KR100510174B1 - Composition for treating myeloid leukemia and increasing immunity comprising Salicornia herbacea extracts. - Google Patents

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Abstract

본 발명은 함초추출물을 포함하는 마이엘로이드계 백혈병 치료 및 면역증강용 조성물에 관한 것으로서 골수세포에 대한 독성과 같은 근원적인 부작용이 없으면서 치료효과가 우수한 마이엘로이드계 백혈병 치료용 조성물 및 다양한 질병의 치료 및 예방에 활용될 수 있는 면역증강용 조성물을 제공할 수 있다.The present invention relates to a myeloid-based leukemia treatment and immuno-enhancing composition comprising a seaweed extract, the composition for the treatment of myeloid-based leukemia and various diseases with excellent therapeutic effect without the underlying side effects such as toxicity to bone marrow cells. It can provide a composition for immuno-enhancing that can be utilized for treatment and prevention.

Description

함초추출물을 포함하는 마이엘로이드계 백혈병 치료 및 면역증강용 조성물{Composition for treating myeloid leukemia and increasing immunity comprising Salicornia herbacea extracts.}Composition for treating myeloid leukemia and increasing immunity comprising Salicornia herbacea extracts.

본 발명은 함초추출물을 포함하는 마이엘로이드계 백혈병 치료 및 면역증강용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a myeloid-based leukemia treatment and immuno-enhancing composition comprising a seaweed extract.

함초(퉁퉁마디, Salicornia herbacea L.)는 대한민국 서해안 갯벌에서 군락을 이루며 자생하는 염생식물이다. 함초는 화석식물의 성상을 갖으며, 일반식물은 살 수 없는 척박한 환경에서 잘 자란다. 함초는 각종 미네랄과 소금기가 많이 함유된 갯벌에서 자라기 때문에 맛이 짜다. 함초에 들어 있는 소금은 인간의 생명을 유지시키는 신진대사 작용에 매우 좋다. 또한 국립해양수산연구소에서 발표한 연구보고서에 의하면 함초에는 인체에 유용한 여러 종류의 유기물과 철, 칼슘, 마그네슘, 인 같은 무기물과 각종 미네랄이 많이 함유되어 있다. 함초는 장내숙변을 제거하여 장청소 효과가 우수하며 갖가지 염증 및 관절염으로 인해 붓는 것을 완화시켜준다. 함초는 요통, 당뇨, 갑상선염, 기관지염에도 우수한 약효를 나타낸다. 함초에는 탁월한 효능을 지닌 물질이 다양하게 함유되어 있다. 땀을 흘리고 피로할 때 함초를 씹어먹으면 즉시 생기가 나는 것을 느낄 수 있으며, 오래 전부터 식용으로 사용되어왔다.Hamcho (Salicornia herbacea L.) is a native plant growing in colonies on the tidal-flat of the west coast of Korea. Hamchoes have the characteristics of fossil plants, and normal plants grow well in harsh environments where they cannot live. Hamchos are salty because they grow on tidal flats that contain many minerals and salts. Salt in the seaweed is very good for metabolism to sustain human life. In addition, according to a research report published by the National Institute of Maritime Affairs and Fisheries, the seaweed contains many kinds of organic materials useful for the human body, and inorganic and various minerals such as iron, calcium, magnesium and phosphorus. Seaweed removes intestinal stool and has an excellent intestinal cleansing effect. Seaweed has excellent effects on back pain, diabetes, thyroiditis and bronchitis. Hamcho contains a variety of substances with excellent efficacy. When sweating and fatigue, chewing on the seaweed immediately gives a feeling of vitality, and it has been used for a long time for food.

사람 백혈병의 경우, 가장 발현 빈도가 높은 것은 마이엘로이드계 백혈병이며, 백혈병은 수술이 불가능하기 때문에 항암 화학요법제를 사용하여 치료하거나, 방사선 조사를 이용하여 치료하고 있다. 그러나, 항암 화학요법제는 골수 세포에 대한 근원적 독성을 갖고 있으며, 방사선 요법도 골수세포에 대한 독성을 피할 수 없다.In the case of human leukemia, the most frequent expression is myeloid leukemia, and since leukemia is inoperable, anticancer chemotherapeutic agents are used for treatment or radiation irradiation. However, anticancer chemotherapeutic agents have inherent toxicity to bone marrow cells, and radiation therapy is inevitable to toxicity to bone marrow cells.

골수 근간세포는 모노블라스트(monoblast), 프로모노사이트(promonocyte), 모노사이트 (monocyte), 마크로파지의 순으로 분화된다고 알려져 있다. 마이엘로이드계 백혈병 세포는 골수 근간 세포(stem cell)가 마크로파지로 분화되는 중간의 어느 단계에서 암세포로 변이된 것이다. 마크로파지는 최종적으로 분화가 완료된 세포(end stage cell)이며, 더 이상 증식하지 못하는 특성을 갖고 있다. 따라서 마이엘로이드계 암세포를 마크로파지로 분화시킬 수 있는 약물이 개발된다면 이는 백혈병 치료의 새로운 약물로 활용도가 아주 높을 것으로 예상되나, 아직까지 그러한 약물이 개발되어 임상에 사용되는 것은 없는 실정이다.Myeloid myoblasts are known to be differentiated in the order of monoblast, promonocyte, monosite, and macrophages. Myeloid-based leukemia cells have been transformed into cancer cells at any stage in which bone marrow stem cells differentiate into macrophages. Macrophages are end staged cells that are finally differentiated and have properties that can no longer proliferate. Therefore, if a drug is developed that can differentiate myeloid-based cancer cells into macrophages, it is expected to be very useful as a new drug for the treatment of leukemia, but such a drug has not yet been developed and used in clinical practice.

암의 치료에 있어서 면역반응의 증강은 항암 화학요법제나 방사선 치료법과 같은 다른 어떠한 치료법 못지 않게 아주 중요하다. 면역반응의 증강은 우리 자신이 갖고 있는 생체방어력을 증강시키는 것이기 때문에 골수세포에 대한 독성과 같은 근원적인 부작용이 없는 치료법으로 개발될 수 있을 것으로 예상될 뿐만이 아니라, 대부분의 암 환자에 있어서 면역기능이 저하되어 있으며 면역반응의 저하와 암의 발병 빈도가 역으로 비례한다는 사실은 생체방어력의 강화가 이들 질병의 예방 및 완치를 위하여 필수적으로 중요함을 보여주는 것이다. Enhancement of the immune response in the treatment of cancer is just as important as any other therapy, such as chemotherapy or radiation therapy. Enhancing the immune response enhances our own biological defenses, so it is not only expected that it can be developed as a treatment without the underlying side effects such as toxicity to bone marrow cells. The reduced and inversely proportional decrease in immune response and the incidence of cancer indicate that enhanced biodefense is essential for the prevention and cure of these diseases.

마크로파지는 모든 생체 조직에 분포하며, 탐식작용이 강력하여 병원균 및 죽은 세포의 제거자(scavenger)로써 중요할 뿐만이 아니라, 항원제시세포로 작용하여 특이적 면역반응(specific immunity)을 유도하는데 필수적으로 관여하는 세포이다. 면역반응의 유도에 있어서 마크로파지의 중요성은 현재 개발된 대부분의 면역증강제가 일차적으로 마크로파지의 기능을 활성화하여 면역증강작용을 나타낸다는 것이 입증하고 있다. Macrophages are distributed in all living tissues and have a strong phagocytosis, which is important not only as a scavenger of pathogens and dead cells, but also essential for inducing specific immunity by acting as antigen presenting cells. It is a cell. The importance of macrophages in the induction of immune responses demonstrates that most of the currently developed immunopotentiators primarily activate the function of macrophages and exhibit immunopotentiation.

따라서 백혈병 치료에 있어서 백혈병 암세포의 분화유도 효과와 마이크로파지의 기능을 활성화하는 효과를 갖는 약물은 골수세포에 대한 독성과 같은 근원적인 부작용이 없는 치료법으로서 매우 유용하게 활용될 수 있기 때문에 그러한 약물을 개발하는 것은 당업계에 주어진 중요한 과제라 할 수 있다. Therefore, in the treatment of leukemia, the drug having the effect of inducing the differentiation of leukemia cancer cells and activating the function of the microphage can be very useful as a treatment without the underlying side effects such as toxicity to bone marrow cells. This is an important task given to the art.

본 발명자들은 함초추출물의 효능을 연구하던 중 함초추출물이 마이엘로이드계 백혈병 암세포의 분화유도 효과와 마이크로파지의 기능을 활성화하는 효과를 갖는 것을 확인하여 본 발명을 완성하게 되었다. The present inventors completed the present invention by confirming that the seaweed extract has the effect of inducing the differentiation of myeloid-based leukemia cancer cells and activating the function of the microphage while studying the efficacy of the seaweed extract.

따라서 본 발명은 골수세포에 대한 독성과 같은 근원적인 부작용이 없으면서 치료효과가 우수한 마이엘로이드계 백혈병 치료용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.Therefore, an object of the present invention is to provide a composition for treating myeloid-based leukemia having excellent therapeutic effect without any underlying side effects such as toxicity to bone marrow cells.

또한, 본 발명은 마이크로파지의 기능을 활성화하는 효과가 우수한 면역증강용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다. In addition, an object of the present invention is to provide a composition for immuno-enhancing excellent effect of activating the function of the microphage.

본 발명은 함초추출물을 포함하는 마이엘로이드계 백혈병 치료 및 면역증강용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a myeloid-based leukemia treatment and immuno-enhancing composition comprising a seaweed extract.

본 발명의 조성물은 백혈병 치료용 조성물로서 단독으로 또는 다른 백혈병 치료용 의약품과 병용하여 투여될 수 있다.The composition of the present invention may be administered alone or in combination with other leukemia treatment medicines as a composition for treating leukemia.

또한, 본 발명의 조성물은 면역증강용 조성물로서 단독으로 또는 다른 약물과 함께 병용하여 다양한 질병의 치료 및 예방에 활용될 수 있다.In addition, the composition of the present invention can be used alone or in combination with other drugs as an immuno-enhancing composition for the treatment and prevention of various diseases.

함초추출물은 사람의 백혈병에서 가장 발현 빈도가 높은 마이엘로이드계 암세포의 분화 유도와 마크로파지 기능을 활성화하는 효과를 갖는다. 마크로파지는 모든 생체 조직에 분포하며, 탐식작용이 강력하여 병원균 및 죽은 세포의 제거자(scavenger)로써 중요할 뿐만이 아니라, 항원제시세포로 작용하여 특이적 면역반응(specific immunity)을 유도하는데 필수적으로 관여하는 세포이다. Seaweed extract has the effect of inducing differentiation and macrophage function of myeloid-type cancer cells, which are most frequently expressed in human leukemia. Macrophages are distributed in all living tissues and have a strong phagocytosis, which is important not only as a scavenger of pathogens and dead cells, but also essential for inducing specific immunity by acting as antigen presenting cells. It is a cell.

본 발명에서 함초추출물은 함초즙 형태와 고분자 당 및 단백질의 형태로 추출된다. In the present invention, the seaweed extract is extracted in the form of seaweed juice and polymer sugar and protein.

먼저, 함초즙 형태의 추출물은 ⅰ) 함초를 음용수로 2∼3회 깨끗이 세척하여 초파기에 통과시키는 단계, ⅱ) 초파기를 통과하여 잘게 부숴진 함초액과 함초분쇄물을 삼베 보자기에 담아 고압중탕멸균기에 넣고 압력 없이 1~2시간 가열한 후, 1~2 기압 하에서 20분∼60분 정도 80∼110℃의 열을 가하여 중탕하는 단계, ⅲ) 중탕한 함초와 액즙을 프레스로 짠 후, 그 액즙만을 자동 롤포장기로 이송하여 포장하는 단계, ⅳ) 포장된 액즙을 100℃ 열수로 5∼30분 동안 소독하는 단계를 포함하여 얻는다. First, the extract in the form of seaweed juice is 단계) step of washing the seaweed with clean drinking water 2-3 times to pass through the chopped, ii) high-pressure water bath containing the finely crushed seaweed solution and seaweed crushed by passing through the microwave After heating in a sterilizer for 1 to 2 hours without pressure, applying a heat of 80-110 ° C. for 20 to 60 minutes under 1 to 2 atmospheres, i) squeezing the wet seaweed and the juice with a press, and then Transferring only the juice to the automatic roll packing machine, i) Obtaining the packaged juice including sterilizing for 5-30 minutes with 100 ℃ hot water.

착즙액을 포장하는 경우에는 그 과정에 거품이 상당히 많이 발생하므로 액즙이 용기에 담길 때 발생하는 거품의 양을 최소화할 수 있는 롤 포장기를 사용하는 것이 바람직하다. 거품이 없을수록 공기가 들어갈 확률이 떨어지므로 장기간 변질 없이 보관하는 것이 용이하게 된다. When the juice is packed, a lot of bubbles are generated in the process, so it is preferable to use a roll packing machine capable of minimizing the amount of bubbles generated when the juice is contained in the container. The lack of foam makes the air less likely to enter, making it easier to store it for a long time without deterioration.

착즙 과정에서 이용된 초파기는 티타늄합금으로 날을 엇갈리게 돌아가게 제작한 것으로서 심이 억세고 거친 7월말∼9월초에 수확한 함초를 효율적으로 분쇄할 수 있으며, 고농도의 염분에 장시간 지속적으로 노출되어도 인체에 전혀 무해한 재질로 제작된 것이다. The chopped soybeans used in the juice process are made of titanium alloy to rotate the blades alternately, which can effectively crush the harvested seaweeds harvested in late July ~ early September when the core is strong and coarse. It is made of completely harmless material.

함초의 고분자 당 및 단백질 형태의 추출물은 ⅰ) 함초를 열풍 건조하여 건조분말을 얻는 단계, ⅱ) 건조분말 중량의 5~10배 되는 증류수를 가하여 90~100 ℃ 에서 3시간 가열한 후, 여과하여 수층을 분리한 다음, 35~45 ℃ 에서 진공 감압 농축하는 단계, ⅲ) 1~5배의 에탄올을 가하여 저온에 10~14시간 방치하여 고분자 침전물을 수득하는 단계, ⅳ) 원심분리에 의하여 침전물을 수확한 후, 동결건조 하는 단계를 포함하여 얻어진다.The extract of the polymer sugar and protein form of the seaweed is iii) drying the seaweed to obtain a dry powder, ii) adding distilled water 5-10 times the weight of the dry powder, and heating at 90-100 ° C. for 3 hours, followed by filtration. Separating the aqueous layer and concentrating under vacuum at 35-45 ° C., iii) adding 1-5 times of ethanol and leaving it at low temperature for 10-14 hours to obtain a polymer precipitate, iii) centrifuging the precipitate. After harvesting, lyophilization is obtained.

이와 같은 방법으로 얻어진 면역증강활성 물질은 분자량이 30,000 달톤(dalton) 보다 큰 고분자 물질이고, 갈락토스(galactose)가 주요 단당류이며, 알라닌 (alanine)이 주요 아미노산이다.The immunopotentiator obtained in this way is a polymer having a molecular weight greater than 30,000 daltons, galactose is the major monosaccharide, and alanine is the major amino acid.

본 발명의 조성물은 백혈병 치료용 조성물로서 단독으로 또는 이마티니브 (Imatinib), 트레티노인 (Tretinoin) 등의 다른 백혈병 치료용 의약품과 병용하여 투여하는 것이 가능하며, 이러한 경우 더욱더 효율적으로 백혈병을 치료할 수 있다. The composition of the present invention can be administered alone or in combination with other leukemia treatment drugs such as Imatinib, Tretinoin, etc., in this case, it is possible to treat leukemia more efficiently. .

본 발명의 조성물은 면역증강용 조성물로서 마크로파지의 기능을 활성화하는 기능을 하기 때문에 단독으로 또는 다른 형태의 의약품과 병용하여 다양한 질병의 치료 및 예방에 활용될 수 있다. 예컨데 인터페론 감마(interferon-γ)와 같이 투여되는 경우에 상승적인 면역증강 효과를 나타낸다.Since the composition of the present invention functions to activate the function of macrophages as an immuno-enhancing composition, it can be used alone or in combination with other forms of medicine to treat and prevent various diseases. For example, when administered with interferon-gamma, a synergistic immunostimulating effect is shown.

본 발명의 백혈병 치료용 조성물 및 면역증강용 조성물은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으나, 1일 1~4 회로 투여할 수 있으며, 함초추출물의 1회 투여량은 추출물의 형태에 따라 함초즙은 10~200ml, 고분자 당 및 단백질은 0.05~4.0g이 바람직하다.The composition for treating leukemia and the composition for boosting immunity of the present invention may vary depending on the age, sex, and weight of the patient, but may be administered 1 to 4 times a day, and the single dose of the perilla extract may vary depending on the form of the extract. It is preferable that the ethanol juice is 10-200 ml, and the polymer sugar and protein are 0.05-4.0 g.

본 발명의 백혈병 치료 및 면역증강용 조성물은 함초 추출물만으로 구성 될 수 있으며, 또한 약제학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 및/또는 첨가제를 포함하는 경우에는 다양한 형태의 제형으로 제제화될 수 있다. 즉, 본 발명의 백혈병 치료 및 면역증강용 조성물은 락토오스, 전분 등의 부형제, 마그네슘 스테이레이트 등의 윤활제, 유화제, 현탁화제, 등장화제 및 안정제, 완충액등을 포함할 수 있으며, 경우에 따라 감미제, 장흡수촉진제 및/또는 향미제를 포함할 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 조성물은 경구용 또는 비경구용 제형으로 제제화할 수 있다. 즉, 본 발명에 따른 조성물은 통상의 정제, 캅셀제, 액제, 시럽제 등의 경구제형의 형태로 제제화될 수 있으며, 주사제 등의 비경구 제형의 형태로 제제화될 수 있다.The leukemia treatment and immuno-enhancing composition of the present invention may be composed only of the extract of seaweed, and may also be formulated in various forms of dosage forms when it contains a pharmaceutically acceptable carrier, excipient, and / or additive. That is, the leukemia treatment and immuno-enhancing composition of the present invention may include excipients such as lactose and starch, lubricants such as magnesium sterate, emulsifiers, suspending agents, isotonic and stabilizing agents, buffers and the like. It may include enteroabsorbents and / or flavoring agents. In addition, the compositions according to the invention may be formulated in oral or parenteral formulations. That is, the composition according to the present invention may be formulated in the form of oral dosage forms such as conventional tablets, capsules, solutions, and syrups, and may be formulated in the form of parenteral formulations such as injections.

본 발명의 백혈병 치료 및 면역증강용 조성물은 음료 형태로 제조될 수 있다. 음료 형태의 조성물은 상기의 함초즙 또는 고분자 당 및 단백질의 1회 투여량에 해당하는 것을 증류수로 희석하여 10~80 부피%로 함유하는 것이 바람직하다. 첨가제로는 액상과당 및 구연산을 혼합하여 사용할 수 있다. 또한 액상과당 대신 설탕 또는 포도당을, 구연산 대신 초산 또는 사과산을 각각 사용하거나 또는 이들을 혼합하여 사용할 수 있다. 음료 형태의 본 발명의 조성물은 백혈병 예방, 치료 및 면역증강의 용도로 사용될 수 있다. The leukemia treatment and immunopotentiation composition of the present invention may be prepared in a beverage form. The composition in the form of the beverage is preferably diluted to distilled water and containing 10 to 80% by volume of the equivalent of the above-mentioned once-time of the juice or polymer sugar and protein. As an additive, liquid fructose and citric acid may be mixed and used. In addition, sugar or glucose may be used instead of liquid fructose, acetic acid or malic acid may be used instead of citric acid, or a mixture thereof may be used. The composition of the present invention in the form of a beverage can be used for the purpose of the prevention, treatment and immune boosting of leukemia.

또한, 본 발명의 조성물은 음료 이외에도 다양한 식품류에도 이용될 수 있다. 함초추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예컨데, 차, 건강보조 식품류 등을 들 수 있다.In addition, the composition of the present invention can be used in various foods in addition to beverages. Examples of the food to which the seaweed extract can be added include tea and health supplements.

함초는 오래전부터 식용으로 사용되오던 것으로서 인체에 안전한 식물이기 때문에 세포독성 등의 부작용에 대한 염려는 없다.The seaweed has been used for a long time as an edible plant, so it is safe for the human body, so there is no concern about side effects such as cytotoxicity.

이하 실시예를 통해 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.The present invention will be described in more detail with reference to the following Examples.

하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것으로, 본 발명의 범위가 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다.The following examples illustrate the invention, but the scope of the invention is not limited by the examples.

실시예 1: 함초즙의 제조Example 1 Preparation of Seaweed Juice

함초를 음용수로 2~3회 깨끗이 세척한 다음, 초파기로 함초를 잘게 부순다. 이 과정에서 나온 함초액과 함초분쇄물을 삼베자루에 담아, 고압중탕멸균기에서 무압력으로 1시간 동안 가열한다. 압력을 1.5기압으로 하고 약 110 ℃ 로 25분간 추가로 가열한다. 이 과정을 통과한 내용물을 프레스에 넣고 압력을 가하여 액즙을 짜낸 다음, 짜낸 액즙을 자동포장기로 이송하여 포장한다. 포장된 즙액을 100℃ 열수에서 10분간 소독한다. Clean the seaweed 2 ~ 3 times with drinking water, and then crush the seaweed with a chopper. The seaweed solution and the seaweed powder obtained in this process are put in a burlap bag and heated under pressureless pressure in an autoclave sterilizer for 1 hour. The pressure is 1.5 atm and further heated to about 110 ° C. for 25 minutes. The contents passed through this process are put into a press, squeezed out of the juice under pressure, and then the squeezed juice is transferred to an automatic packing machine for packaging. The packaged juice solution is sterilized for 10 minutes in 100 ℃ hot water.

실시예 2: 함초로부터 고분자 당 및 단백질의 분리Example 2 Isolation of Polymer Sugar and Protein from Seaweed

함초를 열풍 건조하여 건조분말을 얻어, 건조분말 중량의 10배 되는 증류수를 첨가하여 100 ℃ 에서 3시간 가열한 후, 여과하여 수층을 분리한 다음, 45 ℃ 에서 진공 감압 농축한 후, 1~2배의 에탄올을 가하여 저온에 12시간 정도 방치하여 침전물을 얻었다. 원심분리에 의하여 침전물을 수확한 후, 동결건조 하였다. The hot seaweed was dried by hot air to obtain a dry powder, distilled water 10 times the weight of the dry powder was added, heated at 100 ° C. for 3 hours, filtered to separate an aqueous layer, and concentrated under reduced pressure at 45 ° C., followed by 1-2. Pear ethanol was added and left at low temperature for about 12 hours to obtain a precipitate. The precipitate was harvested by centrifugation and then lyophilized.

제제예 1 : 정제Formulation Example 1 Tablet

실시예 2의 함초추출물 250.0 ㎎Seaweed extract of Example 2 250.0 mg

락토오스 BP 250.0 ㎎Lactose BP 250.0 mg

전분 BP 30.0 ㎎Starch BP 30.0 mg

전젤라틴화 옥수수 전분 BP 15.0 ㎎Pregelatinized Corn Starch BP 15.0 mg

스테아르산 마그네슘 1.0 mg1.0 mg magnesium stearate

실시예 2의 함초추출물을 체질하고, 락토오스, 전분 및 전젤라틴화 옥수수 전분과 혼합한 후, 적합한 용적의 정제수를 첨가하고 분말로 과립화시켰다. 과립을 건조시킨 후 스테아르산마그네슘과 혼합하고 압착하여 정제를 제조하였다. The seaweed extract of Example 2 was sieved and mixed with lactose, starch and pregelatinized corn starch, and then a suitable volume of purified water was added and granulated into a powder. The granules were dried and then mixed with magnesium stearate and compressed to prepare tablets.

제제예 2 : 캡슐제Formulation Example 2: Capsule

실시예 2의 함초추출물 250.0 ㎎Seaweed extract of Example 2 250.0 mg

전분 1500 100.0 ㎎Starch 1500 100.0 mg

스테아르산마그네슘 BP 1.0 ㎎ Magnesium Stearate BP 1.0 mg

실시예 2의 함초추출물을 체질하고 전분 및 스테아르산마그네슘과 혼합한 후, 젤라틴 캡슐중에 충전하여 캡슐제를 제조하였다. The seaweed extract of Example 2 was sieved, mixed with starch and magnesium stearate, and then filled into gelatin capsules to prepare capsules.

제제예 3 : 시럽제Formulation Example 3: Syrup

실시예 2의 함초추출물 100.0 g100.0 g of seaweed extract of Example 2

백당 637.5 g637.5 g per bag

카르복시메칠셀룰로오스나트륨 2.0 g2.0 g of sodium carboxymethylcellulose

메칠파라벤 0.28 g0.28 g of methyl paraben

프로필파라벤 0.12 g0.12 g of propylparaben

에탄올 20 ml20 ml of ethanol

정제수 500 ml에 백당을 용해시킨 용액에 카르복시메칠셀룰로오스나트륨를 정제수 400 ml에 용해시킨 용액을 가하여 혼합하였다. 여기에 메칠파라벤과 프로필파라벤을 가하여 용해시킨 후 에탄올을 가하고 정제수를 더 가하여 1000 ml로 하였다. 여기에 체질한 실시예 2의 함초추출물을 현탁시켜 시럽제를 제조하였다.A solution in which sodium carboxymethylcellulose was dissolved in 400 ml of purified water was added to a solution of white sugar in 500 ml of purified water, followed by mixing. Methyl paraben and propyl paraben were added and dissolved therein, followed by ethanol and purified water to make 1000 ml. A syrup was prepared by suspending the seaweed extract of Example 2, which was sieved thereto.

제제예 4 : 주사제Formulation Example 4 Injection

실시예 2의 함초추출물 100.0 mg100.0 mg of seaweed extract of Example 2

묽은 수산화나트륨 pH 7.5 ~8.5Dilute sodium hydroxide pH 7.5 ~ 8.5

주사용 염화나트륨 BP 최대 2mlSodium Chloride BP for Injection Up to 2ml

실시예 2의 함초추출물을 적당한 용적의 묽은 수산화나트륨 용액에 용해하여 pH 7.5~8.5로 조절하고, 이어서 주사용 염화나트륨 BP를 사용하여 용적을 조절하고, 철저히 혼합하였다. 용액을 투명 유리로 된 2ml 타입 앰퓰 중에 충전시키고, 유리를 용해시킴으로써 공기의 상부격자하에 봉입시키고 이어서 오토클레이브(autoclave)에서 살균하여 주사제를 제조하였다.The seaweed extract of Example 2 was dissolved in a suitable volume of dilute sodium hydroxide solution to adjust pH to 7.5-8.5, followed by volume adjustment using sodium chloride BP for injection, followed by thorough mixing. The solution was filled into a 2 ml type ampoule of clear glass, filled under dissolution of the glass by dissolving the glass and then sterilized in an autoclave to prepare an injection.

제제예 5 : 음료Formulation Example 5: Beverage

함초즙 10 ml를 증류수로 희석하여 80 ml로 한 후, 여기에 액상 과당을 7~10 중량 %, 구연산을 0.1~0.2 중량 % 가하여 100 ml의 혼합음료를 제조하였다.After diluting 10 ml of the vinegar juice with distilled water to make 80 ml, 7 to 10 wt% of liquid fructose and 0.1 to 0.2 wt% of citric acid were added thereto to prepare a mixed beverage of 100 ml.

제제예 6 : 음료Formulation Example 6: Beverage

고분자 당 및 단백질 0.1g을 증류수로 희석하여 80 ml로 한 후, 여기에 액상 과당을 7~10 중량 %, 구연산을 0.1~0.2 중량 % 가하여 100 ml의 혼합음료를 제조하였다. After diluting the polymer sugar and protein 0.1g with distilled water to make 80 ml, 7 to 10% by weight of liquid fructose and 0.1 to 0.2% by weight of citric acid were added to prepare a mixed drink of 100 ml.

실험예 1: 함초로 부터 추출된 고분자 당 및 단백질의 이화학적 특성Experimental Example 1: Physicochemical Properties of Polymer Sugar and Protein Extracted from Seaweed

실시예 2에서 추출된 고분자 당 및 단백질의 이화학적 특성을 조사하였다.The physicochemical properties of the polymer sugar and protein extracted in Example 2 were investigated.

⑴ 분자량 추정⑴ molecular weight estimation

시료를 H2O에 용해시켜 마이크로분할 시스템(micropartition system (MPS-1))으로 여과하여 활성물질의 분자량을 추정하였다. 이러한 결과, 이 물질은 30,000 달톤 보다 분자량이 큰 고분자 물질임을 알 수 있었다.The sample was dissolved in H 2 O and filtered through a micropartition system (MPS-1) to estimate the molecular weight of the active material. As a result, it was found that the material was a high molecular weight material having a molecular weight greater than 30,000 Daltons.

⑵ 당의 조성조성 Sugar composition

시료에 함유된 단당류의 조성을 측정하기 위한 전처리 방법으로 아미노당(amino sugar)의 가수분해를 위하여 6N HCl로 100 ℃ 에서 4시간 동안 처리하였고, 중성당(neutral sugar)의 가수분해를 위하여 2M 트리플로오로 아세트산(trifluoroacetic acid)으로 100 ℃ 에서 다시 4시간 동안 처리하였다. 분석은 미국 디오넥스(Dionex) 사의 바이오-엘시 디엑스-300(Bio-LC DX-300)을 사용하였고, 컬럼은 카보팩 피에이원(Carbopac PA1, (4.5×50mm)) 사용하였고, 검출은 통합 암페어측정기가 부착된 피이디투(PED2 with integrated amperometry)로 하였다.하였다. 이러한 결과는 표 1에 요약하여 나타내었다.As a pretreatment method for measuring the composition of monosaccharides contained in the sample, it was treated with 6N HCl for 4 hours at 100 ° C. for hydrolysis of amino sugars, and 2M triple for hydrolysis of neutral sugars. Treated with trifluoroacetic acid at 100 ℃ again for 4 hours. Analyzes were performed using Bio-LC DX-300 from Dionex, USA, and columns were used with Carbopac PA1 (4.5 × 50 mm) and detection was integrated. It was made by PID2 with integrated amperometry. These results are summarized in Table 1.

시료에 함유된 단당류의 조성Composition of Monosaccharides in Samples Party nmole/95㎍nmole / 95 µg ng/95㎍ng / 95µg 푸코세 Fucose 0.880.88 144144 갈락토사민Galactosamine 0.180.18 3131 글루코사민Glucosamine 0.840.84 150150 갈락토오스Galactose 16.7516.75 3,0183,018 글루코스Glucose 4.964.96 894894 만노오스Mannose 3.413.41 614614

⑶ 아미노산의 조성⑶ composition of amino acids

시료에 함유된 아미노산의 조성은 피코-택(PICO-tag) 방법을 이용하여 가수분해 및 PITC 표지하여 분석하였다. 분석기기는 HPLC를 사용하였고 검출기는 워터스 996 배열광다이오드 검출기 (waters 996 photodiode array detector (PDA, 254nm))로 하였으며 컬럼은 워터스 피코-택 컬럼(waters Pico-tag column(3.9×300mm, 4 ㎛))을 사용하였다. 이러한 결과는 표 2에 요약하여 나타내었다.The composition of amino acids contained in the samples was analyzed by hydrolysis and PITC labeling using the PICO-tag method. The analyzer was HPLC and the detector was a waters 996 photodiode array detector (PDA, 254 nm) and the column was a waters Pico-tag column (3.9 × 300 mm, 4 μm). ) Was used. These results are summarized in Table 2.

시료에 함유된 유리 아미노산의 조성The composition of free amino acids in the sample 아미노산amino acid pmol/290㎍pmol / 290 μg 시스테인Cysteine 624.162624.162 아스파르트산 + 아스파라긴Aspartic Acid + Asparagine 1910.1811910.181 글루탐산 + 글루타민Glutamic Acid + Glutamine 1792.6191792.619 세린Serine 875.061875.061 글리신Glycine 1548.9641548.964 히스티딘Histidine 320.133320.133 아르기닌Arginine 336.355336.355 트레오닌Threonine 351.626351.626 알라닌Alanine 3399.8503399.850 프롤린Proline 796.270796.270 티로신Tyrosine 183.211183.211 발린Valine 863.826863.826 메티오닌Methionine 197.784197.784 시스틴Cystine 30.17930.179 이솔루신Isoleucine 387.406387.406 루신Leucine 507.424507.424 페닐알라닌Phenylalanine 157.971157.971 트립토판Tryptophan 13.10713.107 리신Lee Sin 372.305372.305

실험예 2: 마이엘로이드계 암세포에 대한 분화 유도 효과Experimental Example 2: Induction of Differentiation of Myeloid Cancer Cells

마이엘로이드계 암세포인 Raw 264.7에 대한 분화유도활성을 관찰하였다. 24-웰 배양 접시에 5×105 cells/well로 세포를 가한 다음, 실시예 1과 2의 추출물을 배양액 대비 각각 0.05 부피%, 10 ㎍/ml의 양으로 첨가하였다. 48시간 배양한 후, 광학현미경을 이용하여 검경하였다.Differentiation-inducing activity against Raw 264.7, a myeloid cancer cell, was observed. Cells were added to 5 × 10 5 cells / well in a 24-well culture dish, and the extracts of Examples 1 and 2 were added in amounts of 0.05% by volume and 10 μg / ml, respectively, relative to the culture solution. After 48 hours of incubation, it was examined using an optical microscope.

그 결과, 도 1의 함초즙의 처리전(A) 및 처리후(B) 및 도 2의 고분자 당 및 단백질의 처리전(A) 및 처리후(B)의 모습에서 마이엘로이드계 암세포는 함초즙 원액 또는 함초로부터 분리한 고분자 당 및 단백질(10㎍/ml)에 의하여 분화가 유도되어 그 모양이 섬유아세포(fibroblast) 유사 모양으로 변하고, 플라스틱 표면에 대한 부착성이 강력해지며, 많은 액포들이 생성되는 것을 관찰할 수 있었다. As a result, the myeloid-based cancer cells in the form of before and after the treatment (A) and after treatment (B) of the polymer sugar and protein of FIG. Differentiation is induced by macromolecular sugars and proteins (10 μg / ml) isolated from juice stock or grasswort, and its shape becomes fibroblast-like, strong adhesion to plastic surface, and many vacuoles It could be observed to produce.

마이엘로이계 암세포는 마크로파지로 분화되면 더 이상의 증식을 하지 못하게 된다. Myeloid cancer cells are differentiated into macrophages to prevent further proliferation.

실험예 3: 마이엘로이드계 암세포에 대한 증식 억제 효과Experimental Example 3: Inhibitory Effect of Proliferation on Myeloid Cancer Cells

마이엘로이드계 암세포인 Raw 264.7에 대한 분화유도활성을 관찰하였다. 96-웰 마이크로티터 플레이트(well microtiter plate)에 2×104 cells/well로 세포를 가한 다음, 실시예 1의 추출물을 각각 1, 1/3, 1/9, 1/27, 1/81, 1/243 및 1/729 배로 희석하여 배양액 대비 0.05 부피%로 첨가하고, 실시예 2의 추출물을 각각 200, 70, 20, 7, 2.5, 0.8 및 0.3 ㎍/ml의 농도로 첨가하여 2 일간 배양하였다. 세포의 증식 정도는 [3H]-티미딘(thymidine)을 세포 배양액에 가한 다음, 6 시간 동안 더 배양한 후, 세포를 수확하여 세포 내로 유입된 [3H]-티미딘의 양을 마이크로베타카운터(microbetacounter)로 측정하였다.Differentiation-inducing activity against Raw 264.7, a myeloid cancer cell, was observed. Cells were added to a 96-well microtiter plate at 2 × 10 4 cells / well, and then the extracts of Example 1 were added to 1, 1/3, 1/9, 1/27, 1/81, Dilute to 1/243 and 1/729 times and add 0.05% by volume to the culture, and the extract of Example 2 was added at concentrations of 200, 70, 20, 7, 2.5, 0.8 and 0.3 μg / ml, respectively for 2 days It was. The degree of proliferation of the cells was measured by adding [3H] -thymidine to the cell culture medium, followed by further incubation for 6 hours, and then harvesting the cells to determine the amount of [3H] -thymidine introduced into the cells. microbetacounter).

그 결과, 도 3 및 도 4에 보인 바와 같이, 함초즙 또는 함초로부터 분리한 고분자 당 및 단백질은 농도 의존적으로 암 세포의 증식을 억제하였다. 따라서 본 발명에서 기술한 함초즙 또는 함초로부터 분리한 고분자 당 및 단백질은 마이엘로이드계 암세포인 Raw 264.7의 분화를 유도하여 증식을 억제함을 확인하였다.As a result, as shown in Figs. 3 and 4, the polymer sugar and protein isolated from the perilla juice or perilla inhibited the proliferation of cancer cells in a concentration-dependent manner. Therefore, it was confirmed that the high molecular sugar and protein isolated from the persimmon juice or seaweed described in the present invention induced differentiation of Raw 264.7, a myeloid cancer cell, thereby inhibiting proliferation.

실험예 4: 탐식력 촉진 효과Experimental Example 4: Efficacy promoting effect

마이엘로이드계 암세포인 Raw 264.7를 2-웰 쳄버 슬라이드(well chamber slide)에 1×105cell/ml로 가한 후, 실시예 1과 2의 추출물을 배양액 대비 각각 0.05 부피%, 10㎍/ml의 양으로 첨가하여 48시간 배양하여 마크로파지로 분화시켰다. 여기에 감작 면양적혈구(면양적혈구에 대한 항체를 1:256 농도로 희석하여 가하고, 37 ℃에서 30분간 반응시킨 후, 생리식염수로 2회 세척한 다음, 생리식염수에 1%로 현탁시킨 것)를 50㎕ 첨가하여 37 ℃에서 1시간 배양한 후, ACK 리시스 완충용액(lysis buffer)으로 탐식되지 않은 면양적혈구를 제거하였으며, 라이트(Wright)와 김사(Giemsa) 용액으로 염색하여 탐식된 면양적혈구를 현미경으로 관찰하였다.Raw 264.7, a myeloid-based cancer cell, was added to a 2-well chamber slide at 1 × 10 5 cell / ml, and the extracts of Examples 1 and 2 were 0.05% by volume and 10µg / ml, respectively. It was added in the amount of and incubated for 48 hours to differentiate into macrophages. To this, sensitized sheep blood cells (antibodies to sheep sheep cells diluted 1: 256) were added, reacted at 37 ° C. for 30 minutes, washed twice with physiological saline, and then suspended in physiological saline at 1%. After incubation at 37 ° C. for 1 hour with 50 μl, the undeveloped sheep cells were removed with ACK Lysis buffer and stained with Wright and Giemsa solutions. It was observed under a microscope.

그 결과, 도 5의 함초즙의 처리전(A) 및 처리후(B), 및 도 6의 고분자 당 및 단백질의 처리전(A) 및 처리후(B)의 모습에서 함초즙 원액 또는 함초로부터 분리한 고분자 당 및 단백질(10㎍/ml)에 의하여 면양적혈구에 대한 탐식력이 강력히 증가하는 것을 확인할 수 있었다. 따라서 본 발명에서 기술한 함초즙 또는 함초로부터 분리한 고분자 당 및 단백질은 마크로파지의 가장 대표적인 기능 중의 하나인 탐식력을 강력히 증강시키며, 면역반응의 유도를 촉진하여 항암효과를 나타낼 것으로 예상된다.As a result, from the persimmon juice stock solution or seaweed in the state before (A) and after treatment (B) of the juice of the juice of FIG. 5 and before (A) and after treatment (B) of the polymer sugar and protein of FIG. The isolated macromolecular sugar and protein (10 ㎍ / ml) was confirmed to increase the phagocytosis for sheep red blood cells strongly. Therefore, the polymer sugar and protein isolated from the perilla juice or seaweed described in the present invention is expected to exhibit an anticancer effect by strongly enhancing the phagocytosis, which is one of the most representative functions of macrophages, and promoting the induction of immune responses.

실험예 5: IL-1β 생산 촉진 효과Experimental Example 5: IL-1β Production Promoting Effect

마이엘로이드계 암세포인 Raw 264.7에 시료를 첨가하고 48시간 배양하여 마크로파지로 분화시켰다. 즉, 24-웰 배양 플레이트에 5×105 cells/well로 세포를 가한 다음, 실시예 1의 추출물을 각각 1, 1/3, 1/9, 1/27 및 1/81 배로 희석하여 배양액 대비 0.05 부피%로 첨가하고, 실시예 2의 추출물을 각각 100, 33, 11, 3.7 및 1.2 ㎍/ml의 농도로 첨가하였다. 48시간 배양한 후, 배양 여액을 수득하였다. 배양 여액에 함유되어 있는 IL-1β 의 함량은 R&D 사의 엘리사 키트(ELISA kit)를 이용하여 측정하였다.Samples were added to Raw 264.7, a myeloid cancer cell, and cultured for 48 hours to differentiate into macrophages. That is, the cells were added to a 24-well culture plate at 5 × 10 5 cells / well, and then the extract of Example 1 was diluted 1, 1/3, 1/9, 1/27 and 1/81 times, respectively, to the culture medium. 0.05 volume% and the extract of Example 2 were added at concentrations of 100, 33, 11, 3.7 and 1.2 μg / ml, respectively. After 48 hours of incubation, the culture filtrate was obtained. The amount of IL-1β contained in the culture filtrate was measured using an R & D ELISA kit.

그 결과, 도 7 및 도 8에 보인 바와 같이, 함초즙 또는 함초로부터 분리한 고분자 당 및 단백질은 농도 의존적으로 IL-1β의 생성을 촉진하였다. 따라서 본 발명에서 기술한 함초즙 또는 함초로부터 분리한 고분자 당 및 단백질은 마크로파지로 하여금 IL-1β의 생산을 유도하여 항암효과를 나타낼 것으로 예상된다. As a result, as shown in Figures 7 and 8, the polymer sugar and protein isolated from the perilla juice or perilla promoted the production of IL-1β in a concentration-dependent manner. Therefore, it is expected that the macromolecular sugars and proteins isolated from the persimmon juice or seaweed described in the present invention will induce the production of IL-1β by the macrophages and exhibit anticancer effects.

실험예 6: TNF-α 생산 촉진 효과Experimental Example 6: TNF-α production promoting effect

마이엘로이드계 암세포인 Raw 264.7에 시료를 첨가하고 48시간 배양하여 마크로파지로 분화시켰다. 즉, 24-웰 배양 플레이트에 5×105 cells/well로 세포를 가한 다음, 실시예 1의 추출물을 각각 1, 1/3, 1/9, 1/27, 1/81 및 1/243 배로 희석하여 배양액 대비 0.05 부피%로 첨가하고, 실시예 2의 추출물을 각각 100, 33, 11, 3.7, 1.2 및 0.4 ㎍/ml의 농도로 첨가하였다. 48시간 배양한 후, 배양 여액을 수득하였다. 배양 여액에 함유되어 있는 TNF-α의 함량은 파미겐(Pharmingen) 사의 엘리사 키트(ELISA kit)를 이용하여 측정하였다.Samples were added to Raw 264.7, a myeloid cancer cell, and cultured for 48 hours to differentiate into macrophages. That is, cells were added at 5 × 10 5 cells / well to a 24-well culture plate, and then the extracts of Example 1 were 1, 1/3, 1/9, 1/27, 1/81 and 1/243 times, respectively. Diluted and added to 0.05% by volume relative to the culture, the extract of Example 2 was added at a concentration of 100, 33, 11, 3.7, 1.2 and 0.4 ㎍ / ml, respectively. After 48 hours of incubation, the culture filtrate was obtained. The TNF-α content in the culture filtrate was measured using an ELISA kit from Pharmingen.

그 결과, 도9 및 도10에 보인 바와 같이, 함초즙 또는 함초로부터 분리한 고분자 당 및 단백질은 농도 의존적으로 TNF-α의 생성을 촉진하였다. 따라서 본 발명에서 기술한 함초즙 또는 함초로부터 분리한 고분자 당 및 단백질은 마크로파지로 하여금 TNF-α의 생산을 유도하여 항암효과를 나타낼 것으로 예상된다. As a result, as shown in Figs. 9 and 10, the polymer sugar and protein isolated from the perilla juice or perilla promoted the production of TNF-α in a concentration-dependent manner. Therefore, the polymer sugar and protein isolated from the perilla juice or perilla described in the present invention is expected to exhibit the anti-cancer effect by inducing the production of TNF-α macrophages.

실험예 7: NO 생산 촉진 효과Experimental Example 7: NO Production Promoting Effect

마이엘로이드계 암세포인 Raw 264.7에 시료를 첨가하고 48시간 배양하여 마크로파지로 분화시켰다. 즉, 24-웰 배양 플레이트에 5×105 cells/well로 세포를 가한 다음, 실시예 1의 추출물을 각각 1, 1/3, 1/9, 1/27, 1/81, 1/243 및 1/729 배로 희석하여 배양액 대비 0.05 부피%로 첨가하고, 실시예 2의 추출물을 각각 100, 33, 11, 3.7, 1.2, 0.4 및 0.14 ㎍/ml의 농도로 첨가하였다. 48시간 배양한 후, 배양 여액을 수득하였다. 배양 여액에 함유되어 있는 NO의 함량은 세포 배양액 50㎕ 와 동량의 그리이스 시약(Griess reagent)(2.5% H3PO4 중 0.5 % 술퍼닐아미드, 0.05 % N-(1-나프틸)-에틸렌디아민 디하이드로클로라이드)를 96-웰 마이크로티터 플레이트에 혼합하여 상온에서 5분간 반응시킨 후 엘리사 판독기(ELISA reader)를 이용하여 550nm에서 측정하였다.Samples were added to Raw 264.7, a myeloid cancer cell, and cultured for 48 hours to differentiate into macrophages. That is, the cells were added to the 24-well culture plate at 5 × 10 5 cells / well, and then the extracts of Example 1 were respectively 1, 1/3, 1/9, 1/27, 1/81, 1/243 and Diluted by 1 / 729-fold and added to 0.05% by volume relative to the culture, the extract of Example 2 was added at a concentration of 100, 33, 11, 3.7, 1.2, 0.4 and 0.14 μg / ml, respectively. After 48 hours of incubation, the culture filtrate was obtained. The amount of NO contained in the culture filtrate was equal to 50 µl of the cell culture and 0.5 equivalent sulfinylamide in 0.05% H 3 PO 4 , 0.05% N- (1-naphthyl) -ethylenediamine Dihydrochloride) was mixed in a 96-well microtiter plate and reacted at room temperature for 5 minutes, and then measured at 550 nm using an ELISA reader.

그 결과, 도11 및 도12에 보인 바와 같이, 함초즙 또는 함초로부터 분리한 고분자 당 및 단백질 조성물은 농도 의존적으로 NO의 생성을 촉진하였다. 따라서 본 발명에서 기술한 함초즙 또는 함초로부터 분리한 고분자 당 및 단백질은 마크로파지로 하여금 NO의 생산을 유도하여 항암효과를 나타낼 것으로 예상된다. As a result, as shown in Figs. 11 and 12, the polymer sugar and protein composition isolated from the perilla juice or perilla promoted the production of NO in a concentration-dependent manner. Therefore, it is expected that the macromolecular sugars and proteins isolated from the seaweed juice or seaweed described in the present invention will induce the production of NO by macrophages and exhibit anticancer effects.

실험예 8: 인터페론-감마(interferon-γ)와의 병용 효과Experimental Example 8 Combined Effect with Interferon-gamma

마이엘로이드계 암세포인 Raw 264.7 세포를 24-웰 배양 플레이트에 5×105 cells/well로 세포를 가한 다음, 실시예 2의 추출물을 배양액 대비 각각 100, 33, 11, 3.7, 1.2 및 0.4 ㎍/ml의 농도로 첨가하거나, 실시예 2의 추출물을 각각 100, 33, 11, 3.7, 1.2 및 0.4 ㎍/ml의 농도로 첨가한 것에 인터페론-감마를 10 units/ml로 더 첨가하였다. 48시간 배양한 후, 배양 여액을 수득하였다. 배양 여액에 함유되어 있는 NO의 함량은 세포 배양액 50㎕ 와 동량의 그리이스 시약(Griess reagent)(2.5% H3PO4 중 0.5 % 술퍼닐아미드, 0.05 % N-(1-나프틸)-에틸렌디아민 디하이드로클로라이드)을 96-웰 마이크로티터 플레이트에 혼합하여 상온에서 5분간 반응시킨 후 엘리사 판독기(ELISA reader)를 이용하여 550nm에서 측정하였다.Raw 264.7 cells, which are myeloid cancer cells, were added to the 24-well culture plate at 5 × 10 5 cells / well, and then the extract of Example 2 was 100, 33, 11, 3.7, 1.2 and 0.4 μg / Additional interferon-gamma was added at 10 units / ml to the addition of ml or to extracts of Example 2 at concentrations of 100, 33, 11, 3.7, 1.2 and 0.4 μg / ml, respectively. After 48 hours of incubation, the culture filtrate was obtained. The amount of NO contained in the culture filtrate was equal to 50 µl of the cell culture and 0.5 equivalent sulfinylamide in 0.05% H 3 PO 4 , 0.05% N- (1-naphthyl) -ethylenediamine Dihydrochloride) was mixed in a 96-well microtiter plate and reacted at room temperature for 5 minutes, and then measured at 550 nm using an ELISA reader.

그 결과, 도13에 보인 바와 같이, 함초로부터 분리한 고분자 당 및 단백질 조성물은 인터페론과의 병용에 의하여 NO의 생성을 촉진하였다. 인터페론-감마와의 병용에 의한 NO 생산 증강효과는 함초로부터 분리한 고분자 당 및 단백질 조성물의 농도가 아주 낮은 상황에서 더욱 분명하게 나타났다.As a result, as shown in Fig. 13, the polymer sugar and protein composition isolated from the seaweeds promoted the production of NO by using in combination with interferon. The effect of NO production enhancement by combination with interferon-gamma was more evident in very low concentrations of polymer sugar and protein composition isolated from seaweed.

상기의 실험예로부터 알 수 있는 바와 같이, 함초추출물은 마이엘로이드계 암 세포의 분화 촉진 및 마크로파지 기능 활성화 효과를 갖는다. 따라서, 본 발명은 골수세포에 대한 독성과 같은 근원적인 부작용이 없으면서 치료효과가 우수한 마이엘로이드계 백혈병 치료용 조성물 및 다양한 질병의 치료 및 예방에 활용될 수 있는 면역증강용 조성물을 제공할 수 있다. As can be seen from the above experimental example, the perilla extract has an effect of promoting differentiation and macrophage function activation of myeloid cancer cells. Accordingly, the present invention can provide a composition for treating myeloid-based leukemia, which has excellent therapeutic effect and no immune side effects such as toxicity to bone marrow cells, and an immune enhancing composition that can be used for the treatment and prevention of various diseases. .

도 1은 함초즙에 의한 마이엘로이드계 암 세포의 분화 유도에 따른 형태학적 변화를 나타낸 것이다(함초즙 처리전(A) 및 처리후(B)).Figure 1 shows the morphological changes according to the differentiation induction of myeloid-based cancer cells by the seaweed juice (before (A) and after treatment (B)).

도 2는 함초로부터 분리한 고분자 당 및 단백질에 의한 마이엘로이드계 암 세포의 분화 유도에 따른 형태학적 변화를 나타낸 것이다(고분자 당 및 단백질 처리전(A) 및 처리후(B)).Figure 2 shows the morphological changes according to the induction of differentiation of myeloid-based cancer cells by the polymer sugar and protein isolated from seaweed (polymer sugar and protein before (A) and after treatment (B)).

도 3은 함초즙에 의한 마이엘로이드계 암 세포의 분화 유도에 따른 증식억제효과를 나타낸 것이다.Figure 3 shows the proliferation inhibitory effect according to the differentiation of myeloid-based cancer cells by the seaweed juice.

도 4는 함초로부터 분리한 고분자 당 및 단백질에 의한 마이엘로이드계 암 세포의 분화 유도에 따른 증식억제효과를 나타낸 것이다.Figure 4 shows the proliferation inhibitory effect of the differentiation of myeloid-based cancer cells by the polymer sugar and protein isolated from the seaweed.

도 5는 함초즙의 탐식력 증강 효과를 나타낸 것이다(함초즙 처리전(A) 및 처리후(B)).Figure 5 shows the effect of enhancing the phagocytosis of seaweed juice (prior to the juice juice (A) and after treatment (B)).

도 6은 함초로부터 분리한 고분자 당 및 단백질의 탐식력 증강 효과를 나타낸 것이다(고분자 당 및 단백질 처리전(A) 및 처리후(B)).Figure 6 shows the phagocytosis enhancing effect of the polymer sugar and protein isolated from the seaweed (polymer sugar and protein before (A) and after treatment (B)).

도 7은 함초즙의 IL-1β생산 촉진 효과를 나타낸 것이다.Figure 7 shows the effect of promoting the production of IL-1β juice.

도 8은 함초로부터 분리한 고분자 당 및 단백질의 IL-1β생산 촉진 효과를 나타낸 것이다.Figure 8 shows the IL-1β production promoting effect of the polymer sugar and protein isolated from the seaweed.

도 9는 함초즙의 TNF-α생산 촉진 효과를 나타낸 것이다.Figure 9 shows the effect of promoting the TNF-α production of seaweed juice.

도 10은 함초로부터 분리한 고분자 당 및 단백질의 TNF-α생산 촉진 효과를 나타낸 것이다.Figure 10 shows the TNF-α production promoting effect of the polymer sugar and protein isolated from the seaweed.

도 11은 함초즙의 NO 생산 촉진 효과를 나타낸 것이다.Figure 11 shows the effect of promoting the production of NO.

도 12는 함초로부터 분리한 고분자 당 및 단백질의 NO 생산 촉진 효과를 나타낸 것이다.Figure 12 shows the NO production promoting effect of the polymer sugar and protein isolated from the seaweed.

도 13은 함초로부터 분리한 고분자 당 및 단백질과 인터페론-감마 (interferon-γ)를 병용투여했을때 NO의 생산 증가를 나타낸 것이다.Figure 13 shows the increase in the production of NO when co-administered with interferon-gamma and polymer sugar and protein isolated from seaweed.

Claims (4)

함초추출물을 포함하는 마이엘로이드계 백혈병 치료 및 면역증강용 조성물. Myeloid-based leukemia treatment and immuno-enhancing composition comprising a seaweed extract. 제1항에 있어서, 함초추출물이 ⅰ) 함초를 음용수로 2∼3회 깨끗이 세척하여 초파기에 통과시키는 단계, ⅱ) 초파기를 통과하여 잘게 부숴진 함초액과 함초분쇄물을 삼베 보자기에 담아 고압중탕멸균기에 넣고 압력 없이 1~2시간 가열한 후, 1~2 기압 하에서 20분∼60분 정도 80∼110 ℃의 열을 가하여 중탕하는 단계, ⅲ) 중탕한 함초와 액즙을 프레스로 짠 후, 그 액즙만을 자동 롤포장기로 이송하여 포장하는 단계, ⅳ) 포장된 액즙을 100 ℃ 열수로 5∼30분 동안 소독하는 단계를 포함하여 착즙된 것임을 특징으로 하는 마이엘로이드계 백혈병 치료 및 면역증강용 조성물The method of claim 1, wherein the seaweed extract iii) cleansing the seaweed 2 to 3 times with drinking water and passing it through a chopped wave, ii) putting the crushed vinegar liquor and crushed seaweed powder through the chopped soak into burlap cloth After heating in a sterilized sterilizer for 1 to 2 hours without pressure, applying a heat of 80 to 110 ℃ for 20 minutes to 60 minutes under 1 to 2 atmospheres, i) squeezing the wet seaweed and the juice with a press, Transporting only the juice to an automatic roll packer for packaging; i) disinfecting the packaged juice with hot water at 100 ° C. for 5 to 30 minutes, for treating myeloid-based leukemia and immunity enhancement. Composition 제1항에 있어서, 함초추출물이 ⅰ) 함초를 열풍 건조하여 건조분말을 얻는 단계, ⅱ) 건조분말 중량의 5~10배 되는 증류수를 가하여 90~100 ℃ 에서 3시간 가열한 후, 여과하여 수층을 분리한 다음, 35~45 ℃ 에서 진공 감압 농축하는 단계, ⅲ) 1~5배의 에탄올을 가하여 저온에 10~14시간 방치하여 고분자 침전물을 수득하는 단계, ⅳ) 원심분리에 의하여 침전물을 수확한 후, 동결건조 하는 단계를 포함하여 분리된 고분자 당 및 단백질 임을 특징으로 하는 마이엘로이드계 백혈병 치료 및 면역증강용 조성물The method according to claim 1, wherein the seaweed extract comprises: i) hot air drying the seaweed to obtain a dry powder; ii) adding distilled water 5-10 times the weight of the dry powder, and heating at 90-100 ° C. for 3 hours, followed by filtration Separating and then vacuum concentrating at 35-45 ° C., iii) adding 1-5 times of ethanol and leaving it at low temperature for 10-14 hours to obtain a polymer precipitate, iii) harvesting the precipitate by centrifugation. After, lyophilization, the composition for treating and enhancing myeloid leukemia, characterized in that the separated polymer sugar and protein 제1항 내지 제3항의 어느 한 항에 있어서, 음료의 형태로 제조되는 것을 특징으로 하는 백혈병 치료 및 면역증강용 조성물.The composition for treating leukemia and immunopotentiation according to any one of claims 1 to 3, which is prepared in the form of a beverage.
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