은 ASK1 의존적인 세포사멸과정에서 선택적인 저해제로 사용될 수 있으며, 더 나아가 치매 등의 퇴행성 뇌신경계 질환, 뇌졸중, 면역계 질환 등의 치료, 예방, 진단 또는 그 연구 과정 등에 유용하게 이용될 수 있음을 제시하였다.
따라서 본 발명가들은 이미 제시한 CIIA의 신경세포 보호효과를 구체화하고 더 나아가 퇴행성 뇌신경계 질환에 적용하고자 동물에서 CIIA의 역할을 규명할 수 있는 적합한 동물모델의 개발 필요성에 직면하게 되었다.
본 발명자들은 동물에서 CIIA의 역할을 연구할 수 있는 동물모델을 제작하고자 연구한 결과, 마우스에서 CIIA를 과발현하는 형질전환 마우스를 제작하게 되었으며, 이 마우스 모델로 규명된 CIIA의 신규한 역할인 허혈 및 SOD1 변이에 의한 신경세포손상에 대한 저항성을 기반으로, 퇴행성 뇌질환 치료제의 적용 가능성을 확고히 하였다.
즉, 본 발명의 주된 목적은 허혈 및 SOD1 변이에 의한 신경세포손상에 대한 저항성을 나타내는 형질전환 마우스를 제조하는 방법을 제공하는 것이다.
상기의 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 a) CIIA 유전자를 pCAGGS 벡터에 닭의 베타-액틴프로모터(chick beta-actin promoter)와 토끼의 베타-글로빈 폴리아데닌(rabbit β-globin poly A) 부위 사이에 삽입하여 발현벡터를 제조하는 단계;b) 마우스에 성선자극 호르몬을 투여하여 과배란을 유도하여 수정란을 수득하는 단계;c) 상기 발현벡터를 상기 수정란의 핵으로 삽입하는 단계; 및 d) 상기 수정란을 암컷 마우스의 난관에 이식시키는 단계를 포함하는 CIIA 단백질을 과발현하는 형질전환 마우스의 제조방법을 제공한다.
본 발명의 일 구체예에 있어서, 상기 CIIA 유전자는 CIIA 단백질을 발현하는 모든 유전자, 그의 기능적인 단편 및 결손, 치환, 부가 등에 의한 돌연변이에 의하여도 CIIA 단백질의 특성을 가지는 돌연변이체 CIIA 단백질을 코팅하는 유전자 가 바람직하고, 서열번호 1에 기재된 유전자인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구체예에 있어서, 상기 CIIA 유전자는 플래그(Flag)-태그된 것이 바람직하나 이에 한정되지 아니한다.
본 발명의 형질전환 마우스의 제조방법에 있어서, 상기 성선자극 호르몬은 배란유도(pregnant mare's serum gonadotrophin, PMSG ) 또는 난포자극 (human chorionic gonadotropin, HCG) 또는 이들의 조합인 것이 바람직하나 이에 한정되지 아니한다.
본 발명의 일 구체예에 있어서, 상기 닭의 베타-액틴프로모터는 서열번호 3에 기재된 것이 바람직하고, 상기 토끼의 베타-글로빈 폴리아데닌 부위는 서열번호 4에 기재된 것이 바람직하나 이에 한정되지 아니한다.
또한 본 발명은 상기 본 발명의 제조방법에 있어서, 상기 수정란은 근위축성 측삭 경화증(ALS) 동물 모델 마우스에 교차 교배를 시켜 근위측성 측삭 경화증과 CIIA 단백질의 두 가지 표현형을 모두 가지는 CIIA 단백질을 과발현하는 형질전환 마우스의 제조방법을 제공한다.
본 발명의 바람직한 실시예에 있어서, 상기 마우스는 운동신경세포 보호효과를 가지거나 퇴행성 신경계 질환에 의한 신경세포사멸, 더욱 바람직하게는 근위축성 측삭 경화증에 대한 저항성을 나타내는 것이 바람직하나 이에 한정되지 아니한다.
또한 본 발명은 염색체 안에 서열번호 2의 사이토메갈로 바이러스 게놈 유래의 인 헨서, 서열번호 3의 닭의 베타-액틴프로모터(chick beta-actin promoter), 서열번호 1의 CIIA 유전자 및 서열번호 4의 토끼의 베타-글로빈 폴리아데닌(rabbit β-globin poly A) 부위 순으로 연결하여 제작된 재조합 융합 유전자가 통합되어 있는 CIIA 단백질을 과발현하는 형질전환 마우스를 제공한다.
이하, 본 발명을 설명한다.
본 발명은 허혈 조건 및 SOD1 변이에 의한 ALS 질환 과정에서 나타나는 신경세포사멸의 억제 효과를 보이는 형질전환 마우스의 제작 방법에 관한 것으로 구체적으로 마우스의 수정란에 CIIA cDNA를 포함하는 발현벡터를 주입시켜서 형질전환된 수정란을 수득하는 단계 및 수정란을 대리모에 착상시키고 착상된 수정란을 발생시켜서 CIIA를 발현하는 마우스를 수득하는 단계를 포함한다.
이하, 본 발명의 CIIA가 동물에서 발현되는 형질전환 마우스의 제작방법을 단계별로 설명하기로 한다.
CIIA 단백질을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 갖는 핵산은 재조합 벡터에 삽입되어 발현된다. 본 발명에서 “벡터”란 목적 단백질을 코딩하는 핵산 서열을 숙주 세포로 도입되기 위한 수단을 의미한다. 적합한 발현벡터는 프로모터,오퍼레이터, 개시코돈, 종결코돈, 폴리아데닐화 시그널, 인핸서 같은 발현 조절 요소 외에도 막 표적화 또는 분비를 위한 신호 서열 또는 리더 서열을 포함하며 목적에 따라 다양하게 제조될 수 있다. 개시 코돈 및 종결 코돈은 일반적으로 목적 단백질을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열의 일부로 간주되며, 유전자 작제물이 투여되었을 때 개체에서 반드시 작용을 나타내야 하며 코딩 서열과 인프레임(in frame)에 있어야 한다. 벡터의 프로모터는 구성적 또는 유도성일 수 있다. 또한 발현벡터는 벡터를 함유하는 숙주 세포를 선택하기 위한 선택성 마커를 포함하고, 복제 가능한 발현벡터인 경우 복제 기원을 포함한다. 벡터는 자가 복제하거나 숙주 게놈 DNA에 통합될 수 있다.
바람직하게는 벡터내로 삽입되어 전달된 유전자가 숙주세포의 게놈내로 비가역적으로 융합되어 세포내에서 유전자 발현이 장기간 안정적으로 지속되도록 하는 벡터이다. 구체적으로, 본 발명의 형질전환 마우스 제조에 사용된 벡터는, 사이토메갈로 바이러스 게놈 유래의 인핸서의 조절을 받는 강력한 베타-액틴 프로모터로부터 목적 단백질이 높은 수준으로 발현되는 pCAGGS 벡터이며, 숙주 게놈으로 벡터가 삽입되어(integrate) 안정하게 유지됨을 특징으로 한다.
본 발명은 CIIA 단백질이 과발현된 형질전환 동물에 관한 것으로 본 발명에서 용어, “형질전환 동물(transgenic animal)"이란 세포내 CIIA 단백질 수준이 정상 세포 수준에 비하여 증가되도록 형질의 변형이 유도된 동물을 의미하고, CIIA 단백질을 발현하는 벡터를 세포내 유입함으로써 형질전환을 유도할 수 있다.
본 발명에서 “동물 모델(animal model)” 또는 “질환 모델(disease model)"은 사람의 질병과 유사한 특정 질환을 가지고 있어서 병인을 규명하고, 병태를 확인할 수 있는 연구 대상이 될 수 있는 모델이 되는 동물을 의미한다. 동물 모델로서 사용하기 위한 동물은, 인간에서와 같은 효과를 예측할 수 있으며, 쉽게 만들 수 있고, 재현성이 있다. 또한, 인간질병의 병인과 같거나 유사하게 진행되어 야 한다. 따라서, 인간과 같은 포유류 척추동물이면서, 장기 등의 체내 구조, 면역체계, 체온 등이 유사하고, 고혈압, 암, 면역결핍 등의 질환을 앓는 동물이 동물 모델로서 적합하다. 이런 동물은 바람직하게는 말, 양, 돼지, 염소, 낙타, 영양, 개, 래빗, 마우스, 래트, 기니피그, 햄스터 등의 포유류이고, 보다 바람직하게는 마우스, 래트, 기니피그, 햄스터 등의 설치류이다. 특히, 마우스는 소형동물로 번식력이 우세하고, 사양관리가 쉽고, 질병에 강하며, 유전적으로 균일하며, 다양한 종류가 개발되었고, 사람에서 발생하는 질병과 같거나 유사한 증상을 보이는 동물의 생산이 가능하여, 인간의 질병을 연구하는데 가장 많이 이용되고 있다.
상기의 CIIA 과발현으로 제조된 형질전환 마우스는 허혈성 뇌졸중(ischemic stroke), 근위축성 측삭 경화증(ALS), 치매 등의 퇴행성 뇌질환의 치료, 예방, 진단 또는 그 분자적 기전에 관한 연구과정 등에 널리 이용될 수 있다.
상기 기술된 바와 같이 본 발명은 동물에서 CIIA를 발현시켜서 신경세포사멸에 대한 현저한 저항성을 보이는 형질전환 마우스의 제작방법을 제공한다. 본 발명의 CIIA를 과발현하는 형질전환 마우스는 허혈 및 SOD1 변이에 의한 ALS 질환 과정에서의 신경세포손상에 대한 보호효과가 탁월하므로 퇴행성 뇌질환 연구과정 및 치료제 개발에 널리 활용될 수 있을 것이다.
이하, 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위하여 하기 실시예 등을 들어 설명한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며 본 발명의 범위가 아래에서 상술하는 실시예들에 한정되는 것으로 해석돼서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 본 발명의 구체적 이해를 돕기 위해 예시적으로 제공되는 것이다.
<실시예 1-1> CIIA 발현 벡터의 제조
본 발명자들은 마우스의 Flag-tag이 달린 CIIA cDNA를 동정하여 닭의 베타-액틴프로모터(chick beta-actin promoter)와 토끼의 베타-글로빈 폴리아데닌(rabbit β-globin poly A) 부위 사이에 삽입함으로써 발현벡터 pCAGGS/CIIA-Flag를 제작하였다(도 1a 참조). 도 1a는 CIIA를 발현하는 발현벡터 pCAGGS/CIIA-Flag를 나타내는 유전자 지도이다.
<실시예 1-2> 중합효소연쇄반응(PCR)을 이용한 전달된 유전자의 확인
pCAGGS 벡터에 CIIA-Flag 유전자가 제대로 삽입되었는지 확인하기 위해서 중합효소연쇄반응을 실시하였다. 하기 명시한 특정 primer 및 Taq 중합효소(Invitrogen)를 사용하여 마우스의 chromosomal DNA를 주형으로 94℃에서 3분 동안 변성시키고 94℃에서 30초, 60℃에서 30초 및 72℃에서 30초를 30회 반복하고 72℃에서 10분간 연장시켜 반응을 종결하였다. 그 결과 전달된 유전자(T)가 pCAGGS 벡터 사이에 삽입되어있음을 확인하였다(도 1b).
산물 크기: 약 700 bp
M : 1Kb 마커
N: 음성 대조군(마우스 염색체 DNA)
T : 타겟 PCR 산물(pCAGGS/Ciia + 마우스 염색체 DNA)
P: 양성 대조군(pCAGGS/Ciia)
Ciia-pCAGGS5n'(서열번호 5): 5'CCGGAATTCATGTTCCACGGGATCCC3'
EcoRI
Ciia-pCAGGS3c'(서열번호 6): 5'GC GAGATCTTTA CTTGTCATCGTCGTCCTTGTAATC GGCGTGT
BglII Flag sequence
AGGAAGCGGTTAAAGGC3
<실시예 1-3> 제한효소 절단 (restriction enzyme digestion)에 의한 전달된 유전자의 확인
CIIA-Flag 유전자의 pCAGGS 벡터내로의 정확한 삽입여부를 검증하고자 중합효소연쇄반응 뿐만 아니라 벡터지도에 표시된 특정 제한효소로 절단하였다. 레인 1에서는 EcoR I/Bgl II 제한효소로 절단한 결과 상기 도 1a에서 주입한 유전자 (CIIA-Flag, insert)를 확인하였고, 레인 2에서는 Sal I/Hind III 제한효소로 절단했을 때 pCAGGS/CIIA-Flag 발현벡터를 확인하였다 (도 1c). 이 절단 조각 (3Kb upper band)을 CIIA 형질전환 마우스 작제시 주입하여 사용하였다.
M : 1kb 마커
1: EcoRI/Bgl II로 처리 (인서트)
2:Sal I/ Hind III로 처리(3kb 밴드(upper band)는 CIIA를 가짐)
<실시예 2> CIIA 발현 벡터의 발현능 측정
상기 실시 예 1-1에서 제작한 pCAGGS/CIIA-Flag 벡터의 발현능을 조사하기 위해서 이 벡터를 HEK293 세포주에 형질주입시킨 후 항 Flag 항체(Sigma)로 웨스턴 블롯을 수행하였다. 2번 째 클론(clone, line 2)에서 CIIA가 가장 많이 발현됨을 확인하였다(도 2).
V: pCAGGS vector
Number:pCAGGS.CIIA-Flag의 클론 수
<실시예 3> CIIA 형질전환 마우스의 제작 및 확인
많은 수의 수정란을 얻기 위하여 PMSG (pregnant mare's serum gonadotrophin, 배란유도)와 HCG (human chorionic gonadotropin, 난포자극)와 같은 성선자극 호르몬 5 IU를 FVB/N 마우스(Jackson Laboratory,USA)의 복강내에 투여하여 과배란을 유도하였다. 과배란시켜 얻은 수정란은 팽대부를 절제하고 수정란을 수득하고, 여기에 히알루로니다아제(hyaluronidase; 300 ng/㎖)를 2분 정도 처리하여 난구세포들을 제거하여 수정란만을 수득하였다. 상기 수득한 수정란 중, 핵이 잘 보이는 세포에 미세조작기를 이용하여 pCAGGS/CIIA-Flag 발현벡터를 삽입하였다. 이 수정란을 대리모인 ICR 암컷 마우스(오리엔트바이오, 한국)의 난관에 이식하여 임신시켰다. 태어난 새끼들의 꼬리를 1㎝ 가량 자른 후 이로부터 DNA를 추출한 후, CIIA가 발현되는지 중합효소연쇄반응(PCR)을 이용하여 확인하였다(도 3). 각각의 CIIA 유전자에 특이적인 특정 primer 및 Taq 중합효소를 사용하여 게놈 DNA를 주형으로 94℃에서 2분 동안 변성시키고, 94℃에서 30초, 68℃에서 30초 및 72 ℃에서 30초를 5회 반복하고, 94℃에서 30초, 65℃에서 30초 및 72℃에서 30초를 5회 반복하고, 94℃에서 30초, 62℃에서 30초 및 72℃에서 30초를 5회 반복하고, 94℃에서 30초, 60℃에서 30초 및 72℃에서 30초를 30회 반복하고, 72℃에서 5분간 연장시켜 반응을 종결하였다. 그 결과 출산된 새끼의 일부 개체에 CIIA가 발현됨을 확인하였다 (도 3).
산물 크기: 약 280 bp
M: 100bp 마커(1, 0.9, 0.8, 0.7, 0.6, 0.5, 0.4, .03, 0.2, 0.1 kb)
N: 음성 대조군: (주형으로 25 nG WT 마우스 지노믹 DNA)
P1: 양성 대조군(주형으로 25 ng WT 마우스 지노목 DNA 및 10-6 의 25 ng CIIA-Flag/pCAGGS 혼합물)
프라이머 서열
포워드: exon7F 5’ CTCTTCATTACAGTCATGGAC3’(서열번호 7)
리버스: 3’Flag specific primer 5’ CTTGTCATCGTCGTCCTTGTAATCGGC3’(서열번호 8)
<실시예 4> ALS 동물 모델(G93A mice)에서 CIIA 유전자 발현에 의한 운동성 신경세포 사멸 억제효과
요수에 위치한 운동신경세포의 보호효과를 크레실 바이올렛 염색법을 이용하여 동물이 16주가 되었을 때 비교 실험을 하였다. G93A 쥐(Jackson laboratory)에서의 운동신경세포는 69%까지 감소하였으나, ALS 마우스 (G93A)와 CIIA 형질전환 마우스의 교차교배(cross breeding) 통해서 두 가지 형질을 모두 가지고 있는 G93A/CIIA 는 보통 쥐보다 32%의 감소율로, 운동신경세포의 보호효과 확인하였다 (도 4). 이와 같은 결과를 볼 때 본 발명가들에 의해서 새롭게 제시된 항고사 단백질인 CIIA는 ALS 진행과정에서 지속적으로 나타나는 운동증상 악화를 예방하는 효과가 있음이 입증되었다. 상기 교차교배를 통하여 두가지 형질을 모두 가지는 G93A/CIIA 형질전환 마우스의 제조방법은 실시예 3에 기재된 제조방법에서 단지 적용하는 마우스만 다르고 나머지 과정은 동일하다.
<실시예 5> 산소-포도당 결핍에 의한 허혈성 신경세포사멸과정에서 CIIA 단백질의 신경세포 보호효과
인간 신경세포 유래의 SH-SY5Y 세포에 CIIA 유전자 과발현시킨 후 허혈에 의한 신경세포사멸을 유도하기 위해서 혈청결핍 배지에 0.1% O2 및 0.5% CO2 조건에서 4시간을 배양한 후 10% 혈청이 포함된 배지에 48시간동안 37℃, 5% CO2 조건으로 배양한 후 신경세포사멸을 DAPI(4‘6-diamidino-2-phenylinole)염색법으로 정량화하였다.
구체적으로 3.7% 포름알데하이드(formaldehyde)용액으로 고정시키고 인산완충 식염수(PBS)로 세척, 10μM DAPI로 10분간 염색하고, 다시 인산완충 식염수로 세척하여 형광현미경하에서 세포고사에 의한 신경세포사멸이 유도된 세포수를 조사하였다. 그 결과, 허혈에 의한 신경세포손상이 CIIA를 과발현한 세포주에서 현저히 감소함을 확인하였다 (도 5).
도 1은 CIIA를 발현하는 발현벡터 pCAGGS의 제작방법을 나타낸 도면이다.
도 2는 제작된 발현벡터의 세포에서의 발현능을 측정한 도면이다.
도 3은 태어난 마우스에서 CIIA 발현여부를 측정한 도면이다.
도 4은 ALS 동물 모델에서 CIIA에 의한 운동신경세포퇴화의 지연에 대한 효과를 나타내는 도면이다.
도 5는 허혈에 의한 세포손상에 대한 CIIA의 신경세포사멸의 억제효과를 나타내는 도면이다.
<110> KOREA UNIVERSITY RESEARCH AND BUSINESS FOUNDATION
<120> CIIA Transgenic mouse possessing resistance for neurodegenerative
diseases
<160> 8
<170> KopatentIn 1.71
<210> 1
<211> 690
<212> DNA
<213> Mouse CIIA
<400> 1
atgttccacg ggatcccggc tactcctggt gttggagccc ctgggaacaa gccggagctg 60
tatgaggaag taaagctcta caagaatgct cgggagcggg agaagtatga caacatggca 120
gagctctttg ccgtggtgaa gacgatgcag gccctggaga aggcgtacat caaggactgt 180
gtcaccccca atgagtacac tgcagcctgc tccaggctcc tggtccagta caaagctgcc 240
ttccgacagg tccaaggctc agagatcagc tccattgatg aattttgccg aaagttcaga 300
ctggactgcc cacttgctat ggagaggatc aaagaggacc ggcccatcac tatcaaagac 360
gacaagggca atctcaaccg ctgcattgca gatgttgttt cgctcttcat tacagtcatg 420
gacaagctgc gtctggagat ccgtgccatg gacgagattc agccagacct gcgggagctg 480
atggagacaa tgcacagaat gagccacctg cctccagact tcgagggccg ccagacagtc 540
agccagtggc tgcagaccct gagtggtatg tcggcctctg acgagctgga tgactctcaa 600
gttcgccaga tgctcttcga tctggagtcc gcttacaacg cctttaaccg cttcctacac 660
gccgattaga aggacgacga tgacaagtaa 690
<210> 2
<211> 378
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Enhancer
<400> 2
gacattgatt attgactagt tattaatagt aatcaattac ggggtcatta gttcatagcc 60
catatatgga gttccgcgtt acataactta cggtaaatgg cccgcctggc tgaccgccca 120
acgacccccg cccattgacg tcaataatga cgtatgttcc catagtaacg ccaataggga 180
ctttccattg acgtcaatgg gtggagtatt tacggtaaac tgcccacttg gcagtacatc 240
aagtgtatca tatgccaagt acgcccccta ttgacgtcaa tgacggtaaa tggcccgcct 300
ggcattatgc ccagtacatg accttatggg actttcctac ttggcagtac atctacgtat 360
tagtcatcgc tattacca 378
<210> 3
<211> 1342
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> promoter
<400> 3
gaggtgagcc ccacgttctg cttcactctc cccatctccc ccccctcccc acccccaatt 60
ttgtatttat ttatttttta attattttgt gcagcgatgg gggcgggggg gggggggggg 120
ccccccccag gcggggcggg gcggggcgag gggcggggcg gggcgaggcg gaaaggtgcg 180
gcggcagcca atcagagcgg cgcgctccga aagtttcctt ttatggcgag gcggcggcgg 240
cggcggccct ataaaaagcg aagcgcgcgg cgggcgggag tcgttgcgcg ctgccttccc 300
cccgtgcccc gctccgccgc cgcctcgcgc cgcccgcccc ggctctgact gaccgcgtta 360
ctcccacagg tgagcgggcg ggacggccct tctcctccgg gctgtaatta gcgcttggtt 420
taatgacggc ttgtttcttt tctgtggctg cgtgaaagcc ttgaggggct ccgggagggc 480
cctttgtgcg gggggagcgg ctcggggggt gcgtgcgtgt gtgtgtgcgt ggggagcgcc 540
gcgtgcggct ccgcgctgcc cggcggctgt gagcgctgcg ggcgcggcgc ggggctttgt 600
gcgctccgca gtgtgcgcga ggggagcgcg gccgggggcg gtgccccgcg gtgcgggggg 660
ggctgcgagg ggaacaaagg ctgcgtgcgg ggtgtgtgcg tgggggggtg agcagggggt 720
gtgggcgcgt cggtcgggct gcaacccccc ctgcaccccc ctccccgagt tgctgagcac 780
ggcccggctt cgggtgcggg gctccgtacg gggcgtggcg cggggctcgc cgtgccgggc 840
ggggggtggc ggcaggtggg ggtgccgggc ggggcggggc cgcctcgggc cggggagggc 900
tcgggggaag gggcgcggcg gcccccggag cgccggcggc tgtcgaggcg cggcgagccg 960
cagccattgc cttttatggt aatcgtgcga gagggcgcag ggacttcctt tgtcccaaat 1020
ctgtgcggag ccgaaatctg ggaggcgccg ccgcaccccc tctagcgggc gcggggcgaa 1080
gcggtgcggc gccggcagga aggaaatggg cggggagggc cttcgtgcgt cgccgcgccg 1140
ccgtcccctt ctccctctcc agcctcgggg ctgtccgcgg ggggacggct gccttcgggg 1200
gggacggggc agggcggggt tcggcttctg gcgtgtgacc ggcggctcta gagcctctgc 1260
taaccatgtt catgccttct tctttttcct acagctcctg ggcaacgtgc tggttattgt 1320
gctgtctcat cattttggca aa 1342
<210> 4
<211> 514
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Poly-A
<400> 4
ttcactcctc aggtgcaggc tgcctatcag aaggtggtgg ctggtgtggc caatgccctg 60
gctcacaaat accactgaga tctttttccc tctgccaaaa attatgggga catcatgaag 120
ccccttgagc atctgacttc tggctaataa aggaaattta ttttcattgc aatagtgtgt 180
tggaattttt tgtgtctctc actcggaagg acatatggga gggcaaatca tttaaaacat 240
cagaatgagt atttggttta gagtttggca acatatgcca tatgctggct gccatgaaca 300
aaggtggcta taaagaggtc atcagtatat gaaacagccc cctgctgtcc attccttatt 360
ccatagaaaa gccttgactt gaggttagat tttttttata ttttgttttg tgttattttt 420
ttctttaaca tccctaaaat tttccttaca tgttttacta gccagatttt tcctcctctc 480
ctgactactc ccagtcatag ctgtccctct tctc 514
<210> 5
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 5
ccggaattca tgttccacgg gatccc 26
<210> 6
<211> 60
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 6
gcgagatctt tacttgtcat cgtcgtcctt gtaatcggcg tgtaggaagc ggttaaaggc 60
60
<210> 7
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 7
ctcttcatta cagtcatgga c 21
<210> 8
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 8
cttgtcatcg tcgtccttgt aatcggc 27
Claims (14)
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 염색체 안에 서열번호 2의 사이토메갈로 바이러스 게놈 유래의 인헨서, 서열번호 3의 닭의 베타-액틴프로모터(chick beta-actin promoter), 서열번호 1의 CIIA 유전자 및 서열번호 4의 토끼의 베타-글로빈 폴리아데닌(rabbit β-globin poly A) 부위 순으로 연결하여 제작된 재조합 융합 유전자가 통합되어 있는 CIIA 단백질을 과발현하는 형질전환 마우스.
- 제11항에 있어서, 상기 마우스는 운동 신경세포 보호효과를 가지는 것을 특징으로 하는 CIIA 단백질을 과발현하는 형질전환 마우스.
- 제11항에 있어서, 상기 마우스는 퇴행성 신경계 질환에 의한 신경세포사멸에 대한 저항성을 나타내는 CIIA 단백질을 과발현하는 형질전환 마우스.
- 제11항에 있어서, 상기 마우스는 근위축성 측삭 경화증에 대한 저항성을 나타내는 CIIA 단백질을 과발현하는 형질전환 마우스.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020080117434A KR101055376B1 (ko) | 2008-11-25 | 2008-11-25 | 퇴행성 신경계 질환에 대한 저항성을 가지는 ｃｉｉａ 형질전환 마우스 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020080117434A KR101055376B1 (ko) | 2008-11-25 | 2008-11-25 | 퇴행성 신경계 질환에 대한 저항성을 가지는 ｃｉｉａ 형질전환 마우스 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20100058868A KR20100058868A (ko) | 2010-06-04 |
| KR101055376B1 true KR101055376B1 (ko) | 2011-08-09 |
Family
ID=42360255
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020080117434A KR101055376B1 (ko) | 2008-11-25 | 2008-11-25 | 퇴행성 신경계 질환에 대한 저항성을 가지는 ｃｉｉａ 형질전환 마우스 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR101055376B1 (ko) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101658449B1 (ko) * | 2010-07-29 | 2016-10-04 | 서울대학교산학협력단 | Ａｔｇ5 유전자를 과발현하는 수명이 연장된 형질전환 동물, 및 이의 제조방법 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100399982B1 (ko) * | 2000-06-16 | 2003-11-13 | 학교법인고려중앙학원 | Ａｓｋ１과 결합하는 ｃａｄ의 선택적인 저해제로서아폽토시스를 억제하는 신규한 마우스 ｃｉａ 단백질,ｃｉａ 유전자 및 그의 용도 |
-
2008
- 2008-11-25 KR KR1020080117434A patent/KR101055376B1/ko not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100399982B1 (ko) * | 2000-06-16 | 2003-11-13 | 학교법인고려중앙학원 | Ａｓｋ１과 결합하는 ｃａｄ의 선택적인 저해제로서아폽토시스를 억제하는 신규한 마우스 ｃｉａ 단백질,ｃｉａ 유전자 및 그의 용도 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Identification of a Novel Antiapoptotic Protein That Antagonizes ASK1 and CAD Activities, Ssang-goo Cho et al, 163(1), p71~81, Oct. 2003 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20100058868A (ko) | 2010-06-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US8207396B2 (en) | Gene disruptions, compositions and methods relating thereto | |
| JP2009504183A5 (ko) | ||
| JP2008541781A5 (ko) | ||
| CN111304246A (zh) | 一种人源化细胞因子动物模型、制备方法及应用 | |
| EP2725106B1 (en) | Method for screening substances having body-weight-regulating effect | |
| CN114277055A (zh) | Il1b和il1a基因人源化的非人动物及其构建方法和应用 | |
| US20110179502A1 (en) | Modulation of gm98 (mrf) in remyelination | |
| AU2001241720B2 (en) | Production of mammals which produce progeny of a single sex | |
| CN113651892A (zh) | Tlr8基因人源化的非人动物及其构建方法和应用 | |
| AU2001241720A1 (en) | Production of mammals which produce progeny of a single sex | |
| JP2006526383A (ja) | 杯細胞関連疾患の診断、予防、改善、治療を行なうための方法と薬 | |
| KR101055376B1 (ko) | 퇴행성 신경계 질환에 대한 저항성을 가지는 ｃｉｉａ 형질전환 마우스 | |
| CN112501206B (zh) | Psma基因人源化非人动物的构建方法及应用 | |
| JP2003204796A (ja) | 非ヒト遺伝子改変動物およびその利用 | |
| JP5083820B2 (ja) | 無毛トランスジェニック動物 | |
| CN112553194B (zh) | Kit基因修饰的非人动物的制备方法和应用 | |
| KR20230121327A (ko) | 비인간 당사슬이 제거되고 인간 fcgrt 유전자를 갖는 인간화 마우스 및 그 용도 | |
| CN115786354A (zh) | Tgfb1、garp和/或lrrc33基因人源化非人动物的构建方法及应用 | |
| KR101670219B1 (ko) | Hcn2 유전자 조작을 이용한 우울증상발현 마우스모델 제작과 그의 이용 | |
| US7847148B2 (en) | Oasis gene-deficient mouse | |
| KR100794458B1 (ko) | ｐ23을 이용한 세포사멸 억제와 형질전환 동물의 제조 | |
| CN115010800A (zh) | Pvrig基因人源化非人动物的构建方法及应用 | |
| CN116420680A (zh) | Igf1r基因人源化非人动物及其构建方法和应用 | |
| CN114990128A (zh) | Cd20基因人源化非人动物的构建方法及应用 | |
| NZ769381A (en) | A rodent model of fibrodysplasia ossificans progressiva |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant | ||
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20140630 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20151102 Year of fee payment: 5 |
|
| LAPS | Lapse due to unpaid annual fee |