KR101029341B1

KR101029341B1 - 파이토프소라속 특이 항균유전자 및 이를 이용한 작물역병 방제 방법

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Publication number: KR101029341B1
Application number: KR1020090001489A
Authority: KR
Inventors: 윤상홍; 이창묵; 구본성; 여윤수; 김수진; 권순우; 김정봉; 김영태; 김동관; 임융호; 황병오; 김삼선; 금인경
Original assignee: 대한민국
Priority date: 2009-01-08
Filing date: 2009-01-08
Publication date: 2011-04-13
Also published as: KR20100082143A

Abstract

본 발명은 작물 역병균인 파이토프소라(Phytophthora)속 균을 특이적으로 저해하는 균주인 엔테로박터 속(Enterobacter sp.) YNB54에서 분리한 파이토프소라(Phytophthora)속 균의 성장을 저해하는 9.5kb 크기의 유전자 군인 EnAP95 및 이를 이용한 작물의 역병방제방법에 관한 것으로, 엔테로박터 속 YNB54의 염색체 DNA 단편들을 pBR322에 무작위로 삽입하여 제작한 유전자은행으로부터 작물역병균(Phytophthora capsici)을 특이적으로 저해하는 대장균 클론을 선발, 분석하여 항 Phytophthora 유전자군이 삽입된 단편 20kb내에 존재함을 확인하고, 대장균 클론 단편 20kb를 대상으로 bateriophage Mu (GeneJumper, Invitrogen, USA)가 삽입된 돌연변이주 은행을 제작한 다음, 이들 삽입 변이주들로부터 다양한 Phytophthora 종에 대한 길항력의 상실, 약화, 강화된 변이주를 선발하고 삽입위치를 분석한 결과, 20kb의 삽입단편 중 EnAP95라 명명된 약 9.5kb의 Sal I 단편 내에 항 역병에 관련한 필수영역이 모두 포함됨을 확인 한 후, EnAP95의 Sal I 단편을 pBR322에 클로닝한 pAFYS95를 제작하고, 이를 대장균에 형질전환하여 CDH95균주를 얻었으며, CDH95균주는 야생주인 YNB54균주나 기주 대장균보다 Phytophthora의 균사 성장을 보다 강력히 저해시키는 효과가 있었다.

파이토프소라(Phytophthora) 길항 유전자. 엔테로박터 속(Entrobacter sp.), 작물 역병

Description

파이토프소라속 특이 항균유전자 및 이를 이용한 작물역병 방제 방법{An anti-Phytophthora gene cluster specifically inhibiting the growth of Phytophthora spp. and the prevention method of Phytophthora using thereof}

본 발명은 작물 역병균인 파이토프소라(Phytophthora)속 균을 특이적으로 저해하는 균주인 엔테로박터 속(Enterobacter sp.) YNB54에서 분리한 파이토프소라(Phytophthora)속 균의 성장을 저해하는 9.5kb 크기의 유전자 군인 EnAP95 및 이를 이용한 작물의 역병방제방법에 관한 것으로, 좀 더 구체적으로는 엔테로박터 속 YNB54의 염색체 DNA 단편들을 pBR322에 무작위로 삽입하여 제작한 유전자은행으로부터 작물역병균(Phytophthora capsici)을 특이적으로 저해하는 대장균 클론을 선발, 분석하여 항 Phytophthora 유전자군이 삽입된 단편 20kb내에 존재함을 확인하고, 대장균 클론 단편 20kb를 대상으로 bateriophage Mu (GeneJumper, Invitrogen, USA)가 삽입된 돌연변이주 은행을 제작한 다음, 이들 삽입 변이주들로부터 다양한 Phytophthora 종에 대한 길항력의 상실, 약화, 강화된 변이주를 선발하고 삽입위치를 분석한 결과, 20kb의 삽입단편 중 EnAP95라 명명된 약 9.5kb의 Sal I 단편 내에 항 역병에 관련한 필수영역이 모두 포함됨을 확인 한 후, EnAP95의 Sal I 단편을 pBR322에 클로닝한 pAFYS95를 제작하고, 이를 대장균에 형질전환하여 CDH95균주를 얻었으며, CDH95균주는 야생주인 YNB54균주나 기주 대장균보다 Phytophthora의 균사 성장을 보다 강력히 저해시키는 효과가 있는 파이토프소라(Phytophthora)속 균을 특이적으로 저해하는 균주인 엔테로박터 속(Enterobacter sp.) YNB54에서 분리한 파이토프소라(Phytophthora)속 균의 성장을 저해하는 9.5kb 크기의 유전자 군인 EnAP95 및 이를 이용한 작물의 역병방제방법에 관한 것이다.

식물 역병은 세계적인 주요 작물 질병으로, Phytophthora속 곰팡이에 의해 발생한다. 이 역병 균은 주로 우기의 다습한 기후에서는 단기간 내 토양으로 전염되어 작물전체에 치명적 피해를 일으킨다. 약 1,000여종의 식물에 역병을 일으키는 원인균은 Phytophthora 속으로 분류학상 난균류(Oomycetes)에 속하고, 난균류(Oomycetes)는 상위 분류학상 갈색 조류(brown algae)에 속한다. 대표적 난균류(Oomycetes)로는 파이토프소라(Phytophthora)와 피티움(Pythium)속이 있으며, 매년 이들에 의한 직접적 피해가 수십억 달러에 달한다. 현재까지 약 95종의 Phytophthora와 100여종의 Pythium이 보고되어 있는데, 이 가운데 감자역병을 일으키는 Phytophthora infestans, 뿌리 썩음병을 일으키는 Phytophthora cinnamomi는 특히 유명하다. 국내에서도 Phytophthora capsici에 의한 고추 및 참깨의 역병 피해가 심각한 실정이다.

현재 난균류(Oomycetes)에 대한 연구가 많이 진행되지 않아 생물학적 지식이 제한되어 있으며, 이미 개발된 다수의 항곰팡이 제제가 난균류(Oomycetes) 계열 역병에는 효과적이지 못하다는 것은 주지의 사실이다. 예를 들어, Phytophthora 속의 방제에 상업적으로 사용되는 유기합성농약들(메타라실(metalaxyl), 디메토몰프(dimethomorph), 플루아지남(fluazinam), 파목사돈(famoxadone), 아즈옥시스트로빈(azoxystrobin), 시목사닐(cymoxanil), 프로파모카브(propamocarb), 포세트일(fosetyl), 만코제브(mancozeb), 족스아미드(zoxamide), 에타보삼클로타노일(ethaboxam chlrothalonoil))중에서 메타라실이 가장 널리 사용되는데, 최근 10년간 이것에 저항성을 보이는 균주가 출현되었고 점점 증가되는 추세이다. 따라서, 이미 개발된 합성농약들의 방제 효과는 감소되고 있으며, 농약의 대량 살포가 효과를 발휘할 수는 있으나, 이 경우 토양과 작물에 대한 잔류독성 문제가 심각해지는 문제점이 있다.

즉, 기존의 농약은 대부분 유기 합성제이며, 작용하는 기주 범위가 광범위하므로 독성효과가 큼은 물론, 환경에 잔류하여 인축에 보건위생적 피해를 야기할 수 있다. 더욱이, 최근에는 이들 농약에 저항성을 가진 돌연변이 균주가 빈번히 나타나 점점 더 많은 양의 농약을 사용해야 하는 악순환이 발생하고 있다.

뿐만 아니라, 현재까지 상용화된 역병관련 농약 대부분은 적어도 2속 이상의 비 특이적 곰팡이를 제어 대상으로 하고 있다. 이는 여러 곰팡이 병을 동시에 제어하는 장점이 있는 반면에, 토양 생태계의 교란과 그것의 강력한 독성으로 인축에 보건 위생학적 측면에 위해를 줄 수 있으며 이것은 궁극적으로 작물의 생육 전반에도 악영향을 미치리라 예상된다.

따라서, 분해가 용이하고 난균류에 특이적인 새로운 항진균제의 개발이 요구되고 있고, 하기와 같이 많은 연구가 진행되고 있다.

* 방선균 VK-A9으로부터 thiobutacin의 분리(Lee, J. Y.등, 2008, Pest Management Science 64:172-177, ISSN 1526-498X)

* Pseudomonas fluorescens로부터 massetolide A의 분리(Trans, H. A.등, 2007, New Phytologist 175:731-742, ISSN 0028-646X)

* Serratia marcescens로부터 oocydin A의 분리(Strobel, G., 등, 1999, Microbiology 145:3557-3564, ISSN 1350-0872)

한편, 미생물에서 유래된 천연 항진균제의 경우 특별한 수단을 개발하지 않는다면 생산비가 높아서 시장 경쟁성이 떨어지므로 이들의 생합성 유전자를 분리하여 발현을 높이려는 시도가 아래와 같이 진행되고 있다. 그러나, 항 곰팡이 물질 생합성에 관여하는 유전자군은 대부분 크기 때문에 대장균에서 발현한 보고는 매우 드물고, 유전자의 크기가 적거나 ORF의 구성이 비교적 간단한 경우에 국한되었다.

* Pyoluteorin 생합성 유전자의 Pseudomonas에서 규명(Huang X. 등, 2006, Gene 376:68-78, ISSN 0378-1119)

* 2,4-Diacetylphloroglucinol 유전자 클러스터 Pseudomonas에서 규명(Bangera, M. G.등, 1999, J. Bacteriol. 181:3155-3163, ISSN 0021-9193)

* Pyrrollnitrin의 생합성 유전자 클러스터 Pseudomonas에서 분리(Hammer, P. E. 등, 1997, ISSN 0099-2240)

* 2,4-diacetylphloroglucinol의 생합성 유전자 대장균에서의 발현(Vincent M. N. 등, 1991, ISSN 0099-2240)

한편, 본 발명의 근간이 되는 Phytophthora속 역병 균들에만 특이적인 길항 균 Enterobacter sp. YNB54와 이것의 Tn5-lac 돌연변이 은행 구축, 이 균주의 genomic library 구축은 본 출원인이 아래 학술논문에 이미 보고한 바 있다.

* Yoon S.H., 1999, Molecular cloning and expression of genes related to antifungal activities from Enterobacter sp. B54 antagonistic to Phytophthora capsici, J. Microbiol. Biotechnol. 9:353-357, ISSN 1017-7825

* 윤상홍 등, 1998, Phytophthora capsici의 성장을 저해하는 Enterobacter sp. B54의 선발과 Tn5-lac을 이용한 돌연변이 유기, Kor. J. Appl. Microbiol. Biotechnol. 26:393-399.

그러나, 현재까지 Phytophthora속 균주의 성장을 특이적으로 저해하는 물질 생산과 관련한 유전자의 공식적인 보고는 없다.

따라서, 본 발명의 목적은 Phytophthora속 균주의 성장을 특이적으로 저해하는 물질 생산과 관련된 유전자를 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적은 상기 목적의 유전자를 이용하여 용이하게 저렴한 비용으로 Phytophthora속 균주의 성장을 특이적으로 저해하는 물질을 생산할 수 있는 형질전환 균주를 제공하는 데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 목적의 균주로부터 Phytophthora속 균주의 성장을 특이적으로 저해하는 물질을 얻고, 이를 이용하여 작물역병을 효과적으로 방제하는 방법을 제공하는 데 있다.

상술한 목적들 뿐만 아니라 용이하게 표출될 수 있는 또 다른 목적들을 용이하게 달성하기 위하여 본 발명에서는 엔테로박터 속 YNB54의 염색체 DNA 단편들을 pBR322에 무작위로 삽입하여 제작한 유전자은행으로부터 작물역병균(Phytophthora capsici)을 특이적으로 저해하는 대장균 클론을 선발, 분석하여 항 Phytophthora 유전자군이 삽입된 단편 20kb내에 존재함을 확인하고, 대장균 클론 단편 20kb를 대상으로 bateriophage Mu (GeneJumper, Invitrogen, USA)가 삽입된 돌연변이주 은행을 제작한 다음, 이들 삽입 변이주들로부터 다양한 Phytophthora 종에 대한 길항력의 상실, 약화, 강화된 변이주를 선발하고 삽입위치를 분석한 결과, 20kb의 삽입단편 중 EnAP95라 명명된 약 9.5kb의 Sal I 단편 내에 항 역병에 관련한 필수영역이 모두 포함됨을 확인 한 후, EnAP95의 Sal I 단편을 pBR322에 클로닝한 pAFYS95를 제작하고, 이를 대장균에 형질전환하여 CDH95균주를 얻었으며, CDH95균주는 야생주인 YNB54균주나 기주 대장균보다 Phytophthora의 균사 성장을 보다 강력히 저해시키는 효과를 얻을 수 있었다.

본 발명에 따른 파이토프소라속 특이 항균유전자, 이를 포함하는 유전자조작 생물체 및 이를 이용한 작물역병 방제 방법은 Phytophthora속 균주의 성장을 특이적으로 저해하는 물질 생산과 관련된 유전자를 얻고, 이 유전자를 이용하여 용이하게 저렴한 비용으로 Phytophthora속 균주의 성장을 특이적으로 저해하는 물질을 생산할 수 있는 형질전환 균주를 얻을 수 있으며, 상기 균주로부터 Phytophthora속 균주의 성장을 특이적으로 저해하는 물질을 얻고, 이를 이용하여 작물역병을 효과적으로 방제하는 효과를 얻을 수 있다.

특히, 본 발명에 의해 제공되는 항 역병 길항균 Enterobacter sp. YNB54 유래의 Phytophthora 속 특이적 항 역병 유전자군의 대장균 발현체는 그 자체로 항 역병 물질을 대량으로 추출하는데 사용할 수 있지만 발효공정이 잘 확립된 균주나, 발현벡터나 분비 시스템이 잘 개발된 미생물에 발현시켜 항균물질의 생산을 위한 공정 효과를 더 향상시킬 수 있다.

본 발명에 따른 작물 역병균인 파이토프소라(Phytophthora)속 균을 특이적으로 저해하는 균주인 엔테로박터 속(Enterobacter sp.) YNB54에서 분리한 파이토프 소라(Phytophthora)속 균의 성장을 저해하는 9.5kb 크기의 유전자 군인 EnAP95, 상기 유전자 군을 조작하여 형질전환된 생물체 및 이를 이용한 작물의 역병방제방법은 엔테로박터 속 YNB54의 염색체 DNA 단편들을 pBR322에 무작위로 삽입하여 제작한 유전자은행으로부터 작물역병균(Phytophthora capsici)을 특이적으로 저해하는 대장균 클론을 선발, 분석하여 항 Phytophthora 유전자군이 삽입된 단편 20kb내에 존재함을 확인하고, 대장균 클론 단편 20kb를 대상으로 bateriophage Mu (GeneJumper, Invitrogen, USA)가 삽입된 돌연변이주 은행을 제작한 다음, 이들 삽입 변이주들로부터 다양한 Phytophthora 종에 대한 길항력의 상실, 약화, 강화된 변이주를 선발하고 삽입위치를 분석한 결과, 20kb의 삽입단편 중 EnAP95라 명명된 약 9.5kb의 Sal I 단편 내에 항 역병에 관련한 필수영역이 모두 포함됨을 확인 한 후, EnAP95의 Sal I 단편을 pBR322에 클로닝한 pAFYS95를 제작하고, 이를 대장균에 형질전환하여 CDH95균주를 얻고, 이를 배양하여 배양액을 그대로 이용하거나 파이토프소라(Phytophthora)속 균을 특이적으로 저해하는 물질을 분리하여 작물 역병균에 적용하는 것으로 특징지워진다.

본 발명에 있어서, Phytophthora속 역병 균들에만 특이적인 길항균 Enterobacter sp. YNB54와 이것의 Tn5-lac 돌연변이 은행 구축, 이 균주의 genomic library 구축은 본 출원인이 이미 보고한 바 있는 논문인 "Yoon S.H., 1999, Molecular cloning and expression of genes related to antifungal activities from Enterobacter sp. B54 antagonistic to Phytophthora capsici, J. Microbiol. Biotechnol. 9:353-357, ISSN 1017-7825"와 "윤상홍 등, 1998, Phytophthora capsici의 성장을 저해하는 Enterobacter sp. B54의 선발과 Tn5-lac을 이용한 돌연변이 유기, Kor. J. Appl. Microbiol. Biotechnol. 26:393-399."에 기재된 방법으로 행하였다.

하기 실시예를 통하여 본 발명을 좀 더 구체적으로 설명하면 다음과 같다. 다만, 하기 실시예는 본 발명의 범주를 한정하는 것은 아니다.

실시예 1 : Enterobacter sp. YNB54 균 배양과 항진균 활성 조사

분리균주인 Enterobacter sp. YNB54 균과 항진균 활성 조사용 공시 균들을 각각 박토 트립틱 소이 브로스(Bacto Tryptic Soy Broth : Becton Dickinson, USA)에 1.5% 아가(agar)를 첨가한 TSA배지, 28℃에서 배양하였다. 생리 생화학적 실험을 위한 공시균주인 엔테로박터 칸세로지너스(Enterobacter cancerogenus), 시테로박터 푸루운디(Citerobacter freundii), 엔테로박터 클로아세(Enterobacter cloacae), 레클레르시아 아데카르복실라타(Leclercia adecarboxylata), 클렙시엘라 뉴모니아(Klebsiella pneumoniae)는 American Type Culture Collection(Manassas, VA)로부터 분양 받았다.

또한, 파이토프소라 캡시시(Phytophthora capsici), 파이토프소라 신나모미(P. cinnamomi), 파이토프소라 멜로니스(P. melonis), 파이토프소라 드레체슬러(P. drechsler), 파이토프소라 소재(P. sojae), 파이토프소라 팔미보라(P. palmivora), 파이토프소라 인페스탄스(P. infestans), 콜렉토트리치움 아스퍼질러스(Collectotrichium, Aspergillus A151-50), 리조푸스 오르자이(Rhizopus oryzae), 피티움(Pythium) 등의 식물 병원성 곰팡이는 한국농업 미생물 자원센터 (KACC; Korea Agricultural Culture Collection)에서 분양 받았다. 감자 한천 배지(potato dextrose agar, PDA : Difco Laboratories, U.S.A.)에서 5일간 배양된 곰팡이의 선단 부위(0.3cm×0.3cm)를 떼어내 새로운 PDA에서 각각 계대 배양하였다. PDA상에서 3일 정도 배양한 식물 병원성 곰팡이의 선단 부위에 일정 간격(10mm)을 띄우고 시험균을 멸균된 이쑤시개로 접종하여 25℃, 24시간 배양 후, 콜로니 주위에 형성되는 저지환의 직경으로 상대적 항진균 활성을 조사하였다.

Enterobacter sp. YNB54균의 각 병원균에 대한 저항성을 하기의 표 1에 기재하였다. 특히, 파이토프소라 캡시시(Phytophthora capsici)에 결과는 표 1에 도시하였다.

Phytopathogenic fungus	Strain ID	항 곰팡이 활력 (Antagonistic activities)
Phytophthora capsici	KACC40157, 40475, 40476, 40483	+++
Phytophthora infestans	KACC40718	+++
Phytophthora cinnamoni	KACC40183	++++
Phytophthora melonis	KACC40193	+
Phytophthora palmivors	KACC40409	++
Phytophthora drechsleri	KACC40190	+++
Phytophthora sojae	KACC40468	++
Pythium ultimum	KACC41052, 41062	+
Rhizoctonia solani		-
Rhizopus oryzae		-
Fusarium oxysporum		-
Aspergillus oryzae		-
Colletotrichum gloeosporiodes		-
Penicillium citrinum		-

* KACC, Korean Agricultural Culture Collection.

** 항 진균성은 저지환(inhibition zone)의 크기에 따라 표시함.

(-) : no inhibition, (+) : <3 mm,

(++) : 3 ~ 5mm, (+++) : 5 ~ 10mm, (++++) : >10mm.

실시예 2 : 항 역병 유전자군 EnAP95의 분리

본 발명 출원인의 선행 연구 결과에 기재된 방법으로 YNB54 균주의 P1::Tn5 lac mutagenesis를 통해 얻은 돌연변이주들의 항균 기능 검정 분석으로 항 Phytophthora 활성에 관여하는 유전자의 존재를 확인하였고(Yoon 등 1998), YNB54의 염색체 DNA 단편들을 pBR322에 무작위로 삽입하여 제작한 유전자은행으로부터 작물역병균(Phytophthora capsici)을 특이적으로 저해하는 대장균 클론을 선발, 분석하여 항 Phytophthora 유전자군이 삽입된 단편 20kb내에 존재함을 확인(Yoon 등 1999)하고 이를 분리하였다.

상기 대장균 클론 단편 20kb를 대상으로 bateriophage Mu (GeneJumper, Invitrogen, USA)가 삽입된 돌연변이주 은행을 제작하였다. 이들 삽입 변이주들로부터 다양한 Phytophthora 종에 대한 길항력의 상실, 약화, 강화된 변이주를 선발하여 삽입위치를 분석하여 항 Phytophthora활성과 관련된 필수유전자의 영역을 확인하였다. 그 결과 20kb의 삽입단편 중 EnAP95라 명명된 약 9.5kb의 Sal I 단편 내에 항 역병에 관련한 필수영역이 모두 포함됨을 알 수 있었다. 따라서, EnAP95의 Sal I 단편을 pBR322에 클로닝한 pAFYS95를 제작하였고, 이를 대장균에 형질전환하여 CDH95균주를 얻었다. 얻은 CDH95균주는 도 1에 도시된 바와 같이 야생주인 YNB54균주나 기주 대장균보다 Phytophthora의 균사 성장을 보다 강력히 저해시키는 새로운 기능을 나타냄을 알 수 있었다. 이는 9.5kb의 DNA단편이 대장균에 이전되어 발현된 것에 기인함이 명백하고, 2008년 8월 14일 한국농업미생물 자원센터에 이 클론을 기탁하여 수탁번호(KACC95095)를 부여받았다.

도 1에 있어서, ①은 Enterobacter sp. YNB54, ②는 대조군(E. coli DH5α), ③은 CDH95(EnAP95가 발현된 대장균 E. coli DH5α)이 각각의 필터용지에 치상한 것을 나타낸다.

실시예 3 : 항역병 유전자군 EnAP95의 전체 염기서열 및 기능 분석

우수한 항 역병기능을 나타내는 균주 KACC95095의 EnAP95 염기서열 분석을 위해 숏건 DNA 라이브러리(short-gun DNA library)를 제작하였다. 우선, 목적유전자를 보유한 재조합 플라스미드를 주사기로 절단(shearing)하거나 초음파로 파쇄한 뒤, 말단부위를 평활화한 다음, HpaI/pUC119에 리게이션(ligation)하여 E. coli DH5α에 형질전환(transformation)시켰다. 여기서 LB/X-gal/Amp 배지에서 수백 개의 플라스미드를 임의로 분리하여 모두 시퀀싱(sequencing)하고, 생물정보 분석 프로그램(VectorNTI, ver. 9)을 통해 중복된 배열을 찾아서 조각 염기서열을 전체 DNA 염기서열로 연결하였다. 한 개의 contig로 연결된 유전 정보로부터 가상 ORF를 도출해, 이를 중심으로 NCBI BlastX 알고리즘을 사용하여 GenBank 데이터베이스를 검색하였다.

EnAP95 균주로부터 대장균에 클로닝된 항 Phytophthora 유전자군의 전체 염기서열을 분석한 결과 총 9,493bp였고, 가상 ORF는 11개로 추정되었다. 총 11개 ORF를 가진 필수영역 EnAP95 유전자군은 transcriptional regulator LysR, tautomerase, HAD-superfamily hydrolase, major facilator superfamily MFS1, carboxymuconolactone decarboxylase, acetyl-CoA acetyltransferase, oxidoreductase 외 4개의 hypothetical protein을 code하는 유전자로 구성된 것으로 추정된다. 전체적으로 항 역병 활성과 관련하는 이들 ORF들은 기존 보고된 항균물질 생합성 유전자군의 구성ORF들의 배열, 정체, 염기서열 등에서 어떠한 유사성도 없었다(도 2 및 하기의 항역병 유전자군 EnAP95의 전체 염기서열 (GenBank flat file 형태) 참조). 특히 이 유전자군내 조절단백질을 코드하는 ORF1을 제외한 구조유전자의 제일 앞부분 3개의 ORF(ORF2, 3, 4)는 최근의 NCBI 자료에도 보고된 바 없는 밝혀지지 않은 기능의 단백질을 코드하고 있으므로 EnAP95내 유전자군은 전혀 새로운 항균유전자임이 명백하다. 특히 이 유전자군의 구성 ORF내 두 번째 아미노산 코돈을 중지코돈으로 바꾼 인위적 위치 점 변이주들의 완전한 길항력 상실 또는 약화는 이들이 필수적이고 실제적인 ORF들임을 증명해주고 있다(도 3).

특히, 아직 이 유전자군이 생산하는 물질의 정확한 정체는 규명되지 못했지만 EnAP95유전자의 다양한 Phytophthora종에 대한 특이적 균사성장 저해기능이 있음 명백하고, 그 염기서열 구조와 구성 ORF들을 볼 때 신규한 것으로 확인되었다.

항역병 유전자군 EnAP95의 전체 염기서열 (GenBank flat file 형태

LOCUS EnAP95 9493 bp DNA linear 14-AUG-2008

DEFINITION Sal1 fragment ORF prediction.

SOURCE

ORGANISM Enterobacter sp. YNB54

COMMENT This file is GenBank format.

FEATURES Location/Qualifiers

misc_feature complement(201..1121)

/label=201-1121(ORF1)

/translation="MATAEHLISNNLPSIKQLQCFLAVAHELNFRKAAERLRMTQPPLTRQIKC

LEAVLKRQLFSRSTHDVSLTDAGRALVVQAEKILKDISNLKEDPLSSETG

LRIGLTRTLNFEYIEPVNTQLQKMNAGDDVETPDLTSAQLLQSLSKNMLD

LVLTGEKGTGHEDIVQYRWVCQEPLLIAMPSLHPASLKEKVSLEDISDLP

IFWFSRSANPSFYDKCESYFDTLKTPLKRIKEPDDSLVMLSRIARGKGFA

LLPQSKCTFNQEGLCYRELTDAEAKRLNIDIYAATRLNENREEILNAQNV

LCGKMP"

misc_feature 1309..1920

/label=1309-1920(ORF2)

/translation="MSSKYVLVSRFPLKNTFTEKDFTSLKSNENVRYYSCEENGVNELLELRAF

NDIKEIAWAESEMESMFHRFSAVLSADIRRELLKFVESPIDNKKSLPESN

YIQLRHVEVPAHNYQQYRQWRDETIFNVVRDNKDKIESFEAFHSLISGVP

GVMFISSFNGDKAEYKEAFTNARYQEIIQQAGDNFITGGNDGLYTRIYRA

CCC"

misc_feature 1931..2707

/label=1931-2707(ORF3)

/translation="MNCKKLVVVGDKFNEFANGKDVLTISQLELLTQIPANIIDKEHEIIVGQG

VRKDFAGKVISNQARNAIHGNKLKMCSLEKLVSDKKNAHCHKKLEQNILI

GPAEQAEHNPELYAMPLLIDERCELMADHQTGQHIQGMLLVEASRQAFIG

VTEEFIYPRESGRYYVINSMAINFASFLFPLPALVHFEFLEKDINDRRGR

FKAQVRVTQHQTLCATMDVSFTVYPSTLIAEKEKSLAEVAMQATIVEQQG

VAQGVTHA"

misc_feature 2700..3533

/label=2700-3533(ORF4)

/translation="MPELRSQKYRLAATTQGPLYPPAEVMDGKGNFVVVGMVPGDNGLQWRSVIV

SPDSALPAFGEIAPYNVLCDIEKMPQDALKDIILHTLPLPIPMNNYRMIFA

PEQRPQANKEKRPSLPLHEGYIADYRSSDGKRDIQPVTLAAWLEAEGTFDV

TLSEDKKRARFTFSFRSLVPDSVYTVMSLRENDLASEATSRPGPLGIPNVF

ITDSEGNAEYWAELTDPFPAPERKGNRIINVVVLYMSSRQSYGGAIGFYGL

GGDIHAHLKLKGRSFDEFTTIE"

misc_feature 3541..3765

/label=3541-3765(ORF5)

/translation="MPFVHVMTWPTKDENQIIRLQEDITFAVHKNTGAPLDKISVVVSEIQPSR

WADAGVPGTDKDFPVKSRRKNYEE"

misc_feature 3826..4419

/label=3826-4419(ORF6)

/translation="MFDFYDFWCRANNQNDRLQRYMSRFRADVKNGVPRETLNREYYRQFEGVS

CRYLEEMGEEWFRRKLENAFFIESAVSALKSHQSQNMYTLFISGSMLPIL

SPIAKYLGVTDILCAPLIINDAGELTGEIGLPQTIGAGKKDALMTFCRDK

EINPADCYAYGDDLSDIPMLEAIGHPVCVGEHSALTRYAAEKNWHII"

misc_feature 4441..5661

/label=4441-5661(ORF7)

/translation="MTSELSPQNMTLRSWLALFILAISTFTIVTTELAPVGLLTPIAEGLRSSE

SAVGMTVSLYAWVGALSALFASVFLGNVAKKRLLLVLTVVLLISNVMAAT

VNTYGMLLSARVLGALAHGAFWAMIGATAVAMVPARYIGAATSIVFGGVS

AASVFGVPVSNYIGIHFGWRQAFWLMAALSVIAFVGISVLVPQIASKSAL

GLDALKGVLKSSTLWKIYSATLLAVTAHFAAFTYIEPWLHTQSLLSTAFI

PAVLFVYGIAGLAGNFLTGVMIDKYLKLTVSLSVLLICAVLLFLGLSGSS

LSAALIFTSMIIWGVAVSGIFVGFQTWVLRMAEDKAFPASAIYVSFFNTA

IGIGASVGAWMVSSFSMPLLYIVAGTAIGLSVLLVAVIPATLTAKQSRME

KSYESN"

misc_feature 5648..6061

/label=5648-6061(ORF8)

/translation="MSQINDRTRYGREIMDRLEAGLADKVTRRLSELDPGLPALITDYAFGDVV

GRPGLDLKTREMLTVASLVTLGNAMPQLELHMRGALNTGVTPEELLEIVI

QMAVYAGVPACMNGLTAYRAAMAATGHTLPGLKGSDA"

misc_feature 6058..7233

/label=6058-7233(ORF9)

/translation="MSEVVIIAARRTATGAFQGALAEHSAADLGSRVIQALLKESGVEASDISQ

VIMGQVLTAGCGQNPARQSALNAGLPVETQCLTINKVCGSGLKAVHLGMQ

ALQTGEAEFVIAGGQESMSNAPHIALTSRSGTRLGDITLKDSLVSDGLWD

AFNDYHMGITAENVATEFGISREMQDEYALVSHHNALEAQARGIFEREIV

PVEWLTRKGETICVERDEGPRATSIDKLTKLRPVFRKEGTVTAGNASSLN

DGAAAVLLCTRDTAEARGLPVLASLGVFTNSGIQPALMGAAPIQAIADCL

SRSGWTPEDVDHLESNEAFAAQALAVIQQAGISPDRINPYGGAIALGHAI

GASGCRILVTLVHALVRNDGKRGVAALCVGGGEGVALSVYR"

misc_feature complement(7299..8297)

/label=7299-8297(ORF10)

/translation="MKTRTLSQNLTVSAVGYGAMGLSEFYGQTDDNASLQVLHSLIDLNVTFID

TANLYGRGHNERLIGHFLAGLDKSTREQFKIATKCGIDRSPDESYARTIN

NTPDYIIRCCNESLKRLGVERIDLFYLHRLSNVTPVEESMDCLRTLVKEG

KINHIGLCEVSAATLQRAHAVHPVTALQTEYSLWTRDIEESILPTVKELG

IGLVPYSPLGRGFLTGKYLNNSEFAEGDFRKNNERFAQSSLDHNRQLLDV

IHPLAAKYGCTAGQIALAWLLAQYERLVPIPGTKHAGYLAENARAADIVL

EKSDIESLNNLHRRIEIKGDRYSAEGMKGVNA"

misc_feature complement(8366..9190)

/label=8366-9190\(ORF11)

/translation="MKMAVIPAMTPGRFSSANMFCLWCAASPGRDGSAFHTQMMQSRPITAAAL

KTLRQPIIPPRKLPSGAAITSAIETAPKITDSAFGTVRAGTRRMVSEADI

AQKPPSPSPRQARPSSSRVKLSAKETSRQESVSSTLNRMTTLRRSMVPIT

WVINRLANIATKAVTVTDCPATPSEMPRSCAIGVSRLTGKNSTVIRQATQ

NATEKTADQLGRKTSLICGLVVGWICSVMASPEDKNVRKSRAVYHQKCDG

FNDLTTFVFFNYPGSSTAETDTFSA"

BASE COUNT 2115 a 2386 c 2595 g 2397 t

ORIGIN

1 gtcgacggca gcgaagagaa cctgcacacc tggcaccgca tgctgcgcaa agcccgcctt

61 gccgcaccca ttaccgatgc gcaaatccgc ctcgcgcttg gctttatgcg cgagatggag

121 cccgacccgc aggagcttaa cgccttccag ctacgctata accagctctt cctgccggaa

181 gagggcgtgt tttatctgca ttaaggcatt ttcccgcaaa gcacattctg agcgttcaga

241 atctcttctc tattttcatt gaggcgggtg gcggcataga tatctatgtt taaccttttt

301 gcctccgcgt ccgtgagttc acggtagcaa agtccttcct gattaaaggt gcatttcgac

361 tgtggcagca gggcaaatcc tttccctctt gcgatgcggc taagcatcac gagggaatca

421 tccggctctt taatacgctt cagcggcgtt ttcagcgtat caaagtagct ttcgcatttg

481 tcatagaatg acgggttagc gcttcgcgaa aaccaaaaaa tcgggagatc gctaatgtct

541 tccagcgaga ctttctcttt caggctggca ggatgcaaag agggcattgc gatcagcaac

601 ggttcctggc agacccagcg gtattgaacg atgtcttcat gacccgttcc tttttccccg

661 gtcagcacca gatccagcat atttttagac aagctttgca gcagctgggc tgacgtcagg

721 tccggcgttt cgacatcatc tcccgcgttc attttttgaa gctgggtatt cacgggttca

781 atatattcaa aattaagcgt tcgcgtcagc ccgatgcgca ggcccgtttc agatgaaagt

841 ggatcttctt ttaaattgct gatgtctttt aatatttttt cagcctgaac aaccagcgca

901 cgacctgcgt cagtaaggct aacgtcatgc gtgctgcggc tgaacagctg acgcttcaga

961 accgcttcaa ggcattttat ctgacgcgtc aacggcggtt gagtcatgcg caggcgttcg

1021 gcagccttac ggaagttgag ttcatgtgca acagcgagaa agcattgtaa ttgtttgatg

1081 ctgggcaggt tattgctgat taaatgttct gctgtggcca tacgtgggtc ctgaatgcga

1141 aaaggtattt cgtctttttt ccatttcgat attacacgct aaatgcaggc agtaaaaccc

1201 gttttaacag taatacaaaa aatatattac aaatttaaca attccaattg tttcctgtat

1261 tgataaattt ctacccgaat cctcattcaa tcaatattcg gagtaattat gtcgtctaaa

1321 tatgtactgg tatcacgctt cccgttaaaa aatacgttta ccgagaaaga ttttacttcc

1381 ttaaaaagca atgaaaacgt tcgctactat tcctgtgaag aaaacggtgt taatgaactg

1441 ctggaactgc gcgctttcaa tgatattaaa gaaattgcat gggctgagag tgaaatggaa

1501 tccatgttcc atcgtttctc tgctgttctt tctgccgata ttcgtcgcga actgcttaag

1561 tttgttgaat ctccaatcga taataaaaag agcttacccg aatcaaatta tattcagctt

1621 cgtcacgttg aggtgcccgc gcataactat cagcagtatc gtcagtggcg cgatgaaacc

1681 atctttaatg tggtaagaga taacaaagat aaaatcgaaa gtttcgaagc gtttcattcc

1741 ctgatcagcg gcgttcctgg cgtgatgttt atctcctcat tcaacggcga taaagcagaa

1801 tataaagaag catttaccaa tgcgcgttac caggaaatca ttcagcaggc cggcgacaac

1861 tttatcactg gcggcaatga cggcctttat acgcgtatct atcgtgcttg ctgttgttga

1921 ggaacaatga atgaactgta aaaagttggt agttgttggc gataaattta atgaatttgc

1981 caatggtaaa gatgtactga ctatatctca gcttgaatta ttgactcaga tccctgcgaa

2041 tatcattgat aaagaacatg aaattattgt tgggcagggc gtacgcaagg attttgccgg

2101 gaaagtaatt tcaaaccagg caagaaacgc gattcatggt aataaactaa aaatgtgctc

2161 tctggaaaaa ctggtgagcg acaaaaaaaa tgcacattgc cataaaaaac tggaacagaa

2221 catacttata gggcctgcgg aacaagctga gcataatccc gaactctatg cgatgcctct

2281 gttaatcgat gagcgttgcg aattgatggc ggatcaccag acgggccagc atattcaggg

2341 aatgctcctg gttgaagcca gccgacaggc ctttatcggc gtcaccgaag aatttattta

2401 cccgcgggaa agcgggcgct attacgtcat taacagcatg gcaatcaatt tcgccagctt

2461 cctgttccct ttaccggcgc tggtccattt tgaatttctt gaaaaagata ttaatgaccg

2521 ccgggggcgc ttcaaggctc aggtacgcgt tacgcagcac caaacgcttt gcgcgacgat

2581 ggatgtgtcg ttcaccgtct atccttccac cctgatcgca gagaaagaaa aatctctggc

2641 tgaggttgcc atgcaggcga ccatcgttga gcagcaaggg gtggcgcagg gggtaacgca

2701 tgcctgaatt acgtagccag aaataccgtc tggctgcgac cacgcagggg ccgctttacc

2761 cccctgcgga ggtcatggac gggaagggaa attttgtcgt ggttggcatg gtgcccggtg

2821 ataacggcct gcagtggcga agcgtcattg tttcaccgga cagcgcgctc ccggcatttg

2881 gggaaatcgc gccctataac gttctgtgcg atatcgaaaa aatgcctcag gacgcgttga

2941 aggacatcat tcttcatact ctgcctttac ccattccgat gaacaactat cggatgatat

3001 tcgccccgga acagcggccg caggccaata aggaaaagcg gcctagcctg ccgcttcatg

3061 aaggctatat cgcagattat cgcagcagcg atggaaagcg agacatccag cctgtcaccc

3121 tcgctgcctg gcttgaggca gagggaacct ttgacgtcac gttgtccgaa gacaagaagc

3181 gagcgcgatt cacgttttcg ttcaggagtc ttgtcccgga tagcgtttat accgtgatga

3241 gtctcaggga gaacgattta gcctctgagg cgacgagcag gcctggcccg ctgggcatac

3301 ccaacgtatt tataaccgac agcgaaggta acgctgaata ttgggctgag ttaaccgatc

3361 cttttccggc tccggagagg aaaggaaaca gaattattaa cgtggtcgta ctttatatga

3421 gctcgcgtca gagctacggc ggtgcaattg gtttttacgg tcttggaggc gatatccatg

3481 cccatttaaa actcaaaggc cgttccttcg atgaatttac aactatagag tgagaaaagt

3541 atgccgtttg ttcatgtgat gacctggccg acgaaagatg aaaatcaaat catcaggctt

3601 caggaagata ttacgtttgc cgttcacaaa aacacgggtg cgccgctgga taaaatttcc

3661 gtggtagtgt ctgaaattca accttcccgc tgggcggatg ctggcgtgcc tggtacggat

3721 aaagatttcc cggttaagag tcgaagaaaa aactacgagg aataggcttt gcgtaaacac

3781 gccgcatttt ttgacgttga tgaaacgcta ataaatatta aaagcatgtt tgatttctat

3841 gacttctggt gcagggcaaa taatcaaaac gatcgtcttc aacgctatat gtctcgcttt

3901 cgcgccgacg taaaaaacgg tgtgccaagg gagacgctga acagagagta ttatcgccag

3961 tttgaaggcg tgtcttgtcg ttatctggaa gaaatgggcg aggaatggtt caggcgtaag

4021 ctggaaaacg cattttttat tgagagtgcc gtttcggcac ttaaaagcca tcagagccag

4081 aacatgtaca ccttatttat atcgggctct atgcttccga ttctgtcacc cattgcgaaa

4141 tatcttgggg tcacggacat actctgtgcg ccgttgataa taaatgacgc aggcgagttg

4201 acgggtgaaa tcggcctgcc ccaaacaatt ggcgcgggta aaaaagacgc cctgatgacg

4261 ttttgccggg ataaggagat taacccggcg gattgttatg cctacggtga cgatctttcg

4321 gatattccaa tgctcgaagc catcgggcat cccgtctgtg tgggagagca ttccgcgctt

4381 acccgatatg cagcagaaaa aaattggcac attatttaaa ccattattga ggtaagtagt

4441 atgacttcag aactctcccc gcaaaatatg acgttaaggt catggcttgc gttattcatt

4501 ctggctattt caacgtttac tattgtcact accgaactgg cgccggtcgg attattaacg

4561 ccaatcgcag aggggttacg gtcttcggaa tccgcggtgg gcatgaccgt gtcgctttat

4621 gcctgggtgg gggcgttgag tgcgctgttt gcatccgtct ttttaggcaa tgtggctaag

4681 aagcggcttt tactcgtgct caccgtggtg cttctgatct ctaacgtcat ggccgcgacg

4741 gtaaacacct acggaatgct gcttagcgcc cgcgtgctgg gcgcgcttgc tcacggtgca

4801 ttctgggcga tgatcggcgc aacggcggtg gccatggttc ctgccagata tattggggcg

4861 gcgacgtcaa tcgtgtttgg tggcgtttcc gcagcaagcg tttttggcgt accggtatcc

4921 aactacattg gtatccactt cggctggcgg caggcatttt ggctgatggc cgcgctgagc

4981 gtaattgcct ttgtgggtat tagcgtgctt gttccccaga tcgccagcaa aagcgcgctt

5041 ggcctggatg cgcttaaggg cgtgctgaaa tcgtctaccc tgtggaaaat ttactcagcc

5101 accctgctgg ccgttacggc ccactttgcc gcctttacgt acattgaacc ctggcttcac

5161 acgcagagtt tgctgtccac cgcctttatt cccgccgtgc tttttgttta cggcatcgcg

5221 ggtctggccg gcaatttcct gaccggcgtg atgattgata agtatctcaa gctgacggtt

5281 tcgctgtctg tactgctgat ctgtgcagtg ctgctgttcc tgggcctgtc aggatcctcg

5341 ctctctgctg cgctgatatt caccagcatg attatctggg gcgtcgctgt atcaggaata

5401 tttgtcggct tccagacgtg ggtattacgt atggcagagg ataaagcctt cccggcctcc

5461 gcaatctacg tttcgttttt caataccgcc attggtatcg gcgcgtcggt tggtgcctgg

5521 atggtttcat cattttcaat gccgctcctg tatatcgtcg ccggcacggc catcggcctg

5581 tccgttctgc ttgtcgcggt tattcctgca accttgaccg ccaaacaatc ccgtatggag

5641 aaatcttatg agtcaaatta atgaccgcac gcgctatggc agagagatta tggaccgtct

5701 tgaagcgggg ctcgcggata aagtcacccg ccgcctgagc gaactggacc cgggcctgcc

5761 cgccctgata accgactatg cgttcgggga tgtggtgggg cgtccgggac tggatctcaa

5821 aacgcgcgaa atgctgaccg tcgcctcgct tgtgacgctg ggtaatgcta tgccacagct

5881 ggaactgcac atgagaggcg cgctcaacac cggcgtgacg ccggaagagc tgcttgaaat

5941 tgtgatacag atggcggtgt atgccggcgt tcccgcctgt atgaatggtc ttaccgccta

6001 ccgcgcggca atggcggcga cgggccatac gttgccggga ctgaaaggga gtgacgcatg

6061 agcgaagttg tcattattgc agcccgccgc acggcgacgg gcgcatttca gggcgcgctt

6121 gcggagcatt ccgccgctga cctgggaagc cgggtcattc aggcgctcct caaagaatct

6181 ggcgtagagg ccagtgatat ctctcaggtc attatgggtc aggttcttac ggcggggtgt

6241 ggccagaacc cggcccggca gtcggccctg aatgccggat tacccgttga aacacaatgt

6301 cttacgatca ataaagtgtg cggttccggg cttaaggcag tccatcttgg catgcaggcc

6361 ctgcagacgg gtgaggctga gtttgtgatc gccgggggtc aggagagtat gtccaacgcg

6421 ccgcatatcg ccctgacgtc gcgtagcgga acgcggctgg gcgatatcac tctcaaagat

6481 agcctcgtat ctgacgggct ctgggatgcc ttcaacgatt atcatatggg tatcaccgca

6541 gaaaacgttg cgacggagtt tggtatcagc cgcgaaatgc aggacgaata tgcccttgtc

6601 tctcaccaca atgcgcttga agcgcaggcg cgcggcattt ttgagcgcga aatagttccg

6661 gttgaatggc tgacgcgaaa aggcgaaacg atctgcgtgg agagggacga agggccgcgt

6721 gcaaccagta ttgataaatt gacgaagctg aggccagtct tccgaaaaga gggaacggtg

6781 acggcgggaa atgcttcatc gctgaatgac ggtgccgctg cggtgctgct ttgtacgcgt

6841 gatactgccg aagcgcgtgg cttgccggtt ctggcgtcgc tgggcgtgtt taccaattcc

6901 ggtatccagc cggcattaat gggcgcagcc ccgatccagg ccattgccga ctgcctttcc

6961 cgctcgggat ggacgcctga ggatgtcgat catcttgaat ccaacgaagc gtttgccgcc

7021 caggcgctgg cggtgattca gcaggcgggg atttccccgg atcgtatcaa tccttacggc

7081 ggggccatcg cgcttgggca tgcgataggc gcatccggct gccggatttt ggtgacgctg

7141 gttcatgccc tggtccgtaa cgacggcaag cgtggcgtcg ccgcgctgtg cgtaggcggt

7201 ggggaaggcg tcgcgttgag cgtttatcgc taacggcacg gcgtatcaga tataaaaaaa

7261 ccgggaaaac ccggtttttt tattttcatg atgagggatc aggcgttcac gcctttcata

7321 ccctcggcag aataacgatc gcctttaatc tctatccggc gatgcaggtt gttcaatgat

7381 tcaatatcgc ttttctcaag cacaatgtcg gcagcgcgcg cgttctcggc cagatagccg

7441 gcgtgcttag tccccggaat aggaaccagc ctctcgtatt gtgctaacag ccaggcaagg

7501 gcaatctgac ctgcggtaca gccgtatttc gcggccagcg ggtggatgac atcgagcagc

7561 tggcggttat gatcgaggct ggactgcgcg aaacgttcgt tatttttccg gaaatcacct

7621 tctgcaaatt cgctattgtt caggtatttt cccgtcagga agcctctgcc aagaggcgag

7681 tagggcacca gaccaatgcc cagctctttt acggtcggca gaatgctttc ttcgatatcg

7741 cgcgtccaca gagagtattc cgtttgcagc gcggtgaccg gatgtaccgc atgggcccgc

7801 tgcagcgttg cagccgacac ttcgcaaagg ccgatgtggt tgatcttgcc ctctttaaca

7861 agggtgcgca gacaatccat actctcttcg accggggtga cgttactcag tctgtgaaga

7921 taaaagaggt cgattcgctc cacgccaagc cgcttgaggg actcgttaca gcagcggatg

7981 atatagtcag gcgtattgtt gatggtgcgg gcataagact cgtcaggcga gcgatcgatg

8041 ccgcacttcg tggcgatttt gaactgctcg cgagtgcttt tatccagccc ggcaagaaaa

8101 tgaccgatca gtctttcatt atgaccacgg ccatataaat ttgcggtatc aataaacgtc

8161 acgttcagat cgatgaggct atgcaatacc tgcagcgagg cgttgtcatc agtctggcca

8221 taaaattcac tcagacccat ggcaccatag ccgacggcac tgacggtaag attttgagat

8281 aaagtacgtg ttttcatagt ttctcctttt cagacgctat gattgtttca cctcaaatgt

8341 ggatactgaa ttttcatttt cgttatgctg aaaaggtatc agtctccgcc gtgctgcttc

8401 ccggatagtt aaaaaagaca aaagttgtca aatcgttaaa tccgtcacac ttttgatgat

8461 aaactgcgcg acttttccgc acgtttttat cttcaggtga cgccatgaca gaacatatcc

8521 agcccacgac cagaccgcag atcaacgagg ttttacgccc caactggtcg gcggttttct

8581 ccgtggcgtt ctgcgtcgcc tgcctgatta ccgttgagtt tttgccggtg agcctgctca

8641 cgccgatggc gcaggatctg ggcatttccg aaggcgtggc ggggcagtcc gttaccgtca

8701 ccgccttcgt ggcgatgttc gccagcctgt ttatcaccca ggtgattggc accatcgacc

8761 gccgcaaggt ggtcatcctg ttcagcgtgc tgctgacgct ctcctgcctg ctggtttcct

8821 tcgcggaaag cttcaccctg ctgctgctcg gtcgcgcctg tctggggctg gggctcggcg

8881 gcttctgggc gatgtcggcc tcgctgacca tgcgcctggt gcccgcgcgt acggtgccaa

8941 aggcgctgtc cgttatcttc ggtgcggtct ctatcgcgct ggtgattgcc gcaccgctcg

9001 gcagcttcct cggtgggatt atcggctggc gtaacgtctt caacgccgcg gcggtgatgg

9061 gcctgctctg catcatttgg gtgtggaaag cgctgccgtc cctgccgggc gaagcggcgc

9121 accataagca gaacatgttc gcgctgctga agcgccccgg cgtcatggcg ggaatgaccg

9181 ccatcttcat ggcctttgcc gggcagttcg ccttctttac ctacatccgc ccggtgttta

9241 tgaccatggc gggctttgac gtggacggcc tgacgctggt gctgctgagc ttcggtatcg

9301 ccagctttgt cggcacctcg ctgtcgtccc agttcctcaa acgctccctg aaggtagcgc

9361 tggcgggcgc gccgctggtg ctggcaatga gcgcggcggt gctgacgctg tggggcagcg

9421 acaggtgggt ggcgtcggcg attgcgattg tttggggctt tgcctttgcg ctggtgccgg

9481 tgggctggtc gac

//

도 1은 엔테로박터 속(Enterobacter sp.) YNB54에서 분리한 파이토프소라(Phytophthora)속 균의 성장을 저해하는 9.5kb 크기의 유전자 군인 EnAP95가 대장균에서 발현될 때 Phytophthora capsici의 성장이 억제되는 것을 나타내는 사진이고,

도 2는 EnAP95 유전자 군의 염기서열에 따른 단백질 합성 ORF의 배치와 크기를 모식화 한 그림이며,

도 3은 EnAP95 유전자 군을 구성하는 추정 ORF들을 특정부위에 점 변이시켜 그 기능이 변화됨을 보임으로써 이들이 필수적이고 실제적 ORF임을 제시하는 그림이다.

<110> REPUBLIC OF KOREA(MANAGEMENT: RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION) <120> An anti-Phytophthora gene cluster specifically inhibiting the growth of Phytophthora spp., and the transformation strain containing thereof and the prevention method of Phytophthora using thereof <160> 1 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 9493 <212> DNA <213> Enterobacter sp. YNB54 <400> 1 gtcgacggca gcgaagagaa cctgcacacc tggcaccgca tgctgcgcaa agcccgcctt 60 gccgcaccca ttaccgatgc gcaaatccgc ctcgcgcttg gctttatgcg cgagatggag 120 cccgacccgc aggagcttaa cgccttccag ctacgctata accagctctt cctgccggaa 180 gagggcgtgt tttatctgca ttaaggcatt ttcccgcaaa gcacattctg agcgttcaga 240 atctcttctc tattttcatt gaggcgggtg gcggcataga tatctatgtt taaccttttt 300 gcctccgcgt ccgtgagttc acggtagcaa agtccttcct gattaaaggt gcatttcgac 360 tgtggcagca gggcaaatcc tttccctctt gcgatgcggc taagcatcac gagggaatca 420 tccggctctt taatacgctt cagcggcgtt ttcagcgtat caaagtagct ttcgcatttg 480 tcatagaatg acgggttagc gcttcgcgaa aaccaaaaaa tcgggagatc gctaatgtct 540 tccagcgaga ctttctcttt caggctggca ggatgcaaag agggcattgc gatcagcaac 600 ggttcctggc agacccagcg gtattgaacg atgtcttcat gacccgttcc tttttccccg 660 gtcagcacca gatccagcat atttttagac aagctttgca gcagctgggc tgacgtcagg 720 tccggcgttt cgacatcatc tcccgcgttc attttttgaa gctgggtatt cacgggttca 780 atatattcaa aattaagcgt tcgcgtcagc ccgatgcgca ggcccgtttc agatgaaagt 840 ggatcttctt ttaaattgct gatgtctttt aatatttttt cagcctgaac aaccagcgca 900 cgacctgcgt cagtaaggct aacgtcatgc gtgctgcggc tgaacagctg acgcttcaga 960 accgcttcaa ggcattttat ctgacgcgtc aacggcggtt gagtcatgcg caggcgttcg 1020 gcagccttac ggaagttgag ttcatgtgca acagcgagaa agcattgtaa ttgtttgatg 1080 ctgggcaggt tattgctgat taaatgttct gctgtggcca tacgtgggtc ctgaatgcga 1140 aaaggtattt cgtctttttt ccatttcgat attacacgct aaatgcaggc agtaaaaccc 1200 gttttaacag taatacaaaa aatatattac aaatttaaca attccaattg tttcctgtat 1260 tgataaattt ctacccgaat cctcattcaa tcaatattcg gagtaattat gtcgtctaaa 1320 tatgtactgg tatcacgctt cccgttaaaa aatacgttta ccgagaaaga ttttacttcc 1380 ttaaaaagca atgaaaacgt tcgctactat tcctgtgaag aaaacggtgt taatgaactg 1440 ctggaactgc gcgctttcaa tgatattaaa gaaattgcat gggctgagag tgaaatggaa 1500 tccatgttcc atcgtttctc tgctgttctt tctgccgata ttcgtcgcga actgcttaag 1560 tttgttgaat ctccaatcga taataaaaag agcttacccg aatcaaatta tattcagctt 1620 cgtcacgttg aggtgcccgc gcataactat cagcagtatc gtcagtggcg cgatgaaacc 1680 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Claims

엔테로박터 속(Enterobacter sp.) YNB54에서 분리한 것으로 서열번호 1의 염기서열을 갖는 유전자군 EnAP95(KACC 95090P).
제 1항에 있어서, 유전자군 EnAP95은 엔테로박터 속(Enterobacter sp.)YNB54의 염색체 DNA 단편들을 pBR322에 무작위로 삽입하여 제작한 유전자은행으로부터 작물역병균(Phytophthora capsici)을 특이적으로 저해하는 대장균 클론을 선발, 분석하여 항 Phytophthora 유전자군이 삽입된 20kb의 단편을 분리하고, 대장균 클론 단편 20kb를 대상으로 bateriophage Mu (GeneJumper, Invitrogen, USA)가 삽입된 돌연변이주 은행을 제작하여 다양한 Phytophthora 종에 대한 길항력의 상실, 약화, 강화된 변이주를 선발하여 삽입위치를 분석하여 항 Phytophthora활성과 관련된 필수유전자의 영역을 확인한 Sal I 단편임을 특징으로 하는 유전자 군 EnAP95.
엔테로박터 속(Enterobacter sp.) YNB54에서 분리한 것으로 서열번호 1의 염기서열을 갖는 유전자군 EnAP95(KACC 95090P)를 pBR322에 클로닝한 pAFYS95를 대장균에 형질전환시킨 CDH95균주를 배양하여 배양액을 그대로 이용하거나 파이토프소라(Phytophthora)속 균을 특이적으로 저해하는 물질을 분리하여 작물 역병균에 적 용하는 것을 특징으로 하는 작물의 역병방제방법.