KR100513301B1 - A composition for washing foot - Google Patents

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KR100513301B1 KR10-2002-0018320A KR20020018320A KR100513301B1 KR 100513301 B1 KR100513301 B1 KR 100513301B1 KR 20020018320 A KR20020018320 A KR 20020018320A KR 100513301 B1 KR100513301 B1 KR 100513301B1
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Abstract

본 발명은 발 세정용 조성물에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 케라틴 분해효소 및 각질 제거제를 포함하는 발세정용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은 소염 작용을 갖는 세라티오펩티다제 또는 천연물질을 추가로 포함할 수 있다. 상기한 케라틴 분해효소는 각질층의 주성분인 케라틴을 분해하여 각질 제거에 상승효과를 유발하고 항균효과 및 신진대사를 증진하여 각질제거, 청결유지, 피부보호 및 건강에 도움을 줄 수 있으며, 본 발명의 조성물은 그람 양성균, 그람 음성균, 및 곰팡이를 포함하는 병원균의 전반에, 우수한 항균 효과를 보임으로써, 발 세정제로서 유용하게 사용될 수 있다.The present invention relates to a composition for washing feet, and more particularly, to a composition for washing feet containing keratin degrading enzymes and exfoliants. The composition of the present invention may further comprise a ceratiopeptidase or natural substance having an anti-inflammatory action. The keratin degrading enzymes can decompose keratin, the main component of the stratum corneum, induce a synergistic effect on the exfoliation and promote antimicrobial effect and metabolism to help exfoliation, cleanliness, skin protection and health, of the present invention The composition can be usefully used as a foot cleanser by showing excellent antimicrobial effect over pathogens including gram positive bacteria, gram negative bacteria, and molds.

Description

발 세정용 조성물{A COMPOSITION FOR WASHING FOOT} A composition for foot washing {A COMPOSITION FOR WASHING FOOT}

본 발명은 발 세정용 조성물에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 각질 제거제, 케라틴 분해효소를 포함하는 발세정용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for washing feet, and more particularly, to a composition for washing feet containing an exfoliating agent and keratin degrading enzyme.

피부는 크게 표피(epidermis) 및 진피(dermis)로 분류되며, 표피는 각질층(horney layer), 투명층(clear or lucid layer), 과립층(granular layer), 기저층(germinal layer)으로 구성되고, 진피는 피신경(cutaneus n.) 및 혈관(blood vessels)으로 구성되어 있다. Skin is largely classified into epidermis and dermis. The epidermis is composed of horney layer, clear or lucid layer, granular layer and germinal layer. It is composed of cutaneus n. And blood vessels.

각질층은 케라틴 약 50%, 지방 약 20%, 수용성물질 약 23%, 수분 약 7% 및 기타 성분으로 구성되며, 피부의 겉표면에 도착한 세포들이 딱딱하게 각질화되어 형성되는 부분이다. 이들은 체내 물질이 외부로 나가는 것을 막아주고, 외부의 물리적, 화학적 및 생물학적 자극으로부터 인체를 보호하는 방어 기능을 한다. 기저층에서 생성된 각질세포(keratinocyte)는 과립층을 통과하여 각질층으로 이동하며, 각질층에 도달한 표피 세포는 핵이 소실되고, 케라틴(keratin)이라고 하는 불수용성 단백질로 채워지면서 죽은 세포로 전환된다. 상기 각질 세포는 데스모좀(desmozom)이라고 하는 단백질에 의하여 서로 연결되어 있고, 각질층 상부로 올라갈수록 데스모좀은 분해되어 각질 세포간 응집력이 약화되고, 결국 각질 세포는 피부로부터 분리되어 떨어져 나간다.The stratum corneum is composed of about 50% keratin, about 20% fat, about 23% water-soluble substance, about 7% moisture, and other ingredients, and is a part where the cells that reach the outer surface of the skin are hardened and formed. They act as a defense against the release of substances in the body and protect the body from external physical, chemical and biological stimuli. The keratinocytes produced in the basal layer pass through the granule layer and migrate to the stratum corneum. Epidermal cells that reach the stratum corneum lose their nuclei and are converted to dead cells as they are filled with an insoluble protein called keratin. The keratinocytes are connected to each other by a protein called desmozom, and as they rise up the stratum corneum, desmosomes are degraded to weaken the cohesion between keratinocytes and eventually the keratinocytes are separated from the skin.

각질 세포의 생성에서 여러층을 통과하는 데 걸리는 시간을 주행시간(transit time)이라고 하는데 기저층에서 과립층까지의 주행시간은 14일, 과립층에서 각질세포가 되어 각질층에 도달하여 탈락할 때까지 14일이 걸려, 각질 세포의 생성에서 탈리에 걸리는 시간은 총 28일이 걸린다. The time it takes to pass through multiple layers in the production of keratinocytes is called transit time. The travel time from the basal layer to the granular layer is 14 days, and 14 days until it reaches the stratum corneum from the granular layer to reach the stratum corneum. In the production of keratinocytes, desorption takes 28 days.

최근, 피부 각질층의 턴오버 속도를 빠르게 하여 노화된 각질 세포를 쉽게 탈리시켜서 미백 효과 또는 피부 탄력을 향상시키려는 시도가 행해지고 있다. In recent years, attempts have been made to accelerate the turnover rate of the stratum corneum and to easily detach the aged keratinocytes to improve the whitening effect or skin elasticity.

대한민국등록특허공보 제300197호는 각질제거 기능을 갖는 알파히드록시산인 글리콜산과 보습 및 각질제거기능을 갖는 요소를 포함하는 발 전용 화장료 조성물을 개시하고 있으며, 대한민국공개특허공보 제2000-44978호는 데스모좀에 작용하여 각질제거를 촉진시키는 이소세린(isoserine, 3-amino-2-hydroxypropionic acid)을 함유하는 각질 박리 촉진용 제제를 개시하고 있으며, 대한민국공개특허공보 제2000-66979호는 바실러스 서브티리스(Bacillus subtilis)로부터 얻어지는 효소액을 포함하는 인체 세정제 조성물을 개시하고 있다. 그리고, 대한민국특허 제2000-14115호는 각질 제거용 러빙 크림 조성물을 개시하고 있으며, 상기 조성물은 파인애플 줄기에서 얻어낸 단백질가수분해 효소인 브로멜라인(Bromelain)과 파파야 나무에서 얻어낸 단백질분해효소인 파파인(papain)을 포함한다. 상기 문헌에 따르면 이들은 세포간 접착물질인 데스모좀에 작용하여 각질 제거를 효과적으로 성취하고자 하였다.Korean Patent Publication No. 300197 discloses a cosmetic composition for feet containing glycolic acid, an alpha hydroxy acid having an exfoliating function, and an element having a moisturizing and exfoliating function, and Korean Patent Laid-Open Publication No. 2000-44978 discloses It discloses a preparation for promoting keratin exfoliation containing isoserine (3-amino-2-hydroxypropionic acid) that acts on the hairsome to promote exfoliation, and Korean Patent Publication No. 2000-66979 discloses Bacillus subtilis ( A human detergent composition comprising an enzyme solution obtained from Bacillus subtilis ) is disclosed. And, Korean Patent No. 2000-14115 discloses a rubbing cream composition for exfoliation, the composition is a proteolytic enzyme bromelain (Bromelain) obtained from pineapple stem and papain (protease obtained from papaya tree) papain). According to the above document, they tried to effectively achieve exfoliation by acting on desmosome, an intercellular adhesion material.

그러나, 상기한 예들은 충분한 각질 제거에 의한 발세정 작용을 나타내지 못하였으며, 따라서, 우수한 성능을 갖는 발 세정제가 요구되었다. 이에 본 발명자들은 각질 제거제를 포함하는 발 세정용 조성물에 케라틴 분해효소를 추가로 첨가함으로써 각질 제거 효과가 상승됨과 아울러 항균 활성도 증가됨을 확인하고 본 발명을 완성하였다.However, the above examples did not exhibit a rinse action by sufficient exfoliation, and therefore, a foot cleaner having good performance was required. Accordingly, the present inventors confirmed that the addition of keratin degrading enzyme to the foot washing composition including the exfoliating agent increases the exfoliation effect and the antimicrobial activity also increases, thereby completing the present invention.

따라서, 본 발명은 발 세정의 효과가 향상된 새로운 발 세정용 조성물을 제공하는 것이다.Accordingly, the present invention is to provide a new foot cleaning composition with improved effect of the foot cleaning.

본 발명의 다른 목적은 항균 작용이 우수한 발 세정용 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a composition for washing feet excellent in antibacterial action.

상기한 목적 및 발명의 상세한 설명에 기술된 또 다른 목적은 각질 제거제를 포함하는 종래의 조성물에 케라틴 분해효소를 추가로 공급함으로써 성취될 수 있다. Another object described above and in the detailed description of the invention can be achieved by the additional supply of keratin degrading enzymes to conventional compositions comprising the exfoliating agent.

본 발명은 각질 제거제 및 케라틴 분해효소를 포함하는 발세정용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for cleansing feet comprising an exfoliant and keratin degrading enzyme.

본 명세서에서 "각질 제거제"라 함은 각질 제거기능을 갖는 물질을 말하며, 각질의 껍질을 벗겨내는 역할을 수행하는 물질 또는 데스모좀에 작용하여 각질 세포의 탈리를 촉진시키는 물질을 모두 포함한다. 전자의 예로는 알파히드록시산, 베타히드록시산 또는 요소를 들 수 있으며, 후자의 예로는 이소세린(isoserine, 3-amino-2-hydroxypropionic acid), 브로멜라인(Bromelain), 파파인(papain) 등을 들 수 있다. As used herein, the term "exfoliant" refers to a substance having an exfoliating function, and includes both a substance serving to exfoliate a keratin or a substance acting on a desmosome to promote detachment of keratinocytes. Examples of the former include alpha hydroxy acid, beta hydroxy acid or urea. Examples of the latter include isoserine (3-amino-2-hydroxypropionic acid), bromelain and papain. Etc. can be mentioned.

본 명세서에서 "케라틴 분해효소"라 함은 각질층의 주성분인 케라틴 단백질을 분해하는 효소를 말하며, 이들은 미생물로부터 용이하게 분리할 수 있다. 상기한 케라틴 분해효소는 케라틴을 분해하여 각질층을 연질화를 유도하여 각질제거제에 의한 각질 제거를 촉진시키는 역할을 수행할 뿐만 아니라 그람음성균. 그람 양성균 곰팡이 등의 병원균에 대한 항균활성을 나타낸다. 본 발명에 사용하기 위한 케라틴 분해효소는 25℃ ∼ 40℃의 온도 및 4.0 ∼ 9.0의 pH에 안정하고, 최적 반응온도는 30 ∼ 37℃, 그리고 최적 pH는 5.0 ∼ 7.0이 적합하다. 케라틴 분해효소는 액상 상태, 액상 상태를 농축한 농축액, 또는 건조한 제제의 형태로 사용할 수 있다. 발바닥 각질층은 땀샘에 존재하는 피지샘이 결여되어 있어 지방산이 분비되지 않고 살균 작용을 갖지 못하여 백선균과 같은 무좀균이 발바닥의 각질층에 달라붙으면 발바닥 전체에 퍼지게 된다. 따라서, 항균 활성이 뛰어난 케라틴 분해효소는 이러한 문제점을 해결할 수 있다. 바람직한 사용량은 전체 조성물에 대해 0.01 ∼ 1.00 중량%이고, 더욱 바람직하게는 0.03 ∼ 0.05 중량%이다. 0.01 중량% 미만으로 사용되면, 단백질 분해능이 떨어지고, 1.00 중량%를 초과하여 사용하면 과다 사용으로 인한 과다한 각질 제거한 문제점을 야기할 수 있다.As used herein, the term "keratin degrading enzyme" refers to an enzyme that degrades keratin proteins, which are the main components of the stratum corneum, and these can be easily separated from microorganisms. The keratin degrading enzyme decomposes keratin, induces softening of the stratum corneum, and plays a role of promoting keratin removal by an exfoliating agent, as well as Gram-negative bacteria. It exhibits antimicrobial activity against pathogens such as Gram-positive bacteria and fungi. The keratin degrading enzyme for use in the present invention is stable at a temperature of 25 ° C to 40 ° C and a pH of 4.0 to 9.0, an optimum reaction temperature of 30 to 37 ° C, and an optimum pH of 5.0 to 7.0 are suitable. The keratin degrading enzyme can be used in the form of a liquid state, a concentrated liquid concentrate in a liquid state, or a dry preparation. The stratum corneum of the sole lacks sebaceous glands present in the sweat glands, and fatty acids are not secreted and do not have a bactericidal action. Therefore, keratin degrading enzyme excellent in antimicrobial activity can solve this problem. Preferable amount of use is 0.01 to 1.00 weight% with respect to the whole composition, More preferably, it is 0.03 to 0.05 weight%. When used in less than 0.01% by weight, the protein resolution is lowered, and when used in excess of 1.00% by weight can cause problems of excessive exfoliation due to overuse.

본 발명의 조성물은 항균효과 및 신진대사를 도와주는 기능을 갖는 천연물질을 추가로 포함할 수 있으며, 그러한 예로는 후박, 쑥, 녹차, 오가피, 인삼, 마늘, 은행잎을 들 수 있다. 상기한 천연 물질은 케라틴 분해효소가 갖는 항균 활성을 상승시킬 뿐만 아니라 신진 대사를 촉진시켜 피부 탄력을 향상시키는 역할을 한다. 더욱 바람직하게는 후박 또는 쑥을 사용하는 것이다. 천연물질로 선택된 쑥의 경우는 각종 세균의 번식을 억제하는 효과뿐만 아니라 세균성 이질, 옻독, 풀독, 땀띠 등의 습진 및 피부 가려움에 효능을 갖는다. 또한, 후박은 항세균 작용과 소화작용을 활성시키며 다리부위가 부었을 경우, 붓기를 풀어주는 효능이 있다. 이들은 통상 약탕기 또는 끓인 물에서 용출되어 나오는 액을 희석하여 사용하며, 바람직한 사용량은 투자 가격, 색상, 침전물의 생성 여부를 고려할 때, 조성물의 전체 중량에 대하여 0.01 ∼ 10.0 중량%이고, 더욱 바람직하게는 0.1 ∼ 0.5 중량%이다.The composition of the present invention may further include a natural substance having an antimicrobial effect and a function to help metabolism, and examples thereof include humbac, mugwort, green tea, ogapi, ginseng, garlic, and ginkgo biloba. The natural substance not only increases the antibacterial activity of keratinase, but also promotes metabolism and serves to improve skin elasticity. More preferably, it is to use thick foil or wormwood. In the case of mugwort selected as a natural substance, as well as the effect of suppressing the growth of various bacteria, it has an effect on eczema and itching of the skin such as bacterial dysentery, lacquer poison, grass poison, sweat band. In addition, bakbak activates antibacterial and digestive action, and when the leg is swollen, there is an effect to relieve swelling. They are usually used by diluting the solution eluted in a water bath or boiled water, and the preferred amount is 0.01 to 10.0% by weight based on the total weight of the composition, more preferably considering the investment price, color, and the formation of precipitates, more preferably 0.1-0.5 weight%.

본 발명의 조성물은 세라티아 종(Serratia sp.)로부터 생산되는 세라티오펩티다제를 추가로 포함할 수 있다. 상기한 세라티오펩티다제는 소염 작용을 가지고 있어, 발에 발생한 염증을 효과적으로 치료하는데 도움을 준다.The compositions of the present invention may further comprise ceramide thio peptidase which is produced from the species Serratia marcescens (Serratia sp.). The seratopeptidase described above has an anti-inflammatory effect, which helps to effectively treat inflammation in the foot.

생체내에 외래성 유독물질이 침입하여 염증이나 통증을 유발하는 물질이 분비되면 이에 대한 대표적인 방어기작으로서, 소염효소가 상기의 염증성 물질 또는 괴사조직을 제거한다. Exogenous toxic substances invade in vivo and substances causing inflammation or pain are secreted. As a representative defense mechanism, anti-inflammatory enzymes remove the inflammatory substances or necrotic tissue.

이러한 소염효소로는 Serratia sp.로부터 생산되는 단백질분해효소인 세라티오펩티다제가 소염제로서 가장 많이 사용되고 있으며, 상기의 세라티오펩티다제는 분자량이 50 ∼ 52 kD 정도이고 Zn2+를 함유한 메탈로단백질분해효소(metalloprotease)로서, 효소의 최적 pH가 약알칼리성인 단백질분해효소로 알려져 있다.As such anti-inflammatory enzymes, seraopeptidase, a proteolytic enzyme produced from Serratia sp., Is most commonly used as an anti-inflammatory agent. The seraopeptidase is a metal having a molecular weight of about 50 to 52 kD and containing Zn 2+ . As a metalloprotease, it is known as a protease whose optimum pH is weakly alkaline.

본 발명의 조성물은 상기한 성분 외에도, 발세정용 조성물에 사용되는 통상의 첨가제를 추가로 포함할 수 있다. 그러한 예로는 세정작용, 항생작용, 습윤, 침투, 분산 작용 및 거품을 발생시키기 위한 계면활성제; 수분유지를 위한 보습제; 항산화 능력 및 박테리아 또는 곰팡이에 대한 방부능력을 가지고 있는 방부제; 피부의 산화를 방지하는 항산화제; 무좀균과 같은 칸디다 곰팡이를 제거하는 항곰팡이제; 발 냄세 제거 및 향기를 위한 향수; 시각적 효과를 주는 색소; 연고 및 젤의 사용 그리고 편리성을 주기 위한 점도증가제; 및 보습효과를 주기 위한 수분 운반체를 들 수 있다. In addition to the above components, the composition of the present invention may further include conventional additives used in the composition for washing. Such examples include surfactants for generating cleansing, antibiotic, wetting, penetration, dispersion and foaming; Moisturizers for retaining moisture; Preservatives having antioxidant capacity and antiseptic ability against bacteria or fungi; Antioxidants that prevent oxidation of the skin; Antifungal agents that remove Candida fungi such as athlete's foot; Perfumery for removing foot odor and fragrance; Pigments that give a visual effect; Viscosity increasing agents to give the convenience and use of ointments and gels; And a moisture carrier for giving a moisturizing effect.

본 발명의 바람직한 구체예에 따르면, 조성물의 전체 중량에 대해, 계면활성제 10 ∼ 50 중량%, 보습제 0.01 ∼ 10 중량%, 방부제 0.01 ∼ 0.5 중량%, 각질제거제 0.01 ∼ 0.5 중량%, 산화방지제 0.01 ∼ 0.05 중량%, 항곰팡이제 5 ∼ 16 중량%, 향료 0.01 ∼ 5 중량%, 색소 0.01 ∼ 5 중량%, 점도증가제 0.1 ∼ 10 중량%, 수분 운반체 0.1 ∼ 5 중량%, 케라틴 분해효소 0.01 ∼ 1 중량%, 천연물질 0.01 ∼ 10 중량%을 함유하는 조성물은 혼합 조성에 의해 상승효과(Synergism)를 유발하여 각질제거, 청결유지 및 신진 대사의 촉진을 야기하여 각질 제거 및 항균활성이 뛰어났으며, 피부의 탄력 유지에 도움을 제공하였다.According to a preferred embodiment of the present invention, with respect to the total weight of the composition, 10 to 50% by weight of surfactant, 0.01 to 10% by weight of moisturizer, 0.01 to 0.5% by weight of preservative, 0.01 to 0.5% by weight of exfoliant, 0.01 to 0.5% of antioxidant 0.05 wt%, 5 to 16 wt% antifungal agent, 0.01 to 5 wt% perfume, 0.01 to 5 wt% pigment, 0.1 to 10 wt% viscosity increasing agent, 0.1 to 5 wt% water carrier, 0.01 to 1 keratinase Compositions containing 0.01% by weight to 10% by weight of natural substances cause synergism by the mixed composition, resulting in exfoliation, maintaining cleanliness and promoting metabolism, and have excellent exfoliation and antibacterial activity. It helped maintain the elasticity of the.

본 발명의 발 세정용 조성물은 무좀 예방의 기능을 보강하기 위하여, 소금 또는 천일염을 추가할 수도 있다. The foot cleaning composition of the present invention may add salt or sun salt to reinforce the function of athlete's foot prevention.

본 발명의 발 세정용 조성물은 그 제형에 있어서 특별히 제한되지 아니하며, 예를 들어 샴푸, 크림, 마사지 크림, 로션, 겔, 연고 또는 분무제의 형태로 제조될 수 있다. The foot cleaning composition of the present invention is not particularly limited in its formulation, and may be prepared, for example, in the form of a shampoo, cream, massage cream, lotion, gel, ointment or spray.

도 1에서 나타난 바와 같이, 본 발명의 발 세정용 혼합 조성물이 종래 상용되고 있는 발 세정제보다 단백질 분해능이 우수한 결과를 보이고, 케라틴 분해효소를 첨가함으로써, 미첨가된 대조군보다 단백질 분해능이 우수한 결과(도 2)를 확인하였다.As shown in Figure 1 , the foot cleaning mixed composition of the present invention shows a better protein resolution than the conventional foot wash, and by adding keratin degrading enzyme, better protein resolution than the uncontrolled control ( Fig. 2 ) was confirmed.

도 3 내지 도 7의 결과에서 보는 바와 같이, 미생물에서 유래하는 케라틴 분해효소 또는 천연물질을 추가로 함유하는 발 세정용 혼합 조성물은 그람양성균인 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 스타필로코코스 아우레스(Staphylococcus aureus), 또는 엔테로코코스 락티스(Enterococcus lactis)에 대해, 대조군인 스트렙토마이신 보다는 우수한 항균효과를 보이고, 다른 대조군인 테트라사이클린에 대해서는 다소 낮거나, 동등한 항균효과를 나타낸다.As shown in the results of FIGS . 3 to 7, the mixed composition for washing feet, which further contains keratin degrading enzymes or natural substances derived from microorganisms, is a Gram-positive bacterium Bacillus subtilis , Staphylococcus aureus. ( Staphylococcus aureus ), or Enterococcus lactis shows a superior antimicrobial effect than the control streptomycin, and slightly lower or equivalent antimicrobial effect to the other control tetracycline.

그러나, 그람음성균인 대장균(Escherichia coli K12-594) 및 병원성 곰팡이인 칸디다 알비칸스(Candida albicans)에 대해서는 대조군으로 사용된 물질은 전혀 항균효과를 보이지 않는 반면에, 본 발명의 실험군의 경우는 우수한 항균효과를 나타낸다.However, against the Gram-negative bacterium Escherichia coli K12-594 and the pathogenic fungus Candida albicans, the material used as a control showed no antimicrobial effect, whereas the experimental group of the present invention showed excellent antimicrobial effect. Effect.

따라서, 본 발명은 미생물에서 유래한 케라틴 분해효소를 사용할 경우, 미생물로부터 생산됨으로써, 경제적일 뿐 아니라, 그람 양성균, 그람 음성균 및 변원성 곰팡이를 포함하는 전반적인 병원균에 대해서, 우수한 항균 효과를 보임으로써, 발 세정용도에 적합하게 사용될 수 있다. Therefore, the present invention is not only economical by using the microorganism-derived keratin degrading enzyme, but also shows an excellent antibacterial effect against the overall pathogens including gram positive bacteria, gram negative bacteria and mutant fungi, It can be suitably used for foot cleaning purposes.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples.

본 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것이며, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다. 당해 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면, 본 발명 범위 및 목적을 벗어나지 않는 범위 내에서 본 발명을 변형하거나 보완할 수 있을 것이다.This embodiment is intended to illustrate the present invention in more detail, and the scope of the present invention is not limited to these examples. Those skilled in the art will be able to modify or supplement the present invention without departing from the scope and object of the invention.

<실시예 1> 발 세정용 조성물 1의 제조 Example 1 Preparation of Composition 1 for Foot Washing

하기 표 1에서 제시된 바와 같이, A의 조성물을 90℃에서 용해시킨 후, 80℃의 온도에서 A 및 B의 조성물을 혼합하여 완전히 용해시켰다. 상기 반응액의 온도가 55℃로 내려갔을 때, C의 조성물을 첨가하고, 30℃로 냉각시킨 후 D의 조성물을 첨가하여, 발 세정용 조성물 1을 제조하였다. As shown in Table 1 below, the composition of A was dissolved at 90 ° C., and then the compositions of A and B were mixed to complete dissolution at a temperature of 80 ° C. When the temperature of the reaction solution was lowered to 55 ° C, the composition of C was added, and after cooling to 30 ° C, the composition of D was added to prepare the composition 1 for foot washing.

원료명Raw material name 함량(중량%)Content (% by weight) 비고Remarks Ammonium lauryl sulfate Ammonium lauryl sulfate 2020 AA Ammonium lauryl ethyl sulfate Ammonium lauryl ethyl sulfate 1010 methyl paraben methyl paraben 0.10.1 Coconut Acid diethanol amide Coconut Acid diethanol amide 2.52.5 Glycerin Glycerin 1One BB Propylene glycol Propylene glycol 22 소금 Salt 1.51.5 후박 Thick 1One EDTA EDTA 0.10.1 mentol mentol 1One CC 향 (green tea) Incense (green tea) 1One 색소 (Blue) Pigment (Blue) 약간slightly 케라틴 분해효소 Keratinase 0.050.05 DD

<실시예 2> 발 세정용 조성물 2의 제조 Example 2 Preparation of Composition 2 for Foot Washing

하기 표 2에서 제시된 조성물을 이용하여, 상기 실시예 14와 동일한 방법으로 수행하여, 약한 점성을 갖으며 주황색을 띠고 라일락 향의 오일성질을 갖는 발 세정용 조성물 2를 제조하였다.Using the composition shown in Table 2 below, was carried out in the same manner as in Example 14, to prepare a composition for foot washing 2 having a weak viscosity, orange color and oily flavor of lilac.

원료명Raw material name 함량(중량, %)Content (weight,%) 비고Remarks Ammonium lauryl sulfate Ammonium lauryl sulfate 1515 AA Ammonium lauryl ethyl sulfate Ammonium lauryl ethyl sulfate 2020 Ethyl Sulfate 430 Ethyl Sulfate 430 1010 Coconut Acid diethanol amide Coconut Acid diethanol amide 33 methyl paraben methyl paraben 0.10.1 Glycerin Glycerin 1One BB Propylene glycol Propylene glycol 1One 소금 Salt 33 EDTA EDTA 0.10.1 Sodium sulfate Sodium sulfate 0.10.1 Alpha hydroxy acid Alpha hydroxy acid 0.60.6 Urea Urea 33 mentol mentol 1One CC 향 (라일락) Incense (Lilac) 약간slightly 색소 (주황색) Color (orange) 약간slightly 케라틴 분해효소 Keratinase 0.050.05 DD

<실시예 3> 발 세정용 조성물 3의 제조 Example 3 Preparation of Foot Washing Composition 3

하기 표 3에서 제시된 바와 같이, A의 조성물을 80℃에서 용해시키고 B 및 C의 조성물을 80℃에서 각각 용해시킨 후 65℃의 온도가 되었을 때 상기 A, B, 및 C의 조성물을 혼합하였다. 온도 30℃로 냉각되었을 때, D의 조성물을 혼합하여, 발 세정용 조성물 3을 제조하였다.As shown in Table 3 below, the compositions of A were dissolved at 80 ° C. and the compositions of B and C were dissolved at 80 ° C., respectively, and the compositions of A, B, and C were mixed when the temperature reached 65 ° C. When cooled to a temperature of 30 ° C., the composition of D was mixed to prepare a composition 3 for foot washing.

원료명Raw material name 함량(중량, %)Content (weight,%) 비고Remarks Ammonium lauryl sulfate Ammonium lauryl sulfate 2020 AA Coconut Acid diethanol amide Coconut Acid diethanol amide 1010 methyl paraben methyl paraben 55 Glycerin Glycerin 1One BB Sodium sulfate Sodium sulfate 0.10.1 EDTA EDTA 0.10.1 allantoin allantoin 0.10.1 소금 Salt 22 구연산 Citric acid 0.30.3 CC 후박 Thick 1One Urea Urea 0.50.5 Mentol Mentol 1One DD 향 (mint) Incense (mint) 1One 색소 (Blue) Pigment (Blue) 약간slightly 케라틴 분해효소Keratinase 0.050.05

<실시예 4> 발 세정용 조성물 4의 제조 Example 4 Preparation of Foot Washing Composition 4

하기 표 4에서, A의 조성물과 B의 조성물을 80℃에서 용해시키고 C의 조성물을 70℃에서 용해시킨 후, 상기 A, B, 및 C의 조성물을 혼합하였다. 상기 혼합액이 30℃로 냉각이 되었을 때 D의 조성물을 혼합하여, 한다. 멘톨로 인한 현탁의 푸른색이고 점성이 있는 발 세정용 조성물 4를 제조하였다.In Table 4 below, the composition of A and the composition of B were dissolved at 80 ° C. and the composition of C was dissolved at 70 ° C., and then the compositions of A, B, and C were mixed. When the said mixture liquid cooled to 30 degreeC, the composition of D is mixed and it is carried out. A blue, viscous foot-washing composition 4 of suspension due to menthol was prepared.

원료명Raw material name 함량(중량, %)Content (weight,%) 비고Remarks Ammonium lauryl sulfate Ammonium lauryl sulfate 3030 AA Ammonium lauryl ethyl sulfate Ammonium lauryl ethyl sulfate 55 Ethyl Sulfate 430 Ethyl Sulfate 430 0.20.2 Glycerin Glycerin 1One BB Propylene glycol Propylene glycol 22 EDTA EDTA 0.10.1 소금 Salt 33 구연산 Citric acid 0.30.3 CC 후박 Thick 1One Urea Urea 0.50.5 Mentol Mentol 1.51.5 allantoin allantoin 0.10.1 sodium benzoate sodium benzoate 0.10.1 케라틴 분해효소 Keratinase 0.050.05 DD

<실시예 5> 발 세정용 조성물 5의 제조 Example 5 Preparation of Foot Washing Composition 5

A의 조성물을 85℃에서 용해시키고 B 및 C의 조성물을 80℃에서 각각 용해시킨 후 65℃의 온도에서, 상기 A, B, C, 및 D의 조성물을 혼합하였다. 30℃로 냉각이 되었을 때 E의 조성물을 혼합하여, 멘톨로 인해 푸른색을 띠며 강한 점성을 갖는 발 세정용 조성물 5를 제조하였다.The compositions of A were dissolved at 85 ° C. and the compositions of B and C were dissolved at 80 ° C., respectively, and then the compositions of A, B, C, and D were mixed at a temperature of 65 ° C. The composition of E was mixed when cooled to 30 ° C., thereby preparing a foot washing composition 5 which was blue due to menthol and had a strong viscosity.

원료명Raw material name 함량(중량, %)Content (weight,%) 비고Remarks Ammonium lauryl sulfate Ammonium lauryl sulfate 3030 AA Ethyl Sulfate 430 Ethyl Sulfate 430 1515 Coconut Acid diethanol amide Coconut Acid diethanol amide 55 methyl paraben methyl paraben 0.10.1 Propylene glycol Propylene glycol 22 BB Glycerin Glycerin 1One 소금 Salt 55 EDTA EDTA 0.10.1 allantoin allantoin 0.10.1 Sodium sulfate Sodium sulfate 0.10.1 Sodium benzoate Sodium benzoate 0.10.1 구연산 Citric acid 0.30.3 CC 후박 Thick 22 Urea Urea 0.50.5 향 (라일락) Incense (Lilac) 약간slightly DD mentol mentol 1One 케라틴 분해효소 Keratinase 0.050.05 EE

<실시예 6> 발 세정용 조성물 6의 제조 Example 6 Preparation of Foot Washing Composition 6

A의 조성물을 90℃에서 용해시킨 후, 80℃로 냉각시켜 B의 조성물을 첨가하였다. C의 조성물을 90℃에서 용해시킨 후 80℃로 냉각시켜 D의 조성물을 첨가하였다. 상기 A 및 B의 혼합액과 C 및 D의 혼합액, 그리고 E 및 F의 조성물을 65℃로 냉각되었을 때 혼합하였고, 30℃로 완전히 냉각이 되었을 때 G의 조성물을 첨가하여, 발 세정용 조성물 6를 제조하였다.The composition of A was dissolved at 90 ° C. and then cooled to 80 ° C. to add the composition of B. The composition of C was dissolved at 90 ° C. and then cooled to 80 ° C. to add the composition of D. The mixture of A and B, the mixture of C and D, and the composition of E and F were mixed when cooled to 65 ° C., and the composition of G was added when the mixture was completely cooled to 30 ° C. Prepared.

원료명Raw material name 함량(중량, %)Content (weight,%) 비고Remarks Sodium Lauryl Sulfate Sodium Lauryl Sulfate 30 이상30 or more AA Ethyl Sulfate 430 Ethyl Sulfate 430 15 이상More than 15 Lauric acid diethanol amide Lauric acid diethanol amide 55 methyl paraben methyl paraben 0.20.2 Urea Urea 1.61.6 BB Propylene glycol Propylene glycol 22 CC Glycerin Glycerin 1One 소금 Salt 22 EDTA EDTA 0.10.1 allantoin allantoin 0.50.5 DD 구연산 Citric acid 0.30.3 EE 후박 Thick 22 Sodium sulfate Sodium sulfate 0.20.2 Sodium citrate Sodium citrate 0.10.1 향 (라일락) Incense (Lilac) 약간slightly FF mentol mentol 1One 케라틴 분해효소 Keratinase 0.050.05 GG

<실시예 7> 발 세정용 조성물 7의 제조 Example 7 Preparation of Foot Washing Composition 7

A의 조성물과 B의 조성물을 각각 80℃에서 용해시키고 50℃로 냉각되었을 때, C의 조성물을 혼합시켰다. 상기 A, B, 및 C의 혼합액의 온도가 30℃가 되었을 때 D의 조성물을 첨가하여, 청록색을 띠고, 투명한 액상의 발 세정용 조성물 7을 제조하였다. The composition of C was mixed when the composition of A and the composition of B were each dissolved at 80 ° C. and cooled to 50 ° C. When the temperature of the liquid mixture of A, B, and C reached 30 ° C., the composition of D was added to give a turquoise, transparent liquid foot washing composition 7.

원료명Raw material name 함량(중량, %)Content (weight,%) 비고Remarks Sodium Lauryl Sulfate Sodium Lauryl Sulfate 3535 AA Coconut Acid diethanol amide Coconut Acid diethanol amide 55 methyl paraben methyl paraben 0.10.1 Propylene glycol Propylene glycol 22 BB 소금 Salt 22 EDTA EDTA 0.10.1 allantoin allantoin 0.20.2 후박 Thick 22 Sodium benzoate Sodium benzoate 0.10.1 Urea Urea 22 mentol mentol 1One CC 케라틴 분해효소 Keratinase 0.050.05 DD

<실시예 8> 발 세정용 조성물 8의 제조 Example 8 Preparation of Foot Washing Composition 8

A의 조성물을 85℃에서 용해시키고 B의 조성물을 80℃에서 용해시켜 혼합하였다. 상기 A 및 B의 혼합액이 65℃로 되었을 때 C를 혼합하고 55℃의 온도에서 D의 조성물을 혼합하였다. 상기 혼합액을 30℃로 냉각시키고 E의 조성물을 첨가하여 발 세정용 조성물 8을 제조하였다.The composition of A was dissolved at 85 ° C. and the composition of B was dissolved at 80 ° C. and mixed. When the mixture of A and B reached 65 ° C., C was mixed and the composition of D was mixed at a temperature of 55 ° C. The mixed solution was cooled to 30 ° C and the composition of E was added to prepare a composition 8 for foot washing.

원료명Raw material name 함량(중량, %)Content (weight,%) 비고Remarks Ammonium lauryl sulfate Ammonium lauryl sulfate 3535 AA Coconut Acid diethanol amide Coconut Acid diethanol amide 55 methyl paraben methyl paraben 0.10.1 Propylene glycol Propylene glycol 22 BB 소금 Salt 33 EDTA EDTA 0.10.1 allantoin allantoin 0.20.2 후박 Thick 22 Sodium benzoate Sodium benzoate 0.20.2 Urea Urea 22 Citric acid Citric acid 0.30.3 색소 (Blue) Pigment (Blue) 약간slightly CC menthol menthol 1One DD 케라틴 분해효소 Keratinase 0.050.05 EE

<실시예 9> 발 세정용 조성물 9의 제조 Example 9 Preparation of Foot Washing Composition 9

A의 조성물과 B의 조성물을 80℃에서 용해시키고 45℃로 냉각이 되었을 때 C의 조성물을 혼합하였다. 상기 A, B, 및 C의 혼합액이 30℃정도로 되었을 때 D를 혼합하여 발 세정용 조성물 9를 제조하였다. The composition of A and the composition of B were dissolved at 80 ° C. and the composition of C was mixed when cooled to 45 ° C. When the mixture of A, B, and C was about 30 ° C., D was mixed to prepare a composition 9 for foot washing.

원료명Raw material name 함량(중량, %)Content (weight,%) 비고Remarks Sodium Lauryl Sulfate Sodium Lauryl Sulfate 4040 AA Coconut Acid diethanol amide Coconut Acid diethanol amide 55 methyl paraben methyl paraben 0.10.1 Propylene glycol Propylene glycol 22 BB 소금 Salt 33 EDTA EDTA 0.10.1 allantoin allantoin 0.20.2 후박 Thick 22 Sodium benzoate Sodium benzoate 0.10.1 Urea Urea 22 menthol menthol 1One CC 향 (페파민트 또는 민트) Incense (pepamine or mint) 1.51.5 케라틴 분해효소 Keratinase 0.050.05 DD

<실시예 10> 발 세정용 조성물 10의 제조 Example 10 Preparation of Foot Washing Composition 10

A의 조성물과 B의 조성물을 80℃에서 용해시키고 45℃로 냉각이 되었을 때 C의 조성물을 혼합하였다. 상기 A, B, 및 C의 혼합액이 30℃정도로 되었을 때 D를 혼합하여 발 세정용 조성물 10을 제조하였다. The composition of A and the composition of B were dissolved at 80 ° C. and the composition of C was mixed when cooled to 45 ° C. When the mixed solution of A, B, and C was about 30 ° C., D was mixed to prepare a composition 10 for foot washing.

원료명Raw material name 함량(중량, %)Content (weight,%) 비고Remarks Sodium Lauryl Sulfate Sodium Lauryl Sulfate 4040 AA Coconut Acid diethanol amide Coconut Acid diethanol amide 55 methyl paraben methyl paraben 0.10.1 Propylene glycol Propylene glycol 22 BB 소금 Salt 33 EDTA EDTA 0.10.1 allantoin allantoin 0.20.2 후박 Thick 22 Sodium benzoate Sodium benzoate 0.10.1 Urea Urea 22 menthol menthol 1One CC 향 (페파민트 또는 민트) Incense (pepamine or mint) 1.51.5 케라틴 분해효소Keratinase 0.050.05 DD 세라티오펩티다제Cerathiopeptidase 0.010.01

상기 실시예에서 제조된 본 발명의 발 세정용 조성물에 대한 용도로서 적합한지를 하기와 같이 실험하였다.Whether it is suitable as a use for the foot cleaning composition of the present invention prepared in the above embodiment was tested as follows.

<실험예 1> 단백질 분해능 실험Experimental Example 1 Protein Resolution Experiment

본 발명의 발 세정용 조성물이 각질층의 주성분인 케라틴을 포함하는 단백질에 대한 분해능을 알아보기 위하여 하기와 같이 실험하였다. In order to determine the resolution of the protein for the foot washing composition of the present invention keratin-containing protein of the stratum corneum as follows.

스킴밀크 (Skim milk) 2%에 아가(agar) 1.5%를 혼합하여 121℃에서 15분간 고압멸균하여 단백질 활성 측정 배지를 제조하였다. 상기 제조된 배지에 대조군과 본 발명의 발 세정용 조성물을 첨가한 실험군을 제작하여 37℃에서 18 ∼ 24 시간 반응시켜 단백질 분해능을 측정하였다.1.5% of agar was mixed with 2% of skim milk and autoclaved at 121 ° C. for 15 minutes to prepare a protein activity measurement medium. The experimental group to which the control and the foot washing composition of the present invention was added to the prepared medium was prepared and reacted at 37 ° C. for 18 to 24 hours to measure protein resolution.

대조군은 각질제거능을 갖는 외산(B; Body shop, BSK corporation, 영국)의 발 세정제, 유화작용, 보습효과, 항산화효과 및 각질제거능과 동시에 세척용의 효과를 갖는 외산의 발 세정제(C; 그린티 스크럽, 엘리자베스아덴, 미국)로 구성하였으며, 실험군은 상기 실시예 9에서 제조된 조성물을 사용하였다.The control group is a foot cleanser of an external product (B; Body shop, BSK corporation, UK) having exfoliating ability, an emulsifying effect, a moisturizing effect, an antioxidant effect, and an exfoliating ability and a cleansing effect of a foreign product (C; green tea) Scrub, Elizabeth Arden, USA), the experimental group was used in the composition prepared in Example 9.

도 1에서와 같이, 대조군인 각각의 외산의 발 세정제에서는 단백질 분해능이 관찰되지 않는 반면에(B, C), 본 발명의 조성물은 높은 단백질 분해능을 보였으며(A), 각질층의 주성분인 케라틴을 포함하는 단백질을 효과적으로 분해하여 각질 제거 및 발세정제의 용도로 유용하게 사용될 수 있음을 확인하였다.As shown in FIG. 1, protein resolution was not observed in the foot washes of the respective foreign acids as a control (B, C), whereas the composition of the present invention showed high protein resolution (A), and the keratin, which is the main component of the stratum corneum, was used. It was confirmed that the protein can be effectively used to effectively remove the exfoliation and the cleaning of the containing protein.

<실험예 2> 케라틴 분해효소에 의한 상승 효과 측정Experimental Example 2 Measurement of Synergy by Keratin Degrading Enzyme

케라틴 분해효소에 의한 상승효과(Synergism)를 알아보기 위해서 하기와 같이 실험하였다. In order to determine the synergism by keratinase (Synergism) was tested as follows.

상기 실시예 9의 조성물과, 상기 실시예 9에서 케라틴 분해효소를 첨가하지 않고 제조된 조성물을 상기 실험예 1과 동일한 방법으로 단백질 분해능을 실험하였으며, 그 결과를 도 2에 나타내었다. The composition of Example 9 and the composition prepared without adding keratinase in Example 9 were tested for protein resolution in the same manner as in Experimental Example 1, and the results are shown in FIG. 2.

그 결과로서, 케라틴 분해효소를 첨가하지 않은 대조군은 각질제거제에 의해 일부 단백질의 분해를 확인할 수 있었으나, 그 효과는 미비하였다(B). 그러나 케라틴 분해효소를 첨가하여 제조된 조성물은 상대적으로 높은 단백질 분해능을 보였다(A).As a result, the control group without addition of keratin degrading enzyme was able to confirm the degradation of some proteins by the exfoliating agent, but the effect was insufficient (B). However, the composition prepared by adding keratin degrading enzyme showed a relatively high proteolytic ability (A).

상기의 결과로부터, 각질 제거제에 케라틴 분해효소를 추가로 공급함으로써, 단백질 분해능에 대한 상승적 효과를 제공하였다.From the above results, the keratinase was further supplied to the exfoliant to provide a synergistic effect on protein resolution.

<실험예 3> 병원 미생물에 대한 항균 능력 실험Experimental Example 3 Antimicrobial Activity Test against Hospital Microorganisms

상기 실시예에서 제조된 발 세정용 조성물에 대한 병원 미생물에 대한 항균 능력 실험을 하기와 같이 실시하였으며, 그 결과를 도 4 내지 도 7에 나타내었다. 도 4 내지 도 7에서, A는 실시예 9에서 제조된 발 세정용 조성물(5 ㎕)을 처리하여 얻어진 결과이며, B는 스트렙토마이신(Stretomycin, 50 ㎍/㎕)을 처리하여 얻어진 결과이고, C는 테트라사이클린(Tetracyclin, 2 ㎍/㎕)을 처리하여 얻어진 결과이다. The antimicrobial activity test against the pathogenic microorganisms for the foot cleaning composition prepared in the above example was carried out as follows, and the results are shown in FIGS. 4 to 7. 4 to 7, A is the result obtained by treating the foot washing composition (5 μl) prepared in Example 9, B is the result obtained by treating streptomycin (Stretomycin, 50 μg / μl), C Is the result obtained by treatment with Tetracyclin (2 μg / μl).

<1-1> 그람 양성균에 대한 항균실험<1-1> Antimicrobial test for Gram-positive bacteria

그람양성균(Gram-positive)으로는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis; KCTC No. 3068), 스타필로코코스 아우레스(Staphylococcus aureus; KCTC No. 1928), 및 엔테로코코스 락티스(Enterococcus lactis; KCTC No. 2012)를 사용하였으며, 한국생명공학연구원 유전자은행(Korean Collection for Type Culture; KCTC)에서 분양받아 사용하였다. 실험을 위한 병원균주의 배양은 LB 아가 배지(1% bactopeptone, 0.5% yeast extract, 1% sodium chloride, 1.2% agar)에 계대 배양한 후 단일 콜로니(single colony)를 취하여, 37℃에서 24 시간동안 액체배양하였다. 상기 배양액 일부를 다시 3 ∼ 6 시간동안 액체 배양하여 미드-로가리듬 (mid-logarithmic) 상태(OD 650. 0.3)을 유지하여 사용하였다.Gram-positive Bacillus subtilis (KCTC No. 3068), Staphylococcus aureus ( KCTC No. 1928), And Enterococcus lactis (KCTC No. 2012) were used, and were used by the Korea Collection for Type Culture (KCTC). Culture of the pathogen strain for the experiment was passaged in LB agar medium (1% bactopeptone, 0.5% yeast extract, 1% sodium chloride, 1.2% agar), and then taken a single colony (liquid colony), liquid at 37 ℃ for 24 hours Incubated. A portion of the culture was again incubated for 3 to 6 hours to maintain a mid-logarithmic state (OD 650.0.3).

6 ㎖의 멸균된 LB 아가 배지를 45℃ 정도로 식히고 난 다음에 각각의 균주가 농도 107 CFU/㎖ 배지(media)가 되도록 하여 LB 배지에 섞어 플레이트(plate)에 붓고 충분히 식혔다. 완전히 굳은 배지에 2 ㎡의 홀을 뚫고 대조군 및 실험군의 2 ㎕를 첨가하여 37℃에서 18 ∼ 24 시간동안 배양을 하여 항균능력을 실험하였다.After 6 ml of sterile LB agar medium was cooled to about 45 ° C., each strain was brought to a concentration of 10 7 CFU / ml medium, mixed with LB medium, poured into a plate, and cooled sufficiently. 2 ㎡ holes were added to the completely hardened medium, and 2 μl of the control group and the experimental group were added thereto, followed by incubation at 37 ° C. for 18 to 24 hours to test the antibacterial ability.

도 3 및 도 4에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 조성물은 그람양성세균인 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) 및 스타필로코코스 아우레스(Staphylococcus aureus)의 경우 대조군으로 사용된 스트렙토마이신보다는 높은 항생 효과를 보였으나, 다른 대조군인 테트라사이클린에 대해서는 낮은 항균 활성을 보였다.As can be seen in Figures 3 and 4, the composition of the present invention is higher antibiotic than streptomycin used as a control for the Gram-positive bacteria Bacillus subtilis and Staphylococcus aureus It showed an effect, but showed a low antimicrobial activity against tetracycline, another control.

반면에, 그람양성균인 엔테로코코스 락티스(Enterococcus lactis)에 대한 결과는 도 5에서 보는 바와 같이, 대조군인 스트렙토마이신 및 테트라사이클린에서는 거의 활성을 보이지 못하지만, 실험군인 실시예 9의 조성물은 높은 항균활성을 보였다.On the other hand, the results for the gram-positive bacteria Enterococcus lactis ( Enterococcus lactis ), as shown in Figure 5, showed little activity in the control streptomycin and tetracycline, but the composition of Example 9 of the experimental group has a high antimicrobial activity Showed.

상기의 결과로부터, 본 발명의 조성물은 그람 양성균인 바실러스 서브틸리스(KCTC No. 3068), 스타필로코코스 아우레스(KCTC No. 1928), 및 엔테로코코스 락티스(KCTC No. 2012)에 대해서 고른 항생 능력을 갖고 있음을 확인할 수 있었다.From the above results, the composition of the present invention is Gram-positive bacteria Bacillus subtilis (KCTC No. 3068), Staphylococcus aures (KCTC No. 1928), And it can be confirmed that it has an even antibiotic ability against Enterocococcus lactis (KCTC No. 2012).

<1-2> 그람 음성균에 대한 항균실험<1-2> Antimicrobial test for Gram-negative bacteria

그람 음성균으로 한국생명공학연구원 유전자은행(Korean Collection for Type Culture; KCTC)에서 분양받은 대장균(Escherichia coli K12-594)을 사용하는 것을 제외하고는 상기 단계 1과 동일한 방법으로 수행되었다.As Gram-negative bacteria, Escherichia coli K12-594 obtained from the Korean Collection for Type Culture (KCTC) was used in the same manner as in Step 1.

상기 대조군은 상기 단계 1에서 사용된 스트렙토마이신(Streptomycin, Sigma. USA)과 테트라사이클린(Tetracycline, Sigma. USA)을 동일한 농도로 사용하였으며, 실험군은 상기 실시예 9에서 제조된 발 세정용 조성물을 동일한 농도로 사용하였다. The control group used the same concentration of streptomycin (Streptomycin, Sigma. USA) and tetracycline (Tetracycline, Sigma. USA) used in step 1, the experimental group was the same foot cleaning composition prepared in Example 9 Used as a concentration.

도 6의 결과로부터, 그람음성균인 대장균(Escherichia coli K12-594)에 대해 대조군은 약한 항생능력을 보인 반면 실시예 9의 조성물을 첨가한 실험군은 상대적으로 높은 항생능력을 보였다.From the results of FIG. 6, the control group showed weak antibiotic ability against the Gram-negative bacterium Escherichia coli K12-594, whereas the experimental group to which the composition of Example 9 was added showed a relatively high antibiotic ability.

<1-3> 곰팡이 균에 대한 항균실험<1-3> Antibacterial test for fungi

곰팡이 균으로 한국생명공학연구원 유전자은행(Korean Collection for Type Culture; KCTC)에서 분양받은 곰팡이 균(Candida albicans KCTC No. 7965)을 사용하였다.As a fungal bacterium, a fungal bacterium ( Candida albicans KCTC No. 7965) obtained from the Korean Collection for Type Culture (KCTC) was used.

실험을 위한 병원균주의 배양은 토마토 덱스트로즈 아가 배지(potato dextrose agar medium)(30% dice potato, 2% glucose, 1.2% agar)에 계대 배양한 후 단일 콜로니(single colony)를 취하여, 30℃에서 24 시간동안 액체배양하였다. 상기 배양액 일부를 다시 3 ∼ 6 시간동안 액체 배양하여 미드 로가리듬 상태(OD 650. 0.3)을 유지하여 사용하였다. Culture of the pathogen strain for the experiment was passaged in tomato dextrose agar medium (30% dice potato, 2% glucose, 1.2% agar) and then taken a single colony (single colony), at 30 ℃ Liquid culture for 24 hours. A portion of the culture solution was further liquid cultured for 3 to 6 hours to maintain a mid logarithm state (OD 650.0.3).

6 ㎖의 멸균된 LB 아가 배지를 45℃ 정도로 식히고 난 다음에 각각의 균주가 농도 107 CFU/㎖ 배지(media)가 되도록 하여 LB 배지에 섞어 플레이트(plate)에 붓고 충분히 식혔다. 완전히 굳은 배지에 2 ㎡의 홀을 뚫고 대조군 및 실험군의 2 ㎕를 첨가하여 30℃에서 18 ∼ 24 시간동안 배양을 하여 항균능력을 실험하였다.After 6 ml of sterile LB agar medium was cooled to about 45 ° C., each strain was brought to a concentration of 10 7 CFU / ml medium, mixed with LB medium, poured into a plate, and cooled sufficiently. 2 ㎡ holes were added to the completely hardened medium, and 2 μl of the control group and the experimental group were added thereto, followed by incubation at 30 ° C. for 18 to 24 hours, to test the antibacterial ability.

상기 대조군 및 실험군은 상기 단계 1에서 사용한 것과 동일한 것을 선택하였고 동일한 농도로 사용하였다. The control group and the experimental group were selected the same as those used in step 1 and used at the same concentration.

이러한 결과, 대조군인 스트렙토마이신 및 테트라사이클린은 곰팡이 (Candida albicans)에 대한 항생 능력이 관찰되지 않은 반면에, 실험군인 실시예 9의 조성물은 높은 항생 능력을 보였다(도 7). 그러므로, 본 발명의 조성물은 상기에서 살펴본 바와 같이, 그람 양성균, 그람 음성균, 및 곰팡이에 대해 종래 사용화된 항생제보다 우수한 효과를 보임으로써, 발 세정제로서 유용하게 사용될 수 있다.As a result, while the control group Streptomycin and tetracycline did not observe the antibiotic ability against the fungi ( Candida albicans ), the composition of Example 9 of the experimental group showed a high antibiotic ability (FIG. 7). Therefore, the composition of the present invention can be usefully used as a foot cleanser, as described above, by showing an effect superior to conventionally used antibiotics for Gram-positive bacteria, Gram-negative bacteria, and fungi.

<실험예 4> 소염 효과 실험Experimental Example 4 Anti-inflammatory Effect Experiment

실시예 9의 조성물과 실시예 10의 조성물을 사용하여 소염 효과를 측정하였다.The anti-inflammatory effect was measured using the composition of Example 9 and the composition of Example 10.

브라운 쉬미츠의 방법[Braun, V. & Schmitz, G., Arch, Microbiol. 1980, 124: 55-61]에 따라서, 실시예 9 및 실시예 10에서 제조된 조성물의 단백질분해효소의 역가를 측정하였다. 보다 구체적으로, 아조 카제인(azo-casein; Sigma, USA) 0.24 g을 50 mM 인산 완충 용액(Phosphate buffer, pH 7.5) 10 ㎖에 녹여 기질 용액을 제조하고, 기질용액 300 ㎕와 세포 배양액 100 ㎕를 혼합하여 37℃에서 30 분 동안 반응시킨 후, 반응액에 10% 삼염화 초산(trichloride acetate) 300 ㎕를 첨가하여 상온에서 1 시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 7,000 rpm으로 원심분리하여 펠렛(pellet)과 상등액을 분리하였고, 상등액 300 ㎕에 10% 수산화나트륨 30 ㎕를 첨가하여 420 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 효소의 역가는 흡광도 수치가 1.0 증가할 때를 1 유니트(unit)로 정의하였다. 본 방법의 1 유니트는 단백질 분해효소가 기질인 아조 카제인을 37℃의 조건에서 분당 분해를 통한 아조기와 카제인으로 용출한 양을 정량적으로 측정하였다.Brown Schmidt's method [Braun, V. & Schmitz, G., Arch, Microbiol . 1980, 124: 55-61, titers of proteases of the compositions prepared in Examples 9 and 10 were measured. More specifically, 0.24 g of azo-casein (Sigma, USA) is dissolved in 10 ml of 50 mM Phosphate buffer (pH 7.5) to prepare a substrate solution, and 300 μl of substrate solution and 100 μl of cell culture solution. After mixing and reacting at 37 ° C. for 30 minutes, 300 μl of 10% trichloride acetate was added to the reaction solution and reacted at room temperature for 1 hour. The reaction solution was centrifuged at 7,000 rpm to separate the pellet and the supernatant, and 30 µl of 10% sodium hydroxide was added to 300 µl of the supernatant, and the absorbance was measured at 420 nm. The titer of the enzyme was defined as 1 unit when the absorbance value increased by 1.0. One unit of this method quantitatively measured the amount of azo casein, a protease-substrate substrate, eluted into azo and casein through digestion per minute at 37 ° C.

상기와 같이 실험한 결과, 실시예 10의 조성물은 실시예 9의 조성물에 비해 단백질분해 활성이 약 1.7 배 정도 향상되었음을 관찰할 수 있었다. 따라서, 소염 효과를 갖는 세라티오펩타아제를 추가로 포함함으로써, 염증치료에 효과가 있음을 확인할 수 있었다.As a result of the experiment, it was observed that the composition of Example 10 had about 1.7 times improved proteolytic activity compared to the composition of Example 9. Therefore, it was confirmed that by further comprising a cerapiopeptase having an anti-inflammatory effect, it is effective in the treatment of inflammation.

상기에서 살펴본 바와 같이, 본 발명은 미생물로부터 유래된 케라틴 분해효소 및 각질 제거제를 포함하고, 세라티오펩티다제 또는 천연물질을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 발 세정용 조성물을 얻었으며, 미생물로부터 유래한 케라틴 분해효소 또는 천연식물 군에서 선택될 수 있는 천연물질을 추가로 함유함으로써, 각질층의 주성분인 케라틴을 포함하는 단백질을 분해하는 데 상승효과를 유발하고, 항균효과 및 신진대사를 증진하여, 각질제거, 청결유지, 및 건강에 도움을 줄 수 있으며, 본 발명의 조성물은 바실러스 서브틸리스, 스타필로코코스 아우레스, 엔테로코코스 락티스 등의 그람 양성균, 대장균의 그람 음성균, 및 곰팡이를 포함하는 병원균의 전반에, 우수한 항생효과를 보임으로써, 발 세정제로서 유용하게 사용될 수 있다.As described above, the present invention includes a keratin degrading enzyme and a keratin remover derived from a microorganism, and has obtained a composition for cleaning feet, characterized in that it further comprises a ceratopeptidase or a natural substance. By additionally containing a keratin degrading enzyme or a natural substance selected from the group of natural plants, it causes a synergistic effect in degrading the protein containing keratin, the main component of the stratum corneum, enhances antimicrobial effect and metabolism, Exfoliation, cleanliness, and health, the composition of the present invention is Bacillus subtilis, Staphylococcus Aureus, It can be usefully used as a foot cleaning agent by showing excellent antibiotic effect over gram-positive bacteria such as enterococcus lactis, gram-negative bacteria of Escherichia coli, and fungi.

도 1은 본 발명의 발 세정용 조성물과 종래의 발 세정제와의 단백질 분해능을 비교한 결과이고, 1 is a result of comparing the protein resolution of the foot cleaning composition of the present invention and the conventional foot cleaning agent,

도 2는 케라틴 분해효소가 첨가된 시험군 및 비첨가된 대조군의 단백질 분해능을 비교한 결과이고, Figure 2 is a result of comparing the protein resolution of the test group and keratin added with keratinase,

도 3은 그람양성균인 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)에 대한 항생효과를 나타낸 것이고, Figure 3 shows the antibiotic effect on the Gram-positive bacteria Bacillus subtilis ( Bacillus subtilis ),

도 4는 그람양성균인 스타필로코코스 아우레스(Staphylococcus aureus)에 대한 항생효과를 나타낸 것이고, Figure 4 shows the antibiotic effect on the Gram-positive bacteria Staphylococcus aureus ,

도 5는 그람양성균인 엔테로코코스 락티스(Enterococcus lactis)에 대한 항생효과를 나타낸 것이고, Figure 5 shows the antibiotic effect against Gram-positive bacteria Enterococcus lactis ,

도 6은 그람음성균인 대장균(Escherichia coli K12-594)에 대한 항생효과를 나타낸 것이고, Figure 6 shows the antibiotic effect on the Gram-negative bacteria Escherichia coli K12-594,

도 7은 병원성 곰팡이인 칸디다 알비칸스(Candida albicans)에 대한 항생효과를 나타낸 것이다. Figure 7 shows the antibiotic effect on the pathogenic fungus Candida albicans .

Claims (9)

후박, 쑥, 녹차, 오가피, 인삼, 마늘 및 은행잎으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 이상의 천연물질; One or more natural substances selected from the group consisting of humbac, mugwort, green tea, ogapi, ginseng, garlic and ginkgo biloba; 알파히드록시산, 베타히드록시산, 요소, 이소세린, 브로멜라인, 파파인으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 이상의 각질제거제; 및One or more exfoliants selected from the group consisting of alpha hydroxy acids, beta hydroxy acids, urea, isoserine, bromelain, papain; And 케라틴 분해효소를 포함하는 항균 및 항진균용 발 세정용 조성물.Antibacterial and antifungal foot washing composition comprising keratin degrading enzyme. 제 1항에 있어서 상기 천연물질이 후박 또는 쑥인 것을 특징으로 하는 발 세정용 조성물.The composition of claim 1, wherein the natural substance is thick or wormwood. 제 1 항에 있어서, 상기 발 세정용 조성물이 세라티오펩티다제를 추가로 포함할 수 있는 것을 특징으로 하는 발 세정용 조성물.The composition of claim 1, wherein the composition for foot cleansing may further include ceratiopeptidase. 제 1 항에 있어서, 상기 발 세정용 조성물이 계면활성제, 보습제, 방부제, 산화방지제, 항곰팡이제, 향료, 색소, 점도증가제, 수분운반체, 향료 및 이들의 혼합물로 구성되는 군에서 선택되는 첨가성분을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 발 세정용 조성물.The method according to claim 1, wherein the foot cleaning composition is selected from the group consisting of surfactants, humectants, preservatives, antioxidants, antifungal agents, flavoring agents, pigments, viscosity increasing agents, water carriers, flavoring agents, and mixtures thereof. A composition for washing feet, further comprising a component. 제 1항에 있어서 상기 각질제거제가 알파히드록시산 또는 요소인 것을 특징으로 하는 발 세정용 조성물.The foot cleansing composition according to claim 1, wherein the exfoliant is alpha hydroxy acid or urea. 제 1 항에 있어서, 상기 케라틴 분해효소가 액상, 액상을 농축한 농축액, 또는 건조한 제제인 것을 특징으로 하는 발 세정용 조성물. The composition of claim 1, wherein the keratinase is a liquid, a concentrated liquid concentrate, or a dry preparation. 제 1 항에 있어서, 상기 케라틴 분해효소가 전체 조성물의 중량에 대하여, 0.01 ∼ 1.00 중량%인 것을 특징으로 하는 발 세정용 조성물. The composition of claim 1, wherein the keratinase is 0.01 to 1.00 wt% with respect to the total weight of the composition. 제 1 항에 있어서, 상기 천연물질이 전체 조성물의 중량에 대하여, 0.1 ∼ 0.5 중량%인 것을 특징으로 하는 발 세정용 혼합 조성물.The mixed composition for washing feet according to claim 1, wherein the natural substance is 0.1 to 0.5% by weight based on the total weight of the composition. 제 1 항에 있어서, 상기 발 세정용 조성물이 샴푸, 크림, 마사지 크림, 로션, 겔, 연고 또는 분무제 형태인 것을 특징으로 하는 발 세정용 조성물. The composition of claim 1, wherein the foot cleaning composition is in the form of a shampoo, cream, massage cream, lotion, gel, ointment or spray.
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