JPWO2020225577A5

JPWO2020225577A5 -

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Publication number: JPWO2020225577A5
Application number: JP2021566259A
Authority: JP
Publication date: 2023-05-17

Description

PBMC-腫瘍細胞共培養アッセイの結果は、図2に示されている。マウスネクチン4を発現しない又は安定に発現するマウス4T1腫瘍細胞を、BCY12141あり又はなしで、ヒトPBMC並びに抗CD3及び抗CD28刺激とともに、48時間共培養した。その後、HTRFを用いて、サイトカインIL-2の濃度をアッセイした。OX40-ネクチン-4二重特異性ヘテロタンデムBCY12141は、ネクチン-4を発現する4T1細胞の存在下で、ヒトPBMCによるサイトカインIL-2の産生を誘導した。4T1細胞でのネクチン-4発現が存在しないとき、IL-2レベルは、対照ベースラインCD3+CD28刺激と同程度であった。これは、OX40-ネクチン-4二重特異性分子BCY12141が、ネクチン-4を発現する細胞の存在下でのみ、ヒトPBMCで免疫応答を誘導することができることを示している。
本件出願は、以下の態様の発明を提供する。
（態様１）
少なくとも2つのループ配列によって隔てられた少なくとも3つの反応基を含むポリペプチド及び該ポリペプチドの反応基と共有結合を形成する分子スキャフォールドを含み、その結果、少なくとも2つのポリペプチドループが該分子スキャフォールド上に形成される、OX40に特異的なペプチドリガンド。
（態様２）
前記反応基がシステイン残基を含む、態様1記載のペプチドリガンド。
（態様３）
前記ループ配列が、2、3、4、5、6、7、又は8つのアミノ酸を含む、態様1又は態様2のペプチドリガンド。
（態様４）
前記ループ配列が、その第一のものが2つのアミノ酸を含み、その第二のものが7つのアミノ酸を含む2つのループ配列によって隔てられた3つのシステイン残基を含み、かつ該アミノ酸配列が、
（化１）

(ここで、C _i 、C _ii 、及びC _iii は、それぞれ、第一、第二、及び第三のシステイン残基を表す)、もしくは修飾誘導体、又はこれらの医薬として許容し得る塩、例えば:
A-(配列番号12)-A(本明細書において、BCY10375と称される)
:を含む、態様1～3のいずれか一項記載のペプチドリガンド。
（態様５）
前記ループ配列が、その第一のものが3つのアミノ酸を含み、その第二のものが7つのアミノ酸を含む2つのループ配列によって隔てられた3つのシステイン残基を含み、かつ該アミノ酸配列が、
（化２）

(ここで、C _i 、C _ii 、及びC _iii は、それぞれ、第一、第二、及び第三のシステイン残基を表す)、もしくは修飾誘導体、又はこれらの医薬として許容し得る塩、例えば:
A-(配列番号1)-A-[Sar6]-[KBiot](本明細書において、BCY10551と称される);
A-(配列番号1)-A(本明細書において、BCY10371と称される);
A-(配列番号13)-A(本明細書において、BCY10364と称される);
A-(配列番号14)-A(本明細書において、BCY10365と称される);
A-(配列番号15)-A(本明細書において、BCY10366と称される);
A-(配列番号16)-A(本明細書において、BCY10367と称される);
A-(配列番号17)-A(本明細書において、BCY10368と称される);
A-(配列番号18)-A(本明細書において、BCY10369と称される);
A-(配列番号19)-A(本明細書において、BCY10374と称される);
A-(配列番号20)-A(本明細書において、BCY10376と称される);
A-(配列番号21)-A(本明細書において、BCY10737と称される);
A-(配列番号22)-A(本明細書において、BCY10738と称される);
A-(配列番号23)-A(本明細書において、BCY10739と称される);
A-(配列番号24)-A(本明細書において、BCY10740と称される);
A-(配列番号25)-A(本明細書において、BCY10741と称される);
A-(配列番号26)-A(本明細書において、BCY10742と称される);
A-(配列番号27)-A(本明細書において、BCY10380と称される);
A-(配列番号28)-A(本明細書において、BCY10370と称される);
A-(配列番号29)-A(本明細書において、BCY10372と称される);
A-(配列番号30)-A(本明細書において、BCY10373と称される);及び
A-(配列番号31)-A(本明細書において、BCY10379と称される);
例えば:
A-(配列番号1)-A-[Sar6]-[KBiot](本明細書において、BCY10551と称される)
:を含む、態様1～3のいずれか一項記載のペプチドリガンド。
（態様６）
前記ループ配列が、その第一のものが3つのアミノ酸を含み、その第二のものが8つのアミノ酸を含む2つのループ配列によって隔てられた3つのシステイン残基を含み、かつ該アミノ酸配列が、
（化３）

例えば、
（化４）

(ここで、C _i 、C _ii 、及びC _iii は、それぞれ、第一、第二、及び第三のシステイン残基を表す)、もしくは修飾誘導体、又はこれらの医薬として許容し得る塩、例えば:
A-(配列番号3)-A-[Sar6]-[KBiot](本明細書において、BCY10552と称される);
[Biot]-G-[Sar5]-A-(配列番号3)-A(本明細書において、BCY10479と称される);
A-(配列番号3)-A(本明細書において、BCY10378と称される);
[Biot]-G-[Sar5]-A-(配列番号4)-A(本明細書において、BCY11371と称される);
A-(配列番号4)-A(本明細書において、BCY10743と称される)、
A-(配列番号32)-A(本明細書において、BCY10377と称される);及び
A-(配列番号33)-A(本明細書において、BCY10744と称される)、特に:
A-(配列番号3)-A-[Sar6]-[KBiot](本明細書において、BCY10552と称される);
[Biot]-G-[Sar5]-A-(配列番号3)-A(本明細書において、BCY10479と称される);及び
[Biot]-G-[Sar5]-A-(配列番号4)-A(本明細書において、BCY11371と称される)
:を含む、態様1～3のいずれか一項記載のペプチドリガンド。
（態様７）
前記ループ配列が、その第一のものが4つのアミノ酸を含み、その第二のものが5つのアミノ酸を含む2つのループ配列によって隔てられた3つのシステイン残基を含み、かつ該アミノ酸配列が、
（化５）

(ここで、C _i 、C _ii 、及びC _iii は、それぞれ、第一、第二、及び第三のシステイン残基を表す)、もしくは修飾誘導体、又はこれらの医薬として許容し得る塩、例えば:
A-(配列番号34)-A(本明細書において、BCY10343と称される)
:を含む、態様1～3のいずれか一項記載のペプチドリガンド。
（態様８）
前記ループ配列が、その第一のものが4つのアミノ酸を含み、その第二のものが6つのアミノ酸を含む2つのループ配列によって隔てられた3つのシステイン残基を含み、かつ該アミノ酸配列が、
（化６）

例えば、
（化７）

(ここで、C _i 、C _ii 、及びC _iii は、それぞれ、第一、第二、及び第三のシステイン残基を表す)、もしくは修飾誘導体、又はこれらの医薬として許容し得る塩、例えば:
[Biot]-G-[Sar5]-A-(配列番号6)-A(本明細書において、BCY10482と称される);
A-(配列番号6)-A-[Sar6]-[KBiot](本明細書において、BCY10549と称される);
A-(配列番号6)-A-K(Pya)(本明細書において、BCY11607と称される);
Ac-A-(配列番号6)-A-K(Pya)(以後、BCY12708と称される);
A-(配列番号6)-A(本明細書において、BCY10351と称される);
A-(配列番号7)-A-[Sar6]-[KBiot](本明細書において、BCY11501と称される);及び
A-(配列番号7)-A(本明細書において、BCY10729と称される)
例えば:
[Biot]-G-[Sar5]-A-(配列番号6)-A(本明細書において、BCY10482と称される);
A-(配列番号6)-A-[Sar6]-[KBiot](本明細書において、BCY10549と称される);
A-(配列番号6)-A-K(Pya)(本明細書において、BCY11607と称される);
A-(配列番号7)-A-[Sar6]-[KBiot](本明細書において、BCY11501と称される);
A-(配列番号35)-A(本明細書において、BCY10350と称される);
A-(配列番号36)-A(本明細書において、BCY10352と称される);
A-(配列番号37)-A(本明細書において、BCY10353と称される);
A-(配列番号38)-A(本明細書において、BCY10354と称される);
A-(配列番号39)-A(本明細書において、BCY10730と称される);及び
A-(配列番号40)-A(本明細書において、BCY10731と称される);
(ここで、Pyaは、4-ペンチノイル部分を表す)、特に:
A-(配列番号6)-A-K(Pya)(本明細書において、BCY11607と称される);及び
Ac-A-(配列番号6)-A-K(Pya)(以後、BCY12708と称される);
(ここで、Pyaは、4-ペンチノイル部分を表す)
:を含む、態様1～3のいずれか一項記載のペプチドリガンド。
（態様９）
前記ループ配列が、その第一のものが4つのアミノ酸を含み、その第二のものが8つのアミノ酸を含む2つのループ配列によって隔てられた3つのシステイン残基を含み、かつ該アミノ酸配列が、
（化８）

(ここで、C _i 、C _ii 、及びC _iii は、それぞれ、第一、第二、及び第三のシステイン残基を表す)、もしくは修飾誘導体、又はこれらの医薬として許容し得る塩、例えば:
A-(配列番号41)-A(本明細書において、BCY10339と称される);
A-(配列番号42)-A(本明細書において、BCY10340と称される);
A-(配列番号43)-A(本明細書において、BCY10342と称される);
A-(配列番号44)-A(本明細書において、BCY10345と称される);
A-(配列番号45)-A(本明細書において、BCY10347と称される);
A-(配列番号46)-A(本明細書において、BCY10348と称される);
A-(配列番号47)-A(本明細書において、BCY10720と称される);
A-(配列番号48)-A(本明細書において、BCY10721と称される);
A-(配列番号49)-A(本明細書において、BCY10722と称される);
A-(配列番号50)-A(本明細書において、BCY10723と称される);
A-(配列番号51)-A(本明細書において、BCY10724と称される);
A-(配列番号52)-A(本明細書において、BCY10725と称される);
A-(配列番号53)-A(本明細書において、BCY10726と称される);
A-(配列番号54)-A(本明細書において、BCY10727と称される);及び
A-(配列番号55)-A(本明細書において、BCY10728と称される)
:を含む、態様1～3のいずれか一項記載のペプチドリガンド。
（態様１０）
前記ループ配列が、その両方が5つのアミノ酸を含む2つのループ配列によって隔てられた3つのシステイン残基を含み、該アミノ酸配列が、
（化９）

(ここで、C _i 、C _ii 、及びC _iii は、それぞれ、第一、第二、及び第三のシステイン残基を表す)、もしくは修飾誘導体、又はこれらの医薬として許容し得る塩、例えば:
A-(配列番号8)-A-[Sar6]-[KBiot](本明細書において、BCY10550と称される);
A-(配列番号8)-A(本明細書において、BCY10361と称される);
A-(配列番号56)-A(本明細書において、BCY10360と称される);
A-(配列番号57)-A(本明細書において、BCY10363と称される);
A-(配列番号58)-A(本明細書において、BCY10732と称される);
A-(配列番号59)-A(本明細書において、BCY10733と称される);
A-(配列番号60)-A(本明細書において、BCY10734と称される);
A-(配列番号61)-A(本明細書において、BCY10735と称される);及び
A-(配列番号62)-A(本明細書において、BCY10736と称される)
例えば:
A-(配列番号8)-A-[Sar6]-[KBiot](本明細書において、BCY10550と称される)
:を含む、態様1～3のいずれか一項記載のペプチドリガンド。
（態様１１）
前記ループ配列が、その第一のものが5つのアミノ酸を含み、その第二のものが7つのアミノ酸を含む2つのループ配列によって隔てられた3つのシステイン残基を含み、かつ該アミノ酸配列が、
（化１０）

(ここで、C _i 、C _ii 、及びC _iii は、それぞれ、第一、第二、及び第三のシステイン残基を表す)、もしくは修飾誘導体、又はこれらの医薬として許容し得る塩、例えば:
A-(配列番号63)-A(本明細書において、BCY10336と称される);
A-(配列番号64)-A(本明細書において、BCY10337と称される);及び
A-(配列番号65)-A(本明細書において、BCY10338と称される)
:を含む、態様1～3のいずれか一項記載のペプチドリガンド。
（態様１２）
前記ループ配列が、その第一のものが6つのアミノ酸を含み、その第二のものが5つのアミノ酸を含む2つのループ配列によって隔てられた3つのシステイン残基を含み、かつ該アミノ酸配列が、
（化１１）

(ここで、C _i 、C _ii 、及びC _iii は、それぞれ、第一、第二、及び第三のシステイン残基を表す)、もしくは修飾誘導体、又はこれらの医薬として許容し得る塩、例えば:
A-(配列番号9)-A-[Sar6]-[KBiot](本明細書において、BCY10794と称される);
A-(配列番号9)-A(本明細書において、BCY10349と称される);
A-(配列番号66)-A(本明細書において、BCY10346と称される);及び
A-(配列番号67)-A(本明細書において、BCY10357と称される)
例えば:
A-(配列番号9)-A-[Sar6]-[KBiot](本明細書において、BCY10794と称される)
:を含む、態様1～3のいずれか一項記載のペプチドリガンド。
（態様１３）
前記ループ配列が、その両方が6つのアミノ酸を含む2つのループ配列によって隔てられた3つのシステイン残基を含み、かつ該アミノ酸配列が、
（化１２）

(ここで、C _i 、C _ii 、及びC _iii は、それぞれ、第一、第二、及び第三のシステイン残基を表す)、もしくは修飾誘導体、又はこれらの医薬として許容し得る塩、例えば:
A-(配列番号68)-A(本明細書において、BCY10362と称される)
:を含む、態様1～3のいずれか一項記載のペプチドリガンド。
（態様１４）
前記ループ配列が、その第一のものが8つのアミノ酸を含み、その第二のものが3つのアミノ酸を含む2つのループ配列によって隔てられた3つのシステイン残基を含み、かつ該アミノ酸配列が、
（化１３）

(ここで、C _i 、C _ii 、及びC _iii は、それぞれ、第一、第二、及び第三のシステイン残基を表す)、もしくは修飾誘導体、又はこれらの医薬として許容し得る塩、例えば:
[Biot]-G-[Sar5]-A-(配列番号10)-A(本明細書において、BCY11369と称される);
A-(配列番号10)-A(本明細書において、BCY10331と称される);
A-(配列番号69)-A(本明細書において、BCY10332と称される);
A-(配列番号70)-A(本明細書において、BCY10717と称される);及び
A-(配列番号71)-A(本明細書において、BCY10718と称される)
例えば:
[Biot]-G-[Sar5]-A-(配列番号10)-A(本明細書において、BCY11369と称される)
:を含む、態様1～3のいずれか一項記載のペプチドリガンド。
（態様１５）
前記ループ配列が、その第一のものが8つのアミノ酸を含み、その第二のものが4つのアミノ酸を含む2つのループ配列によって隔てられた3つのシステイン残基を含み、かつ該アミノ酸配列が、
（化１４）

(ここで、C _i 、C _ii 、及びC _iii は、それぞれ、第一、第二、及び第三のシステイン残基を表す)、もしくは修飾誘導体、又はこれらの医薬として許容し得る塩、例えば:
A-(配列番号72)-A(本明細書において、BCY10334と称される);及び
A-(配列番号73)-A(本明細書において、BCY10719と称される)
:を含む、態様1～3のいずれか一項記載のペプチドリガンド。
（態様１６）
前記ペプチドリガンドが、BCY10551、BCY10552、BCY10479、BCY11371、BCY10482、BCY10549、BCY11501、BCY10550、BCY10794、及びBCY11369、例えば、BCY10551、BCY11371、及びBCY10549、特に、BCY10549から選択される、態様1～3のいずれか一項記載のペプチドリガンド。
（態様１７）
前記分子スキャフォールドが、1,1',1''-(1,3,5-トリアジナン-1,3,5-トリイル)トリプロパ-2-エン-1-オン(TATA)である、態様1～16のいずれか一項記載のペプチドリガンド。
（態様１８）
前記医薬として許容し得る塩が、遊離酸又はナトリウム、カリウム、カルシウム、もしくはアンモニウム塩から選択される、態様1～17のいずれか一項記載のペプチドリガンド。
（態様１９）
少なくとも2つのペプチドリガンドを含む多量体結合複合体であって、少なくとも1つのペプチドリガンドが態様1～18のいずれか一項記載のOX40に特異的であり、かつ該ペプチドリガンドが同じであっても異なっていてもよく、これらの各々が、少なくとも2つのループ配列によって隔てられた少なくとも3つの反応基を含むポリペプチド及び該ポリペプチドの反応基と共有結合を形成する分子スキャフォールドを含み、その結果、少なくとも2つのポリペプチドループが該分子スキャフォールド上に形成される、前記多量体結合複合体。
（態様２０）
各々のペプチドリガンドがスペーサー基によって中心のヒンジ部分に接続されている、態様19記載の多量体結合複合体。
（態様２１）
式の(I)化合物を含む、態様19又は態様20記載の多量体結合複合体:
（化１５）

(式中、CHMは、中心のヒンジ部分を表し;
S ₁ は、スペーサー基を表し;
二環は、態様1～18のいずれか一項記載のペプチドリガンドを表し;かつ
mは、2～10から選択される整数を表す)。
（態様２２）
前記ペプチドリガンドが同じ標的に特異的である、態様19～21のいずれか一項記載の多量体結合複合体。
（態様２３）
前記多量体結合複合体が少なくとも2つの同一のペプチドリガンドを含む、態様19～22のいずれか一項記載の多量体結合複合体。
（態様２４）
前記多量体結合複合体が、4つの同一のペプチドリガンド、例えば、4つのBCY10549ペプチドリガンドを含み、かつ四量体複合体BCY12019を含む、態様23記載の多量体結合複合体。
（態様２５）
前記多量体結合複合体が少なくとも2つの異なるペプチドリガンドを含む、態様19～22のいずれか一項記載の多量体結合複合体。
（態様２６）
前記ペプチドリガンドが異なる標的に特異的である、態様19～21のいずれか一項記載の多量体結合複合体。
（態様２７）
前記ペプチドリガンドの少なくとも1つがOX40に特異的であり、かつ前記さらなるペプチドリガンドの少なくとも1つが免疫細胞上のさらなる構成要素に結合する、態様19～26のいずれか一項記載の多量体結合複合体。
（態様２８）
前記免疫細胞上のさらなる構成要素がCD137である、態様27記載の多量体結合複合体。
（態様２９）
前記免疫細胞上のさらなる構成要素に結合する少なくとも1つのさらなるペプチドリガンドがCD137結合ペプチドリガンドを含む、態様27又は態様28記載の多量体結合複合体。
（態様３０）
前記ペプチドリガンドの少なくとも1つがOX40に特異的であり、かつ前記さらなるペプチドリガンドの少なくとも1つが癌細胞上に存在する構成要素に結合し、かつ任意に、該ペプチドリガンドの少なくとも1つが免疫細胞上のさらなる構成要素に結合する、態様19～29のいずれか一項記載の多量体結合複合体。
（態様３１）
(a)態様1～18のいずれか一項記載の1以上のOX40結合ペプチドリガンド;がリンカーを介して、
(b)癌細胞上に存在する構成要素に結合する少なくとも1つの第二のペプチドリガンド;
に結合したもの
:を含み、ここで、該ペプチドリガンドの各々が、少なくとも2つのループ配列によって隔てられた少なくとも3つのシステイン残基を含むポリペプチド及び該ポリペプチドのシステイン残基と共有結合を形成する分子スキャフォールドを含み、その結果、少なくとも2つのポリペプチドループが該分子スキャフォールド上に形成される、ヘテロタンデムペプチド複合体である、態様19記載の多量体結合複合体。
（態様３２）
第二のペプチドリガンドが、配列:
（化１６）

(配列番号11;以後、BCY8116と称される)
(ここで、1Nalは、1-ナフチルアラニンを表し、HArgは、ホモアルギニンを表し、かつHyPは、ヒドロキシプロリンを表す)
を有するアミノ酸を含むEphA2、PD-L1、ネクチン-4、又はPSMA結合二環式ペプチドリガンド、例えば、ネクチン-4結合二環式ペプチドリガンド、例えば、BCY8116のPEG12誘導体、BCY8116のPEG5誘導体、及びBCY8116の三官能性PEG3誘導体を含む、態様31記載の多量体結合複合体。
（態様３３）
BCY12141、BCY12721、及びBCY12697から選択される、態様31又は態様32記載の多量体結合複合体:
（化１７）

。
（態様３４）
1以上のエフェクター及び/又は官能基にコンジュゲートされた、態様1～18のいずれか一項記載のペプチドリガンド又は態様19～33のいずれか一項記載の多量体結合複合体を含む薬物コンジュゲート。
（態様３５）
態様1～18のいずれか一項記載のペプチドリガンド、態様19～33のいずれか一項記載の多量体結合複合体、又は態様34記載の薬物コンジュゲートを1以上の医薬として許容し得る賦形剤との組合せで含む、医薬組成物。
（態様３６）
OX40によって媒介される疾患又は障害の予防、抑制、又は治療において使用するための、態様1～18のいずれか一項記載のペプチドリガンド、態様19～33のいずれか一項記載の多量体結合複合体、又は態様34記載の薬物コンジュゲート。
Results of the PBMC-tumor cell co-culture assay are shown in FIG. Mouse 4T1 tumor cells that do not or stably express mouse Nectin-4 were co-cultured with or without BCY12141 with human PBMC and anti-CD3 and anti-CD28 stimulation for 48 hours. HTRF was then used to assay the concentration of the cytokine IL-2. The OX40-Nectin-4 bispecific heterotandem BCY12141 induced production of the cytokine IL-2 by human PBMCs in the presence of 4T1 cells expressing Nectin-4. In the absence of Nectin-4 expression in 4T1 cells, IL-2 levels were comparable to control baseline CD3+CD28 stimulation. This indicates that the OX40-nectin-4 bispecific molecule BCY12141 can induce an immune response in human PBMC only in the presence of cells expressing nectin-4.
The present application provides inventions of the following aspects.
(Aspect 1)
a polypeptide comprising at least three reactive groups separated by at least two loop sequences; A peptide ligand specific for OX40, formed above.
(Aspect 2)
2. The peptide ligand of embodiment 1, wherein said reactive group comprises a cysteine residue.
(Aspect 3)
3. The peptide ligand of embodiment 1 or embodiment 2, wherein said loop sequence comprises 2, 3, 4, 5, 6, 7, or 8 amino acids.
(Aspect 4)
said loop sequence comprises three cysteine residues separated by two loop sequences, the first of which comprises two amino acids and the second of which comprises seven amino acids;
(Chem. 1)

(where C _i , C _ii , and C _iii represent the first, second, and third cysteine residues, respectively), or modified derivatives, or pharmaceutically acceptable salts thereof, such as:
A-(SEQ ID NO: 12)-A (referred to herein as BCY10375)
The peptide ligand according to any one of embodiments 1-3, comprising:
(Aspect 5)
said loop sequence comprises three cysteine residues separated by two loop sequences, the first of which comprises three amino acids and the second of which comprises seven amino acids;
(Chemical 2)

(where C _i , C _ii , and C _iii represent the first, second, and third cysteine residues, respectively), or modified derivatives, or pharmaceutically acceptable salts thereof, such as:
A-(SEQ ID NO: 1)-A-[Sar6]-[KBiot] (referred to herein as BCY10551);
A-(SEQ ID NO: 1)-A (referred to herein as BCY10371);
A-(SEQ ID NO: 13)-A (referred to herein as BCY10364);
A-(SEQ ID NO: 14)-A (referred to herein as BCY10365);
A-(SEQ ID NO: 15)-A (referred to herein as BCY10366);
A-(SEQ ID NO: 16)-A (referred to herein as BCY10367);
A-(SEQ ID NO: 17)-A (referred to herein as BCY10368);
A-(SEQ ID NO: 18)-A (referred to herein as BCY10369);
A-(SEQ ID NO: 19)-A (referred to herein as BCY10374);
A-(SEQ ID NO:20)-A (referred to herein as BCY10376);
A-(SEQ ID NO:21)-A (referred to herein as BCY10737);
A-(SEQ ID NO:22)-A (referred to herein as BCY10738);
A-(SEQ ID NO:23)-A (referred to herein as BCY10739);
A-(SEQ ID NO:24)-A (referred to herein as BCY10740);
A-(SEQ ID NO:25)-A (referred to herein as BCY10741);
A-(SEQ ID NO:26)-A (referred to herein as BCY10742);
A-(SEQ ID NO:27)-A (referred to herein as BCY10380);
A-(SEQ ID NO:28)-A (referred to herein as BCY10370);
A-(SEQ ID NO:29)-A (referred to herein as BCY10372);
A-(SEQ ID NO:30)-A (referred to herein as BCY10373); and
A-(SEQ ID NO:31)-A (referred to herein as BCY10379);
for example:
A-(SEQ ID NO: 1)-A-[Sar6]-[KBiot] (referred to herein as BCY10551)
The peptide ligand according to any one of embodiments 1-3, comprising:
(Aspect 6)
said loop sequence comprises three cysteine residues separated by two loop sequences, the first of which comprises three amino acids and the second of which comprises eight amino acids;
(Chemical 3)

for example,
(Chem. 4)

(where C _i , C _ii , and C _iii represent the first, second, and third cysteine residues, respectively), or modified derivatives, or pharmaceutically acceptable salts thereof, such as:
A-(SEQ ID NO:3)-A-[Sar6]-[KBiot] (referred to herein as BCY10552);
[Biot]-G-[Sar5]-A-(SEQ ID NO:3)-A (referred to herein as BCY10479);
A-(SEQ ID NO:3)-A (referred to herein as BCY10378);
[Biot]-G-[Sar5]-A-(SEQ ID NO: 4)-A (referred to herein as BCY11371);
A-(SEQ ID NO: 4)-A (referred to herein as BCY10743),
A-(SEQ ID NO:32)-A (referred to herein as BCY10377); and
A-(SEQ ID NO:33)-A (referred to herein as BCY10744), particularly:
A-(SEQ ID NO:3)-A-[Sar6]-[KBiot] (referred to herein as BCY10552);
[Biot]-G-[Sar5]-A-(SEQ ID NO:3)-A (referred to herein as BCY10479); and
[Biot]-G-[Sar5]-A-(SEQ ID NO: 4)-A (referred to herein as BCY11371)
The peptide ligand according to any one of embodiments 1-3, comprising:
(Aspect 7)
said loop sequence comprises three cysteine residues separated by two loop sequences, the first of which comprises four amino acids and the second of which comprises five amino acids, and said amino acid sequence comprises:
(Chem. 5)

(where C _i , C _ii , and C _iii represent the first, second, and third cysteine residues, respectively), or modified derivatives, or pharmaceutically acceptable salts thereof, such as:
A-(SEQ ID NO:34)-A (referred to herein as BCY10343)
The peptide ligand according to any one of embodiments 1-3, comprising:
(Aspect 8)
said loop sequence comprises three cysteine residues separated by two loop sequences, the first of which comprises four amino acids and the second of which comprises six amino acids, and said amino acid sequence comprises:
(Chemical 6)

for example,
(Chem. 7)

(where C _i , C _ii , and C _iii represent the first, second, and third cysteine residues, respectively), or modified derivatives, or pharmaceutically acceptable salts thereof, such as:
[Biot]-G-[Sar5]-A-(SEQ ID NO: 6)-A (referred to herein as BCY10482);
A-(SEQ ID NO:6)-A-[Sar6]-[KBiot] (referred to herein as BCY10549);
A-(SEQ ID NO: 6)-AK(Pya) (referred to herein as BCY11607);
Ac-A-(SEQ ID NO: 6)-AK(Pya) (hereinafter referred to as BCY12708);
A-(SEQ ID NO: 6)-A (referred to herein as BCY10351);
A-(SEQ ID NO:7)-A-[Sar6]-[KBiot] (referred to herein as BCY11501); and
A-(SEQ ID NO:7)-A (referred to herein as BCY10729)
for example:
[Biot]-G-[Sar5]-A-(SEQ ID NO: 6)-A (referred to herein as BCY10482);
A-(SEQ ID NO:6)-A-[Sar6]-[KBiot] (referred to herein as BCY10549);
A-(SEQ ID NO: 6)-AK(Pya) (referred to herein as BCY11607);
A-(SEQ ID NO:7)-A-[Sar6]-[KBiot] (referred to herein as BCY11501);
A-(SEQ ID NO:35)-A (referred to herein as BCY10350);
A-(SEQ ID NO:36)-A (referred to herein as BCY10352);
A-(SEQ ID NO:37)-A (referred to herein as BCY10353);
A-(SEQ ID NO:38)-A (referred to herein as BCY10354);
A-(SEQ ID NO:39)-A (referred to herein as BCY10730); and
A-(SEQ ID NO:40)-A (referred to herein as BCY10731);
(where Pya represents a 4-pentynoyl moiety), in particular:
A-(SEQ ID NO:6)-AK(Pya) (referred to herein as BCY11607); and
Ac-A-(SEQ ID NO: 6)-AK(Pya) (hereinafter referred to as BCY12708);
(where Pya represents the 4-pentynoyl moiety)
The peptide ligand according to any one of embodiments 1-3, comprising:
(Aspect 9)
said loop sequence comprises three cysteine residues separated by two loop sequences, the first of which comprises four amino acids and the second of which comprises eight amino acids;
(Chemical 8)

(where C _i , C _ii , and C _iii represent the first, second, and third cysteine residues, respectively), or modified derivatives, or pharmaceutically acceptable salts thereof, such as:
A-(SEQ ID NO: 41)-A (referred to herein as BCY10339);
A-(SEQ ID NO: 42)-A (referred to herein as BCY10340);
A-(SEQ ID NO: 43)-A (referred to herein as BCY10342);
A-(SEQ ID NO: 44)-A (referred to herein as BCY10345);
A-(SEQ ID NO: 45)-A (referred to herein as BCY10347);
A-(SEQ ID NO:46)-A (referred to herein as BCY10348);
A-(SEQ ID NO: 47)-A (referred to herein as BCY10720);
A-(SEQ ID NO:48)-A (referred to herein as BCY10721);
A-(SEQ ID NO:49)-A (referred to herein as BCY10722);
A-(SEQ ID NO:50)-A (referred to herein as BCY10723);
A-(SEQ ID NO:51)-A (referred to herein as BCY10724);
A-(SEQ ID NO:52)-A (referred to herein as BCY10725);
A-(SEQ ID NO:53)-A (referred to herein as BCY10726);
A-(SEQ ID NO:54)-A (referred to herein as BCY10727); and
A-(SEQ ID NO:55)-A (referred to herein as BCY10728)
The peptide ligand according to any one of embodiments 1-3, comprising:
(Mode 10)
said loop sequence comprising three cysteine residues separated by two loop sequences both comprising five amino acids, said amino acid sequence comprising:
(Chemical 9)

(where C _i , C _ii , and C _iii represent the first, second, and third cysteine residues, respectively), or modified derivatives, or pharmaceutically acceptable salts thereof, such as:
A-(SEQ ID NO:8)-A-[Sar6]-[KBiot] (referred to herein as BCY10550);
A-(SEQ ID NO:8)-A (referred to herein as BCY10361);
A-(SEQ ID NO:56)-A (referred to herein as BCY10360);
A-(SEQ ID NO:57)-A (referred to herein as BCY10363);
A-(SEQ ID NO:58)-A (referred to herein as BCY10732);
A-(SEQ ID NO:59)-A (referred to herein as BCY10733);
A-(SEQ ID NO: 60)-A (referred to herein as BCY10734);
A-(SEQ ID NO: 61)-A (referred to herein as BCY10735); and
A-(SEQ ID NO:62)-A (referred to herein as BCY10736)
for example:
A-(SEQ ID NO:8)-A-[Sar6]-[KBiot] (referred to herein as BCY10550)
The peptide ligand according to any one of embodiments 1-3, comprising:
(Aspect 11)
said loop sequence comprises three cysteine residues separated by two loop sequences, the first of which comprises 5 amino acids and the second of which comprises 7 amino acids, and said amino acid sequence comprises:
(Chem. 10)

(where C _i , C _ii , and C _iii represent the first, second, and third cysteine residues, respectively), or modified derivatives, or pharmaceutically acceptable salts thereof, such as:
A-(SEQ ID NO: 63)-A (referred to herein as BCY10336);
A-(SEQ ID NO: 64)-A (referred to herein as BCY10337); and
A-(SEQ ID NO: 65)-A (referred to herein as BCY10338)
The peptide ligand according to any one of embodiments 1-3, comprising:
(Aspect 12)
said loop sequence comprises three cysteine residues separated by two loop sequences, the first of which comprises 6 amino acids and the second of which comprises 5 amino acids, and said amino acid sequence comprises:
(Chem. 11)

(where C _i , C _ii , and C _iii represent the first, second, and third cysteine residues, respectively), or modified derivatives, or pharmaceutically acceptable salts thereof, such as:
A-(SEQ ID NO:9)-A-[Sar6]-[KBiot] (referred to herein as BCY10794);
A-(SEQ ID NO: 9)-A (referred to herein as BCY10349);
A-(SEQ ID NO: 66)-A (referred to herein as BCY10346); and
A-(SEQ ID NO:67)-A (referred to herein as BCY10357)
for example:
A-(SEQ ID NO:9)-A-[Sar6]-[KBiot] (referred to herein as BCY10794)
The peptide ligand according to any one of embodiments 1-3, comprising:
(Aspect 13)
said loop sequence comprising three cysteine residues separated by two loop sequences both comprising six amino acids, and said amino acid sequence comprising:
(Chem. 12)

(where C _i , C _ii , and C _iii represent the first, second, and third cysteine residues, respectively), or modified derivatives, or pharmaceutically acceptable salts thereof, such as:
A-(SEQ ID NO: 68)-A (referred to herein as BCY10362)
The peptide ligand according to any one of embodiments 1-3, comprising:
(Aspect 14)
said loop sequence comprises three cysteine residues separated by two loop sequences, the first of which comprises eight amino acids and the second of which comprises three amino acids;
(Chem. 13)

(where C _i , C _ii , and C _iii represent the first, second, and third cysteine residues, respectively), or modified derivatives, or pharmaceutically acceptable salts thereof, such as:
[Biot]-G-[Sar5]-A-(SEQ ID NO: 10)-A (referred to herein as BCY11369);
A-(SEQ ID NO: 10)-A (referred to herein as BCY10331);
A-(SEQ ID NO: 69)-A (referred to herein as BCY10332);
A-(SEQ ID NO:70)-A (referred to herein as BCY10717); and
A-(SEQ ID NO:71)-A (referred to herein as BCY10718)
for example:
[Biot]-G-[Sar5]-A-(SEQ ID NO: 10)-A (referred to herein as BCY11369)
The peptide ligand according to any one of embodiments 1-3, comprising:
(Aspect 15)
said loop sequence comprises three cysteine residues separated by two loop sequences, the first of which comprises eight amino acids and the second of which comprises four amino acids;
(Chem. 14)

(where C _i , C _ii , and C _iii represent the first, second, and third cysteine residues, respectively), or modified derivatives, or pharmaceutically acceptable salts thereof, such as:
A-(SEQ ID NO:72)-A (referred to herein as BCY10334); and
A-(SEQ ID NO:73)-A (referred to herein as BCY10719)
The peptide ligand according to any one of embodiments 1-3, comprising:
(Aspect 16)
wherein said peptide ligand is BCY10551, BCY10552, BCY10479, BCY11371, BCY10482, BCY10549, BCY11501, BCY10550, BCY10794 and BCY11369, such as BCY10551, BCY11371 and BCY10549, in particular BCY10549 Any of aspects 1 to 3, selected from A peptide ligand according to claim 1.
(Aspect 17)
Embodiments 1-wherein said molecular scaffold is 1,1′,1″-(1,3,5-triazinane-1,3,5-triyl)triprop-2-en-1-one (TATA) 17. The peptide ligand according to any one of 16.
(Aspect 18)
18. The peptide ligand according to any one of embodiments 1-17, wherein said pharmaceutically acceptable salt is selected from the free acid or a sodium, potassium, calcium or ammonium salt.
(Aspect 19)
19. A multimeric binding complex comprising at least two peptide ligands, wherein at least one peptide ligand is specific for OX40 according to any one of embodiments 1-18, and wherein the peptide ligands are the same Each of which may be different, each of which comprises a polypeptide comprising at least three reactive groups separated by at least two loop sequences and a molecular scaffold that forms covalent bonds with the reactive groups of the polypeptide, so that , said multimeric binding complex, wherein at least two polypeptide loops are formed on said molecular scaffold.
(Aspect 20)
20. A multimeric binding complex according to embodiment 19, wherein each peptide ligand is connected to the central hinge portion by a spacer group.
(Aspect 21)
21. A multimeric binding complex according to embodiment 19 or embodiment 20, comprising a compound of formula (I):
(Chem. 15)

(Where CHM represents the central hinge portion;
S ₁ represents a spacer group;
bicyclic represents a peptide ligand according to any one of embodiments 1-18; and
m represents an integer selected from 2 to 10).
(Aspect 22)
22. The multimeric binding complex according to any one of embodiments 19-21, wherein said peptide ligands are specific for the same target.
(Aspect 23)
23. The multimeric binding complex according to any one of embodiments 19-22, wherein said multimeric binding complex comprises at least two identical peptide ligands.
(Aspect 24)
24. The multimeric binding complex according to embodiment 23, wherein said multimeric binding complex comprises four identical peptide ligands, such as four BCY10549 peptide ligands, and comprises a tetrameric complex BCY12019.
(Aspect 25)
23. The multimeric binding complex according to any one of embodiments 19-22, wherein said multimeric binding complex comprises at least two different peptide ligands.
(Aspect 26)
22. The multimeric binding complex according to any one of embodiments 19-21, wherein said peptide ligands are specific for different targets.
(Aspect 27)
27. The multimeric binding complex according to any one of aspects 19-26, wherein at least one of said peptide ligands is specific for OX40 and at least one of said further peptide ligands binds a further component on an immune cell. .
(Aspect 28)
28. The multimeric binding complex according to embodiment 27, wherein the additional component on said immune cell is CD137.
(Aspect 29)
29. A multimeric binding complex according to embodiment 27 or embodiment 28, wherein at least one further peptide ligand that binds to a further component on said immune cell comprises a CD137 binding peptide ligand.
(Aspect 30)
at least one of said peptide ligands is specific for OX40 and at least one of said further peptide ligands binds to a component present on cancer cells and optionally at least one of said peptide ligands is on immune cells 30. The multimeric binding complex according to any one of aspects 19-29, which is bound to an additional component.
(Aspect 31)
(a) one or more OX40-binding peptide ligands according to any one of embodiments 1-18;
(b) at least one second peptide ligand that binds to a component present on cancer cells;
bound to
wherein each of said peptide ligands comprises a polypeptide comprising at least three cysteine residues separated by at least two loop sequences and a molecular scaffold forming covalent bonds with the cysteine residues of said polypeptide 20. The multimeric binding complex according to embodiment 19, which is a heterotandem peptide complex, comprising at least two polypeptide loops, such that at least two polypeptide loops are formed on said molecular scaffold.
(Aspect 32)
A second peptide ligand has the sequence:
(Chem. 16)

(SEQ ID NO: 11; hereinafter referred to as BCY8116)
(where 1Nal represents 1-naphthylalanine, HArg represents homoarginine, and HyP represents hydroxyproline).
EphA2-, PD-L1-, Nectin-4-, or PSMA-binding bicyclic peptide ligands, such as Nectin-4-binding bicyclic peptide ligands, such as the PEG12 derivative of BCY8116, the PEG5 derivative of BCY8116, and BCY8116 32. The multimeric conjugate according to embodiment 31, comprising a trifunctional PEG3 derivative of
(Aspect 33)
33. The multimeric binding complex according to embodiment 31 or embodiment 32, selected from BCY12141, BCY12721, and BCY12697:
(Chem. 17)

.
(Aspect 34)
A drug conjugate comprising a peptide ligand according to any one of aspects 1-18 or a multimeric binding complex according to any one of aspects 19-33 conjugated to one or more effector and/or functional groups .
(Aspect 35)
a peptide ligand according to any one of aspects 1-18, a multimeric binding complex according to any one of aspects 19-33, or a drug conjugate according to aspect 34, in one or more pharmaceutically acceptable excipients A pharmaceutical composition, including in combination with an agent.
(Aspect 36)
A peptide ligand according to any one of aspects 1-18, a multimeric binding complex according to any one of aspects 19-33, for use in the prevention, suppression or treatment of a disease or disorder mediated by OX40. or the drug conjugate according to embodiment 34.