본 발명은 호기성 및 통성 조건에서 에틸렌글리콜 분해능이 우수한 신규 미생물인 슈도모나스 이지-2 (Pseudomonas sp. EG-2) 및 이를 이용한 에틸렌글리콜(ethylene glycol)이 함유된 폐수의 처리방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는 호기성 또는 통성 조건에서 생육이 양호하고, pH, 온도, 유량 및 생물화학적 산소요구량(BOD)의 변화에 강하며, 고농도의 에틸렌글리콜의 탁월한 분해능을 가진 미생물인 슈도모나스 이지-2 (Pseudomonas sp. EG-2)에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 상기 미생물을 이용하여 에틸렌글리콜이 함유된 폐수를 생물학적으로 처리하는 방법에 관한 것이다.
본 발명자들은 대구지역의 섬유공장 주변 하천의 토양(오염원)을 채취하였다. 본 발명의 신규 미생물은 질소원, 인원, 무기염류를 기본으로 하고, 유일 탄소원으로서 에틸렌글리콜을 함유하는 최소배지를 사용하여 에틸렌글리콜을 탄소원으로 이용할 수 있는 세균들로 분리된 후, 에틸렌글리콜 분해능이 가장 우수한 균주로 선별된 것이다. 상기 최소배지를 보다 상세하게 설명하면, 황산암모늄, 인산이수소칼륨, 염화나트륨 및 황산마그네슘을 기본으로 하고, 유일탄소원으로서 에틸렌글리콜을 함유하고 있다.
본 발명에 따른 신규 미생물의 성상은 다음과 같다.
분리균주의 전자현미경 사진(SEM : Scanning Electron Microscope)은 도 3 와 같으며 형태학적, 생리학적 특징을 조사한 결과는 하기 표 1 및 표 2 와 같다. 분리균주는 그람(Gram)음성, 간균으로서 운동성을 가지고 있었다. 또한, 배양학적 성질을 조사한 결과 카탈라아제 테스트(catalase test), 젤라틴(gelatin) 액화능, 시트르산(citrate) 이용성 및 황화수소 생산물(H2S production)은 모두 양성을 나타내었으며, 메틸레드 테스트(Methyl Red test), V-P 테스트, 인돌(indol) 생성능 및 전분 유사물질 생성능은 음성있으며 포도당으로부터 이산화탄소를 생성하지 않았다. 탄수화물 이용가능성은 글루코오스(glucose), 프록토스(fructose), 크실로오스(xylose). 갈락토오스(galactose), 이노시톨(inositol), 소르보오스(sorbose), 라피노오스(raffinose)를 이용하였으며 그 외의 탄수화물은 이용하지 못하거나 미약하였다. 따라서, 분리된 균주의 형태학적, 배양학적 및 생리학적 특성에 따라 Bergeys Manual of determinative bacteriology (10th ed.) 와 Manual for the Identification of medical bacteria(2nd ed.)등에 준하여 동정한 결과 슈도모나스(Pseudomonas)속 으로 동정되어, 분리균을 슈도모나스 이지-2(Pseudomonas sp. EG-2)로 명명하고, 2002년 7월 20일 자로 한국종균협회 부설 한국 미생물보존센터에 기탁번호 KFCC - 11310로 기탁하였다.
표 1. 분리된 균의 형태학적 및 생리학적 특성
특성(Characteristics) |
슈도모나스 EG-2 |
그람염색(Gram staining)세포형태(Shape)크기(Size)운동성(Motility)포자 생성(Spore formation)카탈라아제 테스트(Catalase test)메틸레드 테스트(Methyl red test)V-P테스트(V-P test)인돌형성(Indol production)녹말가수분해(Starch hydrolysis)젤라틴액화(Gelatin liquefaction)구연산 이용성(Utilization citrate)황화수소생성(Hydrogen sulfid production)Gas from glucose우라아제 테스트(Urease Test)옥시다아제 테스트(Oxidase test)색소생성(Pigment production)광성장온도(Optimum growth temperature)pH염화나트륨하에서의 생장(Growth in NaCl) |
-간상형(Rod)0.4 ∼ 0.6 ×2.5 ∼ 1.8㎛운동가능(Motile)-+----+++--+-25 ∼ 30℃4.0 ∼ 10.00 ∼ 9% |
+, 양성 ; -, 음성
표 2. 분리된 균의 탄소원 이용성
탄소원(Carbon sources) |
슈도모나스 EG-2 |
탄소원(Carbon sources) |
슈도모나스 EG-2 |
글루코오스(Glucose)프록토스(Fructose)크실로오스(Xylose)갈락토오스(Galactose)이노시톨(Inositol)소르보오스(Sorbose)소르비톨(Sorbitol)락토오스(Lactose)수크로오스(Sucrose)말토오스(Maltose)아라비노오스(Arabinose)덱스트린(Dextrin) |
+++++++----+ |
글루콘산(Gluconic acid)펩틴(Pectin)가용성전분(Soluble starch)라피노오스(Raffinose)만노오스(Mannose)글리세린(Glycerin)N-아세틸-글루탐사민(N-acetyl-glucosamine)카프레이트(Caprate)아디페이트(Adipate)말레이트(Malate)페닐아세테이트(Phenylacetate) |
ww-+-w---+- |
+, 양성 ; -,음성; w,미약함
폴리에스터 폐수에는 생물학적으로 분해되기 쉬운 물질뿐만 아니라 난분해성 물질이 다량 배출되고 있으나 기존처리장에서는 응집공정으로 전 처리한 후 활성슬러지공정으로 후처리하고 있어 폭기조내의 용존산소가 낮고 슬러지벌킹등의 발생에 의하여 종합처리를 하는데 어려움이 많다. 기존 처리장에서 응집처리를 제일먼저 하는 이유는 폭기조 내의 생물화학적 산소요구량(BOD) 부하가 높아 폐수처리가 잘 되지 않기 때문에, 응집공정으로 전 처리 하여 BOD부하를 낮추기 위하여 응집처리를 하는 것이다.
또한 염색폐수는 성분조성이 복잡하고 수질변동이 크기 때문에 여러 가지 처리법과 그에 대한 조합이 검토되어 왔으나 아직도 정확한 폐수처리시스템이 정착되지 않고 있는 실정이다. 그러므로 기존 처리장에서는 유량 및 부하 변동에 의한 충격부하로 인하여 폐수처리효율이 저하하고 벌킹현상이 일어남에 따라 BOD 부하를 낮추기 위하여 전처리로서 응집처리를 하고 있는 것이다.
그러나 본 발명에서 분리된 세균은 pH 및 온도의 변화에 강하고, 난분해성물질의 혼입에 의한 미생물의 증식의 억제가 없으며, 유량 및 BOD부하 변동에 의한 충격부하현상이 없으므로, 기존의 처리공정과 같은 응집처리에 의하여 부하를 낮추는 공정이 필요 없이 바로 폐수를 유입시킬 수 있다.
상기와 같은 이유로 본 발명의 슈도모나스 이지-2를 이용하여 폐수를 처리하는 공정은, 원수-중화-폭기조-침전조-가압부상조-침전조-방류와 같은 처리공정으로 처리를 하여도 처리효율이 증가되는 것으로 나타났다.
슈도모나스 이지-2를 이용하여 에틸렌글리콜이 함유된 폐수를 처리하는 공정은, 원수를 중화하는 단계, 상기 중화된 폐수를 폭기조에서 폭기하는 단계, 상기 폭기조를 통과한 폐수를 침전시키는 단계, 상기 침전조를 통과한 폐수를 가압부상하는 단계, 상기 가압부상 단계를 통과한 폐수를 다시 침전시키고, 정화된 폐수를 방류하는 단계를 포함한다. 이하에서 단계별로 보다 상세히 설명한다.
원수인 염색공정의 폐수는 pH 12 정도의 강알칼리 폐수 이다. 따라서, 생물학적 처리를 위하여는 본 균의 최적 pH로 조성해야 하는데, 본 균의 최적 pH는 6~8인 것으로 조사되었으므로, 본 균의 최적 pH를 맞추기 위하여, 황산등의 산을 원수에 첨가하여 pH 6~8이 되도록 조절하는 중화 공정이 필요하다.
폭기조 단계에서는 본 발명인 미생물을 배양하여 폭기조에 투입시킴으로써, 난분해성 물질을 분해하는 작용이 이루어진다.
침전조 단계에서는 폭기조 내의 미생물과 처리수를 분리하고, 미생물의 농도를 조절하는 작용을 한다.
가압부상조 단계에서는 침전조의 상등액에 남아있는 유기물을 가압부상조에서 완전히 제거하고, 상기 가압부상단계를 통과한 폐수를 다시 침전시키고, 마지막으로 상기 공정에 의하여 정화된 분리수를 방류하는 단계로 완결된다.
다음의 실시예는 본 발명을 좀더 구체적으로 설명하는 것이지만, 본 발명의 범주를 하기 실시예에 한정하는 것은 아니다.
(실시예 1) : 에틸렌글리콜 분해 균주의 선별
에틸렌글리콜의 분해능력과 생육이 우수한 미생물을 분리하고자, 대구지역섬유공장의 폐수처리장에서 폐수가 유출되는 하천 주변의 오염원(물과 토양)을 채취하여 일정기간 순응시킨 후, 순응된 미생물을 멸균 생리식염수에 현탁하여 에틸렌글리콜함유 최소배지(에틸렌글리콜 2%, 황산암모늄 0.2%, 인산이수소칼륨 0.1%, 염화나트륨 0.1%, 황산마그네슘 0.05%)의 평판배지에 도말하였다.
도말한 평판배지를 30℃의 배양기에서 3일간 배양하여 평판 배지상에서 우수한 성장을 보이는 20여종의 단일군락 미생물을 분리하였다.
분리된 매생물에 대한 에틸렌 글리콜의 분해능력을 측정하기 위하여 상기 에틸렌글리콜 함유 최소배지에 각각의 단일 군락 미생물을 접종한 후, 30℃에서 48시간 진탕배양하여 균의 생육도 및 에틸렌글리콜의 분해능력이 우수한 1개의 균주를 선택하였다.
(실험예 1)
실시예 1에 의하여 분리된 슈도모나스 이지-2 의 생육에 미치는 에틸렌글리콜(ethylene glycol)농도의 영향을 조사하기 위하여 에틸렌글리콜 농도를 0.01 ∼1.0% 로 조정하여 36시간 진탕배양한 결과는 하기 표 3과 같다.
에틸렌글리콜 농도가 증가할수록 균의 생육도도 비례하여 증가하였으며, 폐수에 에틸렌글리콜 농도가 1% 까지 함유된 점으로 미루어 볼 때 본 균에 의한 폐수처리시 에틸렌글리콜은 균의 생육에 미치는 영향이 없이 완전히 분해되는 것으로 나타났다.
또한, 에틸렌글리콜의 농도가 2.0%이상일 경우에는 에틸렌글리콜의 분해시간이 길어지는 것으로 관찰되었으며, 에틸렌글리콜의 농도가 2.0%이하일 경우에는 짧은 시간(24시간)내에 에틸렌글리콜이 완전히 분해되는 것으로 나타났으며, 에틸렌글리콜의 농도가 2.0%인 경우에도 우수한 분해능을 보이는 것으로 나타났다.
표 3. 에틸렌글리콜의 농도에 따른 슈도모나스 이지-2의 생육도
EG농도(%) |
균생육도 (O.D 660㎚) |
00.010.250.050.10.20.51.02.0 |
0.0110.1240.2340.3220.3920.5110.5780.6250.837 |
(실시예 2) : 에틸렌글리콜이 함유된 폐수처리
상기 실시예 1의 슈도모나스 이지-2를 이용하여 에틸렌글리콜이 함유된 폐수를 처리하기 위하여 다음과 같은 처리를 하였다.
염색공장의 폐수인 원수는 pH 12정도의 강알칼리 폐수이므로, 생물학적 처리를 위하여는, 원수의 pH를 실시예 1에 의하여 분리된 본 발명인 슈도모나스이지-2의 최적 pH에 맞추기 위하여 황산등의 산을 첨가하여 pH를 7이 되도록 조절한다.
폭기조의 유효용량은 13.8ℓ 이며 두께 5mm의 아크릴 수지로 제작하였다. 반응조의 온도 유지를 위하여 물자켓(water jacket)을 이용하여 반응기내 온도를 30±2℃로 유지하였다.
반응조의 원수공급과 오니 반송을 위하여 정량펌프를 이용하여 연속공급하였으며, 송풍기(air blower)를 이용하여 반응기의 용존산소 농도를 1.0~2.0 mg/ℓ 로유지하였다. 또한, 유입수의 씨엔피 균형(CNP Balance)를 유지하기 위하여 요소와 인산을 이용하여 화학적산소요구량(COD) : 질소(N) : 인(P)이 100 : 5 : 1 으로 유지되도록 영양염류를 주입하였으며, 반응조의 수리학적 체류시간을 30~35시간으로 유지하였다.
그리고, 폭기조에는 본 발명인 슈도모나스 이지-2을 배양하여 폭기조에 첨가한 후, 침전조에서는 폭기조 내의 미생물과 처리수를 분리하고, 미생물의 농도를 조절하였다. 가압부상조에서는 침전조의 상등액에 남아있는 유기물을 완전히 제거하고, 다시 침전조를 통한 후, 마지막으로 이(분리수)를 방류함으로써 폐수의 처리는 완료된다.
상기 실시예 2에서 사용한 폐수는 염색공단에서 발생하는 염색폐수로 폐수의 pH는 11.8∼12.3이었으며, CODMn은 480∼1103㎎/ℓ 이었으며, 부유물질은 150∼300㎎/ℓ인 염색폐수를 폐수의 pH와 영양조성비를 조절하고 본 실험에서 분리한 슈도모나스 이지-2를 첨가하여 활성슬러지법으로 처리하였다(표 4).
그 결과 처리수의 수질에는 큰 변화가 없이 방류수의 화학적 산소요구량(COD)이 20.1~33.5 mg/ℓ 이고, 생물화학적 산소요구량(BOD)은 0.4~3.5 mg/ℓ 정도인 처리수를 반복적으로 얻을 수 있었다. 또한, 에틸렌글리콜의 농도는 원수에서 139~231 mg/ℓ 로 평균 179.2 mg/ℓ 로 분석되었다. 그러나, 도 1에 나타난 바와 같이 폭기조와 방류수에서 에틸렌글리콜이 전혀 검출되지 않아 본 처리 공정을 통해 에틸렌글리콜은 100% 완전히 제거되는 것으로 나타났다.
표 4. 분리된 균에 의한 염색폐수처리효과
항목 |
원수 |
처리수 |
CODMn |
481 ∼ 1103 ㎎/ℓ |
20.1 ∼ 33.5㎎/ℓ |
CODCr |
904 ∼ 3357 ㎎/ℓ |
35.1 ∼ 49.2㎎/ℓ |
BOD5 |
863 ∼ 3122 ㎎/ℓ |
0.4 ∼ 3.5㎎/ℓ |
총 유기탄소(TOC) |
912 ∼ 1440 ㎎/ℓ |
21.4 ∼ 31.73㎎/ℓ |
에틸렌글리콜(EG) |
139 ∼ 231 ㎎/ℓ |
불검출 |
부유물질(SS) |
150 ∼ 300 ㎎/ℓ |
5 ∼ 20㎎/ℓ |
pH |
11.8 ∼ 12.3 |
7.5 ∼ 8.2 |
도 2는 운전시간에 따른 슬러지 부피(Sludge Volume : SV)의 변화를 나타낸 것이다. 활성슬러지가 침전조 단계에서 고액분리되는 것은 슬러지의 부피와 밀접한 관계가 있다. 또한, 슬러지의 부피는 유량 및 BOD부하 변동에 의한 충격부하 현상이 일어나는 지를 알 수 있는 지표가 되는 활성슬러지의 효율과 직결되는 중요한 인자가 된다.
도 2에서 나타난 바와 같이, SV30은 운전 3 일째 최저치인 33%를 보인 경우를 제외하고는 42~55%의 범위를 보였으며, 평균 51.2%의 슬러지부피를 나타내었고, SV60는 운전 3일째 최저치인 28%를 보인 이후 33~43%의 범위로 조사되었으며, 평균 32.8%를 보여 슬러지의 침강성이 매우 좋은 것으로 나타났다. 이와 같이, 본 발명인 슈도모나스 이지-2는 유량 및 BOD 부하변동에 의한 충격부하현상이 일어나지 않는다.
(실험예 2)
슈도모나스 이지-2(Pseudomonas sp EG-2)의 에틸렌글리콜(ethylene glycol)분해능을 확인하기 위하여 초기의 에틸렌글리콜의 농도를 1700ppm으로 조정한 액체배지에 균주를 30℃에서 120rpm으로 배양하면서 경시적으로 균의 생육도와 에틸렌글리콜의 농도를 기체크로마토그래피(Gas Chromatography) 로 분석한 결과는 하기 도 3 및 표 5과 같다. 균의 생육도는 24시간 일 때부터 급격히 증가하였으며 에틸렌글리콜(ethylene glycol)의 농도는 배양 60시간 일 때에는 거의 검출되지 않았다. 따라서 슈도모나스 이지-2를 감량폐수처리에 적용하면 감량폐수에 함유되어 있는 에틸렌글리콜을 완전히 분해할 수 있는 것으로 나타났다.
표 5. 에틸렌글리콜 함유 최소배지에서 분리된 균을 접종하여 배양시간별 균의 생육도와 에틸렌글리콜 분해능 측정결과
배양시간(hr) |
에틸렌글리콜농도(ppm) |
균생육도(OD) |
0 |
1700 |
0.012 |
17 |
1358 |
0.289 |
24 |
1130 |
0.682 |
40 |
330 |
1.409 |
48 |
46 |
1.397 |
60 |
0 |
1.349 |