KR100909846B1 - Ｂｖｄｖ 바이러스-유사 입자 - Google Patents

Ｂｖｄｖ 바이러스-유사 입자 Download PDF

Info

Publication number
KR100909846B1
KR100909846B1 KR1020027017425A KR20027017425A KR100909846B1 KR 100909846 B1 KR100909846 B1 KR 100909846B1 KR 1020027017425 A KR1020027017425 A KR 1020027017425A KR 20027017425 A KR20027017425 A KR 20027017425A KR 100909846 B1 KR100909846 B1 KR 100909846B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
leu
thr
gly
val
lys
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
KR1020027017425A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20030032969A (ko
Inventor
스크라프토비아스
리즈세위지크프랑시스쿠스안토니우스마리아
Original Assignee
바이엘 악티엔게젤샤프트
아이디-렐리스타드 비.브이.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 바이엘 악티엔게젤샤프트, 아이디-렐리스타드 비.브이. filed Critical 바이엘 악티엔게젤샤프트
Publication of KR20030032969A publication Critical patent/KR20030032969A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR100909846B1 publication Critical patent/KR100909846B1/ko
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C12N7/04—Inactivation or attenuation; Producing viral sub-units
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5258—Virus-like particles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/24011—Flaviviridae
    • C12N2770/24311—Pestivirus, e.g. bovine viral diarrhea virus
    • C12N2770/24322—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/24011—Flaviviridae
    • C12N2770/24311—Pestivirus, e.g. bovine viral diarrhea virus
    • C12N2770/24323—Virus like particles [VLP]

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

본 발명은 소바이러스-유사 설사바이러스(bovin viral diarrhea virus)성 입자, BVDV 바이러스-유사 입자를 형성하기 충분한 BVDV 구조 단백질들의 폴리프로테인을 코딩하는 것에 상응하는 폴리시스트론 RNA 및 DNA, BVDV 바이러스-유사 입자의 어셈블리(assembly)를 위한 인자 및 구조 단백질을 코딩하는 바이러스 벡터, BVDV 바이러스-유사 입자를 포함하는 백신, 진단용 키트 및 BVDV 바이러스-유사 입자를 제조하는 방법에 관한 것이다.

Description

ＢＶＤＶ 바이러스-유사 입자{ＢＶＤＶ virus-like particles}
본 발명은 소바이러스성 설사바이러스(bovin viral diarrhea virus)성 바이러스-유사 입자, BVDV 바이러스성 입자를 형성하기 충분한 BVDV 구조 단백질들의 폴리프로테인을 코딩하는 폴리시스트론 RNA 및 그에 상응하는 DNA, BVDV 바이러스성 입자의 어셈블리(assembly)를 위한 인자 및 구조 단백질을 코딩하는 바이러스 벡터, BVDV 바이러스성 입자를 포함하는 백신, 진단용 키트 및 BVDV 바이러스성 입자를 제조하는 방법에 관한 것이다.
소바이러스-유사 설사바이러스(BVDV)가 소에서 소바이러스-유사 설사의 병인체이고 전세계적으로 넓은 분포도 및 90% 정도의 높은 유병률을 갖는다.
BVDV는 플라비바이러스(Flaviviridae)과의 페스티바이러스(pestivirus) 속의 구성원이다[Horzinek (1991), Pestiviruses - taxonomic perspectives, Arch. Virology Suppl. 3, 55-65]. BVDV는 하나의 큰 폴리프로테인으로 해독될 수 있는 하나의 오픈 리딩 프레임을 코딩하는 대략 12.5 킬로 베이스(kb)의 (+)-스트랜드 RNA 게놈을 갖는다[Collet et al. (1988), protein encoded by bovin viral diarrhea virus: the genomic organisation of a pestivirus, Virology 165, 200-208]. BVDV 비리온은 당단백질을 포함하는 외피에 의해 둘러싸인 뉴클레오캡시드에 적합한 게놈 RNA로 구성된다.
구조 단백질, 뉴클레오캡시드 단백질 (N) 및 3개의 외피 당단백질 (Erns 또는 gp48, E1 또는 gp25 및 E2 또는 gp53)은 폴리프로테인의 N 말단 끝에서 가까운 순서대로 발견된다. 모든 3개의 당단백질이 시그날 펩티드 서열에 우선하고 소포체(ER)의 루멘에서 숙주 시그날 펩티다제에 의해 폴리프로테인으로부터 유리된다.
관련된 플라비바이러스(Flaviviridae), 즉 C형 간염 바이러스에 대하여 구조 단백질을 코딩만하는 게놈 분절의 발현은 바이러스-유사 입자를 형성하기에 충분하다[Baumert et al. (1998), Hepatitis C virus structure protein assemble into virus-like particles in insect cells, J. Virol. 72, 3827-3836].
소 허피스바이러스 1(BHV-1)은 감염성 소 비기관지염(IBR) 및 감염성 농포성 외음부질염(IPV) 및 감염성 귀두염(IBP)의 병인체이다. BHV-1은 전세계적으로 높은 유병율로 소에서 발견된다.
BHV-1은 알파허피스바이러스의 구성원이다. 약 136킬로 염기쌍의 더블 스트랜드 DNA 게놈을 갖고, 약 70개의 유전자(이중 약 30개의 유전자는 바이러스 복제에 비필수적이다)를 코딩하다. 비필수 당단백질 E (gE) 유전자의 결실을 갖는 자발적 돌연변이체를 안전하고 유효한 마커 백신에 사용한다[Kaashoek et al. (1994), A conventionally attenuated glycoprotein E-negative strain of bovin herpesvirus type 1 is an efficacious and safe vaccine, Vaccine 12, 439-444].
BVDV 유도 질환을 예방하기 위한 백신은 불활성화된 BVDV 균주, 분리된 BVDV 당단백질에 기초한 서브유니트 백신, 약독화된 BVDV 균주[reviewed by Van Oirschot et al. (1999), Vaccination of cattle against bovin viral diarrhoea, Vet. Microbiol. 64, 169-183], DNA 백신[Reddy et al. (1999), Comp Immunol Microbiol Infect Dis. 22, 231-246; Harpin et al. (1999), Vaccination of cattle with a DNA plasmid encoding the bovin viral diarrhoea virus major glycoprotein E2, J. Gen. Virol. 80, 3137-3144], 또는 벡터 백신에 기초한다. 약독화된 BVDV 균주에 기초한 백신은 면역억제 및 자궁내 감염을 유발할 수 있고[Roth & Kaeberle (1983), Suppression of neutrophil and lymphocyte function induced by a vaccinal strain of bovin viral diarrhea virus with or without administration of ACTH, Am. J. Vet. Res. 44, 2366-2372; Liess et al. (1984), Studies on transplacental transmissibility of a bovin virus diarrhea (BVD) vaccine virus in cattle, Zentrbl. Veterinarmed. Reihe B 31, 669-681] 모체 항체의 존재하에서는 덜 유효할 수 있다.
불활성화된 BVDV에 기초한 백신 또는 서브유니트 백신은 항원이 세포내에서 생산되지 않음으로써 면역계의 T 세포 구획에 덜 효과적으로 제시되기 때문에 덜 유효할 수 있다. 예를 들면, 3개의 바쿨로바이러스(baculovirus) BVDV E2 서브유니트 백신중 2개는 양 모델에서 태아 BVDV 감염을 예방하지 못했다[Bruschke et al. (1997), A subunit vaccine based on glycoprotein E2 of bovin virus diarrhea virus induces fetal protection in sheep against homologous challenge, Vaccine 15, 1940-1945].
DNA 백신 및 벡터 백신는 단점이 없지만 현재 사용되고 있는 DNA 및 벡터 백신은 구조 단백질의 일부만을 발현시키고 더욱 면역성인 바이러스-유사 입자를 형성하지 못한다. 예를 들면, WO 95/12682은 BHV-1 균주의 TK 좌위에서 BVDV E2만의 발현을 기술한다[cf. also Kweon et al. (1999), bovin herpesvirus expressing envelop protein (E2) of bovin viral diarrhoea virus as a vaccine candidate, J. Vet. Med. Sci. 61, 395-401].
BVDV는 항원변이를 보이고 여러 항원 그룹으로 구분될 수 있다(BVDV IA 및 IB, 및 BVDV II). 이 항원변이는 주로 E2의 서열 변이에 기초한다[van Rijn et al. (1997), Subdivision of the pestivirus genus based on envelop protein E2, Virology 237, 337-348].
또한 덜 가변성인 N, Erns 및 E1 단백질을 발현시키는 백신 [Elahi et al. (1999), Induction of humoral and cellular immune responses against the nucleocapside of bovin viral diarrgea virus by an adenovirus vector with an inducible promotor, Virology 261, 1-7]보다 교차보호에서 단 한가지 형태의 BVDV의 E2에 기초한 백신이 더욱 한정된다[Bolin and Ridpath (1996), glycoprotein E2 of bovin viral diarrgea virus expressed in insect cells provides calves limited protection from systemic infection and disease, Arch. Virol. 141, 1463-1477].
본 발명은 BVDV 바이러스-유사 입자를 제공한다.
본 명세서에서 사용되는 바 용어 "바이러스-유사 입자"는 그의 감염성 야생형 카운터파트와 공통되는 구조적 성질을 대부분 갖는 바이러스의 구조 단백질 대부분 또는 모두로 구성되는 입자를 언급한다. 그러나 숙주 세포와 상호작용하는 경우 적절한 핵산 서열이 이 입자에 존재하지 않기 때문에 바이러스-유사 입자는 자손 바이러스를 생산하지 않는다. BVDV 바이러스-유사 입자의 경우, 뉴클레오캡시드는 비어있거나 관련이 없는 RNA를 포함할 수 있지만, 그의 전체적인 구조는 야생형 뉴클레오캡시드와 유사하고 둘러싸는 외피는 야생형 BVDV에서 발견되는 것과 같은 동일한 막 당단백질 E1 및 E2 및 동일한 막 관련 단백질 Erns을 포함한다.
특히, 본 발명에 따른 바이러스성 입자는 BVDV 구조 단백질 N, Erns, E1 및 E2를 포함한다. 본 발명은 다양한 자연발생 BVDV 균주 예로서 BVDV I A 형 균주(NADL 균주로 나타냄), BVDV I B형 균주(Osloss 균주로 나타냄) 및 세포병변 균주 87-2552를 포함하는 BVDV II형 균주(890 균주로 나타냄)[Reddy et al. (1995), Antigenic differences between a field isolate and vaccine strains of bovin viral diarrgea virus, J. Clin. Microbiol. 33, 2159-2161] 및 본 명세서중 실시예에서 사용되는 BVDV type I 균주 PT810으로부터 유래될 수 있는 BVDV 바이러스성 입자를 주시한다. 본 발명은 또한 자연발생 단백질과 동일하지 않지만 돌연변이 구조 단백질이 바이러스성 입자로 어셈블링 될 수 있는 능력을 유지하는 하는 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 포함하는 BVDV 구조 단백질을 포함하는 BVDV 바이러스성 입자를 주시한다.
BVDV 구조 단백질은 해독후 프로세싱되는 폴리프로테인으로부터 유도된다. 본 발명에 따른 BVDV 바이러스-유사 입자를 제조하기 위하여 DNA 주형으로부터 구조 단백질을 합성하는 정보를 포함하는 숙주 세포를 사용하는 것이 바람직하다. BVDV 구조 단백질의 폴리프로테인을 코딩하는 자연발생된 RNA로부터 제조된 cDNA는 DNA 주형으로부터 전사된 mRNA가 세포 핵에서 스플라이스좀에 의해 인식되는 아주 많은 스플라이스 부위를 포함하고 있기 때문에 작용하지 못한다. 상기 cDNA로부터 전사된 RNA는 해독되기 전에 파괴될 것이다.
따라서, 본 발명은 BVDV 구조 단백질 N, Erns, E1 및 E2를 코딩하는 리보뉴클레오티드 서열을 포함하고, 세포 핵중 그의 폴리프로테인 코딩 부분내에서의 스플라이싱이 거의 없거나 전혀 없는 폴리시스트론 RNA 분자를 제공한다.
본 발명에 따른 RNA 분자의 바람직한 일례는 서열번호 2에 따른 아미노산 서열을 갖는 폴리프로테인을 코딩하는 리보뉴클레오티드 서열을 포함하고 그의 폴리프로테인 코딩 부분내 강력한 포텐셜(potential) 스플라이싱 부위, 즉, -22 이상의 스코어를 갖는 포텐셜 스플라이스 수용 부위 및 -13.1 이상의 스코어를 갖는 포텐셜 스플라이스 공여 부위가 존재하지 않는 RNA로 표시된다.
본 발명에 따른 RNA 분자의 가장 바람직한 일례는 서열번호 1의 뉴클레오티드 17부터 뉴클레오티드 2710의 폴리뉴클레오티드 서열에 상응하는 리보뉴클레오티드 서열을 포함하는 RNA 분자로 표시된다.
본 발명의 RNA 분자는 또한 본 발명에 의해 제공되는 상응하는 DNA 단편으로 부터 수득될 수 있다.
본 발명에 따른 DNA 단편은 BVDV 구조 단백질 N, Erns, E1 및 E2를 코딩하지만, 강력한 포텐셜의 스플라이스 부위를 포함하지 않는다. 스플라이스 부위는 엑손-인트론 결합(junctions)(스플라이스 공여자 서열) 또는 인트론-엑손 결합(스플라이스 수용 서열)이고 핵중 스플라이스좀에 의해 프리-mRNA로부터 인트론을 제거하여 엑손상에 위치하는 코딩 부위를 함께 융합하여 완전한 오픈 리딩 프레임을 형성하기 위하여 사용되는 진핵세포 mRNAs중 인식 서열이다. BVDV RNA가 통상 세포질중 머물러 있기 때문에 BVDV cDNA는 사용되지 않는 '우발성(accidental)' 스플라이싱 시그날을 포함한다. BHV1과 같은 바이러스성 벡터에 의해 BVDV cDNA를 발현시켜, RNA는 핵내에서 생성되고 스플라이스좀에 의해 프로세싱 될 것이다[Shiu et al. (1997), The presence of RNA splicing signals in the cDNA construct of the E2 gene of classical swine fever virus affected its expression, J. Virol. Methods 69, 223-230].
N, Erns, E1 및 E2를 코딩하는 BVDV cDNA로부터 대부분의 (포텐셜) 스플라이싱 시그날를 제거하기 위하여, PC/유전자 버전 2.32의 핵산 및 단백질 서열 분석 소프트웨어 시스템(Jan. 1989)을 사용할 수 있다. 이 소프트웨어 프로그램에서 Staden의 방법[(1984), Computer methods to locate signals in nucleic acid sequence, Nucl. Acids. Res. 12, 505-519]에 기초하는 임의의 "스플라이스 결합"이 본 발명에서 사용하기에 적절하다.
본 발명에 따른 DNA 단편의 바람직한 일례는 서열번호 1에 따른 뉴클레오티드 17 내지 뉴클레오티드 2710의 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA로 표시된다.
본 발명은 추가로 BVDV 바이러스-유사 입자를 생성하기에 적절한 DNA 작제물을 제공한다. BVDV 구조 단백질이 숙주 세포에서 발현되도록 하기 위하여 DNA는 시스-조절 서열에 작동가능하게 연결된다. 상기 조절 서열은 세포내에서 RNA 폴리머라제에 결합할 수 있고, 하류(3' 방향) 코딩 서열의 전사를 개시시킬 수 있다. 본 발명을 한정하기 위한 목적으로 시스-조절 서열의 3' 말단에 Kozak 보존 서열 및 코딩 서열의 해독 개시 코돈(ATG)이 이어지고 상기 서열은 검출가능한 배경 수준으로 전사를 개시할 수 있는 최소한의 염기 또는 요소를 포함하도록 상류(5' 방향)로 신장된다. 시스-조절 서열중 전사 개시 부위 및 RNA 폴리머라제 II 복합체를 결합시키는 단백질 결합 모티프가 발견될 것이다. 상기 조절 서열의 선택은 본 분야의 기술자에게 자명하다. 적절한 시스-조절 서열은 진핵세포 유전자, 바람직하게 포유동물로부터, 또는 포유동물을 감염시키는 바이러스로부터 유래된 유전자로부터 유래될 수 있다. 예로서 마우스 백혈병 바이러스(MuLV) 말단의 긴 반복서열(MLV-LTR)과 같은 레트로바이러스의 말단의 긴 반복서열상에 위치하는 시스-조절 서열 및 원숭이 바이러스 40 (SV40) 프로모터이다.
본 발명에 따른 DNA 작제물의 바람직한 일례에서 BVDV 구조 단백질의 폴리프로테인을 코딩하는 DNA는 인간 사이토메갈로바이러스 조기 1 프로모터에 작동가능하게 연결된다.
본 발명에 따른 DNA 작제물은 추가로 바람직하게 코딩 부위의 3' 말단에 종결자 서열을 포함한다. 진핵세포중 RNA 폴리머라제 II에 의한 mRNA 합성은 통상 'TATA-Box' 하류로부터 근거리에 정확한 개시점을 갖지만, 정확한 종결 시그날은 갖지 않는다. 전사 부위의 3' 말단의 상류에서 발견되는 poly(A) 시그날은 mRNA 3' 말단의 절단 및 폴리아데닐화에서 중요한 기능을 하고[Keller (1995), No end yet to messenger RNA 3' processing, Cell 81, 829-832] 전사와 종결과 관련되지만 poly(A) 시그날의 하류 서열은 mRNA 전사의 종결에서 중요한 작용을 하는 것으로 판단된다. 이 서열은 전사 복합체를 지연시키거나 중지시키는 것과 관련된다[Vandenbergh (1991), An apparent pause site in the transcription unit of the rabbit alpha-globin gene, J. Mol. Biol. 220, 255-270]. 유효한 종결 및 폴리아데닐화에 의해 mRNA는 안정성을 얻기 때문에, 소 성장 호르몬 유전자의 하류에서 발견되는 것과 같은 종결 시그날은 자주 진핵 세포의 발현 벡터에 포함된다.
본 발명의 DNA 작제물의 바람직한 일례에서 BVDV 구조 단백질의 폴리프로테인을 코딩하는 DNA에 소 성장 호르몬 종결 서열이 잇따른다.
실제 관점으로부터 바이러스 벡터의 용도는 하기 이유에서 바람직한다:
·바이러스 벡터는 삽입된 유전자(들)상에서 고수준으로 코딩되는 단백질을 발현시킬 수 있고;
·재조합 바이러스는 서브유니트 백신보다 저비용으로 적절한 숙주 세포에서 고 역가로 생성될 수 있고;
·숙주에 투여할 때 재조합 바이러스는 삽입된 유전자(들) 상에서 코딩되는 단백질을 발현시키고, 숙주내에서 상기 단백질을 다량 발현시키고;
·삽입된 유전자(들)에 의해 코딩되는 단백질은 세포내에서 발현되고, 따라서 유효하게 MHC I형 분자에 의해 제시되어 숙주의 세포성 T 세포를 자극시킬 수 있고;
·BVDV 게놈의 모든 구조 단백질은 변형된 생(live) 바이러스 백신과 유사하게 발현될 수 있고 바이러스성 입자를 형성할 수 있지만, 야생형으로의 역전(reversion)과 같은 상기 백신에서 통상적으로 발생하는 위험이 없고;
·생 백신은 통상적으로 죽은(killed) 백신보다 더욱 면역원성을 가진다.
본 발명은 BVDV 바이러스-유사 입자의 어셈블리(assebly)에 필유한 BVDV 구조 단백질 및 인자를 코딩하는 바이러스 벡터를 제공한다.
더욱 바람직한 일례로 바이러스 벡터는 송아지 허피스바이러스 1(BHV-1)로 표시된다.
추가의 바람직한 일례로 당단백질 E (gE)를 코딩하는 서열내 결실을 포함하거나 gE를 코딩하는 게놈 영역이 완전하게 결핍되어 있는 BHV-1 벡터는 BVDV 바이러스-유사 입자의 제조에 사용된다. BHV-1 벡터의 한 예는 수탁번호 I-1213하에 프랑스, 인스티투트 파스테르(Institut Pasteur, France)에 기탁된 Difivac-1이다. 상기 벡터 사용으로 이중 마커 성질을 갖는 BHV-1/BVDV 백신을 생산할 수 있다. 본 명세서에 기재된 바와 같이 BHV-1/BVDV 백신으로 면역화된 숙주, 특히 소는 BHV-1 gE 또는 BHV-1gI/gE 복합체 및 BVDV 비구조성 단백질, 특히 NS3 또는 p80를 제외하고 BHV-1 및 BVDV에 대하여 항체를 형성한다. 체액, 특히 비액 샘플 및 혈청 샘플 에서 항-BHV-1gE 또는 항-BHV-1gI/gE 항체 및/또는 항-BVDV 항체의 존재를 측정하여 야생형 BHV-1 및/또는 야생형 BVDV로 감염된 숙주, 특히 소를 이 BVH-1/BVDV 백신으로 백신화된 숙주로부터 선별할 수 있다.
본 발명에 따른 바이러스 벡터의 가장 바람직한 일례는 2000년 6월 8일 콜렉션 내셔날 드 컬쳐 드 마이크로오가니즘스, 인스티튜트 파스테르(25, Rue du Docteur Roux, F-75724 Paris, France)에 기탁된 수탁번호 CNCM I-2488하에 기탁된 A9-SV-1F9(Difivac-1의 gE 좌위중 합성된 BVDV 캡시드; Erns, E1 및 E2)이다.
본 발명은 또한 상기 언급된 바이러스 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 바이러스 벡터를 감염 또는 형질감염에 의해 숙주 세포내로 삽입할 수 있다. 적절한 숙주세포의 예는 배아 소 기관(EBTr) 세포 또는 Madin-Darby 소 신장(MDBK) 세포이다.
본 발명은 또한 BVDV 바이러스-유사 입자 및 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함하는, BVDV 유도 질환에 대하여 숙주를 면역화시키는 백신을 제공한다. 본 발명에 유용한 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제의 예는 안정화제 예를 들면, 탄수화물(예를 들면 소르비톨, 만닛톨, 전분, 수크로오스, 글루코오스,덱스트란), 알부민 또는 카제인과 같은 단백질, 소 혈청 또는 탈지유와 같은 제제를 포함하는 단백질 및 완충액(예를 들면 포스페이트 완충액)을 포함한다. 임의로 어쥬번트 활성을 갖는 하나 이상의 화합물을 백신에 첨가할 수 있다. 적절한 어쥬번트는 예를 들면 수산화알루미늄, 포스페이트 또는 옥사이드 및 유성 유화제 예로서 사포닌을 포함한다.
투여되는 유용한 유효량은 나이, 체중, 투여 방식 및 백신화시키고자 하는 병원체의 유형에 따라 달라질 것이다. 적절한 투여량은 예를 들면 약 103-107pfu/동물일 수 있다.
본 발명에 따른 백신은 비강내, 진피내, 피하내 또는 근육내 투여될 수 있다.
본 발명에 따른 바람직한 백신은 백신화된 숙주에서 BVDV 바이러스-유사 입자를 세포내에서 생성하고 BVDV 유도 질환에 대하여 예방하기 위한 유익한 면역 반응을 유도하는 BHV-1/BVDV 재조합 바이러스 벡터를 포함한다. 또한 상기 백신은 BHV-1 유도 질환을 예방하고, gE가 없는 BHV-1을 벡터로 사용하는 경우, 상기 백신으로 백신화된 숙주는 BHV-1 또는 BVDV로 감염된 숙주로부터 선별될 수 있다.
본 발명은 또한 항-BVDV 항체의 존재 및/또는 부재를 검출, 특히 생물학적 샘플 예로서 생물학적 체액 샘플, 특히 비액 샘플 또는 혈청 샘플중 항-BVDV 및 항-BHV-1 항체의 존재 및/또는 부재를 검출하기 위한 진단용 키트를 제공한다. 이 진단 시험을 사용하여 야생형 바이러스로 감염된 숙주 및 본 명세서에 기재된 BHV-1/BVDV 백신만으로 백신화된 숙주를 선별한다.
이 진단 시험에서 검출된 항-BHV-1 및/또는 항-BVDV 항체는 백신중 존재하지 않는 바이러스 항원, 특히 BHV-1gE 및 BHV-1 gI/gE 복합체 및 BVDV 비구조 단백질, 특히 NS3 또는 p80과 반응한다.
본 발명은 또한
(a) 상기 설명된 바와 같은 DNA 작제물을 BVDV 바이러스-유사 입자의 어셈블리를 위한 인자를 코딩하는 바이러스 벡터내로 삽입하고,
(b) DNA에 의해 코딩되는 폴리프로테인을 발현시킬 수 있는 적절한 숙주 세포를 감염시키고
(c) 적절한 조건하에 숙주 세포를 배양하는 것을 포함하는, BVDV 바이러스-유사 입자를 제조하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한
(a) 적절한 숙주 세포를 상기 설명된 바와 같은 벡터로 감염시키고
(b) 적절한 조건하에 숙주 세포를 배양하는 것을 포함하는 BVDV 바이러스-유사 입자를 제조하는 방법을 제공한다.
본 발명은 추가로
(a) 상기 설명된 바와 같은 DNA 작제물을 BHV-1 게놈내로 삽입하고,
(b) 벡터에 의해 코딩되는 폴리프로테인을 발현시킬 수 있는 적절한 숙주세포를 감염시키고,
(c) 적절한 조건하에 숙주 세포를 배양하는 것을 포함하는, BVDV 바이러스-유사 입자의 형성을 위한 모든 구조 단백질을 코딩하는 BHV1/BVDV 재조합 바이러스를 제조하는 방법을 제공한다.
감염 배양액의 상층액에 세포, 예로서 EBTr 세포 또는 MDBK 세포의 모노레이어를 가하여 적절한 숙주 세포를 재조합 바이러스로 감염시킬 수 있다. 예를 들면, 배지를 제거한 후 150 cm2 조직 배양 플라스크중 모노레이어상에 1 내지 3㎖의 바이러스 포함하는(103 내지 107 pfu/㎖) 배양 배지를 가할 수 있다. 2시간동안 인큐베이션시킨 후 신선한 조직 배양 배지를 30㎖ 이하로 가할 수 있다. 감염 2 내지 3일 후 전체 세포병변효과(cpe)가 가시화될 것이고 108 pfu/㎖이 배지에서 관찰될 수 있다.
BVDV 구조 단백질에 대한 코딩 영역의 작제
최근의 BVDV 단리물의 구조 단백질의 아미노산 서열을 측정하기 위하여 최근 유럽에서 분리된 BVDV I형 균주 PT810의 5'쪽 1/2의 뉴클레오티드 서열을 표준 방법을 사용하여 확인하였다.
뉴클레오캡시드 단백질 N 및 당단백질, Erns, E1 및 E2의 코딩 영역은 유추된 아미노산 서열을 공개된 BVDV 서열과 비교하여 동정되었다. 코딩 영역은 핵내에서 BHV-1에 의해 발현되는 경우 스플라이소좀에 의해 인식되고 프로세싱될 수 있는 서열(스플라이싱 시그날)을 포함하였다. 따라서, 코딩 포텐셜은 영향을 받지 않는 반면 대부분의 (포텐셜) 스플라이싱 시그날은 제거되는 방식으로 상기 서열은 적응하였다. 적응 서열은 합성적으로 제작되었고 N 단백질의 첫번째 아미노산을 제외하고 원 BVDV 서열과 동일한 아미노산을 코딩한다.
BVDV 균주 PT810에서 N 단백질의 아미노산은 세린이지만 합성 코딩 영역의 유효한 해독을 위하여 이 아미노산을 메티오닌으로 대체하고 Kozak 보존 서열에 우선하였다. 단백질 코딩 영역을 종결시키기 위하여 그의 막 영역 바로 뒤에 E2 단백질의 추정의 카복시-말단 종결부뒤에 종결 코돈을 삽입하였다. 클로닝을 용이하게 하기 위하여 Stu I 제한효소에 의해 인식되는 서열을 총 길이가 2715 뉴클레오티드인 합성 서열의 양측에 첨가하였다. 참조 서열번호 1. 더블 스트랜드 DNA 단편을 합성하고 원핵세포 플라스미드 블루스크립트에서 클로닝하고 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli) 박테리아에서 증식시켰다. 참조 도 1.
Difivac-1의 gE 좌위에 대한 BHV-1/BVDV 재조합/발현 카세트 작제
gE 결실 Za 균주(WO 92/21751에서 Difivac-1로 개명됨)의 Us 영역에서 밝혀진 재조합 분석을 통해 당단백질 E 유전자 및 이웃하는 US9 유전자 및 US1.5 유전자 일부의 수반되는 이중 역위가 나타났다. 또한 이 분석을 통하여 재조합점의 위치가 나타났다[Rijsewijk et al. (1999), Spontaneous BHV-1 recombinants in which the gI/gE/US9 region is replaced by a duplication/inversion of the US1.5/US2 region, Arch. Virol. 144, 1527-1537]. 참조 도 2.
Za 균주의 게놈중 이질성 유전자를 gE 결실 부위에 또는 근접하게 삽입하기 위하여 재조합 카세트를 작제하였다. 이 목적으로 gI 유전자 부분을 코딩하고 Za 재조합점의 40 bp 상류에서 종결하는 0.8 킬로 염기쌍 Bsa I 단편 및 Za 재조합점의 40bp 하류에서 개시하고 US1.5 유전자 부분을 코딩하는 0.7 킬로 염기쌍 Bsa I 단편을 그의 원 배향으로 pUC18에서 클로닝하였다. 이 작제물을 pM400으로 명명하고 재조합 단편사이에 발현 카세트 삽입을 위한 유일한 Sma I 부위를 갖는다. 참조 도 3.
pM400의 Sma I 부위에서 플라스미드 pVR1012로부터의 1.9 킬로 염기쌍 Bal I - Acc65 I 단편을 측면에 위치하는 재조합 단편과 동일한 배향으로 그의 시스-조절 서열과 함께 클로닝하였다. 시스-조절 서열은 인간 사이토메갈로바이러스 조기 1 프로모터(hCMVIEp.) 및 그의 5' 비해독 리더(5'UT), 및 소 성장호르몬 종결 서열(BT)이다. 생성된 작제물은 pS205로 명명되고 프로모터 영역 및 종결 영역사이에 유일한 EcoR V 부위를 갖는다.
pS205의 EcoR V 부위에서 BVDV 뉴클레오캡시드 단백질 N 및 BVDV 당단백질, Erns, E1 및 E2를 코딩하는 2707 염기쌍 Stu I 단편을 프로모터/종결자 및 측면에 위치하는 재조합 서열과 동일한 배향으로 클로닝하였다. 이 BHV-1/BVDV 재조합/발현 카세트를 pS318로 명명하였다. 참조 도 3.
BVDV 구조 단백질에 대한 코딩 영역을 발현하는 BHV-1 재조합 바이러스의 작제 및 분리
BVDV 뉴클레오캡시드 단백질 N 및 BVDV 당단백질, Erns, E1 및 E2를 발현하는 BHV-1/BVDV 재조합체(도 4에 나타냄)를 작제하기 위하여, 선형 pS318 플라스미드 및 Za 균주의 게놈 DNA를 표준 방법에 따라 소 세포에 동반형질감염시키고(cotranfection) 동반형질감염 48시간후 세포를 냉동/해동시켜 추정의 재조합 바이러스로부터 유리시켰다. 이 재조합 바이러스를 분리하기 위하여 세포 조각(debris)을 펠릿화하고 상층액을 사용하여 96개의 웰 플레이트상에서 소 세포를 감염시키고 항-BVDV E2 MAb 166로 면역염색법을 사용하여 BVDV 양성 웰을 확인하였다. BVDV E2 양성 웰의 배지내 바이러스를 희석하여 또다른 96개의 웰 마이크로플레이트상에서 소 세포를 감염시키고 BVDV E2 양성 싱글 플라크로부터의 바이러스는 정제된 재조합체를 수득하기 위하여 세번 플라크 정제(plaque purified)되었다. 이 방법으로 수득한 재조합체중 하나를 A9-SV-1F9로 명명하고 MDBK 세포상에서 8회 계대하고 6개의 상이한 소 세포주 패널상에서 발현의 안정성을 시험하였다. 참조 도 5. 8회의 계대후에도 시험된 모든 유형의 소 세포에서 실질적으로 모든 플라크는 BVDV E2 양성으로 밝혀졌다. MDBK 세포에서 BVDV E2 양성 플라크의 퍼센트를 측정하고 8회의 계대후에서 여전히 90% 이상임이 밝혀졌다.
서열 목록 및 도면의 설명
서열번호 1 및 2
BVDV 균주 PT810의 단백질 N, Erns, E1 및 E2를 코딩하는 합성 DNA 단편 PT810AM10의 2715개의 긴 뉴클레오티드 서열을 나타낸다. DNA 단편 양측에 제한효소 Stu I의 인식서열을 첨가하고 개시 코돈(ATG) 상류에 Kozak 보존 서열을 삽입한다. PT810AM10 서열은 통상의 유전자 코드를 사용하여 해독되고 코딩되는 아미노산 서열은 뉴클레오티드 서열밑에 3문자로 표시되었다. 오픈 리딩 프레임에 의해 코딩되는 모든 아미노산은 오픈 리딩 프레임의 첫번째 아미노산을 제외하고 BVDV 균주 PT810에서 발견되는 것과 일치한다. PT810에서 첫번째 아미노산은 세린 잔기이지만 PT810AM10에서 메티오닌 잔기로 바뀌었다. 단백질 코딩 영역 말단의 종결 코돈은 DNA 단편 말단의 Stu I 부위와 중첩한다.
서열번호 3 및 4
단백질 N을 코딩하는 서열번호 1의 분절.
서열번호 5 및 6
단백질 Erns을 코딩하는 서열번호 1의 분절.
서열번호 7 및 8
단백질 E1을 코딩하는 서열번호 1의 분절.
서열번호 9 및 10
단백질 E2를 코딩하는 서열번호 1의 분절.
도 1
플라스미드 BSM584의 구조. 2715개 뉴클레오티드의 긴 DNA 단편 PT810AM10 를 원핵세포 플라스미드 블루스크립트에서 클로닝하였다. 플라스미드 BSM584를 제한효소 Stu I로 분해하여 2707개 뉴클레오티드의 긴 단편을 유리시켜 BHV-1 재조합/발현 카세트 pS205내로 삽입하였다. 참조 도 3.
도 2
상단부: 벡터로서 사용된 Za 또는 Difivac-1 균주에서 발견되는 BHV-1 게놈 및 재조합체의 구조도. 야생형 BHV-1의 길이는 대략 136 킬로 염기쌍이고 길고(L) 짧은(S) 분절을 갖는다. 짧은 단편은 사선 박스에 표시된 역위 반복서열에 접하는 유일한 영역을 갖는다.
중앙부: 유일한 짧은(Us) 영역에서 8개의 오픈 리딩 프레임이 인식되었다: US1.5, US2, PK, gG, gD, gI gE 및 US9.
하단부: 자연발생적 gE 결실 돌연변이 Za 또는 Difivac-1(Dif.)에서 gE 및 US9 유전자는 결실되고 US1.5 유전자 일부는 대신 중복된다. 재조합점을 화살표로 나타낸다. 이 Difivac-1 돌연변이체는 WO 92/21751 및 Rijsewijk등의 [Arch. Virol. (1999)144, 1527-1537]에 기술되어 있다.
도 3
재조합/발현 카세트 플라스미드 pS318의 도.
Difivac-1 균주로부터 분리된 두개의 gE 좌위의 상류측으로부터의 0.8 킬로 염기쌍 Bsa I (B) 단편 및 gE 좌위의 하류측으로부터의 0.7 킬로 염기쌍 Bsa I 단편을 각각 원핵세포 플라스미드 pUC18의 Hinc II 부위 및 EcoR I 부위에서 클로닝하였다. 0.8 kbp Bsa I 단편을 Hinc II 부위내로 삽입하기 위하여 Bsa I 단편을 둔단화하였다(blunt ended). 0.7 kbp Bsa I 단편을 EcoR I 부위내로 삽입하기 위하여 EcoR I 링커를 표준방법을 사용하여 이 단편에 첨가하였다. 생성된 플라스미드를 pM400으로 명명하였다. pM400의 Sma I 부위에서 인간 사이토메갈로바이러스의 IE1 프로모터/인핸서(hCMVIEp.) 및 동일한 프로모터 의 5' 비해독 영역(5'UT) 및 소 성장 호르몬 종결자 (BT) 서열을 포함하는 플라스미드 pVR1012로부터 수득한 단편을 삽입하였다. 생성된 플라스미드를 pS205로 명명하였다. pS205의 유일한 EcoR V 부위내로 플라스미드 BSM584로부터의 2707 bp Stu I 단편을 삽입하였다. 생성된 클론을 플라스미드 pS318로 명명하고 이 플라스미드를 동반형질감염 시험에 사용하여 BVDV 유전자를 Za(Difivac-1)의 gE 좌위내로 재조합하였다. 참조 도 4.
도 4
BVDV 균주 PT810의 모든 구조 단백질을 코딩하는 BHV-1/BVDV 재조합 A9-SV-1F9의 도. 상부에서 BHV-1 게놈의 구조가 표시되었다. 중앙에는 모든 유전자의 위치와 함께 유일한 짧은 영역을 포함하는 EcoR I 단편 및 하단부에는 BVDV 균주 PT810의 구조 단백질을 코딩하는 2707 bp의 긴 단편과 함께 BVDV 발현 카세트를 나타내었다. BVDV 오픈 리딩 프레임보다 인간 사이토메갈로바이러스 IE1 프로모터/인핸서 영역(hCMVIEIp.) 및 이 프로모터의 5' 비해독(5'UT) 리더가 우선하고 BVDV 오픈 리딩 프레임은 소 성장 호르몬 종결자 서열(BT)이 이어진다. 카세트를 gE 좌위에서 이 게놈에서 발견되는 재조합 부위의 40bp 상류의 Difivac-1 게놈내로 주위 유전자와 동일한 배향으로 삽입하였다.
도 5
BHV-1/BVDV 재조합 A9-SV-1F9로 감염되고 감염후 4일간 항-BVDV E2 MAb 166로 염색된 MDBK 세포 모노레이어의 IPMA. 주위 세포는 염색되지 않는 반면 감염된 세포는 항체에 의해 염색된 둥근 플라크를 형성한다.
<110> Bayer AG ID-Lelystad B.V. <120> BVDV virus-like particles <130> Le A 34 440 <160> 10 <170> PatentIn version 3.1 <210> 1 <211> 2715 <212> DNA <213> Bovine viral diarrhea virus <220> <221> CDS <222> (17)..(2707) <223> <220> <221> 3'UTR <222> (8)..(16) <223> Kozak consensus sequence <400> 1 aaggcctgcc gccacc atg gac acg aaa gaa gaa ggg gca aca aaa aaa caa 52 Met Asp Thr Lys Glu Glu Gly Ala Thr Lys Lys Gln 1 5 10 cag aaa ccg gac cgc gtt gaa aaa ggg cgc atg aaa ata acg cct aaa 100 Gln Lys Pro Asp Arg Val Glu Lys Gly Arg Met Lys Ile Thr Pro Lys 15 20 25 gaa act gaa aaa gat tcc cgg acc aaa cca cct gat gct acg atc gtc 148 Glu Thr Glu Lys Asp Ser Arg Thr Lys Pro Pro Asp Ala Thr Ile Val 30 35 40 gtc gac ggc gtc aaa tac caa gtc aaa aaa aaa ggc aaa gtc aaa tcc 196 Val Asp Gly Val Lys Tyr Gln Val Lys Lys Lys Gly Lys Val Lys Ser 45 50 55 60 aaa aac acc caa gat ggg ctc tac cac aat aaa aat aaa cca caa gaa 244 Lys Asn Thr Gln Asp Gly Leu Tyr His Asn Lys Asn Lys Pro Gln Glu 65 70 75 tca cgc aaa aaa ctg gaa aaa gct cta ttg gct tgg gca ata ttg gct 292 Ser Arg Lys Lys Leu Glu Lys Ala Leu Leu Ala Trp Ala Ile Leu Ala 80 85 90 gtt gta tta ttt caa gtc aca atg ggg gaa aac ata aca caa tgg aac 340 Val Val Leu Phe Gln Val Thr Met Gly Glu Asn Ile Thr Gln Trp Asn 95 100 105 ttg caa gac aat gga acc gaa ggc gtc caa cgg gct atg ttt gaa cgc 388 Leu Gln Asp Asn Gly Thr Glu Gly Val Gln Arg Ala Met Phe Glu Arg 110 115 120 ggc gtc aat cgg agc tta cat gga atc tgg ccc gaa aaa atc tgc acc 436 Gly Val Asn Arg Ser Leu His Gly Ile Trp Pro Glu Lys Ile Cys Thr 125 130 135 140 ggc gtc cca tct cat ttg gcc acc gat atg gaa ttg aaa cga att cat 484 Gly Val Pro Ser His Leu Ala Thr Asp Met Glu Leu Lys Arg Ile His 145 150 155 gga atg atg gac gca tct gaa aaa acc aac tat aca tgc tgc cgg ctt 532 Gly Met Met Asp Ala Ser Glu Lys Thr Asn Tyr Thr Cys Cys Arg Leu 160 165 170 caa cga cat gaa tgg aat aaa cat ggc tgg tgc aat tgg tac aat atc 580 Gln Arg His Glu Trp Asn Lys His Gly Trp Cys Asn Trp Tyr Asn Ile 175 180 185 gaa cct tgg att ctg ctt atg aat cgg acc caa gct aac ctc act gaa 628 Glu Pro Trp Ile Leu Leu Met Asn Arg Thr Gln Ala Asn Leu Thr Glu 190 195 200 ggc caa cca caa cgc gaa tgc gcc gtc acc tgc cgc tat gac cgg aat 676 Gly Gln Pro Gln Arg Glu Cys Ala Val Thr Cys Arg Tyr Asp Arg Asn 205 210 215 220 tcc gac ttg aat gtc gtg aca caa gcc cgg gac tct ccg aca cca ctt 724 Ser Asp Leu Asn Val Val Thr Gln Ala Arg Asp Ser Pro Thr Pro Leu 225 230 235 acg gga tgc aaa aaa ggg aaa aac ttc tct ttt tcg ggc atc gtc atc 772 Thr Gly Cys Lys Lys Gly Lys Asn Phe Ser Phe Ser Gly Ile Val Ile 240 245 250 caa ggc cct tgc aat ttt gaa att gct gca tct gac gtc ctc ttc aaa 820 Gln Gly Pro Cys Asn Phe Glu Ile Ala Ala Ser Asp Val Leu Phe Lys 255 260 265 gaa cat gac tgc aca tcc ata ttt caa gat act gct cat tac ctc gtt 868 Glu His Asp Cys Thr Ser Ile Phe Gln Asp Thr Ala His Tyr Leu Val 270 275 280 gat ggg atg act aac tct ttg gag tct gct cga caa gga act gca aaa 916 Asp Gly Met Thr Asn Ser Leu Glu Ser Ala Arg Gln Gly Thr Ala Lys 285 290 295 300 cta aca act tgg ctg ggg cga caa ctt ggg ata ttg ggg aaa aaa ctg 964 Leu Thr Thr Trp Leu Gly Arg Gln Leu Gly Ile Leu Gly Lys Lys Leu 305 310 315 gaa aac aaa tcc aaa aca tgg ttc ggg gct tat gca tct tcc cct tac 1012 Glu Asn Lys Ser Lys Thr Trp Phe Gly Ala Tyr Ala Ser Ser Pro Tyr 320 325 330 tgc gat gtt gaa cga aaa ctt ggc tac atc tgg ttt aca aaa aat tgc 1060 Cys Asp Val Glu Arg Lys Leu Gly Tyr Ile Trp Phe Thr Lys Asn Cys 335 340 345 acc cct gcc tgc ctc ccc aaa aac aca aaa att gtt gga cct ggg aaa 1108 Thr Pro Ala Cys Leu Pro Lys Asn Thr Lys Ile Val Gly Pro Gly Lys 350 355 360 ttt gac acc aat gcc gaa gat gga aaa ata tta cat gaa atg ggg ggc 1156 Phe Asp Thr Asn Ala Glu Asp Gly Lys Ile Leu His Glu Met Gly Gly 365 370 375 380 cac ctt tcg gaa gtt cta tta ctt tca ctt gtt gtt cta tcc gat ttc 1204 His Leu Ser Glu Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Val Leu Ser Asp Phe 385 390 395 gca ccc gaa act gcc tct gcg atg tat ctt gtc cta cat ttt tcc atc 1252 Ala Pro Glu Thr Ala Ser Ala Met Tyr Leu Val Leu His Phe Ser Ile 400 405 410 cca caa cga cac acc gat gtt ctg gac tgc gat aaa tct caa cta aat 1300 Pro Gln Arg His Thr Asp Val Leu Asp Cys Asp Lys Ser Gln Leu Asn 415 420 425 cta acc atg ggc gtc aca acc gcc gat gtt ata ccc gga tcc gtc tgg 1348 Leu Thr Met Gly Val Thr Thr Ala Asp Val Ile Pro Gly Ser Val Trp 430 435 440 aat atg ggc aaa tat gtt tgc ata cga ccc gac tgg tgg cct tat gaa 1396 Asn Met Gly Lys Tyr Val Cys Ile Arg Pro Asp Trp Trp Pro Tyr Glu 445 450 455 460 acg gct gct gtt ctg gct ttg gaa gaa gtt ggg caa gtt aca cgg atc 1444 Thr Ala Ala Val Leu Ala Leu Glu Glu Val Gly Gln Val Thr Arg Ile 465 470 475 gtc ttg cgg gca ctc cgc gac ttg aca cgc atc tgg aac gct gcc aca 1492 Val Leu Arg Ala Leu Arg Asp Leu Thr Arg Ile Trp Asn Ala Ala Thr 480 485 490 acc act gca ttt ctt gtc tgc ctt gtt aaa gtt gtc cgc gga caa gtc 1540 Thr Thr Ala Phe Leu Val Cys Leu Val Lys Val Val Arg Gly Gln Val 495 500 505 tta caa ggc gtc ata tgg tta ctg cta ata acg ggc gtc caa gga cgc 1588 Leu Gln Gly Val Ile Trp Leu Leu Leu Ile Thr Gly Val Gln Gly Arg 510 515 520 ctc gat tgc aaa cct gac ttc tca tat gcc att gcc aaa aat gaa aaa 1636 Leu Asp Cys Lys Pro Asp Phe Ser Tyr Ala Ile Ala Lys Asn Glu Lys 525 530 535 540 att gga cca ctg ggg gct gaa gga ctt act acc act tgg tat gaa tac 1684 Ile Gly Pro Leu Gly Ala Glu Gly Leu Thr Thr Thr Trp Tyr Glu Tyr 545 550 555 tct gat ggg atg caa ctt tcc gac act atg gtt gaa gct cga tgc aaa 1732 Ser Asp Gly Met Gln Leu Ser Asp Thr Met Val Glu Ala Arg Cys Lys 560 565 570 gat ggg gaa ttt aca ttc atc caa aaa tgc aaa acg gaa acc cga tat 1780 Asp Gly Glu Phe Thr Phe Ile Gln Lys Cys Lys Thr Glu Thr Arg Tyr 575 580 585 ctg gcc acc ttg cac aca cgg gcc tta ccg aca tct gtc gtt ttt gaa 1828 Leu Ala Thr Leu His Thr Arg Ala Leu Pro Thr Ser Val Val Phe Glu 590 595 600 aaa ctt ttt gat gga aat aaa ttg gcg gac atc gtt gaa atg gat gac 1876 Lys Leu Phe Asp Gly Asn Lys Leu Ala Asp Ile Val Glu Met Asp Asp 605 610 615 620 aac ttc gaa ttt gcg atc tgc ccc tgc gat gca aaa ccc gtc gtc cgc 1924 Asn Phe Glu Phe Ala Ile Cys Pro Cys Asp Ala Lys Pro Val Val Arg 625 630 635 ggg aaa ttt aac aca aca cta cta aat ggg ccc gcc ttc caa atg gtc 1972 Gly Lys Phe Asn Thr Thr Leu Leu Asn Gly Pro Ala Phe Gln Met Val 640 645 650 tgc ccc att gga tgg act gga tct gtc tcc tgc acc cta gcc aat aaa 2020 Cys Pro Ile Gly Trp Thr Gly Ser Val Ser Cys Thr Leu Ala Asn Lys 655 660 665 gac acc ctc gat acg gcc gtc gtc cgg aca tat aaa cgc gtt tcc cca 2068 Asp Thr Leu Asp Thr Ala Val Val Arg Thr Tyr Lys Arg Val Ser Pro 670 675 680 ttc cct aat cgg caa gga tgc gtt act caa aaa ctt ctc ggg gaa gat 2116 Phe Pro Asn Arg Gln Gly Cys Val Thr Gln Lys Leu Leu Gly Glu Asp 685 690 695 700 ctt tat gat tgc atc ttg ggc gga aac tgg act tgc atc gaa ggg gaa 2164 Leu Tyr Asp Cys Ile Leu Gly Gly Asn Trp Thr Cys Ile Glu Gly Glu 705 710 715 caa cta cga tac act ggg ggc acc att gaa tcc tgc aag tgg tgc ggc 2212 Gln Leu Arg Tyr Thr Gly Gly Thr Ile Glu Ser Cys Lys Trp Cys Gly 720 725 730 tac aaa ttc ttg aaa tcg gaa ggg cta cca cac tat cca att ggc aaa 2260 Tyr Lys Phe Leu Lys Ser Glu Gly Leu Pro His Tyr Pro Ile Gly Lys 735 740 745 tgc cgc tta caa aat gaa act ggc tac cgg ctt gtc gac gac acc tct 2308 Cys Arg Leu Gln Asn Glu Thr Gly Tyr Arg Leu Val Asp Asp Thr Ser 750 755 760 tgc aat gtc ggc ggc gtc gca att gtc cca cat gga ctt gtc aaa tgc 2356 Cys Asn Val Gly Gly Val Ala Ile Val Pro His Gly Leu Val Lys Cys 765 770 775 780 aaa att ggg gat acc gtc gtc caa gtc gtc gca atg gac acg aaa ctt 2404 Lys Ile Gly Asp Thr Val Val Gln Val Val Ala Met Asp Thr Lys Leu 785 790 795 gga cct atg cct tgc aaa cca cat gaa ata ata tca tcg gaa gga ccc 2452 Gly Pro Met Pro Cys Lys Pro His Glu Ile Ile Ser Ser Glu Gly Pro 800 805 810 gtt gaa aaa acg gca tgc aca ttc aac tat aca cgg acc tta acg aac 2500 Val Glu Lys Thr Ala Cys Thr Phe Asn Tyr Thr Arg Thr Leu Thr Asn 815 820 825 aaa tat ttt gaa ccc cgg gac aat tac ttc caa caa tac atg cta aaa 2548 Lys Tyr Phe Glu Pro Arg Asp Asn Tyr Phe Gln Gln Tyr Met Leu Lys 830 835 840 ggg gac tac caa tat tgg ttt gat ctg gaa gtc tct gac cac cat cgg 2596 Gly Asp Tyr Gln Tyr Trp Phe Asp Leu Glu Val Ser Asp His His Arg 845 850 855 860 gat tac ttt acg gaa ttc cta ctt gtc att gtt gtc gcc ctc ttg ggc 2644 Asp Tyr Phe Thr Glu Phe Leu Leu Val Ile Val Val Ala Leu Leu Gly 865 870 875 gga cgc tat gtc ctt tgg cta ctt gtc aca tac atg gtc ctc tcc gaa 2692 Gly Arg Tyr Val Leu Trp Leu Leu Val Thr Tyr Met Val Leu Ser Glu 880 885 890 caa aat gcc tcg gct taggcctt 2715 Gln Asn Ala Ser Ala 895 <210> 2 <211> 897 <212> PRT <213> Bovine viral diarrhea virus <400> 2 Met Asp Thr Lys Glu Glu Gly Ala Thr Lys Lys Gln Gln Lys Pro Asp 1 5 10 15 Arg Val Glu Lys Gly Arg Met Lys Ile Thr Pro Lys Glu Thr Glu Lys 20 25 30 Asp Ser Arg Thr Lys Pro Pro Asp Ala Thr Ile Val Val Asp Gly Val 35 40 45 Lys Tyr Gln Val Lys Lys Lys Gly Lys Val Lys Ser Lys Asn Thr Gln 50 55 60 Asp Gly Leu Tyr His Asn Lys Asn Lys Pro Gln Glu Ser Arg Lys Lys 65 70 75 80 Leu Glu Lys Ala Leu Leu Ala Trp Ala Ile Leu Ala Val Val Leu Phe 85 90 95 Gln Val Thr Met Gly Glu Asn Ile Thr Gln Trp Asn Leu Gln Asp Asn 100 105 110 Gly Thr Glu Gly Val Gln Arg Ala Met Phe Glu Arg Gly Val Asn Arg 115 120 125 Ser Leu His Gly Ile Trp Pro Glu Lys Ile Cys Thr Gly Val Pro Ser 130 135 140 His Leu Ala Thr Asp Met Glu Leu Lys Arg Ile His Gly Met Met Asp 145 150 155 160 Ala Ser Glu Lys Thr Asn Tyr Thr Cys Cys Arg Leu Gln Arg His Glu 165 170 175 Trp Asn Lys His Gly Trp Cys Asn Trp Tyr Asn Ile Glu Pro Trp Ile 180 185 190 Leu Leu Met Asn Arg Thr Gln Ala Asn Leu Thr Glu Gly Gln Pro Gln 195 200 205 Arg Glu Cys Ala Val Thr Cys Arg Tyr Asp Arg Asn Ser Asp Leu Asn 210 215 220 Val Val Thr Gln Ala Arg Asp Ser Pro Thr Pro Leu Thr Gly Cys Lys 225 230 235 240 Lys Gly Lys Asn Phe Ser Phe Ser Gly Ile Val Ile Gln Gly Pro Cys 245 250 255 Asn Phe Glu Ile Ala Ala Ser Asp Val Leu Phe Lys Glu His Asp Cys 260 265 270 Thr Ser Ile Phe Gln Asp Thr Ala His Tyr Leu Val Asp Gly Met Thr 275 280 285 Asn Ser Leu Glu Ser Ala Arg Gln Gly Thr Ala Lys Leu Thr Thr Trp 290 295 300 Leu Gly Arg Gln Leu Gly Ile Leu Gly Lys Lys Leu Glu Asn Lys Ser 305 310 315 320 Lys Thr Trp Phe Gly Ala Tyr Ala Ser Ser Pro Tyr Cys Asp Val Glu 325 330 335 Arg Lys Leu Gly Tyr Ile Trp Phe Thr Lys Asn Cys Thr Pro Ala Cys 340 345 350 Leu Pro Lys Asn Thr Lys Ile Val Gly Pro Gly Lys Phe Asp Thr Asn 355 360 365 Ala Glu Asp Gly Lys Ile Leu His Glu Met Gly Gly His Leu Ser Glu 370 375 380 Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Val Leu Ser Asp Phe Ala Pro Glu Thr 385 390 395 400 Ala Ser Ala Met Tyr Leu Val Leu His Phe Ser Ile Pro Gln Arg His 405 410 415 Thr Asp Val Leu Asp Cys Asp Lys Ser Gln Leu Asn Leu Thr Met Gly 420 425 430 Val Thr Thr Ala Asp Val Ile Pro Gly Ser Val Trp Asn Met Gly Lys 435 440 445 Tyr Val Cys Ile Arg Pro Asp Trp Trp Pro Tyr Glu Thr Ala Ala Val 450 455 460 Leu Ala Leu Glu Glu Val Gly Gln Val Thr Arg Ile Val Leu Arg Ala 465 470 475 480 Leu Arg Asp Leu Thr Arg Ile Trp Asn Ala Ala Thr Thr Thr Ala Phe 485 490 495 Leu Val Cys Leu Val Lys Val Val Arg Gly Gln Val Leu Gln Gly Val 500 505 510 Ile Trp Leu Leu Leu Ile Thr Gly Val Gln Gly Arg Leu Asp Cys Lys 515 520 525 Pro Asp Phe Ser Tyr Ala Ile Ala Lys Asn Glu Lys Ile Gly Pro Leu 530 535 540 Gly Ala Glu Gly Leu Thr Thr Thr Trp Tyr Glu Tyr Ser Asp Gly Met 545 550 555 560 Gln Leu Ser Asp Thr Met Val Glu Ala Arg Cys Lys Asp Gly Glu Phe 565 570 575 Thr Phe Ile Gln Lys Cys Lys Thr Glu Thr Arg Tyr Leu Ala Thr Leu 580 585 590 His Thr Arg Ala Leu Pro Thr Ser Val Val Phe Glu Lys Leu Phe Asp 595 600 605 Gly Asn Lys Leu Ala Asp Ile Val Glu Met Asp Asp Asn Phe Glu Phe 610 615 620 Ala Ile Cys Pro Cys Asp Ala Lys Pro Val Val Arg Gly Lys Phe Asn 625 630 635 640 Thr Thr Leu Leu Asn Gly Pro Ala Phe Gln Met Val Cys Pro Ile Gly 645 650 655 Trp Thr Gly Ser Val Ser Cys Thr Leu Ala Asn Lys Asp Thr Leu Asp 660 665 670 Thr Ala Val Val Arg Thr Tyr Lys Arg Val Ser Pro Phe Pro Asn Arg 675 680 685 Gln Gly Cys Val Thr Gln Lys Leu Leu Gly Glu Asp Leu Tyr Asp Cys 690 695 700 Ile Leu Gly Gly Asn Trp Thr Cys Ile Glu Gly Glu Gln Leu Arg Tyr 705 710 715 720 Thr Gly Gly Thr Ile Glu Ser Cys Lys Trp Cys Gly Tyr Lys Phe Leu 725 730 735 Lys Ser Glu Gly Leu Pro His Tyr Pro Ile Gly Lys Cys Arg Leu Gln 740 745 750 Asn Glu Thr Gly Tyr Arg Leu Val Asp Asp Thr Ser Cys Asn Val Gly 755 760 765 Gly Val Ala Ile Val Pro His Gly Leu Val Lys Cys Lys Ile Gly Asp 770 775 780 Thr Val Val Gln Val Val Ala Met Asp Thr Lys Leu Gly Pro Met Pro 785 790 795 800 Cys Lys Pro His Glu Ile Ile Ser Ser Glu Gly Pro Val Glu Lys Thr 805 810 815 Ala Cys Thr Phe Asn Tyr Thr Arg Thr Leu Thr Asn Lys Tyr Phe Glu 820 825 830 Pro Arg Asp Asn Tyr Phe Gln Gln Tyr Met Leu Lys Gly Asp Tyr Gln 835 840 845 Tyr Trp Phe Asp Leu Glu Val Ser Asp His His Arg Asp Tyr Phe Thr 850 855 860 Glu Phe Leu Leu Val Ile Val Val Ala Leu Leu Gly Gly Arg Tyr Val 865 870 875 880 Leu Trp Leu Leu Val Thr Tyr Met Val Leu Ser Glu Gln Asn Ala Ser 885 890 895 Ala <210> 3 <211> 303 <212> DNA <213> Bovine viral diarrhea virus <220> <221> CDS <222> (1)..(303) <223> Protein N <400> 3 atg gac acg aaa gaa gaa ggg gca aca aaa aaa caa cag aaa ccg gac 48 Met Asp Thr Lys Glu Glu Gly Ala Thr Lys Lys Gln Gln Lys Pro Asp 1 5 10 15 cgc gtt gaa aaa ggg cgc atg aaa ata acg cct aaa gaa act gaa aaa 96 Arg Val Glu Lys Gly Arg Met Lys Ile Thr Pro Lys Glu Thr Glu Lys 20 25 30 gat tcc cgg acc aaa cca cct gat gct acg atc gtc gtc gac ggc gtc 144 Asp Ser Arg Thr Lys Pro Pro Asp Ala Thr Ile Val Val Asp Gly Val 35 40 45 aaa tac caa gtc aaa aaa aaa ggc aaa gtc aaa tcc aaa aac acc caa 192 Lys Tyr Gln Val Lys Lys Lys Gly Lys Val Lys Ser Lys Asn Thr Gln 50 55 60 gat ggg ctc tac cac aat aaa aat aaa cca caa gaa tca cgc aaa aaa 240 Asp Gly Leu Tyr His Asn Lys Asn Lys Pro Gln Glu Ser Arg Lys Lys 65 70 75 80 ctg gaa aaa gct cta ttg gct tgg gca ata ttg gct gtt gta tta ttt 288 Leu Glu Lys Ala Leu Leu Ala Trp Ala Ile Leu Ala Val Val Leu Phe 85 90 95 caa gtc aca atg ggg 303 Gln Val Thr Met Gly 100 <210> 4 <211> 101 <212> PRT <213> Bovine viral diarrhea virus <400> 4 Met Asp Thr Lys Glu Glu Gly Ala Thr Lys Lys Gln Gln Lys Pro Asp 1 5 10 15 Arg Val Glu Lys Gly Arg Met Lys Ile Thr Pro Lys Glu Thr Glu Lys 20 25 30 Asp Ser Arg Thr Lys Pro Pro Asp Ala Thr Ile Val Val Asp Gly Val 35 40 45 Lys Tyr Gln Val Lys Lys Lys Gly Lys Val Lys Ser Lys Asn Thr Gln 50 55 60 Asp Gly Leu Tyr His Asn Lys Asn Lys Pro Gln Glu Ser Arg Lys Lys 65 70 75 80 Leu Glu Lys Ala Leu Leu Ala Trp Ala Ile Leu Ala Val Val Leu Phe 85 90 95 Gln Val Thr Met Gly 100 <210> 5 <211> 681 <212> DNA <213> Bovine viral diarrhea virus <220> <221> CDS <222> (1)..(681) <223> Protein ERNS <400> 5 gaa aac ata aca caa tgg aac ttg caa gac aat gga acc gaa ggc gtc 48 Glu Asn Ile Thr Gln Trp Asn Leu Gln Asp Asn Gly Thr Glu Gly Val 1 5 10 15 caa cgg gct atg ttt gaa cgc ggc gtc aat cgg agc tta cat gga atc 96 Gln Arg Ala Met Phe Glu Arg Gly Val Asn Arg Ser Leu His Gly Ile 20 25 30 tgg ccc gaa aaa atc tgc acc ggc gtc cca tct cat ttg gcc acc gat 144 Trp Pro Glu Lys Ile Cys Thr Gly Val Pro Ser His Leu Ala Thr Asp 35 40 45 atg gaa ttg aaa cga att cat gga atg atg gac gca tct gaa aaa acc 192 Met Glu Leu Lys Arg Ile His Gly Met Met Asp Ala Ser Glu Lys Thr 50 55 60 aac tat aca tgc tgc cgg ctt caa cga cat gaa tgg aat aaa cat ggc 240 Asn Tyr Thr Cys Cys Arg Leu Gln Arg His Glu Trp Asn Lys His Gly 65 70 75 80 tgg tgc aat tgg tac aat atc gaa cct tgg att ctg ctt atg aat cgg 288 Trp Cys Asn Trp Tyr Asn Ile Glu Pro Trp Ile Leu Leu Met Asn Arg 85 90 95 acc caa gct aac ctc act gaa ggc caa cca caa cgc gaa tgc gcc gtc 336 Thr Gln Ala Asn Leu Thr Glu Gly Gln Pro Gln Arg Glu Cys Ala Val 100 105 110 acc tgc cgc tat gac cgg aat tcc gac ttg aat gtc gtg aca caa gcc 384 Thr Cys Arg Tyr Asp Arg Asn Ser Asp Leu Asn Val Val Thr Gln Ala 115 120 125 cgg gac tct ccg aca cca ctt acg gga tgc aaa aaa ggg aaa aac ttc 432 Arg Asp Ser Pro Thr Pro Leu Thr Gly Cys Lys Lys Gly Lys Asn Phe 130 135 140 tct ttt tcg ggc atc gtc atc caa ggc cct tgc aat ttt gaa att gct 480 Ser Phe Ser Gly Ile Val Ile Gln Gly Pro Cys Asn Phe Glu Ile Ala 145 150 155 160 gca tct gac gtc ctc ttc aaa gaa cat gac tgc aca tcc ata ttt caa 528 Ala Ser Asp Val Leu Phe Lys Glu His Asp Cys Thr Ser Ile Phe Gln 165 170 175 gat act gct cat tac ctc gtt gat ggg atg act aac tct ttg gag tct 576 Asp Thr Ala His Tyr Leu Val Asp Gly Met Thr Asn Ser Leu Glu Ser 180 185 190 gct cga caa gga act gca aaa cta aca act tgg ctg ggg cga caa ctt 624 Ala Arg Gln Gly Thr Ala Lys Leu Thr Thr Trp Leu Gly Arg Gln Leu 195 200 205 ggg ata ttg ggg aaa aaa ctg gaa aac aaa tcc aaa aca tgg ttc ggg 672 Gly Ile Leu Gly Lys Lys Leu Glu Asn Lys Ser Lys Thr Trp Phe Gly 210 215 220 gct tat gca 681 Ala Tyr Ala 225 <210> 6 <211> 227 <212> PRT <213> Bovine viral diarrhea virus <400> 6 Glu Asn Ile Thr Gln Trp Asn Leu Gln Asp Asn Gly Thr Glu Gly Val 1 5 10 15 Gln Arg Ala Met Phe Glu Arg Gly Val Asn Arg Ser Leu His Gly Ile 20 25 30 Trp Pro Glu Lys Ile Cys Thr Gly Val Pro Ser His Leu Ala Thr Asp 35 40 45 Met Glu Leu Lys Arg Ile His Gly Met Met Asp Ala Ser Glu Lys Thr 50 55 60 Asn Tyr Thr Cys Cys Arg Leu Gln Arg His Glu Trp Asn Lys His Gly 65 70 75 80 Trp Cys Asn Trp Tyr Asn Ile Glu Pro Trp Ile Leu Leu Met Asn Arg 85 90 95 Thr Gln Ala Asn Leu Thr Glu Gly Gln Pro Gln Arg Glu Cys Ala Val 100 105 110 Thr Cys Arg Tyr Asp Arg Asn Ser Asp Leu Asn Val Val Thr Gln Ala 115 120 125 Arg Asp Ser Pro Thr Pro Leu Thr Gly Cys Lys Lys Gly Lys Asn Phe 130 135 140 Ser Phe Ser Gly Ile Val Ile Gln Gly Pro Cys Asn Phe Glu Ile Ala 145 150 155 160 Ala Ser Asp Val Leu Phe Lys Glu His Asp Cys Thr Ser Ile Phe Gln 165 170 175 Asp Thr Ala His Tyr Leu Val Asp Gly Met Thr Asn Ser Leu Glu Ser 180 185 190 Ala Arg Gln Gly Thr Ala Lys Leu Thr Thr Trp Leu Gly Arg Gln Leu 195 200 205 Gly Ile Leu Gly Lys Lys Leu Glu Asn Lys Ser Lys Thr Trp Phe Gly 210 215 220 Ala Tyr Ala 225 <210> 7 <211> 585 <212> DNA <213> Bovine viral diarrhea virus <220> <221> CDS <222> (1)..(585) <223> Protein E1 <400> 7 tct tcc cct tac tgc gat gtt gaa cga aaa ctt ggc tac atc tgg ttt 48 Ser Ser Pro Tyr Cys Asp Val Glu Arg Lys Leu Gly Tyr Ile Trp Phe 1 5 10 15 aca aaa aat tgc acc cct gcc tgc ctc ccc aaa aac aca aaa att gtt 96 Thr Lys Asn Cys Thr Pro Ala Cys Leu Pro Lys Asn Thr Lys Ile Val 20 25 30 gga cct ggg aaa ttt gac acc aat gcc gaa gat gga aaa ata tta cat 144 Gly Pro Gly Lys Phe Asp Thr Asn Ala Glu Asp Gly Lys Ile Leu His 35 40 45 gaa atg ggg ggc cac ctt tcg gaa gtt cta tta ctt tca ctt gtt gtt 192 Glu Met Gly Gly His Leu Ser Glu Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Val 50 55 60 cta tcc gat ttc gca ccc gaa act gcc tct gcg atg tat ctt gtc cta 240 Leu Ser Asp Phe Ala Pro Glu Thr Ala Ser Ala Met Tyr Leu Val Leu 65 70 75 80 cat ttt tcc atc cca caa cga cac acc gat gtt ctg gac tgc gat aaa 288 His Phe Ser Ile Pro Gln Arg His Thr Asp Val Leu Asp Cys Asp Lys 85 90 95 tct caa cta aat cta acc atg ggc gtc aca acc gcc gat gtt ata ccc 336 Ser Gln Leu Asn Leu Thr Met Gly Val Thr Thr Ala Asp Val Ile Pro 100 105 110 gga tcc gtc tgg aat atg ggc aaa tat gtt tgc ata cga ccc gac tgg 384 Gly Ser Val Trp Asn Met Gly Lys Tyr Val Cys Ile Arg Pro Asp Trp 115 120 125 tgg cct tat gaa acg gct gct gtt ctg gct ttg gaa gaa gtt ggg caa 432 Trp Pro Tyr Glu Thr Ala Ala Val Leu Ala Leu Glu Glu Val Gly Gln 130 135 140 gtt aca cgg atc gtc ttg cgg gca ctc cgc gac ttg aca cgc atc tgg 480 Val Thr Arg Ile Val Leu Arg Ala Leu Arg Asp Leu Thr Arg Ile Trp 145 150 155 160 aac gct gcc aca acc act gca ttt ctt gtc tgc ctt gtt aaa gtt gtc 528 Asn Ala Ala Thr Thr Thr Ala Phe Leu Val Cys Leu Val Lys Val Val 165 170 175 cgc gga caa gtc tta caa ggc gtc ata tgg tta ctg cta ata acg ggc 576 Arg Gly Gln Val Leu Gln Gly Val Ile Trp Leu Leu Leu Ile Thr Gly 180 185 190 gtc caa gga 585 Val Gln Gly 195 <210> 8 <211> 195 <212> PRT <213> Bovine viral diarrhea virus <400> 8 Ser Ser Pro Tyr Cys Asp Val Glu Arg Lys Leu Gly Tyr Ile Trp Phe 1 5 10 15 Thr Lys Asn Cys Thr Pro Ala Cys Leu Pro Lys Asn Thr Lys Ile Val 20 25 30 Gly Pro Gly Lys Phe Asp Thr Asn Ala Glu Asp Gly Lys Ile Leu His 35 40 45 Glu Met Gly Gly His Leu Ser Glu Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Val 50 55 60 Leu Ser Asp Phe Ala Pro Glu Thr Ala Ser Ala Met Tyr Leu Val Leu 65 70 75 80 His Phe Ser Ile Pro Gln Arg His Thr Asp Val Leu Asp Cys Asp Lys 85 90 95 Ser Gln Leu Asn Leu Thr Met Gly Val Thr Thr Ala Asp Val Ile Pro 100 105 110 Gly Ser Val Trp Asn Met Gly Lys Tyr Val Cys Ile Arg Pro Asp Trp 115 120 125 Trp Pro Tyr Glu Thr Ala Ala Val Leu Ala Leu Glu Glu Val Gly Gln 130 135 140 Val Thr Arg Ile Val Leu Arg Ala Leu Arg Asp Leu Thr Arg Ile Trp 145 150 155 160 Asn Ala Ala Thr Thr Thr Ala Phe Leu Val Cys Leu Val Lys Val Val 165 170 175 Arg Gly Gln Val Leu Gln Gly Val Ile Trp Leu Leu Leu Ile Thr Gly 180 185 190 Val Gln Gly 195 <210> 9 <211> 1122 <212> DNA <213> Bovine viral diarrhea virus <220> <221> CDS <222> (1)..(1122) <223> Protein E2 <400> 9 cgc ctc gat tgc aaa cct gac ttc tca tat gcc att gcc aaa aat gaa 48 Arg Leu Asp Cys Lys Pro Asp Phe Ser Tyr Ala Ile Ala Lys Asn Glu 1 5 10 15 aaa att gga cca ctg ggg gct gaa gga ctt act acc act tgg tat gaa 96 Lys Ile Gly Pro Leu Gly Ala Glu Gly Leu Thr Thr Thr Trp Tyr Glu 20 25 30 tac tct gat ggg atg caa ctt tcc gac act atg gtt gaa gct cga tgc 144 Tyr Ser Asp Gly Met Gln Leu Ser Asp Thr Met Val Glu Ala Arg Cys 35 40 45 aaa gat ggg gaa ttt aca ttc atc caa aaa tgc aaa acg gaa acc cga 192 Lys Asp Gly Glu Phe Thr Phe Ile Gln Lys Cys Lys Thr Glu Thr Arg 50 55 60 tat ctg gcc acc ttg cac aca cgg gcc tta ccg aca tct gtc gtt ttt 240 Tyr Leu Ala Thr Leu His Thr Arg Ala Leu Pro Thr Ser Val Val Phe 65 70 75 80 gaa aaa ctt ttt gat gga aat aaa ttg gcg gac atc gtt gaa atg gat 288 Glu Lys Leu Phe Asp Gly Asn Lys Leu Ala Asp Ile Val Glu Met Asp 85 90 95 gac aac ttc gaa ttt gcg atc tgc ccc tgc gat gca aaa ccc gtc gtc 336 Asp Asn Phe Glu Phe Ala Ile Cys Pro Cys Asp Ala Lys Pro Val Val 100 105 110 cgc ggg aaa ttt aac aca aca cta cta aat ggg ccc gcc ttc caa atg 384 Arg Gly Lys Phe Asn Thr Thr Leu Leu Asn Gly Pro Ala Phe Gln Met 115 120 125 gtc tgc ccc att gga tgg act gga tct gtc tcc tgc acc cta gcc aat 432 Val Cys Pro Ile Gly Trp Thr Gly Ser Val Ser Cys Thr Leu Ala Asn 130 135 140 aaa gac acc ctc gat acg gcc gtc gtc cgg aca tat aaa cgc gtt tcc 480 Lys Asp Thr Leu Asp Thr Ala Val Val Arg Thr Tyr Lys Arg Val Ser 145 150 155 160 cca ttc cct aat cgg caa gga tgc gtt act caa aaa ctt ctc ggg gaa 528 Pro Phe Pro Asn Arg Gln Gly Cys Val Thr Gln Lys Leu Leu Gly Glu 165 170 175 gat ctt tat gat tgc atc ttg ggc gga aac tgg act tgc atc gaa ggg 576 Asp Leu Tyr Asp Cys Ile Leu Gly Gly Asn Trp Thr Cys Ile Glu Gly 180 185 190 gaa caa cta cga tac act ggg ggc acc att gaa tcc tgc aag tgg tgc 624 Glu Gln Leu Arg Tyr Thr Gly Gly Thr Ile Glu Ser Cys Lys Trp Cys 195 200 205 ggc tac aaa ttc ttg aaa tcg gaa ggg cta cca cac tat cca att ggc 672 Gly Tyr Lys Phe Leu Lys Ser Glu Gly Leu Pro His Tyr Pro Ile Gly 210 215 220 aaa tgc cgc tta caa aat gaa act ggc tac cgg ctt gtc gac gac acc 720 Lys Cys Arg Leu Gln Asn Glu Thr Gly Tyr Arg Leu Val Asp Asp Thr 225 230 235 240 tct tgc aat gtc ggc ggc gtc gca att gtc cca cat gga ctt gtc aaa 768 Ser Cys Asn Val Gly Gly Val Ala Ile Val Pro His Gly Leu Val Lys 245 250 255 tgc aaa att ggg gat acc gtc gtc caa gtc gtc gca atg gac acg aaa 816 Cys Lys Ile Gly Asp Thr Val Val Gln Val Val Ala Met Asp Thr Lys 260 265 270 ctt gga cct atg cct tgc aaa cca cat gaa ata ata tca tcg gaa gga 864 Leu Gly Pro Met Pro Cys Lys Pro His Glu Ile Ile Ser Ser Glu Gly 275 280 285 ccc gtt gaa aaa acg gca tgc aca ttc aac tat aca cgg acc tta acg 912 Pro Val Glu Lys Thr Ala Cys Thr Phe Asn Tyr Thr Arg Thr Leu Thr 290 295 300 aac aaa tat ttt gaa ccc cgg gac aat tac ttc caa caa tac atg cta 960 Asn Lys Tyr Phe Glu Pro Arg Asp Asn Tyr Phe Gln Gln Tyr Met Leu 305 310 315 320 aaa ggg gac tac caa tat tgg ttt gat ctg gaa gtc tct gac cac cat 1008 Lys Gly Asp Tyr Gln Tyr Trp Phe Asp Leu Glu Val Ser Asp His His 325 330 335 cgg gat tac ttt acg gaa ttc cta ctt gtc att gtt gtc gcc ctc ttg 1056 Arg Asp Tyr Phe Thr Glu Phe Leu Leu Val Ile Val Val Ala Leu Leu 340 345 350 ggc gga cgc tat gtc ctt tgg cta ctt gtc aca tac atg gtc ctc tcc 1104 Gly Gly Arg Tyr Val Leu Trp Leu Leu Val Thr Tyr Met Val Leu Ser 355 360 365 gaa caa aat gcc tcg gct 1122 Glu Gln Asn Ala Ser Ala 370 <210> 10 <211> 374 <212> PRT <213> Bovine viral diarrhea virus <400> 10 Arg Leu Asp Cys Lys Pro Asp Phe Ser Tyr Ala Ile Ala Lys Asn Glu 1 5 10 15 Lys Ile Gly Pro Leu Gly Ala Glu Gly Leu Thr Thr Thr Trp Tyr Glu 20 25 30 Tyr Ser Asp Gly Met Gln Leu Ser Asp Thr Met Val Glu Ala Arg Cys 35 40 45 Lys Asp Gly Glu Phe Thr Phe Ile Gln Lys Cys Lys Thr Glu Thr Arg 50 55 60 Tyr Leu Ala Thr Leu His Thr Arg Ala Leu Pro Thr Ser Val Val Phe 65 70 75 80 Glu Lys Leu Phe Asp Gly Asn Lys Leu Ala Asp Ile Val Glu Met Asp 85 90 95 Asp Asn Phe Glu Phe Ala Ile Cys Pro Cys Asp Ala Lys Pro Val Val 100 105 110 Arg Gly Lys Phe Asn Thr Thr Leu Leu Asn Gly Pro Ala Phe Gln Met 115 120 125 Val Cys Pro Ile Gly Trp Thr Gly Ser Val Ser Cys Thr Leu Ala Asn 130 135 140 Lys Asp Thr Leu Asp Thr Ala Val Val Arg Thr Tyr Lys Arg Val Ser 145 150 155 160 Pro Phe Pro Asn Arg Gln Gly Cys Val Thr Gln Lys Leu Leu Gly Glu 165 170 175 Asp Leu Tyr Asp Cys Ile Leu Gly Gly Asn Trp Thr Cys Ile Glu Gly 180 185 190 Glu Gln Leu Arg Tyr Thr Gly Gly Thr Ile Glu Ser Cys Lys Trp Cys 195 200 205 Gly Tyr Lys Phe Leu Lys Ser Glu Gly Leu Pro His Tyr Pro Ile Gly 210 215 220 Lys Cys Arg Leu Gln Asn Glu Thr Gly Tyr Arg Leu Val Asp Asp Thr 225 230 235 240 Ser Cys Asn Val Gly Gly Val Ala Ile Val Pro His Gly Leu Val Lys 245 250 255 Cys Lys Ile Gly Asp Thr Val Val Gln Val Val Ala Met Asp Thr Lys 260 265 270 Leu Gly Pro Met Pro Cys Lys Pro His Glu Ile Ile Ser Ser Glu Gly 275 280 285 Pro Val Glu Lys Thr Ala Cys Thr Phe Asn Tyr Thr Arg Thr Leu Thr 290 295 300 Asn Lys Tyr Phe Glu Pro Arg Asp Asn Tyr Phe Gln Gln Tyr Met Leu 305 310 315 320 Lys Gly Asp Tyr Gln Tyr Trp Phe Asp Leu Glu Val Ser Asp His His 325 330 335 Arg Asp Tyr Phe Thr Glu Phe Leu Leu Val Ile Val Val Ala Leu Leu 340 345 350 Gly Gly Arg Tyr Val Leu Trp Leu Leu Val Thr Tyr Met Val Leu Ser 355 360 365 Glu Gln Asn Ala Ser Ala

Claims (28)

  1. (a) 폴리프로테인으로서 BVDV 단백질 N, Erns, E1 및 E2를 순차적으로 코딩하는 DNA 서열로서, 전사된 RNA가 스플라이스 공여 부위로서든 스플라이스 수용 부위로서든 강력한 포텐셜 스플라이스 부위를 포함하지 않도록 암호화 서열이 개질된 DNA 서열, 또는
    (b) (a)의 상보체(complement)를 포함하는 분리된 폴리뉴클레오티드 서열.
  2. 제 1 항에 있어서, RNA로 전사되었을 때 상기 RNA에는 스타덴 (Staden, 1984) 방법에 따를 때, -22 이상의 스코어를 갖는 스플라이스 수용 부위 및 -13.1 이상의 스코어를 갖는 스플라이스 공여 부위가 존재하지 않도록 암호화 서열이 개질된, 분리된 폴리뉴클레오티드 서열.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 코딩되는 폴리프로테인이 서열번호 2에 따른 아미노산 서열을 가지는 분리된 폴리뉴클레오티드 서열.
  4. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 폴리프로테인의 발현을 조절할 수 있는 시스-조절 서열을 추가로 포함하는 분리된 폴리뉴클레오티드 서열.
  5. 제 1 항 또는 제 2 항에 따른 폴리뉴클레오티드 서열에 상응하는 RNA 분자.
  6. 제 1 항 또는 제 2 항에 따른 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 바이러스 벡터.
  7. 제 6 항에 있어서, BHV-1 또는 BHV-1 결실 돌연변이를 추가로 포함하는 바이러스 벡터.
  8. 제 7 항에 있어서, 인스티튜트 파스테르 CNCM 수탁번호 I-1213 하에 기탁된 Difivac-1인 바이러스 벡터.
  9. 제 7 항에 있어서, BVDV-폴리프로테인 코딩 서열이 BHV-1의 gE 좌위 (locus)에 위치한 바이러스 벡터.
  10. 제 7 항에 있어서, 인스티튜트 파스테르 CNCM 수탁번호 I-2488 하에 기탁된 A9-SV-1F9인 바이러스 벡터.
  11. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 서열번호 1의 뉴클레오티드 17 부터 뉴클레오티드 2710의 폴리뉴클레오티드 서열 또는 그의 상보체를 포함하는 분리된 폴리뉴클레오티드 서열.
  12. 제 4 항에 있어서, 시스-조절 서열이 인간 사이토메갈로바이러스 조기(human cytomegalovirus immediate early) 1 프로모터 및 5' 비해독 리더인 분리된 폴리뉴클레오티드 서열.
  13. 제 4 항에 있어서, 종결 서열을 추가로 포함하는 분리된 폴리뉴클레오티드 서열.
  14. 제 13 항에 있어서, 종결 서열이 소 성장 호르몬 종결 서열인 분리된 폴리뉴클레오티드 서열.
  15. 제 6 항에 따른 바이러스 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  16. (a) 제 7 항에 따른 바이러스 벡터로 적절한 숙주 세포를 감염시키고,
    (b) 숙주 세포를 적절한 조건하에 배양하고,
    (c) 재조합 바이러스를 분리하는 것을 포함함을 특징으로 하여
    BVDV 단백질 N, Erns, E1 및 E2에 대한 코딩 서열을 포함하는 BHV-1 바이러스를 제조하는 방법.
  17. 제 16 항에서 분리된 재조합 바이러스를 약제학적으로 허용되는 담체와 혼합함을 특징으로 하여 BHV-1/BVDV 백신을 제조하는 방법.
  18. 제 17 항의 방법에 의해 제조됨을 특징으로 하는, 재조합 바이러스 함유 백신.
  19. BHV-1 바이러스 비필수 유전자의 전체 또는 부분이 결실되고 제 1 항 또는 제 2 항에 따른 폴리뉴클레오티드 서열로 대체된 BHV-1 바이러스를 포함하는 BHV-1/BVDV 백신으로서, 여기에서 상기 백신은 BHV-1/BVDV 백신으로 면역화된 숙주로부터 야생형 BHV-1, 야생형 BVDV, 또는 야생형 BHV-1 및 야생형 BVDV로 감염된 숙주를 선별할 수 있도록 하는 이중 마커 성질을 가지고 있으며, 여기에서 BHV-1으로부터의 비필수 유전자의 결실이 감염 및 복제에 대한 능력에 실질적인 손상을 주지 않음을 특징으로 하는, BHV-1 바이러스를 포함하는 BHV-1/BVDV 백신.
  20. 삭제
  21. 삭제
  22. 삭제
  23. 삭제
  24. 삭제
  25. 삭제
  26. 삭제
  27. 삭제
  28. 삭제
KR1020027017425A 2000-06-27 2001-06-15 Ｂｖｄｖ 바이러스-유사 입자 Expired - Fee Related KR100909846B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP00113088A EP1170367A1 (en) 2000-06-27 2000-06-27 BVDV virus-like particles
EP00113088.9 2000-06-27
PCT/EP2001/006738 WO2002000881A1 (en) 2000-06-27 2001-06-15 Bvdv virus-like particles

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020087009258A Division KR100939050B1 (ko) 2000-06-27 2001-06-15 Ｂｖｄｖ 바이러스-유사 입자

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20030032969A KR20030032969A (ko) 2003-04-26
KR100909846B1 true KR100909846B1 (ko) 2009-07-29

Family

ID=8169027

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020027017425A Expired - Fee Related KR100909846B1 (ko) 2000-06-27 2001-06-15 Ｂｖｄｖ 바이러스-유사 입자
KR1020087009258A Expired - Fee Related KR100939050B1 (ko) 2000-06-27 2001-06-15 Ｂｖｄｖ 바이러스-유사 입자

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020087009258A Expired - Fee Related KR100939050B1 (ko) 2000-06-27 2001-06-15 Ｂｖｄｖ 바이러스-유사 입자

Country Status (10)

Country Link
US (1) US20030129744A1 (ko)
EP (2) EP2365082A1 (ko)
JP (1) JP4856351B2 (ko)
KR (2) KR100909846B1 (ko)
AU (1) AU2001283862A1 (ko)
BR (1) BR0112020A (ko)
CA (1) CA2414339C (ko)
MX (1) MXPA02012593A (ko)
WO (1) WO2002000881A1 (ko)
ZA (1) ZA200210354B (ko)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6380376B1 (en) 1992-10-30 2002-04-30 Iowa State University Research Foundation Proteins encoded by polynucleic acids of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV)
EP1454981A1 (en) 2003-03-03 2004-09-08 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Infectious pestivirus pseudo-particles containing functional erns, E1, E2 envelope proteins
AU2005279303B2 (en) * 2004-09-03 2011-10-27 Consejo Superior De Investigaciones Cientificas Nucleic acid sequences encoding proteins capable of associating into a virus-like particle
AU2007242061B2 (en) 2006-04-21 2012-11-29 Intervet International B.V. Pestivirus species
WO2010064164A1 (en) * 2008-12-03 2010-06-10 Pfizer Inc. Bovine viral diarrhea virus with a modified erns protein
KR200449684Y1 (ko) * 2010-04-08 2010-07-30 이미경 장폭형 수문장치
CN103917874B (zh) * 2011-08-24 2016-02-03 佐蒂斯有限责任公司 改进的疫苗诊断
WO2015036917A2 (en) * 2013-09-10 2015-03-19 MockV Solutions Methods and kits for quantifying the removal of mock virus particles from a purified solution
CN105924506A (zh) * 2016-07-04 2016-09-07 中国兽医药品监察所 牛病毒性腹泻病毒e2蛋白亚单位疫苗制备方法
CN112646840B (zh) * 2020-12-25 2022-11-18 石河子大学 一种杆状病毒表达系统制备牛病毒性腹泻病毒e2蛋白的方法及应用
CN112961224B (zh) * 2021-03-26 2022-09-27 中国农业大学 牛病毒性腹泻病毒1型病毒样颗粒的制备及应用
CN116785420B (zh) * 2023-08-21 2023-11-14 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心） 一种牛病毒性腹泻病毒的mRNA疫苗及其应用

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL9100989A (nl) 1991-06-07 1993-01-04 Stichting Centr Diergeneeskund Bovine herpesvirus type 1 deletiemutanten, daarop gebaseerde vaccins, diagnostische kits voor detectie van bovine herpesvirus type 1.
AU688819B2 (en) 1993-11-05 1998-03-19 Bayer Aktiengesellschaft Viral vector with bovine viral diarrhea virus (BVDV) antigens
US6001613A (en) * 1996-05-24 1999-12-14 Board Of Regents Of University Of Nebraska Plasmid bearing a cDNA copy of the genome of bovine viral diarrhea virus, chimeric derivatives thereof, and method of producing an infectious bovine viral diarrhea virus using said plasmid

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Journal of general virology, vol.80(11), pp.2839-2848.
Virology, vol.261(1), pp.1-7.

Also Published As

Publication number Publication date
BR0112020A (pt) 2003-05-13
WO2002000881A1 (en) 2002-01-03
AU2001283862A1 (en) 2002-01-08
US20030129744A1 (en) 2003-07-10
JP2004501644A (ja) 2004-01-22
JP4856351B2 (ja) 2012-01-18
EP1170367A1 (en) 2002-01-09
ZA200210354B (en) 2004-04-20
CA2414339C (en) 2012-09-04
MXPA02012593A (es) 2004-05-17
KR20030032969A (ko) 2003-04-26
KR100939050B1 (ko) 2010-02-11
EP2365082A1 (en) 2011-09-14
KR20080038457A (ko) 2008-05-06
CA2414339A1 (en) 2002-01-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Reimann et al. An avirulent chimeric Pestivirus with altered cell tropism protects pigs against lethal infection with classical swine fever virus
JP3826055B2 (ja) 組換えアビポックスウイルスによる免疫方法
JP3531934B2 (ja) キメラおよび／または増殖制限されたフラビウイルス
KR20210092762A (ko) 아프리카 돼지 열병 바이러스에 대한 면역원성 조성물
KR100909846B1 (ko) Ｂｖｄｖ 바이러스-유사 입자
JP3602759B2 (ja) 弱毒型のウシウィルス性下痢性ウィルス
Maurer et al. Oronasal vaccination with classical swine fever virus (CSFV) replicon particles with either partial or complete deletion of the E2 gene induces partial protection against lethal challenge with highly virulent CSFV
KR101097547B1 (ko) 마킹된 소 바이러스성 설사 바이러스 백신
CA2811243C (en) Bvdv vaccine
EP0772632B1 (en) T cell stimulating protein of pestivirus
EP1087014B1 (en) Hog cholera virus vaccine and diagnostic
CA2363493C (en) Attenuated forms of bovine viral diarrhea virus
CA2342305C (en) Pestivirus mutants and vaccines containing the same
US6974575B2 (en) Generation of type I/type II hybrid form of bovine viral diarrhea virus for use as vaccine
CA2123804A1 (en) Recombinant viruses comprising artificial proteolytic cleavage site
US6322793B1 (en) Channel catfish virus vaccine
CZ277921B6 (en) Peptides and polypeptides, vaccines and nucleic acids
CA2297507A1 (en) Synthetic gene of bovine viral diarrhoea virus
JPH03503760A (ja) ヒト・パラインフルエンザウイルス３型の免疫原性セグメント類を含有するキメラ糖蛋白類

Legal Events

Date Code Title Description
PA0105 International application

Patent event date: 20021220

Patent event code: PA01051R01D

Comment text: International Patent Application

PG1501 Laying open of application
A201 Request for examination
PA0201 Request for examination

Patent event code: PA02012R01D

Patent event date: 20060515

Comment text: Request for Examination of Application

E902 Notification of reason for refusal
PE0902 Notice of grounds for rejection

Comment text: Notification of reason for refusal

Patent event date: 20070521

Patent event code: PE09021S01D

A107 Divisional application of patent
PA0104 Divisional application for international application

Comment text: Divisional Application for International Patent

Patent event code: PA01041R01D

Patent event date: 20080417

E902 Notification of reason for refusal
PE0902 Notice of grounds for rejection

Comment text: Notification of reason for refusal

Patent event date: 20080827

Patent event code: PE09021S01D

E701 Decision to grant or registration of patent right
PE0701 Decision of registration

Patent event code: PE07011S01D

Comment text: Decision to Grant Registration

Patent event date: 20090626

GRNT Written decision to grant
PR0701 Registration of establishment

Comment text: Registration of Establishment

Patent event date: 20090722

Patent event code: PR07011E01D

PR1002 Payment of registration fee

Payment date: 20090723

End annual number: 3

Start annual number: 1

PG1601 Publication of registration
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20120628

Year of fee payment: 4

PR1001 Payment of annual fee

Payment date: 20120628

Start annual number: 4

End annual number: 4

LAPS Lapse due to unpaid annual fee
PC1903 Unpaid annual fee