KR100928527B1 - 포미톱시스 팔루스트리스 ｆｆｐｒｉ 0507 균주 유래의셀룰라아제 코딩 유전자 및 그의 발현방법 - Google Patents

포미톱시스 팔루스트리스 ｆｆｐｒｉ 0507 균주 유래의셀룰라아제 코딩 유전자 및 그의 발현방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 포미톱시스 팔루스트리스(Formitopsis palustris) FFPRI 0507 균주 유래의 셀룰라아제 코딩 유전자 및 그의 발현 방법에 관한 것으로, 셀룰로오스 분해 활성이 높은 셀룰라아제 코딩 유전자를 찾아내었으며, 이를 효모에서 발현시켜 저비용으로 셀룰로오스로부터 대체에너지인 바이오에탄올 생산을 위한 원천기술을 개발함으로써 막대한 경제적 이득을 얻을 수 있는 효과가 있다.
포미톱시스 팔루스트리스, 셀룰라아제, 셀룰라아제 코딩 유전자

Description

포미톱시스 팔루스트리스 ＦＦＰＲＩ 0507 균주 유래의 셀룰라아제 코딩 유전자 및 그의 발현방법{Cellulase-coding gene derived from Fomitopsis palustris FFPRI 0507 and expression method thereof}
본 발명은 포미톱시스 팔루스트리스 FFPRI 0507 균주 유래의 셀룰라아제 코딩 유전자 및 그의 발현 방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 포미톱시스 팔루스트리스 FFPRI 0507 균주 유래의 셀룰라아제 코딩 유전자를 분리하고 이를 발현벡터를 이용하여 피키아 파스토리스 GS115 균주에서 발현시키는 방법에 관한 것이다.
목질계 바이오매스중 가장 많은 양을 차지하는 셀룰로오스(cellulose)는 재생산성 자원이며 이로부터 에너지, 식량, 화학물질 등의 효율적인 생산을 위한 공급원이 되고 있다. 셀룰로오스는 β-1,4-글루코시드 결합으로 연결된 글루코스 단위의 선형 중합체로서 목재 바이오매스의 주성분이다. 셀룰로오스는 셀룰라아제(cellulase)에 의하여 최종적으로 글루코오스(glucose)로 분해되므로 이를 이용하여 에탄올을 생산함으로써 바이오에너지를 생산할 수 있다.
따라서 미국은 에너지부 (Department of Energy, DOE) 의 국립재생에너지연구실 (National Renewable Energy Laboratory, NREL)과 효소를 주로 생산하는 회사인 Genencor International 및 Novozymes 등이 이들은 주로 트리코데르마 리세이(Trichoderma reesei)에서 얻은 효소시스템을 이용하여 보다 효율적이며 저렴한 셀룰라아제를 생산하려는 연구를 진행하고 있고, 일본은 삼림종합연구소에서 목재로부터 당을 고 효율적으로 생산하기 위하여 초임계수를 이용한 고속당화법의 기술 개발을 위한 연구를 진행 중에 있다. 또한 쿄토대학의 와타나베(Watanabe) 등은 백색부후균을 이용하여 선택적으로 리그닌을 분해시킨 뒤 목재로부터 에탄올과 같은 유용물질로의 변환에 관한 연구를 진행 중에 있다. 국내에서도 목질계 바이오매스로부터 바이오에탄올을 생산하는 기술의 실용화를 위해 많은 연구를 수행 중이나 큰 성과를 거두지 못하고 있다.
균류에 의한 셀룰로오스 분해에는 일반적으로 3그룹의 가수분해 효소인 엔도글루카나아제(endoglucanase;EG), 엑소글루카나아제(exoglucanase;CBH) 및 β-글루코시다제(β-glucosidase;BGL)이 관여한다고 여겨지고 있다.
엔도글루카나아제는 셀룰로오스 내부 사슬의 β-1,4 결합을 무작위로 가수분해하고, 엑소글루카나아제는 엔도글루카나아제에 가수분해되어 생성된 셀룰로오스 중합체의 환원말단 및 비환원말단을 점진적으로 가수분해하여 2분자의 글루코오스가 결합한 셀로비오스를 생산한다. 셀로비오스는 엔도글루카나아제와 엑소글루카나아제에 있어서 강력한 억제제로 작용하므로, β-글루코시다제는 이러한 셀로비오스를 가수분해시켜 각각 엔도글루카나아제와 엑소글루카나아제의 강한 억제를 제거시 킨다. 일반적으로 엔도글루카나아제는 셀룰로오스 분자의 무결정 영역을 가수분해할 수 있고, 엑소글루카나아제는 결정 영역에 결합하여 셀룰로오스 사슬의 환원 및 비환원말단으로부터 가용성 환원당을 생산할 수 있다. 셀룰라아제는 세균과 곰팡이에서 얻어지며, 셀룰로오스 분해효소를 생산하는 곰팡이로는 아스퍼질러스(Aspergillus), 페니실리움(Penicillium), 푸사리움(Fusarium), 스포로트리쿰(Sporotricum) 등이 있으며, 세균으로는 셀로비브리오(Cellovibrio), 클로스트리듐(Clostridium), 아세토비브리오(Acetovibrio), 박테리오데스(Bacteriodes), 셀룰로모나스(Cellulomonas), 슈도모나스(Pseudomonas) 또한 방선균인 써모액티노미세테스(Thermoactinomycetes), 써모모노스포라(Thermomonospora) 및 스트렙토미세스(Streptomyces) 등에 대한 효소학적 연구가 지속적으로 행하여져 왔다.
셀룰라아제에 관한 종래 등록된 특허기술을 살펴보면, 셀룰라제를 분비하는 효모 및 그것을 포함하는 사료첨가제(대한민국 특허등록 제 10-0377954호), 크리소스포리움 셀룰라아제 및 사용방법((대한민국 특허등록 제 10-0641878호), 중성 셀룰라아제를 생산하는 신규한 바실러스속 79-23 균주((대한민국 특허등록 제 10-0318554호), 셀룰라아제와 자일란아제를 생산하는 아스퍼질러스 균주와 이에 의해 제조된 효소 및 고체배양물(대한민국 특허등록 제 10-044917호) 등이 있다.
본 발명에서는 종래에 널리 연구된 균이 아닌 목재부후균에서 셀룰라아제를 분리하였다. 목재부후균은 지구상에 축적되는 유기물 중 가장 많은 양을 차지하며 더욱이 잘 분해되지 않는 목재를 분해하여 무기물로 환원시키는 역할을 하는 균주이다.
목재의 주성분은 셀룰로오스와 리그닌이며, 목재부후균에는 주로 셀룰로오스를 분해하는 것과 리그닌을 분해하는 것이 있다. 셀룰로오스 분해균에 의한 부후재는 갈색을 띠므로 갈색부후(褐色腐朽)라고 하며, 리그닌 분해균은 백색부후(白色腐朽)를 일으킨다. 이러한 목재부후균에는 구멍장이버섯과(科) 등의 경질균(硬質菌)이 많으며, 표고 등과 같은 연질(軟質)의 것도 많다. 그 중 포미톱시스(Formitopsis) 균주는 진균류에 속하는 갈색부후담자균류 버섯 중 하나로 소나무 뿐만 아니라 각종 침엽수의 고목 또는 생목의 줄기에 자생한다. 자루가 없고 갓은 나무줄기에 선반모양으로 붙어서 반원형을 이룬다.
본 발명자는 포미톱시스 팔루스트리스 균주가 셀룰로오스 분해활성을 갖는다는 것을 학술지(Journal of Microbiology; vol.43 no.6, pp.487-492)에 밝힌 바 있다.
다양한 균주 중에서도 활성이 높은 셀룰라아제를 찾아내고 이를 발효공업에 이용되는 산업용 미생물에 도입시킴으로써 셀룰로오스 분해능이 강한 균주를 개발하여 농산 폐기물 등 셀룰로오스가 다량 포함된 유기폐기물을 기질로 사용하여 단세포 단백질, 연료용 바이오에탄올 등을 효율적으로 생산할 수 있을 것으로 기대된다.
이를 토대로 하여 연구를 거듭한 결과 본 발명자들은 대한민국 및 일본의 목재 방부 효율 시험에서 표준균주로 사용되고 있는 전형적인 갈색부후를 야기시키는 포미톱시스 팔루스트리스(Fomitopsis palustris) FFPRI 0507로부터 현재 미국 등의 선진국에서 개발되어 이용하고 있는 트리코데르마 리세이(Trichoderma reesei ) 등 에서 얻은 셀룰라아제 효소시스템보다 목질 바이오매스의 분해능력이 우수한 셀룰라아제 유전자를 획득하는 본 발명에 이르게 되었다.
따라서, 본 발명의 목적은 목재부후균인 포미톱시스 팔루스트리스 FFPRI 0507로부터 셀룰로오스 분해 유전자를 획득하고 이를 발현시켜 셀룰라아제 활성을 갖는 단백질을 생산하는 것이다.
본 발명의 상기 목적은 포미톱시스 팔루스트리스 FFPRI 0507로부터 분리한 셀룰로오스 분해 유전자의 염기서열을 분석하고, 상기 유전자를 피키아 파스토리스 GS115에서 발현시켜 엔도글루카나아제 활성을 확인함으로써 달성하였다.
본 발명은 미톱시스 팔루스트리스(Fomitopsis palustris) FFPRI 0507 균주 유래의 글리코실 하이드롤라아제 패밀리 12계열의 셀룰라아제를 코딩하는 유전자를 제공함을 특징으로 한다.
상기 유전자는 바람직하게는 서열목록 1의 염기서열을 갖고, 이로부터 추정되는 서열목록 2의 244개의 아미노산서열을 갖는 것을 특징으로 하는 셀룰라아제를 코딩하는 유전자일 수 있다.
또한 본 발명은 제 1항 내지 제 2항의 셀룰라아제 코딩 유전자를 pPICZαC 발현벡터에 삽입하여 재조합 발현벡터를 제조하는 단계 및 상기 재조합 발현벡터를 피키아 파스토리스(Pichia pastoris) GS115에 도입하여 형질전환시켜 발현시키는 단계로 구성된 셀룰라아제 코딩 유전자의 발현시스템을 제공함을 특징으로 한다.
또한 본 발명은 상기의 방법에 의하여 발현된 셀룰라아제를 유효성분으로 함유하는 목재 바이오매스 분해용 효소 제제를 제공함을 특징으로 한다.
본 발명은 포미톱시스 팔루스트리스 FFPRI 0507 균주 유래의 셀룰라아제 코딩 유전자 및 그의 발현 시스템에 관한 것으로, 셀룰로오스 분해 활성이 높은 셀룰라아제 코딩 유전자를 찾아내었으며, 이를 효모에서 발현시켜 저비용으로 셀룰로오스로부터 대체에너지인 바이오에탄올 생산을 위한 원천기술을 개발함으로써 막대한 경제적 이득을 얻을 수 있는 효과가 있다.
이하, 본 발명이 구체적인 방법을 실시예를 들어 상세히 설명하고자 하지만 본 발명의 권리범위는 이들 실시예에만 한정되는 것은 아니다.
실시예 1 : 균사체의 제조
일본 산림자원연구소(the Forest Products Research Institute;FFPRI)로부터 입수한 갈색부후담자균인 포미톱시스 팔루스트리스(Fomitopsis palustris ) FFPRI 0507 균주를 실험에 사용하였다. 상기 균주는 PDA(Potato Dextrose agar, Conda, USA) 플레이트에서 28℃에서 7일간 배양하였다. 그 후 전 배양은 포미톱시스 팔루스트리스(Fomitopsis palustris FFPRI 0507)의 균사를 100 mL의 PDB(Potato Dextrose Broth, Conda, USA)배지에서 7일간 진탕 배양하였다. 전배양액 중 15mL 를 100mL의 배지에 접종하였다. 상기 배지는 탄소원으로 미세결정 셀룰로오스(Avicel; Fluka, Switzerland) 2%(w/v), 펩톤 0.8%(w/v), 인산이수소칼륨(KH2PO4) 0.5%(w/v), 인산수소이칼륨(K2HPO4) 0.5%(w/v), 황산마그네슘(MgSO47H2O) 0.3%(w/v), 티아민-염산(Thiamin-HCl) 0.1%(v/v), 효모 추출물(Yeast Extract) 0.2%(w/v)으로 구성되어 있다. 상기 접종된 배지를 28℃에서 14일간 진탕 배양(150rpm)하여 형성된 균사체를 셀룰로오스 분해효소의 유전자 획득에 사용하였다.
실시예 2 : Total RNA 추출 및 cDNA 합성
배양을 마친 배지에서 균사체를 거름종이(Whatman 10㎛)로 여과하였다. 상기 여과물을 액체질소를 가해 얼린 후 잘게 분쇄한 다음 total RNA 추출 키트(total RNA extraction kit, RNA-spin, iNtRON Biotechnology, Daejon, Korea)를 이용하여 total RNA를 추출하였다. mRNA 정제 키트(mRNA purification kit, Oligotex mRNA Mini Kit, Qiagen, Germany)를 이용하여 total RNA로부터 폴리아데닐레이티드 RNA(polyadenylated RNA)를 분리하였다. 그 후 분리한 폴리아데닐레이티드 RNA로부터 맥심 RT-프리믹스(Maxime RT-premix, iNtRON Biotechnology, Daejon, Korea)를 이용하여 cDNA를 합성하였다.
실시예 3 : PCR 을 통한 셀룰로오스 분해효소 유전자의 획득 및 서열분석
엔도글루카나아제를 인코딩하고 있다고 추정되는 cDNA 조각을 팜사이클 러(PalmCycler, Corbett, Australia)를 이용하여 PCR 증폭하였다.
NCBI database의 포미톱시스 팔루스트리스의 엔도글루카나아제 (글리코실 하이드롤라아제 패밀리 12)의 아미노산 서열을 이용하여 Forward Primer(5'- ATGCARCTSCGBACBTCNTTYGT)와 Reverse primer (5'-GTRTTNACNGTNACNGARTARTC)를 제작하였다. PCR 증폭반응은 94℃에서 10분간(1사이클), 94℃에서 30초, 55℃에서 30초, 72℃에서 30초(30사이클), 72℃에서 10분(1 사이클)의 조건하에 수행하였다. 합성된 조각은 전기영동으로 분석하고 유전자 클린키트(gene clean kit, QIAquick Gel Extraction Kit, Qiagen, Germany)로 정제하였다. 상기 정제된 조각을 T&A cloning 벡터(RBC bioscience, Taiwan)에 클로닝 한 후 E. coli DH5α로 형질전환하였고 마크로젠(Macrogen, Seoul, Korea)에 의한 유전자 서열분석을 통하여 이를 확인하였다.
유전자 서열분석에 의해 밝혀진 염기서열 및 이로부터 추정되는 아미노산 서열은 서열목록 1에 나타내었다. 상기 셀룰로오스 분해효소 유전자는 732bp의 염기서열을 가지며, 244개의 아미노산을 암호화하고 있었다. 아미노산 서열은 서열목록 2에 나타내었다.
블래스트 데이터베이스(Blast database) 검색을 통해 폴리포루스 아르쿨라리우스(Polyporus arcularius)의 엔도셀룰라아제(endocellulase)와 59%(accession No. BAD98315), 파네로카에테 크리소스로리움(Phanerochaete chrysosporium )의 엔도글루카나아제(endoglucanase)와 56%(accession No. P22669), 아스퍼질러스 아쿨레아투스(Aspergillus aculeatus)의 엔도-1,4-베타-D-글루카나아제(endo-1,4- beta-D-glucanase)와 43%( accession No. EAW19666 ) 등 많은 글리코실 하이드롤라아제 패밀리 12계열의 셀룰라아제 효소들과 상동성을 보였다.
실시예 4 : 셀룰라아제 코팅 유전자의 피키아 파스토리스 ( Pichia pastoris ) GS115 내로의 도입
유전자가 클로닝된 T&A vector를 제한효소 EcoRI과 Xba I으로 잘라낸 후 아가로즈 젤 전기영동을 통해 유전자 DNA 단편을 분리하였다. 이 단편을 EcoRI 과 Xba I 제한효소를 처리한 피키아 파스토리스 발현벡터인 pPICZαC(Invitrogen, USA)에 클로닝하여 재조합 셀룰레이즈 발현벡터(pPICZαC-EG12)를 획득하였다.
상기의 셀룰라아제를 코팅하는 유전자를 삽입한 재조합 발현벡터 pPICZαC-EG12는 도 1에 도식화하였다. 상기 제조된 벡터는 제한효소 자리 분석 및 DNA 서열분석에 의하여 확인하였다. 상기 벡터를 E. coli DH5α로 형질전환시키고, 양성클론을 선발하였다.
이 발현벡터를 형질전환한 대장균 형질전환체 중 유효한 클론으로부터 플라스미드를 분리한 후 플라스미드를 제한효소 Pme I으로 직선화시켜 일렉트로포레이션(electroporation)에 의하여 P. pastoris GS115에 형질전환하였다.
제오신(zeocin)을 함유하는 플레이트를 이용하여 상기 효모 균주를 스크리닝하였다.
실시예 5 : 형질전환된 피키아 파스토리스의 엔도글루카나아제(EG) 활성 측 정
상기 스크리닝 한 pPICZαC-EG12 벡터를 함유하는 콜로니를 50mL의 BMGY 배지에 접종하고 30℃에서 200rpm으로 진탕배양하였다. BMGY의 조성은 1% 효모추출액, 2%의 펩톤, 1%의 글리세롤, 1.34%의 YNB(Yeast Nitrogen Base-아미노산 제외), 0.00004%의 비오틴(biotin), pH6.0, 10%의 1mol/L의 인산칼륨(potassium phosphate)버퍼로 이루어져 있다. 상기 배양액을 원심분리기를 이용하여 5,000× g에서 10분간 원심분리한 후 펠렛(pellet)을 얻었다. 상기 펠렛을 50mL의 BMMY 배지에 녹인 후 메탄올(100%)을 24시간 간격으로 첨가하여 최종적으로 0.5%(v/v)으로 조정하였다. 상기 BMMY 배지는 BMGY배지에서 글리세롤 대신에 0.5%의 메탄올을 첨가한 것을 제외하고는 동일하다. 이 후 상층액을 채취하여 엔도글루카나아제(EG) 활성을 측정하였다.
엔도글루카나아제의 활성측정은 빌리 등(Biely et al.)에 의하여 알려진 방법에 의하여 OBR-HEC(Ostazin Brilliant Red H-3B hydroxyethyl cellulose)를 이용하여 100mM의 아세트산나트륨 하에서 수행하였다.
상기 배양액에 120μL의 2.5mg/mL OBR-HEC를 혼합하고 최종 부피를 300μL로 한 후 40℃에서 15분간 배양하였다. 900μL의 에탄올을 첨가하여 효소반응을 정지시키고 상기 용액을 실온에서 5분간 더 배양하였다. 그리고 나서 상기 용액을 5분동안 15,000× g로 원심분리하고 상층액의 흡광도를 550nm에서 측정하였다. 효소활성은 △A550에서의 분당 증가도로 나타내었다.
측정한 결과는 도 2에 나타내었으며, 도 2 중 □는 pPICZαC 벡터만을 형질전환하여 발현시킨 배양 상층액의 엔도글루카나아제 활성을 측정한 것이고, ■는 pPICZαC-EG12(pPICZαC에 셀룰라아제 코팅 유전자가 도입된 벡터)를 형질전환하여 발현시킨 배양 상층액의 활성을 측정한 것이다.
도 2에 나타낸 바와 같이, 배양기간이 길어질수록 대조군인 pPICZαC 벡터만을 형질전환한 배양 상층액은 변화가 거의 없는 반면, pPICZαC-EG12를 형질전환한 배양 상층액은 활성이 꾸준히 상승하는 것을 알 수 있었다. 이는 포미톱시스 팔루스트리스에서 분리한 유전자가 훌륭하게 셀룰라아제를 발현시킨다는 것을 보여준다.
도 1은 셀룰라아제를 코딩하는 유전자를 삽입한 재조합 발현벡터 pPICZαC-EG12를 도식화한 것이다.
도 2는 피키아 파스토리스 GS115에서 발현한 상층액의 엔도글루카나아제(EG) 활성을 측정한 도표이다.
<110> Kookmin University Industry Academy Cooperation Foundation <120> Cellulose-coding gene derived from Formitopsis palustris FFPRI 0507 and expression method thereof <160> 2 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 732 <212> DNA <213> Fomitopsos palustris <400> 1 atgcagcttc ggacctcgtt cgtcctcgca gccgtcgcgg tcagtgccca ggcggcgact 60 accttgacgg gtcagtacag ctgcgccacg tctggcaact accagctttg caacgaccaa 120 tggggctccg gtaacggcga ggggtcgcag acctccacac tcgagagcac cagcggtgac 180 agcatcacat ggtctacgac ttacacctgg tccgagaacg agaacgacgt gaagagctat 240 gccaacgtcg agccgacatc tggcgcaagc ggcatgacgc tggccgaaat cacctctgct 300 ccgacgacct acaactggga gtacacgtcc tcgtcctccg gccttcgtgc tgatgtctcc 360 tacgacatct ggacgggtac ctctgctggc gaccccgcct ccagcacctc caactacgag 420 atcatgatct ggctctccgg tgagggaggc atccagcccg ttggctctca gatcgactcc 480 ggcgtcagcg tcgccggtta ctcttggaac ctctggtccg gcccgaactc caactggcag 540 acgatctcct tcgtctccgc tgacgggaac atcaacgact tcagcgctga cctcaacgag 600 ttcttccagt acctcgagga gaaccagggt gtctccacct ctcaggtcct ccaggccatc 660 caggctggca ccgaggcctt cactggctct gcgacgctct cggtcaccga ctactctgtc 720 accgtaaaca ca 732 <210> 2 <211> 244 <212> PRT <213> Fomitopsis paulstris <400> 2 Met Gln Leu Arg Thr Ser Phe Val Leu Ala Ala Val Ala Val Ser Ala 1 5 10 15 Gln Ala Ala Thr Thr Leu Thr Gly Gln Tyr Ser Cys Ala Thr Ser Gly 20 25 30 Asn Tyr Gln Leu Cys Asn Asp Gln Trp Gly Ser Gly Asn Gly Glu Gly 35 40 45 Ser Gln Thr Ser Thr Leu Glu Ser Thr Ser Gly Asp Ser Ile Thr Trp 50 55 60 Ser Thr Thr Tyr Thr Trp Ser Glu Asn Glu Asn Asp Val Lys Ser Tyr 65 70 75 80 Ala Asn Val Glu Pro Thr Ser Gly Ala Ser Gly Met Thr Leu Ala Glu 85 90 95 Ile Thr Ser Ala Pro Thr Thr Tyr Asn Trp Glu Tyr Thr Ser Ser Ser 100 105 110 Ser Gly Leu Arg Ala Asp Val Ser Tyr Asp Ile Trp Thr Gly Thr Ser 115 120 125 Ala Gly Asp Pro Ala Ser Ser Thr Ser Asn Tyr Glu Ile Met Ile Trp 130 135 140 Leu Ser Gly Glu Gly Gly Ile Gln Pro Val Gly Ser Gln Ile Asp Ser 145 150 155 160 Gly Val Ser Val Ala Gly Tyr Ser Trp Asn Leu Trp Ser Gly Pro Asn 165 170 175 Ser Asn Trp Gln Thr Ile Ser Phe Val Ser Ala Asp Gly Asn Ile Asn 180 185 190 Asp Phe Ser Ala Asp Leu Asn Glu Phe Phe Gln Tyr Leu Glu Glu Asn 195 200 205 Gln Gly Val Ser Thr Ser Gln Val Leu Gln Ala Ile Gln Ala Gly Thr 210 215 220 Glu Ala Phe Thr Gly Ser Ala Thr Leu Ser Val Thr Asp Tyr Ser Val 225 230 235 240 Thr Val Asn Thr

Claims (3)

  1. 포미톱시스 팔루스트리스(Fomitopsis palustris) FFPRI 0507 균주 유래의 서열목록 1의 732 bp 염기서열을 갖고, 이로부터 추정되는 서열목록 2의 244개 아미노산서열을 갖는 글리코실 하이드롤라아제(glycosyl hydrolase) 패밀리 12계열의 셀룰라아제를 코딩하는 유전자.
  2. 제 1항의 셀룰라아제 코딩 유전자를 pPICZαC 발현벡터에 삽입하여 재조합 발현벡터를 제조하는 단계; 및
    상기 재조합 발현벡터를 피키아 파스토리스(Pichia pastoris) GS115에 도입하여 형질전환시켜 발현시키는 단계
    로 구성된 셀룰라아제 코딩 유전자의 발현방법.
  3. 제 2항의 방법에 의하여 발현된 셀룰라아제를 유효성분으로 함유하는 목재 바이오매스 분해용 효소 제제.
KR1020070119538A 2007-11-22 2007-11-22 포미톱시스 팔루스트리스 ｆｆｐｒｉ 0507 균주 유래의셀룰라아제 코딩 유전자 및 그의 발현방법 KR100928527B1 (ko)

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