KR100524184B1 - Cosmetic Composition for Skin Whitening Comprising Myrothecium verrucaria-Cultured Medium as Active Ingredient - Google Patents

Cosmetic Composition for Skin Whitening Comprising Myrothecium verrucaria-Cultured Medium as Active Ingredient Download PDF

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KR100524184B1 KR10-2004-0001197A KR20040001197A KR100524184B1 KR 100524184 B1 KR100524184 B1 KR 100524184B1 KR 20040001197 A KR20040001197 A KR 20040001197A KR 100524184 B1 KR100524184 B1 KR 100524184B1
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Abstract

본 발명은 미로테슘 베루카리아 (Myrothecium verrucaria)의 배양액을 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명의 미로테슘 베루카리아의 배양액은 종래의 미백 성분에 비하여 향상된 티로시나아제 활성 억제 효과 및 뛰어난 멜라노사이트의 멜라닌 생성 저해 효과가 있으며, 본 발명의 미로테슘 베루카리아의 배양액을 포함하는 화장료 조성물은 탁월한 피부 미백 효과를 나타낸다. 또한, 본 발명의 미로테슘 베루카리아의 배양액은 피부에 거의 자극을 주지 않는다.The present invention provides a composition comprising a culture of a maze potassium chopping Luca Liao (Myrothecium verrucaria). The culture solution of myrcium berucaria of the present invention has an improved inhibitory effect on tyrosinase activity and an excellent effect of inhibiting melanin production of melanocytes compared to the conventional whitening ingredients, and a cosmetic composition comprising the culture solution of myrosium berucaria of the present invention. The composition exhibits an excellent skin lightening effect. In addition, the culture solution of myrcium berucaria of the present invention hardly irritates the skin.

Description

미로테슘 베루카리아의 배양액을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물{Cosmetic Composition for Skin Whitening Comprising Myrothecium verrucaria-Cultured Medium as Active Ingredient}Cosmetic composition for skin whitening comprising a culture solution of myrcium berucaria {Cosmetic Composition for Skin Whitening Comprising Myrothecium verrucaria-Cultured Medium as Active Ingredient}

본 발명은 미로테슘 베루카리아 (Myrothecium verrucaria)의 배양액을 포함하는 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 미백 성분으로서 미로테슘 베루카리아의 배양액을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition comprising a culture solution of myrothecium verrucaria , and more particularly, to a cosmetic composition for skin whitening comprising a culture solution of myrcium berucaria as a whitening component.

사람의 피부, 모발 및 눈 등의 색은 멜라닌, 카로틴 및 헤모글로빈 등에 의해 결정되는데, 특히 멜라닌은 피부색을 결정하는 가장 중요한 요인으로서, 멜라닌의 양과 성질 및 분포의 정도에 따라 피부색이 결정된다.The color of human skin, hair and eyes is determined by melanin, carotene and hemoglobin, and the like. In particular, melanin is the most important factor determining skin color, and skin color is determined according to the amount, nature and distribution of melanin.

사람의 피부나 모발의 색소는 햇빛, 특히 자외선의 유해한 영향으로부터 피부나 모발을 보호해 주는 역할을 한다. 예컨대, 이러한 색소가 부족한 사람은 햇빛에 매우 민감하여 화상을 입기 쉬우며 어린 나이에도 피부암의 발생 확률이 높다. 단파장의 자외선 (290-320 nm) 및 발암 물질은 피부에서 유해 라디칼, 예컨대, 산소 라디칼을 형성하며, 이러한 산소 라디칼이 피부 세포를 공격하여 피부를 노화시키는 것으로 알려져 있다.Human skin and hair pigments protect skin and hair from the harmful effects of sunlight, especially ultraviolet light. For example, people who lack these pigments are very sensitive to sunlight and are prone to burns and have a high probability of developing skin cancer even at a young age. Short wavelength ultraviolet (290-320 nm) and carcinogens form harmful radicals in the skin, such as oxygen radicals, which are known to attack skin cells and age the skin.

멜라닌의 주요한 기능은 이러한 유해 라디칼을 제거하여 이에 의한 손상으로부터 피부를 보호하는 것이다. 따라서, 멜라닌의 양이 많다는 것은 물리적 또는 화학적 독성 물질로부터 피부를 보호할 수 있는 효과적인 대응 체계를 가지고 있다는 것을 의미한다. 이러한 멜라닌의 생성을 촉진하는 요인으로서는 햇빛 (자외선) 뿐만 아니라 에스트로겐 또는 프로스타글라딘 등이 있다.The main function of melanin is to remove these harmful radicals and protect the skin from the damage thereby. Thus, high amounts of melanin means that it has an effective response system that can protect the skin from physical or chemical toxic substances. Factors that promote the production of such melanin include sunlight (ultraviolet rays) as well as estrogen or prostaglandin.

멜라닌은 자외선에 의해 멜라노사이트에서 티로신이 티로시나아제(tyrosinase)라는 효소에 의해 도파, 도파크롬으로 변환된 뒤 복잡한 산화와 축합 반응을 거쳐 생성된다. 생성된 멜라닌은 피부 세포에 전달되고 표피 박리와 함께 멜라닌이 상실되어 소멸되는 순환 작용을 보인다.Melanin is produced through the complex oxidation and condensation reaction of melanocytes in the melanocytes by tyrosine is converted to dopa, dopachrome by an enzyme called tyrosinase. The resulting melanin is delivered to the skin cells and exhibits a circulating action in which the melanin is lost and disappeared along with epidermal detachment.

이러한 멜라닌 생성 과정은 자연적으로 일어나는 현상으로서, 정상 상태의 사람 피부에서는 멜라닌의 과다 생성이 일어나지 않는다. 하지만, 피부가 외부의 자극, 예컨대, 자외선, 환경오염 또는 스트레스 등에 반응하면 멜라닌이 과다 생성된다. 과다 생성된 멜라닌이 피부 밖으로 배출되지 못하고 피부 속에 남아 있게 되면 색소 침착이 일어나게 된다.This melanin production process is a naturally occurring phenomenon, and overproduction of melanin does not occur in normal human skin. However, when the skin responds to external stimuli such as ultraviolet rays, environmental pollution or stress, excessive production of melanin. If excess melanin remains in the skin rather than drains out of the skin, pigmentation occurs.

상기 외부 자극 요인 중 자외선은 가장 큰 멜라닌 생합성 자극원으로서, 멜라닌 생성과 관련된 여러 가지 과정에 영향을 줄 수 있다. 즉, 자외선은 멜라닌 생성 세포인 멜라노사이트의 활성 촉진, 멜라닌 생합성 자극 호르몬 분비 촉진, 멜라닌의 산화 촉진, 또는 티로시나아제 활성 촉진 등을 통해 멜라닌 과다 생성을 유도하는 중요 요인으로 작용한다.Among the external stimulating factors, UV is the largest melanin biosynthetic stimulus, and may affect various processes related to melanin production. That is, ultraviolet rays act as an important factor inducing melanin overproduction by promoting the activity of melanocytes, melanocytes, melanin biosynthesis stimulating hormone secretion, melanin oxidation, or tyrosinase activity.

이러한 멜라닌 생성 메카니즘의 가장 큰 특징은 티로시나아제라는 단 한 개의 효소가 관여한다는 것으로, 상기 티로시아나제 활성을 억제하여 멜라닌 생성을 방지하게 되면 미백 효과를 기대할 수 있다.The most distinctive feature of the melanin production mechanism is that only one enzyme called tyrosinase is involved. When the tyrosinase activity is inhibited to prevent melanin production, a whitening effect can be expected.

한편, 미백 화장료에 있어 멜라닌 생성을 억제하는 방법은 크게 다음과 같이 나눌 수 있다. On the other hand, the method of suppressing melanin production in the whitening cosmetics can be largely divided as follows.

첫째, 멜라닌 생성의 주 원인인 자외선을 차단하여 멜라닌 생성을 억제하는 것으로써, 이 방법은 화장품 조성물에 광 산란제 또는 광 차단제를 함유시켜 좋은 결과를 기대할 수 있다. 둘째, 티로시나아제의 활성에 필요한 코어 탄수화물의 합성을 저해하는 물질, 예컨대, 글루코사민을 사용하여 멜라닌 생성을 억제시키는 것이다. 셋째, 효소산 (코직산) 또는 알부틴과 같은 물질을 사용하여 멜라닌 생성에 관여하는 티로시나아제의 활성을 저해하는 방법이다. 넷째, 멜라닌을 생성하는 세포인 멜라노사이트에 대하여 특이적인 독성을 가지고 있는 물질, 예컨대, 하이드로퀴논을 사용하여 멜라노사이트의 세포 분열을 방해하는 방법이다. 다섯째, 티로신이 도파와 도파크롬을 거쳐 복잡한 산화와 축합 반응을 거치는 동안에 강한 항산화 효과를 발휘하는 물질, 예컨대, 비타민 C를 사용하여 멜라닌 생성을 저해하는 방법이다.First, by inhibiting the melanin production by blocking the ultraviolet rays which is the main cause of melanin production, this method can be expected to contain a light scattering agent or a light blocker in the cosmetic composition, a good result can be expected. Second, a substance that inhibits the synthesis of core carbohydrates required for the activity of tyrosinase, such as glucosamine, is used to inhibit melanin production. Third, a method of inhibiting the activity of tyrosinase involved in melanogenesis using a substance such as enzyme acid (kojic acid) or arbutin. Fourth, a method of preventing cell division of melanocytes by using a substance having specific toxicity to melanocytes, which are cells producing melanin, such as hydroquinone. Fifth, it is a method of inhibiting melanin production using a substance exhibiting a strong antioxidant effect, such as vitamin C, during tyrosine undergoing complex oxidation and condensation reaction through dopa and dopachrome.

종래 기술 중에는 미백 물질로서 아스코르브산을 사용하는 것이 알려져 있다 (일본특개 평 4-9320 호). 그러나 아스코르브산은 제형 내에서 상 안정성이 나빠 시간이 경과하면서 그 유효 성분의 활성도가 떨어지는 문제점이 있다. 따라서, 최근에는 캡슐 또는 리포좀으로 아스코르브산을 안정화시키는 등의 다양한 방법이 제기되고 있으나 아직 뚜렷한 안정화 방법을 제시하지 못하고 있다.In the prior art, it is known to use ascorbic acid as a whitening substance (Japanese Patent Laid-Open No. 4-9320). However, ascorbic acid is poor in phase stability in the formulation, there is a problem that the activity of the active ingredient is lowered over time. Therefore, in recent years, various methods such as stabilizing ascorbic acid with capsules or liposomes have been proposed, but have not yet provided a clear stabilization method.

다른 미백 물질로서 하이드로퀴논을 사용하는 것이 알려져 있다 (일본특개 평 6-192062 호). 하이드로퀴논은 그 효과가 우수하나 발암성 물질이므로 화장료로서의 사용에 제한을 받고 있다.It is known to use hydroquinone as another whitening substance (Japanese Patent Laid-Open No. 6-192062). Hydroquinone has an excellent effect but is limited to its use as a cosmetic since it is a carcinogenic substance.

또 다른 미백 물질로서 코직산을 사용하는 것이 알려져 있다 (일본특개 평 56-7710 호). 코직산은 티로시나아제의 저해 능력이 탁월하여 미백 효과가 우수하게 나타나지만 역시 제형 내 안전성 측면에서 문제점이 있으며 최근 발암 물질로 발표된 바 있다.It is known to use kojic acid as another whitening substance (Japanese Patent Laid-Open No. 56-7710). Kojic acid has an excellent inhibitory ability of tyrosinase and thus shows an excellent whitening effect, but also has a problem in terms of safety in the formulation and has recently been announced as a carcinogen.

또 다른 미백 물질로 알부틴을 사용하는 것이 알려져 있다 (일본특개평 4-9315 호). 알부틴은 고산 지대의 월귤 나무에서 추출하거나 합성을 통하여 얻을 수 있으며 코직산과 마찬가지로 티로시나아제에 대한 억제 능력이 검증되고 있다. 하지만, 알부틴 자체는 하이드로퀴논에 당이 붙어있는 상태로서 화장료에 적용 시 피부 효소에 의해 당이 분리되어 하이드로퀴논에 의한 피부 자극이 유발되는 문제점이 있다.It is known to use arbutin as another whitening substance (Japanese Patent Laid-Open No. 4-9315). Arbutin can be extracted or synthesized from alpine bilberry and its ability to inhibit tyrosinase, like kojic acid, has been demonstrated. However, arbutin itself has a problem in that the sugar is attached to the hydroquinone, and when applied to the cosmetic, the sugar is separated by the skin enzyme to cause skin irritation by the hydroquinone.

본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 특허 문헌 및 논문이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 특허 문헌 및 논문의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.Throughout this specification, numerous patent documents and articles are referenced and their citations are indicated. The disclosures of cited patent documents and articles are incorporated herein by reference in their entirety, so that the level of the technical field to which the present invention belongs and the contents of the present invention are more clearly explained.

본 발명자들은 종래 피부 미백용 화장료 조성물의 문제점, 즉, 안정성의 저하, 부작용의 발생 및 미백효과의 약화 등의 문제점을 극복하기 위하여, 해양조류에 기생하는 미생물을 대상으로 미백효과를 지닌 물질을 생산하는 미생물을 스크리닝을 한 결과, 미로테슘 베루카리아을 선별해 내고 특히, 미로테슘 베루카리아의 배양액이 우수한 티로시나아제 활성 억제 효과 및 멜라노사이트의 멜라닌 생성을 저해 효과를 나타내며, 피부자극이 없는 것을 확인하여 본 발명을 완성하게 되었다.The present inventors produce a material having a whitening effect on the microorganisms parasitic in marine algae in order to overcome the problems of conventional cosmetic composition for skin whitening, that is, lowering stability, side effects and weakening of the whitening effect, etc. As a result of screening the microorganisms to be screened, it is possible to screen out the myrcium berucaria , and in particular, the culture solution of the myrothesis berucaria shows an excellent inhibitory effect on tyrosinase activity and melanin production of melanocytes. It was confirmed that the present invention was completed.

따라서, 본 발명의 목적은 미로테슘 베루카리아의 배양액을 유효성분으로 포함하는 티로시나아제 활성 억제용 조성물을 제공하는 데 있다.Accordingly, it is an object of the present invention to provide a composition for inhibiting tyrosinase activity comprising a culture solution of myrcium berucaria as an active ingredient.

본 발명의 다른 목적은 미로테슘 베루카리아의 배양액을 유효성분으로 포함하는 멜라노사이트의 멜라닌 생성 저해용 조성물을 제공하는 데 있다.Another object of the present invention is to provide a composition for inhibiting melanin production of melanocytes comprising a culture solution of myrcium berucaria as an active ingredient.

본 발명의 또 다른 목적은 미로테슘 베루카리아의 배양액을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.Still another object of the present invention is to provide a cosmetic composition for skin whitening comprising a culture solution of myrcium berucaria as an active ingredient.

본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 실시예 및 청구범위 의해 명확하게 된다. Other objects and advantages of the invention will be apparent from the following examples and claims.

본 발명의 일 양태에 의하면, 본 발명은 미로테슘 베루카리아의 배양액을 유효성분으로 포함하는 티로시나아제 활성 억제용 조성물을 제공한다.According to one aspect of the present invention, the present invention provides a composition for inhibiting tyrosinase activity, comprising a culture solution of myrcium berucaria as an active ingredient.

본 발명의 다른 일 양태에 의하면, 본 발명은 미로테슘 베루카리아의 배양액을 유효성분으로 포함하는 멜라노사이트의 멜라닌 생성 저해용 조성물을 제공한다.According to another aspect of the present invention, the present invention provides a composition for inhibiting melanin production of melanocytes comprising a culture solution of myrcium berucaria as an active ingredient.

본 발명은 미백 성분으로 미로테슘 베루카리아의 배양액을 포함하는 것을 특징으로 한다.The present invention is characterized in that it comprises a culture solution of myrcium berucaria as a whitening component.

본 발명에서 사용되는 미로테슘 베루카리아는 KCCM 32013 및 ATCC 9095에 등록되어 있는 균류로서 주로 토양에 존재한다. 상기 균류는 셀룰라아제 (Formation of cellulase and degradation of cellulose by several fungi. J.Ferment. Technol. 56:273-278 (1978)) 및 엔도-1,4-베타-시아나아제 (Physicochemical and catalytiic properties of a low-molecular-weight endo-1,4-D-xylanase from Myrothecium verrucaria. Enzyme Microbs.Fed.Test Method Std.191A) 등 다양한 효소의 생산에 이용되는 것이 알려져 있다. Mirosium berucaria used in the present invention is a fungus registered in KCCM 32013 and ATCC 9095 and is mainly present in soil. The fungus is formed of cellulase (Formation of cellulase and degradation of cellulose by several fungi. J. Ferment. Technol . 56: 273-278 (1978)) and endo-1,4-beta-cyanase (Physicochemical and catalytiic properties of a Low-molecular-weight endo-1,4-D-xylanase from Myrothecium verrucaria.Enzyme Microbs.Fed.Test Method Std. 191A).

본 발명에서 사용되는 미로테슘 베루카리아는 토양 또는 해조류에서 분리하여 사용할 수 있으며, 또한 KCCM (32013) 및 ATCC (9095)으로부터 입수하여 사용할 수 있다. Mirosium berucaria used in the present invention can be used separately from soil or algae, and can also be obtained from KCCM (32013) and ATCC (9095).

본 발명의 조성물에 사용되는 미로테슘 베루카리아의 배양액은 상기 미로테슘 베루카리아를 배양한 후 균류를 제거하고 남은 배양액이다.The culture medium of the myrcium berucaria used in the composition of the present invention is a culture solution after removing the fungus after culturing the myrothesis berucaria .

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명에서 미로테슘 베루카리아를 배양하는 데 사용되는 배지는 균류를 배양하는데 사용되는 통상적인 배지가 사용될 수 있으며, 바람직하게는 YPM 배지 (이스트 추출물 0.2%, 펩톤 0.2%, 만니톨 0.4% 및 바닷물 99.2%) 또는 SWS 배지 (용해성 전분 1.0%, 소이톤 0.1% 및 바닷물 98.9%)이다. 본 발명의 조성물에 함유되는 미로테슘 베루카리아의 배양액을 제조하는 데 사용되는 보다 바람직한 배지는 SWS 배지이다.According to a preferred embodiment of the present invention, the medium used for culturing myrcium berucaria in the present invention may be a conventional medium used for culturing fungi, preferably YPM medium (yeast extract 0.2%, Peptone 0.2%, mannitol 0.4% and seawater 99.2%) or SWS medium (1.0% soluble starch, 0.1% soyton and 98.9% seawater). A more preferred medium used to prepare a culture solution of myrcium berucaria contained in the composition of the present invention is SWS medium.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명에서 미로테슘 베루카리아를 배양하는 조건은 상기 균류를 배양하는데 사용되는 통상적인 배양 조건을 사용할 수 있고 바람직하게는 24-36℃ 및 습도 30-80%이며, 보다 바람직하게는 28-29℃ 및 습도 50-60%이다.According to a preferred embodiment of the present invention, the conditions for culturing myrcium berucaria in the present invention can use the conventional culture conditions used to culture the fungus, preferably 24-36 ℃ and humidity 30-80% More preferably 28-29 ° C. and humidity 50-60%.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명에서 균류를 배양액으로부터 분리하는 방법은 통상적인 분리방법이 사용될 수 있으며, 바람직하게는 여과 또는 원심분리 등에 의하며, 보다 바람직하게는 여과에 의한다. 상기 여과를 위하여 통상적인 여과용 필터를 사용할 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, the method for separating fungus from the culture medium in the present invention may be used a conventional separation method, preferably by filtration or centrifugation, etc., more preferably by filtration. Conventional filtration filters may be used for the filtration.

본 발명의 하기 실시예를 참조하여 미로테슘 베루카리아의 배양액의 제조방법을 설명하면 다음과 같다: 해조류, 바람직하게는 납작파래 (Enteromorpha compressa)를 멸균한 고체배지 상에서 계대배양하여 균류 미로테슘 베루카리아를 분리한다. 분리한 미로테슘 베루카리아를 YPM 배지에서 수 일간 적정 온도 및 습도에서 배양한 후 이것을 SWS 배지에서 상기와 같은 조건 하에 수 주간 배양한다. 필터로 상기 배양액을 여과하여 균사체를 분리한다.When referring to the following Examples of the present invention a manufacturing method of the maze potassium chopping Luca Liao culture medium of the following: algae, preferably a flat laver (Enteromorpha compressa) a sterile fungus maze by subculturing on solid media potassium Vespa Separate Lucaria . The isolated myrcium berucaria is incubated in YPM medium for several days at an appropriate temperature and humidity and then incubated for several weeks under the same conditions in SWS medium. The culture is filtered with a filter to separate the mycelium.

본 발명은 미로테슘 베루카리아을 배양한 배양액을 피부 미백 성분으로 사용하는 것에 특징이 있으며, 본 발명의 미로테슘 베루카리아의 배양액은 티로시나아제의 활성을 억제함으로써 티로신으로부터 멜라닌이 생성되는 것을 저해하고, 멜라닌 생성 과정의 중간단계인 L-도파로부터 도파퀴논이 생성되는 것을 억제할 뿐만 아니라 멜라노사이트의 멜라닌 생성을 저해하는 효과가 있다.The present invention is characterized in that the culture medium of the myrcium berucaria is used as a skin whitening component, and the culture solution of the myrosium berucaria of the present invention inhibits the activity of tyrosinase, thereby producing melanin from tyrosine. It inhibits the production of dopaquinone from L-dopa, which is an intermediate step of the melanin production process, and also inhibits melanin production of melanocytes.

본 발명의 조성물은 티로시나아제 활성을 저해하거나 또는 멜라노사이트의 멜라닌 생성을 저해할 수 있는 유효량의 미로테슘 베루카리아의 배양액을 포함한다. 본 발명의 조성물 중 미로테슘 베루카리아의 배양액의 함량은 조성물의 총 중량기준으로 0.001-15.0 중량%, 바람직하게 1.0-15.0 중량%, 보다 바람직하게 5.0-10.0 중량%, 가장 바람직하게는 7 중량%이다. 미로테슘 베루카리아의 배양액의 함량이 0.001 중량% 미만일 경우에는 티로시나아제 활성 억제 및 멜라노사이트의 멜라닌 생성을 저해를 통한 미백효과의 개선이 다소 미흡한 문제점이 있고, 15 중량%를 초과할 경우에는 함유량 증가에 따른 뚜렷한 미백효과의 증가가 보이지 않는 문제점이 있다.The composition of the present invention comprises a culture of an effective amount of myrcium berucara that can inhibit tyrosinase activity or inhibit melanin production of melanocytes. The content of the culture medium of the maze potassium chopping Luca Ria in a composition of the invention is 0.001-15.0% by weight based on the total weight of the composition, preferably 1.0-15.0% by weight, more preferably 5.0-10.0 wt%, most preferably 7 wt. %to be. If the content of the culture medium of myrcium berucaria is less than 0.001% by weight, there is a problem that the improvement of the whitening effect through inhibition of tyrosinase activity and inhibition of melanin production of melanocytes is slightly insufficient. There is a problem that the apparent increase in whitening effect is not seen as the content is increased.

본 발명의 다른 양태에 의하면, 본 발명은 미로테슘 베루카리아의 배양액을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.According to another aspect of the present invention, the present invention provides a cosmetic composition for skin whitening comprising a culture solution of myrcium berucaria as an active ingredient.

본 발명의 화장료 조성물은 상술한 미로테슘 베루카리아의 배양액을 유효성분으로 포함하기 때문에, 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여, 중복된 내용은 그 기재를 생략한다Since the cosmetic composition of the present invention includes the above-mentioned culture medium of the myrcium berucaria as an active ingredient, in order to avoid excessive complexity of the present specification, duplicated descriptions are omitted.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서의 미로테슘 베루카리아의 배양액 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들, 예를 들어 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체 등이 포함될 수 있다.The components included in the cosmetic composition of the present invention are components commonly used in cosmetic compositions in addition to the culture solution of myrcium berucaria as the active ingredient, such as antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments and flavorings. Conventional adjuvants, and carriers and the like.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다. 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 수렴 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.The cosmetic composition of the present invention may be prepared in any formulation commonly prepared in the art. For example, it may be formulated as a solution, suspension, emulsion, paste, gel, cream, lotion, powder, soap, surfactant-containing cleansing, oil, powder foundation, emulsion foundation, wax foundation, spray, and the like. More specifically, it may be prepared in the form of a flexible lotion, astringent lotion, nutrition lotion, nutrition cream, massage cream, essence, eye cream, cleansing cream, cleansing foam, cleansing water, pack, spray or powder.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a paste, cream or gel, animal oils, vegetable oils, waxes, paraffins, starches, trachants, cellulose derivatives, polyethylene glycols, silicones, bentonites, silicas, talc or zinc oxide may be used as carrier components. Can be.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 포함할 수 있다.When the formulation of the present invention is a powder or a spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used, in particular in the case of a spray, additionally chlorofluorohydrocarbon, propane Propellant such as butane or dimethyl ether.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용될 수 있다. 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a solution or emulsion, a solvent, solubilizer or emulsion may be used as the carrier component. For example, water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1,3-butylglycol oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol or fatty acid ester of sorbitan and the like can be used.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a suspension, liquid carrier diluents such as water, ethanol or propylene glycol, suspending agents such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, microcrystals Soluble cellulose, aluminum metahydroxy, bentonite, agar or tracant and the like can be used.

본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클린싱인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a surfactant-containing cleansing, the carrier component is an aliphatic alcohol sulfate, an aliphatic alcohol ether sulfate, a sulfosuccinic acid monoester, isethionate, an imidazolinium derivative, a methyltaurate, a sarcosinate, a fatty acid amide ether. Sulfates, alkylamidobetaines, aliphatic alcohols, fatty acid glycerides, fatty acid diethanolamides, vegetable oils, lanolin derivatives or ethoxylated glycerol fatty acid esters and the like can be used.

본 발명의 미로테슘 베루카리아의 배양액을 포함하는 화장료 조성물은 티로시나아제의 활성 억제 및 멜라노사이트의 멜라닌 생성 억제를 통하여 우수한 피부 미백효과를 나타내며, 피부에 대한 자극이 낮으므로 뛰어난 피부 안전성을 갖는다.The cosmetic composition comprising the culture solution of myrosium berucaria of the present invention exhibits excellent skin whitening effect through the inhibition of tyrosinase activity and the inhibition of melanin production of melanocytes, and has excellent skin safety because of low skin irritation. .

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. These examples are only for illustrating the present invention in more detail, and the scope of the present invention is not limited by these examples in accordance with the gist of the present invention to those skilled in the art. Will be self-evident.

실시예Example

재료material

하기 예에서 사용된 미로테슘 베루카리아는 아래와 같은 방법으로 선별하였다. Mirothesis berucaria used in the following example was selected by the following method.

부산 백운포에서 채집한 납작파래 (Enteromorpha compressa)를 120℃에서 15분간 멸균한 YPG+Agar 고체배지 (이스트 추출물 0.5%, 펩톤 0.5%, 글루코스 1.0%, 아가 1.6%, 페니실리움 0.1% 및 바닷물 96.3%) 상에서 3회 계대배양하여 균류 미로테슘 베루카리아를 분리하였다.YPG + Agar solid medium (Yeast extract 0.5%, peptone 0.5%, glucose 1.0%, agar 1.6%, penicillium 0.1% and seawater) sterilized with Enteromorpha compressa collected from Busan Baekpo for 15 minutes at 120 ℃ 96.3%) was passaged three times to isolate the fungus myrcium berucaria .

분리한 미로테슘 베루카리아를 10 ㎖ YPM 배지 (이스트 추출물 0.2%, 펩톤 0.2%, 만니톨 0.4%, 바닷물 99.2%)에서 5일간 온도 28-29℃, 습도 50-60% 조건에서 배양하였다. 이것을 250 ㎖ SWS 배지 (용해성 전분 1.0%, 소이톤 0.1% 및 바닷물 98.9%)에 접종하고 상기와 같은 조건 하에 4주간 배양하였다.The isolated myrcium berucaria was incubated in 10 ml of YPM medium (0.2% yeast extract, 0.2% peptone, 0.4% mannitol, 99.2% seawater) for 5 days at a temperature of 28-29 ° C. and a humidity of 50-60%. It was inoculated in 250 ml SWS medium (1.0% soluble starch, 0.1% soyton and 98.9% seawater) and incubated for 4 weeks under the same conditions as above.

가제로 상기 배양액을 여과하고 다시 0.45 ㎛ 필터로 여과하여 균사체를 분리낸 후 그 여액, 즉 미로테슘 베루카리아의 배양액을 화장료 조성물에 사용하였다.The culture solution was filtered with a gauze and filtered again with a 0.45 μm filter to separate the mycelium, and then the filtrate, that is , a culture solution of myrcium berucaria, was used in the cosmetic composition.

실험예 1: Experimental Example 1: 미로테슘 베루카리아Mirotesium Berukaria 의 배양액의 티로시나아제 활성 저해 실험Inhibition of Tyrosinase Activity in Culture Medium

기질로는 인산 나트륨 완충액 (pH 6.8)에 용해한 1.5 mmol/ℓ의 티로신 (시그마사, 미합중국) 40 ㎕를 사용하였다. 미로테슘 베루카리아의 배양액을 0.05 M 인산나트륨 완충용액 (pH 6.8)으로 희석하여 농도별로 시료액을 제조하였다. 티로신 40 ㎕에 상기 농도별 시료액 240 ㎕을 각각 첨가하고, 상기 용액에 티로시나아제 (시그마사, 1500 U/㎖) 20 ㎕을 첨가한 후 37℃에서 15분 동안 반응시킨 다음, 490 nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군으로는 미로테슘 베루카리아의 배양액을 첨가하지 않은 것을 사용하였다. 미로테슘 베루카리아의 배양에 사용된 배지의 영향을 확인하기 위하여 미로테슘 베루카리아의 배양용 배지를 사용하여 상기와 동일한 실험을 실시하였다. 수학식 1에 의하여 티로시나아에 활성 저해도를 계산하였다. 그 결과는 표 1에 나타나있다.40 μl of 1.5 mmol / L tyrosine (Sigma, USA) dissolved in sodium phosphate buffer (pH 6.8) was used as the substrate. A culture solution of myrcium berucaria was diluted with 0.05 M sodium phosphate buffer (pH 6.8) to prepare a sample solution for each concentration. 240 μl of the sample solution for each concentration was added to 40 μl of tyrosine, and 20 μl of tyrosinase (Sigma, 1500 U / ml) was added to the solution, followed by reaction at 37 ° C. for 15 minutes, and then at 490 nm. Absorbance was measured. As a control, one without addition of a culture solution of myrcium berucaria was used. In order to confirm the influence of the medium used for the cultivation of myrcium berucaria, the same experiment was conducted using the medium for the culture of myrcium berucaria . Inhibitory activity of tyrosinah was calculated by Equation 1. The results are shown in Table 1.

저해도(%)=[1- 비교군 흡광도(O.D.490)/대조군 흡광도(O.D.490)] ×100% Inhibition = [1-absorbance of comparative group (O.D.490) / control absorbance (O.D.490)] × 100

미로테슘 베루카리아의 배양액의 농도(%)Concentration (%) of Mirothesis Berukaria 저해도(%)% Inhibition 미로테슘 베루카리아의 배양용 배지의 농도(%)Concentration (%) of cultivation medium of Mirotesium berucaria 저해도(%)% Inhibition 0.00.0 00 0.00.0 00 0.10.1 19.819.8 0.10.1 00 0.20.2 40.140.1 0.20.2 00 0.80.8 76.776.7 0.80.8 00 2.02.0 88.888.8 2.02.0 00 5.05.0 92.892.8 5.05.0 00

상기 표 1에서 알 수 있는 바와 같이, 미로테슘 베루카리아의 배양액은 탁월한 티로시나아제 활성 저해 효과를 나타내었으며 저해도는 미로테슘 베루카리아의 배양액 농도에 의존적으로 증가하였다. 따라서, 본 발명의 미로테슘 베루카리아의 배양액을 함유하는 조성물은 우수한 티로시나아제 활성 저해 효과를 나타냄을 알 수 있었으며 미로테슘 베루카리아의 배양액의 상기 효과는 종래의 미백제인 상지 추출물에 비하여 보다 우수한 것이었다.As can be seen in Table 1 , the culture medium of myrcium berucaria showed an excellent inhibitory effect on tyrosinase activity, and the inhibition was increased depending on the culture solution concentration of myrothesis berucaria . Therefore, it can be seen that the composition containing the culture solution of myrcium berucaria of the present invention exhibits an excellent inhibitory effect on tyrosinase activity, and the effect of the culture solution of myrosium berucaria is higher than that of the conventional whitening agent, the upper limb extract. It was excellent.

또한, 미로테슘 베루카리아를 배양하는 데 사용된 배지는 티로시나아제 저해 활성을 나타내지 않았으므로 상기 효과는 배양용 배지의 구성 성분에 의한 것이 아니라는 것을 알 수 있었다.In addition, since the medium used for culturing myrcium berucaria did not show tyrosinase inhibitory activity, it was found that the effect was not due to the components of the culture medium.

실험예 2: Experimental Example 2: 미로테슘 베루카리아Mirotesium Berukaria 의 배양액의 멜라닌 생성 저해 실험 (멜라닌 분석법)Melanin production inhibitory experiments in culture medium (Melanin assay)

B-16 세포 (쥐 멜라노마 세포, 한국세포주은행)를 12-웰 플레이트 (well plate)에 104 cell/well이 되도록 접종한 후에 하루 동안 배양하였다. 각 웰에 농도 별로 미로테슘 베루카리아의 배양액을 처리하고 3-4일 동안 배양한 후 각 웰의 배양액을 원심분리하였다. 분리된 세포는 디메틸설폭사이드 (DMSO)에 용해한 1N NaOH 용액 500 ㎕로 용해하여 10분간 90℃ 수욕 (water bath)에서 가열하였다. 이를 다시 원심분리하고 570 ㎚에서 상등액의 흡광도를 측정하였다. 대조군으로는 미로테슘 베루카리아의 배양액을 처리하지 않은 것을 사용하였다. 미로테슘 베루카리아의 배양에 사용된 배지의 영향을 확인하기 위하여 미로테슘 베루카리아 의 배양용 배지를 사용하여 상기와 동일한 실험을 실시하였다.B-16 cells (rat melanoma cells, Korea Cell Line Bank) were seeded in 12-well plates to 10 4 cells / well and cultured for one day. Each well was treated with a culture solution of myrcium berucaria by concentration and incubated for 3-4 days, and the culture solution of each well was centrifuged. The isolated cells were lysed with 500 μl of 1N NaOH solution dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO) and heated in a 90 ° C. water bath for 10 minutes. It was centrifuged again and the absorbance of the supernatant was measured at 570 nm. As a control, one that was not treated with a culture solution of myrcium berucaria was used. In order to confirm the influence of the medium used for the cultivation of myrcium berucaria, the same experiment was conducted using the medium for the culture of myrcium berucaria .

멜라닌 생성 저해도는 하기 수학식 2에 따라 계산하였으며, 그 결과는 표 2에 나타나 있다.Melanin production inhibition was calculated according to the following equation (2), the results are shown in Table 2.

저해도(%)=[1- 비교군흡광도(O.D.490)/대조군흡광도(O.D.490)] ×100% Inhibition = [1-absorbance of comparative group (O.D.490) / control absorbance (O.D.490)] × 100

미로테슘 베루카리아의 배양액의 농도(%)Concentration (%) of Mirothesis Berukaria 저해도(%)% Inhibition 미로테슘 베루카리아의 배양용 배지의 농도(%)Concentration (%) of cultivation medium of Mirotesium berucaria 저해도(%)  % Inhibition 00 0.00.0 0.00.0 0.00.0 0.10.1 19.819.8 0.10.1 0.00.0 0.20.2 40.140.1 0.20.2 0.00.0 0.40.4 60.160.1 0.40.4 0.00.0 0.80.8 76.776.7 0.80.8 0.00.0 2.02.0 88.888.8 2.02.0 0.00.0 5.05.0 92.892.8 5.05.0 0.00.0

상기 표 2에 나타난 바와 같이, 미로테슘 베루카리아의 배양액은 멜라노마 세포의 멜라닌 생성 저해에 우수한 효과가 있었으며, 상기 멜라닌 생성 저해도는 미로테슘 베루카리아의 배양액 농도에 의존적으로 증가하였다. 따라서, 본 발명의 미로테슘 베루카리아의 배양액을 포함하는 조성물은 멜라닌 생성 억제에 우수한 효과가 있음을 알 수 있다.As shown in Table 2, the culture medium of the maze potassium chopping Luca Ria has had an excellent effect on melanogenesis inhibition of melanoma cells, and the melanin synthesis inhibition is increased dependent on the concentration of the culture medium maze potassium chopping Luca Liao. Therefore, it can be seen that the composition comprising the culture solution of the myrcium berucaria of the present invention has an excellent effect on inhibiting melanogenesis.

또한, 미로테슘 베루카리아를 배양하는 데 사용된 배지는 멜라닌 생성 저해 활성을 나타내지 않았으므로 상기 효과는 배양용 배지의 구성 성분에 의한 것이 아니라는 것을 알 수 있었다.In addition, since the medium used for culturing myrcium berucaria did not show melanin production inhibitory activity, it was found that the effect was not due to the components of the culture medium.

실험예 3: Experimental Example 3: 미로테슘 베루카리아Mirotesium Berukaria 의 배양액의 L-도파 산화 저해 실험Inhibition of L-dopa Oxidation in Culture Media

미리 37℃로 10분 동안 유지시켜 놓은 pH 7.5인 50 mM Tris-HCl 완충용액 850 ㎕을 1 ㎖ EP 튜브에 넣고, 머쉬룸 티로시나아제 (시그마사,미합중국, 18 units) 및 시험액인 미로테슘 베루카리아의 배양액을 농도에 맞춰 50 ㎕ 첨가하였다. 이 용액을 37℃에서 2분간 방치한 후, 15 mM L-도파 (시그마사, 미합중국)를 사용하기 바로 전에 제조하여 50 ㎕를 첨가하였다. 첨가 즉시 엘라이자 리더 (ELISA reader)를 이용하여 475 nm에서 1분간 흡광도 변화를 측정하였다. 이는 L-도파가 티로시나아제에 의해 갈색 생성물인 도파크롬으로 변환하는 것을 측정하는 것이다. 대조군으로는 미로테슘 베루카리아의 배양액을 첨가하지 않은 것을 사용하였다. 미로테슘 베루카리아의 배양에 사용된 배지의 영향을 확인하기 위하여 미로테슘 베루카리아의 배양용 배지를 사용하여 상기와 동일한 실험을 실시하였다. 저해도는 하기 수학식 3에 따라 계산되었고, 그 결과는 표 3에 나타나 있다.850 μl of 50 mM Tris-HCl buffer, pH 7.5, previously maintained at 37 ° C. for 10 minutes, was placed in a 1 ml EP tube, and the mushroom tyrosinase (Sigma, United States, 18 units) and the test solution, myrosium beruka. to match the culture medium of the RIA it was added to a concentration 50 ㎕. This solution was left at 37 ° C. for 2 minutes and prepared immediately before using 15 mM L-dopa (Sigma, USA) and 50 μl was added. Immediately after addition, the absorbance change was measured for 1 minute at 475 nm using an ELISA reader. This measures the conversion of L-dopa to dopachrome, a brown product, by tyrosinase. As a control, one without addition of a culture solution of myrcium berucaria was used. In order to confirm the influence of the medium used for the cultivation of myrcium berucaria, the same experiment was conducted using the medium for the culture of myrcium berucaria . Inhibition was calculated according to the following equation (3), the results are shown in Table 3.

저해도(%)=[1 - 비교군흡광도(O.D.475)/대조군흡광도(O.D.475)] ×100% Inhibition = [1-control absorbance (O.D.475) / control absorbance (O.D.475)] × 100

미로테슘 베루카리아 배양액의 농도(%)% Concentration of myrcium berukaria broth 저해도(%)% Inhibition 미로테슘 베루카리아의 배양용 배지의 농도(%)Concentration (%) of cultivation medium of Mirotesium berucaria 저해도(%)% Inhibition 00 00 0.00.0 0.00.0 1One 49.849.8 1.01.0 0.00.0 2.52.5 56.856.8 2.52.5 0.00.0 55 68.868.8 5.05.0 0.00.0 7.57.5 69.869.8 7.57.5 0.00.0 1010 74.574.5 10.010.0 0.00.0

상기 표 3에서 알 수 있는 바와 같이, 미로테슘 베루카리아의 배양액은 탁월한 L-도파 산화 저해 효과를 나타내었으며 저해도는 미로테슘 베루카리아의 배양액 농도에 의존적으로 증가하였다. 따라서, 본 발명의 미로테슘 베루카리아의 배양액을 함유하는 조성물은 L-도파가 티로시나아제에 의해 도파크롬으로 변환하는 것을 억제하는 데 우수한 효과를 나타냄을 알 수 있었다.As can be seen in Table 3 , the culture medium of myrcium berucaria showed an excellent L-dopa oxidation inhibitory effect and the inhibition was increased depending on the concentration of the culture medium of myrcium berucaria . Therefore, it was found that the composition containing the culture solution of myrcium berucaria of the present invention showed an excellent effect in inhibiting L-dopa from being converted into dopachrome by tyrosinase.

또한, 미로테슘 베루카리아를 배양하는 데 사용된 배지는 L-도파 산화 저해효과를 나타내지 않았으므로 상기 효과는 배양용 배지의 구성 성분에 의한 것이 아니라는 것을 알 수 있었다.In addition, since the medium used for culturing myrcium berucaria did not show L-dopa oxidation inhibitory effect, it was found that the effect was not due to the components of the culture medium.

실험예 4: Experimental Example 4: 미로테슘 베루카리아Mirotesium Berukaria 의 배양액의 세포독성 실험 (MTT 분석법)Cytotoxicity Tests of Cultures (MTT Assay)

메틸트리아졸릴테트라졸륨 (MTT) 분석법을 통하여 미로테슘 베루카리아의 배양액의 독성여부를 확인하였다.Methyltriazolyltetrazolium (MTT) analysis confirmed the toxicity of the culture medium of myrcium berucaria .

섬유아세포 (한국세포주은행)를 96-웰 플레이트에 8000 cells/well로 접종하고, 200 ㎕의 DMEM (Dulbecco Minimum Essential Medium)에서 24 시간 동안 배양하였다. 웰에 미로테슘 베루카리아의 배양액이 최종 농도 0, 0.2, 0.8, 1.5, 3.0 및 5.0 ㎍/㎖로 각각 넣고 20 시간 동안 두었다. 웰의 혼합액은 0.5 ㎎/㎖ MTT 용액을 포함한 배지에서 4 시간 둔 후, 배지를 제거하고 200 ㎕의 DMSO 용액을 웰에 넣어 반응시켰다. 웰의 반응액은 엘라이자 리더를 사용하여 570 ㎚에서 흡광도를 측정하였고, 세포증식율은 대조군 (미로테슘 베루카리아의 배양액 무처리군)을 100%로 두고, 하기 수학식 4에 따라 계산되었다. 그 결과는 표 3에 나타나있다.Fibroblasts (Korea Cell Line Bank) were seeded in 96-well plates at 8000 cells / well and incubated in 200 μl DMEM (Dulbecco Minimum Essential Medium) for 24 hours. The wells of myrcium berucaria were added to final concentrations of 0, 0.2, 0.8, 1.5, 3.0 and 5.0 μg / ml, respectively, and left for 20 hours. The mixed solution of the wells was left in a medium containing 0.5 mg / ml MTT solution for 4 hours, and then the medium was removed and 200 μl of DMSO solution was added to the wells for reaction. The reaction solution of the wells was measured for absorbance at 570 nm using an ELISA reader, and the cell proliferation rate was calculated according to the following Equation 4 with a control group (untreated group of myrcium berucaria ) at 100%. The results are shown in Table 3.

세포증식율 = (실험군의 흡광도/대조군의 흡광도) ×100 (%)Cell proliferation rate = (absorbance of experimental group / absorbance of control group) × 100 (%)

미로테슘 베루카리아의 배양액의 농도(%)Concentration (%) of Mirothesis Berukaria 세포증식율(%)Cell growth rate (%) 0.00.0 100.0100.0 1.51.5 104.2104.2 3.03.0 106.5106.5 8.08.0 106.8106.8 15.015.0 107.1107.1 20.020.0 105.6105.6

상기 표 4에서 보듯이, 미로테슘 베루카리아의 배양액은 상대적으로 고농도에서도 섬유아세포에 대하여 세포 독성을 나타내지 않았으며, 따라서, 미로테슘 베루카리아의 배양액은 세포 독성이 없음을 확인할 수 있었다.As shown in Table 4 , the culture medium of myrcium berucaria did not show cytotoxicity against fibroblasts even at relatively high concentrations, and thus, the culture solution of myrotes berucaria was not cytotoxic.

제형예 1: 유연 화장수Formulation Example 1 Flexible Lotion

하기 표 5의 조성으로 실시예 1 및 비교예 1의 유연 화장수를 제조하였다. To the flexible cosmetic lotion of Example 1 and Comparative Example 1 was prepared in the composition of Table 5.

성분ingredient 함량 (중량%)Content (% by weight) 실시예 1Example 1 비교예 1Comparative Example 1 미로테슘 베루카리아의 배양액초산 토코페롤올레일 알코올에탄올벤조페논-9카르복실비닐 폴리머셀룰로오스검향방부제정제수 Culture medium of myrcium berukaria acetic acid tocopherol oleyl alcohol ethanol benzophenone-9 carboxyvinyl polymer cellulose gum preservative 7.05.21.53.22.01.03.5미량미량잔량7.05.21.53.22.01.03.5 Minor balance -5.21.53.22.01.03.5미량미량잔량-5.21.53.22.01.03.5 system 100100 100100

제형예 2: 밀크 로션Formulation Example 2: Milk Lotion

하기 표 6의 조성으로 실시예 2 및 비교예 2의 밀크 로션을 제조하였다.To the milk lotion of Example 2 and Comparative Example 2 was prepared in the composition of Table 6.

성분ingredient 함량 (중량%)Content (% by weight) 실시예2Example 2 비교예2Comparative Example 2 미로테슘 베루카리아의 배양액글리세린프로필렌글리콜토코페릴 아세테이트유동파라핀트리에탄올아민스쿠알란마카다미아너트오일폴리솔베이트 60솔비탄세스퀴롤레이트프로필파라벤카르복실비닐 폴리머향방부제정제수 Labyrinth potassium chopping Luca Ria the culture medium of glycerin, propylene glycol Tocopheryl Acetate Liquid paraffin Squalane triethanolamine macadamia nut oil polysorbate 60 sorbitan process kwirol rate propylparaben carboxylic polymer attitude subtitle purified water 7.05.14.23.04.61.03.12.51.61.60.61.5미량미량잔량7.05.14.23.04.61.03.12.51.61.60.61.5 Microbalance -5.14.23.04.61.03.12.51.61.60.61.5미량미량잔량-5.14.23.04.61.03.12.51.61.60.61.5 Microbalance system 100100 100100

제형예 3: 영양 크림Formulation Example 3: Nutrition Cream

하기 표 7의 조성으로 실시예 3 및 비교예 3의 영양 크림을 제조하였다.To the nutrition cream of Example 3 and Comparative Example 3 was prepared in the composition of Table 7.

성분ingredient 함량 (중량%)Content (% by weight) 실시예3Example 3 비교예3Comparative Example 3 미로테슘 베루카리아의 배양액글리세린바셀린트리에탄올아민유동파라핀스쿠알란밀납토코페릴 아세테이트폴리솔베이트 60카르복실비닐 폴리머솔비탄세스퀴올레이트향방부제정제수 Labyrinth potassium chopping culture glycerol vaseline Lucca Ria triethanolamine liquid paraffin, squalane wax tocopheryl acetate, polysorbate 60 carboxylic polymer sorbitan process kwiol rate attitude subtitle purified water 7.04.03.52.15.33.02.65.43.21.03.1미량미량잔량7.04.03.52.15.33.02.65.43.21.03.1 Microbalance -4.03.52.15.33.02.65.43.21.03.1미량미량잔량-4.03.52.15.33.02.65.43.21.03.1 Microbalance system 100100 100100

실험예 5: 화장료 조성물의 미백 효과 실험Experimental Example 5: Whitening effect experiment of the cosmetic composition

19-40세의 특히 피부가 검은 한국 여성 30명을 대상으로 본 발명의 화장료 조성물의 미백 효과 실험을 실시하였다. 측정 장비로는 Minolta CR 300을 사용하였으며 2주 간격으로 8주 동안 측정하였다. 측정 부위는 팔의 9 곳을 가로 세로 1 ㎝씩 표시한 후 꾸준히 각기 다른 처방 (실시예 2, 3 및 비교예 2, 3)을 8 곳에 바르고 한 곳은 비교를 위하여 대조군 값으로 두었다.A whitening effect test of the cosmetic composition of the present invention was carried out on 30 Korean women aged 19-40 years, especially those with dark skin. Minolta CR 300 was used as a measuring instrument and measured for 8 weeks at two-week intervals. The measurement site was marked with 1 cm by 9 cm on the arm and steadily applied different prescriptions (Examples 2, 3 and Comparative Examples 2, 3) to 8 places and one place was used as a control value for comparison.

상기 실험의 결과는 하기 표 8에 나타나있다. The results of this experiment are shown in Table 8 below.

구분division 실시예 2Example 2 실시예 3Example 3 비교예 2Comparative Example 2 비교예 3Comparative Example 3 대조군Control △L 값△ L value 2.722.72 2.502.50 0.500.50 1.001.00 0.000.00

상기 표 8에 나타난 바와 같이, 8주 후의 △L 값을 보면, 실시예 2 및 실시예 3이 비교예 2, 3 및 대조군에 비하여 월등히 높게 나타났다. 따라서, 본 발명의 화장료 조성물은 매우 우수한 미백 효과를 갖고 있음을 알 수 있다.As shown in Table 8, when the ΔL value after 8 weeks, Example 2 and Example 3 was significantly higher than Comparative Examples 2, 3 and the control group. Therefore, it can be seen that the cosmetic composition of the present invention has a very good whitening effect.

실험예 6: 화장료 조성물의 피부 자극성 시험Experimental Example 6: Skin irritation test of the cosmetic composition

건강한 성인 남·여 50명을 대상으로 상기 실시예 및 비교예에 따라 제조된 제품들의 피부 자극성을 실험을 실시하였다. 각 피검자들의 양팔 하박부에 5 ×20 ㎠로 각 시료 (실시예 1-3 및 비교예 1-3)의 일정량 (약 0.1 g)을 24시간 첩포한 후, 제거하고 1시간 및 24시간 경과 후 육안으로 피부 상태 변화를 판정하였으며, 또한 판정한 결과에 기초하여 하기 수학식 5에 따라 피부 자극율을 계산하였다. 그 결과는 표 9에 나타나있다.Skin irritation of the products prepared according to the above Examples and Comparative Examples was tested on 50 healthy adults male and female. After a certain amount (approximately 0.1 g) of each sample (Examples 1-3 and Comparative Examples 1-3) was applied to the lower hind arm of each subject at 5 × 20 cm 2 for 24 hours, and then removed for 1 hour and 24 hours. The skin condition change was visually determined, and the skin irritation rate was calculated according to the following Equation 5 based on the determined result. The results are shown in Table 9.

자극율 ={[(+-)수×1 + (+)수×2 + (++)수×3]/(전체피검자수×3)} ×100Stimulus rate = {[(+-) number × 1 + (+) number × 2 + (++) number × 3] / (total number of subjects × 3)} × 100

제형Formulation 판정 결과 (명)Judgment result (person) 자극율 (%)Stimulation rate (%) ++++ ++ +-+- -- 실시예 1Example 1 -- -- 55 4646 3.43.4 실시예 2Example 2 -- 1One 33 4646 3.43.4 실시예 3Example 3 -- -- 33 4747 2.02.0 비교예 1Comparative Example 1 -- -- 55 4545 3.43.4 비교예 2Comparative Example 2 -- 1One 33 4646 3.43.4 비교예 3Comparative Example 3 -- -- 44 4646 2.62.6 -: 홍반이나 특이한 현상 없음+-: 주위보다 약간 붉어짐+: 주위보다 현저히 붉어짐++: 주위보다 심하게 붉어지고 부풀음-: No erythema or unusual phenomena +-: Slightly redder than the surroundings +: Slightly redder than the surroundings ++: Severe reddening and swelling than the surroundings

상기 표 10에서 나타난 바와 같이, 본 발명의 실시예 1-3의 화장료 조성물은 비교예 1-3과 비교하여 거의 유사한 피부 자극도를 나타내어 미로테슘 베루카리아의 배양액이 피부에 자극을 거의 주지 않는 것을 알 수 있었다. 따라서, 본 발명의 화장료 조성물은 피부 자극이 적고 따라서, 피부 안전성이 우수함을 알 수 있었다.As shown in Table 10, the cosmetic composition of Example 1-3 of the present invention shows a nearly similar skin irritation compared to Comparative Example 1-3 , so that the culture solution of myrcium berucaria hardly irritates the skin. I could see that. Therefore, it was found that the cosmetic composition of the present invention has less skin irritation and, therefore, excellent skin safety.

이상에서 상세히 설명하였듯이, 본 발명은 미로테슘 베루카리아의 배양액을 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명의 미로테슘 베루카리아의 배양액은 종래의 미백 성분에 비하여 향상된 티로시나아제 활성 억제 효과 및 뛰어난 멜라노사이트의 멜라닌 생성 저해 효과가 있으며, 본 발명의 미로테슘 베루카리아의 배양액을 포함하는 화장료 조성물은 탁월한 피부 미백 효과를 나타낸다. 또한, 본 발명의 미로테슘 베루카리아의 배양액은 피부에 거의 자극을 주지 않는다.As described in detail above, the present invention provides a composition comprising a culture solution of myrcium berucaria . The culture solution of myrcium berucaria of the present invention has an improved inhibitory effect on tyrosinase activity and an excellent effect of inhibiting melanin production of melanocytes compared to the conventional whitening ingredients, and a cosmetic composition comprising the culture solution of myrosium berucaria of the present invention. The composition exhibits an excellent skin lightening effect. In addition, the culture solution of myrcium berucaria of the present invention hardly irritates the skin.

Claims (6)

미로테슘 베루카리아 (Myrothecium verrucaria)의 배양액을 유효성분으로 포함하는 티로시나아제 활성 억제용 조성물. Labyrinth potassium chopping Luca Ria tyrosinase activity inhibiting composition comprising the culture of (Myrothecium verrucaria) as an active ingredient. 미로테슘 베루카리아의 배양액을 유효성분으로 포함하는 멜라노사이트의 멜라닌 생성 저해용 조성물.Composition for inhibiting melanin production of melanocytes comprising a culture solution of myrcium berucaria as an active ingredient. 미로테슘 베루카리아의 배양액을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물.A cosmetic composition for skin whitening comprising a culture solution of mirotesium berucaria as an active ingredient. 제 3 항에 있어서, 상기 조성물은 티로시나아제 활성 및 멜라노사이트의 멜라닌 생성을 억제하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.The cosmetic composition for skin whitening according to claim 3, wherein the composition inhibits tyrosinase activity and melanin production of melanocytes. 제 3 항에 있어서, 상기 미로테슘 베루카리아의 배양액의 함량은 조성물의 총 중량에 대해서 0.001-15.0 중량%인 것을 특징으로 하는 조성물.The method of claim 3, wherein the content of the culture medium of the maze potassium chopping Luca Ria is a composition, characterized in that from 0.001 to 15.0 wt% based on the total weight of the composition. 제 3 항에 있어서, 상기 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.The group of claim 3 wherein the composition consists of a solution, suspension, emulsion, paste, gel, cream, lotion, powder, soap, surfactant-containing cleansing, oil, powder foundation, emulsion foundation, wax foundation and spray Cosmetic composition for skin whitening, characterized in that it has a formulation selected from.
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