KR100552462B1 - Natural anti-virus and Composition comprising thereof - Google Patents
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Abstract
본 발명은 김치의 숙성 과정에서 출현하는 김치 유산균을 이용하여 제조되는 바이러스의 감염에 대한 높은 억제 효과를 나타내고 부작용이 없는 안전성이 높은 천연 항바이러스제 및 이를 포함하는 음료, 사료, 식품, 의약품, 화장품과 같은 조성물에 관한 것이다.The present invention provides a high inhibitory effect on the infection of the virus produced by the kimchi lactic acid bacteria appearing during the ripening process of kimchi and high safety without side effects and beverages, feeds, foods, pharmaceuticals, cosmetics and the like To the same composition.
Description
본 발명은 천연 항바이러스제 및 이를 포함하는 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 김치의 숙성 과정에서 출현하는 김치 유산균을 이용하여 제조되는 바이러스의 감염에 대한 높은 억제 효과를 나타내고 부작용이 없는 안전성이 높은 천연 항바이러스제 및 이를 포함하는 음료, 사료, 식품, 의약품, 화장품과 같은 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a natural antiviral agent and a composition comprising the same, and more particularly, a high safety natural with high inhibitory effect against the infection of the virus produced using the kimchi lactic acid bacteria appearing during the ripening process of kimchi and no side effects It relates to an antiviral agent and a composition such as beverages, feed, food, medicine, cosmetics comprising the same.
매년 독감을 유행시키는 인플루엔자 바이러스는 직경 1/10,000mm 정도의 엔벨롭(envelope)이 있는 RNA 바이러스이다. 그 항원성의 차이로부터 A, B, C의 3개형으로 분류되지만 유행적인 확산을 보이는 것은 A, B형이다. 이들 바이러스의 입자 표면에는 적혈구 응집소(HA)와 뉴라미데이지(neuramidase; NA)라는 2종류의 당단백이 스파이크 상으로 돌출되어 있고, 내부에는 8개로 분절된 유전자 RNA가 존재한다. 바이러스 표면에 있는 HA와 NA는 동일한 아형 내에서 변이를 번번이 일으키고, 매년 새로운 항원변이주가 출현한다.The influenza virus that causes the flu every year is an RNA virus with an envelope of about 1 / 10,000 mm in diameter. It is classified into three types of A, B, and C from the difference of antigenicity, but it is type A, B which shows epidemic spread. On the particle surface of these viruses, two types of glycoproteins, erythrocyte agglutinates (HA) and neuramidase (NA), protrude onto spikes, and there are eight segmented gene RNAs inside. HA and NA on the surface of the virus cause mutations within the same subtype, with new antigenic strains appearing each year.
기침에 의한 비말에 의해 방출된 인플루엔자 바이러스는 사람의 코나 입에 침입해 바이러스 표층의 스파이크상 당단백질 HA에 의해 상기도의 점막 상피세포에 흡착되고 세포에 침입 후 증식을 개시한다. 그 동안의 연구에 의해 바이러스 감염 메카니즘이 명확하게 되었는데, 바이러스는 사람의 표적세포의 표층에 존재하는 당쇄로 된 리셉터에 결합하고, 엔도좀으로 둘러싸여져 바이러스막과 엔도좀막의 융합에 의해 세포내로 침입하고 바이러스 유전자의 전사와 복제, 그리고 숙주세포막에서의 출아에 의해 자손 바이러스 입자를 형성해서 증식한다.Influenza viruses released by cough droplets invade human noses or mouths and are adsorbed to the mucosal epithelial cells of the upper airway by spiked glycoprotein HA on the surface of the virus and invade the cells and initiate proliferation. Research has clarified the mechanism of viral infection, which binds to sugar chain receptors on the surface of human target cells, is surrounded by endosomes, and invades into cells by fusion of viral and endosomal membranes. Progeny virus particles are formed and multiplied by transcription and replication of viral genes and emergence from host cell membranes.
인플루엔자 바이러스의 감염에 의해 수일동안 돌연한 발열, 두통, 관절의 통증, 전신권태감 등의 증상이 나타나고, 이와 전후하여 기침이나 목의 통증, 콧물, 코막힘 등의 호흡기 증상이 나타난다. 소위 감기와는 다르며, 감염력이 강해서 단기간에 폭발적인 유행을 일으키는 것이 특징이다. 또 인플루엔자 바이러스의 HA 단백질 구조는 매년마다 변이를 되풀이하며 과거의 감염에 의해 생겨난 항체가 그다지 유행하지 않은 것도 감염을 확신시키는 요인이 되고 있다.Influenza virus infection causes symptoms such as sudden fever, headache, joint pain, and general boredom for several days. Before and after this, respiratory symptoms such as cough, sore throat, runny nose and stuffy nose appear. It is different from the so-called cold, and its infectivity is strong, which is characterized by an explosive outbreak in a short time. In addition, the HA protein structure of influenza viruses repeats every year, and the fact that the antibodies produced by past infections are not so prevalent is contributing to the conviction.
인플루엔자 바이러스 감염을 억제하기 위해서는, 상피세포에의 흡착 저해, 세포에의 침입 저해, 유전자의 전사, 복제 억제, 단백질 합성 저해, 세포에서의 방출 억제 등이 고려될 수 있고, 각각 항인플루엔자 바이러스제의 타겟이 되고 있다. 현재까지는 아만타딘, 리만타딘, 자나미빌 등이 항바이러스제로 개발되었지만 과민증, 정신신경 증상, 소화기계 증상, 자율신경계 증상 등의 부작용이 보고되어 있어 그 응용에 관해서는 많은 주의가 필요하다.In order to inhibit influenza virus infection, inhibition of adsorption to epithelial cells, inhibition of invasion into cells, transcription of genes, inhibition of replication, inhibition of protein synthesis, inhibition of release from cells, and the like may be considered. It is becoming. Until now, amantadine, rimantadine, zanamiville and the like have been developed as antiviral agents, but side effects such as hypersensitivity, mental neurological symptoms, digestive system symptoms, and autonomic nervous system symptoms have been reported.
또한 인플루엔자 바이러스는 기도 점막상피에 감염, 증식하는 것이며, 백신의 접종에 의해 감염을 억제하는 것은 유행하는 바이러스의 형과 백신의 바이러스 의 형이 맞지 않으면 효과가 적은 문제점이 있어 백신에 의한 예방에는 한계가 있으며, 현재 가장 유효한 예방책은 잦은 양치질과 목의 건조를 피하는 것, 영양과 휴식을 충분히 취하는 것 등이라고 알려져 있을 뿐 효과적인 치료법이나 예방책은 아직 미비한 상태이다.In addition, influenza virus infects and proliferates the airway mucosal epithelium, and suppressing infection by inoculation of vaccines has little effect if the type of the epidemic virus does not match the type of the virus of the vaccine. Currently, the most effective precautions are known to prevent frequent brushing and dryness of the neck, to get enough nutrition and rest, but effective treatments and preventive measures are still inadequate.
이와 같은 이유에서 감염 억제 효과가 높고 또한 안정성에 문제가 없으며 일상적으로 이용될 수 있는 항인플루엔자 바이러스제의 개발이 요망되고 있다.For this reason, it is desired to develop an anti-influenza virus agent which is highly effective in suppressing infection and has no problem in stability and can be used on a daily basis.
또한 양계산업에 가장 큰 피해와 위협을 주는 것은 바이러스성 질환이다. 가금 인플루엔자는 양계산업뿐만이 아니고 전인류의 재앙으로까지 거론되고 있다. 중국과 동남아시아 국가에서 H5N1 인플루엔자 바이러스에 의한 고병원성 조류인플루엔자(HPAI)가 지속적으로 발생하고 있고, 현재 추세로 간다면 이들 국가에서 인플루엔자가 근절되기는커녕 새로운 변이형에 의하여 또 다른 문제가 발생할 가능성이 높아지고 있다.Also, the most damaging and threatening to the poultry industry is viral disease. Poultry influenza is mentioned not only in the poultry industry but also as a disaster for all human beings. Highly pathogenic avian influenza (HPAI) continues to be caused by H5N1 influenza virus in China and Southeast Asia, and current trends are likely to cause further problems with new variants, rather than eradicating influenza in these countries.
인도네시아에서는 이미 방역통제가 불가능하고 중국에서는 오리나 야생조류에서 다양한 종류의 고병원성 H5N1 바이러스가 다수 분리되고 있기 때문에 질병을 제압하는 속도보다 확산되는 속도가 더 빨라서 예방접종 외에는 대안이 없어 지역적으로 백신접종을 하고 있다.In Indonesia, it is not possible to control the epidemic, and in China, many kinds of high-pathogenic H5N1 viruses are separated from ducks and wild birds, so the spread is faster than the rate of disease suppression, so there is no alternative except vaccination. Doing.
베트남과 태국에서도 계속적인 인체감염과 사망 사례가 보도되고 있고 좀처럼 진정될 기미가 보이지 않는다. 태국은 세계적인 가금육 수출산업의 위상을 고려하여 도살처분 정책과 함께 백신금지 정책을 고수하고 있고, 조기 근절을 위하여 백신을 몰래 접종하는 농가는 벌금까지 물리는 강경책으로 맞서고 있다. 백신을 접 종하면 국가적인 박멸이 매우 어려워 태국산 가금육의 수출은 포기해야 하기 때문이다.In Vietnam and Thailand, cases of continuous human infections and deaths are reported and there is no sign of calming down. Thailand adheres to the slaughter disposal policy and vaccine ban policy in consideration of the global poultry export industry, and farmers who secretly inoculate vaccines for early eradication are faced with a tough policy against fines. Vaccination is very difficult for the nation to eradicate and exports of poultry from Thailand have to be abandoned.
닭전염성 기관지염(IB)은 양계 산업을 갖고 있는 모든 국가에서 예외없이 생산성에 막대한 피해를 주는 대표적인 질병이다. ND(뉴캐슬병)나 AI(조류인플루엔자)를 종식시킨 나라는 있어도 IB를 종식시킨 나라는 없는 것이 현실이다Chicken infectious bronchitis (IB) is a representative disease that causes huge losses to productivity in all countries with poultry industries. The reality is that there are no countries that have ended ND (Newcastle Disease) or AI (algae influenza), but no country has ended IB.
우리나라에서도 수의과학검역원 조류질병과 병성감정 결과 IB로 판정된 것이 2001년에는 총 검색 건 중 6%, 2002년에는 5.2%로 조류바이러스성 질병 중 제일 많은 검색 실적을 나타내고 있다. IB바이러스는 코로나 바이러스속에 속하며 믿을 수 없을 정도로 간단한 구조를 이루고 있다. 지금도 세계각지에서 바이러스가 변이되고 있어 움직이는 바이러스라 불린다 . 변이의 주된 원인은 혈청형이 다른 IB바이러스의 혼합감염에 의한 유전자 재조합에 의해서 이루어진다. 2종류 이상의 IB바이러스가 동시에 감염되면, 같은 세포 속에서 자라면서 유전자재조합이 이루어지고, 원래의 바이러스 성질과는 다른 특징을 갖는 새로운 바이러스가 생성된다. 즉 약독 백신 바이러스와 강독 야외 바이러스가 유전자 재조합이 되면, 두 바이러스의 장점인 증식성과 병원성이 합쳐 질 확률이 높아지며, 이 바이러스는 전파력이 높은 무서운 질병의 원인체가 될 수 있다. 이러한 이유 때문에 외국에서 사용되는 약독 백신이라고 해도 함부로 국내에 도입해서는 안 된다.In Korea, veterinary science quarantine avian disease and pathological evaluation resulted in IB as the result of 6% of the total screening in 2001 and 5.2% in 2002, showing the highest number of avian viral diseases. The IB virus belongs to the corona virus and has an incredibly simple structure. The virus is still mutating all over the world and is called a moving virus. The main cause of mutations is genetic recombination by mixed infection of IB viruses with different serotypes. When two or more types of IB viruses are infected at the same time, they grow in the same cell and are genetically recombined, producing new viruses with different characteristics from the original viral properties. In other words, when the attenuated vaccine virus and the virulent field virus are genetically recombined, there is a high probability of combining the advantages of both viruses, proliferation and pathogenicity, and this virus may be a cause of a terrible disease with high propagation. For this reason, even attenuated vaccines used abroad should not be introduced in Korea.
다양한 혈청형과 변종의 지속적인 출현, 다른 어떠한 질병보다도 빠른 전파력(잠복기 18∼36시간), 계군 내 지속적인 생존능력(농장 상재화) 등이 IB 바이러스의 대표적인 특징이다. 또한 혈중항체에 의한 방어능력이나 혈청형 간의 교차면 역이 제한적이며 2종류 이상의 혈청형이 동시에 계군을 공격함으로써 백신만으로 방어한다는 자체가 어렵다.The constant emergence of various serotypes and strains, faster propagation (18 to 36 hours incubation) than any other disease, and sustained viability in farming (farming commercialization) are typical features of the IB virus. In addition, the ability to defend against blood antibodies or cross-immunity between serotypes is limited, and two or more types of serotypes simultaneously attack the flocks, making it difficult to defend with vaccines alone.
뉴캐슬병 (ND)도 바이러스의 일종인 뉴캐슬병 바이러스에 의하여 발생하는 1종 법종 전염병으로 매년 국내 농가에서 발생하고 있으며 현재 뉴캐슬병 바이러스를 불활화시킨 백신이 많이 개발되어 있으나 발생빈도가 줄어들지 않고 있어 바이러스 질환의 가장 큰 특징을 나타내고 있다.Newcastle disease (ND) is a type of epidemic caused by Newcastle disease virus, a type of virus, which occurs every year in domestic farms. Currently, many vaccines that inactivate Newcastle disease have been developed. It shows a big characteristic.
현재 양계 농가에서 조류질병을 억제하는 데는 3가지 방어선이 있다. 1차 저지선은 차단방역(Biosecurity)이며 2차 저지선은 백신(vaccination), 3차 저지선은 계군 자체의 면역 시스템(immune system)이다. 그러나 실제 농장 내 발생했다면 역으로 IB 바이러스는 농장의 차단 방역선을 유유히 넘어 백신을 무력화시킨 후 닭의 면역시스템을 비웃기라도 하듯이 닭 몸속 여러 곳곳을 돌아다니며 질병을 유발하고 몸을 망가뜨리고 있는 실정이나 바이러스를 죽이는 치료제나 면역시스템을 획기적으로 올려주는 복합적 기능의 치료개선제가 꼭 필요하다.There are currently three defenses against bird diseases in poultry farms. The first stop is biosecurity, the second stop is vaccine, and the third stop is the family's own immune system. However, if it actually occurred on a farm, the IB virus would go beyond the farm's barrier and neutralize the vaccine, then roam around the chickens, causing disease and destroying the body, as if to ridicule the chicken's immune system. In addition, there is a need for a therapeutic agent that kills viruses or a complex function that improves the immune system.
따라서 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 인플루엔자 바이러스, 조류 인플루엔자 바이러스, 닭전염성 기관지염 바이러스 등의 감염에 대한 높은 억제 효과를 나타내고 부작용이 없어 안전성이 높은 천연 항바이러스제를 제공하는 것이다.Therefore, the technical problem to be achieved by the present invention is to provide a high safety natural antiviral agent with high inhibitory effect against infections such as influenza virus, avian influenza virus, chicken infectious bronchitis virus and no side effects.
또한, 본 발명이 이루고자 하는 다른 기술적 과제는 상술한 바와 같은 천연 항바이러스를 활성 성분으로 포함하여 여러 제품으로 응용될 수 있는 조성물을 제 고하는 것이다.In addition, another technical problem to be achieved by the present invention is to provide a composition that can be applied to various products including the natural anti-virus as described above as an active ingredient.
상기 기술적 과제를 달성하기 위하여, 본 발명은In order to achieve the above technical problem, the present invention
김치의 숙성 과정에서 출현하는 김치 유산균의 배양액, 배양액의 농축액, 배양액의 건조물 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나의 천연 항바이러스제를 제공한다.Provided is a natural antiviral agent selected from the group consisting of a culture of kimchi lactic acid bacteria, a concentrate of the culture, dried products of the culture, and mixtures thereof.
상술한 바와 같은 본 발명에 따른 천연 항바이러스제에 있어서, 상기 김치 유산균이 류코노스톡(Leuconostoc)속 김치 유산균, 락토바실루스(Lactobacillus)속 김치 유산균, 웨이셀라(Weissella)속 김치 유산균 및 이들의 혼합 유산균에서 선택되는 어느 하나인 것이 바람직하다.In the natural antiviral agent according to the present invention as described above, the kimchi lactic acid bacteria are lactic acid bacteria of the genus Leuconostoc , kimchi lactic acid bacteria of the genus Lactobacillus ( Lactobacillus ), kimchi lactic acid bacteria of the genus Weissella and mixed lactic acid bacteria thereof It is preferable that it is any one selected from.
상술한 바와 같은 본 발명에 따른 천연 항바이러스제에 있어서, 상기 류코노스톡(Leuconostoc)속 김치 유산균은 류코노스톡 시트레움(Leuconostoc citreum), 류코노스톡 락티스(Leuconostoc lactis), 류코노스톡 메젠테로이드 서브스피. 덱스트라니쿰(Leuconostoc mesenteroides subsp. dextranicum), 류코노스톡 메젠테로이드 서브스피. 메젠테로이드(Leuconostoc mesenteroides subsp. Mesenteroides), 류코노스톡 아르젠티눔(Leuconostoc argentinum), 류코노스톡 카르노숨(Leuconostoc carnosum), 류코노스톡 젤리둠(Leuconostoc gellidum), 류코노스톡 김치아이(Leuconostoc kimchii), 류코노스톡 인해(Leuconostoc inhae), 류코노스톡 가시코 미타툼(Leuconostoc gasicomitatum) 및 이들의 혼합 유산균으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나인 것이 바람직하다.In the natural antiviral agent according to the present invention as described above, the Leuconostoc genus Kimchi lactobacillus is Leuconostoc citreum , Leuconostoc lactis , Leukonoststock megenteroid Sub speech. Leuconostoc mesenteroides subsp.dextranicum , Leukonostok mesentroid subspi. Leuconostoc mesenteroides subsp.Mesenteroides, Leuconostoc argentinum , Leuconostoc carnosum , Leuconostoc gellidum , Leuconoststock kimchi child ( Leuconostoc kimchi) , Leuconostoc inhae ( Leuconostoc inhae ), Leuconostoc gasicomitatum ( Leuconostoc gasicomitatum ) is preferably any one selected from the group consisting of mixed lactic acid bacteria thereof.
상술한 바와 같은 본 발명에 따른 천연 항바이러스제에 있어서, 상기 락토바실루스(Lactobacillus)속 김치 유산균은 락토바실루스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실루스 애시도필루스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실루스 불가리커스(Lactobacillus bulgaricus), 락토바실루스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실루스 김치아이(Lactobacillus kimchii), 락토바실루스 파라플란타룸(Lactobacillus paraplantarum), 락토바실루스 쿠르바투스 서브시피. 쿠르바투스(Lactobacillus curvatus subsp. curvatus), 락토바실루스 사케이 서브시피. 사케이(Lactobacillus sakei subsp. sakei) 및 이들의 혼합 유산균으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나인 것이 바람직하다.In the natural antiviral agent according to the present invention as described above, the Lactobacillus genus Kimchi lactic acid bacteria are Lactobacillus brevis ( Lactobacillus brevis ), Lactobacillus ashophilus ( Lactobacillus acidophilus ), Lactobacillus vulgaricus ( Lactobacillus bulgaricus) ), Lactobacillus plantarum , Lactobacillus kimchii , Lactobacillus paraplantarum , Lactobacillus parabatus subsiphy. Lactobacillus curvatus subsp.curvatus , Lactobacillus sakei subcipi . It is preferably one selected from the group consisting of Lactobacillus sakei subsp. Sakei and mixed lactic acid bacteria thereof.
상술한 바와 같은 본 발명에 따른 천연 항바이러스제에 있어서, 상기 웨이셀라(Weissella)속 김치 유산균이 웨이셀라 코레엔시스(Weissella koreensi), 웨이셀라 하니아이(Weissella hanii), 웨이셀라 김치아이(Weissella kimchii), 웨이셀라솔리(Weissella soli), 웨이셀라 콘푸사(Weissella confusa) 및 이들의 혼합 유산균으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나인 것이 바람직하다.In the natural antiviral agent according to the present invention as described above, the Weissella genus Kimchi lactic acid bacteria are Weissella koreensi , Weissella hanii , Weissella kimchii Weissella kimchii , Weissella soli , Weissella confusa ( Weissella confusa ) and is preferably any one selected from the group consisting of mixed lactic acid bacteria thereof.
다른 기술적 과제를 달성하기 위하여, 본 발명은 김치의 숙성 과정에서 출현하는 김치 유산균의 배양액, 배양액의 농축액, 배양액의 건조물 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나의 천연 항바이러스제를 활성 성분으로 포함하는 조성물을 제공한다.In order to achieve the other technical problem, the present invention is any one of the natural antiviral agent selected from the group consisting of the culture solution of kimchi lactic acid bacteria, the concentrate of the culture solution, the dried product of the culture solution and mixtures thereof appearing during the ripening process of kimchi as an active ingredient It provides a composition comprising.
상술한 바와 같은 본 발명에 따른 조성물은 음료, 사료, 식품, 의약품 및 화장품으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나인 것이 바람직하다.The composition according to the present invention as described above is preferably any one selected from the group consisting of beverages, feed, food, medicines and cosmetics.
본 발명은 무·배추 및 오이 등을 소금에 절인 것 또는 이 절인 것을 고추·마늘·파·생강·젓갈 등의 양념을 버무린 후 젖산 생성에 의해 숙성되어 저온에서 발효된 제품인 김치의 발효 과정에서 출현하는 김치 유산균의 배양액이 항바이러스제의 역할을 할 수 있고, 항바이러스 스펙트럼이 광범위한 다기능성 천연 항바이러스제의 역할을 할 수 있음을 발견하여 완성된 것으로 본 발명에 대하여 실시예를 통하여 상세하게 설명하기로 한다. 하기 실시예는 본 발명을 설명하고자하는 예시적인 것일 뿐, 이에 의해 본 발명의 기술적 사상의 범위가 변경되거나 축소되는 것은 아니다.In the present invention, pickled radish, cabbage, cucumber, etc., or pickled with red pepper, garlic, green onion, ginger, salted fish, etc. are aged in the fermentation process of kimchi, which is aged by lactic acid production and fermented at low temperature. The culture of kimchi lactic acid bacteria to act as an antiviral agent, and the antiviral spectrum was found to be able to play a role of a wide range of multifunctional natural antiviral agent to be described in detail with reference to the present invention. do. The following examples are merely illustrative of the present invention, and thus the scope of the technical spirit of the present invention is not changed or reduced.
<실시예><Example>
김치 유산균의 배양액의 제조Preparation of Kimchi Lactic Acid Bacteria
배양액 제조를 위하여 김치 유산균 중에서 류코노스톡 김치아이(Leuconostoc Kimchii)(KCTC2386), 류코노스톡 메젠테로이드 서브스피. 메젠테로이드(Leuconostoc mesenteroides subsp. Mesenteroides)(KCTC3530), 류코노스톡 시트레움(Leuconostoc Citreum)(KCTC3524), 류코노스톡 락티스(Leuconostoc lactis)(KCTC3528), 락토바실러스 플란타룸(Leuconostoc plantarum)(KCCM11322), 웨이셀라 코레엔시스(Weissella Koreensis)(KJCTC3746)를 이용하였다. Leuconostoc Kimchii (KCTC2386), leukonostock mesenteroid subspipe among kimchi lactic acid bacteria for the production of culture medium. Leuconostoc mesenteroides subsp.Mesenteroides (KCTC3530), Leuconostoc Citreum (KCTC3524), Leuconostoc lactis (KCTC3528), Lactobacillus plantarum (113um) ), Weissella Koreensis (KJCTC3746) was used.
100 ml의 MRS(Difco) broth를 121℃에서 15분간 고압멸균 후, 상기 김치 유산균을 접종하고 30℃에서 16시간 동안 진탕 배양하였다.100 ml of MRS (Difco) broth was autoclaved at 121 ° C. for 15 minutes, and then inoculated with the kimchi lactic acid bacteria and shaken at 30 ° C. for 16 hours.
상기 배양액을 5000 X g로 3분간 원심 분리하여 상등액을 취하고, 이 상등액을 pore size 0.22 ㎛인 여과막 (membrane filter) 을 이용하여 여과하여 bacteria-free 상태의 배양액을 수득하였다.The culture solution was centrifuged at 5000 X g for 3 minutes to obtain a supernatant, and the supernatant was filtered using a membrane filter having a pore size of 0.22 µm to obtain a bacteria-free culture solution.
이어서, 상기 배양액을 10,000 Da membrane을 통과시켜 여과액을 취한 후, 1,000 Da membrane으로 농축하였으며, 농축한 배양액을 bacteria-free 상태로 유지하기 위하여 pore size 0.22㎛인 여과막 (membrane filter) 을 이용해 여과하여 최종 실험용 배양액을 얻었다. 이 배양액의 최종 pH는 항상 7이 되도록 조정하여 pH에 의한 효과를 배제시켰다.Subsequently, the culture solution was filtered through 10,000 Da membrane, concentrated to 1,000 Da membrane, and filtered using a membrane filter having a pore size of 0.22 μm in order to maintain the concentrated culture medium in a bacteria-free state. Final experimental cultures were obtained. The final pH of this culture was always adjusted to 7 to exclude the effect of pH.
-조류 독감 바이러스에 대한 효과 시험-Effect test against bird flu virus
조류 독감 바이러스인 HK/220를 단일층(mono-layer)으로 자란 동물세포주(MDCK cell line Madin-Darby canine의 Kidney, CEFcell line: Chicken embryo fibroblast )에 바이러스를 감염시켰으며, 이를 3일간 배양한 후 생성된 플라크(plaque)의 형성을 통해서 바이러스에 감염되었음을 확인할 수 있었다.HK / 220, avian influenza virus, was infected with a monolayer of animal cells (MDCK cell line Madin-Darby canine Kidney, CEFcell line: Chicken embryo fibroblast) and cultured for 3 days. It was confirmed that the virus was infected through the formation of generated plaques.
플레이트에 단층으로 80%이상 자란 MDCK 혹은 CEF 동물세포주에 PBS(pH 7.4)로 10-3비율로 희석된 조류 독감 엔자바이러스와 동일한 완충용액으로 희석된 김치 유산균 배양액을 혼합하여 감염시킨 후 3일간 배양하고 고정화 과정과 뉴트랄 레드(neutral red)를 통한 염색으로 플라크의 형성 정도를 관찰하여 그 결과를 표1에 나타냈다.Inoculated with Kimchi lactobacillus diluted with the same buffer solution as the avian influenza virus diluted 10-3 in PBS (pH 7.4) in MDCK or CEF animal cell lines grown more than 80% in a single layer and cultured for 3 days The degree of plaque formation was observed through the immobilization process and neutral red (neutral red), and the results are shown in Table 1.
[표 1]TABLE 1
표 1에서 보는 바와 같이 김치 유산균 배양액을 넣지 않은 대조군의 경우 1.3~1.6 X 102개의 플라크가 형성된 반면에 김치 유산균 배양액을 첨가하여 감염시킨 경우 플라크의 개수가 현저히 감소하는 경향을 보여 본 발명에 따른 김치 유산균 배양액이 조류 독감 바이러스에 대한 매우 강한 항바이러스 활성을 가지고 있음을 알 수 있었다.As shown in Table 1, the control group did not put the Kimchi lactic acid bacteria culture medium 1.3 ~ 1.6 X 10 case where the two plaques was added to Kimchi lactic acid bacteria culture solution infected with the other hand, formed in accordance with the present invention show a tendency that the number of plaques significantly reduced Kimchi lactobacillus cultures were found to have very strong antiviral activity against avian influenza virus.
-독감 바이러스에 대한 효과 시험-Effect test against flu virus
독감 바이러스로 A1H3N2를 이용한 것을 제외하고는 조류 독감 바이러스에 대한 효과 시험에서와 동일한 방법을 본 발명에 따른 김치 유산균 배양액을 이용한 효과시험을 하였으며, 그 결과를 표 2에 나타냈다.Except that A1H3N2 was used as the influenza virus, the same method as in the effect test for avian influenza virus was performed using the kimchi lactic acid bacteria culture solution according to the present invention, and the results are shown in Table 2.
[표 2]TABLE 2
표 2에서 보는 바와 같이 김치 유산균 배양액을 넣지 않은 대조군의 경우 1.3~1.6 X 102개의 플라크가 형성된 반면에 김치 유산균 배양액을 첨가하여 감염시킨 경우 플라크의 개수가 현저히 감소하는 경향을 보여 본 발명에 따른 김치 유산균 배양액이 독감 바이러스에 대한 매우 강한 항바이러스 활성을 가지고 있음을 알 수 있었다.Table as shown in Figure 2 of the control group did not put the Kimchi lactic acid bacteria culture medium 1.3 ~ 1.6 X 10 case where the two plaques was infected by adding the Kimchi lactic acid bacteria culture fluid on the other hand, formed in accordance with the present demonstrate a tendency for the number of plaques significantly reduced invention Kimchi lactobacillus cultures were found to have very strong antiviral activity against the flu virus.
-김치 유산균 배양액의 동물 시험-Animal test of Kimchi lactic acid bacteria culture medium
조류 독감과 뉴캐슬병의 복합 증세로 산란율이 현저하게 저하되어 있는 산란계 1100마리를 선정하여 무작위로 각 110마리 씩 구분하여 10개의 계군에 김치 유산균류를 배양하여 얻은 김치 유산균 배양액을 계군에 음수에 1/10씩 희석하여 제공하고 17일간 각 계군의 산란율의 변화를 관찰하여 그 결과를 표 3에 나타냈다.A total of 1100 laying hens with significantly lower egg production due to the combined symptoms of avian influenza and Newcastle disease were randomly divided into 110 eggs each. 10 dilutions were provided and the change in the scattering rate of each group was observed for 17 days. The results are shown in Table 3.
표 3의 샘플 1은 류코노스톡 김치아이(Leuconostoc Kimchii)(KCTC2386)의 배양액, 샘플 2는 류코노스톡 메젠테로이드 서브스피. 메젠테로이드(Leuconostoc mesenteroides subsp. Mesenteroides)(KCTC3530)의 배양액, 샘플 3은 류코노스톡 시트레움(Leuconostoc Citreum)(KCTC3524)의 배양액, 샘플 4는 류코노스톡 락티스(Leuconostoc lactis)(KCTC3528)의 배양액, 샘플 5는 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)(KCCM11322)의 배양액, 샘플 6은 웨이셀라 코레엔시스(Weissella koreensis) (KCTC3746)의 배양액, 샘플 7은 류코노스톡 메젠테로이드 서브스피. 메젠테로이드(Leuconostoc mesenteroides subsp. Mesenteroides)(KCTC3530)의 배양액과 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)(KCCM11322)의 배양액의 혼합물, 샘플 8은 류코노스톡 김치아이(Leuconostoc Kimchii)(KCTC2386)의 배양액과 웨이셀라 코레엔시스(Weissella koreensis) (KCTC3746)의 배양액의 혼합물, 샘플 9는 웨이셀라 코레엔시스(Weissella koreensis) (KCTC3746)의 배양액과 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)(KCCMll322)의 배양액의 혼합물을 의미한다.Sample 1 of Table 3 is a culture solution of Leuconostoc Kimchii (KCTC2386), and sample 2 is a leuconosstock methyleneteroid subspi. Culture of Leuconostoc mesenteroides subsp.Mesenteroides (KCTC3530), Sample 3 is the culture of Leuconostoc Citreum (KCTC3524), Sample 4 is the culture of Leuconostoc lactis (KCTC3528) , Sample 5 is a culture of Lactobacillus plantarum (KCCM11322), Sample 6 is a culture of Weissella koreensis (KCTC3746), Sample 7 is a leukonostock mesenteroid subspi. A mixture of a culture solution of Leuconostoc mesenteroides subsp.Mesenteroides (KCTC3530) and a culture solution of Lactobacillus plantarum (KCCM11322), and Sample 8 were cultured from Leuconostoc Kimchii (KCTC2386). Mixture of cultures of Weissella koreensis (KCTC3746), Sample 9 is a mixture of cultures of Weissella koreensis (KCTC3746) and culture of Lactobacillus plantarum (KCCMll322). it means.
[표 3]TABLE 3
표 3에서 보는 바와 같이 현 바이러스 질병에 감염되어 산란율이 떨어지고 설사를 하며 호흡기 이상을 보인 계군에 음수 투여하여 10일 이후에는 정상으로 회 복되는 것을 확인하였고 산란율도 정상계의 수준으로 회복되는 것을 알 수 있다. 따라서 본 발명에 따른 김치 유산균의 배양액은 in vivo상에서도 매우 우수한 항바이러스 효과를 가지고 있다.As shown in Table 3, it was confirmed that the egg was infected with the current viral disease, and the egg laying rate decreased, diarrhea, and negative administration to the group showing respiratory abnormalities returned to normal after 10 days, and the egg laying rate was restored to the normal level. Can be. Therefore, the culture of kimchi lactic acid bacteria according to the present invention has a very excellent antiviral effect in vivo.
그리고 본 발명에 따른 김치 유산균 배양액의 안정성에 대해서는 실험을 생략하였으나, 김치는 오랜 기간 동안 인간에 섭취되면서 그 안전성이 입증된 것이므로 별도의 실험이 없어도 본 발명에 김치 유산균 배양액의 안정성은 확보되었다고 할 수 있다.And the experiment was omitted for the stability of the kimchi lactobacillus culture medium according to the present invention, kimchi is ingested in humans for a long time since its safety has been proved that the stability of the kimchi lactobacillus culture medium in the present invention without a separate experiment can be said that have.
또한, 김치 유산균의 배양액을 산란계의 음용수에 혼합하여 사용하는 시험이외에 다른 식품, 사료, 음료, 화장품, 의약품 등에 혼합하여 항바이러스 활성에 대하여 구체적인 시험을 하지는 않았으나, 항바이러스 활성이 그대로 유지되는 것은 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자에게는 명백한 사항이라고 사료된다.In addition, the antiviral activity was not specifically tested by mixing kimchi lactic acid bacteria with other foods, feeds, beverages, cosmetics, medicines, etc. in addition to the test used by mixing the drinking water of laying hens. It is considered to be obvious to one of ordinary skill in the art.
그리고 적용 대상의 특성, 적용 대상의 제조, 유통, 보관 및 사용 양태 등에 따라 본 발명에 따른 배양액의 함량을 적절하게 조절하는 것은 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자라면 조성물의 안정성 시험 등을 통해 충분히 가능할 것이다.And appropriately controlling the content of the culture medium according to the present invention according to the characteristics of the application object, the preparation, distribution, storage and use of the application object is a stability test of the composition if one of ordinary skill in the art It will be possible enough.
이상 살펴본 바와 같이, 본 발명에 의한 김치 유산균 배양액은 매우 우수한 항바이러스 활성이 가지고 있으며, 이를 활용하는 경우 안전하고 효과적으로 음료, 사료, 식품, 의약품, 화장품 등에 항바이러스 효과를 부여할 수 있다.As described above, the kimchi lactic acid bacteria culture medium according to the present invention has a very good antiviral activity, and when used, it can safely and effectively impart antiviral effects to beverages, feed, food, medicine, cosmetics, and the like.
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