KR100911755B1 - Producing Method for Natto using Roasted Bean and the Natto - Google Patents

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Abstract

본 발명은 볶은 콩류를 바실러스 균주(Bacillus sp.)로 고체발효하여 생산된 콩 발효물을 제조하는 방법에 관한 것으로, 청국장은 면역증진 효과, 항암효과 및 성인병 예방 등의 생리활성기능을 가지고 있다고 보고 되고 있으나 청국장 특유의 냄새와, 제조하는데 번거로움이 있다는 단점을 가지고 있다. 따라서 본 발명은 청국장 제조에 있어서 시간이 많이 소요되는 침지와 증자의 공정을 생략하여 보다 손쉽고 간편하게 청국장을 제조하고, 볶은 콩 특유의 구수함과 위생적인 종균발효로 역겨운 냄새가 없는 청국장을 제조하는 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for producing a soybean fermented product produced by solid fermentation of roasted beans with Bacillus strain ( Bacillus sp.), Cheonggukjang is reported to have a physiological activity function, such as immuno-stimulating effect, anti-cancer effect and adult disease prevention But it has the disadvantage of peculiar smell and troublesome manufacturing. Therefore, the present invention in the method of producing a cheongukjang more easily and simply by eliminating the time-consuming immersion and the process of increasing the production of Cheonggukjang, the production of Cheonggukjang without the disgusting smell of roasted soybean peculiarity and hygienic spawn fermentation It is about.

바실러스 (Bacillus sp.), 청국장, 볶은 콩, 혈전용해효소, 가수분해효소, 점질물, 청국장 제조방법 Bacillus sp.

Description

볶은 콩의 청국장 제조 방법 및 이에 의해 제조된 청국장{Producing Method for Natto using Roasted Bean and the Natto}Producing Method for Natto using Roasted Bean and the Natto}

본 발명은 볶은 콩류에 유용한 바실러스 균주(Bacillus sp.)를 이용한 발효를 통하여 제조된 콩 발효물, 즉 청국장을 제조하는 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for producing soybean fermented product, ie, cheonggukjang, prepared through fermentation using Bacillus sp. Useful for roasted beans.

청국장은 우리나라의 대두발효 식품으로써, 발효숙성 과정 중에 바실러스(Bacillus sp.)균주들이 생산하는 효소작용에 의해 대두에 없던 성분인 효소 및 다양한 생리활성물질이 만들어지며, 콩 단백질이 분해되어 그 특유의 구수한 맛과 냄새를 내는 동시에 끈적끈적한 점질물이 생성된다.Cheonggukjang is a soybean fermented food of Korea. The enzymes produced by Bacillus sp. Strain during fermentation ripening process produce enzymes and various physiologically active substances, which are not found in soybean, and soy protein is decomposed. It gives off a delicious taste and smell and at the same time produces a sticky slime.

고초균은 암모니아, 인돌 및 아민 등의 발암촉진물질의 생성을 감소시키며, 이러한 유해물질들을 흡착하여 변과 함께 배설시키기도 한다. 그리고 병원균에 대해 항균작용을 하며, 유기산을 생성하여 장을 자극해 소화가 잘 되게 돕기도 한다. Bacillus subtilis reduces the production of carcinogens, such as ammonia, indole and amines, and adsorbs these harmful substances and excretes them with stools. It also acts as an antimicrobial against pathogens, and produces organic acids that help intestine digestion.

청국장은 원료인 콩이 가지는 영양성분 이외에도 인체의 건강증진을 위한 생리활성 물질이라고 알려진 식이섬유, 인지질, 아이소플라본 (isoflavones: genistein, daidzein, etc.), 페놀화합물 (phenolic acids), 사포닌 (saponins), 피틱산 (phytic acid) 등의 성분이 들어있어 동맥경화, 심장병, 당뇨병 예방효과, 노인성 치매 예방효과, 항암효과(유방암, 대장암, 폐암 등), 골다공증 억제 등의 성인병 예방효과가 있음이 발표 되었다. 이외에도 청국장이 미생물에 의한 발효과정 중 기능성 펩타이드 등의 생리활성 물질을 생성하여 혈압 상승 억제효과 및 지질 대사 개선 효과, 항 돌연변이성 및 항암성, 항균작용 등을 나타내는 것으로 보고되고 있다.In addition to the nutritional ingredients of soybeans, Cheonggukjang contains dietary fiber, phospholipids, isoflavones (isoflavones: genistein, daidzein, etc.), phenolic acids, and saponins. , Phytic acid and other ingredients, including arteriosclerosis, heart disease, diabetes prevention effect, senile dementia prevention effect, anti-cancer effect (breast cancer, colon cancer, lung cancer, etc.), osteoporosis prevention, etc. It became. In addition, Cheonggukjang has been reported to produce bioactive substances such as functional peptides during the fermentation process by microorganisms, thereby suppressing blood pressure increase and improving lipid metabolism, antimutagenic and anticancer effects, and antibacterial activity.

또한 청국장에 풍부한 비타민 B2는 간의 원활한 해독작용을 도움을 주며, 고초균에 의한 콩 발효 중에 다양한 효소들이 생산되며, 특히 혈전분해효소는 혈전을 녹이는 작용을 하므로 심근경색 및 뇌혈전 등을 예방하는데 효과가 있다는 연구보고도 있다.In addition, vitamin B 2 enriched in Cheonggukjang helps the liver detoxification, and various enzymes are produced during fermentation of soybean by Bacillus subtilis. There are also research reports.

지금까지 고초균 발효에 대한 연구는 주로 콩을 주원료로 하여 청국장을 제조하는 것이며, 이러한 청국장을 만드는 고전적인 방법에 따르면, 메주콩을 깨끗이 씻어 물에 불린 후 이를 끓는 물에서 투입하여 충분히 익힌 다음 시루나 소쿠리에 깨끗한 볏짚을 깔고 삶은 콩을 넣어 베보자기를 덮어 그 위에 담요로 보온시킨 상태에서 따뜻한 곳에서 2~3일간 발효시켜 제조한다. 이러한 전통의 제법은 잡균의 혼입으로 역겨운 냄새가 많이 발생할 수 있고, 콩의 수침시간이 길고, 몇 시간 동안 콩을 삶는 불편함으로 현대의 일반가정에서는 제조하기에는 많은 번거로움이 있다. 즉, 기존 청국장 제조는 콩세척 --> 수침(12~15시간) --> 증자(3~5시간) --> 발효공정--> 청국장의 과정으로 제조되어 수침과 증자에 많은 시간이 필요하고 그 절차가 번거러운 단점이 있었다.Until now, the research on fermentation of Bacillus subtilis was mainly made of soybeans as a main ingredient, and according to the classical method of making soybean paste, the soybeans were washed thoroughly, soaked in water, and then boiled in boiling water, and then cooked sufficiently. Put clean boiled straw and put boiled soybeans on it. This traditional recipe can cause a lot of disgusting smell due to the mixing of various bacteria, long soaking time of beans, and the inconvenience of boiling beans for several hours, it is a lot of trouble to manufacture in modern homes. In other words, the existing production of Cheonggukjang is made by soybean washing-> immersion (12-15 hours)-> Capital increase (3-5 hours)-> Fermentation process-> Cheonggukjang, so much time is required for immersion and increase The procedure was cumbersome.

청국장의 발효는 대부분 사용하는 대두를 삶은 후 청국장 종균을 접종하여 발효하는 것이 일반적이다. 한편, 청국장 이외의 분야에서는 콩을 다양하게 가공하여 사용할 수 있다. 예컨대, 한국특허공개번호 2007-0068563에는 볶은 콩을 분말하여 식물성 버터와 식물성 경화유 유화제 등을 비율별로 기술적으로 혼합하여 숙성 발효시킨 버터-그리미 제조방법이 기재되어 있는데, 이 방법은 청국장의 발효와 전혀 그 분야가 상이하고 그 구성이 청국장과는 전혀 상이하다. 또한, 한국특허공개 2005-0047231에는 볶은 콩가루를 청국장에 첨가하는 기술이 기재되어 있다. The fermentation of Cheonggukjang is usually done by boiling the soybeans used and inoculating it with the seed. On the other hand, in fields other than Cheonggukjang, soybeans can be processed and used in various ways. For example, Korean Patent Publication No. 2007-0068563 describes a method of preparing butter-grimi, which is a fermentation of fermented soybean powder by technically mixing vegetable butter and vegetable cured oil emulsifier by ratio, which method is completely different from the fermentation of Cheonggukjang. The field is different and its composition is completely different from Cheonggukjang. In addition, Korean Patent Publication No. 2005-0047231 describes a technique for adding roasted soybean powder to Cheonggukjang.

본 발명자들은 바실러스 균주들을 종균으로 볶은 콩류에 접종한 후 콩을 삶는 과정없이 발효를 수행함으로써 간편하고 위생적으로 양질의 청국장을 제공할 수 있도록 한 것이다.The present inventors inoculate Bacillus strains roasted with beans as seed spawn to perform fermentation without boiling soybeans to provide a simple and hygienic high quality Cheonggukjang.

본 발명의 목적은 기존 전통식의 청국장제조 방법의 불편함과 발효 시 생성되는 청국장 특유의 냄새를 제거하기 위하여, 본 발명은 침지와 증자의 공정을 생략할 수 있어 보다 손쉽게 청국장을 제조할 수 있는 청국장 제조방법과 원료 콩의 가공처리와 순수 종균 발효에 의한 청국장 특유의 냄새를 감소시킴으로써 본 발명을 완성하였다.An object of the present invention is to remove the inconvenience of the conventional traditional method of producing cheonggukjang and odor peculiar to Cheonggukjang produced during fermentation, the present invention can omit the process of dipping and increase the production of Cheonggukjang more easily The present invention was completed by reducing the odor peculiar to Cheonggukjang by the manufacturing method and processing of raw soybean and pure seed spawn fermentation.

본 발명은 바실러스 균주들을 종균으로 볶은 콩류에 접종한 후 발효를 수행 함으로써 간편하고 위생적으로 양질의 청국장을 제공한다.The present invention provides a simple and hygienic high-quality Cheonggukjang by inoculating Bacillus strains in the roasted beans as seed.

본 발명에 따르면, 볶은 콩을 준비하는 단계; 상기 볶은 콩에 물 및 바실러스속 발효균을 첨가하는 단계; 및 발효하는 단계로 구성된 청국장의 제조방법이 제공된다.According to the invention, preparing a roasted beans; Adding water and Bacillus genus fermentation bacteria to the roasted beans; And it is provided a method of producing a cheongukjang consisting of fermentation.

구체적으로, 본 발명은 볶은 콩을 용기에 준비하는 단계; 상기 콩 무게에 대비하여 물의 양을 0.5 내지 2배, 바실러스속의 발효균을 콩 무게에 대하여 0.1~3 중량% 첨가하는 단계; 발효하는 단계로 구성된 청국장의 제조방법 및 그로부터 제조된 청국장을 제공한다. 물의 양은 예컨대, 콩 원료대비 물을 0.75, 1.0, 1.25, 1.5배로 첨가할 수 있다.Specifically, the present invention comprises the steps of preparing the roasted beans in a container; Adding 0.5 to 2 times the amount of water relative to the weight of the beans and 0.1 to 3% by weight of the fermentation bacteria of the genus Bacillus relative to the weight of the beans; It provides a method of manufacturing a Chungkookjang consisting of the fermentation step and the Chungkookjang prepared therefrom. The amount of water, for example, may be added 0.75, 1.0, 1.25, 1.5 times the water relative to the soybean raw material.

상기 물은 온도가 상온도 가능하나, 37~90℃인 것이 바람직하고, 가능하면 70℃ 이상으로 가열한 후 식힌 물과 같이 살균된 물이 바람직하다. 살균된 물은 잡균의 오염을 감소시켜 청국장의 풍미를 좋게 한다. 특히, 청국장에서 바람직하지 않은 냄새를 제거하는 효과가 있다. 바실러스는 포자를 형성하므로 종균이 분말상, 포자가 형성된 배양액 등의 경우에는 물의 온도가 다소 고온이어도 종균이 사멸될 우려는 낮다.The water may be a normal temperature, but is preferably 37 ~ 90 ℃, preferably sterilized water, such as water cooled after heating to 70 ℃ or more if possible. Sterilized water reduces the contamination of various germs to improve the flavor of Cheonggukjang. In particular, it has the effect of removing the undesirable odor in Cheonggukjang. Since Bacillus forms spores, in the case of spawns in the form of powder and cultures in which spores are formed, there is a low possibility that spawns are killed even if the water temperature is a little high.

상기 바실러스속 발효균은 종래에 공지된 발효균이면 가능하고, 바실러스 종균 배양액 또는 동결건조된 바실러스 종균 분말을 사용할 수 있다. 상기 발효균은 물과 함께 또는 물의 첨가전후에 첨가할 수 있는데, 고온의 물을 첨가할 경우에는 당연히 물의 첨가후 어느 정도 물이 식은 후에 첨가하는 것이 바람직하다(도 1 또는 도 2 참조). The Bacillus genus fermentation bacteria can be any conventionally known fermentation bacteria, Bacillus seed culture medium or lyophilized Bacillus seed powder may be used. The fermentation bacteria may be added together with water or before or after the addition of water. In the case of adding hot water, it is preferable to add the water after the water has cooled down to some extent after the addition of water (see FIG. 1 or 2).

상기 발효단계는 일반적인 청국장 발효 온도와 시간에서 발효하는데 37~45℃에서 16~48시간 발효하는 것이 바람직하다. 엔유씨전자 시판의 청국장 발효기에서 청국장 발효기능으로 청국장을 발효하면 16시간으로 청국장 제조가 가능하였다.The fermentation step is a fermentation at a general Cheonggukjang fermentation temperature and time 16-48 hours at 37 ~ 45 ℃ It is preferable to ferment. Cheonggukjang was fermented with Cheonggukjang fermentation function in the market of Cheonggukjang fermenter in the market.

본 발명에서 사용가능한 콩류는 백태 대립종, 백태 중립종, 백태 소립종, 흑태 소립종, 흑태 서목태 등이 가능하면 특별히 제한이 없다. 또한, 본 발명에서 사용가능한 종균도 종래에 공지된 청국장 발효균들이 가능하다. The legumes usable in the present invention are not particularly limited as long as the white alleles, white rot neutral species, white baek small grains, black tae small grains, black taemoktae and the like are possible. In addition, the seed which can be used in the present invention is also known in the conventional fermented soybeans.

콩을 볶는 방법으로 일반적으로 사용되는 방법이 이용되는데, 상압에서 열을 가하여 볶거나, 열과 4~7 kgf/cm2의 압력으로 볶아도 된다.A method commonly used for roasting soybeans is used, and may be roasted by applying heat at normal pressure, or by heat and pressure of 4-7 kgf / cm 2 .

본 발명의 방법에 따른 청국장은 볶은 콩을 사용하는 것을 요지로 하고 있다. 볶은 콩을 사용하므로 종래와 같은 긴 수침이나 증자의 단계를 거치지 않아도 간단한 공정으로 청국장 발효가 가능하다.Cheonggukjang according to the method of the present invention is to use the roasted beans. Since roasted beans are used, the fermentation of Cheonggukjang is possible in a simple process without having to go through the long immersion or increase of the conventional steps.

또한, 볶은 콩을 사용하므로 종래의 증자에 의한 청국장의 제조와 대비하여 풍미가 우수함을 발견하였다. 이는 콩을 볶음으로써 발생하는 고소한 맛과 향이 청국장의 발효 후에도 잔존하여 기존의 증자에 의한 청국장의 청국장 특유의 냄새를 상쇄시키는 것으로 보인다. In addition, the use of roasted beans was found to be excellent in flavor compared to the production of Cheonggukjang by the conventional increase. It seems that the savory taste and aroma generated by roasting beans remain after the fermentation of Cheonggukjang to offset the smell of Cheonggukjang by Cheonggukjang.

더 나아가. 볶은 콩을 사용하여도 청국장의 발효에는 문제가 없었고 혈전용해효소, 점질물 생산 및 가수분해효소 활성도 우수하였다.Furthermore. Roasted soybeans were used for fermentation of Cheonggukjang, and thrombolytic enzyme, viscous substance production and hydrolase activity were excellent.

이상에서 상세히 설명한 바와 같이, 본 발명의 볶은 콩을 사용하여 제조한 청국장은 풍미가 크게 개선되고 그 제조방법이 간단하다.As described in detail above, the cheongukjang prepared using the roasted beans of the present invention is greatly improved in flavor and the manufacturing method is simple.

기존 방법에 의해 제조되는 청국장은 특유의 냄새가 많이 발생하고, 제조하는데 시간이 많이 소요되고, 콩의 수침, 증자 등의 번거로운 과정이 있다는 단점을 가지고 있다. 따라서 본 발명은 침지와 증자의 공정을 생략할 수 있기 때문에 보다 손쉽게 청국장을 제조할 수 있으며, 볶은 콩 특유의 구수함과 순수 종균발효로 청국장 특유의 냄새를 감소함으로써 본 발명을 완성하였다.Cheonggukjang produced by the conventional method has a disadvantage that a lot of peculiar smell occurs, takes a lot of time to manufacture, and has a cumbersome process such as soaking of soybeans, increase in steam. Therefore, since the present invention can omit the process of immersion and increase of steam, it is possible to more easily produce Cheonggukjang, and completed the present invention by reducing the smell of Cheonggukjang by the uniqueness of roasted beans and pure spawn fermentation.

이하 실시 예를 통하여 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시 예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시 예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to the following examples. However, these examples are for illustrative purposes only and the scope of the present invention is not limited to these examples.

<< 실시예Example 1>  1> 바실러스Bacillus 스타터 배양액을 이용한 청국장 제조 Preparation of Cheonggukjang Using Starter Culture

<< 실험예Experimental Example 1> 종류별 볶은 콩을 이용한 청국장 발효 1> Fermented Cheonggukjang with Roasted Soybeans by Type

1-1. 1-1. 바실러스Bacillus 스타터(종균) 제조 Starter production

바실러스 서브틸리스 HA(KCCM10775P)와 바실러스 서브틸리스 KCCM-10839P를 MRS agar plate에서 42℃ 항온기를 이용하여 24시간 활성화시킨 후, 한 콜로니(colony)를 따서 멸균된 5% 콩분말용액에 접종한 후 42℃ 항온기에서 24시간 150rpm에서 진탕 배양시켜 스타터 종균으로 사용하였다.Bacillus subtilis HA (KCCM10775P) and Bacillus subtilis KCCM-10839P were activated on a MRS agar plate for 24 hours using a 42 ° C thermostat, and then inoculated in a colony (sterile) 5% soybean powder solution. After shaking culture at 150rpm for 24 hours at 42 ℃ thermostat was used as starter spawn.

1-2. 원료처리 및 청국장 발효1-2. Raw material processing and fermentation of Cheonggukjang

볶은 콩류 각각(백태 대립종, 백태 중립종, 백태 소립종, 흑태 소립종, 흑태 서목태) 30g을 용기에 담은 다음 원료무게에 대비하여 끓는 물을 상기 콩 무게에 1배의 비율로 첨가한 후, 물이 어느 정도 식었을 때, 상기에 기재된 바실러스 종균 2종류의 배양액을 각각 1 중량%(콩무게에 대하여)씩 접종한 후 40℃에서 40시간 발효하여 청국장을 제조하였다. 각각의 콩류에 대하여 청국장은 외관상 양호하게 제조되었다,30g of each roasted beans (white baek allele, white baek neutral, white baek minor, black tae jong, black tae moktae) was placed in a container, and boiling water was added to the weight of the beans in proportion to the weight of the raw material, After cooling to some extent, each of the two kinds of Bacillus spawn cultures described above was inoculated by 1% by weight (based on soybean weight), and fermented at 40 ° C. for 40 hours to prepare Cheonggukjang. Cheonggukjang was well made for each legume.

<< 실험예Experimental Example 2> 물의 양을 달리한 청국장 발효 시  2> When fermented Cheonggukjang with different amount of water 점조도Consistency 변화 change

상기 실시예 1에서 기재된 방법에 따라 제조된 청국장에 대하여 점조도를 표 1에 나타내었다. 다만, 첨가하는 물의 양을 달리하여 제조하였다.The consistency of Cheonggukjang prepared according to the method described in Example 1 is shown in Table 1. However, it was prepared by varying the amount of water added.

볶은 콩(백태 중립종)에 물의 양을 달리하여 발효하였을 때 1중량배의 물의 양을 첨가하였을 때 가장 높은 점조도를 보였으며, 1배 이하의 물을 첨가하였을 때에는 물이 적어 섞기 힘들었고, 침지가 제대로 되지 않아 딱딱한 반면, 1중량배 이상의 물을 첨가하였을 때에는 물이 모두 흡수되지 않아 발효 후에도 물이 바닥에 고여 있었다. 따라서 물을 1중량배로 첨가하였을 때 가장 좋은 발효 조건을 나타내었다.When fermented by varying the amount of water in roasted soybean (Baektae neutral species), it showed the highest consistency when the amount of water of 1 weight was added, and when less than 1 time of water was added, it was difficult to mix due to less water, and the immersion was properly On the other hand, when more than 1 wt. Of water was added, all of the water was not absorbed and water remained on the bottom even after fermentation. Therefore, the best fermentation conditions were obtained when water was added in 1 weight times.

물의 양 (배)Volume of water (pear) 점조도 (Pa·sn)Consistency (Pas n ) 0.750.75 0.33570.3357 1.01.0 0.73710.7371 1.251.25 0.19110.1911 1.51.5 0.15390.1539

<< 실험예Experimental Example 3> 콩 종류별 볶은 콩을 이용한 청국장 제조 시  3> Production of Cheonggukjang using roasted beans 점조도Consistency 변화 change

상기의 실험예 1에 기재된 방법에 따라 제조된 청국장을 볶은 콩을 종류별로 발효하였을 때의 점조도는 표 2에 나타내었다. 그 결과 균주 모두 좋은 점도를 보였으며, 특히 바실러스 서브틸리스 HA 균주를 이용하여 발효한 중립 콩에서는 0.74 Pa·sn으로 가장 높은 점도를 보였다.The consistency of the fermented soybeans prepared by the method described in Experimental Example 1, roasted soybeans is shown in Table 2. As a result, all of the strains showed good viscosity, and especially in the neutral soybean fermented with Bacillus subtilis HA strain, the highest viscosity was 0.74 Pa · s n .

따라서 볶은 콩류와 바실러스 균주에 상관없이 본 발명의 제조 방법에 따라 청국장 발효에 효과가 있는 것으로 나타났다.Therefore, regardless of the roasted beans and Bacillus strain was shown to be effective in the fermentation of Cheonggukjang according to the production method of the present invention.

바실러스 서브틸리스 HA KCCM 10775PBacillus subtilis HA KCCM 10775P 바실러스 서브틸리스 KCCM 10839PBacillus subtilis KCCM 10839P 백태various phases 대립종Allele 0.00680.0068 0.21920.2192 중립종Neutral species 0.73710.7371 0.33380.3338 소립종Small species 0.30810.3081 0.01280.0128 흑태Black Tae 소립종Small species 0.43790.4379 0.23420.2342 서목태Seomoktae 0.84240.8424 0.49880.4988

<< 실시예Example 2> 본 발명에 따른 청국장의 생리활성물질 2> Bioactive substance of Cheonggukjang according to the present invention

볶은 콩(백태 대립종, 백태 중립종, 백태 소립종, 흑태 소립종, 흑태 서목태)을 실시예 1에 기재된 방법으로 청국장을 발효하고 발효균은 동결건조 한 바실러스 종균 분말을 사용하여 청국장을 제조하였다. 제조한 청국장은 표 3에 나타낸 것과 같이 점조도, 혈전용해효소, 타이로신 함량 및 프로테아제 활성을 측정하였다.Roasted soybean (white baek allele, white baek neutral species, white baek small grain, black tae small grain, black tae seomoktae) fermented Cheonggukjang by the method described in Example 1 and fermented bacteria were prepared by using lyophilized Bacillus seed powder. Cheonggukjang prepared as shown in Table 3 measured the consistency, thrombolytic enzyme, tyrosine content and protease activity.

실험결과 백태 소립종에서 모든 활성이 다 뛰어났으며, 특히 혈전용해능이 73.54%로 가장 활성이 뛰어나는 것으로 나타났다.Experimental results showed that all activity was excellent in small white granules, and especially the thrombolytic ability was 73.54%.

점조도 (Pa·sn)Consistency (Pas n ) 혈전용해효소 (%)Thrombolytic enzyme (%) 타이로신 함량 (mg%)Tyrosine content (mg%) 프로테아제 활성 (unit/g)Protease activity (unit / g) 백태various phases 대립종Allele 0.0560.056 26.9926.99 78.6778.67 13.0513.05 중립종Neutral species 0.0300.030 29.8229.82 73.9373.93 8.118.11 소립종Small species 0.0570.057 73.5473.54 115.47115.47 185.31185.31 흑태Black Tae 소립종Small species 0.0270.027 31.0931.09 89.2789.27 15.9615.96 서목태Seomoktae 0.0350.035 37.2737.27 185.13185.13 22.2922.29

<< 평가1Evaluation1 > 청국장의 생리활성물질 분석 방법> Cheonggukjang's analysis of bioactive substances

본 발명에서 사용한 분석방법은 아래와 같다.The analysis method used in the present invention is as follows.

가. 점조도 end. Consistency

청국장 추출물의 점조도는 레오미터 시스템(Rheometer System)(HAAKE RheoStress 1, Germany)에 스핀들(spindle)(Rotor DG43 DIN 53544 Titan)을 장착하여 측정용 컵 DG43(measuring cup DG43)을 사용하여 측정하였다. 점조도 값은 변형 속도(shear rate)(1/s)와 변형 압력(shear stress)(Pa)으로 나타내어 점조도가 높아짐에 따라 층밀림 변형력이 높아지는 효과를 측정하였다. 측정온도 20℃에서 전단속도는 1~100 s-1의 범위로 유동특성을 알아보았고, 점조도지수와 유동지수 값은 파워 로우 모델(Power law model)(τ=arb)로 측정하였다. The viscosity of Cheonggukjang extract was measured by using a measuring cup DG43 by mounting a spindle (Rotor DG43 DIN 53544 Titan) on a rheometer system (HAAKE RheoStress 1, Germany). The consistency value is represented by the shear rate (1 / s) and the shear stress (Pa) to measure the effect of increasing the laminar strain as the consistency increases. Shear velocity was measured in the range of 1 ~ 100 s -1 at the measurement temperature of 20 ℃, and the viscosity index and the flow index were measured by the power law model (τ = ar b ).

나. 혈전용해효소 I. Thrombolytic enzyme

혈전용해능 측정 시료는 청국장 2 g을 0.1 M 인산완충용액(phosphate buffer)(pH 7.5) 8 mL에 혼합한 후 원심분리하여 얻은 상등액을 조효소액으로 사용하였다.For thrombolytic activity, 2 g of Cheonggukjang was mixed with 8 mL of 0.1 M phosphate buffer (pH 7.5), and the supernatant obtained by centrifugation was used as a crude enzyme solution.

혈전용해효소활성은 피브린 플레이트법(fibrin plate method)의 일종인 아스트럽 및 뮬러츠법(Astrup and Mullertz method)을 사용하여 측정하였다. 피브린 플레이트(Fibrin plate)는 0.5% 피브리노겐(fibrinogen)을 0.067M 인산화 나트륨 완충용액(sodium phosphate buffer)(pH 7.4)에 용해시켜서 직경 9cm인 페트리 접시(petri dish)에 10mL을 가하였다. Thrombolytic enzyme activity was measured using the Astrup and Mullertz method, a kind of fibrin plate method. Fibrin plates were dissolved in 0.5% fibrinogen in 0.067M sodium phosphate buffer (pH 7.4) and 10 mL was added to a petri dish 9 cm in diameter.

여기에 0.067M 인산화 나트륨 완충용액(sodium phosphate buffer)에 용해된 트롬빈(thrombin)(100 NIH/mL) 0.1 mL를 가하고 신속하게 혼합하고 균일한 평판을 제조한 후 실온에서 30분 방치하여 사용하였다. 피브린 플레이트(Fibrin plate)에 시료 점적 위치를 표시하고 배양 상등액(조효소액)을 20㎕씩 각 표시한 위치에 점적하여 37℃ 항온기에서 2시간 반응시킨 후 용해 면적으로 효소활성을 구하였다. 0.1 mL of thrombin (100 NIH / mL) dissolved in 0.067M sodium phosphate buffer was added thereto, mixed rapidly, and a uniform plate was prepared and used for 30 minutes at room temperature. Sample drop position was indicated on the fibrin plate, and 20 µl of the culture supernatant (coenzyme solution) was added to each marked position for 2 hours at 37 ° C. incubator, and enzyme activity was determined by dissolution area.

혈전용해효소의 표준곡선을 구하기 위해서 표준 플라스민(plasmin) 용액을 0.6, 1.6, 2.6, 5 unit/mL로 되도록 트리스-라이신 완충용액(Tris-lysine buffer)(pH 9.0)으로 조제한 다음, 피브린 플레이트(fibrin plate)에 20㎕씩 가하여 형성된 용해 면적으로부터 플라스민(plasmin) 효소활성의 표준곡선을 작성하였다. To obtain the standard curve of thrombolytic enzymes, standard plasmin solution was prepared in Tris-lysine buffer (pH 9.0) to 0.6, 1.6, 2.6, 5 unit / mL, and then fibrin plates. A standard curve of plasmin enzyme activity was prepared from the dissolved area formed by adding 20 µl to the fibrin plate.

배양액 중의 혈전용해효소는 표준곡선과 비교하여 플라스민 단위(plasmin unit)로 환산한 것이며, 아래 식을 이용하여 혈전용해효소 활성을 계산하여 혈전용해능이 우수한 균주만을 선별하였다. The thrombolytic enzyme in the culture solution was converted into plasmin units compared to the standard curve, and only strains having excellent thrombolytic activity were selected by calculating the thrombolytic enzyme activity using the following equation.

<식 1><Equation 1>

혈전용해활성(%)=(시료의 용해영역/플라스민의 용해영역)*100Thrombolytic activity (%) = (sample lysis zone / plasmin lysis zone) * 100

다. 타이로신 함량All. Tyrosine content

발효물의 펩타이드 생성정도를 측정하기 위하여 Folin phenol 시약을 이용하여 발효비지의 물 추출액 중에 존재하는 tyrosine 함량을 측정하였다. 발효물을 증류수로 5배 희석하여 추출한 시료액 0.7 mL에 0.44 M TCA (trichloroacetic acid) 0.7 mL을 첨가하여 37℃에서 30분간 반응시킨 다음, 15,000 rpm에서 10분 동안 원심 분리하여 침전물을 제거하였다. 회수된 상등액 1 mL에 0.55 M Na2CO3 2.5 mL와 Folin phenol 0.5 mL을 차례로 넣고 혼합한 후 37℃ 항온수조에서 30분간 반응시켰다. 상온에서 냉각시킨 후 반응액의 흡광도를 흡광도로 660 nm에서 측정하였다.In order to measure the degree of peptide production of the fermentation, the content of tyrosine in the water extract of fermentation bean was measured using Folin phenol reagent. 0.7 mL of 0.44 M TCA (trichloroacetic acid) was added to 0.7 mL of the sample solution, which was diluted 5 times with distilled water, and reacted at 37 ° C. for 30 minutes, followed by centrifugation at 15,000 rpm for 10 minutes to remove the precipitate. 2.5 mL of 0.55 M Na 2 CO 3 and 0.5 mL of Folin phenol were added and mixed in 1 mL of the recovered supernatant, followed by reaction for 30 minutes in a 37 ° C. constant temperature water bath. After cooling at room temperature, the absorbance of the reaction solution was measured at 660 nm as absorbance.

라. 프로테아제 활성la. Protease activity

발효물 5 g에 0.02M phosphate buffer(pH 7.0) 95 mL을 첨가한 뒤 실온에서 진탕 후 원심분리(15000 rpm, 15분)하여 상등액으로부터 효소액을 조제한 다음 효소활성을 측정하였다. Protease의 활성도는 Anson의 방법을 변형하여 측정하였다. 기질로 0.6%의 카제인 용액 0.35 mL과 효소액 0.35 mL를 e-tube에 넣고 항온수조에서 반응(37℃, 10분)시킨 다음 0.44 M TCA 용액 0.7 mL을 넣어 반응을 정지시킨 후 37℃에서 30분간 정치시켰다. 이 반응액을 원심분리(15,000rpm, 15분)한 후 여액 1 mL에 0.55 M Na2CO3 2.5 mL과 3배 희석된 Folin reagent 0.5 mL을 넣고 37℃에서 30분간 반응시킨 후 660 nm에서 흡광도를 측정하였다. 이 반응조건 하에서 1분간에 tyrosine 1 ㎍을 유리시키는 효소량을 1 unit로 하였다.After adding 95 mL of 0.02M phosphate buffer (pH 7.0) to 5 g of fermentation, the mixture was shaken at room temperature and centrifuged (15000 rpm, 15 minutes) to prepare an enzyme solution from the supernatant, and then enzyme activity was measured. Protease activity was measured by modifying Anson's method. Add 0.35 mL of 0.6% casein solution and 0.35 mL of enzyme solution to the e-tube as a substrate, react in a constant temperature water bath (37 ℃, 10 minutes), stop the reaction by adding 0.7mL of 0.44 M TCA solution, and stop at 37 ℃ for 30 minutes. Let it stand. After centrifugation (15,000 rpm, 15 minutes) of the reaction solution, 2.5 mL of 0.55 M Na 2 CO 3 and 0.5 mL of 3-fold diluted Folin reagent were added to 1 mL of the filtrate, and reacted at 37 ° C. for 30 minutes, followed by absorbance at 660 nm. Was measured. Under this reaction condition, the amount of enzyme that liberated 1 μg of tyrosine was 1 unit in 1 minute.

<실시 예 3> 청국장 발효기를 이용한 즉석 청국장 제조Example 3 Preparation of Instant Cheonggukjang Using Cheonggukjang Fermenter

엔유씨청국장 발효기의 게르마늄컵에 볶은 콩류(백태 중립종) 30g과, 상기 콩에 대하여 종균 1 중량%를 혼합하여 넣은 다음 원료무게 대비 1.0 중량배의 물을 첨가한다. 이때 첨가하는 물은 정수기의 뜨거운 물(온도 70℃)과, 이를 45℃의 온도로 식힌 물, 끓여서 90℃정도의 온도인 물을 각각 첨가하여 컵의 마개를 닫은 후 엔유씨 청국장 발효기에서 청국장 발효기능으로(온도 42℃, 16시간) 청국장을 발효하였다.30 g of roasted beans (Baektae neutral species) and 1% by weight of the seed are added to the germanium cup of the N.C. Chunggukjang fermenter, and then 1.0% of water is added to the weight of the raw material. The water to be added is hot water of the water purifier (temperature 70 ℃), water cooled to 45 ℃ temperature, boiled water to the temperature of about 90 ℃ each to close the lid of the cup and fermented Cheonggukjang in Nyu Cheonggukjang fermenter Cheonggukjang was fermented by (temperature 42 ℃, 16 hours).

볶은 콩 청국장의 관능적 특징으로는 청국장 특유의 냄새가 없이 볶은 콩의 고소한 맛이 가미가 되었고, 진(예컨대, 청국장에서 실처럼 길게 늘어지는 것)이 풍부하여 생으로 먹기 좋은 낫또 형태의 청국장을 얻을 수 있었다. 제조된 청국장의 형상은 도 3에 도시된 바와 같다.Roasted beans Cheonggukjang's sensual characteristics include the savory taste of roasted beans without the peculiar smell of Cheonggukjang, and it is rich in gin (e.g., long stretched like a thread in Cheonggukjang), so you can get natto-shaped Cheonggukjang. there was. The shape of the prepared Cheonggukjang is as shown in FIG.

이상에서는 본 발명의 바람직한 실시 예에 대해서 도시하고 설명하였으나, 본 발명은 상술한 특정의 바람직한 실시 예에 한정되지 아니하며, 청구범위에서 청구하는 본 발명의 요지를 벗어남이 없이 당해 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 누구든지 다양한 변형 실시가 가능한 것은 물론이고 그와 같은 변경은 청구 범위 기재의 범위 내에 있게 된다.In the above described and illustrated with respect to the preferred embodiment of the present invention, the present invention is not limited to the specific preferred embodiment described above, in the technical field to which the invention belongs without departing from the spirit of the invention claimed in the claims Various modifications can be made by those skilled in the art, and such changes are within the scope of the claims.

도 1 및 도 2는 본 발명에 따른 볶은 콩을 이용한 청국장의 제조 방법을 보여주는 흐름도이다.1 and 2 is a flow chart showing a manufacturing method of the Cheonggukjang using roasted beans according to the present invention.

도 3은 본 발명에 따른 볶은 콩을 이용하여 제조한 청국장의 사진이다.Figure 3 is a photograph of the cheongukjang prepared using roasted beans according to the present invention.

Claims (8)

볶은 콩을 준비하는 단계;Preparing roasted beans; 상기 볶은 콩에, 콩 무게에 대하여 1배의 물과, 콩 무게에 대하여 0.1 내지 3중량%의 바실러스속 발효균을 첨가하는 단계 및Adding to the roasted beans, water of 1 times the weight of the beans and 0.1 to 3% by weight of Bacillus sp. 발효시키는 단계로 구성된 청국장의 제조방법.Fermentation method consisting of fermented soybeans. 삭제delete 청구항 1에 있어서, 상기 바실러스속 발효균은 바실러스 종균 배양액 또는 동결건조된 바실러스 종균 분말인 것을 특징으로 하는 청국장의 제조방법.The method of claim 1, wherein the Bacillus genus fermentation is Bacillus spawn culture medium or lyophilized Bacillus spawn powder, characterized in that the production method of Chunggukjang. 청구항 1에 있어서, 상기 발효단계는 37~45℃에서 16~48시간 발효하는 것을 특징으로 하는 청국장의 제조방법.The method of claim 1, wherein the fermentation step of the fermented soybeans, characterized in that for 16 to 48 hours at 37 ~ 45 ℃. 청구항 1, 청구항 3 또는 청구항 4 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 볶은 콩에 첨가하는 물은 70℃ 이상으로 가열한 후 식힌 물인 것을 특징으로 하는 청국장의 제조방법.The method according to claim 1, wherein the water added to the roasted beans is water cooled after being heated to 70 ° C. or higher. 청구항 1, 청구항 3 또는 청구항 4 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 볶은 콩에 물을 첨가하기 전에 상기 바실러스속 발효균을 먼저 첨가하는 것을 특징으로 하는 청국장의 제조방법.The method according to any one of claims 1, 3 or 4, wherein the Bacillus sp. Fermentor is first added before adding water to the roasted beans. 청구항 1, 청구항 3 또는 청구항 4 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 볶은 콩에 바실러스속 발효균을 첨가하기 전에 상기 물을 먼저 첨가하는 것을 특징으로 하는 청국장의 제조방법.The method of claim 1, wherein the water is first added to the roasted beans before adding Bacillus sp. 청구항 1, 청구항 3 또는 청구항 4 중 어느 하나의 항에 기재된 방법으로 제조된 청국장.Cheonggukjang prepared by the method according to any one of claims 1, 3 or 4.
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