KR100199284B1 - Method for manufacturing chondroitic sulfate and sodium salts thereof from the bone or cartilage of a shark - Google Patents
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Abstract
본 발명은 건조된 상어 뼈 또는 연골로부터 하기 화학식 1로 표시되는 콘드로이친 설페이트 및 그의 나트륨염을 제조하는 방법에 관한 것으로, ①상어 뼈 또는 연골을 염산 용액에 침적한 후, 95%의 에탄올로 세척하여 불순물을 제거하는 단계 ; ②단백질 분해효소를 사용하여 상어 뼈 또는 연골로부터 콘드로이친 설페이트를 추출하는 단계 ; ③추출액의 pH를 약 8.5로 맞추어 콘드로이친 설페이트 이외의 단백질을 제거하는 단계; ④추출액을 이온교환수지를 사용하여 정제하는 단계 ; ⑤필요에 따라, 이온교환 수지를 통과한 추출액의 pH를 5.0∼7.0으로 조절한 후 나트륨염을 첨가하여 완전 용해시키는 단계 ; 및 ⑥ 알코올을 이용하여 콘드로이친 설페이트 또는 그의 나트륨염을 결정화하는 단계를 포함함을 특징으로 한다.The present invention relates to a method for producing chondroitin sulfate and its sodium salt represented by the following formula (1) from dried shark bone or cartilage, ① by immersing the shark bone or cartilage in hydrochloric acid solution, washed with 95% ethanol Removing impurities; ② extracting chondroitin sulfate from shark bone or cartilage using protease; ③ adjusting the pH of the extract to about 8.5 to remove proteins other than chondroitin sulfate; ④ purifying the extract using an ion exchange resin; ⑤ adjusting the pH of the extract passed through the ion exchange resin to 5.0 to 7.0, if necessary, and then dissolving it completely by adding sodium salt; And ⑥ crystallizing chondroitin sulfate or its sodium salt using alcohol.
여기서, n: 75∼85 M : H or NaN: 75 to 85 M: H or Na
Description
본 발명은 건조된 상어 뼈 또는 연골로부터 콘드로이친 설페이트 및 그의 나트륨염을 제조하는 방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 동물의 결합 조직에 주성분으로 존재하는 콘드로이친 설페이트를 상어 뼈 또는 연골로부터 추출해서 고순도로 정제하는 방법 및 그의 나트륨염을 제조하는 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for producing chondroitin sulfate and its sodium salt from dried shark bone or cartilage, and more particularly, to extract high-purity purified chondroitin sulfate present in the connective tissue of the animal from the shark bone or cartilage And a method for producing the sodium salt thereof.
상어 뼈 또는 연골에서 추출한 추출물의 주요성분은 콘드로이친 설페이트와 소량의 프로테오글리칸이며, 이중에서 하기 화학식 1로 표시되는 콘드로이친 설페이트는 N-아세틸기를 함유하는 뮤코 다당류의 하나로 세포나 조직을 지탱하여 안정화시키거나 윤활제의 역할을 한다. 또한, 이온 교환에 의하여 전해질의 조절, 수분을 유지하는 역할 등을 하는 것으로 알려져 있다.The main components of the extract extracted from shark bone or cartilage are chondroitin sulfate and a small amount of proteoglycan, of which chondroitin sulfate represented by the following formula (1) is one of mucopolysaccharides containing N-acetyl group, which supports or stabilizes cells or tissues, or is a lubricant. Plays a role. In addition, it is known to play a role in controlling the electrolyte and maintaining moisture by ion exchange.
[화학식1][Formula 1]
여기서, n: 75∼85 M : H or NaN: 75 to 85 M: H or Na
종래, 콘드로이친 설페이트는 소의 뼈나 달팽이를 원료원으로 하여 50mM의 아세트산나트륨 완충용액에 0.15M의 염화칼륨 또는 4M의 구아니디늄 클로라이드(guanidinium chloride)용액으로 추출한 후, 원심분리하고, 투석한 후, 냉동 건조시키는 방법으로 제조되었으나, 열적조작을 가하므로 콘드로이친 설페이트가 불안정해지고, 고순도로 정제해낼 수 없는 문제점이 있었다.Conventionally, chondroitin sulfate is extracted from 0.15M potassium chloride or 4M guanidinium chloride solution in 50mM sodium acetate buffer, using bovine bone or snail as a raw material, followed by centrifugation, dialysis, and freeze drying. It was prepared by the method, but due to the thermal operation chondroitin sulfate was unstable, there was a problem that can not be purified with high purity.
이에, 본 발명자들은 소의 뼈나 달팽이 이외에 콘드로이친 설페이트를 함유한 물질에 대하여 조사한 결과, 상어 뼈 또는 연골에 콘드로이친 설페이트가 존재한다는 사실로부터, 열적조작 없이 안정하게 콘드로이친 설페이트를 추출해서, 고순도로 정제하여 이를 의약용, 화장품용 원료, 건강 식품용 원료로 용이하게 사용할 수 있음을 알고 본 발명을 완성하게 되었다.Therefore, the inventors of the present inventors investigated the substance containing chondroitin sulfate in addition to bovine bone or snail, and from the fact that chondroitin sulfate is present in the shark bone or cartilage, chondroitin sulfate was stably extracted without thermal manipulation, and purified to high purity The present invention has been completed by knowing that it can be easily used as a raw material for cosmetics, cosmetic raw materials and health food.
또한, 고순도로 정제된 콘드로이친 설페이트에 나트륨염을 부가하는 경우 보다 용이하게 의약용, 화장품용 원료, 건강 식품용 원료로 이를 사용할 수 있음을 알고 본 발명을 완성하게 되었다.In addition, when the sodium salt is added to highly purified chondroitin sulfate, it was found that the present invention can be easily used as a raw material for medicine, cosmetics, and health food.
따라서, 본 발명의 목적은 상어 뼈 또는 연골로부터 상기 화학식 1로 표시되는 콘드로이친 설페이트 및 그의 나트륨염을 제조하는 방법을 제공하는 것이다.Accordingly, it is an object of the present invention to provide a method for preparing chondroitin sulfate and sodium salt thereof represented by Chemical Formula 1 from shark bone or cartilage.
상기한 목적을 이루기 위해서, 본 발명의 상어 뼈 또는 연골로부터 콘드로이친 설페이트 및 그의 나트륨염을 제조하는 방법은 ①상어 뼈 또는 연골을 염산 용액에 침적한 후, 95%의 에탄올로 세척하여 불순물을 제거하는 단계 ; ②단백질 분해효소를 사용하여 상어 뼈 또는 연골로부터 콘드로이친 설페이트를 추출하는 단계 ; ③추출액의 pH를 약 8.5로 맞추어 콘드로이친 설페이트 이외의 단백질을 제거하는 단계; ④추출액을 이온교환수지를 사용하여 정제하는 단계 ; ⑤ 필요에 따라, 이온교환 수지를 통과한 추출액의 pH를 5.0∼7.0으로 조절한 후, 나트륨염을 첨가하여 완전 용해시키는 단계; 및 ⑥ 알코올을 이용하여 콘드로이친 설페이트 또는 그의 나트륨염을 결정화하는 단계를 포함함을 특징으로 한다.In order to achieve the above object, the method for producing chondroitin sulfate and its sodium salt from the shark bone or cartilage of the present invention is ① by immersing the shark bone or cartilage in hydrochloric acid solution, washed with 95% ethanol to remove impurities step ; ② extracting chondroitin sulfate from shark bone or cartilage using protease; ③ adjusting the pH of the extract to about 8.5 to remove proteins other than chondroitin sulfate; ④ purifying the extract using an ion exchange resin; ⑤ as necessary, adjusting the pH of the extract passed through the ion exchange resin to 5.0 to 7.0, and then dissolving it completely by adding sodium salt; And ⑥ crystallizing chondroitin sulfate or its sodium salt using alcohol.
본 발명의 다른 목적, 특성 및 작용은 하기 발명의 상세한 설명으로부터 당업자에게 명백하게 드러날 것이다.Other objects, features and functions of the present invention will become apparent to those skilled in the art from the following detailed description of the invention.
이하 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail.
본 발명의 상어 뼈 또는 연골로부터 콘드로이친 설페이트 및 그의 나트륨염을 제조하는 방법을 각 단계별로 보다 구체적으로 설명하면 다음과 같다.The method for producing chondroitin sulfate and its sodium salt from the shark bone or cartilage of the present invention will be described in more detail below for each step.
①상어 뼈 또는 연골을 염산용액에 침적한 후, 95%의 에탄올로 세척하여 불순물을 제거하는 단계① Dip shark bone or cartilage into hydrochloric acid solution and wash it with 95% ethanol to remove impurities
건조된 상어 뼈를 0.1∼2N의 염산 용액에 침적하여 상어 뼈 또는 연골에 함유된 회분류들을 제거한다. 이때 침적 시간은 표 1의 침적 시간과 회분 함량 사이의 상관 관계에서 알 수 있는 바와 같이, 생산성 향상을 위해서는 짧을수록 좋지만 너무 짧으면 회분 제거효과가 감소되므로 18시간 정도가 바람직하다. 염산 침적후 95%의 에탄올로 세척하여 기타 불순물들을 제거하는 과정을 거친 후 건조한다.Dried shark bone is immersed in 0.1-2N hydrochloric acid solution to remove ash contained in shark bone or cartilage. At this time, as the deposition time can be seen from the correlation between the deposition time and ash content of Table 1, the shorter the better for the productivity improvement, but too short, the ash removal effect is reduced, so about 18 hours is preferable. After dipping hydrochloric acid, it is washed with 95% ethanol to remove other impurities and dried.
② 단백질 분해효소를 사용하여 상어 뼈 또는 연골로부터 콘드로이친 설페이트를 추출하는 단계② extracting chondroitin sulfate from shark bone or cartilage using protease
①단계에서 불순물이 제거된 상어 뼈 또는 연골에서 콜라겐과 강한 결합을 하고 있는 콘드로이친 설페이트를 분리하기 위하여 콘드로이친 설페이트를 물 및 단백질 분해효소인 펩신 또는 파파인 등을 0.3%정도로 사용하여 추출해낸다. 추출은 펩신을 사용하는 경우 pH를 2로, 파파인을 사용하는 경우에는 pH를 7로 맞춘 후, 표 2에서 알 수 있는 바와 같이, 24시간 이상 추출할 경우에는 수율은 증가하지만 추출시 추출물의 변성이 일어나 최종 산물로서의 가치를 상실하게 되므로, 24시간 동안 추출하는 것이 콘드로이친 설페이트의 수율이 가장 좋다.In step ①, chondroitin sulfate is extracted using 0.3% of water and protease pepsin or papain to separate chondroitin sulfate, which has strong binding to collagen, from shark bone or cartilage from which impurities are removed. The extraction is adjusted to pH 2 when pepsin is used, and pH 7 when papain is used, and as shown in Table 2, the yield is increased when extracted for 24 hours or more, but the denaturation of the extract during extraction is increased. This happens and loses its value as a final product, so extraction for 24 hours yields the best yield of chondroitin sulfate.
③추출액의 pH를 약 8.5로 맞추어 콘드로이친 설페이트 이외의 단백질을 제거하는 단계③ Adjusting the pH of the extract to about 8.5 to remove proteins other than chondroitin sulfate
상기 ②단계에서 추출된 추출액에는 콘드로이친 설페이트 외에도 콜라겐, 단백질 분해효소 등의 단백질이 불순물로서 존재하므로 2N의 수산화나트륨을 사용하여 pH를 약알칼리성인 8.5로 맞추어 침전을 유도한 후, 추출액을 여과한다.In addition to chondroitin sulfate, the extract extracted in step ② contains proteins such as collagen and protease, as impurities, and then precipitates by adjusting pH to weak alkaline 8.5 using 2N sodium hydroxide, and then filtering the extract.
④추출액을 이온교환수지를 사용하여 정제하는 단계④ Purification of the extract using ion exchange resin
③단계에서 pH를 약알카리성으로 맞추어 불순물을 제거하였지만, 추출액에는 콘드로이친 설페이트 이외에도 많은 염들과 단백질 분해물들이 아민 형태로 존재하고 있으므로, 고순도의 콘드로이친 설페이트를 얻기 위해서, 양이온교환수지를 이용하여 양이온성 염류와 아민을 흡착시키고, 음이온교환수지를 이용하여 음이온성 염류를 흡착함으로써, 열적 조작없이 고순도의 정제된 콘드로이친 설페이트를 얻을 수 있다.In step ③, impurities were removed by adjusting the pH to weak alkalinity, but in addition to chondroitin sulfate, many salts and protein degradation products exist in the form of amine. Thus, in order to obtain high purity chondroitin sulfate, cation exchange resins are used for cationic salts and By adsorbing an amine and adsorbing anionic salts using an anion exchange resin, high purity purified chondroitin sulfate can be obtained without thermal manipulation.
추출액의 정제에 사용되는 이온교환수지는 스티렌 및 디비닐벤젠의 공중합체로 이루어진 다공성 고분자 물질로 양이온교환수지로는 다이온사의 SK-1B, WK-30, WK-20, WK-10, 바이엘사의 S-101 등을, 음이온교환수지로는 다이온사의 WA-30, WA-20, WA-10, 바이엘사의 MP-65 등을 사용할 수 있다. 이온교환수지의 활성화는, 양이온교환수지의 경우 6%의 염산 용액으로 수지 충진탑을 통과시킨후, 정제수로 수세하여 활성기를 H+로 하고, 음이온교환수지의 경우는 4%의 수산화나트륨 용액으로 수지 충진탑을 통과시킨 후, 정제수로 수세하여 활성기를 OH－로 준비하여 사용한다.The ion exchange resin used for the purification of the extract is a porous polymer made of a copolymer of styrene and divinylbenzene. The cation exchange resin is SK-1B, WK-30, WK-20, WK-10, Bayer Corp. S-101 and the like can be used as anion exchange resin, such as WA-30, WA-20, WA-10, Bayer's MP-65, or the like. Activation of the ion exchange resin is passed through the resin filling tower with 6% hydrochloric acid solution in the case of cation exchange resin, and washed with purified water to make the activator H + , and 4% sodium hydroxide solution in the case of anion exchange resin. After passing through the resin filling tower, it is washed with purified water to prepare an active group with OH − and used.
활성화된 이온교환수지는 음이온교환수지와 양이온교환수지를 혼합하여 충전한 혼상식을 사용하는데, 양이온교환수지와 음이온교환수지의 부피비는, 표 3에서 알 수 있는 바와 같이, 최종 산물인 콘드로이친 설페이트의 수율이 최대가 되는 9:1로 하여 정제한다.The activated ion exchange resin is a mixed bed filled with a mixture of anion exchange resin and cation exchange resin. The volume ratio of the cation exchange resin and the anion exchange resin, as shown in Table 3, is the final product of chondroitin sulfate. The refinement is carried out at 9: 1, the maximum yield.
⑤ 필요에 따라, 이온교환수지를 통과한 추출액의 pH를 5.0∼7.0으로 조절한 후 나트륨염을 첨가하여 완전 용해시키는 단계⑤ If necessary, adjust the pH of the extract passed through the ion exchange resin to 5.0 ~ 7.0 and then completely dissolved by adding sodium salt
이온교환수지를 통과한 추출액내에는 순수한 콘드로이친 설페이트가 존재하게 되는데, 물에 대한 용해성을 증가시켜 좀더 용이하게 의약용, 화장품용 원료, 건강 식품용 원료등으로 사용하기 위하여 나트륨염을 부가하여 상기 화학식 1의 M이 나트륨인 콘드로이친 설페이트 나트륨염을 제공할 수 있다.Pure chondroitin sulfate is present in the extract passed through the ion exchange resin, solubility in water is added, so that sodium salt is added to make it easier to use as a raw material for medicine, cosmetics, health food, etc. Chondroitin sulfate sodium salt in which M of 1 is sodium can be provided.
상기 콘드로이친 설페이트의 나트륨염을 제공하기 위해서 사용된 나트륨염은 특별히 한정되지는 않지만, 예를 들면, 염화나트륨, 인산일수소나트륨염, 인산이수소나트륨염등이 있으며, 첨가량은 6중량% 미만인 경우에는 나트륨기가 콘드로이친 설페이트 구조에 결합이 잘 이루어지지 않고, 20중량% 이상인 경우에는 침전시 나트륨기가 같이 석출되어 불순물로 존재하게 되므로 6∼20중량%의 양으로 첨가하는 것이 바람직하다.The sodium salt used to provide the sodium salt of chondroitin sulfate is not particularly limited, but, for example, sodium chloride, sodium dihydrogen phosphate salt, sodium dihydrogen phosphate salt, etc., the addition amount is less than 6% by weight If the sodium group is not well bonded to the chondroitin sulfate structure, and if it is 20% by weight or more, it is preferable to add it in an amount of 6 to 20% by weight since the sodium group is precipitated together and exists as impurities.
⑥ 알코올을 이용하여 콘드로이친 설페이트 또는 그의 나트륨염을 결정화하는 단계⑥ crystallization of chondroitin sulfate or its sodium salt using alcohol
이온교환수지를 사용하여 정제된 추출액 또는 나트륨염이 부가된 추출액을 알코올을 사용하여 희석시켜서 결정화된 콘드로이친 설페이트 또는 그의 나트륨염을를 얻는다. 결정화된 콘드로이친 설페이트 또는 그의 나트륨염은 다시 알코올을 사용하여 세척하고 이를 건조하면 백색의 콘드로이친 설페이트 또는 그의 나트륨염을 얻을 수 있다. 이 경우 알코올은 특별히 한정되지는 않지만, 메틸알코올, 에틸알코올, 프로필알코올, 부틸알코올 및 그 이성질체중 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 사용할 수 있다.The purified extract using ion exchange resin or the extract added with sodium salt is diluted with alcohol to obtain crystallized chondroitin sulfate or its sodium salt. The crystallized chondroitin sulfate or its sodium salt can be washed again with alcohol and dried to obtain a white chondroitin sulfate or its sodium salt. In this case, the alcohol is not particularly limited, but one or a mixture of methyl alcohol, ethyl alcohol, propyl alcohol, butyl alcohol and isomers thereof may be used.
한편, 본 발명에 의해 제공되는 콘드로이친 설페이트 및 그의 나트륨염의 용해성은 본 발명에 따라 제조된 콘드로이친 설페이트 및 그의 나트륨염을 탈염수(deionized water)에 녹인 후, 전도도(conductivity)를 측정하여 확인하였다. 그 결과는 다음과 같다.On the other hand, the solubility of chondroitin sulfate and its sodium salt provided by the present invention was confirmed by dissolving the chondroitin sulfate and its sodium salt prepared according to the present invention in deionized water, and then measuring the conductivity. the results are as follow.
이하 실시예로서 본 발명을 상세히 설명하지만 본 발명이 이들 실시예로만 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to Examples, but the present invention is not limited to these Examples.
[실시예 1]Example 1
염산 수용액으로 전처리를 마친 상어 뼈 또는 연골 100g을 정제수 1000㎖, 펩신 0.3g과 함께 섞은 후, 24시간 동안 추출하고 pH를 8.5로 맞추었다. 약 10분 후 침전이 형성된 것을 확인하고, 규조토를 이용하여 여과를 실시하였다. 그후 추출액을 양이온교환수지, 음이온교환수지로 충진한 이온 교환 수지탑 상부에서 분당 20㎖의 유속으로 통과시켜 얻은 정제된 추출액의 pH를 5.7∼6.0으로 맞추었다. 메틸알코올을 이용하여 천천히 희석시키면서 콘드로이친 설페이트의 침전을 얻었다. 석출된 콘드로이틴 설페이트를 메틸알코올로 세척한 후 건조하여 14g 정도의 백색 콘드로이친 설페이트를 얻었다.100 g of shark bone or cartilage pretreated with aqueous hydrochloric acid was mixed with 1000 ml of purified water and 0.3 g of pepsin, extracted for 24 hours, and the pH was adjusted to 8.5. After about 10 minutes, it was confirmed that a precipitate was formed, and filtration was performed using diatomaceous earth. Then, the pH of the purified extract obtained by passing the extract at a flow rate of 20 ml per minute at the top of the ion exchange resin tower filled with a cation exchange resin and an anion exchange resin was adjusted to 5.7 to 6.0. Precipitation of chondroitin sulfate was obtained by diluting slowly with methyl alcohol. The precipitated chondroitin sulfate was washed with methyl alcohol and dried to obtain about 14 g of white chondroitin sulfate.
[실시예 2]Example 2
메틸알코올 대신 에틸알코올을 사용한다는 것을 제외하고 실시예 1과 동일한 방법으로 추출 및 정제하여 14g 정도의 백색 콘드로이친 설페이트를 얻었다.Extracting and purifying in the same manner as in Example 1 except that ethyl alcohol is used instead of methyl alcohol to obtain a white chondroitin sulfate of about 14g.
[실시예 3]Example 3
메틸알코올 대신 프로필알코올을 사용한다는 것을 제외하고 실시예 1과 동일한 방법으로 추출 및 정제하여 14g 정도의 백색 콘드로이친 설페이트를 얻었다.Except for using propyl alcohol instead of methyl alcohol, extraction and purification in the same manner as in Example 1 to obtain about 14g of white chondroitin sulfate.
[실시예 4]Example 4
메틸알코올 대신 부틸알코올을 사용한다는 것을 제외하고 실시예 1과 동일한 방법으로 추출 및 정제하여 14g 정도의 백색 콘드로이친 설페이트를 얻었다.Except for using butyl alcohol instead of methyl alcohol, extraction and purification in the same manner as in Example 1 to obtain about 14g of white chondroitin sulfate.
[실시예 5]Example 5
염산 수용액으로 전처리를 마친 상어 뼈 또는 연골 100g을 정제수 1000㎖, 파파인 0.3g과 함께 섞은 후, 24시간 동안 추출하고 pH를 8.5로 맞추었다. 약 10분 후 침전이 형성된 것을 확인하고, 규조토를 이용하여 여과를 실시하였다. 그후 추출액을 양이온교환수지, 음이온교환수지로 충진한 이온교환수지 탑 상부에서 분당 20㎖의 유속으로 통과시켜 얻은 정제된 추출액의 pH를 5.7∼6.0으로 맞추었다. 메틸알코올을 이용하여 천천히 희석시키면서 콘드로이친 설페이트의 침전을 얻었다. 석출된 콘드로이틴 설페이트를 메틸알코올로 세척한 후 건조하여 14g 정도의 백색 콘드로이친 설페이트를 얻었다.100 g of shark bone or cartilage pretreated with aqueous hydrochloric acid was mixed with 1000 ml of purified water and 0.3 g of papain, extracted for 24 hours, and adjusted to pH 8.5. After about 10 minutes, it was confirmed that a precipitate was formed, and filtration was performed using diatomaceous earth. Then, the pH of the purified extract obtained by passing the extract at a flow rate of 20 ml / min at the top of the ion exchange resin column filled with the cation exchange resin and the anion exchange resin was adjusted to 5.7 to 6.0. Precipitation of chondroitin sulfate was obtained by diluting slowly with methyl alcohol. The precipitated chondroitin sulfate was washed with methyl alcohol and dried to obtain about 14 g of white chondroitin sulfate.
[실시예 6]Example 6
메틸알코올 대신 에틸알코올을 사용한다는 것을 제외하고 실시예 5와 동일한 방법으로 추출 및 정제하여 14g 정도의 백색 콘드로이친 설페이트를 얻었다.Extracting and purifying in the same manner as in Example 5, except that ethyl alcohol was used instead of methyl alcohol, about 14 g of white chondroitin sulfate was obtained.
[실시예 7]Example 7
메틸알코올 대신 프로필알코올을 사용한다는 것을 제외하고 실시예 5와 동일한 방법으로 추출 및 정제하여 14g 정도의 백색 콘드로이친 설페이트를 얻었다.Except for using propyl alcohol instead of methyl alcohol, extraction and purification in the same manner as in Example 5 to obtain about 14g of white chondroitin sulfate.
[실시예 8]Example 8
메틸알코올 대신 부틸알코올을 사용한다는 것을 제외하고 실시예 5와 동일한 방법으로 추출 및 정제하여 14g 정도의 백색 콘드로이친 설페이트를 얻었다.Except for using butyl alcohol instead of methyl alcohol, extraction and purification in the same manner as in Example 5 to obtain about 14g of white chondroitin sulfate.
[실시예 9]Example 9
염산 수용액으로 전처리를 마친 상어 뼈 또는 연골 100g을 정제수 1000㎖, 펩신 0.3g과 함께 섞은 후, 24시간 동안 추출하고 pH를 8.5로 맞추었다. 약 10분 후 침전이 형성된 것을 확인하고, 규조토를 이용하여 여과를 실시하였다. 그후 추출액을 양이온교환수지, 음이온교환수지로 충진한 이온 교환 수지탑 상부에서 분당 20㎖의 유속으로 통과시켜 얻은 정제된 추출액의 pH를 5.0∼7.0으로 맞추었다. 이후 인산일수소나트륨염(Na2HPO4) 80g을 용해시킨 후, 메틸알코올을 이용하여 천천히 희석시키면서 콘드로이친 설페이트 나트륨염의 침전을 얻었다. 석출된 콘드로이틴 설페이트 나트륨염을 메틸알코올로 세척한 후 건조하여 16g 정도의 백색 콘드로이친 설페이트 나트륨염을 얻었다.100 g of shark bone or cartilage pretreated with aqueous hydrochloric acid was mixed with 1000 ml of purified water and 0.3 g of pepsin, extracted for 24 hours, and the pH was adjusted to 8.5. After about 10 minutes, it was confirmed that a precipitate was formed, and filtration was performed using diatomaceous earth. Then, the pH of the purified extract obtained by passing the extract at a flow rate of 20 ml per minute on the top of the ion exchange resin column filled with a cation exchange resin and an anion exchange resin was adjusted to 5.0 to 7.0. After dissolving 80 g of sodium monohydrogen phosphate (Na 2 HPO 4 ), and slowly diluting with methyl alcohol to obtain a precipitate of chondroitin sulfate sodium salt. The precipitated chondroitin sulfate sodium salt was washed with methyl alcohol and dried to obtain about 16 g of white chondroitin sulfate sodium salt.
[실시예 10]Example 10
메틸알코올 대신 에틸알코올을 사용한다는 것을 제외하고 실시예 9와 동일한 방법으로 추출 및 정제하여 16g 정도의 백색 콘드로이친 설페이트 나트륨염을 얻었다.Extracting and purifying in the same manner as in Example 9, except that ethyl alcohol was used instead of methyl alcohol, about 16 g of white chondroitin sulfate sodium salt was obtained.
[실시예 11]Example 11
메틸알코올 대신 프로필알코올을 사용한다는 것을 제외하고 실시예 9와 동일한 방법으로 추출 및 정제하여 16g 정도의 백색 콘드로이친 설페이트 나트륨염을 얻었다.Except for using propyl alcohol instead of methyl alcohol extraction and purification in the same manner as in Example 9 to obtain a white chondroitin sulfate sodium salt of about 16g.
[실시예 12]Example 12
메틸알코올 대신 부틸알코올을 사용한다는 것을 제외하고 실시예 9와 동일한 방법으로 추출 및 정제하여 16g 정도의 백색 콘드로이친 설페이트 나트륨염을 얻었다.Except that butyl alcohol is used instead of methyl alcohol, extraction and purification in the same manner as in Example 9 to obtain a white chondroitin sulfate sodium salt of about 16g.
[실시예 13]Example 13
염산 수용액으로 전처리를 마친 상어 뼈 또는 연골 100g을 정제수 1000㎖, 파파인 0.3g과 함께 섞은 후, 24시간 동안 추출하고 pH를 8.5로 맞추었다. 약 10분 후 침전이 형성된 것을 확인하고, 규조토를 이용하여 여과를 실시하였다. 그후 추출액을 양이온교환수지, 음이온교환수지로 충진한 이온교환수지 탑 상부에서 분당 20㎖의 유속으로 통과시켜 얻은 정제된 추출액의 pH를 5.0∼7.0으로 맞추었다. 이후 염화나트륨 80g을 용해시킨 후, 메틸알코올을 이용하여 천천히 희석시키면서 콘드로이친 설페이트 나트륨염의 침전을 얻었다. 석출된 콘드로이틴 설페이트 나트륨염을 메틸알코올로 세척한 후 건조하여 16g 정도의 백색 콘드로이친 설페이트 나트륨염을 얻었다.100 g of shark bone or cartilage pretreated with aqueous hydrochloric acid was mixed with 1000 ml of purified water and 0.3 g of papain, extracted for 24 hours, and adjusted to pH 8.5. After about 10 minutes, it was confirmed that a precipitate was formed, and filtration was performed using diatomaceous earth. Then, the pH of the purified extract obtained by passing the extract at a flow rate of 20 ml per minute at the top of the ion exchange resin tower filled with a cation exchange resin and an anion exchange resin was adjusted to 5.0 to 7.0. Thereafter, after dissolving 80 g of sodium chloride, the dilution of chondroitin sulfate sodium salt was obtained while slowly diluting with methyl alcohol. The precipitated chondroitin sulfate sodium salt was washed with methyl alcohol and dried to obtain about 16 g of white chondroitin sulfate sodium salt.
[실시예 14]Example 14
메틸알코올 대신 에틸알코올을 사용한다는 것을 제외하고 실시예 13과 동일한 방법으로 추출 및 정제하여 16g 정도의 백색 콘드로이친 설페이트 나트륨염을 얻었다.Extracting and purifying in the same manner as in Example 13, except that ethyl alcohol was used instead of methyl alcohol, 16 g of white chondroitin sulfate sodium salt was obtained.
[실시예 15]Example 15
메틸알코올 대신 프로필알코올을 사용한다는 것을 제외하고 실시예 13과 동일한 방법으로 추출 및 정제하여 16g 정도의 백색 콘드로이친 설페이트 나트륨염을얻었다.Except for using propyl alcohol instead of methyl alcohol, extraction and purification in the same manner as in Example 13 to obtain about 16g of white chondroitin sulfate sodium salt.
[실시예 16]Example 16
메틸알코올 대신 부틸알코올을 사용한다는 것을 제외하고 실시예 13과 동일한 방법으로 추출 및 정제하여 16g 정도의 백색 콘드로이친 설페이트나트륨염을 얻었다.Extracting and purifying in the same manner as in Example 13, except that butyl alcohol was used instead of methyl alcohol, to obtain about 16 g of white chondroitin sulfate sodium salt.
[실시예 17]Example 17
염산 수용액으로 전처리를 마친 상어 뼈 또는 연골 100g을 정제수 1000㎖, 파파인 0.3g과 함께 섞은 후, 24시간 동안 추출하고 pH를 8.5로 맞추었다. 약 10분 후 침전이 형성된 것을 확인하고, 규조토를 이용하여 여과를 실시하였다. 그후 추출액을 양이온교환수지, 음이온교환수지로 충진한 이온교환수지 탑 상부에서 분당 20㎖의 유속으로 통과시켜 얻은 정제된 추출액의 pH를 5.0∼7.0으로 맞추었다. 이후 인산이수소나트륨염(NaH2PO4) 80g을 용해시킨 후, 메틸알코올을 이용하여 천천히 희석시키면서 콘드로이친 설페이트 나트륨염의 침전을 얻었다. 석출된 콘드로이틴 설페이트 나트륨염을 메틸알코올로 세척한 후 건조하여 16g 정도의 백색 콘드로이친 설페이트 나트륨염을 얻었다.100 g of shark bone or cartilage pretreated with aqueous hydrochloric acid was mixed with 1000 ml of purified water and 0.3 g of papain, extracted for 24 hours, and adjusted to pH 8.5. After about 10 minutes, it was confirmed that a precipitate was formed, and filtration was performed using diatomaceous earth. Then, the pH of the purified extract obtained by passing the extract at a flow rate of 20 ml per minute at the top of the ion exchange resin tower filled with a cation exchange resin and an anion exchange resin was adjusted to 5.0 to 7.0. Then, after dissolving 80 g of sodium dihydrogen phosphate (NaH 2 PO 4 ), slowly diluting with methyl alcohol, a precipitate of sodium chondroitin sulfate was obtained. The precipitated chondroitin sulfate sodium salt was washed with methyl alcohol and dried to obtain about 16 g of white chondroitin sulfate sodium salt.
[실시예 18]Example 18
메틸알코올 대신 에틸알코올을 사용한다는 것을 제외하고 실시예 17과 동일한 방법으로 추출 및 정제하여 16g 정도의 백색 콘드로이친 설페이트 나트륨염을 얻었다.Extracting and purifying in the same manner as in Example 17, except that ethyl alcohol was used instead of methyl alcohol, 16 g of white chondroitin sulfate sodium salt was obtained.
[실시예 19]Example 19
메틸알코올 대신 프로필알코올을 사용한다는 것을 제외하고 실시예 17과 동일한 방법으로 추출 및 정제하여 16g 정도의 백색 콘드로이친 설페이트 나트륨염을 얻었다.Except for using propyl alcohol instead of methyl alcohol, extraction and purification in the same manner as in Example 17 to obtain about 16g of white chondroitin sulfate sodium salt.
[실시예 20]Example 20
메틸알코올 대신 부틸알코올을 사용한다는 것을 제외하고 실시예 17과 동일한 방법으로 추출 및 정제하여 16g 정도의 백색 콘드로이친 설페이트 나트륨염을 얻었다.Except that butyl alcohol is used instead of methyl alcohol, extraction and purification in the same manner as in Example 17 to obtain about 16g of white chondroitin sulfate sodium salt.
이상에서 설명한 바와 같이, 본 발명의 상어 뼈 또는 연골로부터 콘드로이친 설페이트 및 그의 나트륨염을 제조하는 방법은 우선 이온교환수지 를 사용하여 정제하므로 열적 조작이 없어 안정한 콘드로친 설페이트를 고순도로 얻을 수 있고, 또한 나트륨염을 부가함으로서 물에 대한 용해성을 증가시켜서 의약품 원료, 화장품용 원료, 건강 식품용 원료등 다양한 분야에서 용이하게 사용할 수 있다.As described above, the method for producing chondroitin sulfate and its sodium salt from the shark bone or cartilage of the present invention is first purified using an ion exchange resin, so that there is no thermal manipulation, so stable chondroitin sulfate can be obtained with high purity, In addition, by adding sodium salt to increase the solubility in water it can be easily used in various fields such as pharmaceutical raw materials, cosmetic raw materials, health food raw materials.
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|---|---|---|---|---|
| CN102924624A (en) * | 2012-11-26 | 2013-02-13 | 中国水产科学研究院南海水产研究所 | Method for preparing chondroitin sulfate from sturgeon cartilage |
| CN104017108A (en) * | 2014-06-27 | 2014-09-03 | 黄心诚 | Preparation method of chondroitin sulfate |
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-
1997
- 1997-03-24 KR KR1019970010050A patent/KR100199284B1/en not_active IP Right Cessation
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| CN104017108A (en) * | 2014-06-27 | 2014-09-03 | 黄心诚 | Preparation method of chondroitin sulfate |
| KR101678482B1 (en) | 2016-04-15 | 2016-11-22 | 김준혁 | Manufacturing method of bone broth and food additives powder using shark bone |
| KR102627236B1 (en) | 2023-04-14 | 2024-01-19 | 인코스(주) | A sea squirt shell ferment made by using bioconversion process, composition including the same and cosmetic composition including the same for anti-inflammatory, anti-oxidation, anti-wrinkle, skin regeneration, skin elasticity and skin soothing |
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