KR101006321B1

KR101006321B1 - 줄무늬감탕벌 독액으로부터 추출한 항생제 활성을 갖는 펩타이드와 이를 코딩하는 유전자

Info

Publication number: KR101006321B1
Application number: KR1020080113265A
Authority: KR
Inventors: 이시혁; 백지형; 이승환
Original assignee: 서울대학교산학협력단
Priority date: 2008-11-14
Filing date: 2008-11-14
Publication date: 2011-01-06
Also published as: KR20100054361A

Abstract

본 발명은 곤충으로부터 분리된 항생제 활성을 갖는 펩타이드와 이를 코딩하는 유전자에 관한 것으로, 특히 국내 단독생활형 사냥벌인 줄무늬감탕벌의 독액으로부터 추출한 항생제 활성을 갖는 펩타이드와 이를 코딩하는 유전자에 관한 것이다. 본 발명에서는 줄무늬감탕벌의 독액으로부터 세균과 곰팡이는 물론 항생제 내성균까지 효과적으로 억제하는 항생제 활성을 갖는 펩타이드가 분리되고, 그 효능이 확인된다.

펩타이드, 항생제, 곤충, 벌, 독액, 줄무늬감탕벌, Orancistrocerus drewseni

Description

줄무늬감탕벌 독액으로부터 추출한 항생제 활성을 갖는 펩타이드와 이를 코딩하는 유전자 {An antimicrobial peptide and its gene sequence from venom of Orancistrocerus drewseni Saussure}

본 발명은 펩타이드성 항생물질에 관한 것으로, 특히 곤충으로부터 분리된 항생제 활성을 갖는 펩타이드와 이를 코딩하는 유전자에 관한 것이다.

최근 곤충 유래 유용 유전자들이 산업적으로 실용화되어 국내외 관련분야에서 많은 주목을 받으면서, 곤충을 이용한 산업의 현황 및 가능성에 대해서도 기대가 고조되고 있다. 특히 1차산업적인 측면에서 곤충을 단순히 생산, 이용하는 것에서 나아가 전통지식과 첨단생명공학기술을 접목한 차원의 곤충산업은 차세대 미래성장산업의 새로운 분야로 무한한 가능성을 제시하고 있다. 또한 유전자원의 확보 및 생물소재 개발이라는 산업적, 경제적 측면에서 종 다양성이 매우 풍부한 곤충을 유용생물자원으로 인식하고 활용하고자 선진 각국을 중심으로 곤충자원 확보경쟁이 국가 전략적 차원에서 날로 치열해지고 있으며, 이들의 가치평가 및 이용개발 연구가 매우 활발히 수행되고 있다.

곤충을 포함한 절지동물(Arthropod)의 독액(venom)은 생리활성물질, 특히 신경독성물질의 풍부한 보고로서 지난 수년간 주목받아왔다. 전갈, 거미, 벌의 독액으로부터 분리된 수많은 독소들은 이온 채널(ion channel)의 작용기작과 수용체(receptor) 기능 규명 등의 신경기능연구의 수단이 되었고, 신경병리학적 장애의 치료를 위한 연구에도 이용되어왔다(Biochem. Biophys. Res. Commun. 250: 612-616, 1998). 국내에 서식하는 독액보유 곤충 중에서 포식성벌인 호리병벌과는 나비목 유충 등을 먹이로 하는 곤충으로, 독액을 이용해 먹이를 사냥하여 차세대를 생산하는 단독 생활형 사냥벌(solitary hunting wasp)의 일종이다. 이들은 먹이를 사냥한 후 바로 죽이지 않고 마취시켜 벌의 유충이 알에서 깨어나 먹이를 소비할 때까지 오랫동안 신선도를 유지하도록 보관한다. 따라서 단독 생활형 사냥벌의 독액과 분비물에는 기존 연구를 통해 밝혀진 신경독성분과 더불어, 먹이가 신선하게 보존될 수 있도록 하는 항균성 펩타이드 등 많은 생리활성물질이 포함되어 있을 것으로 생각된다. 그러나 이러한 단독 사냥벌류의 특이한 먹이사냥 및 보존 행동에도 불구하고 이들의 독액 성분에 대한 연구와 유용 유전자의 활용은 미비한 실정이다.

항생제는 살아있는 유기물에서 추출한 것으로 다른 미생물의 생장을 억제하거나 죽이는 물질을 말한다. 1928년 플레밍(A. Fleming)이 페니실린을 처음 발견하고, 1943년 스트렙토마이신이 발견된 후 약 5천여 종 이상의 항생물질이 발견됐고, 50여 종의 항생제가 400여 종의 제제로 개발되어 임상에서 사용되고 있다. 기존 항생제는 주로 다음과 같은 기작으로 미생물의 생장을 억제하거나 사멸시킨다. 1) 세포벽의 합성을 차단(Cycloserine, Vancomycin, Bacitracin, Penicillin, Cephalosporin, Monobactam, Carbapenem , Ampicillin), 2) 세포막 구조를 파괴(Polymyxin), 3) 대사작용 억제(Trimethroprim, Sulfonamide), 4) DNA 또는 RNA 합성 억제(Actinomycin, Nalidixic acid, Ciprofloxacin, Novobiocin, Rifampin, Streptovaricin), 5) 단백질 합성 억제(Erythromycin, Chloramphenicol, Clindamycin, Lincomycin, Tetracycline, Streptinomycin, Streptomycin, Gentamicin, Kanamycin, Amikacin, Nitrofuran, Mupirocin, Puromycin). 그러나 1960년대부터 항생제 내성균이 출현하기 시작하여, 1997년에는 ‘항생제의 마지막 보루’라고 불리던 반코마이신으로도 억제할 수 없는 내성균인, 일명 ‘슈퍼박테리아’가 출현하였다. 이와 같은 기존 항생제에 내성이 생긴 미생물이 전 세계적으로 확산되고 있을 뿐만 아니라, 한 종류의 항생제에 내성이 생긴 미생물이 유사한 작용기작을 가진 다른 항생제에 교차저항성을 보이기도 한다(한국특허정보원, 2004). 특히 한국의 항생제 오남용에 따른 내성균 증가 속도는 세계적으로 유례가 없을 만큼 빠르다(한국특허정보원, 2004). 또한, 박테리아뿐만 아니라 병원성 진균에서도 항생제 내성이 확산되고 있어, 안전하고 효과적인 새로운 항진균제의 개발 역시 절실히 요구되고 있다(BioWave, Vol. 6, No. 16, 2004). 이에, 전 세계의 연구자들은 지난 10여 년간 펩타이드 형태의 항생제 개발에 많은 관심을 기울여왔다.

항균 펩타이드가 병원균에 작용하는 기작은 기존 항생제들의 작용기전과 매우 다르다. 이들은 주로 미생물의 세포표면에 결합한 후, 세포막에 pore를 형성함으로써 세포막의 정상적 투과특성을 교란하여 병원체를 빠른 속도로 죽게 한다(Pharmacol. Rev. 55: 27-55, 2003). 또한 이들은 병원체의 내독성인자로 인해 초래되는 패혈증을 방지할 수 있다고 알려져 있으며(Biochim. Biophys. Acta. 1562: 32-36, 2002), 고등동물체내에서 후천성면역 반응을 매개하는 신호분자로서도 작용한다고 보고되었다(J. Leukoc. Biol. 60: 415-422, 1996). 이러한 특성으로 인해 항균 펩타이드는 항생제 내성균을 제어할 수 있는 신규 항생제나 새로운 생체면역활성인자로 이용할 수 있을 것으로 주목받고 있다. 이에 그 동안 기존 항생제를 대체할 수 있는 항생물질을 찾기 위해 다양한 생물체에서 펩타이드성 항생물질이 분리되어 시험되었다. 그러나 실제 제품화되어 사용되고 있는 사례는 극히 드문데, 이는 펩타이드 항생제가 생체내에 주입되었을 때의 안정성이나 인체에 대한 안전성의 문제가 제기되었기 때문이다. 이러한 난점을 해결하기 위해서는 항균 또는 항진균 활성을 갖는 펩타이드들의 아미노산 서열과 구조를 비교 분석하여 인체에는 위해를 가하지 않으면서 효율적으로 미생물을 사멸시킬 수 있는 구조를 알아내야 한다. 이를 위해서는 지금까지 보고된 것 이상의 다양한 항생제 활성 펩타이드의 아미노산 서열과 구조에 대한 정보가 필요한 실정이다.

최근 다양한 생물체에서 분리된 항균성 및 항진균성 펩타이드가 기존의 항생제들을 대체할 수 있는 신규 기능성 물질로 주목받으면서 곤충 독액에서 분리된 항생제 활성을 가진 펩타이드에 대한 연구도 활발히 진행되고 있다. 이에, 본 발명자들은 국내 단독 생활형 사냥벌의 독액으로부터 항생제 활성을 가진 펩타이드를 분리하여 신규 항생제 개발을 위한 기초 물질로서의 이용 가능성을 타진하였다.

본 발명은 일반 세균 및 곰팡이는 물론 항생제에 내성을 가져 기존의 항생제에는 반응하지 않는 항생제 내성균까지 제어할 수 있는 기능성 물질을 국내 단독 생활형 사냥벌의 독액으로부터 분리하고 그 특성을 규명함으로써 새로운 항생제 개발을 위한 기초물질을 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명에서는 국내 단독생활형 사냥벌인 줄무늬감탕벌의 독액으로부터 세균과 곰팡이는 물론 항생제 내성균까지 효과적으로 억제하는, 항생제 활성을 갖는 펩타이드가 분리되고 그 효능이 확인된다. 이러한 시험 결과를 토대로 본 발명에서는, 서열목록의 서열번호 1에 기재된 펩타이드 및 이를 코딩하는 유전자가 제공된다. 또한 본 발명에서는 서열번호 1에 기재된 프리펩타이드(prepeptide)에서 post-traslational modification에 의해 생산된 성숙 펩타이드(mature peptide) 및 이를 코딩하는 유전자가 제공된다. 이 성숙 펩타이드는 서열번호 2에 기재된 아미노산 서열에서 C-말단 류신 잔기가 아미드화된 것으로, “GRILSFIKGLAEHL-NH2”로 표시 된다.

본 발명의 항생제 활성을 갖는 펩타이드는 14개의 아미노산으로 이루어진 독액 성분으로, C-말단(terminal)의 류신(Leucine) 잔기가 아미드화(amidation) 되어 있으며, 2차 구조는 양극성을 가진 α-헬릭스의 형태를 가진다. 본 발명에서 분리한 줄무늬감탕벌의 독액 펩타이드는 기보고된 펩타이드성 항생물질들과 유사한 구조를 가졌지만, 아미노산의 서열은 기존의 펩타이드들과 상이하다. 본 펩타이드는 그람양성 및 그람음성의 박테리아에 대한 항박테리아 활성과 곰팡이에 대한 항진균활성을 모두 보이며, 기존의 비펩타이드성 항생제에 내성을 가진 박테리아에도 강한 항생제 활성을 보인다.

또, 실시예를 통해 확인되는 바와 같이, 본 발명에서 밝힌 아미노산 서열에 따라 인공합성한 펩타이드가 항생제 활성을 나타내므로, 벌 독액에서 직접 추출·분리하지 않고도 대량 인공합성을 통해 본 발명의 항생제 활성을 갖는 펩타이드를 생산할 수 있다. 즉, 본 발명의 항생제 활성을 갖는 펩타이드는 재조합 바이러스나 형질도입 박테리아 또는 펩타이드 인공합성 등의 다양한 방법으로 생산될 수 있으므로, 생산방법에 제한을 받지 않는다.

본 발명에서 제시하고 있는 펩타이드는 실시예를 통해 확인되는 바와 같이 기존의 항생제와는 미생물에 대한 작용기작이 상이하여, 시험에 사용한 세균과 곰팡이는 물론, 항생제 내성균까지 효과적으로 억제하였다. 특히, 본 펩타이드는 줄무늬감탕벌의 독액으로부터 분리한 것으로, 이는 줄무늬감탕벌 독액 성분의 효능을 세계 최초로 확인한 것이기도 하다. 줄무늬감탕벌은 국내 서식 감탕벌 중 우점종이므로, 국내 서식 생물종의 유전자원을 확보하여 생명과학과 생물정보 분야의 국제경쟁력을 제고하는 데에도 본 발명이 기여하는 바가 크다고 할 수 있다.

이하 구체적인 실시예를 통해 본 발명을 보다 상세히 설명한다. 그러나 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

벌 독액 추출

국내 충청북도 태안 지역 등에서 7-9월에 걸쳐 줄무늬감탕벌을 채집하였다. 벌은 암컷만이 독액을 보유하고 있으므로 암컷을 선별하여 독액을 추출하였다. 벌을 이산화탄소로 마취시켜 표본 제작용 핀으로 스티로폼 위에 고정한 후, 해부용 핀셋으로 복부 말단의 독침을 당겨 독샘과 독선이 내장과 함께 끌려 나오도록 하였다(도 1). 이 중, 독선이 연결되어 있는 독샘을 핀셋으로 떼어내어 DNA-binding resin이 충진되지 않은 Wizard Minicolumn(Promega, Madison, WI)에 모은 후, 4℃, 1,000× g에서 10분간 원심분리하여 독샘조직은 컬럼 상단에 걸러지고 독액만 컬럼 아래의 1.5 ㎖ 튜브에 모이도록 하였다.

벌 독액 아미노산 및 염기서열 분석

여러 펩타이드가 혼합되어 있는 전체 독액을 Hybrid Quadrupole-TOF LC/MS/MS Mass Spectrometer(AB Sciex Instruments, CA, USA) 기기에 주입하여 다양한 펩타이드의 아미노산 서열을 분석하였고, 이 중 아미노산 14개로 이루어진 펩타이드의 서열을 얻었다(도 2). 분석된 펩타이드의 서열을 기반으로 Rapid Amplification of 5' cDNA Ends(5'-RACE)를 위한 degenerate primer를 디자인하여 5' 말단까지의 서열을 분석하였다. 5'-RACE를 통하여 얻은 cDNA 부분염기서열을 기반으로 gene-specific primer를 디자인하여 3'-RACE를 수행하였다. 5'- 과 3'-RACE를 통해 얻은 각각의 부분염기서열을 기반으로 전체 ORF(open reading frame)을 증폭할 수 있는 gene-specific primer를 디자인하여 독액 펩타이드의 전장염기서열을 분석하였다. 분석된 서열을 도 3 및 서열목록의 서열번호 1로 기재하였다. 각 PCR에 사용된 프라이머의 명칭과 염기서열은 표 1에 정리하였다.

독액 펩타이드의 구조 분석

본 발명에서 분리한 독액 펩타이드의 염기서열을 BLAST 분석한 결과, 말벌의 일종인 베스파 바살리스(Vespa basalis)로부터 분리된 premastoparan B (Insect. Mol. Biol. 16: 231-237, 2007)의 유전자구조와 유사성을 가졌다(도 4). V. basalis의 mastoparan을 포함한 생체내의 많은 펩타이드성 물질(호르몬, 신경전달물질, 독액 펩타이드 등)은 프리펩타이드(prepeptide)가 생산된 후, 생체 내에서의 가공과정을 거쳐 성숙 펩타이드(mature peptide)의 형태를 갖추는 것으로 알려져 있다. V. basalis mastoparan의 프리펩타이드는 signal peptide, prosequence, mature peptide와 C-말단 글리신(Glycine) 잔기로 구성되어 있으며, post-translational modification 과정에서 signal peptide, prosequence가 분리되고 C-말단 글리신이 떨어져 나가면서 류신(Leucine) 잔기가 아미드화(amidation)된다(Insect. Mol. Biol. 16: 231-237, 2007). 즉, 본 발명에서 분리한 독액 펩타이드의 최종 형태는 C-말단 류신이 아미드화 되어 있는 14개의 아미노산으로 이루어진 펩타이드이다. 펩타이드의 구조를 예측해주는 소프트웨어 Protean(Lasergene, Madison, WI)로 분석한 결과, 이 펩타이드는 소수성과 친수성 아미노산이 각기 반대편으로 정렬되어 amphipathic α-helix 구조를 이루고 있었다(도 5).

독액 펩타이드의 항균활성 분석

1. 펩타이드 인공합성

줄무늬감탕벌 독액에서 분리한 펩타이드를 OdVP1( O rancistrocerus d rewseni venom peptide 1)이라고 명명하였으며, 본 펩타이드의 활성 시험을 위해 (주)펩트론에 의뢰하여 C-말단이 아미드화 된 펩타이드(C-terminal amidated peptide)를 95% 이상의 순도로 인공합성하였다.

2. 실험 대상 미생물

OdVP1의 미생물에 대한 항생제 활성 검사를 위해 그람음성 세균인Escherichia coli(ATCC 11775), 그람양성 세균인 Staphylococcus aureus(ATCC 12600), 페니실린 내성인 S. aureus(ATCC 13301), 메티실린(Methicillin) 내성인 S. aureus(ATCC 33591), 이스트형 곰팡이인 Candida albicans(ATCC 10231)를 한국미생물보존센터(KCCM)에서 분양받았다. 앰피실린(Amphicillin) 내성, 가나마이신(kanamycin) 내성, 클로람페니콜(chloramphenicol) 내성 E. coli는 실험실에서 플라스미드를 이용한 형질도입법으로 생산하여 사용하였다. 균사형 곰팡이인 Botrytis cinerea는 국립산림과학원 남부산림연구소에서 분양받아 실험실에서 계대중인 것을 사용하였다.

3. 항생제 활성 검사

방법

LB(LURIA-BERTANI) 아가 플레이트(agar plate)에서 배양한 시험대상 세균의 콜로니 하나를 400㎕의 LB 브로스(broth)에 현탁한 후, 37℃의 shaking incubator에서 2시간동안 배양하여 OD₆₀₀ 값이 약 0.1이 되도록 하였다. 아가(agar)가 0.7% 함유된 LB 브로스 50 ㎖를 오토클레이브(autoclave)하고 약 40℃ 정도로 식힌 후, 위의 미생물 배양액 500㎕를 혼합하고, 이 중 5㎖를 LB 아가 플레이트 위에 부어 탑 아가(Top agar)를 만들었다. 곰팡이 대상 실험에서는 PDA(Potato-dextrose agar) 플레이트와 브로스(PDB)를 사용하여 탑 아가를 제작하였다. 탑 아가가 완전히 굳은 후, OdVP1과 대조군 항생제 (앰피실린, 가나마이신, 클로람페니콜, 페니실린, 옥사실린) 20㎕(50㎍)를 각 시험의 필요에 따라 선택하여 탑 아가 위에 놓았다. 항생제들이 배지에 완전히 흡수된 후, 세균은 37℃, 곰팡이는 25℃ 인큐베이터에서 16시간동안 배양하였다.

세균과 곰팡이에 대한 항생제 활성

상기 방법으로 E. coli, S. aureus, C. albicans 배지를 제작하고 20㎕의 OdVP1(50㎍)과 멸균수를 배지에 흡수시킨 후 세균은 37℃, 곰팡이는 25℃에서 배양하였다. 16시간 배양 후, 멸균수를 처리한 부분의 세균과 곰팡이는 정상적으로 자란 반면(도 6의 A, C, E), OdVP1을 처리한 부분은 세균과 곰팡이가 자라지 못하였다(도 6의 B, D, F). 딸기잿빛곰팡이 B. cinerea는 탑 아가를 제작하지 않고 균사를 일반 PDA 배지에서 배양한 후 OdVP1과 멸균수를 곰팡이 위에 얹고 25℃ 인큐베이터에서 배양하였다. 1시간 배양 후, 멸균수는 잿빛곰팡이에 흡수되지 않고 물방울 형태를 유지하고 있는 반면(도 6의 G), OdVP1을 처리한 부분은 균사가 와해되어 균사 아래의 배지가 드러나 있어 빠른 시간 내에 항진균 효과를 확인할 수 있었다(도 6의 H). 본 시험을 통해 본 발명에서 분리한 줄무늬감탕벌의 독액 펩타이드가 그람양성과 그람음성 세균 및 곰팡이를 저해하는 항균 및 항진균 활성을 가지고 있음을 확인하였다.

항생제 내성 세균에 대한 항균활성

본 발명에서 분리한 펩타이드가 기존의 항생제에 내성을 가진 세균에도 항균활성을 가지는지 확인하기 위해, 앰피실린 내성, 가나마이신 내성, 클로람페니콜 내성 E. coli와, 페니실린 내성, 메티실린 내성 S. aureus를 대상으로 항균활성을 검사하였다. S. aureus의 메티실린 내성 여부 판별 시험은 Minimum Inhibitory Concentration (MIC) Analysis and Susceptibility Testing of MRSA (Methods in Molecular Biology, 391: 29-49, 2007)에서 추천하는 시험 방식을 참고하여 옥사실린(oxacillin)을 이용하여 시험하였다. E. coli와 S. aureus 배양 배지는 위에 기술한 방식대로 탑 아가를 제작하여 준비하였다. E. coli 배지에는 20㎕의 멸균수, OdVP1, 앰피실린, 가나마이신, 클로람페니콜(각 50㎍)을, S. aureus 배지에는 20㎕의 멸균수, OdVP1, 앰피실린, 페니실린, 옥사실린(각 50㎍)을 떨어뜨려 배지에 흡수시켰다. 각 항생제가 배지에 흡수된 후 37℃ 인큐베이터에서 16시간동안 배양하였다. OdVP1은 앰피실린 내성, 가나마이신 내성, 클로람페니콜 내성 E. coli와 페니실린 내성, 메티실린 내 S. aureus 모두에 항균활성을 보였다(도 7, 도 8). 즉, 본 발명에서 분리한 펩타이드는 기존 항생제와는 그 작용기작이 달라, 항생제 내성균과 곰팡이 모두에 작용하여 이들의 증식을 억제하거나 사멸시킬 수 있음을 확인할 수 있었다.

최소저해농도(minimal inhibitory concentration, MIC) 결정

본 발명에서 분리한 펩타이드가 세균과 곰팡이의 생장을 저해하기 위한 최소 농도(MIC)를 확인하였다. E. coli와 S. aureus는 100㎕의 LB 브로스에, C. albicans는 100㎕의 PDB에 균을 현탁하여 OD₆₀₀ 값이 0.001이 되도록 한 후, 배양액 내 OdVP1의 최종농도가 0, 10, 25, 50, 100, 200 ㎍/㎖이 되도록 혼합하여 세균은 37℃, 곰팡이는 25℃로 설정된 shaking incubator에서 배양하였다. 세균은 4시간, 곰팡이는 15시간 배양 후, 각 배양액의 OD₆₀₀ 값을 측정하여 미생물의 증식을 억제하는 최소 펩타이드 농도를 결정하였다. 결과는 다음 표 2와 같다. E. coli는 펩타이드 농도 50㎍/㎖ 초과, 100㎍/㎖ 미만, S. aureus는 100㎍/㎖ 초과, 200㎍/㎖ 미만, C. albicans는 100㎍/㎖ 미만으로 MIC가 결정되었다.

본 발명에서 분리한 줄무늬감탕벌의 독액 펩타이드는 기존 항생제에 내성을 가진 세균과 곰팡이에도 강력한 항균 및 항진균 활성을 보여, 신규 항생제 개발의 기초물질로 이용할 수 있다. 본 발명에서 분리한 줄무늬감탕벌의 독액 펩타이드는 기보고된 펩타이드성 항생물질들과 유사한 2차 구조를 가졌지만, 아미노산의 서열은 기존의 펩타이드들과 상이하다. 따라서, 본 발명에서 제시한 펩타이드 서열과 기보고된 펩타이드성 항생물질의 아미노산 서열 2차 구조를 비교 분석함으로써 신규 항생물질을 개발하기 위한 정보로 이용할 수 있다.

도 1은 줄무늬감탕벌의 독액분비기관을 보여주는 사진으로, VG는 독선; VS는 독샘; Stg는 독침; AC는 소화기관이다.

도 2는 줄무늬감탕벌 독액 펩타이드 1종의 아미노산 서열 분석 예시이다.

도 3은 줄무늬감탕벌에서 분리된 독액 펩타이드의 전장 염기서열과 아미노산서열이며, 회색배경처리한 14개의 아미노산이 성숙 펩타이드(mature peptide)이다.

도 4는 줄무늬감탕벌의 독액 펩타이드와 Vespa basalis의 premastoparan B 아미노산 서열을 비교한 것이다. 프로펩타이드(Propeptide) 내에 나타나는 프롤린(Proline)과 알라닌(Alanine)의 반복적인 배열은 빨간글자로 표시하였다.

도 5는 Protean 프로그램을 이용한 줄무늬감탕벌 독액 펩타이드의 2차구조 예상도이다.

도 6은 OdVP1의 항생제 활성 검사 결과이다. A는 E. coli에 멸균수 처리, B는 E. coli에 OdVP1 처리, C는 S. aureus에 멸균수 처리, D는 S. aureus에 OdVP1 처리, E는 C. albicans에 멸균수 처리, F는 C. albicans에 OdVP1 처리, G는 B. cinerea에 멸균수 처리, H는 B. cinerea에 OdVP1 처리한 것이다.

도 7은 항생제 내성 E. coli에 대한 OdVP1의 항균활성시험 결과이다. A는 항생제 감수성, B는 앰피실린 내성, C는 가나마이신 내성, D는 클로람페니콜 내성 E. coli에 OdVP1 50㎍을 처리한 후 37℃에서 16시간 배양한 결과이다.

도 8은 항생제 내성 S. aureus에 대한 OdVP1의 항균활성시험 결과이다. A는 항생제 감수성, B는 페니실린 내성, C는 메티실린 내성 S. aureus에 OdVP1 50㎍을 처리한 후 37℃에서 16시간 배양한 결과이다.

<110> SNU R&DB FOUNDATION <120> An antimicrobial peptide and its gene sequence from venom of Orancistrocerus drewseni Saussure <160> 2 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 79 <212> PRT <213> Orancistrocerus drewseni <400> 1 Met Lys Gln Thr Ile Val Ile Val Leu Leu Ala Ala Val Ala Met Met 1 5 10 15 Ala Cys Leu Gln Met Val Ala Ala Glu Pro Leu Pro Glu Ala Ala Pro 20 25 30 Ala Pro Ser Pro Leu Ala Glu Ala Glu Ala Leu Ala Ser Pro Ile Ala 35 40 45 Glu Ala Leu Ala Asn Pro Glu Ala Leu Ala Ser Pro Glu Ala Gly Arg 50 55 60 Ile Leu Ser Phe Ile Lys Gly Leu Ala Glu His Leu Gly Lys Lys 65 70 75 <210> 2 <211> 14 <212> PRT <213> Orancistrocerus drewseni <400> 2 Gly Arg Ile Leu Ser Phe Ile Lys Gly Leu Ala Glu His Leu 1 5 10

Claims

서열번호 1에 기재된 펩타이드를 코딩하는 유전자
서열번호 2에 기재된 아미노산 서열에서 C-말단 류신 잔기가 아미드화되어 GRILSFIKGLAEHL-NH2로 표시되는 펩타이드를 코딩하는 유전자
서열번호 1에 기재된 아미노산 서열을 가진 펩타이드.
서열번호 2에 기재된 아미노산 서열에서 C-말단 류신 잔기가 아미드화되어 GRILSFIKGLAEHL-NH2로 표시되는 펩타이드.
제4항에 있어서, 상기 펩타이드는 양극성을 가진 α-헬릭스 형태의 구조를 갖는 것을 특징으로 하는 펩타이드.