KR100237970B1 - 다당류 히드롤라제의 활성화 - Google Patents

다당류 히드롤라제의 활성화 Download PDF

Info

Publication number
KR100237970B1
KR100237970B1 KR1019920703173A KR920703173A KR100237970B1 KR 100237970 B1 KR100237970 B1 KR 100237970B1 KR 1019920703173 A KR1019920703173 A KR 1019920703173A KR 920703173 A KR920703173 A KR 920703173A KR 100237970 B1 KR100237970 B1 KR 100237970B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
cellulase
group
pvp
vinylpyrrolidone
pullulanase
Prior art date
Application number
KR1019920703173A
Other languages
English (en)
Inventor
로스홀름 페터
크이 시 요안
기알로카이 옷토
바그너 페터
Original Assignee
한센 핀 베네드
노보 노르디스크 에이/에스
안네 제헤르
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 한센 핀 베네드, 노보 노르디스크 에이/에스, 안네 제헤르 filed Critical 한센 핀 베네드
Priority claimed from PCT/DK1991/000158 external-priority patent/WO1991019807A1/en
Application granted granted Critical
Publication of KR100237970B1 publication Critical patent/KR100237970B1/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
    • C12N9/2411—Amylases
    • C12N9/2414—Alpha-amylase (3.2.1.1.)
    • C12N9/2417—Alpha-amylase (3.2.1.1.) from microbiological source
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16—Organic compounds
    • C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
    • C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16—Organic compounds
    • C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
    • C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
    • C11D3/38636—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase containing enzymes other than protease, amylase, lipase, cellulase, oxidase or reductase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16—Organic compounds
    • C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
    • C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
    • C11D3/38645—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase containing cellulase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
    • C12N9/2437—Cellulases (3.2.1.4; 3.2.1.74; 3.2.1.91; 3.2.1.150)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/96—Stabilising an enzyme by forming an adduct or a composition; Forming enzyme conjugates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01004—Cellulase (3.2.1.4), i.e. endo-1,4-beta-glucanase
    • D—TEXTILES; PAPER
    • D06—TREATMENT OF TEXTILES OR THE LIKE; LAUNDERING; FLEXIBLE MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • D06L—DRY-CLEANING, WASHING OR BLEACHING FIBRES, FILAMENTS, THREADS, YARNS, FABRICS, FEATHERS OR MADE-UP FIBROUS GOODS; BLEACHING LEATHER OR FURS
    • D06L1/00—Dry-cleaning or washing fibres, filaments, threads, yarns, fabrics, feathers or made-up fibrous goods
    • D06L1/12—Dry-cleaning or washing fibres, filaments, threads, yarns, fabrics, feathers or made-up fibrous goods using aqueous solvents
    • D06L1/14—De-sizing
    • D—TEXTILES; PAPER
    • D06—TREATMENT OF TEXTILES OR THE LIKE; LAUNDERING; FLEXIBLE MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • D06M—TREATMENT, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE IN CLASS D06, OF FIBRES, THREADS, YARNS, FABRICS, FEATHERS OR FIBROUS GOODS MADE FROM SUCH MATERIALS
    • D06M16/00—Biochemical treatment of fibres, threads, yarns, fabrics, or fibrous goods made from such materials, e.g. enzymatic
    • D06M16/003—Biochemical treatment of fibres, threads, yarns, fabrics, or fibrous goods made from such materials, e.g. enzymatic with enzymes or microorganisms
    • D—TEXTILES; PAPER
    • D06—TREATMENT OF TEXTILES OR THE LIKE; LAUNDERING; FLEXIBLE MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • D06P—DYEING OR PRINTING TEXTILES; DYEING LEATHER, FURS OR SOLID MACROMOLECULAR SUBSTANCES IN ANY FORM
    • D06P5/00—Other features in dyeing or printing textiles, or dyeing leather, furs, or solid macromolecular substances in any form
    • D06P5/12—Reserving parts of the material before dyeing or printing ; Locally decreasing dye affinity by chemical means

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Textile Engineering (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Chemical Or Physical Treatment Of Fibers (AREA)
  • Detergent Compositions (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

다당류 히드롤라제의 효과는 비닐피롤리돈, 비닐알코올, 아크릴아미드 및 가용성 아크릴레이트의 군으로 부터 선택된 하나 이상의 단위체의 수용성 중합체를 용해된 형태로 반응계 속에 삽입시킴으로써 증가되었다.

Description

[발명의 명칭]
다당류 히드롤라제의 활성화
[기술분야]
본발명은 다당류 히드롤라제(polysaccharide hydrolase)의 효과를 증가시키는 방법에 관한 것이다.
[배경기술]
다당류 히드롤라제는 그룹 EC 3.2.1로 분류되고 기질로서 다당류를 가지는 효소이다. 이것의 실례는 각기 글루칸인 녹말, 셀룰로스 및 풀룰란(pullulan)의 엔도-가수분해를 촉진하는 α-아밀라제, 셀룰라제 및 풀룰란아제 따위의 엔도-글루칸아제이다.
다당류 히드롤라제의 많은 산업상 이용이 공지되어 있다. 그리하여, 글루코스(덱스트로스) 또는 말토스 생성을 위해 (예컨대 EP 63,909) 또는 풀룰란을 말토트리오스로 가수분해시키기 위해 액화 녹말의 당화에서 당화효소와 함께 풀룰란아제를 이용하는 것이 공지되어 있다. 셀룰로스를 예컨대 작물의 색깔 정화에 이용하는 것이 공지되어 있다(EP 220,016).
[발명의 개시]
우리는 놀랍게도 어떤 수용성 중합체의 첨가가 다당류 히드롤라제의 효과를 크게 증가시킨다는 것을 발견하였다.
따라서, 본 발명은 비닐피롤리돈, 비닐알코올, 아크릴아미드 및 가용성 아크릴레이트의 군으로 부터 선택된 하나 또는 그 이상의 단위체의 수용성 중합체를 반응계속으로 용해된 형태로 삽입하는 것을 특징으로 하는 다당류 히드롤라제의 효과를 증가시키는 방법을 제공한다.
본 발명의 다른 면은 상기의 수용성 중합체의 존재를 특징으로 하는 다당류 히드롤라제를 이용한 효소공정을 제공한다.
최종적으로 본 발명은 상기의 수용성 중합체를 함유하는 것을 특징으로 하는 다당류 히드롤라제 제조물을 제공한다.
PVP는 발표된 효소활성에 대한 어떤 영향없이 효소(예컨대 프로테아제, 글루코스 이성화효소)의 과립화에서 결합제로 이용되었다(예컨대 US 4,572,897).
PVP는 또한 효소(예컨대 퍼옥시다제, 프로테아제)의 저장 안정성을 개선한다고 발표되었다(예컨대 EP 303,062, WO 90/00593).
V. Jancsik, J. Mol, Catal., 6(1), 41-50(1979)은 PVP에 의한 한종류의 알도라제의 억제를 발표하였다. F. E. Prado et al., J. Biol. Chem. 260 (8), 4952-7 (1985)은 PVP에 의한 인버타제(전화효소)의 활성화를 발표하였다.
J.R.L. Walker et al., Phytochemistry (Oxford), 19 (3), 373-8 (1980)은 O-디페놀 옥시다제(카테콜아제)는 PVP에 의해 억제되지만, P-디페놀 옥시다제(락카제)는 PVP에 의해 영향을 받지 않는다고 발표하였다.
PVP는 또한 발표된 효소활성에 대한 어떤 영향없이 효소의 회수에 이용되었다(EP 262,651, EP 214,531, US 4,144,130, US 4,016,039).
그러나, 선행기술은 당업자에게 PVP에 의한 다당류 히드롤라제의 활성화를 예상할 수 있도록 지침을 주지는 않는다.
[발명의 상세한 설명]
[다당류 히드롤라제]
본 발명은 다당류 히드롤라제 즉 기질로의 다당류를 가지고 효소 명명법에 따라 그룹 EC 3.2.1에 속하는 효소의 활성화에 관한 것이다.
그것은 특히 엔도글루칸아제 즉 글루칸(글루코스 단위의 중합체)의 엔도-가수분해에 작용하는 효소 예컨대 셀룰라제, 풀룰란아제 또는 α-아밀라제의 활성화에 적용할 수 있다.
셀룰라제(EC 3.2.1.4)는 Humicola(특히 H. lanuginosa, US 4,435,307) 또는 Trichoderma(예컨대 T. viride, T. reesei 또는 T. koningii)로부터 추출될 수 있고, 또는 PCT/DK 90/00123에 따라 제조될 수 있다.
풀룰란아제(EC 3.2.1.41)는 EP 63,909에서 기술한 대로 Bacillus 특히 B. acidopullulyticus로부터 추출될 수 있다.
α-아밀라제(EC 3.2.1.1)는 Bacillus 예컨대 B. amyloliquefaciens, B. licheniformis 또는 B. stearothermophilus로부터 추출될 수 있다.
본 발명은 또한 예컨대 Aspergillus, 특히 A, niger로부터 추출된 이눌린아제(EC 3.2.1.7)의 활성화에도 적용가능하다.
[효소공정]
본 발명은 다당류 히드롤라제를 이용한 공정에서 효소적 효과를 증가시키는데 이용된다. 하나의 실례는 EP 220,016에 기술된 것처럼 직물의 색깔 정화를 위해 셀룰라제를 이용하는 공정이다.
색깔 정화에서, 효소와 PVP를 세정제와 함께 선택적으로 이용할 수 있다.
다른 실례는 글루코아밀라제, β-아밀라제 및 말토게닉 아밀라제의 군으로 부터 선택된 당화 효소와 함께 풀룰란아제 존재하에서의 액화 녹말의 당화이다.
또 다른 실례는 풀룰란을 말토트리오스로 가수분해하기 위한 풀룰란아제의 이용이다.
[수용성 중합체]
본 발명에 이용된 수용성 중합체는 비닐피롤리돈, 비닐알코올, 비닐카르복실레이트(예컨대 아세테이트 따위의 C1-C4카르복실레이트), 아크릴아미드 및 아크릴레이트(예컨대 소듐 아크릴레이트 따위의 알칼리 금속아크릴레이트)의 하나 또는 그 이상의 단위체의 중합체이다. 중합체는 단일 중합체 또는 공중합체 예컨대 블록 또는 임의의 공중합체일 수 있다.
바람직한 중합체의 실례는 PVP(폴리비닐 피롤리돈), PVA(폴리비닐알코올), 폴리 아크릴레이트, 및 아크릴아미드 또는 비닐알코올과 비닐피롤리돈의 공중합체이다.
본 발명에 이용된 PVP는 바람직하게는 평균 분자량이 5,000-1,000,000 특히 5,000-50,000이다. PVP의 양은 바람직하게는 공정조건에서 건조고체 kg당 0.03-3g PVP 또는 반응 배지내의 0.005-5%이다. 효소제조물에서 PVP의 양은 바람직하게는 0.005-10%, 특히 0.1-5%(모두 중량 %)이다.
풀룰란아제의 경우에는, PVP의 양이 바람직하게는 5×10-4-5×10-2g PVP/PUN이다.
중합체의 양은 바람직하게는 반응계내에서 0.5-100㎎/ℓ, 예컨대 0.5-50㎎/ℓ 또는 효소 제조물에서 0.005-10%, 예컨대 0.1-5%이다.
본 발명에 이용된 PVA는 바람직하게는 부분가수분해된 저(低)(예컨대 C1-C4) 카르복실산의 폴리비닐 에스테르, 특히 가수분해 정도가 75% 이상 특히 90% 이상 예컨대 95% 이상인 폴리비닐 아세테이트이다.
PVA는 바람직하게는 분자량이 5,000-200,000 예컨대 20,000-200,000 특히 50,000-100,000이다.
상기에서 언급한 공중합체는 바람직하게는 비닐피롤리돈과 비닐알코올 또는 아크릴아미드의 비율이 1:10 내지 10:1(몰농도에 근거하여) 범위인 임의의 공중합체이다.
[효소제조물]
본 발명의 효소제조물은 저장 및 적재에 적합한 안정화된 액체 또는 비-분진성 과립의 형태로 제공될 수 있거나, 또는 곧 사용할 수 있는 수용액일 수도 있다.
비-분진성 과립은 예컨대 US 4,106,991 및 4,661,452(모두 Novo Industri A/S)에 개시되어 있는 대로 생성될 수 있고 선택적으로 당업계에 공지된 방법에 의하여 코팅될 수 있다.
액체 효소제조물은 예컨대 프로필렌 글리콜 따위의 폴리알코올, 당알코올 또는 탄수화물 예컨대 수크로스를 예컨대 20-80%, 바람직하게는 50% 이상의 양으로 첨가함으로써 안정화시킬 수 있다.
또한 락트산을 안정화제로서 이용할 수 있고, 액체가 더욱이 벤조산나트륨 따위의 방부제를 전형적으로 0.1-0.5% 포함할 수도 있다.
본 발명에 따른 액체 풀룰란아제 제조물은 더욱이 SO2로부터 0.1-2%에 해당하는 아황산나트륨 또는 중아황산나트륨에 포함할 수도 있다.
사용목적에 따라, 효소가 다른 활성성분과 혼합될 수도 있다.
그리하여 풀룰란아제는 상기에서 언급한 당화효소와 함께 풀룰란아제를 함유하는 혼합된 효소제조물로서 이용할 수도 있다.
PVP와 함께 셀룰라제는 액체 또는 과립일 수 있는 세정제 조성물 속에 포함될 수도 있다.
[셀룰라제 활성의 결정(CEVU)]
0.1M Tris 완충용액(pH 9.0)내에 33.3g/ℓ CMC(Hercules 7 LFD)를 함유하는 기질 용액을 제조한다. 분석할 효소샘플을 같은 완충용액에 녹인다.
기질용액 10㎖의 효소용액 0.5㎖을 혼합하고 40℃로 자동온도조절된 점성도계(예컨대 Haake VT 181, NV sensor, 181 rpm)로 옮긴다. 1셀룰라제 점성도 단위(CEVU)는 이 조건하에서 점성도를 1/2로 감소시키는 효소의 양으로 정의한다.
[폴룰란아제 활성의 결정(PUN)]
이 단위는 EP 63,909에 정의된다.
[실시예]
[실시예 1]
[Humicola 셀룰라제 및 PVP의 직물색깔정화]
흑색 면직물 견본을 Terg-O-TometerTM에서의 세번의 반복적인 세척 및 각각 세척후 헹굼과 건조공정에 의하여 처리했다.
세척조건은 다음과 같다.
세정제는 상업적인 US 액체 세정제였고, 2g/ℓ의 투여량을 사용했다.
PVP(분자량 30,000)의 양을 변화시켜서 세정제에 첨가했다.
US 4,435,307에 따라서 제조된 H. insolens의 셀룰라제를 0.50 또는 100 CEVU/ℓ의 투여량으로 세척 바로 전에 세정제 용액에 첨가하였다.
견본의 표면을 반사광을 측정하여 분석하였다.
이 측정에서는, 백색광을 표면에 방사하고 반사/방사를 “Elrepho 2000” Datacolor Schweiz 장치에 의하여 16개의 파장에서 탐지하였다.
이 탐지의 결과를 헌터좌표(Hunter Coordinate)로 처리하였는데 L-좌표는 표준회색 색표(grey scale) 값(100 : 흑색, 0 : 백색)을 나타낸다.
효소의 효과는 회색/닳아서 해진 형태를 야기하는 손상된 셀룰로스 섬유의 제거이다. 표준 회색 색표 값을 측정함으로써 효소처리에 대한 정량적 표시를 얻었다. 그 결과는 셀룰라제와 PVP 없이 처리된 표면에 관한 델타 L로서 표현되었다.
[세정제 1]
셀룰라제의 색깔정화 효과가 PVP의 첨가에 의하여 증가된다는 것이 보여진다.
[실시예 2]
[셀룰라제와 PVP의 직물색깔정화]
이 실험은 실시예 1과 똑같은 방법으로 행하였지만, 세정제 대신에 완충용액 시스템을 및 PVP 대신에 PVA를 이용하였다.
PVA는 평균 분자량이 72,000이고 가수분해의 정도는 98%이다.
완충용액 시스템은 5%(W/W) 트리에탄올 아민, 10% 에탄올 및 85% H2O를 포함하였다. 2g/ℓ의 투여량을 사용하였다.
[결과]
실시예 1에서와 같이 델타 L로 표현됨;
[실시예 3]
[PVA/PVP 공중합체에 의한 셀룰라제의 활성화]
이 실험은 실시예 2와 똑같은 방법으로 행하여졌지만, PVA 대신에 비닐알코올과 비닐피롤리돈의 임의의 공중합체를 이용하였다.
[실시예 4]
[PVP/아크릴아미드 공중합체에 의한 셀룰라제의 활성화]
이 실험은 실시예 2와 똑같은 방법으로 행하여졌지만, PVA 대신에 비닐피롤리돈과 아크릴아미드의 임의의 공중합체를 이용하였다.
[결과]
[실시예 5]
[CMC 가수분해에서 Trichoderma 셀룰라제의 활성화]
675 EGU/g(WO 91/07542에서 기술한 셀룰라제 활성단위)의 활성을 갖는 T. reesei의 셀룰라제를 카르복시메틸 셀룰로스(CMC)의 가수분해에서 PVP를 첨가 및 첨가하지 않고 검사하였다. PVP의 양은 효소제조물에 비례하는 중량%로서 표현하였다.
0.1M 인산완충용액(pH 6.0)내에 34.0g/ℓ CMC(Hercules 7 LFD)를 함유하는 기질용액을 제조하였다. 분석할 효소샘플을 똑같은 완충용액을 녹였다.
기질용액 5㎖과 효소용액 0.15㎖을 혼합하고 40℃로 자동온도조절된 진동 점성도계(예컨대 MIVI 3000, Sofraser, France)로 옮겼다.
상대활성은 이 조건하에서 점성도를 1/2로 감소시키는 효소의 양으로 부터 계산하였다; PVP의 첨가없는 결과를 100으로 하였다.
효소샘플의 양은 반응 혼합물내에서 0.01-0.20 EGU/㎖였다.
[결과]
[실시예 6]
[풀룰란 가수분해에서 풀룰란아제의 활성화]
액체 풀룰란아제 제조물은 EP 63,909에 따라 제조하였다.
이 제조물은 180 PUN/g의 풀룰란아제 활성을 가지며 50% 수크로스를 포함하였다.
PVP (MW 15,000)의 양을 변화시켜서 이 제조물에 첨가하였다.
겉보기 풀룰란아제 활성은 PUN 방법에 의해 결정하였다. PVP 함량은 제조물 내에서 중량%로서 주어졌다.
[결과]
그 결과는 1.0% PVP에서 33% 증가까지 활성화를 증가시키는 것을 명백하게 보여준다.
[실시예 7]
[p당화에서 풀룰란아제의 활성화]
본 실시예에서는, 액화녹말을 PVP를 함유한 룰란아제와 글루코아밀라제로 당화시켰다. 실험은 본질적으로 EP 63,909에서와 같이 수행하였다.
실시예 6의 풀룰란아제 샘플을 이용하였고 실시예 6에서 주어진 겉보기 활성에 따라 투여하였다. 즉 PVP에 의해 활성화된 제조물에 대응하여 더 적게 투여하였다. 효소 투여량은 글루코아밀라제 0.18AG/g 및 풀룰란아제 0.06 PUN/g였다. 당화 조건은 60℃, 초기의 pH는 4.3이었다.
HPLC에 의한 분석은 24, 48, 72 및 96시간 후에 행하여졌다.
최대 % DP1는 다음과 같다.
풀룰란 가수분해에서와 같이 가수분해된 녹말의 당화에서도 똑같은 정도의 활성화가 발견된다는 것을 나타내는 동일한 결과를 얻었다.
[실시예 8]
[이눌린아제의 활성화]
이눌린의 가수분해에서 PVP의 첨가 및 PVP의 첨가없이 A. niger의 이눌린아제를 검사하였다. PVP의 양은 효소제조물에 대한 중량%로서 표현되었다.
이눌린 가수분해에 이용된 조건은 0.025M 시트르산 완충용액(pH 4.70)내의 50g/ℓ 이눌린(Inulin Sigma I 3754), 40℃, 반응시간 30분이었다.
배양하는 동안 생성된 환원 탄수화물의 농도는 소모기넬슨방응(Somogyi Nelson reaction)에 의하여 결정하였다.
PVP 없는 기준 샘플은 효소제조물 g당 3107몰 환원 탄수화물(글루코스로서 계산됨)을 생성했다. 그리고 이것을 100%로 정하였다.
[결과]

Claims (14)

  1. 셀룰라제, 풀룰란아제 또는 이눌린아제의 효과를 증가시키는 방법에 있어서, 비닐피롤리돈, 비닐알코올, 비닐카르복실레이트, 아크릴아미드 및 가용성 아크릴레이트의 군으로부터 선택된 하나 이상의 단위체의 수용성 중합체를 용해된 반응계 속으로 삽입하는 것을 특징으로 하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 반응계내의 상기 중합체의 농도가 0.5-100mg/ℓ인 방법.
  3. 제3항 또는 제2항에 있어서, 상기의 중합체가 폴리비닐피롤리돈(PVP), 폴리비닐알코올(PVA), 폴리아크릴레이트, 또는 비닐피롤리돈의 비닐알코올 또는 아크릴아미드의 공중합체인 방법.
  4. 제3항에 있어서, 상기의 PVP의 평균분자량이 5,000-1,000,000인 방법.
  5. 제3항에 있어서, 상기의 PVA가 가수분해 정도가 75% 이상이고 평균분자량이 5,000-200,000인 부분적으로 가수분해된 C1-4카르복실산의 폴리비닐 에스테르인 방법.
  6. 셀룰라제, 풀룰란아제 또는 이눌린아제를 이용하는 효소학적 방법에 있어서, 비닐피룰리돈, 비닐알코올, 비닐카르복실레이트, 아크릴아미드 및 가용성 아크릴레이트의 군으로부터 선택된 하나 이상의 단위체의 수용성 중합체가 용해된 형태로 존재하는 것을 특징으로 하는 방법.
  7. 제6항에 있어서, 면직물의 색깔정화를 위해 셀룰라제를 이용하는 방법.
  8. 제6항에 있어서, 글루코아밀라제, β-아밀라제 및 말토게닉 아밀라제의 군으로부터 선택된 당화효소와 함께 액화녹말의 당화에 풀룰란아제를 이용하는 방법.
  9. 풀룰란아제 또는 이눌린아제 제조물에 있어서, 비닐피롤리돈, 비닐알코올, 아크릴 아미드 및 가용성 아크릴레이트의 군으로 부터 선택된 하나 이상의 단위체의 수용성 중합체가 0.005-10중량% 함유되어 있는 것을 특징으로 하는 풀룰란아제 또는 이눌린아제 제조물.
  10. 제9항에 있어서, 글루코아밀라제, β-아밀라제 및 말토게닉 아밀라제의 군으로부터 선택된 당화효소를 추가로 함유하는 혼합된 풀룰란아제 제조물.
  11. 제9항 또는 제10항에 있어서, 제조물의 비-분진성 과립 또는 안정화된 액체형태인 제조물.
  12. 액체 셀룰라제 제조물에 있어서, 비닐피롤리돈, 비닐알코올, 아크릴아미드 및 가용성 아크릴레이트의 군으로 부터 선택된 하나 이상의 단위체의 수용성 중합체가 0.005-10중량% 용해된 형태로 함유되어 있는 것을 특징으로 하는 액체 셀룰라제 제조물.
  13. 셀룰라제 제조물에 있어서, 비닐피롤리돈, 아크릴라이드 및 가용성 아크릴레이트의 군으로 부터 선택된 하나 이상의 단위체의 수용성 중합체를 함유하는 것을 특징으로 하는 셀룰라제 제조물.
  14. 제12항 또는 제13항에 따른 셀룰라제 제조물을 함유하는 세정제 조성물.
KR1019920703173A 1990-06-14 1991-06-14 다당류 히드롤라제의 활성화 KR100237970B1 (ko)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DK145090A DK145090D0 (da) 1990-06-14 1990-06-14 Cellulasepraeparat og anvendelse deraf
DK1450/90 1990-06-14
DK91610023.3 1991-03-27
PCT/DK1991/000158 WO1991019807A1 (en) 1990-06-14 1991-06-14 Activation of polysaccharide hydrolase

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR100237970B1 true KR100237970B1 (ko) 2000-01-15

Family

ID=8104953

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1019920703173A KR100237970B1 (ko) 1990-06-14 1991-06-14 다당류 히드롤라제의 활성화

Country Status (4)

Country Link
KR (1) KR100237970B1 (ko)
AU (1) AU8076791A (ko)
DK (1) DK145090D0 (ko)
WO (1) WO1991019794A1 (ko)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7202225B1 (en) 1993-10-15 2007-04-10 Emanuele R Martin Therapeutic delivery compositions and methods of use thereof
US6933286B2 (en) 1991-03-19 2005-08-23 R. Martin Emanuele Therapeutic delivery compositions and methods of use thereof
IL113714A0 (en) * 1994-06-22 1995-08-31 Ivax Ind Inc Method of treating dyed cellulosic fabric
TR199500988A2 (tr) * 1994-08-15 1996-06-21 Nova Nordisk As Selüloz iceren kumaslarda hasilin giderilmesi icin bir yöntem.
DE19603054A1 (de) 1996-01-29 1997-08-14 Bayer Ag Enzymgemische und Verfahren zur Entschlichtung von mit Stärke geschlichteten Textilien
DE19606619A1 (de) * 1996-02-22 1997-08-28 Henkel Kgaa Feste, praktisch wasserfreie Zubereitungen
US5919697A (en) * 1996-10-18 1999-07-06 Novo Nordisk A/S Color clarification methods
JP4754322B2 (ja) 2004-12-09 2011-08-24 花王株式会社 α−アミラーゼの活性化方法
WO2016110379A1 (en) 2015-01-06 2016-07-14 Unilever Plc Laundry composition

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2909396B2 (de) * 1979-03-09 1981-07-30 Diamalt AG, 8000 München Entschlichtungsmittel und Verfahren zu seiner Herstellung
DE3200274A1 (de) * 1982-01-07 1983-07-14 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren zur stabilisierung waessriger loesungen von cholesterinesterase aus pseudomonaden
NZ230842A (en) * 1988-10-21 1992-05-26 Colgate Palmolive Co Nonionic heavy duty particulate detergent containing protease, amylase and cellulase

Also Published As

Publication number Publication date
WO1991019794A1 (en) 1991-12-26
AU8076791A (en) 1992-01-07
DK145090D0 (da) 1990-06-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3083704B1 (en) Use of poly alpha-1,3-glucan ethers as viscosity modifiers
CN112292403B (zh) 包含多糖衍生物的产品
KR102421497B1 (ko) 세제 조성물
Reese Biological degradation of cellulose derivatives
Shoemaker et al. Enzymic activities of endo-1, 4-β-D-glucanases purified from Trichoderma viride
KR100237970B1 (ko) 다당류 히드롤라제의 활성화
FI120910B (fi) Alkalinen Bacillus-amylaasi
Zhu et al. Biodegradation of polyelectrolyte complex films composed of chitosan and sodium cellulose sulfate as the controllable release carrier
EP0576424B1 (en) Activation of polysaccharide hydrolase
CN101910390A (zh) 纤维素酶在后续洗涤过程期间赋予棉制品去垢有益效果的用途
McCleary et al. Novel substrates for the measurement of endo-1, 4-β-glucanase (endo-cellulase)
Planchot et al. Purification and characterization of extracellular alpha-amylase from Aspergillus fumigatus
Kim et al. Substrate specificity and detailed characterization of a bifunctional amylase‐pullulanase enzyme from Bacillus circulans F‐2 having two different active sites on one polypeptide
Karim et al. Single step immobilization of CMCase within agarose gel matrix: kinetics and thermodynamic studies
Chen et al. Chemoenzymatic synthesis of linear poly (sucrose acrylate): Optimization of enzyme activity and polymerization conditions
US6517588B2 (en) Laundry treatment for fabrics
JPH11502256A (ja) 固定化酵素を含有する洗剤組成物
CN1118556C (zh) 颜色净化方法
Kasumi et al. Preparation and some properties of chitosan bound enzymes
JPH034791A (ja) 酵素の安定化方法
CA2218953A1 (en) Cellulase-containing washing agents
US20010036908A1 (en) Laundry treatment for fabrics
Tahara et al. Two types of cellulase activity produced by a cellulose-producing Acetobacter strain
Woodward et al. Properties of native and immobilised preparations of β‐D‐glucosidase from Aspergillus niger
Greenwood et al. Studies on starch-degrading enzymes: Part II the Z-enzyme from soya beans; purification and properties

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
LAPS Lapse due to unpaid annual fee