KR100517879B1 - 신경 퇴행성 질환의 치료를 위한 제약학적 조성물 및 이들의 사용방법 - Google Patents

신경 퇴행성 질환의 치료를 위한 제약학적 조성물 및 이들의 사용방법 Download PDF

Info

Publication number
KR100517879B1
KR100517879B1 KR1019950706050A KR19950706050A KR100517879B1 KR 100517879 B1 KR100517879 B1 KR 100517879B1 KR 1019950706050 A KR1019950706050 A KR 1019950706050A KR 19950706050 A KR19950706050 A KR 19950706050A KR 100517879 B1 KR100517879 B1 KR 100517879B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
sequence
seq
nucleic acid
cells
dna
Prior art date
Application number
KR1019950706050A
Other languages
English (en)
Other versions
KR960703432A (ko
Inventor
말레 자끄
르바 후레데릭
자끄 로베르 장
Original Assignee
아방티 파르마 소시에테 아노님
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 아방티 파르마 소시에테 아노님 filed Critical 아방티 파르마 소시에테 아노님
Publication of KR960703432A publication Critical patent/KR960703432A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR100517879B1 publication Critical patent/KR100517879B1/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1135—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against oncogenes or tumor suppressor genes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/82—Translation products from oncogenes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C12N2310/111—Antisense spanning the whole gene, or a large part of it
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/13—Decoys

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

본 발명을 신경퇴생성 질환의 치료를 위한 제약학적 조성물의 제조를 위해 전사 인자의 활성에 영향을 미치는 화합물의 사용에 관한 것이다.

Description

신경퇴행성 질환의 치료를 위한 제약학적 조성물 및 이들의 사용방법
본 발명은 특히 신경퇴행성 질환의 치료를 위한 제약학적 조성물 및 이들의 용도에 관한 것이다. 이것은 보다 특별하게 신경퇴행성 질환의 치료를 위한 제약학적 조성물의 제조를 위해 SEQ ID 제 1 번 서열과 전사 인자 사이의 상호작용에 영향을 미치는 화합물을사용하는 것에 관한 것이다.
본 발명은 인자 AP1 이 뉴우런 변성의 전달인자를 구성하고, 이러한 복합제의 활성을 억제할 수 있는 화합물의 사용은 뉴우런이 사멸되는 과정을 차단시킬 수 있음을 설명하는 부분적인 결과이다. 본 발명은 또한 DNA 와 전사 인자의 상호작용 자리에 해당하는 핵산이 이러한 전사 인자의 활성을 적어도 부분적으로 억제할 수 있음을 설명하는 결과이다.
뉴우런 변성의 분자 기전을 연구하기 위해, 출원인은 글루타메이트에서 유도된 독성을 모델로 사용했다. 글루타메이트는 중앙 신경 시스템의 주된 흥분 신경전달물질이다. 그러나, 비정상적으로 긴 시간동안 글루타메이트에 노출시키거나, 생리학적 농도 이상의 농도에서는 독성 촉진제 (excitotoxicity)이라는 용어로 나타난 뉴우런 독성을 야기시킬 수 있다 (Olney Adv. Exp. Med. Biol. 203 (1986) 631). 많은 실험을 근거로 한 논의의 방향은 이러한 독성 유형이 허혈, 저산소증, 저혈당증 및 간질성 발작 또는 이와는 달리 대뇌 외상과 연관된 뉴우런 변성 때문으로 제안된다 (Choi, J. Neurobiol. 23 (1992) 1261). 독성 촉진제는 또한 헌팅톤무도병 (Young 일동., Science 241 (1988) 981) 및 알쯔하이머병 (Koh 일동., Brain Res. 533 (1990) 315; Mattson 일동.; J. Neurosci. 12 (1992) 376)과 같은 질환의 병에 관련되다고 여겨진다.
보다 구체적으로, 본 출원인은 1 차 배양에서 태아 시궁쥐의 피질 뉴우런 상에 글루타메이트가 야기시킨 사멸을 연구했다. 이전의 연구는 글루타메이트와 이것의 막 수용체의 결합이 세포막의 탈분극 및 세포내 칼슘의 증가를 초래했고, 따라서 몇가지 효소 집단을 포함하는 제 2 전령의 연속 활성화를 야기함을 나타냈었다. 본 출원인은 유전자 수준에서 전사 인자에 대해 코딩하는 조기 응답 유전자의 변조를 연구했고, 이때 임의의 유전자의 조절 서열과 번갈아 상호 작용하는 것은 이들의 발현을 활성화시키거나 억제할 것이다. 보다 특별하게, 출원인은 놀라웁게도, 피질 셀을 글루타메이트 또는 NMDA와 같은 다른 독성촉진제에 노출시키는 것은 "12-O-테트라데카노일포르볼 13-아세테이트에 반응하는 성분"으로 표시되고, TRE 로 축약된 유전자 서열에 결합할 수 있는 단백질 복합체의 수를 증가시킴을 나타낼 수 있었다 [ Schntal 일동., Cell 54 (1988) 325 ; Lucibello 일동., Oncogene 3 (1988) 43; Angel 일동., Cell 49 (1987) 729 ; Bohman 일동., Science 238 (1988) 1386]. TRE 영역의 이러한 서열이 SEQ ID 제 1번에 나타나있다. 부가로, 출원인은 또한 SEQ ID 제 1번 서열에 결합할 수 있는 인자를 격리시킴으로써, 피질 세포는 임의 농도 범위의 글루타메이트에 의해 초래된 사멸로부터 보호됨을 나타냈다. 이것은 SEQ ID 제 1번 서열이 뉴우런 변성의 전달 인자로서 작용함을 설명하며, 이러한 관찰은 선행 기술에 보고되지 않았었다. 그러므로 SEQ ID 제 1번 서열 및 이것과 상호작용할 수 있는 일련의 전사 인자는 신경퇴행성 과정을 치료할때 새로운 약리학적 표적물을 구성한다. 그러므로 본 발명은 부분적으로 신경퇴행성 질환의 치료를 위해 SEQ ID 제 1번 서열의 활성을 억제할 수 있는 화합물의 사용에 관한 것이다.
그러므로 본 발명의 일차 목적은 신경퇴행성 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 제약학적 조성물을 제조하기 위해, SEQ ID 제 1 번 서열 및 이것과 상호작용하는 전사 인자 사이의 상호작용을 적어도 부분적으로 억제하는 화합물의 사용에 있다.
본 발명의 목적을 위해, SEQ ID 제 1번 서열과 전사 인자 사이의 상호작용을 적어도 부분적으로 억제하는 화합물은 예컨대, (i) 전사, 번역 또는 번역 이후의 단계에서 이들 인자 또는 이들의 성분을 합성할 때, (ii) 이들 인자들의 활성을 변조시키는 분자 기전 (다량체화, 인산화-탈인산화 등)에서, 또는 이와는 달리 (iii) 이들 인자가 SEQ ID 제 1번 서열에 결합할때 영향을 미치는 화합물일 수 있다.
SEQ ID 제 1번 서열과 상호작용하는 전사 인자는 유전자 용어 AP1로 함께 분류되었다 (Landschultz 일동., Science 240 (1988) 1759). 문제시되는 분자는 이것의 단위 성분이 "류신 지퍼 (leucine zipper)" 구조적 특색을 통해 서로 연결되는 이합체이다. 전형적으로, 성분 중 하나는 Fos 원시종양유전자 군 (특히, Fos, Far1, Fra 2 및 Fos B 단백질을 포함하는 군)에 속하고 다른 하나는 Jun 군(특히, Jun, JunB 및 JunD 단백질을 포함하는 군)에 속한다. 한가지 예로서, Fos 단백질은 380 개의 아미노산, 354 개의 Jun 으로 구성된다 (Mc Mahon 및 Monroe, FASEB J. 6 (1992) 2707 을 참고하라).
SEQ ID 제 1 번 서열과 결합하는 인자의 합성에 영향을 미치는 화합물들 중에서, 해당 유전자의 번역을 방해하며, 이들 인자 또는 이들의 성분에 대해 연관된 항감지 누클레오티드 서열을 언급할 수 있다. 그러므로, Fos 와 Jun 의 경우에, Holt 일동. (PNAS 83 (1966) 4794) 또는 Kovary 및 Bravo (Mol, Cell, Biol. 11 (1991) 4466) 에 의해 서술된 항감지 서열을 사용할 수 있다. 이러한 인자에 대한 유전자 발현의 조절에 영향을 미치는 다른 화합물은 또한 본 발명에서, 예컨대, 특히 쿠르쿠민 (Huang 일동., PNAS 88 (1991) 5292), 2-아미노푸린 (Zinn 일동., Science 240 (1988) 210) 또는 이와는 달리 헤파린 (Wright 일동., PNAS 86 (1989) 3199)을 언급할 수 있고, 이러한 화합물은 Fos 및 Jun 의 합성에 영향을 미칠 수 있다.
본 발명에서 사용될 수 있는 또다른 부류의 화합물들은 SEQ ID 제 1번 서열과 상호작용하는 전사 인자의 활성을 변조시키는 분자 기전에 영향을 미치는 화합물과 함께 분류된다. 이러한 기전은 특히 다량체화, 인산화-탈인산화 등의 단계를 포함한다. 인자 AP1 에 대해서, 후자는 활성을 띠기위해서 인산화되어야 하며, 인산화는 DNA-의존 단백질 키나제 (Bannister 일동., Nucleic Acids Res. 21 (1993) 1289)에 의해서 뿐만아니라, 단백질 키나제 C 또는 단백질 키나제 A (위에서 인용한 Mc Mahon 및 Monroe 를 참고하라)에 의해 촉매화된다. 그러므로 본 발명을 위해 AP1 의 인산화에 영향을 미치는 화합물들 중에서, 이들 단백질 키나제의 활성을 적어도 부분적으로 억제할 수 있는 화합물을 언급할 수 있다.
마지막으로, 앞에서 설명한 바와같이, 본 발명을 위한 다른 화합물은 전사 인자와 SEQ ID 제 1번 서열과의 상호작용을 적어도 부분적으로 억제할 수 있는 것들이다. 특히 이러한 화합물은 전사 인자 길항질, 또는 전사 인자와 또는 이들의 성분 또는 ID 제 1번 서열과 상호작용할 수 있고 그리하여 이들 인자와 SEQ ID 제1번 서열 사이의 결합 활성을 변조할 수 있는 단백질일 수 있다. 이와 관련하여, CREB (Hai 및 Curran, PNAS 88 (1991) 3720), LRF-1 (Hsu 일동., PANS 88 (1991) 3511), 및 IP-1 (Auwerx 및 Sassone-Corsi, Cell 64 (1991) 983) 부류의 단백질, 또는 스테로이드 수용체 (Miner 및 Yamamoto, Trends in Biochem. Sci 16(1991) 423 을 참고하라)를 언급할 수 있다. CREB 부류의 막은 Fos 또는 Jun 부류의 단량체와 상호작용한다. 상이한 이종이합체는 상이한 결합 특이성을 갖는다. 그러므로, Fos-CREB 또는 Jun-CREB 교차-이합체는 이합체의 조성물에 따라서 TRE 자리, 뿐만아니라 CRE 자리 (CREB 단백질이 DNA 에 결합하는 자리)에 결합할 수 있다. 보다 구제적으로, 이들은 일반적으로 CRE 자리 (상기 언급된 Hai 및 Curran)에 바람직한 결합을 나타낸다. 그러므로 CREB 부류의 부재와 Fos 또는 Jun 부류의 부재의 이합체화는 SEQ ID 제 1 번 서열에 결합된 인자의 부재 변조를 초래한다. LRF-1 단백질은 c-Jun 및 Jun-B 와 이합체를 형성한다. 이러한 이합체는 결과로서 시험관내에서 CRE 자리에 결합할 수 있고 SEQ ID 제 1번 서열 (상기 언급된 Hsu 일동.)에 결합된 인자의 부재를 방해할 수 있다. IP-1 은 핵 및 몇몇 세포 유형의 세포질에서 나타나는 내인성 인자이다. IP-1 은 특히 DNA와 AP1 인자의 결합을 차단한다. 이것은 인산화된 형태 (상기 인용된 Auwerx 및 Sassone-Corsi) 일때 이것의 활성에 영향을 미치는 30-40 kDa 의 단백질이다. 스테로이드에 대한 수용체에 관해서 (글루코코르티코이드, 미네랄로코르티코이드, 프로게스테론, 안드로겐 등), 이들은 아연 손가락형 전사 인자의 부류에 속하는 핵 수용체이다. 이들은 SEQ ID 제 1번과는 상이한 DNA 와의 상호작용 자리를 가지고 있다. 그러나, 유전자의 조절 영역에 조성물 반응 요소가 있는데, 이들 요소를 가지고 스테로이드 수용체 부류의 부재와 류신 지퍼 전사 인자 부류(AP1, CREB, LRF-1등)의 부재는 상호 작용하여(단백질-단백질 또는 단백질-DNA 상호 작용을 거쳐) 이들 인자들 중 오직 한가지만 있을 때는 존재하지 않는 조절 효과를 생성시킬 수 있다. 이러한 이유로, 이러한 단백질 세트가 직접적으로 또는 간접적으로 AP1 인자 및/또는 SEQ ID 제 1 번 서열과 상호작용할 수 있기 때문에, 이들 단백질을 본 발명에서 사용하여 뉴우런 퇴화의 과정을 막을 수 있다. 이들 단백질을 있는 그대로 또는 생체 내에서 이러한 단백질을 발현할 수 있는 유전적 구조물의 형태로 사용할 수 있다. 전사 인자와 SEQ ID 제 1 번 서열 사이의 상호작용을 적어도 부분적으로 억제할 수 있는 다른 화할물은 전사 인자와 DNA, 즉 SEQ ID 제 1 번 서열, 또는 후자의 임의의 활성 변종의 결합 자리를 재현하는 이중-가닥 핵산으로 구성된다. 출원인은 이러한 핵산은 세포내에 있는 전사 인자(및 특별히 AP1 인자)를 복합화하고, 이들이 이들의 내인성 자리에서 결합하지 못하게 하고, 그리하여 이들의 전사 활성을 차단할 수 있었음을 효과적으로 재시했다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명에서 사용된 화합물은 SEQ ID 제 1 번 서열 또는 후자의 활성 변종 모두 또는 일부로 구성되는 이중-가닥 핵산이다.
본 발명을 위해, 활성 변종이라는 용어는 AP1 인자에 결합하는 성질을 보유한 SEQ ID 제 1 번 서열의 임의의 변종을 의미한다. 이러한 변종은 돌연변이, 결실, 치환 및/또는 SEQ ID 제 1 번 서열에 염기를 첨가하여 얻을 수 있고, 뒤이어 실시예 1 및 2에 서술된 바와 같이 시혐관내에서 결합 활성을 확인한다.
이러한 이중-가닥 핵산을 있는 그대로, 예컨대 사람 또는 동물내로 주입한 후에 사용하여 보호하거나 뉴우런 퇴화를 치료할 수 있다. 구체적으로, 이것은 출원 WO 90/11092에 서술된 기술에 따라 벗겨진 DNA 형태로 주입될 수 있다. 이것은 또한 예컨대 DEAE-멕스트란(Pagano 일동., J, Virol. 1 (1967) 891)과, 핵 단백질(Kaneda 일동., Science 243 (1989) 375)과, 지질(Felgner 일동., PNAS 84 (1987) 7413)과의 복합체 형태로, 리포좀의 형태 (Fraley 일동., J. Biol. Chem. 255 (1980) 1043l) 등으로 투여될 수 있다.
바람직하게, 본 발명에서 사용된 이중-가닥 핵산이 벡터의 일부를 형성한다. 사실상, 치료될 세포 내에 핵산의 투여를 증가시키고, 또한 이러한 세포에서 이것의 안정성을 증가시킴으로써 지속적인 억제 효과를 얻기 위해서 이러한 백터를 사용할 수 있다. 게다가, 이것은 몇가지 핵산 서열을 동일한 벡터 내로 도입할 수 있으며, 또한 치료의 효력을 증가시킬 수 있다.
사용된 벡터는 이것이 동물 세포, 바람직하게 사람 신경 세포를 형질전환시킬 수 있다면, 여러가지 종일 수 있다. 본 발명의 바람직한 실시양태에서, 사용된 비루스성 벡터는 아데노비루스, 레트로비루스, 아데노가 연결된 비루스(AAV), 헤르페스비루스 등으로부터 선택될 수 있다.
이와 관련해서, 본 발명의 목적은 또한 DNA와 전사 인자외 상호작용 자리에 해당하는 이중-가닥 핵산을 포함하고 이것의 게놈내로 삽입된 임의의 재조합 비루스이다. 사실상, 본 발명은 임의의 유전자 발현으로부터 초래된 임의의 병의 치료가능성을 설명하는데, 포함된 유전자 또는 유전자를 또는 이들의 전령 RNA, 또는 이들의 번역 생성물에 직접적으로 영향을 미치게 하는 것이 아니라, 이들의 발현의 원인이 되는 전사 인자의 활성에 영향을 미치게 하는 것으로서 설명한다. 이러한 접근접은 많은 유전자들, 예컨대 알쯔하이머 질환의 병에 포함된 아밀로이드 단백질 전구체(APP)의 상이한 동등형(isoform)을 코딩하는 유전자의 발현이 조절되게 한다. 사실상, 이러한 유전자는 전사 개시점의 400 bp 업스트림 미만의 전사 인자(AP1)에 대해 2개치 결합 자리를 함유한다(Lee 일동., Nature 325 (1987) 368). 유사하게, 파킨슨씨 병에 포함된 카테콜라민 합성에서 주된 효소인 티로신 히드록실라제에 대한 유전자의 프로모터(promoter)는 AP1 인자에 대한 결합 자리를 함유한다(Icard-Liepkans 일동., J. Neurosc. Res. 32 (1992) 290). 또 다른 실시예는 전사 인자에 대한 결합 자리를 또한 가지고 있는 NSF 유전자에 관한 것이다(S D'Mello 및 Heinrich, Mol. Brain Res. 11 (1991) 255).
본 발명에 따른 재조합 비루스는 아데노비루스, 레트로비루스, 아데노가 결합된 비루스등으로부터 선택될 수 있다. 바람직하계, 이것은 특히 아데노비루스와 같은 신경 세포를 감염시킬 수 있는 비루스이다. 아데노비루스, 레트로비루스, 또는 AAV가 병합된 이종 핵산 서열로부터 유도된 벡터가 문헌에 서술되어 있다[Akli 일동., Nature Genetics 3 (1993) 224; Stratford-Perricaudet 일동., Human Gene Therapy 1 (1990) 241; EP 185 573, Levrero 일동., Gene 101 (1991) 195; Le Gal la Salle 일동., Science 259 (1993) 988; Roemer 및 Friedmann, Eur. J. Biochem. 208 (1992) 211; Dobson 일동., Neuron 5 (1990) 353; Chiocca 일동., New Biol. 2 (1990) 739; Miyanohara 일동., New Biol. 4 (1992) 238; WO 91/18088].
본 발명의 특정 실시양태에서, 상기 정의된 재조합 비루스는 DNA와 AP1 인자의 상호작용 자리에 해당하는 이중-가닥 핵산을 포함한다. 보다 바람직하게, 이중-가닥 핵산은 SEQ ID 제 1 번 서열 또는 후자의 활성변종 전체 또는 일부를 포함한다.
유리하게, 본 발명에 따른 재조합 비루스는 결손 비루스이다, "결손 비루스"라는 용어는 표적 세포에서 복제를 할 수 없는 비루스를 나타낸다. 일반적으로, 본 발명에서 사용될 결손 비루스의 게놈은 따라서 감염된 세포 내에서 상기 비루스의 복제에 필요한 서열이 부족하다. 이러한 영역은 제거되거나(완전히 또는 부분적으로), 또는 작용하지 못하게 되거나, 또는 다른 서열들, 및 특히 이중-가닥 핵산으로 대체될 수 있다. 바람직하게, 결손 비루스는 그럼에도 불구하고 비루스성 입자의 캡시드화에 필요한 게놈의 서열을 보유한다.
본 발명의 핵산 서열을 결손 재조합 아데노비루스에 삽입된 형태로 사용하는 것이 특별히 유리하다.
사실상, 상이한 아데노비루스 항원형, 약간 변하는 구조 및 성질이 존재하지만, 이것은 사람에 대해 그리고 특히 면역 억제되지 않은 피실험자에 대해서는 병이 아니다. 부가로, 이러한 비루스는 이들이 감염시킨 세포의 게놈내에 통합되지 않고, 외인성 DNA의 커다란 단편을 포함할 수 있다. 상이한 항원형들 중에서, 본 발명에서는 아데노비루스 유형 2 또는 5 (Ad 2 또는 Ad5)를 사용하는 것이 바람직하다. Ad5 아데노비루스외 경우에, 복제에 필요한 서열은 E1A 및 E1B 영역이다.
게다가, 본 발명에 따른 전자 인자가 DNA에 결합하는 자리에 해당하는 크기가 작은 핵산은 유리하게 동일하거나(동일한 전사 인자를 차단하기 위함) 또는 상이할 수 있는 (상이한 전사 인자를 차단하기 위함) 몇가지 핵산을 동시에 동일한 벡터내에 넣을 수 있게 한다. 따라서 본 발명의 특정한 실시양태는 벡터, 특히 상기 정의된 둘 이상의 핵산을 포함하는 비루스성 벡터로 구성된다.
본 발명의 결손 재조합 비루스는 결손 비루스와 플라스미드 운반체, 그 중에서도 특히 상기 정의된 (Levrero 일동., Gene 101 (1991) 195; Graham, EMBO J. 3 (12) (1984) 2917) 핵산 서열 사이의 동종 재조합에 의해 제조될 수 있다. 동종 재조합은 상기 비루스 및 상기 플라스미드를 적합한 셀 라인 내로 공동형질 감염시킨 후에 일어난다. 사용된 셀 라인은 바람직하게 (i) 상기 요소들에 의해 형질전환될 수 있어야 하고, (ⅱ) 재조합의 위험을 막기 위해 바람직하게 삽입된 형태로, 결손 비루스 게놈외 일부를 보충할 수 있는 서열을 함유해야 한다. 결손 재조합 아데노비루스의 제조를 위해 사용될 수 있는 라인의 실례로서, 특히 이것의 게놈 내에 삽입되어 Ad5 아데노비루스 (12%) 게놈의 왼쪽 부분을 함유하고 있는 사람 태아의 콩팥 라인 293 (Graham 일동., J. Gen. Virol. 36 (1977) 59)을 언급할 수 있다. 결손 재조합 레트로비루스의 제조를 위해 사용될 수 있는 라인의 실례로서, CRIP 라인(Danos 및 Mulligan, PNAS 85 (1988) 6460)을 언급할 수 있다.
그후에, 다중화된 비루스는 분자 생물학 표준 기술에 따라 회수되고 정제된다.
본 발명의 주제는 또한 상기 정의된 DNA와 전사 인자의 상호 작용 자리에 해당하는 하나 이상의 재조합 비루스 또는 하나의 핵산을 포함하는 제약학적 조성물이다. 보다 바람직하게, 본 발명은 SEQ ID 제 1 번 서열 또는 후자의 활성 변종 모두 또는 일부를 포함하는 하나 이상의 이중-가닥 핵산, 또는 이런 핵산을 포함하는 재조합 비루스를 포함하는 제약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 제약학적 조성물은 국소적, 경구적, 비경구적, 비강내의, 정맥내의, 근육내의, 피하의, 눈을 통한 투여 등의 목적으로 조제될 수 있다.
바람직하게, 제약학적 조성물은 조재물을 주사할 수 있도륵 제약학적으로 허용가능한 운반체를 함유한다. 특히, 이들은 무균의 등장성 염 용액(제일인산나트륨 또는 제이인산나트륨, 염화나트륨, 염화칼륨, 염화칼슘 또는 염화마그네슘등 또는 상기 염의 혼합물)이거나, 또는 건조한, 특히 친액성화된 조성물일 수 있는데, 살균된 물이나 생리적 식염수를 첨가할 때, 경우에 따라서 주사가능한 용액이 형성되게 한다.
투여를 위해 사용된 핵산 (서열 또는 벡터)의 투여량은 상이한 변수들에 따라서, 특히 사용된 투여 방식, 문제되는 병, 발현될 핵산 또는 원하는 치료 기간에 따라 조절될 수 있다. 일반걱으로 말해서, 본 발명에 따른 재조합 비루스에 관해서, 후자는 104 내지 1014 pfu/ml, 및 바람직하게 106 내지 1010 pfu/ml 사이의 복용 형태로 배합되고 투여된다. 용어 pfu ("용균반 형성 단위")는 비루스 용액의 감염 세기에 해당하며, 적합한 세포 배양물을 감염시키고, 일반적으로 48시간 후에, 감염된 세포의 용균반의 수를 측정함으로써 결정된다. 비루스성 용액의 pfu 적정량을 측정하는 기술이 문헌에 잘 기록되어 있다.
이러한 제약학적 조성물은 사람에서 신경퇴행성 질환의 치료 및/또는 예방을 위해, 및 특히 허혈, 저산소증, 저혈당증 및 간질성 발작과 관련되거나 또는 대뇌 손상과 관련된 뉴우런 퇴화의 치료 및/또는 예방을 위해, 또는 헌팅톤무도병 또는 알쯔하이머 병의 치료 및/또는 예방을 위해 사용될 수 있다.
본 발명을 하기 실시예로서 보다 완전히 설명될 것이며, 실시예는 예시적이고 비제한적인 것으로 고려되어야 한다.
도면에 대한 설명
SEQ ID 제 1 번 : TRE 단편의 서열.
제 1도 : 와바인(ouabain)의 결합을 측정함으로써 SEQ ID 제 1번 서열에 의해 글루타메이트가 초래한 세포 사멸의 억제에 대한 설명. 이러한 억제 효과는 위치 10(T→G) 및 15(C→T)에서 변성된 SEQ ID 제 1번 서열의 존재하에서는 관찰되지 않는다.
제 2도 : 세포외외 매질내로 방출된 LDH를 측정하므로써 SEQ ID 제 1번 서열에 의해 글루타메이트가 초래한 세포 사멸의 억제에 대한 설명. 이러한 억제 효과는 위치 10(T→G) 및 15(C→T)애서 변성된 SEQ ID 제 1번 서열의 존재하에서는 관찰되지 않는다.
제 3도 : SEQ ID 제 1번 서열에 의해 트리판 블루 염색법에 의해 글루타메이트가 초래한 세포 사멸의 억제에 대한 설명.
일반적인 클로닝 기술
분자 생물학에서 전통적으로 사용된 방법들, 예컨대 플라스미드 DNA의 예비 추출, 염화 세슘 구배에서 플라스미드 DNA의 원심분리, 한천 또는 아크릴아미드 겔 전기영동, 전기용리에 의한 DNA 단편의 정제, 단백질의 페놀 또는 페놀/클로로포름 추출, 염수 매질에서 DNA의 에탄올 또는 이소프로판을 침전, 대장균에서의 형질전환등은 당업자에게 잘 공지되어있고 문헌에 상세히 설명되어있다 [Maniatis T. 일동., "Molecular cloning, a Laboratory Manual", Cold "Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, 뉴욕, 1982; Ausubel F. M. 일동. (편집자), "Current Protocols in Molecular Biology", John Wiley ＆ Sons, 뉴욕, 1987].
pBR322 및 pUC 유형의 플라스미드 및 M13 시리즈의 파아지(phage)가 통상적인 종(origin)이다 (Bethesda Researh Laboratories).
결찰을 수행하기위해, DNA 단편은 이들의 크기에 따라 한천 또는 아크릴아미드 겔 전기영동에 의헤 분리되고, 페놀을 사용하거나 페놀/클로로포름 혼합물을 사용하여 추출되고, 에탄올을 사용하여 침전되고나서 공급자의 건의에 따라 파아지 T4 DNA 리가아제(Biolabs)의 존재하에 항온처리될 수 있다.
5' 돌출 말단의 충전은 공급자의 설계에 다라 대장균 DNA 폴리머라제 I (Biolabs)의 Klenow 단편을 사용하여 수행될 수 있다. 3' 돌출 말단의 파괴는 제조자의 건의에 따라 사용된 파아지 T4 DNA 폴리머라제(Biolabs)의 존재하에 수헹된다. 5' 돌출 말단의 파괴는 S1 누클레아제를 사용하여 조절된 처리에 의해 수행된다.
합성 올리고데옥시누클레오티드를 사용하여 시험관에서 조작된 돌연변이화는 Amersham에 의해 분류된 키트(kit)를 사용하여 Taylor 일동 [Nucleic Acids Res. 13 (1985) 8749-8764]에 의해 전개된 방법에 따라 수행될 수 있다.
소위 PCR [Polymerase-catalysed Chain Reaction, Salki R.K. 일동., Science 230 (1985) 1350-1354; Mullis K.B. 및 Faloona F.A., Meth. Enzym. 155 (1987) 335-350] 기술에 의해 DNA 단편의 효소성 증식은 제조자의 설계에 따라 "DNA 열 사이클러(cycler)" (Perkin Elmer Cetus)를 사용하여 수행될 수 있다.
누클레오티드 서열의 다양함은 Amersham에 의해 분류된 키트를 사용하여 Sanger 일동에 의해 개발된 방법에 의해 수행될 수 있다 [Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 74 (1977) 5463-5467].
실시예
실시예 1 : 피질 세포를 글루타메이트에 노출시킨 후에 SEQ ID 제 1번 서열을 결합하는 복합체에 대한 설명.
본 실시예는 피질 세포를 글루타메이트에 노출시킨 후에 SEQ ID 제 1번 서열을 결합할 수 있는 세포내 복합체 수의 증가를 설명한다. 본 설명은 겔 제지 기술 (Lassar 일동., Cell 66 (1991) 305)을 사용하여 수행했다.
이러한 목적으로, Wistar 시궁쥐 피질 배 세포(E17)를 Dichter 방법(Brain Res. 149 (1978) 279)에 따라 단리시키고, 인슐린 10㎍/ml, 트란스페린 10㎍/ml, 아셀렌산 나트륨 10ng/ml, 프로게스테론 10 nM 및 트리요오도티로닌 1 nM을 함유하는 DMEM 매질 (Dulbecco's Modified Eagle Medium) 내에서 Costar 6-웰(well) 접시 (35분; 밀도 6×105 세포/접시)에서 배양하고, 항온기 (37℃, 5% CO2)에 저장했다.
4-6일간 배양후에, 글루타메이트를 세포에 첨가한다. 10분에서 48시간 후에, 상기 인용된 Lassar 일동에 의해 서술된 기술에 따라 세포의 핵 추출물을 얻었다. SEQ ID 제 1번 서열에 의해 해당하는 방사성 탐침을 실시예 2에 따라, 및 그리고나서 Maniatis에 의해 서술된 기술 (전형적인 특이 활성 : 50000 cpm/ng)에 따라 아인산-32로 라벨링시켜 준비했다. 그리하여 얻은 탐침 0.2 ng을 폴리 D(IC)(IC)(Pharmacia) 500ng의 존재하에 핵 추출물 0.5-2㎍과 함께 항온처리하여 비-특이적 결합을 감소시킨다. 반응은 얼음 내에서 10분 동안 일어난다. 그리고나서 형성된 복합체를 5% 아크릴아미드 겔 상에서 전기영동하여 볼 수 있게 한다. 방사성 밴드의 존재(방사선자기법에 의해 나타남)는 글루타메이트가 SEQ ID 제 1번을 결합할 수 있는 복합체의 세포 발현을 초래시켰음을 나타낸다.
실시예 2 : SEQ ID 제 1번 서열 및 비활성 변종의 합성.
SEQ ID 제 1번 서열에 해당하는 이중-가닥 핵산을 자동 누클레오티드 합성기를 사용하여 합성했다 (Maniatis).
이 핵산의 비활성 돌연변이체를 동일한 계획안에 따라 제조했다. 이러한 비활성 돌연변이체는 SEQ ID 제 1번 서열에 비해 위치 10(T→G) 및 15(C→T)에서 돌연변이를 갖고 있다. 이러한 돌연변이체의 활성 부재는 탐침으로서 방사성 라벨링 후에 이 돌연변이체를 사용하여, 실시예 1과 동일한 조건하에서 설명되었다. 이러한 돌연변이체의 비활성은 글루타메이트의 존재하에 배양된 후에, SEQ ID 제 1번과 비교하여, 이것의 세포 추출물과 결합하는 면이 변화가 없는 것으로서 나타난다.
글루타메이트가 초래한 사멸을 억제하는 SEQ ID 제 1번 서열의 능력은 세가지 파라미터를 측정하여 : 트리튬화된 와바인과 배양중인 뉴우런의 결합, 세포외의 매질 내 락테이트 틸수소 효소의 검출, 및 트립탄 블루 염색 후에 세포를 계수함으로써 결정했다.
실시예 3 : 트리튬화된 와바인과 배양중인 뉴우런의 결합의 측정 (제 1 도).
와바인은 막 ATPase에 대한 리간드이다. 이것은 오직 살아있는 뉴우런과 결합한다. 따라서, 결합된 와바인의 양이 많을수록, 살아있는 세포의 수는 많아진다.
Wistar 시궁쥐 피질 배 세포(E17)를 Dichter 방법 (Brain Res. 149 (1978)279)에 따라 단리시키고, 인슐린 10㎍/ml, 트란스페린 10㎍/ml, 아셀렌산 나트륨 10ng/ml, 프로게스테론 10nM 및 트리요오도티로닌 1nM을 함유하는 DMEM 매질 (Dulbecco's Modified Eagle Medium)내에서 Costar 6-웰 접시 (35분; 밀도 6×105 세포/접시) 또는 24-웰 접시 (16분; 밀도 3×105 세포/접시)에서 배양하고, 항온기 (37℃, 5% CO2) 내에 저장된다. 4 또는 5일간 배양한 후에, SEQ ID 제 1번 서열 또는 이것의 비활성 변종(실시예 2를 참고하라)의 합성 핵산 2μM을 배양접시에 첨가했다. 항온한 후 15시간 후에, 글루타메이트 (1mM)를 첨가했다. 배양물과 트리튬화된 와바인의 결합은 Markwell 일동., (Brain Res. 538 (1991) 1)에 의해 서술된 계획안에 따라 글루타메이트를 첨가한 후 24시간 후에 측정했다.
얻은 결과가 제 1 도에 제시된다, 이들은 글루타메이트가 세포와 와바인의 결합 손실을 초래하고, 이러한 손실은 SEQ ID 제 1번 서열의 합성 핵산이 있으나, 비활성 돌연변이된 변종이 없는 상태에서 억제됨을 명확히 보여준다.
실시예 4 : 세포 외부 매질내로 락테이트 탈수소효소 방출의 측정 (제 2도).
락테이트 탈수소효소(LDH)는 세포를 사멸시킴으로써 세포 외부 매질내로 방출된 세포질 효소이다. 따라서, 방출된 LDH의 양이 많아질수록 사멸되는 세포의 수는 많아진다.
세포를 실시예 3과 동일한 조건하에서 배양시켰다. 세포 외부 매질내에 존재하는 LDH 활성을 Berger 및 Brodia의 방법 (Sigma 방법 500)에 따라 글루타메이트를 첨가 후 24시간 후에 분석했다.
얻은 결과가 제 2도에 제시된다. 이들은 글루타메이트가 LDH의 세포 외부 양을 증가시키고, 이러한 증가는 SEQ ID 제 1번 서열의 합성 핵산이 있지만, 돌연변이된 비활성 변종이 없는 상태에서 억제됨을 분명하게 보여준다.
실시예 5 : 트리판 블루 염색 후에 세포의 계수(제 3 도)
트리판 블루는 죽은 세포에 들어가서 "푸르게"되는 생체 염색약으로서, 이것은 살아있는 세포로부터는 배제되어 "흰색"으로 남아있는 것으로 알려져있다. 따라서, "푸른색" 세포의 양이 많을 수록, 죽은 세포의 수가 많다.
세포를 실시예 3과 동일한 조건하에서 배양했다. 본 실시예에 사용된 글루타메이트 농도는 5mM이다. 항온의 마지막에서, 트리판 블루를 0.02%의 농도에서 첨가했고, 세포를 10분 동안 항온기내에 놓아두었다. 그리고 나서 모든 웰(조건마다 6개의 웰)을 Zeiss 135M 현미경을 사용하여 5회 사진을 찍었다. 그리고 나서 푸른색과 흰색 세포의 수를 각각의 사진 상에서 어림짐작으로 셌다.
얻은 결과가 제 3 도에 제시된다. 이들은 글루타메이트가 상당한 세포 사멸을 초래하고, 이러한 세포 사멸은 SEQ ID 제 1번 서열의 합성 핵산의 존재하에 억제됨을 분명하게 보여준다,
이러한 결과는 총체적으로 글루타메이트가 초래한 뉴우런 사멸을 억제하는 본 발명의 핵산의 능력을 명확하게 보여준다.
서열 목록
(1) 일반적인 정보
(i) 출원인 :
(A) 성명 : RHONE-POULENC RORER, S.A.
(B) 거리 : 20, Raymond ARON가
(C) 시 : ANTONY
(E) 국명 : 프랑스
(F) 우편번호 : 92165
(ii) 발명의 명칭 : 신경퇴행성 질환의 치료를 위한 제약학적 조성물 및 이들의 사용 방법.
(iii) 서열의 수 : 1
(iv) 컴퓨터 판독가능한 형태 :
(A) 매체 유형 : 테이프
(B) 컴퓨터 : 호환가능한 IBM PC
(C) 작동 시스템 : PC-DOS/MS-DOS
(D) 소프트웨어 : PatentIn Release #1.0, 버젼 #1.25(EPO)
(2) SEQ ID 제 1번에 대한 정보 :
(i) 서열 특성 :
(A) 길이 : 25 염기쌍
(B) 유형 : 핵산
(C) 꼬임 : 이중
(D) 위상 : 선형
(ii) 분자 유형 : cDNA
(iii) 가설 : 없음
(ⅲ) 안티-센스 : 없음
(xi) 서열 설명 : SEQ ID 제 1 번 :
AGCCGCAAGT GACTCAGCGC GGGGC

Claims (7)

  1. SEQ ID 제1번 서열을 함유하는 이중 나선 핵산을 포함하는 신경퇴행성 질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물로서, 상기 이중 나선 핵산은 SEQ ID 제1번 서열에 대한 인자 AP1의 결합을 저해하는 약학 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 이중 나선 핵산이 벡터 내에 함유된 약학 조성물.
  3. 제 2항에 있어서, 이중 나선 핵산이 비루스 벡터 내에 함유된 약학 조성물.
  4. 제2항 또는 제3항에 있어서, 벡터가 아데노비루스, 레트로비루스, 아데노 연관 비루스 또는 헤르페스비루스인 약학 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 비루스가 아데노비루스인 약학 조성물.
  6. 제2항 또는 제3항에 있어서, 벡터가 전사 인자와 DNA의 상호작용 자리에 해당하는 하나 이상의 이중 나선 핵산을 함유하는 약학 조성물.
  7. 제2항 또는 제3항에 있어서, 벡터가 복제 결손 비루스인 약학 조성물.
KR1019950706050A 1993-06-30 1994-06-27 신경 퇴행성 질환의 치료를 위한 제약학적 조성물 및 이들의 사용방법 KR100517879B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9307962A FR2707880B1 (fr) 1993-06-30 1993-06-30 Compositions pharmaceutiques et leur utilisation, notamment pour le traitement des maladies neurodégénératives.
FR93-07962 1993-06-30
PCT/FR1994/000771 WO1995001429A1 (fr) 1993-06-30 1994-06-27 Compositions pharmaceutiques et leur utilisation, notamment pour le traitement des maladies neurodegeneratives

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR960703432A KR960703432A (ko) 1996-08-17
KR100517879B1 true KR100517879B1 (ko) 2005-12-16

Family

ID=9448720

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1019950706050A KR100517879B1 (ko) 1993-06-30 1994-06-27 신경 퇴행성 질환의 치료를 위한 제약학적 조성물 및 이들의 사용방법

Country Status (15)

Country Link
US (1) US6140112A (ko)
EP (2) EP1454984A1 (ko)
JP (1) JP3755825B2 (ko)
KR (1) KR100517879B1 (ko)
AT (1) ATE276360T1 (ko)
AU (1) AU696644B2 (ko)
CA (1) CA2166318C (ko)
DE (1) DE69433996T2 (ko)
DK (1) DK0707644T3 (ko)
ES (1) ES2227528T3 (ko)
FI (1) FI120942B (ko)
FR (1) FR2707880B1 (ko)
NO (1) NO321455B1 (ko)
PT (1) PT707644E (ko)
WO (1) WO1995001429A1 (ko)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6017903A (en) 1996-09-27 2000-01-25 Guilford Pharmaceuticals Inc. Pharmaceutical compositions and methods of treating a glutamate abnormality and effecting a neuronal activity in an animal using NAALADase inhibitors
US5824662A (en) 1996-09-27 1998-10-20 Guilford Pharmaceuticals Inc. Treatment of global and focal ischemia using naaladase inhibitors
PL332413A1 (en) 1996-09-27 1999-09-13 Guilford Pharm Inc Compositions containing inhibitors of naaladase as well as methods of treating glutamatic anomaly and influencing neuronic functions among animals
DE29916160U1 (de) 1999-09-14 2000-03-09 Cardiogene Gentherapeutische Systeme AG, 40699 Erkrath Modulation der Transkription von Genen in vaskulären Zellen
US6599741B1 (en) 1999-09-14 2003-07-29 Avontec Gmbh Modulating transcription of genes in vascular cells
CN1315402A (zh) * 2000-03-28 2001-10-03 上海博德基因开发有限公司 一种新的多肽——人淀粉类前体蛋白结合蛋白14和编码这种多肽的多核苷酸
CN1315439A (zh) * 2000-03-29 2001-10-03 上海博德基因开发有限公司 一种新的多肽——人淀粉类前体蛋白结合蛋白9和编码这种多肽的多核苷酸
DE10308045B3 (de) 2003-02-26 2004-06-17 Lurgi Ag Verfahren und Vorrichtung zur kontinuierlichen Gewinnung freier Weinsäure aus Kaliumhydrogentartrat enthaltenden Rohstoffen

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1991011535A1 (en) * 1990-01-30 1991-08-08 Childrens Hospital Of Los Angeles Inhibition of transcription by double-stranded oligonucleotides

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2573436B1 (fr) * 1984-11-20 1989-02-17 Pasteur Institut Adn recombinant comportant une sequence nucleotidique codant pour un polypeptide determine sous le controle d'un promoteur d'adenovirus, vecteurs contenant cet adn recombinant, cellules eucaryotes transformees par cet adn recombinant, produits d'excretion de ces cellules transformees et leurs applications, notamment a la constitution de vaccins
WO1991018088A1 (en) * 1990-05-23 1991-11-28 The United States Of America, Represented By The Secretary, United States Department Of Commerce Adeno-associated virus (aav)-based eucaryotic vectors
FR2675803B1 (fr) * 1991-04-25 1996-09-06 Genset Sa Oligonucleotides fermes, antisens et sens et leurs applications.
GB9114437D0 (en) * 1991-07-03 1991-08-21 Health Lab Service Board Recombinant adenoviruses and the use thereof for detecting the presence in eukaryotic cells of the expression products of specific genes
FR2708283B1 (fr) * 1994-01-14 1995-10-20 Rhone Poulenc Rorer Sa Compositions pharmaceutiques et leur utilisation, notamment pour le traitement des maladies neurodégénératives.

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1991011535A1 (en) * 1990-01-30 1991-08-08 Childrens Hospital Of Los Angeles Inhibition of transcription by double-stranded oligonucleotides

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SCIENCE, vol. 259, pp. 988-990 (1993.02.12 *

Also Published As

Publication number Publication date
NO321455B1 (no) 2006-05-15
FR2707880B1 (fr) 1995-10-06
FI956353A (fi) 1995-12-29
AU696644B2 (en) 1998-09-17
JP3755825B2 (ja) 2006-03-15
FR2707880A1 (fr) 1995-01-27
PT707644E (pt) 2005-01-31
NO954888L (no) 1995-12-01
EP0707644B1 (fr) 2004-09-15
AU7188294A (en) 1995-01-24
EP0707644A1 (fr) 1996-04-24
US6140112A (en) 2000-10-31
ATE276360T1 (de) 2004-10-15
FI120942B (fi) 2010-05-14
DE69433996T2 (de) 2005-09-22
EP1454984A1 (fr) 2004-09-08
FI956353A0 (fi) 1995-12-29
JPH08512043A (ja) 1996-12-17
CA2166318A1 (fr) 1995-01-12
CA2166318C (fr) 2009-02-10
ES2227528T3 (es) 2005-04-01
KR960703432A (ko) 1996-08-17
DK0707644T3 (da) 2005-01-17
WO1995001429A1 (fr) 1995-01-12
DE69433996D1 (de) 2004-10-21
NO954888D0 (no) 1995-12-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102459597B (zh) 通过针对dmd家族的天然反义转录物的抑制治疗肌营养蛋白家族相关疾病
ES2594083T3 (es) Oligorribonucleótidos y métodos de uso de los mismos para tratamiento de la alopecia, insuficiencia renal aguda y otras enfermedades
US11034962B2 (en) Inhibitors of CACNA1A/ALPHA1A subunit internal ribosomal entry site (IRES) and methods of treating spinocerebellar ataxia type 6
US20070191273A1 (en) Modulation of angiogenesis
US20180312839A1 (en) Methods and compositions for increasing smn expression
JP2012510819A (ja) Ｅｐｏに対する天然アンチセンス転写物の抑制によるエリスロポエチン（ｅｐｏ）関連疾患の治療
JP2009518022A (ja) 抗ミオシンＶａｓｉＲＮＡおよび皮膚の脱色
EP3286317B1 (en) Dynamin 2 inhibitor for the treatment of duchenne's muscular dystrophy
KR100517879B1 (ko) 신경 퇴행성 질환의 치료를 위한 제약학적 조성물 및 이들의 사용방법
JPH09502357A (ja) Ｇｒｂ３−３遺伝子、その変異体およびそれらの使用
JP2007190020A (ja) 特に神経変性疾患の治療のための医薬組成物およびその使用
US20190055553A1 (en) Methods for identifying and targeting non-coding rna scaffolds
KR101121987B1 (ko) 파골세포 골흡수 억제 ｓｉＲＮＡ 발현 벡터 및 이를 이용한 유전자 치료제
JP2023513188A (ja) 遺伝子の発現増加のためのｍｉｒｎａ－４８５阻害剤
US8431119B2 (en) Pharmaceutical compositions and utilization thereof particularly for the treatment of neurodegenerative diseases
FR2708283A1 (fr) Compositions pharmaceutiques et leur utilisation, notamment pour le traitement des maladies neurodégénératives.
WO2024145496A2 (en) Splice-switching oligonucleotides for treating syngap1-associated disorders
Ambati et al. Modulation of Angiogenesis

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
E601 Decision to refuse application
AMND Amendment
J201 Request for trial against refusal decision
B701 Decision to grant
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20120907

Year of fee payment: 8

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20130906

Year of fee payment: 9

EXPY Expiration of term