KR100889783B1 - 폐수의 생물학적 처리방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 바실러스 서브틸러스 KS-3, 바실러스 아밀로리퀘파시엔스 KS-4, 바실러스-아가라다에렌스 KS-5, 파에니바실러스 렌티모부스 KS-6, 바실러스 라에볼락티쿠스 KS-7, 류코노스톡 파라메센테로이드 KS-9, 쿠르시아 시비리카KS-13 및 스핑고박테리움 스피리티보럼-GC 서브그룹 B(플라보박테리움) KS-18로 구성된 군에서 선택되는 1종 이상의 미생물을 포함하는 미생물 제제를 폐수에 처리하는 것을 포함하는 생물학적 폐수처리 방법 및 폐수처리제를 제공한다.
피혁폐수, 생물학적 처리

Description

폐수의 생물학적 처리방법{METHOD FOR HIGHLY BIOLOGICALLY THE WASTE-WATER}
본 발명은 폐수의 생물학적 처리방법에 관한 것으로서, 특히 고농도 폐수를 물리ㆍ화학적으로 전처리를 거치지 않고 생물학적으로 처리할 수 있도록 함은 물론 발생 슬러지도 저감시킬 수 있도록 하는 폐수의 생물학적 처리방법에 관한 것이다.
일반적으로 악성폐수를 배출하는 산업은 하천, 호수, 해안, 만 등의 수질을 오염시키는 원인이 되고 있다. 특히, 악성폐수 배출 업체 중에서도 피혁 제조업체는 대부분이 영세업체이며 수도권의 상수원 지역에 밀집되어 있어 그 심각성이 더 크다고 하겠다. 또한, 피혁 제조업체에서는 폐수처리시 다량의 슬러지(Sluge, 물이나 기름 등에 혼합된 불순물이 밑바닥에 침전된 것을 말함)가 발생하여 이를 처리하는데 따른 환경 부담금이 생산원가의 10% 정도를 차지할 정도이다.
또한 이와 같이, 피혁 제조업체에서 발생되는 피혁폐수의 경우 온갖 유기물과 잔존 화학약품이 혼재하는 난분해성 폐수로써 전세계적으로 "물리, 화학적 처리공정"을 우선시하여 처리하고, "생물학적인 처리공정"은 단순히 보조적인 역할로서만 이용되고 있는 추세이다.
현재까지 T-N 배출허용기준 60mg/l와 COD 배출허용기준 90mg/l는 매우 엄격한 기준으로 현존하는 기술로는 배출허용기준을 충족시키기란 거의 불가능한 수준으로 판단하여 2004년에는 환경부에서 원피가공시설에 대한 T-N 배출 허용기준을 200mg/l로 완화한 바 있다.
즉, 현재까지의 기술로는 이러한 피혁폐수의 처리에 있어서 만족할 만한 처리수준을 달성하지 못하고 있으며, 더욱이 이들 폐수는 생물학적 처리에 적합하지 않기 때문에 유량조절, 중화 및 응집 침전 등의 전처리를 실시한 후 생물학적 처리를 하고 있어 다량의 슬러지(Sludge)가 발생되는 경우가 대부분이다. 또한, 심한 악취문제와 더불어 피혁폐수 처리에 어려움을 겪고 있어 이에 대한 대책과 효과적인 처리방법의 개발이 시급히 요구되고 있는 실정이다.
본 발명은 상기한 바와 같이 종래기술이 가지는 문제점을 해결하기 위해 제안된 것으로서, 피혁폐수와 같은 고농도 악성폐수의 생물학적 처리가능성을 제시하고자 하였으며, 폐수처리 과정에서 슬러지를 저감시킬 수 있도록 한 폐수의 생물학적 처리방법을 제공함에 그 목적이 있다.
본 발명의 다른 목적은 피혁폐수와 같은 고농도 악성폐수의 생물학적 처리제를 제공함에 있다.
상기한 목적을 달성하기 위해 본 발명은 바실러스 서브틸러스(Bacillus-subtilus) KS-3, 바실러스 아밀로리퀘파시엔스(Bacillus-amyloliquefaciens) KS-4, 바실러스-아가라다에렌스(Bacillus-agaradhaerens) KS-5, 파에니바실러스 렌티모부스(Paenibacillus-lentimorbus) KS-6, 바실러스 라에볼락티쿠스(Bacillus-laevolacticus) KS-7, 류코노스톡 파라메센테로이드(Leuconostoc paramesenteroides) KS-9, 쿠르시아 시비리카(Kurthia-sibirica) KS-13 및 스핑고박테리움 스피리티보럼-GC 서브그룹 B(플라보박테리움)(Sphingobacterium-spiritivorum-GC subgroup B(Flavobacterium) KS-18로 구성되는 군에서 선택되는 1종 이상의 미생물을 포함하는 미생물 제제를 폐수에 처리하는 것을 포함하는 생물학적 폐수처리 방법을 제공한다.
상기에서 폐수는 바람직하게는 피혁폐수로 한다.
상기에서 미생물 제제는 바람직하게는 담체에 고정된 형태이다.
또한, 본 발명은 바실러스 서브틸러스(Bacillus-subtilus) KS-3, 바실러스 아밀로리퀘파시엔스(Bacillus-amyloliquefaciens) KS-4, 바실러스-아가라다에렌스(Bacillus-agaradhaerens) KS-5, 파에니바실러스 렌티모부스(Paenibacillus-lentimorbus) KS-6, 바실러스 라에볼락티쿠스(Bacillus-laevolacticus) KS-7, 류코노스톡 파라메센테로이드(Leuconostoc paramesenteroides) KS-9, 쿠르시아 시비리카(Kurthia-sibirica) KS-13 및 스핑고박테리움 스피리티보럼-GC 서브그룹 B(플라보박테리움)(Sphingobacterium-spiritivorum-GC subgroup B(Flavobacterium) KS-18로 구성된 군에서 선택되는 1종 이상을 포함하는 폐수처리제를 제공한다.
이상에서와 같이 본 발명에 따른 피혁폐수 처리방법을 적용함으로써 고농도이면서 악성으로 알려진 피혁폐수를 순 생물학적 처리만으로 기존의 물리ㆍ화학적 전처리를 거친 후 생물학적 처리를 하는 공법과 비교하여 처리효율이 우수하고 슬러지의 발생비율이 현저히 감소시키는 효과가 발휘된다. 뿐만 아니라, 기업의 환경 부담금을 저감시켜 피혁제품의 생산 원가를 절감시킬 수 있는 효과도 발휘된다.
이하, 본 발명의 내용을 보다 상세하게 설명하면 다음과 같다.
본 발명은 상기한 바와 같이 바실러스 서브틸러스(Bacillus-subtilus) KS-3, 바실러스 아밀로리퀘파시엔스(Bacillus-amyloliquefaciens) KS-4, 바실러스-아가라다에렌스(Bacillus-agaradhaerens) KS-5, 파에니바실러스 렌티모부 스(Paenibacillus-lentimorbus) KS-6, 바실러스 라에볼락티쿠스(Bacillus-laevolacticus) KS-7, 류코노스톡 파라메센테로이드(Leuconostoc paramesenteroides) KS-9, 쿠르시아 시비리카(Kurthia-sibirica) KS-13 및 스핑고박테리움 스피리티보럼-GC 서브그룹 B(플라보박테리움)(Sphingobacterium-spiritivorum-GC subgroup B(Flavobacterium) KS-18로 구성되는 군에서 선택되는 1종 이상의 미생물 제제를 폐수에 처리하는 것을 포함하는 생물학적 폐수처리 방법을 제공한다.
상기 본 발명에 사용되는 미생물들의 분리과정은 다음과 같았다.
토양시료(충북 제천의 산림의 부숙토)를 60℃에서 30분 동안 열처리한 후 막자사발에서 곱게 갈아 준비해 둔 다음, 시료 1g을 취하여 0.85 % NaCl 9㎖에 현탁한 후, 100 내지 10-7로 희석하였다. 각각의 희석 현탁액 100 ㎕를 TSA, BL, BBL 배지(DIFCO 사)에 도말하여 28℃에서 배양하였고, 혐기성 균주를 동정하기 위하여 ANAEROGENTM COMPACT (OXOID 제품)을 사용하여 배양하였다. 배양된 균주는 콜로니 형태가 다른 것들을 선발하여 TSA 배지에서 적어도 3회 이상 계대배양하여 단일콜로니로 분리한 후, 분리된 균주는 액체 배양하고 게노믹 DNA(genomic DNA)를 순화하여 16S RNA의 프라이머를 이용하여 증폭한 뒤, 증폭된 부분을 주형(template)으로 하고 519r과 785r 프라이머(primer)를 사용하여 서열을 시퀀싱(sequencing)하였다.
그 결과물을 NCBI DB에서 조사하여 종을 동정하였는 바, 16S RNA로 균을 동 정하는 데 사용된 프라이머 세트는 "Nucleic acid techniques in bacterial systematics (John Wiley and Sons, England)"와 "nucleic acid research (2000) 28(1):173-174를 참고하였다.
이와 같이 분리된 본 발명에 사용되는 미생물은 한국유전자은행 (대전광역시 유성구 어은동 52번지 소재)을 기탁기관으로 하여, 바실러스 아밀로리퀘파시엔스(Bacillus-amyloliquefaciens) KS-4는 KCTC 11186BP, 바실러스-아가라다에렌스(Bacillus-agaradhaerens) KS-5는 KCTC 11187BP, 파에니바실러스 렌티모부스(Paenibacillus-lentimorbus) KS-6는 KCTC 11188BP, 바실러스 라에볼락티쿠스(Bacillus-laevolacticus) KS-7는 KCTC 11189BP, 류코노스톡 파라메센테로이드(Leuconostoc paramesenteroides) KS-9는 KCTC 11190BP, 쿠르시아 시비리카(Kurthia-sibirica) KS-13은 KCTC 11191BP 및 스핑고박테리움 스피리티보럼-GC 서브그룹 B(플라보박테리움)(Sphingobacterium-spiritivorum-GC subgroup B(Flavobacterium) KS-18은 KCTC 11192BP로서 2007.09.04일자로 각각 기탁되어 있다.
상기와 같은 미생물 들을 이용하여 본 발명에 따른 미생물 제제는 다음과 같은 방법으로 제조될 수 있다.
상기 본 발명에 따른 미생물 제제는 상기 미생물 혼합종균 0.001 내지 0.02중량%와, 쌀겨 2 내지 5중량%, 당밀 2 내지 4중량% 및 황설탕 2 내지 4중량%에 나머지 물을 혼합하여 100중량%가 되도록 하여 혼합한 후 온도 20 내지 25℃를 유지하며 2 내지 6시간 간격으로 5 내지 10㎥/h의 공기를 1 내지 3시간 동안 폭기하는 과정을 일일 2 내지 6회 반복적으로 수행하며 15 내지 21일간 배양하여 제조할 수 있다. 상기 폭기 등의 조건은 본 발명자의 연구결과 최적화된 결과이며, 당업자라면 상기 조건에 다소의 변형을 가할 수 있으나 그러한 변형이 본 발명의 권리범위를 벗어나지 않는다는 것도 알 것이다.
이와 같은 복합 미생물 액제를 제조한 후에는, 쌀겨, 농산물 부산물 및 농임산물 건조분말로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 배양원료 20 내지 30중량% 및 상기 복합미생물 액제 70 내지 80중량%로 구성된 혼합원료를 제조한 후, 상기 토양미생물 혼합종균 0.01 내지 0.1 중량%를 접종하는 접종단계를 수행할 수 있다. 본 발명의 미생물제제는 배양원료로서 비교적 구하기 용이하고 원가부담이 적은 쌀겨, 농산물 부산물 또는 농임산물 등을 사용할 수 있다. 상기 배양원료는 상기 쌀겨, 농산물 부산물 또는 농임산물 단독으로 또는 조합되어 사용되어도 무방하나, 바람직하게는 35 내지 45중량%의 쌀겨, 25 내지 35중량%의 농산물 부산물, 20 내지 30중량%의 농임산물의 조성비로 이루어지는 것이 바람직하다. 상기 배양원료는 미리 100메쉬 정도로 분쇄하여 분말상으로 사용하는 것이 바람직하다.
상기 혼합, 분쇄된 원료 들을 직화배양기에 넣고 미생물 발효에 적절한 환경을 유지하기 위해 액상의 복합미생물제로 수분을 조절한 다음, 바실러스 속 균주 또는 유산균을 포함하는 혼합종균을 접종할 수 있다. 상기 혼합종균은 계절적, 환경적 다양성이 존재하는 토양의 미생물상을 인위적인 여과 없이 그대로 채취하여 천연물배지상에서 6개월간 환경적응과정을 거치면서 유해성을 제거하여 분말상으로 제조할 수 있다. 본 발명에 따른 미생물제제의 제조시에는 상기 혼합종균을 원료 총중량의 0.01 내지 0.1 중량%를 접종하는 것이 더 바람직하다.
상기 접종단계를 수행한 후에는, 상기 접종된 혼합원료를 80 내지 85℃에서 2 내지 8시간동안 배양시키는 고온 배양단계를 거치게 된다. 본 발명의 미생물제제 제조방법은 전술한 바와 같이, 80℃ 이상의 초고온에서 배양하는 것을 특징으로 한다. 보통의 미생물배양은 20 내지 40℃ 범위에서 이루어지는 것이 일반적인 것임을 고려하면, 본 발명의 미생물제제는 초고온의 조건에서 수행된다는 것을 알 수 있다. 특히, 본 발명의 일실시예에서는 상기 복합종균이 접종된 배양원료는 80 내지 85℃에서 2 내지 8시간 동안 30 내지 80rpm/min의 속도로 교반하면서 초고온 배양시켰다. 이때 배양온도는 불필요한 미생물의 증식을 억제하기 위해 80℃ 이상에서 수행하나, 본 발명에 따른 미생물 복합균의 활성도를 유지하기 위해 85℃이하에서 수행하는 것이 바람직하다.
상기 고온배양단계 후, 선택적으로 상기 배양된 혼합원료를 상온까지 냉각한 후 상기 혼합원료 100중량부에 대해 상기 복합미생물 액제 10 내지 15중량부를 첨가하여 성형기를 이용하여 성형하는 성형단계를 추가로 포함할 수 있다. 상기 고온 배양 후 본 발명의 미생물제제는 어느 정도의 수분을 함유하고 있기는 하지만 고온배양의 영향으로 성형에는 적합하지 않은 분말상으로 존재하게 된다. 이를 그대로 건조되거나 분쇄과정을 거쳐 건조되어 분말상으로 제조될 수도 있으나, 필요에 따라 선택적으로 성형과정을 거칠 수 있기 때문에 성형을 위하여 수분을 공급하는 것이다. 상기 성형과정은 특별한 제한은 없으며, 본 발명의 일실시예에서는 배양된 미생물제제를 펠렛형으로 가공할 경우 시간당 800 내지 1,000kg 처리용량의 성형기 를 이용 하여 성형하였다.
상기 고온배양 또는 성형 단계 후에는 상기 배양된 미생물제제를 건조하는 건조단계를 수행하게 된다. 상기 건조는 미생물 제제가 열변형 등의 우려가 없는 범위에서 공지의 건조방법 모두 사용가능하며 특별한 제한은 없다. 본 발명의 일실시예에서는 50 내지 80℃ 범위에서 열풍건조를 수행하였다.
또한, 본 발명은 상기 미생물들을 폐수처리조에 직접 첨가하는 것을 배제하는 것은 아니지만, 미생물들의 활성 지속 가능한 형태로서 담체에 담지된 형태로 첨가하는 것이 효과적이다. 미생물을 담지시키는 경우는 담체 표면에의 단순한 흡착에 의한 담지도 좋지만, 고정화 담체에 담지시키는 것이 보다 유리하다. 즉 고정화 담체를 이용하면 미생물의 활성이 높아지고, 분해 기간이 단축되기 때문에, 이 형태가 보다 바람직하다.
미생물을 포괄 고정화하여 첨가하는 형태는 미생물의 활동을 안정 또한 활성화한다. 이와 같은 방법의 구체적인 것으로는 공지의 각종 방법들이 이미 알려져 있다. 상기의 본 발명의 폐수 처리 방법에 따라, 높은 COD값의 피혁폐수를 본 발명에 따른 미생물 제제를 이용하여 구체적으로는 기준치 이하의 수준으로 저감시킬 수 있다.
미생물 담지용 담체로서는 상기 미생물들을 담지하여 피혁폐수에 투여할 수 있는 재료이면 어느 공지 재료도 사용할 수 있지만, 유용 미생물의 효과적인 담지라고 하는 점에서 담체 표면에 미생물이 강하게 흡착하는 것, 미생물을 미소공극내에 침입시키는 것으로 보관 유지력을 높일 수 있는 것과 같은 다공성의 것, 마이크 로 입자가 응집하여 실질적으로 흡착 혹은 흡장표면을 증대시킨 것이 바람직하다.
구체적으로는 셀룰로오스, 덱스트란, 아가로스와 같은 다당류;콜라겐, 젤라틴, 알부민 등의 불활화 단백질;이온교환 수지, 폴리비닐 클로라이드와 같은 합성 고분자 화합물;세라믹스나 다공성 유리 등의 무기물;한천, 알긴산, 카라기난 등의 천연 탄수화물;또는 셀룰로오스 아세테이트, 폴리 아크릴 아미드, 폴리비닐 알코올, 에폭시 수지, 광경화성 수지, 폴리에스테르, 폴리스티렌, 폴리우레탄 등 포괄 담체로써 얻을 수 있는 고분자 화합물 등을 들 수 있다. 또, 리그닌, 전분, 키틴, 키토산, 여과지, 목편 등으로 이루어지는 것도 이용할 수 있다.
미생물의 담지ㅇ고정화 중에서도 특히 미생물이 담체 물질내에 함유된 담지 형태, 즉 포괄 고정화가 바람직하다.
바람직한 담체의 형상으로서는 대략 구상, 대략 입방체상, 대략 직방체상, 원통형 혹은 튜브상이며, 그 중에서도 제조하기 쉬운 대략 구상, 혹은 비면적을 크게 할 수 있는 거의 직방체상의 것이 바람직하다. 담체의 제조 방법으로서는 기존의 임의의 방법을 이용할 수 있다. 예를 들면 미생물과 담체 물질(또는 그 전구체)의 혼합 용액을 불용해성 액체 내에 적하하여 액체내에 액적을 고화시켜 미생물 담지용 담체 입자의 분산물을 만드는 방법, 미생물과 담체 물질(또는 그 전구체)의 혼합 용액을 저온화, 겔화제나 고체화제의 첨가 등의 방법으로 고화시킨 후, 고화체를 적당한 사이즈로 잘라 미생물을 담지한 직방체 입자를 얻는 방법, 미생물과 담체 물질(또는 그 전구체)의 혼합 용액을 압출하여 노즐로부터 불용해성 액체내에 주입하여 액체내에서 고화시켜 미생물 담지용 담체의 사상고화물을 얻고 이를 적당 하게 잘라 원통형 입자를 만드는 방법, 또 이 경우의 압출 성형 다이를 환상으로 하여 원환상 (튜브상)의 미생물 담지용 담체입자를 얻는 방법을 들 수 있다.
포괄 고정화법의 특징은 균체를 고농도로 유지할 수 있기 때문에, 처리 효율을 향상시킬 수 있어 증식이 늦은 균을 고정화할 수 있다. 또, pH, 온도 등의 조건 변화에 대한 내성이 크고, 고부하 상태에도 견딜 수 있는 것도 있다. 포괄 고정화법으로서는 아크릴 아미드법, 한천-아크릴 아미드법, PVA-붕산법, PVA-냉동법, 광경화성 수지법, 아크릴계 합성 고분자 수지법, 폴리 아크릴산 소다법, 알긴산나트륨법, K-카라기난법 등, 미생물을 가둘 수 있고, 담체내에서 미생물의 활성을 유지하면서 물리적 강도가 크게 장시간 사용할 만한 것이라면 종류를 묻지 않는다. 또, 다른 포괄 고정화 방법으로서는 활성탄 입자에 고정화하는 방법을 들 수 있다. 또 다른 포괄 고정화 방법으로서는 특정 미생물을 탄소섬유제 천에 고정화하는 방법도 있다. 담체로서 이용되는 탄소섬유는 예를 들면, 석탄 피치를 고온으로 용융방사하여 불융탄소화하여 얻을 수 있는 섬유이다. 바람직하게는 지름 1~30μm의 탄소섬유로 구성되는 두께 0.3~6.0 mm, 단위무게 20~300 g/m2의 탄소섬유제 천을 이용한다.
또한, 본 발명의 미생물제제는 필요에 따라 여러 가지 첨가제, 예를 들면 광물(응집제), 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, 성형화에 사용되는 제제 등을 함유할 수 있다.
상기와 같이 제조될 수 있는 미생물제제의 첨가 방법은 처리조내에 균일하게 분산할 수 있는 것인 한 어떠한 방법이어도 사용할 수 있다. 예를 들면, 처리조의 폐수 속에 공기를 넣어 배수정화 또는 교반기 등에 의한 교반을 행하면서 미생물을 수납 용기로부터 수동으로 직접 투입하여도 무방하다.
폐수를 처리하는 복수 처리조 전체의 용량과 체류 기간은 폐수량에 따라서 다르지만 일반적으로는 복수 처리조 전체에 있어서의 폐수의 체류 시간이 0.2일부터 20 일 정도가 되도록 조정된다. 특히 체류 시간이 0.5일부터 5 일정도가 되도록 조정되는 것이 바람직하다.
또, 구성되는 처리조의 수에는 제한은 없지만, 효율, 장치 비용의 관점으로부터 2 내지 3조가 바람직하다.
미생물제제의 처리는 pH, DO(용존 산소), 처리 전후의 COD값 등을 측정하여 관리한다. pH는 4.0~8.5, 바람직하게는 4.5~8.0이며, 폐수의 성질에 따라 더욱 좁은 관리폭이 선택될 수 있다. DO는 5.0mg/l~15.0mg/l, 바람직하게는 7.0mg/l~13.0mg/l이다. pH는 산 또는 알칼리의 첨가에 의해, DO는 하수 속에 공기를 넣어 배수 정화량의 조절에 의해 제어할 수 있다.
특정 화합물의 농도 측정은 직접적인 정량도 가능하겠지만, 관리상의 실제적 방법으로서는 농도에 대응하는 값으로 하여 COD를 이용하는 것이 실제적이다. COD의 측정은 최초 폐수 처리조 입구와 최종 처리조의 출구 쌍방의 농도를 측정하는 것이 바람직하다.
폐수처리조에서는 영양원으로 미생물의 생육에 적당한 탄소원, 질소원 혹은 유기 영양원, 무기염이 투입될 수 있다. 유기 영양원으로서 폴리 펩톤, 효모 엑기스, 고기 엑기스, 당밀 등을, 무기 영양원으로서 각종 인산염, 마그네슘염 등이 투여되고 그 첨가량은 유기 영양원은 폐수량의 0.001~5 질량%, 바람직하게는 0.01~1 중량%이며, 무기 영양원은 유기 영양원의 0.1~1 중량% 정도이다. 이 양은 한정적인 것은 아니고, 폐수의 성질이나 상태에 의해 적당히 선택된다.
상기한 구성에 의해 얻어지는 미생물 제제를 이용한 폐수처리방법은 현재의 폐수배출 허용기준을 만족하는 것 뿐만 아니라, 슬러지 발생량에 있어서 처리전 매일 40~50톤 가량 발생하던 슬러지를 84일간 적용한 결과 80톤으로 감소시키며, 이는 4천~5천만원의 비용절감 효과를 가진다. 더욱이 해양투기가 금지되는 2011년 이후에는 슬러지 처리비용이 천문학적으로 발생될 것으로 예상된다.
또한, 본 발명에 따른 폐수처리방법에 의하면 폐수처리시설의 악취를 감소시킨다.
이하 본 발명의 내용을 실시예 및 시험예를 통하여 구체적으로 설명한다. 그러나, 이들은 본 발명을 보다 상세하게 설명하기 위한 것으로 본 발명의 권리범위가 이들에 의해 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> 복합미생물 균주의 배양
미생물이 함유된 토양시료(충북 제천의 산림의 부숙토)를 60℃에서 30분 동안 열처리한 후 막자사발에서 곱게 갈아 준비해 둔 다음, 시료 1g을 취하여 0.85 % NaCl 9㎖에 현탁한 후, 100 내지 10-7로 희석하였다. 각각의 희석 현탁액 100 ㎕를 TSA, BL, BBL 배지(DIFCO 사)에 도말하여 28℃에서 배양하여 토양미생물 복합종균을 배양하였다. 상기 토양미생물 혼합종균을 분리동정한 결과 바실러스 속 균주 또는 유산균인 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 바실러스 소노렌시스(Bacillus sonorensis), 바실러스 TUT1206(Bacillus sp. TUT1206), 바실러스 Q-12(Bacillus sp. Q-12), 바실러스 터모아밀로보란스(Bacillus thermoamylovorans), 류코노스톡 파라메센테로이드(Leuconostoc paramesenteroides) 및 페디오코커스 펜토사세이스 스트레인 LM2632(Pediococcus pentosaceis strain LM2632) 등으로 구성되어 있음을 알 수 있었다.
<실시예 2> 미생물제제의 제조
상기와 같이 배양된 토양미생물 종균 0.01kg, 쌀겨 4kg, 당밀 2kg 및 황설탕 4kg을 음용수 기준에 적합한 물과 혼합하여 무게가 100kg이 되도록 혼합한 후 20 내지 25℃를 유지하며 4시간 간격으로 10㎥/h의 공기를 2시간 동안 폭기하는 과정을 일일 4회 반복적으로 수행하며 21일간 배양하여 복합미생물 액제를 제조하였다. 상기 복합미생물 액제는 총균수 4,3 x 109 cfu/g였다.
이와는 별도로, 미리 분쇄한 65kg의 쌀겨, 35kg의 농산물부산물을 혼합기능이 있는 배양기에 넣고 30분간 혼합하였다. 혼합된 원료에 상기 복합미생물 액제 30kg을 넣어 수분농도 70%로 조절한 다음, 상기 토양미생물 복합종균을 배양원료 전체중량의 0.01%로 접종하였다. 접종된 배양원료를 외기온도 300℃, 배양기 내부온도 80 내지 85℃,30 내지 80rpm/min으로 교반하면서 초고온 배양을 4시간 진행하였다.
<실시예 3> 미생물의 동정
상기와 같이 제조한 미생물제제 중 콜로니 형태가 다른 것들을 선발하여 TSA 배지에서 적어도 3회 이상 계대배양하여 단일콜로니로 분리한 후, 분리된 균주는 액체 배양하고 지노믹 DNA(genomic DNA)를 순화하여 16S RNA의 프라이머를 이용하여 증폭한 뒤, 증폭된 부분을 주형(template)으로 하고 519r과 785r 프라이머(primer)를 사용하여 서열을 시퀀싱(sequencing)하였다. 그 결과물을 NCBI DB에서 조사하여 종을 동정하였는 바, 16S RNA로 균을 동정하는 데 쓰인 프라이머 세트는 "Nucleic acid techniques in bacterial systematics (John Wiley and Sons, England)"와 "nucleic acid research (2000) 28(1):173-174를 참고하였다.
또한, 상기 16s RNA 시퀀싱 외에 GC-MIDI분석, BIOLOG 분석을 더해 동정을 하였다. 상기 16s RAN 시퀀싱 결과와 GC-MIDI의 결과가 상이한 경우에는 GC-MIDI의 결과를 따르는 방향으로 동정하였다. 하기 표 1은 상기 16s RNA 시퀀싱 결과와 GC-MIDI 및 Biolog 분석 결과를 통해 확인된 본 발명의 미생물제제에 포함된 신규한 균주에 대한 동정결과를 나타낸 것이다. 하기 표 1에 나타난 것과 같이, 본 발명의 미생물제제는 식물성 병원균에 대하여 길항작용을 갖는 총 8종의 신규한 균주를 포함한다. SEQ NO 1∼8은 각각 하기 신규한 균주에 대한 16s RNA 분석결과이다.
<표 1>
GC 분석 16s RNA sequencing Biolog 분석
No.1 유사도
ks-3 0.914 Bacillus - subtilis Bacillus subtilis Bacillus amyloliquefaciens B
ks-4 0.769 Bacillus-amyloliquefaciens
ks-5 0.761 Bacillus - agaradhaerens Bacillus sp. Bacillus subtilis C
ks-6 0.789 Paenibacillus - lentimorbus
ks-7 0.794 Bacillus - laevolacticus Bacillus sonorensis Bacillus licheniformis
ks-9 Leuconostoc paramesenteroides Leuconostoc paramesenteroides
ks-13 0.294 Kurthia - sibirica Bacillus oleronius Streptococcus iniae
ks-18 0.674 Sphingobacterium - spiritivorum Uncultured bacterium PE02 Sphingobacterium spiritovorum
<실시예 4> 분말상 미생물제제의 제조
상기 실시예 2에서 제조한 액상의 미생물제제를 실온(20 내지 25℃)으로 냉각한 다음 열풍건조(60℃)의 과정을 거쳐 수분함량 12%의 미생물제제 92kg을 제조하였다.
<실험예 1> 피혁폐수에의 적용
도 1에서와 같은 부산 신평 장림 피혁조합에서 운용하는 공동 폐수처리 시설에 본 발명 실시예에 따른 미생물 제제를 적용하였다. 1톤 탱크에 종균 150kg과 상기 분말상의 미생물제제 10kg 및 당밀 20리터를 넣고 3시간 교반하였다. 교반한 내용물을 상온에서 24시간 숙성시킨 후 숙성된 내용물 1톤을 49톤의 물에 희석하여 100톤 탱크에 넣었다. 100톤 탱크의 안전재고(safety inventory)가 50톤일 때 위 희석액 50톤을 넣어 사용하였다. 100톤에 든 미생물 액상 제제를 1일 6톤 씩 유량 조절조, 폭기조, 발효합성조에 1일 6톤씩 투입하였고, 1일 폐수 유입량은 7,000톤으로 하였다. 일체의 다른 화학적 처리과정은 수행하지 않았으며, 그 결과 슬러지 발생량은 거의 없었으며, 악취가 감소되고, 하기 표에서와 같이 BOD, COD 및 T-N 등의 측정값에서 확인할 수 있듯이 방류수 수질이 획기적으로 개선되어졌다.
<표 1>
구분 1월 2월 3월 4월 처리기준
pH 7.80 7.76 7.29 7.97 -
COD[ppm] 215 226 164 109 120
SS[ppm] 237 269 546 73 -
NH3-N[ppm] 66.3 19.9 22.3 4.8 -
NO2-N[ppm] 22.6 58.0 16.4 1.7 -
NO3-N[ppm] 46.6 125.1 100.4 4.7 -
TN[ppm] 136 203 139 11 90
상술한 바와 같이, 본 발명의 바람직한 실시예를 참조하여 설명하였지만 해당 기술 분야의 숙련된 당업자라면 하기의 특허청구범위에 기재된 본 발명의 사상 및 영역으로부터 벗어나지 않는 범위 내에서 본 발명을 다양하게 수정 및 변경시킬 수 있음을 이해할 수 있을 것이다.
도 1은 본 발명의 피혁폐수처리 공정을 위한 폐수처리 시스템의 구성예
<110> YANG, Kuk San <120> METHOD FOR HIGHLY BIOLOGICALLY THE WASTE-WATER <160> 8 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 1518 <212> RNA <213> Bacillus subtilis <220> <221> rRNA <222> (1)..(1518) <400> 1 ucgauuagug uuugauccug gcucaggacg aacgcuggcg gcgugccuaa uacaugcaag 60 ucgagcggac agaugggagc uugcucccug auguuagcgg cggacgggug aguaacacgu 120 ggguaaccug ccuguaagac ugggauaacu ccgggaaacc ggggcuaaua ccggaugguu 180 guuugaaccg caugguucaa auauaaaagg uggcuucggc uaccacuuac agauggaccc 240 gcggcgcauu agcuaguugg ugagguaacg gcucaccaag gcgacgaugc guagccgacc 300 ugagagggug aucggccaca cugggacuga gacacggccc agacuccuac gggaggcagc 360 aguagggaau cuuccgcaau ggacgaaagu cugacggagc aacgccgcgu gagugaugaa 420 gguuuucgga ucguaaagcu cuguuguuag ggaagaacaa guaccguucg aauagggcgg 480 uaccuugacg guaccuaacc agaaagccac ggcuaacuac gugccagcag ccgcgguaau 540 acguaggugg caagcguugu ccggaauuau ugggcguaaa gggcucgcag gcgguuucuu 600 aagucugaug ugaaagcccc cggcucaacc ggggaggguc auuggaaacu ggggaacuug 660 agugcagaag aggagagugg aauuccacgu guagcgguga aaugcguaga gauguggagg 720 aacaccagug gcgaaggcga cucucugguc uguaacugac gcugaggagc gaaagcgugg 780 ggagcgaaca ggauuagaua cccugguagu ccacgccgua aacgaugagu gcuaaguguu 840 aggggguuuc cgccccuuag ugcugcagcu aacgcauuaa gcacuccgcc uggggaguac 900 ggucgcaaga cugaaacuca aaggaauuga cgggggcccg cacaagcggu ggagcaugug 960 guuuaauucg aagcaacgcg aagaaccuua ccaggucuug acauccucug acaauccuag 1020 agauaggacg uccccuucgg gggcagagug acagguggug caugguuguc gucagcucgu 1080 gucgugagau guuggguuaa gucccgcaac gagcgcaacc cuugaucuua guugccagca 1140 uucaguuggg cacucuaagg ugacugccgg ugacaaaccg gaggaaggug gggaugacgu 1200 caaaucauca ugccccuuau gaccugggcu acacacgugc uacaauggac agaacaaagg 1260 gcagcgaaac cgcgagguua agccaauccc acaaaucugu ucucaguucg gaucgcaguc 1320 ugcaacucga cugcgugaag ccggaaucgc uaguaaucgc ggaucagcau gccgcgguga 1380 auacguuccc gggccuugua cacaccgccc gucacaccac gagaguuugu aacacccgaa 1440 gucggugagg uaaccuuuua ggagccagcc gccgaaggug ggacagauga uuggggugaa 1500 gucguaacaa gguagcca 1518 <210> 2 <211> 1514 <212> RNA <213> Bacillus amyloliquefaciens <220> <221> rRNA <222> (1)..(1514) <400> 2 uggcuaccuu guuacgacuu caccccaauc aucuguccca ccuuaggcgg cuggcuccaa 60 aaagguuacc ccaccgacuu cggguguuac aaacucucgu ggugugacgg gcggugugua 120 caaggcccgg gaacguauuc accgcggcau gcugauccgc gauuacuagc gauuccagcu 180 ucauguaggc gaguugcagc cuacaauccg aacugagaac gguuuuauga gauuagcucc 240 accucgcggu cuugcagcuc uuuguaccgu ccauuguagc acguguguag cccaggucau 300 aaggggcaug augauuugac gucaucccca ccuuccuccg guuugucacc ggcagucacc 360 uuagagugcc caacugaaug auggcaacua agaucaaggg uugcgcucgu ugcgggacuu 420 aacccaacau cucacgacac gagcugacga caaccaugca ccaccuguca cucugcuccc 480 gaaggagaag cccuaucucu aggguuguca gaggauguca agaccuggua agguucuucg 540 cguugcuucg aauuaaacca caugcuccac cgcuugugcg ggcccccguc aauuccuuug 600 aguuucagcc uugcggccgu acuccccagg cggagugcuu aaugcguuaa cuucagcacu 660 aaagggcgga aacccucuaa cacuuagcac ucaucguuua cggcguggac uaccagggua 720 ucuaauccug uuugcucccc acgcuuucgc gccucagugu caguuacaga ccagaaaguc 780 gccuucgcca cugguguucc uccauaucuc uacgcauuuc accgcuacac auggaauucc 840 acuuuccucu ucugcacuca agucucccag uuuccaauga cccuccacgg uugagccgug 900 ggcuuucaca ucagacuuaa gaaaccaccu gcgcgcgcuu uacgcccaau aauuccggau 960 aacgcuugcc accuacguau uaccgcggcu gcuggcacgu aguuagccgu ggcuuucugg 1020 uuagguaccg ucaaggugcc agcuuauuca acuagcacuu guucuucccu aacaacagag 1080 uuuuacgacc cgaaagccuu caucacucac gcggcguugc uccgucagac uuucguccau 1140 ugcggaagau ucccuacugc ugccucccgu aggagucugg gccgugucuc agucccagug 1200 uggccgauca cccucucagg ucggcuacgc aucguugccu uggugagccg uuaccucacc 1260 aacuagcuaa ugcgacgcgg guccauccau aagugacagc cgaagccgcc uuucaauuuc 1320 gaaccaugcg guucaaaaug uuauccggua uuagccccgg uuucccggag uuaucccagu 1380 cuuaugggca gguuacccac guguuacuca cccguccgcc gcuaacuuca uaagagcaag 1440 cucuuaaucc auucgcucga cuugcaugua uuaggcacgc cgccagcguu cauccugagc 1500 caugaucaaa cucu 1514 <210> 3 <211> 1513 <212> RNA <213> Bacillus agaradhaerens <220> <221> rRNA <222> (1)..(1513) <400> 3 uggcuaccuu guuacgacuu 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aaggcccggg aacguauuca ccgcggcaug cugauccgcg auuacuagcg auuccagccu 180 cacgcagucg aguugcagac ugcgauccga acugagaaca gauuuguggg auuggcuuag 240 ccucgcggcu ucgcugcccu uuguucugcc cauuguagca cguguguagc ccaggucaua 300 aggggcauga ugauuugacg ucauccccac cuuccuccgg uuugucaccg gcagucaccu 360 uagagugccc aacugaaugc uggcaacuaa gaucaagggu ugcgcucguu gcgggacuua 420 acccaacauc ucacgacacg agcugacgac aaccaugcac caccugucac ucugcccccg 480 aaggggaagc ccuaucucua ggguugucag aggaugucaa gaccugguaa gguucuucgc 540 guugcuucga auuaaaccac augcuccacc gcuugugcgg gcccccguca auuccuuuga 600 guuucagucu ugcgaccgua cuccccaggc ggagugcuua augcguuugc ugcagcacua 660 aagggcggaa acccucuaac acuuagcacu caucguuuac ggcguggacu accaggguau 720 cuaauccugu ucgcucccca cgcuuucgcg ccucagcguc aguuacagac cagagagucg 780 ccuucgccac ugguguuccu ccacaucucu acgcauuuca ccgcuacacg uggaauucca 840 cucuccucuu cugcacucaa guuccccagu uuccaaugac ccuccccggu ugagccgggg 900 gcuuucacau cagacuuaag aaaccgccug cgcgcgcuuu acgcccaaua auuccggaca 960 acgcuugcca 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ggacaaggug acagguggug 1080 caugguuguc gucagcucgu gucgugagau guuggguuaa gucccgcaac gagcgcaacc 1140 cuuauuauua guugccagca uucaguuggg cacucuagug agacugccgg ugacaaaccg 1200 gaggaaggug gggaugacgu caaaucauca ugccccuuau gaccugggcu acacacgugc 1260 uacaauggca uauacaacga gucgccaacc cgcgagggug cgcuaaucuc uuaaaguaug 1320 ucucaguucg gauuguaggc ugcaacucgc cuacaugaag ucggaaucgc uaguaaucgc 1380 ggaucagcac gccgcgguga auacguuccc gggucuugua cacaccgccc gucacaccau 1440 gagaguuugu aacacccaaa gccggugggg uaaccuuuua ggagccagcc gucuaaggug 1500 ggacagauga uuagggugaa gucguaacaa gguaacca 1538 <210> 6 <211> 1494 <212> RNA <213> Leuconostoc paramescenteroides <220> <221> rRNA <222> (1)..(1494) <400> 6 uggcuaccuu guuacgacuu caccccaguc augaauccua ccgugguaau cgccccccuu 60 gcgguuaggc uaacuacuuc ugguaaaacc cacucccaug gugugacggg cgguguguac 120 aagacccggg aacguauuca ccgcgacaug cugauccgcg auuacuagcg auuccgacuu 180 cacgcagucg aguugcagac ugcgauccgg acuacgaucg gguuucuggg auuggcuccc 240 ccucgcgggu uggcugcccu cugucccgac cauuguauga cgugugaagc ccuacccaua 300 agggccauga ggacuugacg ucauccccac cuuccuccgg uuugucaccg gcagucucau 360 uagagugucc uuucguagca acuaaugaca aggguugcgc ucguugcggg acuuaaccca 420 acaucucacg acacgagcug acgacagcca ugcagcaccu guguuccggu ucucuugcga 480 gcacugccaa aucucuucgg cauuccagac augucaaggg uagguaaggu uuuucgcguu 540 gcaucgaauu aauccacauc auccaccgcu ugugcggguc cccgucaauu ccuuugaguu 600 uuaaucuugc gaccguacuc cccaggcggu caacuucacg cguuagcugc gcuaccaagg 660 gccgaagccc ccaacagcua guugacaucg uuuagggcgu ggacuaccag gguaucuaau 720 ccuguuugcu ccccacgcuu ucgugcauga gcgucagugu uaucccagga ggcugccuuc 780 gccaucggug uuccuccgca ucucuacgca uuucacugcu acacgcggaa uuccaccucc 840 cucugacaca cucuagcccg guaguuaaaa augcaguucc aagguuaagc ccugggauuu 900 cacaucuuuc uuuccgaacc gccugcgcac gcuuuacgcc caguaauucc gauuaacgcu 960 ugcacccuac guauuaccgc ggcugcuggc acguaguuag ccggugcuua uucugcaggu 1020 accgucagcu gccccaggua uuaaccaggg ccguuucuuu ccugccaaaa gugcuuuaca 1080 acccgaaggc cuucaucgca cacgcgggau ggcuggauca 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uaaggacaag gguugcgcuc guugcgggac 420 uuaacccaac aucucacgac acgagcugac gacagccaug cagcaccugu cucacgguuc 480 ccgaaggcac caauccaucu cuggaaaguu ccguggaugu caagaccagg uaagguucuu 540 cgcguugcau cgaauuaaac cacauacucc accgcuugug cgggcccccg ucaauuccuu 600 ugaguuucag ucuugcgacc guacucccca ggcggcgaac uuaacgcguu agcuucgaua 660 cugcgugcca aguugcaccc aacauccagu ucgcaucguu uagggcgugg acuaccaggg 720 uaucuaaucc uguuugcucc ccacgcuuuc gugccucagu gucaguguug guccagaugg 780 ccgccuucgc cacagauguu ccucccgauc ucuacgcauu ucacugcuac accgggaauu 840 ccgccauccu cuaccacacu cuaguugccc aguauccacu gcaauuccca gguugagccc 900 agggcuuuca caacggacuu aaacaaccac cuacgcacgc uuuacgccca guaauuccga 960 guaacgcuug cacccuucgu auuaccgcgg cugcuggcac gaaguuagcc ggugcuuauu 1020 cuuuggguac cgucagaaca aucggguauu aaccgacugc uuuucuuucc caacaaaagg 1080 gcuuuacaac ccgaaggccu ucuucaccca cgcggcaugg cuggaucagg cuugcgccca 1140 uuguccaaua uuccccacug cugccucccg uaggagucug gaccgugucu caguuccagu 1200 guggcugauc auccucucag accagcuacg gaucgucgcc uuggugggcc uuuaccccgc 1260 caacuagcua auccgacauc ggcucaucua uccgcgcgaa gcccgaaggu ccuccgcuuu 1320 cacccuaagg ucguaugcgg uauuagcgua aguuucccua cguuaucccc cacgaaaagg 1380 uagauuccga uguauuccuc acccguccgc cacucgccac ccagagagca agcucuccug 1440 ugcugccguu cgacuugcau guguuaggcc ugccgccagc guucacucug agccaggauc 1500 aaacucua 1508 <210> 8 <211> 1091 <212> RNA <213> Sphingobacterium spiritivorum <220> <221> rRNA <222> (1)..(1091) <400> 8 uacaaaucuc acgacacgag cugacgacaa ccaugcacca ccugucacuc ugcccccuaa 60 ggggaagccc uaucucuagg guugucagag gaugucaaga ccugguaagg uucuucgcgu 120 ugcuucgaau uaaaccacau gcuccaccgc uugugcgggc ccccgucaau uccuuugagu 180 uucagucuug cgaccguacu ccccaggcgg agugcuuaau gcguuugcug cagcacuaaa 240 gggcggaaac ccucuaacac uuagcacuca ucguuuacgg cguggacuac caggguaucu 300 aauccuguuc gcuccccacg cuuucgcgcc ucagcgucag uuacagacca gagagucgcc 360 uucgccacug guguuccucc acaucccuac gcauuucacc gcuacacgug gaauuccgcu 420 cuccucuucu gcacucaagu uccccaguuu ccaaugaccc uccccgguug agccgggggc 480 uuucacauca gacuuaagaa accgccugcg cgcgcuuuac gcccaauaau uccggacaac 540 gcuugccacc uacguauuac cgcggcugcu ggcacguagu uagccguggc uuucugguua 600 gguaccguca agguaccgcc cuauucgaac gguacuuguu cuucccuaac aacagaguuu 660 uacgauccga aaaccuucau cacucacgcg gcguugcucc gucagacuuu cguccauugc 720 ggaagauucc cugcugcugc cucccguagg agucugggcc gugucucagu cccagugugg 780 ccgaucaccc ucucaggucg gcuacgcauc gucgccuugg ugagccguua ccucaccaac 840 uagcuaaugc gccgcggguc caucuguaag ugguagcuga aagccaccuu uuauaauuga 900 accaugcggc ucaaucaagc auccgguauu agccccgguu ucccggaguu aucccagucu 960 uacaggcagg uuacccacgu guuacucacc cguccgccgc ugaccuaagg gagcaagcuc 1020 ccgucggucc gcucgacuug cauguauuag gcacgccgcc agcguucguc cugagccaug 1080 aucaaacucu a 1091

Claims (6)

  1. 바실러스 서브틸러스(Bacillus-subtilus) KS-3, 바실러스 아밀로리퀘파시엔스(Bacillus-amyloliquefaciens) KS-4, 바실러스-아가라다에렌스(Bacillus-agaradhaerens) KS-5, 파에니바실러스 렌티모부스(Paenibacillus-lentimorbus) KS-6, 바실러스 라에볼락티쿠스(Bacillus-laevolacticus) KS-7, 류코노스톡 파라메센테로이드(Leuconostoc paramesenteroides) KS-9, 쿠르시아 시비리카(Kurthia-sibirica) KS-13 및 스핑고박테리움 스피리티보럼-GC 서브그룹 B(플라보박테리움)(Sphingobacterium-spiritivorum-GC subgroup B(Flavobacterium) KS-18로 구성된 군에서 선택되는 1종 이상의 미생물 제제를 폐수에 처리하는 것을 포함하는 생물학적 폐수처리 방법
  2. 제1항에 있어서, 폐수는 피혁폐수인 것을 특징으로 하는 생물학적 폐수처리 방법
  3. 제1항에 있어서, 미생물 제제는 액상제제인 것을 특징으로 하는 생물학적 폐수처리 방법
  4. 제1항에 있어서, 미생물 제제는 담체에 고정된 형태인 것을 특징으로 하는 생물학적 폐수처리 방법
  5. 바실러스 서브틸러스(Bacillus-subtilus) KS-3, 바실러스 아밀로리퀘파시엔스(Bacillus-amyloliquefaciens) KS-4, 바실러스-아가라다에렌스(Bacillus-agaradhaerens) KS-5, 파에니바실러스 렌티모부스(Paenibacillus-lentimorbus) KS-6, 바실러스 라에볼락티쿠스(Bacillus-laevolacticus) KS-7, 류코노스톡 파라메센테로이드(Leuconostoc paramesenteroides) KS-9, 쿠르시아 시비리카(Kurthia-sibirica) KS-13 및 스핑고박테리움 스피리티보럼-GC 서브그룹 B(플라보박테리움)(Sphingobacterium-spiritivorum-GC subgroup B(Flavobacterium) KS-18로 구성된 군에서 선택되는 1종 이상을 포함하는 폐수처리제
  6. 제5항에 있어서, 폐수는 피혁폐수인 것을 특징으로 하는 폐수처리제
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