KR20130057730A - Leuconostoc mesenteroides having anti-virus activity and composition containing the same - Google Patents

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Abstract

PURPOSE: Leuconostoc mesenteroides YML 003, a culture thereof, or a product thereof is provided to suppress a virus including avian influenza virus and to be used in various fields such as food products, pharmaceutical products, and cosmetic products. CONSTITUTION: Leuconostoc mesenteroides YML 003(deposit number: KCTC 12031BP) has antiviral activity. An antiviral composition contains Leuconostoc mesenteroides YML 003, a culture thereof, or a product thereof. The virus is avian influenza virus which is selected from a group consisting of serotype H5N1, serotype H9N2, serotype H7N3, and serotype H7N7. The antiviral composition includes animal feed, a fermented food, a digestive, probiotics, a sterilizer for spraying, a cosmetic material, a hand sanitizer, or a body disinfectant.

Description

항바이러스 활성을 가진 류코노스톡 메센테로이드 및 이를 포함하는 조성물 {Leuconostoc mesenteroides having anti-virus activity and composition containing the same}Leuconostoc mesenteroides having anti-virus activity and composition containing the same

본 발명은 병원성 바이러스, 바람직하게는 조류인플루엔자 바이러스에 저항성을 갖는 류코노스톡 메센테로이드 및 이를 포함하는 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a leuconosstock mesenteroid having a resistance to a pathogenic virus, preferably avian influenza virus, and a composition comprising the same.

조류인플루엔자 바이러스는 동물과 사람에 있어서 중요한 질병으로 최근 양계산업의 피해의 확산과 조류에서 사람으로의 감염으로 인한 피해의 확산이 대두되고 있다. 이에 조류인플루엔자 바이러스의 효과적인 예방 및 대응방법이 요구되고 있다. Avian influenza virus is an important disease in animals and humans. Recently, the damage of the poultry industry and the damage from bird-to-human infections are emerging. Therefore, there is a need for an effective prevention and response method of avian influenza virus.

인플루엔자 바이러스에 의해 20세기 동안 범세계적인 pandemic 발생이 있었으며 이로 인해 많은 인명피해와 큰 경제적 손실이 있었다. 1918년 발생한 대유행은 H1N1 type 으로 Spanish Flu로 불리었으며 전 세계적으로 2천만에서 5천만에 이르는 인명이 사망하였다. 이후 1957년에는 H2N2 type으로 Asian Influenza가 발생하였으며 이로 인해 백만명 이상의 인명피해가 있었으며, 1968년에 발생한 Hong Kong Flu는 H3N2 type에 의해 백만명 가까운 인명 손실을 초래하였다. Influenza viruses have caused pandemic pandemic outbreaks worldwide during the 20th century, resulting in many casualties and significant economic losses. The pandemic that occurred in 1918 was called H1N1 type Spanish Flu and killed 20 to 50 million people worldwide. In 1957, H2N2 type Asian Influenza occurred, resulting in more than one million casualties. In Hong Kong Flu in 1968, H3N2 type caused nearly one million lives.

가장 최근에는 1977년 Russian Flu로 H1N1에 의하여 대유행이 있었다. 이러한 대유행은 최근 바이러스의 유전적 분석을 통하여 직, 간접적으로 조류인플루엔자 바이러스로부터 유래 되었음이 밝혀졌다. 특히 최근 중국, 동남아시아에서 문제가 되고 있는 조류 인플루엔자 바이러스는 H5N1 (1997년), H9N2 (1999년), 캐나다의 H7N3 (2004년), 그리고 네덜란드에서 문제가 되었던 H7N7 (2003년) 등은 모두 야생 또는 가금의 조류바이러스가 직접 또는 변이를 통해 사람에게 전파되어 많은 인명 피해를 낸 경우라 할 수 있다. Most recently there was a pandemic by H1N1 as the 1977 Russian Flu. This pandemic has recently been derived from avian influenza virus, directly or indirectly, through genetic analysis of the virus. In particular, H5N1 (1997), H9N2 (1999), H7N3 (2004) in Canada, and H7N7 (2003), which have been a problem in the Netherlands, are all wild or Poultry avian viruses have been transmitted to humans either directly or through mutations, causing many lives.

조류인플루엔자 바이러스의 감염은 조류의 분비물을 직접 접촉할 때 주로 일어나며, 물, 사람, 사료차, 기구, 장비, 알 겉면에 묻은 분변 등에 의해서도 전파된다. Infection with avian influenza virus occurs mainly when the bird's secretion is in direct contact with it, and is also transmitted by water, humans, feed cars, appliances, equipment, and feces on the outside of eggs.

조류인플루엔자 바이러스가 감염되면 전 세계 대부분의 국가에서는 전량 도살 처분하며, 발생국가에서는 양계 산물을 수출할 수 없게 된다. 국내에서도 혈청형 H9N2 저병원성 조류인플루엔자와 혈청형 H5N1 고병원성 조류 인플루엔자가 1996년부터 빈번히 발생되어 문제시되고 있다. When the avian influenza virus is infected, most countries in the world slaughter it and they are unable to export poultry products. In Korea, serotype H9N2 low pathogenic avian influenza and serotype H5N1 high pathogenic avian influenza have been frequently developed since 1996 and are problematic.

상기와 같은 조류 질병의 피해를 막기 위해, 양계농가에서는 방역 및 위생관리, 백신이나 항생제를 사용하지만 백신의 접종에 의해 감염을 억제하는 것은 유행하는 바이러스의 형과 백신의 바이러스의 형이 맞지 않으면 효능에 문제점이 있어 백신에 의한 예방에는 한계가 있기 때문에 바이러스에 대한 효과적인 치료법이나 예방책은 아직 미비한 상태이다. 따라서 병원성 조류 인플루엔자 바이러스에 대한 억제 효과를 가지면서 계군 자체의 면역시스템을 강화시킬 수 있고, 또한 안정성에 문제가 없는 복합적인 치료예방제가 필요한 상황이다In order to prevent the damage caused by bird diseases, poultry farmers use prevention and hygiene management, vaccines or antibiotics, but suppressing infection by vaccination is effective if the type of the virus and the virus of the vaccine do not match. Since there is a problem in preventing vaccines, there is a limit to effective treatments or preventive measures against viruses. Therefore, there is a need for a complex therapeutic prophylaxis that can enhance the immune system of the family itself while having an inhibitory effect on the pathogenic avian influenza virus, and also has no stability problems.

본 발명은 항바이러스 활성을 갖는 류코노스톡 메센테로이드 YML003 (수탁번호: KCTC 12031BP)을 제공하고자 한다. The present invention seeks to provide a leukonostock mecetheroidoid YML003 (Accession No .: KCTC 12031BP) having antiviral activity.

본 발명은 류코노스톡 메센테로이드 YML003, 이의 배양물 또는 이의 생산물을 포함하는 항바이러스용 조성물, 식품첨가용 조성물, 화장품 조성물 및 약학 조성물을 제공하고자 한다. The present invention is to provide an antiviral composition, a food additive composition, a cosmetic composition and a pharmaceutical composition comprising a leukonostock mecetheroid YML003, a culture thereof or a product thereof.

본 발명은 항바이러스 활성을 갖는 류코노스톡 메센테로이드 YML003 (수탁번호: KCTC 12031BP)을 제공한다.The present invention provides leuconosstock mesenteroid YML003 (Accession No .: KCTC 12031BP) having antiviral activity.

본 발명은 류코노스톡 메센테로이드 YML003, 이의 배양물 또는 이의 생산물을 포함하는 항바이러스용 조성물을 제공한다.The present invention provides an antiviral composition comprising a leukonostock mecetheroidoid YML003, a culture thereof or a product thereof.

상기 바이러스는 조류인플루엔자 바이러스일 수 있다.The virus may be avian influenza virus.

상기 조류인플루엔자 바이러스는 혈청형 H5N1, 혈청형 H9N2, 혈청형 H7N3, 및 혈청형 H7N7로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 조류인플루엔자 바이러스일 수 있다.The avian influenza virus may be at least one avian influenza virus selected from the group consisting of serotype H5N1, serotype H9N2, serotype H7N3, and serotype H7N7.

상기 항바이러스용 조성물은 동물사료, 발효식품, 정장제, 생균제, 분무용 살균제, 화장료, 손소독제 또는 바디소독제인, 항바이러스용 조성물일 수 있다.The antiviral composition may be an animal feed, fermented food, suit, probiotics, spray disinfectant, cosmetics, hand disinfectant or body disinfectant, anti-viral composition.

본 발명의 류코노스톡 메센테로이드 YML003, 이의 배양물 또는 이의 생산물은 조류인플루엔자 바이러스를 포함한 바이러스에 대한 저해활성을 나타내기에, 이를 사료, 발효제품, 건강식품 등의 식품, 의약품, 화장품 등 다양한 분야에 활용할 수 있다.The leukonostock mesenteroid YML003 of the present invention, its culture or its product exhibits inhibitory activity against viruses, including avian influenza virus, which is used in various fields such as food, pharmaceuticals, cosmetics such as feed, fermented products, and health foods. It can be utilized.

도 1은 Madin-Darby canine kidney (MDCK) 세포주 (cell line)에 저병원성 조류인플루엔자 H9N2 바이러스 (Low-pathogenci Avian Influenza H9N2 virus)를 감염시킨 후 류코노스톡 메센테로이드 YML003를 처리하여 세포주를 배양한 실험 결과를 나타낸 것이다 (a : MDCK cell 세포주, b : LPAI H9N2 바이러스 감염, c : 류코노스톡 메센테로이드 YML003 과 LAPI H9N2 바이러스 처리).
도 2는 종란에 류코노스톡 메센테로이드 YML003과 저병원성 조류인플루엔자 바이러스를 접종하여 4일간 배양 후 혈구응집시험 (hemagglutination test, HA)을 실시한 결과를 나타낸 것이다 (A : Leu . mesenteroides YML003, B : Avian Influenza virus (H9N2), C : Phosphate buffered saline (PBS) buffer )
도 3는 류코노스톡 메센테로이드 YML003과 저병원성 조류인플루엔자 바이러스를 SPF 닭에 처리한 후 인터페론 감마의 변화를 측정한 것이다.1 is an experimental result of incubating a cell line by treating a low-pathogen avian influenza H9N2 virus in a Madin-Darby canine kidney (MDCK) cell line (Low-pathogenci Avian Influenza H9N2 virus). (A: MDCK cell cell line, b: LPAI H9N2 virus infection, c: leukonostock mesentoid YML003 and LAPI H9N2 virus treatment).
Figure 2 shows the results of the hemagglutination test (HA) after incubation with the low-pathogenic avian influenza virus inoculated with the leukonostock mecetheroid YML003 in the oviposition (A: Leu . Mesenteroides YML003, B: Avian Influenza virus (H9N2), C: Phosphate buffered saline (PBS) buffer)
Figure 3 measures the change of interferon gamma after treatment with leukonostock mestheteroid YML003 and low pathogenic avian influenza virus in SPF chicken.

본 발명에서는 항바이러스 활성을 갖는 류코노스톡 메센테로이드 YML003 (수탁번호: KCTC 12031BP), 이를 이용한 항바이러스용 조성물을 제공한다.
The present invention provides an antiviral composition using the leukonostock mestheteroid YML003 (Accession Number: KCTC 12031BP) having the antiviral activity.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다. Hereinafter, the present invention will be described in detail.

종래에는 인플루엔자, 특히 조류 인플루엔자에 대한 치료제로서 타미플루와 리렌자 등을 사용하여 왔지만, 상기 치료제에 대한 바이러스 내성이 점차 증가하며 돌연변이의 출현으로 타미플루 및 리렌자 등이 더 이상 효과를 나타내지 못하는 신종 플루가 출현하기도 하였다. 이에 본 발명자는 항바이러스 활성이 강하며, 천연에서 추출하여 부작용이나 내성의 우려가 적고, 장기간 복용함에 따라 인체의 면역력을 증가시켜 돌연변이 바이러스 출연에도 저항성을 나타낼 수 있는 신규한 물질을 찾고자 노력하던 중, 본 발명의 미생물에 의해 상기 문제점이 해결될 수 있음을 발견하고 본 발명을 완성하였다. Conventionally, Tamiflu and rerenza have been used as treatments for influenza, especially avian influenza, but a new influenza in which Tamiflu and rerenza are no longer effective due to the emergence of mutations has appeared. It was. Therefore, the present inventors are trying to find a novel substance that is strong in antiviral activity, has little concern about side effects or resistance by extracting from nature, and increases the immunity of the human body with a long-term dose, thereby making it resistant to the appearance of mutant viruses. The present invention has been found to be solved by the microorganism of the present invention.

본 발명은 항바이러스 활성을 류코노스톡 메센테로이드 YML003 (수탁번호: KCTC 12031BP)을 제공한다. The present invention provides the antiviral activity of leuconosstock mesenteroid YML003 (Accession Number: KCTC 12031BP).

상기 미생물은 김치로부터 분리된 식물유래 유산균으로, 37℃에서 24시간 동안 MRS 고체배지 또는 MRS 액체배지 (Difco laboratories, Detroit, MI, USA)에서 배양한 후 분리하고, 이를 16S rRNA 염기서열분석 (16S rRNA sequencing)을 사용하여 계통학적 분석 및 균주 동정을 수행하였다.The microorganism is a plant-derived lactic acid bacteria isolated from kimchi, and then isolated after incubation in MRS solid medium or MRS liquid medium (Difco laboratories, Detroit, MI, USA) for 24 hours at 37 ℃, 16S rRNA sequencing (16S Phylogenetic analysis and strain identification were performed using rRNA sequencing.

상기 균주는 2011년 10월 20일자로 부다페스트 조약에 따른 국제기탁기관인 한국생명공학연구원 생명자원센터에 기탁번호 KCTC 12031BP로 기탁되었다. The strain was deposited on October 20, 2011 under the accession number KCTC 12031BP to the Korea Institute of Bioscience and Biotechnology, an international depository institution under the Budapest Treaty.

상기 바이러스는 특별히 한정된 것은 아니나, 병원성 바이러스일 수 있으며, 바람직하게는 인플루엔자 바이러스일 수 있고, 보다 바람직하게는 조류인플루엔자 바이러스일 수 있다.The virus is not particularly limited, but may be a pathogenic virus, preferably an influenza virus, more preferably an avian influenza virus.

상기 균주는 실시예 1에서 확인한 바와 같이, 인공위액 (pH2.3)에서 2시간 배양후 60%이상의 본 발명의 균주가 생존하였고 인공담즙액 (Bile)에서 5시간 배양한 결과 70%이상의 균주가 생존한 것을 확인한 결과, 본 발명의 균주는 산과 담즙에 대한 내성이 있어서 위장관에서의 생존 가능성이 크고, 암피실린 (Ampicillin), 테트라사이클린 (Tetracycline), 에리트로마이신 (Erythromycin), 세팔로신 (Cephalothin), 린코마이신 (Lincomycin), 네오마이신 (Neomycin), 스트렙토마이신 (Streptomycin), 카르베니실린 (Carbenicillin), 페니실린 G (Penicillin G) 등의 다양한 항생제에 대해 감수성이 보였다. 또한, 실시예 2에서 확인한 바와 같이, In vitro 상에서 세포주 (cell line)과 종란 (Embryonated egg)실험을 통하여 조류인플루엔자 바이러스 증식 억제에 우수한 활성을 보임을 확인할 수 있었고, 실시예 3에서 확인한 바와 같이, In vivo상에서 본 발명의 균주에 바이러스 접종 후 3 내지 5일 경과 후에는 바이러스 역가가 측정되지 않아 바이러스 증식이 모두 억제됨을 확인할 수 있었고, 면역작용에 따른 인터페론 감마의 생성과 면역기관의 무게 증가가 이루어짐을 확인할 수 있었다.As confirmed in Example 1, more than 60% of the strains of the present invention survived after 2 hours of incubation in artificial gastric juice (pH2.3) and over 70% of the strains were cultured in artificial bile (Bile) for 5 hours. As a result of confirmation of survival, the strain of the present invention has a high resistance to acid and bile, and has a high possibility of survival in the gastrointestinal tract, ampicillin, tetracycline, erythromycin, cephalothin, Sensitivity was shown to various antibiotics, such as lincomycin, neomycin, streptomycin, carbenicillin, and penicillin G. In addition, as confirmed in Example 2, the cell line (Embryonated egg) experiments in vitro showed a good activity in inhibiting avian influenza virus growth, as confirmed in Example 3, After 3 to 5 days after inoculation of the strain of the present invention in vivo, the virus titer was not measured, and it was confirmed that all of the virus proliferation was suppressed, and the interferon gamma production and the weight of the immune organ were increased according to the immune action. Could confirm.

또한, 본 발명의 류코노스톡 메센테로이드 YML003은 항바이러스 활성이 강할 뿐 아니라, 장기간 안정성과 유용성을 인정받은 김치에서 추출한 것으로 부작용이나 내성의 우려가 적고, 발효 시 풍부하게 생산된 유용한 생리활성 물질 등으로 인해 인체의 면역력이 증가되어 돌연변이 바이러스 출연에도 저항성을 나타낼 수 있다.In addition, the leuconosstock meshenoidoid YML003 of the present invention is not only strong antiviral activity, but also extracted from kimchi, which has been recognized for its long-term stability and usefulness, has little concern about side effects or resistance, and useful bioactive substances produced in abundance during fermentation. As a result, the body's immunity is increased, and thus resistance to mutant viruses may appear.

본 발명의 미생물은 당업계에 공지된 통상적인 물리화학적 돌연변이 방법 등에 의해 이와 동등한 활성을 가지거나 또는 이보다 우수한 활성을 가지도록 개선 또는 개량될 수 있으며, 이 또한 본 발명의 범위에 포함될 수 있다.
The microorganism of the present invention may be improved or improved to have equivalent activity or better activity by conventional physicochemical mutation methods known in the art, etc., which may also be included in the scope of the present invention.

본 발명은 류코노스톡 메센테로이드 YML003, 이의 배양물 또는 이의 생산물을 포함하는 항바이러스용 조성물을 제공한다.The present invention provides an antiviral composition comprising a leukonostock mecetheroidoid YML003, a culture thereof or a product thereof.

상기 류코노스톡 메센테로이드 YML003의 수거형태는 특별히 한정된 것은 아니고, 배양상태를 그대로 사용하거나 원심분리 또는 여과과정을 거칠 수 있으며 이러한 단계는 당업자의 필요에 따라 수행할 수 있다. 농축된 균체는 통상적인 방법에 따라 냉장하거나 냉동건조하여 그 활성을 잃지 않도록 보존할 수 있다.The collection form of the leukonostock mestheteroid YML003 is not particularly limited, and may be used as it is, as it is, or subjected to centrifugation or filtration. The concentrated cells can be preserved so as not to lose their activity by refrigeration or lyophilization according to a conventional method.

상기 류코노스톡 메센테로이드 YML003의 배양물은 류코노스톡 메센테로이드 YML003를 배양시킨 모든 종류의 고체배양물 또는 액체 배양물을 포함할 수 있으며, 상기 배양물이 배지의 종류나 배양방법에 의해 한정되는 것이 아니며, 항바이러스활성을 갖는 본 발명의 균체를 포함한 배양원액, 균체를 제거한 배양 상등액 또는 배양액의 희석액 또는 농축액일 수 있다. 또한 상기 류코노스톡 메센테로이드 YML003의 생산물은 상기 미생물의 대사에 의해 생성되는 모든 산물을 의미할 수 있다.The culture of leuconosstock mesentroid YML003 may include all kinds of solid culture or liquid cultures in which leuconosstock mesentoid YML003 is cultivated, and the culture is limited by the type or culture method of the medium. It may be a culture stock solution containing the cells of the present invention having antiviral activity, a culture supernatant from which the cells are removed, or a dilution or concentrate of the culture solution. In addition, the product of the leukonostock mesentroid YML003 may mean all products produced by the metabolism of the microorganism.

본 발명의 일례로, 고체 배양의 경우, 표준 한천 배지, MRS 한천 배지 등을 사용하여 25 내지 45℃에서 정치배양을 하는 방법을 사용할 수 있으며, 액체 배양의 경우, 상기 한천 배지로부터 한천을 제거한 각종 액체 배지 등을 사용하여 25 내지 45℃에서 진탕교반 배양하는 방법을 사용하여 이의 배양물을 제공할 수 있다.As an example of the present invention, in the case of solid culture, a method of stationary culture may be used at 25 to 45 ° C. using a standard agar medium, MRS agar medium, and the like, and in the case of liquid culture, various kinds of agar may be removed from the agar medium. The culture thereof may be provided using a method of shaking stirring at 25 to 45 ° C. using a liquid medium or the like.

본 발명의 일례로, 류코노스톡 메센테로이드 YML003을 37℃에서 24시간 동안 MRS 액체배지 (MRS broth)에서 배양하여 균체 배양 상등액 또는, 이를 원심분리하여 무세포 상등액 (cell-free supernatant)을 사용할 수 있다.In one example of the present invention, the cell culture supernatant or the cell-free supernatant may be used by culturing the leukonostock mecetheroid YML003 in MRS broth for 24 hours at 37 ° C. have.

본 발명의 류코노스톡 메센테로이드 YML003가 저항성을 나타내는 바이러스는 특별히 한정된 것은 아니고, 병원성 바이러스일 수 있으며, 바람직하게는 인플루엔자 바이러스일 수 있고, 보다 바람직하게는 조류인플루엔자 바이러스일 수 있다.The virus in which the leuconostock mesenteroid YML003 of the present invention is resistant is not particularly limited and may be a pathogenic virus, preferably an influenza virus, and more preferably an avian influenza virus.

조류인플루엔자 바이러스는 모두 본 발명의 범위에 포함될 수 있으며, 일례로, 혈청형 H5N1, 혈청형 H9N2, 혈청형 H7N3, 및 혈청형 H7N7로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 조류인플루엔자 바이러스가 포함될 수 있으며, 본 발명의 류코노스톡 메센테로이드 YML003는 특히 혈청형 H9N2인 조류인플루엔자 바이러스에 대해 우수한 저항성을 나타낼 수 있다.All avian influenza viruses may be included in the scope of the present invention, for example, may include one or more avian influenza virus selected from the group consisting of serotype H5N1, serotype H9N2, serotype H7N3, and serotype H7N7, the present invention The leukonostock mesentaroid of YML003 may exhibit excellent resistance to avian influenza virus, in particular serotype H9N2.

본 발명의 일례로, 실시예 1 내지 3에는 조류인플루엔자 바이러스인 H9N2에 대한 항바이러스 활성이 나타나있다. As an example of the invention, Examples 1-3 show antiviral activity against H9N2, an avian influenza virus.

상기 류코노스톡 메센테로이드 YML003, 이의 배양물 또는 이의 생산물을 포함하는 항바이러스용 조성물은 그 용도에 있어서 특별히 한정된 것은 아니고, 식품 조성물, 약학 조성물, 화장품 조성물로서 활용이 가능하며, 일례로 동물사료, 발효식품, 정장제, 생균제, 분무용 살균제, 화장료, 손소독제 또는 바디소독제로 사용될 수 있다.The antiviral composition comprising the leuconosstock mesentoid YML003, its culture or its products is not particularly limited in its use, and can be utilized as a food composition, a pharmaceutical composition, a cosmetic composition, for example, animal feed, It can be used as fermented food, suit, probiotics, spray disinfectant, cosmetic, hand sanitizer or body sanitizer.

본 발명은 류코노스톡 메센테로이드 YML003, 이의 배양물 또는 이의 생산물을 포함하는 항바이러스용 식품 조성물을 제공한다. The present invention provides an antiviral food composition comprising leukonostock mesenteroid YML003, a culture thereof or a product thereof.

상기 바이러스는 특별히 한정된 것은 아니나, 병원성 바이러스일 수 있으며, 바람직하게는 인플루엔자 바이러스일 수 있고, 보다 바람직하게는 조류인플루엔자 바이러스일 수 있다. 조류인플루엔자 바이러스는 모두 본 발명의 범위에 포함될 수 있으며, 일례로, 혈청형 H5N1, 혈청형 H9N2, 혈청형 H7N3, 및 혈청형 H7N7로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 조류인플루엔자 바이러스가 포함될 수 있으며, 본 발명의 류코노스톡 메센테로이드 YML003는 특히 혈청형 H9N2인 조류인플루엔자 바이러스에 대해 우수한 저항성을 나타낼 수 있다.The virus is not particularly limited, but may be a pathogenic virus, preferably an influenza virus, more preferably an avian influenza virus. All avian influenza viruses may be included in the scope of the present invention, for example, may include one or more avian influenza virus selected from the group consisting of serotype H5N1, serotype H9N2, serotype H7N3, and serotype H7N7, the present invention The leukonostock mesentaroid of YML003 may exhibit excellent resistance to avian influenza virus, in particular serotype H9N2.

상기 식품은 특별히 한정된 것은 아니고 동식물이 섭취할 수 있는 것으로, 건강보조제, 유산균 음료와 같은 발효식품, 식품 첨가제, 및 사료첨가제 등을 모두 포함할 수 있다. The food is not particularly limited and can be consumed by animals and plants, and may include all of health supplements, fermented foods such as lactic acid bacteria beverages, food additives, and feed additives.

식품 조성물에는 본 발명의 미생물과 더불어 지방, 단백질, 탄수화물, 식이섬유, 무기질 및 비타민 등으로 구성된 하나 이상의 영양 구성물을 포함할 수 있다. 상기 구성물 중에서 특히 식이섬유는 일반적으로 유산균의 분열을 촉진하는 생물발생이전 (Prebiotic)기질로 알려져 있기 때문에 체내에 유입되어 장내에서 콜로니의 형성 및 유지에 중요한 역할을 할 수 있으므로 본 발명의 조성물을 섭취한 후에 또는 동시에 투여될 수 있도록 조성물에 포함시킬 수 있다.The food composition may include one or more nutritional components consisting of fats, proteins, carbohydrates, dietary fiber, minerals, vitamins, and the like, along with the microorganisms of the present invention. In particular, the dietary fiber is known as a prebiotic substrate that promotes the splitting of lactic acid bacteria, so it may enter the body and play an important role in the formation and maintenance of colonies in the intestine. It may be included in the composition so that it can be administered later or simultaneously.

본 발명의 식품 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 류코노스톡 메센테로이드 YML003, 이의 배양물 또는 이의 생산물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. The food composition of the present invention is not particularly limited, except for containing the leuconosstock mesenteroid YML003, its culture, or its products as essential ingredients in the indicated proportions, and various flavors or natural carbohydrates, such as ordinary drinks. Etc. can be contained as an additional component.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다.    In addition to the above-mentioned composition, the composition of the present invention can be used as a flavoring agent such as various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), synthetic flavors and natural flavors, coloring agents and intermediates (cheese, chocolate etc.), pectic acid and its salts, Salts, organic acids, protective colloid thickening agents, pH adjusting agents, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonating agents used in carbonated beverages and the like.

상기 조성물이 사료 조성물의 형태로 제공될 경우, 기존 항생제의 대체용으로 사용되어 장내 유해균의 생육을 억제하며 장내 균총을 안정되게 유지하여 가축의 건강상태를 양호하게 하여 가축의 증체량과 육질을 개선시키고 산유량 및 면역력을 증가시킬 수 있다. 본 발명의 사료 조성물은 이에 한정되지는 않으나 발효사료, 배합사료, 펠렛 형태, 사일레지 (silage) 등의 형태로 제조될 수 있다. 상기 발효사료는 본 발명의 류코노스톡 메센테로이드 YML003, 이의 배양물 또는 이의 생산물과 여러 가지 미생물 또는 효소를 첨가함으로써 유기물을 발효시켜 제조할 수 있으며, 상기 배합사료는 여러 종류의 일반사료와 본 발명의 류코노스톡 메센테로이드 YML003, 이의 배양물 또는 이의 생산물을 혼합하여 제조할 수 있다. 또한, 상기 펠렛 형태의 사료는 상기 발효사료 또는 배합사료를 펠렛기에서 열과 압력을 가하여 제조할 수 있으며, 사일레지는 청예사료를 본 발명의 류코노스톡 메센테로이드 YML003으로 발효시킴으로써 제조할 수 있다.When the composition is provided in the form of a feed composition, it is used as a substitute for the existing antibiotics to suppress the growth of harmful intestinal bacteria and to maintain the intestinal flora in a stable condition to improve the health of the livestock and improve the weight gain and quality of the livestock May increase production and immunity. Feed composition of the present invention is not limited to this, but can be prepared in the form of fermented feed, compound feed, pellet form, silage (silage) and the like. The fermented feed may be prepared by fermenting the organic material by adding the leukonostock mesenteroid YML003 of the present invention, its culture or its products and various microorganisms or enzymes, the compound feed is a variety of general feed and the present invention It can be prepared by mixing the leukonostock mesenteroid YML003, its culture or its products. In addition, the feed in the form of pellets can be prepared by applying heat and pressure to the fermented feed or blended feed in a pellet machine, silage can be prepared by fermenting the chewing feed with the leuconosstock mesentoid YML003 of the present invention.

본 발명의 식품 조성물에 포함되는 류코노스톡 메센테로이드 YML003의 함량은 특별히 한정된 것은 아니나, 105 cfu/g 내지 약 1011 cfu/g일 수 있으며, 최소의 효능을 가지는데 필요한 균주량 및 일일 섭취 정도는 섭취자의 신체 또는 건강상태에 따라 달라질 수 있다. The content of the leukonostock mesentroid YML003 included in the food composition of the present invention is not particularly limited, but may be from 10 5 cfu / g to about 10 11 cfu / g, and the amount of strain and daily intake necessary to have minimal efficacy The degree may vary depending on the body or health condition of the ingestor.

본 발명은 류코노스톡 메센테로이드 YML003, 이의 배양물 또는 이의 생산물을 포함하는 항바이러스용 약학 조성물을 제공한다. The present invention provides a pharmaceutical composition for anti-viral comprising leukonostock mestheteroid YML003, a culture thereof or a product thereof.

상기 바이러스는 특별히 한정된 것은 아니나, 병원성 바이러스일 수 있으며, 바람직하게는 인플루엔자 바이러스일 수 있고, 보다 바람직하게는 조류인플루엔자 바이러스일 수 있다. 조류인플루엔자 바이러스는 모두 본 발명의 범위에 포함될 수 있으며, 혈청형 H5N1, 혈청형 H9N2, 혈청형 H7N3, 및 혈청형 H7N7로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 조류인플루엔자 바이러스가 포함될 수 있으며, 본 발명의 류코노스톡 메센테로이드 YML003는 특히 혈청형 H9N2인 조류인플루엔자 바이러스에 대해 우수한 저항성을 나타낼 수 있다.The virus is not particularly limited, but may be a pathogenic virus, preferably an influenza virus, more preferably an avian influenza virus. All of the avian influenza viruses may be included in the scope of the present invention, and may include at least one avian influenza virus selected from the group consisting of serotype H5N1, serotype H9N2, serotype H7N3, and serotype H7N7, and the leukono of the present invention. Stock mesentroid YML003 may exhibit excellent resistance, particularly against avian influenza virus, serotype H9N2.

본 발명의 조성물의 적용대상에는 특별한 제한이 없으며, 본 발명의 조성물은 사람뿐만 아니라 동물 일례로, 사육동물이나 애완동물을 포함한 모든 동물에게 적용될 수 있다.There is no particular limitation on the application of the composition of the present invention, the composition of the present invention can be applied to all animals, including animals or pets, as an example of animals as well as humans.

본 발명의 항바이러스용 약학 조성물은 병원성 바이러스의 생육을 저해 또는 억제하는 활성을 지닌 조성물일 수 있으며, 그 일례로는, 정장제, 생균제, 분무용 살균제 등이 있다.The pharmaceutical composition for an antiviral of the present invention may be a composition having an activity of inhibiting or inhibiting the growth of a pathogenic virus, and examples thereof include a formal agent, a probiotic, a spray disinfectant, and the like.

상기 정장제는 동물의 장내 세균총의 이상 발효에 의하여 야기되는 제반증상을 치료 및 개선하기 위한 것으로, 본 발명의 일례로, 유해 미생물에 의한 감염성 설사, 위장염, 염증성장질환, 신경성 장염 증후군, 소장 미생물 과성장증, 장 급이성 설사 등이 포함될 수 있다.The suit is intended to treat and ameliorate various symptoms caused by abnormal fermentation of the intestinal flora of the animal. As an example of the present invention, infectious diarrhea, gastroenteritis, inflammatory growth disease, neuro enteritis syndrome, small intestine microorganism and Growth, bowel dysentery, and the like.

상기 생균제는 살아 있는 균 즉, 동물이 섭취했을 때 위장관에 머물러 생존할 수 있는 미생물로서 특정 병리상태를 예방하거나 치료할 수 있는 효과가 있는 미생물 제제를 의미할 수 있다. The probiotic may refer to a microorganism having an effect of preventing or treating a specific pathological condition as a living microorganism, that is, a microorganism that can survive in the gastrointestinal tract when ingested by an animal.

상기 약학조성물 총 중량에 대하여 상기 류코노스톡 메센테로이드 YML003, 이의 배양물 또는 이의 생산물은 0.1 내지 90 중량%로 포함할 수 있다.Based on the total weight of the pharmaceutical composition, the leuconosstock mesenteroid YML003, a culture thereof, or a product thereof may be included in an amount of 0.1 to 90 wt%.

본 발명의 류코노스톡 메센테로이드 YML003, 이의 배양물 또는 이의 생산물을 포함하는 약학조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 본 발명의 약학조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며 (예: 문헌 [Remington's Pharmaceutical Science, 최신판; Mack Publishing Company, Easton PA), 담체기질 또는 영양 성분과 함께 경구 투여, 비경구 투여, 또는 피부 또는 점막에 물리적인 접촉을 통해 투여하거나, 직접적으로 튜브나 카테타를 통해 장에 투여할 수도 있다. 상기 약학적 조성물은 정제 (tablet), 트로키 (troche), 캡슐(capsule), 엘릭시르(elixir), 시럽(syrup), 산제(powder), 현탁제 (suspension), 과립제(granule), 분무제 등의 형태로 제조되어 투여될 수 있다.The pharmaceutical composition comprising the leukonostock mesentroid YML003, a culture thereof, or a product thereof of the present invention may further include appropriate carriers, excipients, and diluents commonly used in the preparation of pharmaceutical compositions. The pharmaceutical compositions of the present invention may be prepared in any formulation conventionally prepared in the art (e.g., Remington's Pharmaceutical Science, latest edition; Mack Publishing Company, Easton PA), orally administered with a carrier substrate or nutritional component, It may be administered parenterally, or by physical contact with the skin or mucous membranes, or directly to the intestine via a tube or catheter. The pharmaceutical composition may be a tablet, a troche, a capsule, an elixir, a syrup, a powder, a suspension, a granule, a spray, or the like. It may be prepared and administered in the form.

예를 들어, 산제는 본 발명의 유산균과 유당, 전분, 미결정셀룰로오스 등 약제학적으로 허용되는 적당한 부형제를 단순 혼합함으로써 제조될 수 있다. 과립제는 본 발명의 미생물; 약제학적으로 허용되는 적당한 부형제; 및 폴리비닐피롤리돈, 히드록시프로필셀룰로오스 등의 약제학적으로 허용되는 적당한 결합제를 혼합한 후, 물, 에탄올, 이소프로판올 등의 용매를 이용한 습식과립법 또는 압축력을 이용한 건식과립법을 이용하여 제조될 수 있다. 또한 정제는 상기 과립제를 마그네슘스테아레이트 등의 약제학적으로 허용되는 적당한 활택제화 혼합한 후, 타정기를 이용하여 타정함으로써 제조될 수 있다.For example, powders may be prepared by simply mixing the lactic acid bacteria of the present invention with a suitable pharmaceutically acceptable excipient such as lactose, starch, microcrystalline cellulose. The granules are microorganisms of the present invention; Suitable excipients which are pharmaceutically acceptable; And a suitable pharmaceutically acceptable binder such as polyvinylpyrrolidone and hydroxypropylcellulose, followed by wet granulation using a solvent such as water, ethanol or isopropanol or dry granulation using a compressive force . Further, the tablet may be prepared by mixing the above granule with a suitable pharmaceutically acceptable salt such as magnesium stearate and then tableting it using a tablet machine.

본 발명의 투여 용량은 체내에서의 활성성분의 흡수도, 불활성율, 배설속도, 피투여자의 연령, 성별, 상태, 질병의 중증정도 등에 따라 적절히 선택할 수 있는데, 일례로, 생균제용 조성물의 경우에는 조성물 내 생균수가 1×105 내지 1×1011 cfu/g이 되도록 투여될 수 있으나, 이는 환자 및 상황에 따라 선택되어야 할 사항으로 상기 투여량에 의해서 본 발명의 범위가 한정되는 것은 아니다. The dosage of the present invention can be appropriately selected according to the absorbency, inactivation rate, excretion rate, age, sex, condition, severity of disease, etc. of the active ingredient in the body, for example, in the case of a probiotic composition The number of viable cells in the composition may be administered to be 1 × 10 5 to 1 × 10 11 cfu / g, but this should be selected according to the patient and the situation, and the scope of the present invention is not limited by the dosage.

본 발명은 류코노스톡 메센테로이드 YML003, 이의 배양물 또는 이의 생산물을 포함하는 항바이러스용 화장품 조성물을 제공한다.The present invention provides a cosmetic composition for anti-viral comprising leukonostock mecetheroid YML003, its culture or its products.

상기 바이러스는 특별히 한정된 것은 아니나, 병원성 바이러스일 수 있으며, 바람직하게는 인플루엔자 바이러스일 수 있고, 보다 바람직하게는 조류인플루엔자 바이러스일 수 있다. 조류인플루엔자 바이러스는 모두 본 발명의 범위에 포함될 수 있으며, 일례로, 혈청형 H5N1, 혈청형 H9N2, 혈청형 H7N3, 및 혈청형 H7N7로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 조류인플루엔자 바이러스가 포함될 수 있으며, 본 발명의 류코노스톡 메센테로이드 YML003는 특히 혈청형 H9N2인 조류인플루엔자 바이러스에 대해 우수한 저항성을 나타낼 수 있다.The virus is not particularly limited, but may be a pathogenic virus, preferably an influenza virus, more preferably an avian influenza virus. All avian influenza viruses may be included in the scope of the present invention, for example, may include one or more avian influenza virus selected from the group consisting of serotype H5N1, serotype H9N2, serotype H7N3, and serotype H7N7, the present invention The leukonostock mesentaroid of YML003 may exhibit excellent resistance to avian influenza virus, in particular serotype H9N2.

본 발명의 조성물의 적용대상에는 특별한 제한이 없으며, 본 발명의 조성물은 사람뿐만 아니라 동물 예를 들면, 사육동물이나 애완동물을 포함한 모든 동물에게 적용될 수 있다. There is no particular limitation on the application of the composition of the present invention, the composition of the present invention can be applied to all animals, including humans as well as animals, for example, breeding animals or pets.

본 발명의 화장품의 형태는 특별히 한정되지 않으며, 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 형태로도 제조될 수 있는데 (예: 문헌 [Remington's Pharmaceutical Science, 최신판), 예컨대, 에멀젼, 로션, 크림 (수중유적형, 유중수적형, 다중상), 용액, 현탁액 (무수 및 수계), 무수 생성물 (오일 및 글리콜계), 젤, 마스크, 팩, 분말, 비누 등의 형태로 제조될 수 있다. The form of the cosmetic of the present invention is not particularly limited and may be prepared in any form conventionally prepared in the art (e.g., Remington's Pharmaceutical Science, the latest edition), such as emulsions, lotions, creams (oil-in-water) , Water-in-oil, multiphase), solutions, suspensions (anhydrous and aqueous), anhydrous products (oil and glycols), gels, masks, packs, powders, soaps and the like.

본 발명의 일례로, 본 발명의 조성물은 분무용 현탁액으로 손소독제 또는 바디소독제로 사용될 수 있다. In one example of the present invention, the composition of the present invention may be used as a hand sanitizer or a body sanitizer as a spray suspension.

본 발명의 화장품에는, 필요에 따라 본 발명의 효과를 손상시키지 않는 범위에서, 통상의 성분들, 예컨대 유분, 계면활성제, 보습제, 다가알콜, 증점제, 수용성 고분자, 피막형성제, 비수용성 고분자, 분말, 안료, 염료, 레이크, 저급 알콜, 자외선 흡수제, 금속이온 킬레이트제, 유기아민류, pH 조정제, 약효성분, 당류, 방부제, 산화방지제, 향료, 물 등을 첨가할 수 있다. Cosmetics of the present invention, if necessary, in the range that does not impair the effects of the present invention, conventional ingredients such as oil, surfactants, moisturizers, polyhydric alcohols, thickeners, water-soluble polymers, film-forming agents, water-insoluble polymers, powder , Pigments, dyes, lakes, lower alcohols, ultraviolet absorbers, metal ion chelating agents, organic amines, pH adjusting agents, active ingredients, sugars, preservatives, antioxidants, fragrances, water and the like can be added.

상기 화장품에 있어서의 류코노스톡 메센테로이드 YML003, 이의 배양물 또는 이의 생산물의 배합량은, 화장품의 형태인 상기 물질의 종류 등에 따라 당업자가 적절히 선택 가능하지만, 예를 들면 0.001 중량% 내지 50 중량%일 수 있으나, 사용 용도, 상태 등에 따라 중량비는 변할 수 있다.The blending amount of leukonostock mecetheroidoid YML003, the culture thereof, or the product thereof in the cosmetic may be appropriately selected by those skilled in the art according to the kind of the substance, which is a form of cosmetic, for example, 0.001% by weight to 50% by weight. However, the weight ratio may vary depending on the use purpose, condition, and the like.

본 발명의 화장품은 완제품의 최종 용도와 특성에 따라서 도포한다. 예를 들면 항바이러스 활성을 나타내는 소독용 화장품를 매일 한번, 필요에 따라서는 그보다 더 자주 또는 그보다 더 적은 횟수로 사용할 수 있다. 기타 적합한 도포 방법은 통상의 최적화 방법에 따라 결정한다.
Cosmetics of the present invention are applied according to the end use and characteristics of the finished product. For example, antiseptic cosmetics that exhibit antiviral activity can be used once daily, more often or less often, if necessary. Other suitable application methods are determined according to conventional optimization methods.

이하, 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 단, 하기 실시예들은 본 발명을 예시한 것으로 본 발명의 내용이 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail by way of examples. However, the following examples are illustrative of the present invention, and the content of the present invention is not limited by the examples.

< < 실시예Example > >

실시예Example 1. 내 산성, 내 담즙산성 및 항생제 감수성을 갖는 세균 분리 1.Isolation of bacteria with acid resistance, bile acid resistance and antibiotic sensitivity

실시예Example 1-1.  1-1. 내산성Acid resistance 측정 Measure

한국 전통 김치에서 분리한 류코노스톡 메센테로이드 YML003을 MRS 액체배지 (Difco)에 37℃에서 24시간 배양하여 배양상등액을 확보하였다.The supernatant was obtained by incubating the leukonostock mecetheroidoid YML003 isolated from Korean traditional kimchi for 24 hours at 37 ° C in MRS liquid medium (Difco).

내 산성을 확인하기 1N HCl과 NaOH 용액을 사용하여 pH 2.3 조정한 MRS 액체배지에 류코노스톡 메센테로이드 YML003 배양액을 접종하고, 37℃에서 2시간 배양하여 생균수를 측정하였고, 그 결과를 표 1에 나타내었다.
To check the acid resistance inoculated with the leukonostock mesentoid YML003 culture medium in a pH 2.3 adjusted MRS liquid medium using 1N HCl and NaOH solution, and incubated at 37 ℃ for 2 hours to measure the number of viable cells, the results are shown in Table 1 Shown in

실시예Example 1-2. 내 담즙산성 측정 1-2. Bile Acid Resistance Measurement

내 담즙산성 시험은 담즙 (oxgall, Sigma-Aldrich, USA) 5%가 첨가된 MRS 액체배지에 류코노스톡 메센테로이드 YML003을 접종하여 37℃에서 5시간 배양하여 생균수를 측정하였고, 그 결과를 표 1에 나타내었다.In the bile acid resistance test, inoculated with leukonostock mecetheroid YML003 in MRS liquid medium to which bile (oxgall, Sigma-Aldrich, USA) 5% was added was incubated at 37 ° C. for 5 hours, and the result was measured. 1 is shown.

내 산성 (인공 위액)Acid-resistant (artificial gastric juice) 내 담즙산성 (인공 Bile acid resistance (artificial 담즙액Bile )) 생균수(CFU/ml)Viable Count (CFU / ml) 생존율(%)Survival rate (%) 생균수(CFU/ml)Viable Count (CFU / ml) 생존율(%)Survival rate (%) 배양 전Before incubation 배양 후After incubation 배양 전Before incubation 배양 후After incubation 2.5 × 108 2.5 × 10 8 1.7 × 105 1.7 × 10 5 6060 2.5 × 108 2.5 × 10 8 2.3 × 106 2.3 × 10 6 7070

상기 표 1에서 확인한 바와 같이, 류코노스톡 메센테로이드 YML003은 산과 담즙에 대한 내성이 있어 위장관에서의 생존 가능성이 높은 것으로 나타났다.
As confirmed in Table 1, the leukonostock mesentroid YML003 was resistant to acid and bile, and thus, was highly likely to survive in the gastrointestinal tract.

실시예Example 1-3. 항생제 감수성 측정 1-3. Antibiotic sensitivity measurement

류코노스톡 메센테로이드 YML003의 항생제에 대한 감수성 실험은 Becton Dickinson Microbiology Systems의 방법에 따라 BBL Sensi-Disc를 사용하여 실험하였고 11종의 항생제에 대해 수행하였으며, 그 종류는 다음과 같다. Antimicrobial susceptibility experiments of leukonostock mesentroid YML003 were tested using BBL Sensi-Disc according to the method of Becton Dickinson Microbiology Systems, and were performed on 11 antibiotics.

암피실린 (Ampicillin, 10ug), 테트라사이클린 (Tetracycline, 30ug), 젠타마이신 (Gentamicin, 10ug), 에리쓰로마이신 (Erythromycin, 15ug), 세파로신 (Cephalothin, 30ug), 린코마이신 (Lincomycin, 30ug), 네오마이신 (Neomycin, 30ug), 스트렙토마이신 (Streptomycin, 10ug), 카베니실린 (Carbenicillin, 100ug), 설피소사졸 (Sulfisoxazole, 25ug), 페니실린 G (Penicillin G, 10ug) 이었다.Ampicillin (10ug), Tetracycline (30ug), Gentamicin (10ug), Erythromycin (Erythromycin, 15ug), Sepharosin (Cephalothin, 30ug), Lincomycin (30ug), Neomycin (Neomycin, 30ug), Streptomycin (Strugtomycin, 10ug), Carbenicillin (100ug), Sulfisoxazole (Sulfisoxazole, 25ug), Penicillin G (Penicillin G, 10ug).

류코노스톡 메센테로이드 YML003을 MRS 액체배지에서 배양한 (37℃, 24시간) 후, MRS 고체배지 plate에 균액을 균일하게 도말하고, BBL Sensi-Disc를 올려놓은 다음 배양 (37℃, 24시간)하였다. 배양이 끝난 다음 형성된 생육 억제환 (clear zone)의 직경을 측정하여 항생제에 대한 감수성 결과를 표 2에 나타내었다. After incubating the leukonostock mestheteroid YML003 in MRS liquid medium (37 ℃, 24 hours), spreading the solution on MRS solid medium plate uniformly, placing BBL Sensi-Disc and incubating (37 ℃, 24 hours) It was. Table 2 shows the results of susceptibility to antibiotics by measuring the diameter of the clear zone formed after the incubation.

항생제 (Antibiotic ( BBLBBL SensiSensi -- DiscDisc , 6, 6 mmmm )) 생육 Growth 억제환의Restraint 직경diameter ( ( mmmm )) 암피실린 (10ug)Ampicillin (10ug) 1818 테트라사이클린 (30ug)Tetracycline (30ug) 1414 젠타마이신 (10ug)Gentamicin (10ug) -- 에리쓰로마이신 (15ug)Erythromycin (15ug) 2525 세파로신 (30ug)Sepharosin (30ug) 2222 린코마이신 (2ug)Lincomycin (2ug) 2525 네오마이신 (30ug)Neomycin (30 ug) 1515 스트렙토마이신 (10ug)Streptomycin (10ug) 1313 카베니실린 (100ug)Carbenicillin (100ug) 2525 설피소사졸 (25ug)Sulfisoazole (25ug) -- 페니실린 G (10ug)Penicillin G (10ug) 2323

실시예Example 2.  2. InIn vitrovitro 상에서  On 저병원성Low pathogenic 조류인플루엔자 바이러스 생장 억제 실험 Avian Influenza Virus Growth Inhibition Experiment

실시예Example 2-1. 세포주 ( 2-1. Cell line ( CellCell lineline )을 이용한 항바이러스 활성Antiviral activity

MDCK cell monolayer (단층세포)에 조류인플루엔자 H9N2 혈청형 바이러스 (LPAI H9N2 virus)인 A/chicken/Korea/MS96/1996 (H9N2) 접종하고 약 1시간 바이러스를 세포에 흡착시킨 후 MEM (Eagle's minimum essential medium)을 첨가하고 5% CO2를 함유한 37℃ 세포배양기에서 배양하면서 세포 변성효과 (cytopathic effects, CPE)를 관찰하였다. LPAI H9N2 바이러스 배양액을 MEM으로 희석하여 바이러스 역가 (virus titer)가 107.5 EID50/0.1ml가 되게 하였다. 96공 세포배양 플레이트 (plate)에 MDCK cell monolayer를 준비한 다음 유산균 배양액을 각 공 (well)에서 2배씩 희석하였으며, 96공 세포 배양 plate의 각 공 (well)에 LPAI H9N2 바이러스를 참가한 후 5% CO2를 함유한 37℃ 세포배양기에서 72시간 배양하여 세포 변성효과를 관찰하였다.MDCK cell monolayer was inoculated with A / chicken / Korea / MS96 / 1996 (H9N2), avian influenza H9N2 serotype virus (LPAI H9N2 virus), and the virus was adsorbed to the cells for about 1 hour, followed by MEM (Eagle's minimum essential medium). ), And cytopathic effects (CPE) were observed while culturing in a 37 ° C cell incubator containing 5% CO 2 . The LPAI H9N2 virus culture was diluted with MEM to give a virus titer of 10 7.5 EID 50 /0.1 ml. MDCK cell monolayers were prepared in 96-hole cell culture plates, and the lactic acid bacteria culture medium was diluted twice in each well. After incorporating LPAI H9N2 virus into each well of the 96-hole cell culture plate, 5% CO Cell degeneration was observed by incubating for 72 hours in a 37 ℃ cell incubator containing 2 .

류코노스톡 메센테로이드 YML003의 LPAI H9N2 바이러스에 대한 억제 활성은 다음 표 3과 같다.Inhibitory activity of the leukonostock mesenteroid YML003 against LPAI H9N2 virus is shown in Table 3 below.

희석 배수Dilution drainage 22 00 22 1One 22 22 22 33 세포배양상등액
(Cell-free supernatant)Cell culture supernatant
(Cell-free supernatant) ++ ++ ±± -- 열 처리 세포배양상등액
(Heat-killed supernatant)Heat Treated Cell Culture Supernatant
(Heat-killed supernatant) ++ ++ -- -- + : antiviral activity, - : cytopathic effect+: antiviral activity,-: cytopathic effect

상기 표 3 및 도 1에서 확인한 바와 같이, 세포변성이 나타났으므로 류코노스톡 메센테로이드 YML003의 LPAI H9N2 바이러스에 대한 항바이러스 활성을 확인할 수 있다.
As shown in Table 3 and Figure 1, since the degeneration of the cytokine can be confirmed the antiviral activity against the LPAI H9N2 virus of the leukonostock mesenteroid YML003.

실시예Example 2-2. 종란 ( 2-2. Seedling ( EggEgg )을 이용한 항바이러스 활성Antiviral activity

LPAI H9N2 바이러스는 9~11일령의 SPF 종란에 배양하여 역가가 107.5 EID50/0.1ml 되도록 증식하였으며, 증식된 바이러스는 영하 70℃가 유지되는 냉동고에 보관하면서 사용하였다. 유산균 배양 상등액은 PBS을 이용하여 102으로 희석하여 사용하였다. LPAI H9N2 virus was incubated in 9-11 days of age SPF oocytes, the titer was increased to 10 7.5 EID 50 /0.1ml, and the propagated virus was used while stored in a freezer maintained at minus 70 ℃. The lactic acid bacteria supernatant was diluted to 10 2 using PBS.

바이러스 증식여부의 판정을 위해 LPAI H9N2 바이러스와 유산균 배양 상등액을 실온에서 1시간 반응시키고, 11일령의 SPF 종란 (발육란)의 요막강에 100ul 접종하였다. 바이러스 접종 후 5일간 배양 (부화기, 37℃)하며, 매일 검란을 실시하여 죽은 발육란은 제외하였다. 5일간 배양된 발육란을 4℃에서 chilling 한 후 발육란에서 요막강액을 채취하였다. 1% SPF 닭의 적혈구를 사용하여 혈구응집반응 시험을 실시하고 농도별 바이러스 증식 억제 능력을 측정하여 결과를 하기 표 4에 나타내었다.For determination of virus propagation, the LPAI H9N2 virus and the lactic acid bacteria culture supernatant were allowed to react at room temperature for 1 hour, and 100 μl of the urea cavity of 11-day-old SPF eggs (embedded eggs) was inoculated. After inoculation of the virus was incubated for 5 days (incubator, 37 ℃), and the embryonated eggs were excluded every day was excluded. Five days of cultured embryonated eggs were chilled at 4 ° C, and the ureteral fluid was collected from the embryonated eggs. Hemagglutination reaction test was performed using red blood cells of 1% SPF chicken, and the results of the virus growth inhibition ability by concentration were shown in Table 4 below.

시험구Test section NONO CSCS HSHS SSSS 혈구응집반응 시험Hemagglutination Test 00 1:81: 8 1:81: 8 1:41: 4 NO ; LPAI-uninfected eggs, CS ; cell freesupernatant-treated eggs, HS ; heat killed cell free supernatant-treated eggs, SS ; sonicated cell free supernatant. NO; LPAI-uninfected eggs, CS; cell free supernatant-treated eggs, HS; heat killed cell free supernatant-treated eggs, SS; sonicated cell free supernatant.

상기 표 4에서 확인할 수 있는 바와 같이, 혈구응집시험 결과 최대 8배 희석한 곳까지 바이러스 증식에 의한 혈구응집을 억제시킬 수 있는 항바이러스 활성을 확인할 수 있었다.
As can be seen in Table 4, as a result of the hemagglutination test, it was confirmed that the antiviral activity capable of inhibiting the hemagglutination caused by virus proliferation up to a dilution of 8-fold.

실시예Example 3.  3. InIn vivovivo 상에서  On 저병원성Low pathogenic 조류인플루엔자 바이러스 생장 억제 실험 Avian Influenza Virus Growth Inhibition Experiment

실시예Example 3-1.  3-1. SPFSPF 닭의 체중, 면역기관 무게 변화 확인 Changes in chicken weight and immune system weight

SPF 닭에서 LPAI H9N2 바이러스의 증식 억제를 확인하기 위해 SPF 닭 100수를 4개의 시험구로 나누어, 닭의 체중, 면역기관 무게 변화를 확인하였다. In order to confirm the inhibition of the proliferation of LPAI H9N2 virus in SPF chickens, 100 SPF chickens were divided into four test groups, and the change in chicken weight and immune organ weight was confirmed.

시험구 A는 유산균 배양액을 90℃에서 1시간 끓인 사균배양액 (1%), B는 유산균 배양액 생균배양액 (1%)를 사료에 섞어 투여하였다. D의 경우는 유산균 배양액이 포함되지 않은 사료만 투여한 시험구이다. A, B, D는 유산균 배양액 (생균, 사균)과 저병원성 조류인플루엔자 바이러스를 처리한 시험구로 유산균 배양액 (생균, 사균)을 2주일 간 투여한 후 LPAI H9N2 바이러스를 공격 접종하였다. C는 대조구로 미생물 배양액 생균배양액 1%를 사료에 혼합하여 투여하였으며, LPAI H9N2 바이러스는 공격 접종하지 않았다. Test A was mixed with lactic acid bacteria culture broth culture (1%) boiled at 90 ° C. for 1 hour, and B was mixed with lactic acid bacteria culture medium (1%). In the case of D, only the feed containing no lactic acid bacteria culture medium was administered. A, B, and D were treated with lactic acid bacteria cultures (live bacteria, dead bacteria) and low-pathogenic avian influenza virus. C was administered as a control was mixed with 1% of the microbial culture culture culture medium in the feed, and LPAI H9N2 virus was not challenged.

상기 시간 경과에 따른 닭의 체중, 면역기관 무게의 변화를 표 5에 나타내었다.Table 5 shows the change in body weight and immune organ weight of the chicken over time.

항목Item 그룹group P 값P value bb AA BB CC DD 체중  weight 176.0±6.7176.0 ± 6.7 218.4±5.5218.4 ± 5.5 191.1±14.3191.1 ± 14.3 187.5±9.6187.5 ± 9.6 비장 인덱스a Spleen index a 0.42±0.060.42 ± 0.06 0.43±0.030.43 ± 0.03 0.27±0.020.27 ± 0.02 0.40±0.040.40 ± 0.04 파브리시우스 낭 인덱스a Fabrizius sac index a 0.90±0.050.90 ± 0.05 1.03±0.071.03 ± 0.07 0.74±0.070.74 ± 0.07 0.74±0.070.74 ± 0.07 Serum       Serum GPT(u/l)GPT (u / l) 13.83±1.1113.83 ± 1.11 12.33±0.8412.33 ± 0.84 15.10±0.4015.10 ± 0.40 13.77±1.6413.77 ± 1.64 0.270.27 GOT(u/l)GOT (u / l) 179.0±5.3179.0 ± 5.3 193.67±9.56193.67 ± 9.56 206.3±18.4206.3 ± 18.4 186.3±15.1186.3 ± 15.1 0.340.34 ALB(g/㎗)ALB (g / ㎗) 1.07±0.041.07 ± 0.04 1.47±0.091.47 ± 0.09 1.37±0.111.37 ± 0.11 1.70±0.071.70 ± 0.07 ≤0.05≤0.05 a Spleen and BF(bursa of Fabricius) index ; immune organ weight/body weight x 1000
b Means within each row without an uppercase superscript letter differ significantly (P
≤0.05)
GPT ; glutamic pyruvic transaminase, GOT ; glutamic oxaloacetic transminase, ALB ; albumin a Spleen and bursa of Fabricius index; immune organ weight / body weight x 1000
b Means within each row without an uppercase superscript letter differ significantly (P
≤0.05)
GPT; glutamic pyruvic transaminase, GOT; glutamic oxaloacetic transminase, ALB; albumin

상기 표 5에서 확인한 바와 같이, 바이러스 공격 접종 3일 후 모든 시험구에서 비슷한 결과의 체중 변화가 나타났으나, 공격 접종 5일째 생균배양액이 1% 투여된 B, C시험구에서 SPF닭의 체중이 높게 나타났다.As shown in Table 5 above, after 3 days of virus challenge inoculation, all of the test groups showed similar results in weight change, but at 5 days of challenge inoculation, BF and C in the B and C test cells treated with 1% probiotic culture were High.

생균 배양액 1%를 사료에 혼합하여 투여한 B 시험구에서 LPAI H9N2 바이러스의 감염 후 비장과 파브리시우스 낭의 무게가 가장 높은 것으로 나타났다. 또한 LPAI 바이러스를 접종하지 않고 생균 배양액 1%를 사료에 혼합한 C 시험구에서도 바이러스 감염 시간이 지날수록 비장과 파브리시우스 낭의 무게가 높아지는 것으로 나타났다.
In the test group B, which was mixed with 1% of the viable culture medium, the spleen and Fabriscis cyst had the highest weight after the LPAI H9N2 virus infection. In addition, in the C test group in which 1% of the viable culture solution was mixed with the feed without inoculating the LPAI virus, the weight of the spleen and Fabrisius sac increased as the virus infection time passed.

실시예Example 3-2. 기도 ( 3-2. Prayer ( TracheaTrachea )에서 조류인플루엔자 바이러스 Avian influenza virus 배출역가Discharge potency 측정 Measure

실시예 3-1과 동일하게 처리한 시험구와 대조구를 사용하였다. 조류인플루엔자 바이러스를 공격 접종 한 후 SPF 닭의 기도에서 기간에 따른 바이러스 역가를 qRT-PCR을 이용하여 측정하였고, 그 결과를 표 6에 나타내었다.
Test and control treated in the same manner as in Example 3-1 were used. After inoculation with avian influenza virus, virus titer was measured by qRT-PCR in the airways of SPF chickens, and the results are shown in Table 6.

하기 표 6에서 나타난 바와 같이, 생균 배양액과 사균 배양액을 처리하지 않은 D 시험구의 바이러스 역가가 가장 높았으며, 사균 배양액을 투여한 A 시험구와 생균 배양액을 투여한 B 시험구에서는 D 시험구 보다 낮은 바이러스 역가가 측정 되었다. 특히, 생균배양액를 투여한 B 시험구는 다른 시험구에 비하여 낮은 바이러스 역가를 보였다. 이는 생균배양액을 투여한 SPF 닭에서 바이러스 증식의 억제가 높은 것을 알 수 있으며, 또한 사균배양액을 투여한 SPF 닭에서도 생균을 투여한 그룹보다 낮지만 바이러스 증식의 억제가 작용하였음을 알 수 있다.
As shown in Table 6 below, the virus titer of the test cell D treated with the live cell culture and the dead cell culture was the highest, and the test cell A and the test cell treated with the live cell culture were lower than the test cell D. Titer was measured. In particular, test group B, which was administered with viable culture medium, showed lower viral titer than other test groups. It can be seen that the suppression of virus proliferation was higher in SPF chickens to which the viable culture solution was administered, and also to the SPF chickens to which the bacterial culture solution was administered was lower than the group to which the viable bacteria were administered.

실시예Example 3-3. 배설강 ( 3-3. Excretory steel ( CloacaCloaca )에서 조류인플루엔자 바이러스 배출 ) Avian Influenza Virus Emissions 역가Potency 측정 Measure

실시예 3-1과 동일하게 처리한 시험구와 대조구를 사용하였다. 바이러스를 공격 접종한 후 SPF 닭의 배설강에서 기간에 따른 바이러스 역가를 qRT-PCR을 이용하여 측정하였고, 그 결과를 표 6에 나타내었다.
Test and control treated in the same manner as in Example 3-1 were used. Viral titers of the SPF chickens in the excretory cavity of the virus after challenge inoculation were measured using qRT-PCR, and the results are shown in Table 6.

하기 표 6에 나타난 바와 같이, 조류인플루엔자 바이러스 공격 접종 후 3일째 역가를 측정한 결과 생균 배양액 및 사균 배양액을 처리하지 않은 D 시험구의 바이러스 역가가 가장 높았으며, 생균 배양액을 투여한 B 시험구에서는 A, D 시험구 보다 매우 낮은 바이러스 역가가 측정되었다. 특히 생균 배양액을 투여한 B 시험구에서는 바이러스 공격 접종 5일째부터 바이러스의 역가가 측정되지 않았다. 이는 바이러스의 증식이 모두 억제된 것을 의미한다. As shown in Table 6 below, the titer was measured on the third day after the avian influenza virus challenge inoculation, the highest viral titer in the D test plot that was not treated with the live cell culture and the dead cell culture, and in the test group B which was administered the live cell culture A Very low viral titers were measured than in the D test group. Particularly, in test group B administered with the live cell culture, the titer of virus was not measured from the 5th day of virus challenge inoculation. This means that the proliferation of the virus is all suppressed.

항목Item 그룹group P 값P value aa AA BB CC DD 기도 ( Prayer ( TracheaTrachea )) 0 d.p.i0 d.p.i UDUD UDUD UDUD UDUD 3 d.p.i3 d.p.i 2.83±0.112.83 ± 0.11 2.73±0.132.73 ± 0.13 0.00±0.000.00 ± 0.00 3.04±0.283.04 ± 0.28 ≤0.05≤0.05 5 d.p.i5 d.p.i 3.33±0.073.33 ± 0.07 2.95±0.542.95 ± 0.54 0.00±0.000.00 ± 0.00 3.27±0.203.27 ± 0.20 ≤0.05≤0.05 배설강 ( Excretory steel ( CloacaCloaca )) 0 d.p.i0 d.p.i UDUD UDUD UDUD UDUD 3 d.p.i3 d.p.i 1.42±1.891.42 ± 1.89 0.69±0.920.69 ± 0.92 0.00±0.000.00 ± 0.00 1.47±1.961.47 ± 1.96 0.750.75 5 d.p.i5 d.p.i 1.20±1.611.20 ± 1.61 0.00±0.000.00 ± 0.00 0.00±0.000.00 ± 0.00 3.82±0.473.82 ± 0.47 ≤0.05≤0.05 a Means within each row without an uppercase superscript letter differ significantly (P ≤0.05)
UD ; undetectable levels a Means within each row without an uppercase superscript letter differ significantly (P ≤0.05)
UD; undetectable levels

상기 표 6에서 나타난 바와 같이, 생균 배양액 1%을 투여한 B 시험구는 다른 시험구에 비하여 낮은 바이러스 역가를 보였다. 이는 생균 배양액 1% 투여한 SPF 닭에서 바이러스 증식의 억제가 높은 것을 알 수 있으며, 또한 사균 배양액 1% 투여한 SPF 닭에서도 생균을 투여한 그룹보다 낮지만 바이러스 증식의 억제가 작용하였음을 알 수 있다.
As shown in Table 6, the test group B administered 1% of the viable culture medium showed a lower virus titer than the other test groups. It was found that the inhibition of virus growth was higher in SPF chickens administered with 1% of live cell culture, and also to SPF chickens treated with 1% of dead cell culture, but lower in virus growth than the group treated with live bacteria. .

실시예Example 3-4.  3-4. 비장세포에서In splenocytes 인터페론 감마의 생성 측정 Generation Measurement of Interferon Gamma

실시예 3-1과 동일하게 처리한 시험구와 대조구를 사용하였다. 조류인플루엔자 바이러스 감염 후 기간에 따른 비장 세포에서 인터페론 감마의 생성을 측정하였고, 그 결과를 도 3에 나타내었다.
Test and control treated in the same manner as in Example 3-1 were used. The production of interferon gamma in the spleen cells with time after avian influenza virus infection was measured, the results are shown in FIG.

도 3에 나타난 바와 같이, A, B, C, D 시험구 모두 인터페론 감마의 생성은 LPAI H9N2 바이러스 접종 후 5일째에서 가장 많이 생성되는 것을 알 수 있다. 특히 생균 배양액을 사료에 혼합하여 투여한 B 시험구는 다른 시험구에 비해 인터페론 감마의 생성이 매우 높았다. SPF 닭에 유산균 배양액 (생균, 사균)을 투여한 시험구는 LPAI H9N2 바이러스만 접종한 시험구에 비하여 면역 조절 활성이 높은 것으로 확인되었다.
As shown in Figure 3, A, B, C, D test cells in the production of interferon gamma is the most produced on the 5th day after the LPAI H9N2 virus inoculation. In particular, test group B, which was administered with a mixed culture of live bacteria, had a higher production of interferon gamma than other test groups. It was confirmed that the test cells administered with lactic acid bacteria culture medium (live bacteria and dead bacteria) to SPF chicken had higher immunomodulatory activity than the test cells inoculated with only LPAI H9N2 virus.

한국생명공학연구원Korea Biotechnology Research Institute KCTC12031KCTC12031 2011102020111020

Claims (5)

항바이러스 활성을 갖는 류코노스톡 메센테로이드 YML003 (수탁번호: KCTC 12031BP).Leuconosestock mesenteroid YML003 with antiviral activity (Accession Number: KCTC 12031BP). 류코노스톡 메센테로이드 YML003, 이의 배양물 또는 이의 생산물을 포함하는 항바이러스용 조성물.Leuconosestock mesenteroid YML003, an antiviral composition comprising a culture thereof or a product thereof. 제 2항에 있어서,
상기 바이러스는 조류인플루엔자 바이러스인, 항바이러스용 조성물.The method of claim 2,
The virus is avian influenza virus, antiviral composition. 제 3항에 있어서,
상기 조류인플루엔자 바이러스는 혈청형 H5N1, 혈청형 H9N2, 혈청형 H7N3, 및 혈청형 H7N7로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 조류인플루엔자 바이러스인, 항바이러스용 조성물.The method of claim 3, wherein
The avian influenza virus is at least one avian influenza virus selected from the group consisting of serotype H5N1, serotype H9N2, serotype H7N3, and serotype H7N7, antiviral composition. 제 2항에 있어서,
상기 항바이러스용 조성물은 동물사료, 발효식품, 정장제, 생균제, 분무용 살균제, 화장료, 손소독제 또는 바디소독제인, 항바이러스용 조성물.
The method of claim 2,
The antiviral composition is an animal feed, fermented food, suits, probiotics, spray fungicides, cosmetics, hand disinfectant or body disinfectant, anti-viral composition.
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