JPWO2020205605A5 - - Google Patents

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均等物
本発明は、その精神または必須特徴から逸脱することなく、他の特定の形態で具現化され得る。それ故に前記実施態様は、全ての本発明の限定ではなく、全ての点で説明用であると解釈されるべきである。故に、本発明の範囲は、上の記載ではなく、添付する特許請求の範囲により示され、特許請求の範囲の均等物の意味および範囲内の全ての変化は、それ故に本明細書に包含されることが意図される。
さらに、本願発明は次の態様を含む。
１. (i)5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'、または(ii)5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'における10～30個の連続するヌクレオチドの長さを有するその一部、と実質的に相補的な相補性領域を含む、15～35塩基長のRNA分子。
２. AUAAAGAUUAACCAGAAGAAと実質的に相補的な相補性領域を含む、項1に記載のRNA分子。
３. 一本鎖(ss)RNAまたは二本鎖(ds)RNAである、項1に記載のRNA分子。
４. センス鎖およびアンチセンス鎖を含む、項3に記載のdsRNAであって、ここで、アンチセンス鎖は5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'と実質的に相補的な相補性領域を含む、該dsRNA。
５. 15～25塩基長である、項1に記載のRNA分子。
６. 該相補性領域が、5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'の少なくとも10、11、12または13個の連続するヌクレオチドと相補的である、項3に記載のdsRNA。
７. 該相補性領域が、5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'とのミスマッチを3個以下で含む、項3に記載のdsRNA。
８. 該相補性領域が、5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'と完全に相補的である、項3に記載のdsRNA。
９. 平滑末端である、項3に記載のdsRNA。
１０. 少なくとも1つの一本鎖ヌクレオチド突出部を含む、項3に記載のdsRNA。
１１. 天然に存在するヌクレオチドを含む、項3に記載のdsRNA。
１２. 少なくとも1つの修飾ヌクレオチドを含む、項3に記載のdsRNA。
１３. 該修飾ヌクレオチドが、2'-O-メチル修飾ヌクレオチド、5'-ホスホロチオエート基を含むヌクレオチド、およびコレステリル誘導体もしくはドデカン酸ビスデシルアミド基に結合された末端ヌクレオチドからなる群から選択される、項12に記載のdsRNA。
１４. 該修飾ヌクレオチドが、2'-デオキシ-2'-フルオロ修飾ヌクレオチド、2'-デオキシ-修飾ヌクレオチド、ロックされたヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、2'-アミノ-修飾ヌクレオチド、2'-アルキル-修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホルアミデートおよび非天然塩基を含むヌクレオチドからなる群から選択される、項12に記載のdsRNA。
１５. 2'-O-メチル修飾ヌクレオチドを少なくとも1つ、および5'ホスホロチオエート基を含むヌクレオチドを少なくとも1つ含む、項3記載のdsRNA。
１６. 少なくとも80％が化学的に修飾されている、項3に記載のdsRNA。
１７. 完全に化学的に修飾されている、項3に記載のdsRNA。
１８. コレステロール部分を含む、項3に記載のdsRNA。
１９. 5'末端および3'末端を含み、標的に対して相補性を有する、項1に記載のRNA分子であって、
(1)RNA分子は、2'-メトキシ-リボヌクレオチドおよび2'-フルオロ-リボヌクレオチドを交互に含み;
(2)5'末端から2位および14位のヌクレオチドは、2'-メトキシ-リボヌクレオチドではなく;
(3)ヌクレオチドは、ホスホジエステルまたはホスホロチオエート結合を介して結合され;そして
(4)3'末端から1～2位から1～7位のヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合を介して隣接するヌクレオチドに結合されている、該RNA分子。
２０. 5'末端および3'末端を有し、標的に対して相補性を有し、そして第一のオリゴヌクレオチドおよび第二のオリゴヌクレオチドを含む、項3に記載のdsRNAであって、
(1)第一のオリゴヌクレオチドは、5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'と実質的に相補的な配列を含み;
(2)第一のオリゴヌクレオチドの一部は、第二のオリゴヌクレオチドの一部と相補的であり;
(3)第二のオリゴヌクレオチドは、2'-メトキシ-リボヌクレオチドおよび2'-フルオロ-リボヌクレオチドを交互に含み;
(4)第二のオリゴヌクレオチドの3'末端から2位および14位のヌクレオチドは、2'-メトキシ-リボヌクレオチドであり;そして
(5)第二のオリゴヌクレオチドのヌクレオチドは、ホスホジエステルまたはホスホロチオエート結合を介して結合されている、該dsRNA。
２１. 5'末端および3'末端を含み、標的に対して相補性を有する、項1に記載のRNA分子であって、
(1)RNA分子は、3つの連続する2'-フルオロ-リボヌクレオチドの領域を含み;
(2)5'末端から2位および14位のヌクレオチドは、2'-メトキシ-リボヌクレオチドではなく;
(3)ヌクレオチドは、ホスホジエステルまたはホスホロチオエート結合を介して結合され;
(4)3'末端から1～2位から1～7位のヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合を介して隣接するヌクレオチドに結合され;そして、
(5)5'末端から1～2位のヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合を介して互いに結合されている、該RNA分子。
２２. 5'末端および3'末端を有し、標的に対して相補性を有し、そして第一のオリゴヌクレオチドおよび第二のオリゴヌクレオチドを含む、項3に記載のdsRNAであって、
(1)第一のオリゴヌクレオチドは、5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'と実質的に相補的な配列を含み;
(2)第一のオリゴヌクレオチドの一部は、第二のオリゴヌクレオチドの一部と相補的であり;
(3)第二のオリゴヌクレオチドは、3つの連続する2'-メトキシ-リボヌクレオチドの領域を含み;
(4)第二のオリゴヌクレオチドの3'末端から2位および14位のヌクレオチドは、2'-メトキシ-リボヌクレオチドであり;そして
(5)第二のオリゴヌクレオチドのヌクレオチドは、ホスホジエステルまたはホスホロチオエート結合を介して結合されている、該dsRNA。
２３. 第二のオリゴヌクレオチドが、その3'末端に疎水性分子が結合されている、項20または21に記載の核酸。
２４. 第二のオリゴヌクレオチドと疎水性分子との間の結合が、ポリエチレングリコールまたはトリエチレングリコールを含む、項23に記載の核酸。
２５. 第二のオリゴヌクレオチドの3'末端から1位および2位のヌクレオチドが、ホスホロチオエート結合を介して隣接するヌクレオチドに結合されている、項20または21に記載の核酸。
２６. 第二のオリゴヌクレオチドの3'末端から1位および2位のヌクレオチド、および第二のオリゴヌクレオチドの5'末端から1位および2位のヌクレオチドが、ホスホロチオエート結合を介して隣接するリボヌクレオチドに結合されている、項20または21に記載の核酸。
２７. 項3に記載のdsRNA、および薬学的に許容できる担体を含む、生物においてC9ORF72遺伝子の発現を阻害するための医薬組成物。
２８. dsRNAが、該C9ORF72遺伝子の発現を少なくとも50％阻害する、項27に記載の医薬組成物。
２９. dsRNAが、該C9ORF72遺伝子の発現を少なくとも90％阻害する、項27に記載の医薬組成物。
３０. 細胞内でのC9ORF72遺伝子の発現を阻害する方法であって、
(a)項3に記載の二本鎖リボ核酸(dsRNA)を細胞に導入すること;および
(b)工程(a)で作製された細胞を、C9ORF72遺伝子のmRNA転写産物の分解を得るのに十分な時間を維持することを含み、それによって細胞内でのC9ORF72遺伝子の発現を阻害する方法。
３１. 神経変性疾患を処置または管理する方法であって、そのような処置または管理を必要とする患者に、項3に記載の該dsRNAの治療有効量を投与することを含む方法。
３２. 該dsRNAが、患者の脳に投与される、項31に記載の方法。
３３. 該dsRNAが、脳室内(ICV)または髄腔内(IT)注射によって投与される、項31に記載の方法。
３４. dsRNAの投与により、脳においてC9ORF72遺伝子の低減を引き起こす、項31に記載の方法。
３５. dsRNAの投与により、脊髄においてC9ORF72遺伝子の低減を引き起こす、項31に記載の方法。
３６. dsRNAが、該C9ORF72遺伝子の発現を少なくとも50％阻害する、項31に記載の方法。
３７. dsRNAが、該C9ORF72遺伝子の発現を少なくとも90％阻害する、項31に記載の方法。
３８. 細胞内でのC9ORF72遺伝子の発現を阻害するためのベクターであって、5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'と実質的に相補的なRNA分子をコードするヌクレオチド配列に操作可能に結合された調節配列を含み、ここで、該RNA分子は、10～35塩基長であり、該RNA分子は、該C9ORF72遺伝子を発現する細胞と接触すると、該C9ORF72遺伝子の発現を少なくとも50％阻害する、該ベクター。
３９. RNA分子が、該C9ORF72遺伝子の発現を少なくとも90％阻害する、項38に記載のベクター。
４０. 該RNA分子が、ssRNAまたはdsRNAである、項38に記載のベクター。
４１. dsRNAが、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、ここで、アンチセンス鎖は5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'と実質的に相補的な相補性領域を含む、項40に記載のベクター。
４２. 項38に記載のベクターを含む細胞。
４３. 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'と実質的に相補的な相補性領域を含む、15～35塩基長のRNA分子であって、C9ORF72遺伝子mRNAのイントロンを標的とする、該RNA分子。
４４. 該RNA分子が、ssRNAまたはdsRNAである、項43に記載のRNA分子。
４５. センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、ここで、アンチセンス鎖は5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'と実質的に相補的な相補性領域を含む、項44に記載のdsRNA。
４６. C9ORF72 mRNAと実質的に相補的な相補性領域を含む、15～35塩基長の2つのRNA分子を含むジ分岐状RNA化合物であって、該2つのRNA分子は、リンカー、スペーサーおよび分岐点から独立して選択される1つまたはそれ以上の部分によって互いに結合されている、該ジ分岐状RNA化合物。
４７. 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'と実質的に相補的な相補性領域を含む、項46に記載のRNA分子。
４８. AUAAAGAUUAACCAGAAGAAと実質的に相補的な相補性領域を含む、項46に記載のRNA分子。
４９. ssRNAまたはdsRNAである、項46に記載のRNA分子。
５０. アンチセンス分子またはギャップマー分子である、項46に記載のRNA分子。
５１. 該アンチセンス分子が、アンチセンスオリゴヌクレオチドである、項50に記載のRNA分子。
５２. 該アンチセンス分子が、相補性領域の分解を向上させる、項51に記載のRNA分子。
５３. 該分解が、ヌクレアーゼ分解である、項52に記載のRNA分子。
５４. 該ヌクレアーゼ分解が、RNase Hによって媒介される、項53に記載のRNA分子。
５５. 表1、表2、表3、表4、または表5に記載のC9ORF72遺伝子における遺伝子領域と実質的に相補的な相補性領域を含む、15～35塩基長のRNA分子。
５６. 一本鎖(ss)RNAまたは二本鎖(ds)RNAである、項55に記載のRNA分子。
５７. 2つまたはそれ以上の核酸を含む分岐状オリゴヌクレオチド化合物であって、
各核酸は、独立して、15～35塩基長であり、
各核酸は、独立して、5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'と実質的に相補的な相補性領域を含み、そして、
該2つまたはそれ以上の核酸は、リンカー、スペーサーおよび分岐点から選択される1つまたはそれ以上の部分によって互い結合されている、該分岐状オリゴヌクレオチド化合物。
５８. 各核酸が、独立して、15～25塩基長である、項57に記載の分岐状オリゴヌクレオチド化合物。
５９. 少なくとも1つの相補性領域が、5' AUAAAGAUUAACCAGAAGAA 3'と実質的に相補的である、項57に記載の分岐状オリゴヌクレオチド化合物。
６０. 核酸が二本鎖(ds)RNAであり、各核酸がセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、各アンチセンス鎖は5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'と実質的に相補的な相補性領域を含む、項57に記載の分岐状オリゴヌクレオチド化合物。
６１. 各相補性領域が、5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'の少なくとも10、11、12または13個の連続するヌクレオチドと相補的ある、項60に記載の分岐状オリゴヌクレオチド化合物。
６２. 各相補性領域が、5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'とのミスマッチを3個以下で含む、項60に記載の分岐状オリゴヌクレオチド化合物。
６３. 各相補性領域が、5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'と完全に相補的である、項60に記載の分岐状オリゴヌクレオチド化合物。
６４. 少なくとも1つの核酸のdsRNAが、少なくとも1つの修飾ヌクレオチドを含む、項60に記載の分岐状オリゴヌクレオチド化合物。
６５. 該修飾ヌクレオチドが、2'-O-メチル修飾ヌクレオチド、5'-ホスホロチオエート基を含むヌクレオチド、2'-デオキシ-2'-フルオロ修飾ヌクレオチド、2'-デオキシ-修飾ヌクレオチド、ロックされたヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、2'-アミノ-修飾ヌクレオチド、2'-アルキル-修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホルアミデート、非天然塩基を含むヌクレオチド、およびコレステリル誘導体もしくはドデカン酸ビスデシルアミド基に結合された末端ヌクレオチドからなる群から選択される、項64に記載の分岐状オリゴヌクレオチド化合物。
６６. 少なくとも1つの核酸のdsRNAが、少なくとも80％が化学的に修飾されている、項60に記載の分岐状オリゴヌクレオチド化合物。
６７. 少なくとも1つの核酸のdsRNAが、完全に化学的に修飾されている、項60に記載の分岐状オリゴヌクレオチド化合物。
６８. 各核酸が、5'末端および3'末端を含み、標的に対して相補性を有する、項60に記載の分岐状オリゴヌクレオチド化合物であって、
(1)核酸は、2'-メトキシ-リボヌクレオチドおよび2'-フルオロ-リボヌクレオチドを交互に含み;
(2)5'末端から2位および14位のヌクレオチドは、2'-メトキシ-リボヌクレオチドではなく;
(3)ヌクレオチドは、ホスホジエステルまたはホスホロチオエート結合を介して結合され;そして、
(4)3'末端から1～2位から1～7位のヌクレオチドが、ホスホロチオエート結合を介して隣接するヌクレオチドに結合されている、分岐状オリゴヌクレオチド化合物。
６９. 2、3、4、6、または8の核酸を含む、項57に記載の分岐状オリゴヌクレオチド化合物。
７０. 核酸が二本鎖(ds)RNAであり、各核酸が、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、各dsRNAが、独立して、センス鎖またはアンチセンス鎖の3'末端または5'末端でリンカー、スペーサーまたは分岐点に結合されている、項57に記載の分岐状オリゴヌクレオチド化合物。
７１. 各リンカーが、独立して、エチレングリコール鎖、アルキル鎖、ペプチド、RNA、DNA、ホスフェート、ホスホネート、ホスホルアミデート、エステル、アミド、トリアゾール、およびこれらの組み合わせから選択され;ここで、リンカーのいずれかの炭素または酸素原子は窒素原子によって置き換えられていてよく、ヒドロキシル置換基を有するか、オキソ置換基を有する、項57に記載の分岐状オリゴヌクレオチド化合物。
７２. 式(I)：

Figure 2020205605000012
［式(I)中、
Lは、エチレングリコール鎖、アルキル鎖、ペプチド、RNA、DNA、ホスフェート、ホスホネート、ホスホルアミデート、エステル、アミド、トリアゾール、およびこれらの組み合わせから選択され、ここで、式(I)は、1つまたはそれ以上の分岐点B、および1つまたはそれ以上のスペーサーSをさらに含んでいてよく(ここで、
Bは、出現するごとに独立して、多価有機種またはその誘導体であり;
Sは、出現するごとに独立して、エチレングリコール鎖、アルキル鎖、ペプチド、RNA、DNA、ホスフェート、ホスホネート、ホスホルアミデート、エステル、アミド、トリアゾール、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される);
Nは、センス鎖およびアンチセンス鎖を含む15～35塩基長の二本鎖核酸であり、ここで、
アンチセンス鎖は、5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'と実質的に相補的な相補性領域を含み;
センス鎖およびアンチセンス鎖は、それぞれ独立して、1つまたはそれ以上の化学修飾を含み;そして、
nは、2、3、4、5、6、7または8である］
で示される化合物。
７３. 式(I-1)～(I-9):
Figure 2020205605000013
 から選択される構造を有する、項72に記載の化合物。
７４. アンチセンス鎖が、
Figure 2020205605000014
 からなる群から選択される5'末端基Rを含む、項72に記載の化合物。
７５. 式(II):
Figure 2020205605000015
 ［式中、
Xは、出現するごとに独立して、アデノシン、グアノシン、ウリジン、シチジン、およびそれらの化学修飾誘導体から選択され;
Yは、出現するごとに独立して、アデノシン、グアノシン、ウリジン、シチジン、およびそれらの化学修飾誘導体から選択され;
-は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を示し;
=は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を示し;そして、
---は、出現するごとに単独に、塩基対合の相互作用またはミスマッチを示す］
の構造を有する、項72に記載の化合物。
７６. 式(III):
Figure 2020205605000016
 ［式中、
Xは、出現するごとに独立して、2'-デオキシ-2'-フルオロ修飾を含むヌクレオチドであり;
Xは、出現するごとに独立して、2'-O-メチル修飾を含むヌクレオチドであり;
Yは、出現するごとに独立して、2'-デオキシ-2'-フルオロ修飾を含むヌクレオチドであり;そして、
Yは、出現するごとに独立して、2'-O-メチル修飾を含むヌクレオチドである］
の構造を有する、項75に記載の化合物。
７７. 式(IV):
Figure 2020205605000017
 ［式中、
Xは、出現するごとに独立して、アデノシン、グアノシン、ウリジン、シチジン、およびそれらの化学修飾誘導体から選択され;
Yは、出現するごとに独立して、アデノシン、グアノシン、ウリジン、シチジン、およびそれらの化学修飾誘導体から選択され;
-は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を示し;
=は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を示し;そして、
---は、出現するごとに単独に、塩基対合の相互作用またはミスマッチを示す］
の構造を有する、項72に記載の化合物。
７８. 式(V):
Figure 2020205605000018
 ［式中、
Xは、出現するごとに独立して、2'-デオキシ-2'-フルオロ修飾を含むヌクレオチドであり;
Xは、出現するごとに独立して、2'-O-メチル修飾を含むヌクレオチドであり;
Yは、出現するごとに独立して、2'-デオキシ-2'-フルオロ修飾を含むヌクレオチドであり;そして、
Yは、出現するごとに独立して、2'-O-メチル修飾を含むヌクレオチドである］
の構造を有する、項77に記載の化合物。
７９. Lが、構造L1:
Figure 2020205605000019
 である、項72～78のいずれか一項に記載の化合物。
８０. RがR 3 であり、nが2である、項79に記載の化合物。
８１. Lが、構造L2:
Figure 2020205605000020
 である、項72～78のいずれか一項に記載の化合物。
８２. RがR 3 であり、nが2である、項81に記載の化合物。
８３. 式(VI):
Figure 2020205605000021
 ［式(VI)中、
Lは、エチレングリコール鎖、アルキル鎖、ペプチド、RNA、DNA、ホスフェート、ホスホネート、ホスホルアミデート、エステル、アミド、トリアゾール、およびこれらの組み合わせからなる群から選択され、ここで、式(VI)は、1つまたはそれ以上の分岐点B、および1つまたはそれ以上のスペーサーSをさらに含んでいてよく(ここで、
Bは、出現するごとに独立して、多価有機種またはその誘導体であり;
Sは、出現するごとに独立して、エチレングリコール鎖、アルキル鎖、ペプチド、RNA、DNA、ホスフェート、ホスホネート、ホスホルアミデート、エステル、アミド、トリアゾール、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される);
各cNAは、独立して、1つまたはそれ以上の化学修飾を含む担体核酸であり;
各cNAは、独立して、5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'の少なくとも15個の連続するヌクレオチドを含み;そして、
nは、2、3、4、5、6、7または8である］
の構造を有する、治療的核酸のための送達システム。
８４. 式(VI-1)～(VI-9):
Figure 2020205605000022
 から選択される構造を有する、項83に記載の送達システム。
８５. 各cNAが、独立して、化学修飾ヌクレオチドを含む、項83に記載の送達システム。
８６. n個の治療的核酸(NA)をさらに含み、ここで、各NAは、少なくとも1つのcNAにハイブリダイズしている、項83に記載の送達システム。
８７. 各NAが、独立して、少なくとも16個の連続するヌクレオチドを含む、項86に記載の送達システム。
８８. 各NAが、独立して、16～20個の連続するヌクレオチドを含む、項87に記載の送達システム。
８９. 各NAが、少なくとも2個のヌクレオチドの不対突出部を含む、項87に記載の送達システム。
９０. 突出部のヌクレオチドが、ホスホロチオエート結合を介して結合されている、項89に記載の送達システム。
９１. 各NAが、独立して、DNA、siRNA、アンタゴmiR、miRNA、ギャップマー、ミックスマー、またはガイドRNAからなる群から選択される、項86に記載の送達システム。
９２. 生物においてC9ORF72遺伝子の発現を阻害する医薬組成物であって、項55～80のいずれか一項に記載の分岐状オリゴヌクレオチド化合物または項83～91のいずれか一項に記載の送達システムおよび薬学的に許容できる担体を含む、該医薬組成物。
９３. 分岐状オリゴヌクレオチド化合物または送達システムが、該C9ORF72遺伝子の発現を少なくとも50％阻害する、項92に記載の医薬組成物。
９４. 分岐状オリゴヌクレオチド化合物または送達システムが、該C9ORF72遺伝子の発現を少なくとも90％阻害する、項92に記載の医薬組成物。
９５. 細胞内でのC9ORF72遺伝子の発現を阻害する方法であって、
(a)項57～82のいずれか一項に記載の分岐状オリゴヌクレオチド化合物または項83～91のいずれか一項に記載の送達システムを細胞に導入すること;および
(b)工程(a)で作製された細胞を、C9ORF72遺伝子のmRNA転写産物を得るのに十分な時間維持することを含み、それによって細胞内でのC9ORF72遺伝子の発現を阻害する方法。
９６. 神経変性疾患を処置または管理する方法であって、そのよう処置または管理を必要とする患者に、治療有効量の項57～82のいずれか一項に記載の分岐状オリゴヌクレオチド化合物または項83～91のいずれか一項に記載の送達システムを投与することを含む方法。
９７. 分岐状オリゴヌクレオチド化合物または送達システムが、患者の脳に投与される、項96に記載の方法。
９８. 分岐状オリゴヌクレオチド化合物または送達システムが、脳室内(ICV)または髄腔内(IT)注射によって投与される、項97に記載の方法。
９９. 分岐状オリゴヌクレオチド化合物または送達システムの投与により、脳においてC9ORF72遺伝子mRNAの低減を引き起こす、項96に記載の方法。
１００. 分岐状オリゴヌクレオチド化合物または送達システムの投与により、脊髄においてC9ORF72遺伝子mRNAの低減を引き起こす、項96に記載の方法。
１０１. 分岐状オリゴヌクレオチド化合物または送達システムが、C9ORF72遺伝子の発現を少なくとも50％阻害する、項96に記載の方法。
１０２. 分岐状オリゴヌクレオチド化合物または送達システムが、C9ORF72遺伝子の発現を少なくとも90％阻害する、項96に記載の方法。
１０３. それぞれ独立して15～35塩基長である二つの核酸を含む分岐状オリゴヌクレオチド化合物であって、各核酸は、C9ORF72 mRNAと実質的に相補的な相補性領域を含み、ここで、該二つの核酸は、リンカー、スペーサーおよび分岐点からなる群から独立して選択される1つまたはそれ以上の部分によって互いに結合されている、該分岐状オリゴヌクレオチド化合物。
１０４. 各核酸が、独立して、表1、表2、表3、表4、または表5に記載のC9ORF72遺伝子における遺伝子領域と実質的に相補的な相補性領域を含む、項103に記載の分岐状オリゴヌクレオチド化合物。
１０５. 各核酸が、独立して、一本鎖(ss)RNAまたは二本鎖(ds)RNAである、項103に記載の分岐状オリゴヌクレオチド化合物。
１０６. 第一のガイド鎖、第二のガイド鎖、第一のパッセンジャー鎖、第二のパッセンジャー鎖、およびリンカーを含むジ分岐状オリゴヌクレオチド化合物であって、
第一のガイド鎖および第二のガイド鎖は、それぞれ独立して、5' GAUUAACCAGAAGAA 3'と実質的に相補的な相補性領域を含み;そして、
第一のパッセンジャー鎖および第二のパッセンジャー鎖は、リンカーを介して互いに結合されている、該ジ分岐状オリゴヌクレオチド化合物。
１０７. 第一のガイド鎖および第二のガイド鎖は、それぞれ独立して、5' VP(mU)#(fU)#(mC)(fU)(fU)(fC)(mU)(fG)(mG)(fU)(mU)(fA)(mA)#(fU)#(mC)#(mU)#(mU)#(mU)#(mA)#(fU) 3'を含む、項106に記載のジ分岐状オリゴヌクレオチド化合物。
１０８. 第一のパッセンジャー鎖および第二のパッセンジャー鎖はそれぞれ、5' (mG)#(mA)#(fU)(mU)(fA)(mA)(fC)(mC)(fA)(mG)(mA)(mA)(fG)#(mA)#(mA) 3'を含む、項106に記載のジ分岐状オリゴヌクレオチド化合物。
１０９. リンカーが、エチレングリコール鎖、アルキル鎖、ペプチド、RNAオリゴヌクレオチド、DNAオリゴヌクレオチド、ホスフェート、ホスホネート、ホスホルアミデート、エステル、アミド、トリアゾール、およびこれらの組み合わせからなる群から選択され;
ここで、リンカーのいずれかの炭素または酸素原子は、窒素原子によって置き換えられていてよく、ヒドロキシル置換基を有していてよく、またはオキソ置換基を有していてよい、項106に記載のジ分岐状オリゴヌクレオチド化合物。
１１０. リンカーが、グリセロールまたは式-O-(CH 2 ) o -CH(OH)-(CH 2 ) p -O-［式中、oおよびpは、独立して、1～約6の整数である］のグリセロールホモログ鎖;および
式-O-(CH 2 ) m -C(O)NH-CH 2 -CH(OH)-CH 2 -NHC(O)-(CH 2 ) m -O-［式中、mは、0～約10の整数である］の1,3-ジアミノ-2-ヒドロキシプロパンの誘導体からなる群から選択される、項106に記載のジ分岐状オリゴヌクレオチド化合物。
１１１. 第一のパッセンジャー鎖の3'末端が、リンカーを介して第二のパッセンジャー鎖の3'末端に結合されている、項106に記載のジ分岐状オリゴヌクレオチド。
１１２. 神経変性疾患を処置または管理する方法であって、そのような処置または管理を必要とする患者に、項106～111のいずれか一項に記載の治療有効量のジ分岐状オリゴヌクレオチド化合物を投与することを含む方法。
１１３. ジ分岐状オリゴヌクレオチド化合物が、患者の脳に投与される、項112に記載の方法。
１１４. ジ分岐状オリゴヌクレオチド化合物が、脳室内(ICV)または髄腔内注射によって投与される、項112に記載の方法。
１１５. ジ分岐状オリゴヌクレオチド化合物の投与により、脳においてC9ORF72疾患アイソフォーム遺伝子mRNAの低減を引き起こす、項112に記載の方法。
１１６. ジ分岐状オリゴヌクレオチド化合物の投与により、脊髄においてC9ORF72疾患アイソフォーム遺伝子mRNAの低減を引き起こす、項112に記載の方法。
１１７. ジ分岐状オリゴヌクレオチド化合物が、C9ORF72疾患アイソフォーム遺伝子の発現を少なくとも50％阻害する、項112に記載の方法。
１１８. ジ分岐状オリゴヌクレオチド化合物が、C9ORF72疾患アイソフォーム遺伝子の発現を少なくとも90％阻害する、項112に記載の方法。


EQUIVALENTS The invention may be embodied in other specific forms without departing from the spirit or essential characteristics thereof. The above embodiments are therefore to be construed in all respects as illustrative rather than restrictive of the invention in all respects. The scope of the invention is, therefore, indicated by the appended claims rather than by the foregoing description, and all changes that come within the meaning and range of equivalency of the claims are therefore to be embraced herein. It is intended that
Furthermore, the present invention includes the following aspects.
1. (i) 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3', or (ii) a portion thereof having a length of 10-30 contiguous nucleotides at 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'. , 15-35 base long RNA molecules.
2. The RNA molecule of paragraph 1, comprising a complementary region substantially complementary to AUAAAGAUUAACCAGAAGAA.
3. The RNA molecule of paragraph 1, which is single-stranded (ss) RNA or double-stranded (ds) RNA.
4. The dsRNA of paragraph 3, comprising a sense strand and an antisense strand, wherein the antisense strand comprises a complementary region substantially complementary to 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'.
5. The RNA molecule according to item 1, which is 15 to 25 bases long.
6. The dsRNA of paragraph 3, wherein said complementary region is complementary to at least 10, 11, 12 or 13 contiguous nucleotides of 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'.
7. The dsRNA of paragraph 3, wherein said complementary region comprises no more than 3 mismatches with 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'.
8. The dsRNA of paragraph 3, wherein said complementary region is fully complementary to 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'.
9. The dsRNA of paragraph 3, which is blunt-ended.
10. The dsRNA of paragraph 3, comprising at least one single-stranded nucleotide overhang.
11. The dsRNA of paragraph 3, comprising naturally occurring nucleotides.
12. The dsRNA of paragraph 3, comprising at least one modified nucleotide.
13. Clause wherein said modified nucleotide is selected from the group consisting of a 2'-O-methyl modified nucleotide, a nucleotide containing a 5'-phosphorothioate group, and a terminal nucleotide attached to a cholesteryl derivative or a dodecanoic acid bisdecylamide group. dsRNA according to 12.
14. The modified nucleotide is 2'-deoxy-2'-fluoro modified nucleotide, 2'-deoxy-modified nucleotide, locked nucleotide, abasic nucleotide, 2'-amino-modified nucleotide, 2'-alkyl-modified 13. The dsRNA of paragraph 12, wherein the dsRNA is selected from the group consisting of nucleotides, morpholinonucleotides, phosphoramidates and nucleotides containing non-natural bases.
15. The dsRNA of paragraph 3, comprising at least one 2'-O-methyl modified nucleotide and at least one nucleotide comprising a 5' phosphorothioate group.
16. The dsRNA of paragraph 3, wherein at least 80% is chemically modified.
17. The dsRNA of paragraph 3, which is fully chemically modified.
18. The dsRNA of paragraph 3, comprising a cholesterol moiety.
19. The RNA molecule of paragraph 1 comprising a 5′ end and a 3′ end and having complementarity to a target,
(1) the RNA molecule contains alternating 2'-methoxy-ribonucleotides and 2'-fluoro-ribonucleotides;
(2) nucleotides 2 and 14 from the 5' end are not 2'-methoxy-ribonucleotides;
(3) the nucleotides are linked via phosphodiester or phosphorothioate linkages; and
(4) the RNA molecule, wherein nucleotides at positions 1-2 to 1-7 from the 3' end are linked to adjacent nucleotides via phosphorothioate linkages;
20. The dsRNA of paragraph 3, having a 5' end and a 3' end, having complementarity to a target, and comprising a first oligonucleotide and a second oligonucleotide, wherein
(1) the first oligonucleotide comprises a sequence substantially complementary to 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3';
(2) a portion of the first oligonucleotide is complementary to a portion of the second oligonucleotide;
(3) the second oligonucleotide comprises alternating 2'-methoxy-ribonucleotides and 2'-fluoro-ribonucleotides;
(4) nucleotides 2 and 14 from the 3' end of the second oligonucleotide are 2'-methoxy-ribonucleotides; and
(5) the dsRNA, wherein the nucleotides of the second oligonucleotide are linked via phosphodiester or phosphorothioate linkages;
21. The RNA molecule of paragraph 1, comprising a 5' end and a 3' end and having complementarity to a target,
(1) the RNA molecule contains a region of three consecutive 2'-fluoro-ribonucleotides;
(2) nucleotides 2 and 14 from the 5' end are not 2'-methoxy-ribonucleotides;
(3) the nucleotides are linked via phosphodiester or phosphorothioate linkages;
(4) nucleotides 1-2 to 1-7 from the 3' end are linked to adjacent nucleotides via phosphorothioate linkages; and
(5) the RNA molecule, wherein the 1-2 nucleotides from the 5' end are linked to each other via phosphorothioate linkages;
22. The dsRNA of paragraph 3, having a 5' end and a 3' end, having complementarity to a target, and comprising a first oligonucleotide and a second oligonucleotide, wherein
(1) the first oligonucleotide comprises a sequence substantially complementary to 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3';
(2) a portion of the first oligonucleotide is complementary to a portion of the second oligonucleotide;
(3) the second oligonucleotide comprises a region of three consecutive 2'-methoxy-ribonucleotides;
(4) nucleotides 2 and 14 from the 3' end of the second oligonucleotide are 2'-methoxy-ribonucleotides; and
(5) the dsRNA, wherein the nucleotides of the second oligonucleotide are linked via phosphodiester or phosphorothioate linkages;
23. The nucleic acid of paragraphs 20 or 21, wherein the second oligonucleotide has a hydrophobic molecule attached to its 3' end.
24. The nucleic acid of paragraph 23, wherein the linkage between the second oligonucleotide and the hydrophobic molecule comprises polyethylene glycol or triethylene glycol.
25. The nucleic acid of paragraphs 20 or 21, wherein nucleotides 1 and 2 from the 3' end of the second oligonucleotide are linked to adjacent nucleotides via phosphorothioate linkages.
26. Nucleotides 1 and 2 from the 3' end of the second oligonucleotide and nucleotides 1 and 2 from the 5' end of the second oligonucleotide are attached to adjacent ribonucleotides via phosphorothioate linkages. 22. The nucleic acid of paragraphs 20 or 21, which is bound.
27. A pharmaceutical composition for inhibiting expression of the C9ORF72 gene in an organism, comprising the dsRNA of Item 3 and a pharmaceutically acceptable carrier.
28. The pharmaceutical composition of paragraph 27, wherein the dsRNA inhibits expression of said C9ORF72 gene by at least 50%.
29. The pharmaceutical composition of paragraph 27, wherein the dsRNA inhibits expression of said C9ORF72 gene by at least 90%.
30. A method of inhibiting expression of the C9ORF72 gene in a cell comprising:
(a) introducing into a cell the double-stranded ribonucleic acid (dsRNA) of paragraph 3; and
(b) a method of inhibiting expression of the C9ORF72 gene in the cell, comprising maintaining the cell produced in step (a) for sufficient time to obtain degradation of the mRNA transcript of the C9ORF72 gene; .
31. A method of treating or managing a neurodegenerative disease comprising administering to a patient in need of such treatment or management a therapeutically effective amount of said dsRNA of paragraph 3.
32. The method of paragraph 31, wherein said dsRNA is administered to the patient's brain.
33. The method of Paragraph 31, wherein said dsRNA is administered by intracerebroventricular (ICV) or intrathecal (IT) injection.
34. The method of Paragraph 31, wherein administration of the dsRNA causes reduction of the C9ORF72 gene in the brain.
35. The method of Paragraph 31, wherein administration of dsRNA causes reduction of the C9ORF72 gene in the spinal cord.
36. The method of paragraph 31, wherein the dsRNA inhibits expression of said C9ORF72 gene by at least 50%.
37. The method of paragraph 31, wherein the dsRNA inhibits expression of said C9ORF72 gene by at least 90%.
38. A vector for inhibiting expression of the C9ORF72 gene in a cell, comprising a regulatory sequence operably linked to a nucleotide sequence encoding an RNA molecule substantially complementary to 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3' , wherein said RNA molecule is 10 to 35 bases long and said RNA molecule inhibits expression of said C9ORF72 gene by at least 50% upon contact with a cell expressing said C9ORF72 gene.
39. The vector of Paragraph 38, wherein the RNA molecule inhibits expression of said C9ORF72 gene by at least 90%.
40. The vector of Paragraph 38, wherein said RNA molecule is ssRNA or dsRNA.
41. The vector of paragraph 40, wherein the dsRNA comprises a sense strand and an antisense strand, wherein the antisense strand comprises a complementary region substantially complementary to 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'.
42. A cell containing the vector of paragraph 38.
43. An RNA molecule 15-35 bases long comprising a complementary region substantially complementary to 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3', said RNA molecule targeting an intron of the C9ORF72 gene mRNA.
44. The RNA molecule of paragraph 43, wherein said RNA molecule is ssRNA or dsRNA.
45. The dsRNA of paragraph 44, comprising a sense strand and an antisense strand, wherein the antisense strand comprises a complementary region substantially complementary to 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'.
46. A di-branched RNA compound comprising two RNA molecules 15-35 bases in length comprising complementary regions substantially complementary to C9ORF72 mRNA, wherein the two RNA molecules comprise a linker, a spacer and a branch. Said diantennary RNA compounds linked together by one or more moieties independently selected from the points.
47. The RNA molecule of Paragraph 46, comprising a complementary region substantially complementary to 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'.
48. The RNA molecule of paragraph 46, comprising a complementary region substantially complementary to AUAAAGAUUAACCAGAAGAA.
49. The RNA molecule of Paragraph 46, which is ssRNA or dsRNA.
50. The RNA molecule of paragraph 46, which is an antisense molecule or a gapmer molecule.
51. The RNA molecule of Paragraph 50, wherein said antisense molecule is an antisense oligonucleotide.
52. The RNA molecule of Paragraph 51, wherein said antisense molecule enhances degradation of complementary regions.
53. The RNA molecule of Paragraph 52, wherein said degradation is nuclease degradation.
54. The RNA molecule of paragraph 53, wherein said nuclease degradation is mediated by RNase H.
55. An RNA molecule 15-35 bases in length comprising a complementary region substantially complementary to a gene region in the C9ORF72 gene set forth in Table 1, Table 2, Table 3, Table 4, or Table 5.
56. The RNA molecule of Paragraph 55, which is single-stranded (ss) RNA or double-stranded (ds) RNA.
57. A branched oligonucleotide compound comprising two or more nucleic acids,
each nucleic acid is independently 15 to 35 bases long,
each nucleic acid independently comprises a complementary region substantially complementary to 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3', and
The branched oligonucleotide compound, wherein the two or more nucleic acids are linked together by one or more moieties selected from linkers, spacers and branch points.
58. The branched oligonucleotide compound of paragraph 57, wherein each nucleic acid is independently 15-25 bases long.
59. The branched oligonucleotide compound of paragraph 57, wherein at least one region of complementarity is substantially complementary to 5' AUAAAGAUUAACCAGAAGAA 3'.
60. The nucleic acid is double-stranded (ds) RNA, each nucleic acid comprising a sense strand and an antisense strand, each antisense strand comprising a complementary region substantially complementary to 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3' 57. The branched oligonucleotide compound according to 57.
61. The branched oligonucleotide compound of paragraph 60, wherein each complementary region is complementary to at least 10, 11, 12 or 13 contiguous nucleotides of 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'.
62. The branched oligonucleotide compound of Paragraph 60, wherein each region of complementarity contains no more than 3 mismatches with 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'.
63. The branched oligonucleotide compound of paragraph 60, wherein each complementary region is fully complementary to 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'.
64. The branched oligonucleotide compound of Paragraph 60, wherein the dsRNA of at least one nucleic acid comprises at least one modified nucleotide.
65. The modified nucleotide is a 2'-O-methyl modified nucleotide, a nucleotide containing a 5'-phosphorothioate group, a 2'-deoxy-2'-fluoro modified nucleotide, a 2'-deoxy-modified nucleotide, a locked nucleotide, abasic nucleotides, 2'-amino-modified nucleotides, 2'-alkyl-modified nucleotides, morpholino nucleotides, phosphoramidates, nucleotides containing unnatural bases, and terminally bound cholesteryl derivatives or dodecanoic acid bisdecylamide groups 65. The branched oligonucleotide compound of Paragraph 64, selected from the group consisting of nucleotides.
66. The branched oligonucleotide compound of paragraph 60, wherein the dsRNA of at least one nucleic acid is at least 80% chemically modified.
67. The branched oligonucleotide compound of paragraph 60, wherein the dsRNA of at least one nucleic acid is fully chemically modified.
68. The branched oligonucleotide compound of paragraph 60, wherein each nucleic acid comprises a 5' end and a 3' end and has complementarity to a target,
(1) the nucleic acid comprises alternating 2'-methoxy-ribonucleotides and 2'-fluoro-ribonucleotides;
(2) nucleotides 2 and 14 from the 5' end are not 2'-methoxy-ribonucleotides;
(3) the nucleotides are linked via phosphodiester or phosphorothioate linkages; and
(4) A branched oligonucleotide compound in which nucleotides 1-2 to 1-7 from the 3' end are linked to adjacent nucleotides via phosphorothioate linkages.
69. The branched oligonucleotide compound of Paragraph 57, comprising the nucleic acids of 2, 3, 4, 6, or 8.
70. The nucleic acid is a double-stranded (ds)RNA, each nucleic acid comprising a sense strand and an antisense strand, each dsRNA independently at the 3' or 5' end of the sense or antisense strand 58. The branched oligonucleotide compound of Paragraph 57, attached to a linker, spacer or branch point.
71. Each linker is independently selected from ethylene glycol chains, alkyl chains, peptides, RNA, DNA, phosphates, phosphonates, phosphoramidates, esters, amides, triazoles, and combinations thereof; 58. The branched oligonucleotide compound of Paragraph 57, wherein any carbon or oxygen atom of may be replaced by a nitrogen atom and has a hydroxyl substituent or has an oxo substituent.
72. Formula (I):
Figure 2020205605000012
 [In the formula (I),
L is selected from ethylene glycol chains, alkyl chains, peptides, RNA, DNA, phosphates, phosphonates, phosphoramidates, esters, amides, triazoles, and combinations thereof, wherein formula (I) is one or more branch points B, and one or more spacers S (wherein
B is independently at each occurrence a multivalent organic species or derivative thereof;
S is independently selected at each occurrence from the group consisting of ethylene glycol chains, alkyl chains, peptides, RNA, DNA, phosphates, phosphonates, phosphoramidates, esters, amides, triazoles, and combinations thereof. );
N is a double-stranded nucleic acid 15-35 bases in length comprising a sense strand and an antisense strand, where:
the antisense strand comprises a complementary region substantially complementary to 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3';
the sense strand and the antisense strand each independently contain one or more chemical modifications; and
n is 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8]
A compound represented by
73. Formulas (I-1) to (I-9):
Figure 2020205605000013
 73. The compound of Paragraph 72, having a structure selected from
74. The antisense strand is
Figure 2020205605000014
 73. The compound of Paragraph 72, comprising a 5' end group R selected from the group consisting of
75. Formula (II):
Figure 2020205605000015
 [In the formula,
X is independently selected at each occurrence from adenosine, guanosine, uridine, cytidine, and chemically modified derivatives thereof;
Y is independently selected at each occurrence from adenosine, guanosine, uridine, cytidine, and chemically modified derivatives thereof;
- indicates a phosphodiester internucleoside linkage;
= indicates a phosphorothioate internucleoside linkage; and
--- indicates a base-pairing interaction or mismatch in each occurrence]
73. The compound of Paragraph 72, having the structure
76. Formula (III):
Figure 2020205605000016
 [In the formula,
X is independently at each occurrence a nucleotide containing a 2'-deoxy-2'-fluoro modification;
X is, independently at each occurrence, a nucleotide containing a 2'-O-methyl modification;
Y is, independently at each occurrence, a nucleotide containing a 2'-deoxy-2'-fluoro modification; and
Y is independently at each occurrence a nucleotide containing a 2'-O-methyl modification]
76. The compound of Paragraph 75, having the structure
77. Formula (IV):
Figure 2020205605000017
 [In the formula,
X is independently selected at each occurrence from adenosine, guanosine, uridine, cytidine, and chemically modified derivatives thereof;
Y is independently selected at each occurrence from adenosine, guanosine, uridine, cytidine, and chemically modified derivatives thereof;
- indicates a phosphodiester internucleoside linkage;
= indicates a phosphorothioate internucleoside linkage; and
--- indicates a base-pairing interaction or mismatch in each occurrence]
73. The compound of Paragraph 72, having the structure
78. Formula (V):
Figure 2020205605000018
 [In the formula,
X is independently at each occurrence a nucleotide containing a 2'-deoxy-2'-fluoro modification;
X is, independently at each occurrence, a nucleotide containing a 2'-O-methyl modification;
Y is, independently at each occurrence, a nucleotide containing a 2'-deoxy-2'-fluoro modification; and
Y is independently at each occurrence a nucleotide containing a 2'-O-methyl modification]
78. The compound of Paragraph 77, having the structure
79. L is the structure L1:
Figure 2020205605000019
 79. The compound of any one of paragraphs 72-78, which is
80. The compound of paragraph 79, wherein R is R3 and n is 2.
81. L is the structure L2:
Figure 2020205605000020
 79. The compound of any one of paragraphs 72-78, which is
82. The compound of paragraph 81, wherein R is R3 and n is 2.
83. Formula (VI):
Figure 2020205605000021
 [In formula (VI),
L is selected from the group consisting of ethylene glycol chains, alkyl chains, peptides, RNA, DNA, phosphates, phosphonates, phosphoramidates, esters, amides, triazoles, and combinations thereof, wherein formula (VI) is , one or more branch points B, and one or more spacers S, where
B is independently at each occurrence a multivalent organic species or derivative thereof;
S is independently selected at each occurrence from the group consisting of ethylene glycol chains, alkyl chains, peptides, RNA, DNA, phosphates, phosphonates, phosphoramidates, esters, amides, triazoles, and combinations thereof. );
each cNA is independently a carrier nucleic acid containing one or more chemical modifications;
each cNA independently comprises at least 15 contiguous nucleotides 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'; and
n is 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8]
A delivery system for therapeutic nucleic acids having the structure of
84. Formulas (VI-1) to (VI-9):
Figure 2020205605000022
 84. The delivery system of Paragraph 83, having a structure selected from
85. The delivery system of Paragraph 83, wherein each cNA independently comprises a chemically modified nucleotide.
86. The delivery system of paragraph 83, further comprising n therapeutic nucleic acids (NA), wherein each NA is hybridized to at least one cNA.
87. The delivery system of paragraph 86, wherein each NA independently comprises at least 16 contiguous nucleotides.
88. The delivery system of paragraph 87, wherein each NA independently comprises 16-20 contiguous nucleotides.
89. The delivery system of paragraph 87, wherein each NA comprises an unpaired overhang of at least two nucleotides.
90. The delivery system of paragraph 89, wherein the nucleotides of the overhang are linked via phosphorothioate linkages.
91. The delivery system of Paragraph 86, wherein each NA is independently selected from the group consisting of DNA, siRNA, antagomiRs, miRNAs, gapmers, mixmers, or guide RNAs.
92. A pharmaceutical composition for inhibiting expression of the C9ORF72 gene in an organism, comprising the branched oligonucleotide compound of any one of paragraphs 55-80 or the delivery system of any one of paragraphs 83-91 and a pharmaceutically acceptable carrier.
93. The pharmaceutical composition of Paragraph 92, wherein the branched oligonucleotide compound or delivery system inhibits expression of said C9ORF72 gene by at least 50%.
94. The pharmaceutical composition of Paragraph 92, wherein the branched oligonucleotide compound or delivery system inhibits expression of said C9ORF72 gene by at least 90%.
95. A method of inhibiting expression of the C9ORF72 gene in a cell comprising:
(a) introducing into a cell the branched oligonucleotide compound of any one of paragraphs 57-82 or the delivery system of any one of paragraphs 83-91; and
(b) A method comprising maintaining the cell produced in step (a) for a time sufficient to obtain an mRNA transcript of the C9ORF72 gene, thereby inhibiting expression of the C9ORF72 gene within the cell.
96. A method of treating or managing a neurodegenerative disease comprising administering to a patient in need of such treatment or management a therapeutically effective amount of the branched oligonucleotide compound of any one of paragraphs 57-82 or A method comprising administering the delivery system of any one of 83-91.
97. The method of Paragraph 96, wherein the branched oligonucleotide compound or delivery system is administered to the patient's brain.
98. The method of Paragraph 97, wherein the branched oligonucleotide compound or delivery system is administered by intracerebroventricular (ICV) or intrathecal (IT) injection.
99. The method of Paragraph 96, wherein administration of the branched oligonucleotide compound or delivery system causes a reduction in C9ORF72 gene mRNA in the brain.
100. The method of Paragraph 96, wherein administration of the branched oligonucleotide compound or delivery system causes reduction of C9ORF72 gene mRNA in the spinal cord.
101. The method of Paragraph 96, wherein the branched oligonucleotide compound or delivery system inhibits expression of the C9ORF72 gene by at least 50%.
102. The method of Paragraph 96, wherein the branched oligonucleotide compound or delivery system inhibits expression of the C9ORF72 gene by at least 90%.
103. A branched oligonucleotide compound comprising two nucleic acids that are each independently 15-35 bases long, each nucleic acid comprising a complementary region substantially complementary to C9ORF72 mRNA, wherein said The branched oligonucleotide compound, wherein the two nucleic acids are linked together by one or more moieties independently selected from the group consisting of linkers, spacers and branch points.
104. According to paragraph 103, wherein each nucleic acid independently comprises a region of complementarity substantially complementary to a gene region in the C9ORF72 gene set forth in Table 1, Table 2, Table 3, Table 4, or Table 5 branched oligonucleotide compounds.
105. The branched oligonucleotide compound of Paragraph 103, wherein each nucleic acid is independently single-stranded (ss) RNA or double-stranded (ds) RNA.
106. A di-branched oligonucleotide compound comprising a first guide strand, a second guide strand, a first passenger strand, a second passenger strand, and a linker, wherein
the first guide strand and the second guide strand each independently comprise a complementary region substantially complementary to 5' GAUUAACCAGAAGAA 3'; and
The di-branched oligonucleotide compound, wherein the first passenger strand and the second passenger strand are linked together via a linker.
107. The first guide strand and the second guide strand are each independently 5'VP(mU)#(fU)#(mC)(fU)(fU)(fC)(mU)(fG)(mG)(fU)(mU)(fA)(mA)#(fU)#(mC)#(mU)#(mU)#(mU)#(mA)#(fU)3' in paragraph 106 A di-branched oligonucleotide compound as described.
108. The first passenger strand and the second passenger strand are each 5'(mG)#(mA)#(fU)(mU)(fA)(mA)(fC)(mC)(fA)(mG) 107. The di-branched oligonucleotide compound of Paragraph 106, comprising (mA)(mA)(fG)#(mA)#(mA) 3'.
109. linkers are selected from the group consisting of ethylene glycol chains, alkyl chains, peptides, RNA oligonucleotides, DNA oligonucleotides, phosphates, phosphonates, phosphoramidates, esters, amides, triazoles, and combinations thereof;
107, wherein any carbon or oxygen atom of the linker may be replaced by a nitrogen atom, may have a hydroxyl substituent, or may have an oxo substituent. Branched oligonucleotide compounds.
110. The linker is glycerol or of the formula -O-(CH2 ) o - CH(OH)-(CH2 ) p - O-, where o and p are independently integers from 1 to about 6 a] glycerol homolog chain; and
Formula -O-(CH2 ) m - C(O)NH-CH2 - CH(OH)-CH2 - NHC(O)-(CH2 ) m - O- [wherein m is from 0 to about 107. The di-branched oligonucleotide compound of paragraph 106, which is selected from the group consisting of derivatives of 1,3-diamino-2-hydroxypropane in which the di-branched oligonucleotide compound is an integer of 10.
111. The di-branched oligonucleotide of paragraph 106, wherein the 3' end of the first passenger strand is linked via a linker to the 3' end of the second passenger strand.
112. A method of treating or managing a neurodegenerative disease comprising administering to a patient in need of such treatment or management a therapeutically effective amount of a di-branched oligonucleotide compound according to any one of paragraphs 106-111. A method comprising administering
113. The method of Paragraph 112, wherein the di-branched oligonucleotide compound is administered to the patient's brain.
114. The method of Paragraph 112, wherein the diantennary oligonucleotide compound is administered by intracerebroventricular (ICV) or intrathecal injection.
115. The method of Paragraph 112, wherein administration of the diantennary oligonucleotide compound causes a reduction in C9ORF72 disease isoform gene mRNA in the brain.
116. The method of Paragraph 112, wherein administration of the diantennary oligonucleotide compound causes a reduction in C9ORF72 disease isoform gene mRNA in the spinal cord.
117. The method of Paragraph 112, wherein the diantennary oligonucleotide compound inhibits expression of the C9ORF72 disease isoform gene by at least 50%.
118. The method of Paragraph 112, wherein the diantennary oligonucleotide compound inhibits expression of the C9ORF72 disease isoform gene by at least 90%.


Claims (15)

(i)5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'、または(ii)5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'における10～30個の連続するヌクレオチドの長さを有するその一部、と実質的に相補的な相補性領域を含む、15～35塩基長のRNA分子であって、好ましくは、該RNA分子は15～25塩基長であり、および／または、AUAAAGAUUAACCAGAAGAAと実質的に相補的な相補性領域を含む、RNA分子。 (i) 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3', or (ii) a portion thereof having a length of 10-30 contiguous nucleotides at 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3', 15 An RNA molecule of ~35 bases in length, preferably said RNA molecule is 15-25 bases in length and/or comprises a complementary region substantially complementary to AUAAAGAUUAACCAGAAGAA. 該RNA分子が二本鎖(ds)RNAであり、該相補性領域が5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'とのミスマッチを3個以下で含む、請求項1に記載のRNA分子。2. The RNA molecule of claim 1, wherein said RNA molecule is a double-stranded (ds) RNA and said region of complementarity comprises no more than 3 mismatches with 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'. 一本鎖(ss)RNAまたは二本鎖(ds)RNAである、請求項1に記載のRNA分子であって、
好ましくは、該dsRNAはセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、ここで、アンチセンス鎖は5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'と実質的に相補的な相補性領域を含み；好ましくは、
i)該相補性領域は、5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'の少なくとも10、11、12または13個の連続するヌクレオチドと相補的であるか、
ii)該相補性領域は、5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'とのミスマッチを3個以下で含むか、または
iii)該相補性領域は、5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'と完全に相補的であり；
および／または、
iv)該dsRNAは、平滑末端であり；
v)該dsRNAは、少なくとも1つの一本鎖ヌクレオチド突出部を含み；
vi)該dsRNAは、天然に存在するヌクレオチドを含み;
および／または
vii)該dsRNAは、少なくとも1つの修飾ヌクレオチドを含み（好ましくは、ここで、
a)該修飾ヌクレオチドは、2'-O-メチル修飾ヌクレオチド、5'-ホスホロチオエート基を含むヌクレオチド、およびコレステリル誘導体もしくはドデカン酸ビスデシルアミド基に結合された末端ヌクレオチドからなる群から選択されるか；
または
b)該修飾ヌクレオチドは、2'-デオキシ-2'-フルオロ修飾ヌクレオチド、2'-デオキシ-修飾ヌクレオチド、ロックされたヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、2'-アミノ-修飾ヌクレオチド、2'-アルキル-修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホルアミデートおよび非天然塩基を含むヌクレオチドからなる群から選択される）
および／または、
viii)該dsRNAは、2'-O-メチル修飾ヌクレオチドを少なくとも1つ、および5'ホスホロチオエート基を含むヌクレオチドを少なくとも1つ含み；
ix)該dsRNAは、少なくとも80％が化学的に修飾されているか、または完全に修飾されており；
および／または、
x)該dsRNAは、コレステロール部分を含む、RNA分子。 2. The RNA molecule of claim 1, which is a single-stranded (ss) RNA or a double-stranded (ds) RNA,
Preferably, the dsRNA comprises a sense strand and an antisense strand, wherein the antisense strand comprises a complementary region substantially complementary to 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3';
i) said complementary region is complementary to at least 10, 11, 12 or 13 contiguous nucleotides of 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3';
ii) the region of complementarity contains no more than 3 mismatches with 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3', or
iii) said complementary region is fully complementary to 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3';
and/or
iv) the dsRNA is blunt-ended;
v) said dsRNA comprises at least one single-stranded nucleotide overhang;
vi) the dsRNA comprises naturally occurring nucleotides;
and/or
vii) said dsRNA comprises at least one modified nucleotide (preferably wherein
a) said modified nucleotides are selected from the group consisting of 2'-O-methyl modified nucleotides, nucleotides containing a 5'-phosphorothioate group, and terminal nucleotides attached to cholesteryl derivatives or dodecanoic acid bisdecylamide groups;
or
b) said modified nucleotides are 2'-deoxy-2'-fluoro modified nucleotides, 2'-deoxy-modified nucleotides, locked nucleotides, abasic nucleotides, 2'-amino-modified nucleotides, 2'-alkyl-modified selected from the group consisting of nucleotides, morpholinonucleotides, phosphoramidates and nucleotides containing unnatural bases )
and/or
viii) said dsRNA comprises at least one 2'-O-methyl modified nucleotide and at least one nucleotide comprising a 5' phosphorothioate group;
ix) the dsRNA is at least 80% chemically modified or fully modified;
and/or
x) an RNA molecule , wherein said dsRNA comprises a cholesterol moiety. 5'末端および3'末端を含み、標的に対して相補性を有する、請求項1に記載のRNA分子であって、
(1)RNA分子は、2'-メトキシ-リボヌクレオチドおよび2'-フルオロ-リボヌクレオチドを交互に含み;
(2)5'末端から2位および14位のヌクレオチドは、2'-メトキシ-リボヌクレオチドではなく;
(3)ヌクレオチドは、ホスホジエステルまたはホスホロチオエート結合を介して結合され;そして
(4)3'末端から1～2位から1～7位のヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合を介して隣接するヌクレオチドに結合されているか、
または
(1)RNA分子は、3つの連続する2'-フルオロ-リボヌクレオチドの領域を含み;
(2)5'末端から2位および14位のヌクレオチドは、2'-メトキシ-リボヌクレオチドではなく;
(3)ヌクレオチドは、ホスホジエステルまたはホスホロチオエート結合を介して結合され;
(4)3'末端から1～2位から1～7位のヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合を介して隣接するヌクレオチドに結合され;そして、
(5)5'末端から1～2位のヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合を介して互いに結合されている、RNA分子。 2. The RNA molecule of claim 1, comprising a 5' end and a 3' end and having complementarity to a target,
(1) the RNA molecule contains alternating 2'-methoxy-ribonucleotides and 2'-fluoro-ribonucleotides;
(2) nucleotides 2 and 14 from the 5' end are not 2'-methoxy-ribonucleotides;
(3) the nucleotides are linked via phosphodiester or phosphorothioate linkages; and
(4) nucleotides 1-2 to 1-7 from the 3' end are linked to adjacent nucleotides via phosphorothioate linkages;
or
(1) the RNA molecule contains a region of three consecutive 2'-fluoro-ribonucleotides;
(2) nucleotides 2 and 14 from the 5' end are not 2'-methoxy-ribonucleotides;
(3) the nucleotides are linked via phosphodiester or phosphorothioate linkages;
(4) nucleotides 1-2 to 1-7 from the 3' end are linked to adjacent nucleotides via phosphorothioate linkages; and
(5) RNA molecules in which the 1-2 nucleotides from the 5' end are linked together via phosphorothioate linkages. 5'末端および3'末端を有し、標的に対して相補性を有し、そして第一のオリゴヌクレオチドおよび第二のオリゴヌクレオチドを含む、請求項3に記載のdsRNAであって、
(1)第一のオリゴヌクレオチドは、5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'と実質的に相補的な配列を含み;
(2)第一のオリゴヌクレオチドの一部は、第二のオリゴヌクレオチドの一部と相補的であり;
(3)第二のオリゴヌクレオチドは、2'-メトキシ-リボヌクレオチドおよび2'-フルオロ-リボヌクレオチドを交互に含み;
(4)第二のオリゴヌクレオチドの3'末端から2位および14位のヌクレオチドは、2'-メトキシ-リボヌクレオチドであり;そして
(5)第二のオリゴヌクレオチドのヌクレオチドは、ホスホジエステルまたはホスホロチオエート結合を介して結合されているか、
または
(1)第一のオリゴヌクレオチドは、5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'と実質的に相補的な配列を含み;
(2)第一のオリゴヌクレオチドの一部は、第二のオリゴヌクレオチドの一部と相補的であり;
(3)第二のオリゴヌクレオチドは、3つの連続する2'-メトキシ-リボヌクレオチドの領域を含み;
(4)第二のオリゴヌクレオチドの3'末端から2位および14位のヌクレオチドは、2'-メトキシ-リボヌクレオチドであり;そして
(5)第二のオリゴヌクレオチドのヌクレオチドは、ホスホジエステルまたはホスホロチオエート結合を介して結合されており、
好ましくは、
i)第二のオリゴヌクレオチドは、その3'末端に疎水性分子が結合されている(好ましくは、第二のオリゴヌクレオチドと疎水性分子との間の結合は、ポリエチレングリコールまたはトリエチレングリコールを含む)か、
ii)第二のオリゴヌクレオチドの3'末端から1位および2位のヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合を介して隣接するヌクレオチドに結合されているか、
または
iii)第二のオリゴヌクレオチドの3'末端から1位および2位のヌクレオチド、および第二のオリゴヌクレオチドの5'末端から1位および2位のヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合を介して隣接するリボヌクレオチドに結合されている、dsRNA。 4. The dsRNA of claim 3, having a 5' end and a 3' end, having complementarity to a target, and comprising a first oligonucleotide and a second oligonucleotide,
(1) the first oligonucleotide comprises a sequence substantially complementary to 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3';
(2) a portion of the first oligonucleotide is complementary to a portion of the second oligonucleotide;
(3) the second oligonucleotide comprises alternating 2'-methoxy-ribonucleotides and 2'-fluoro-ribonucleotides;
(4) nucleotides 2 and 14 from the 3' end of the second oligonucleotide are 2'-methoxy-ribonucleotides; and
(5) the nucleotides of the second oligonucleotide are linked via phosphodiester or phosphorothioate linkages;
or
(1) the first oligonucleotide comprises a sequence substantially complementary to 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3';
(2) a portion of the first oligonucleotide is complementary to a portion of the second oligonucleotide;
(3) the second oligonucleotide comprises a region of three consecutive 2'-methoxy-ribonucleotides;
(4) nucleotides 2 and 14 from the 3' end of the second oligonucleotide are 2'-methoxy-ribonucleotides; and
(5) the nucleotides of the second oligonucleotide are linked via phosphodiester or phosphorothioate linkages;
Preferably,
i) the second oligonucleotide has a hydrophobic molecule attached to its 3' end (preferably the linkage between the second oligonucleotide and the hydrophobic molecule comprises polyethylene glycol or triethylene glycol ) or
ii) nucleotides 1 and 2 from the 3' end of the second oligonucleotide are linked to adjacent nucleotides via phosphorothioate linkages;
or
iii) nucleotides 1 and 2 from the 3' end of the second oligonucleotide and nucleotides 1 and 2 from the 5' end of the second oligonucleotide to adjacent ribonucleotides via phosphorothioate linkages; Bound, dsRNA . 細胞内でのC9ORF72遺伝子の発現を阻害するためのベクターであって、5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'と実質的に相補的なRNA分子をコードするヌクレオチド配列に操作可能に結合された調節配列を含み、ここで、該RNA分子は、10～35塩基長であり、該RNA分子は、該C9ORF72遺伝子を発現する細胞と接触すると、該C9ORF72遺伝子の発現を少なくとも50％、または少なくとも90％阻害し、
好ましくは、該RNA分子は、ssRNAまたはdsRNAであり、
好ましくは、該dsRNAは、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、ここで、アンチセンス鎖は5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'と実質的に相補的な相補性領域を含む、ベクター、および
場合により、該ベクターを含む細胞。 A vector for inhibiting expression of the C9ORF72 gene in a cell, comprising a regulatory sequence operably linked to a nucleotide sequence encoding an RNA molecule substantially complementary to 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3', wherein wherein said RNA molecule is 10 to 35 bases long, said RNA molecule inhibits expression of said C9ORF72 gene by at least 50 % or at least 90% upon contact with a cell expressing said C9ORF72 gene;
Preferably, said RNA molecule is ssRNA or dsRNA,
Preferably, the dsRNA comprises a sense strand and an antisense strand, wherein the antisense strand comprises a complementary region substantially complementary to 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3' vector , and
Optionally, a cell containing said vector. 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'と実質的に相補的な相補性領域を含む、15～35塩基長のRNA分子であって、C9ORF72遺伝子mRNAのイントロンを標的とし、
好ましくは、該RNA分子は、ssRNAまたはdsRNAであり、
好ましくは、該dsRNAは、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、ここで、アンチセンス鎖は、5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'と実質的に相補的な相補性領域を含む、RNA分子；
あるいは、
表1、表2、表3、表4または表5に記載のC9ORF72遺伝子の遺伝子領域と実質的に相補的な相補性領域を含む、15～35塩基長のRNA分子であって、好ましくは、一本鎖(ss)RNAまたは二本鎖(ds)RNAである、RNA分子。 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3' RNA molecule 15-35 bases long comprising a complementary region substantially complementary to the intron of C9ORF72 gene mRNA,
Preferably, said RNA molecule is ssRNA or dsRNA,
Preferably, the dsRNA comprises a sense strand and an antisense strand, wherein the antisense strand comprises a complementary region substantially complementary to 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3' RNA molecule;
or,
An RNA molecule of 15 to 35 nucleotides in length comprising a complementary region substantially complementary to the gene region of the C9ORF72 gene listed in Table 1, Table 2, Table 3, Table 4 or Table 5, preferably comprising: RNA molecules that are single-stranded (ss) RNA or double-stranded (ds) RNA. C9ORF72 mRNAと実質的に相補的な相補性領域を含む、15～35塩基長の2つのRNA分子を含むジ分岐状RNA化合物であって、該2つのRNA分子は、リンカー、スペーサーおよび分岐点から独立して選択される1つまたはそれ以上の部分によって互いに結合されており、好ましくは、
i)5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'と実質的に相補的な相補性領域を含むか、
または
ii)AUAAAGAUUAACCAGAAGAAと実質的に相補的な相補性領域を含み；
好ましくは、
i)該RNA分子は、ssRNAまたはdsRNAであるか；
または
ii)該RNA分子はアンチセンス分子またはギャップマー分子であり、好ましくは、該アンチセンス分子はアンチセンスオリゴヌクレオチドであり、好ましくは、該アンチセンス分子により相補性領域の分解を向上させ、好ましくは、該分解はヌクレアーゼ分解であるか、または、該ヌクレアーゼ分解はRNase Hによって媒介される、ジ分岐状RNA化合物。 A di-branched RNA compound comprising two RNA molecules 15-35 bases in length comprising complementary regions substantially complementary to C9ORF72 mRNA, the two RNA molecules comprising a linker, a spacer and a branch point. bound together by one or more independently selected moieties, preferably
i) comprises a complementary region substantially complementary to 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3', or
or
ii) comprising a complementary region substantially complementary to AUAAAGAUUAACCAGAAGAA;
Preferably,
i) whether the RNA molecule is ssRNA or dsRNA ;
or
ii ) said RNA molecule is an antisense molecule or a gapmer molecule, preferably said antisense molecule is an antisense oligonucleotide, preferably said antisense molecule enhances degradation of complementary regions; , preferably a diantennary RNA compound , wherein said degradation is nuclease degradation or said nuclease degradation is mediated by RNase H. 2つまたはそれ以上の核酸を含む分岐状オリゴヌクレオチド化合物であって、
各核酸は、独立して、15～35塩基長であり、
各核酸は、独立して、5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'と実質的に相補的な相補性領域を含み、そして、
該2つまたはそれ以上の核酸は、リンカー、スペーサーおよび分岐点から選択される1つまたはそれ以上の部分によって互い結合されており、好ましくは、
i)各核酸は、独立して、15～25塩基長であり、
ii)少なくとも1つの相補性領域は、5' AUAAAGAUUAACCAGAAGAA 3'と実質的に相補的であり、
および／または
iii)該核酸は二本鎖(ds)RNAであり、各核酸はセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、各アンチセンス鎖は、5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'と実質的に相補的な相補性領域を含み、好ましくは、ここで、
a)各相補性領域は、5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'の少なくとも10、11、12または13個の連続するヌクレオチドと相補的であるか、
b)各相補性領域は、5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'とのミスマッチを3個以下で含むか、
c)各相補性領域は、5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'と完全に相補的であるか、
d)少なくとも1つの核酸のdsRNAは、少なくとも1つの修飾ヌクレオチドを含む（好ましくは、該修飾ヌクレオチドは、2'-O-メチル修飾ヌクレオチド、5'-ホスホロチオエート基を含むヌクレオチド、2'-デオキシ-2'-フルオロ修飾ヌクレオチド、2'-デオキシ-修飾ヌクレオチド、ロックされたヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、2'-アミノ-修飾ヌクレオチド、2'-アルキル-修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホルアミデート、非天然塩基を含むヌクレオチド、およびコレステリル誘導体もしくはドデカン酸ビスデシルアミド基に結合された末端ヌクレオチドからなる群から選択される）か；
e)少なくとも1つの核酸のdsRNAは、少なくとも80％が化学的に修飾されているか、
または
f)各核酸は、5'末端および3'末端を含み、標的に対して相補性を有し、ここで、
(1)該核酸は、2'-メトキシ-リボヌクレオチドおよび2'-フルオロ-リボヌクレオチドを交互に含み;
(2)5'末端から2位および14位のヌクレオチドは、2'-メトキシ-リボヌクレオチドではなく;
(3)ヌクレオチドは、ホスホジエステルまたはホスホロチオエート結合を介して結合され;そして、
(4)3'末端から1～2位から1～7位のヌクレオチドが、ホスホロチオエート結合を介して隣接するヌクレオチドに結合されており、
好ましくは、
i)2、3、4、6、または8の核酸を含み；
ii)該核酸は二本鎖(ds)RNAであり、各ds核酸はセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、各dsRNAは、独立して、センス鎖またはアンチセンス鎖の3'末端または5'末端でリンカー、スペーサーまたは分岐点に結合されており；
および／または
iii)各リンカーは、独立して、エチレングリコール鎖、アルキル鎖、ペプチド、RNA、DNA、ホスフェート、ホスホネート、ホスホルアミデート、エステル、アミド、トリアゾール、およびこれらの組み合わせからなる群から選択され;ここで、リンカーのいずれかの炭素または酸素原子は場合により窒素原子によって置き換えられていてよく、ヒドロキシル置換基を有するか、またはオキソ置換基を有する、分岐状オリゴヌクレオチド化合物。 A branched oligonucleotide compound comprising two or more nucleic acids,
each nucleic acid is independently 15 to 35 bases long,
each nucleic acid independently comprises a complementary region substantially complementary to 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3', and
The two or more nucleic acids are linked together by one or more moieties selected from linkers, spacers and branch points, preferably
i) each nucleic acid is independently 15 to 25 bases long,
ii) at least one region of complementarity is substantially complementary to 5' AUAAAGAUUAACCAGAAGAA 3';
and/or
iii) the nucleic acid is double-stranded (ds) RNA, each nucleic acid comprising a sense strand and an antisense strand, each antisense strand comprising a complementary region substantially complementary to 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'; preferably where
a) each complementary region is complementary to at least 10, 11, 12 or 13 contiguous nucleotides of 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3', or
b) each complementary region contains no more than 3 mismatches to 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3', or
c) each complementary region is fully complementary to 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3', or
d) the dsRNA of at least one nucleic acid comprises at least one modified nucleotide (preferably said modified nucleotide is a 2'-O-methyl modified nucleotide, a nucleotide containing a 5'-phosphorothioate group, a 2'-deoxy-2 '-fluoro-modified nucleotides, 2'-deoxy-modified nucleotides, locked nucleotides, abasic nucleotides, 2'-amino-modified nucleotides, 2'-alkyl-modified nucleotides, morpholino nucleotides, phosphoramidates, unnatural bases and a terminal nucleotide attached to a cholesteryl derivative or a dodecanoic acid bisdecylamide group);
e) the dsRNA of at least one nucleic acid is at least 80% chemically modified;
or
f) each nucleic acid comprises a 5' end and a 3' end and is complementary to a target, wherein
(1) the nucleic acid comprises alternating 2'-methoxy-ribonucleotides and 2'-fluoro-ribonucleotides;
(2) nucleotides 2 and 14 from the 5' end are not 2'-methoxy-ribonucleotides;
(3) the nucleotides are linked via phosphodiester or phosphorothioate linkages; and
(4) nucleotides at positions 1-2 to 1-7 from the 3' end are linked to adjacent nucleotides via phosphorothioate linkages;
Preferably,
i) comprises 2, 3, 4, 6, or 8 nucleic acids;
ii) the nucleic acid is a double-stranded (ds) RNA, each ds nucleic acid comprising a sense strand and an antisense strand, each dsRNA independently comprising the 3' or 5' end of the sense or antisense strand; is attached to a linker, spacer or branch point with
and/or
iii) each linker is independently selected from the group consisting of ethylene glycol chains, alkyl chains, peptides, RNA, DNA, phosphates, phosphonates, phosphoramidates, esters, amides, triazoles, and combinations thereof; A branched oligonucleotide compound wherein any carbon or oxygen atom of the linker may optionally be replaced by a nitrogen atom and has a hydroxyl substituent or has an oxo substituent. 式(I)：
Figure 2020205605000001
 ［式(I)中、
Lは、エチレングリコール鎖、アルキル鎖、ペプチド、RNA、DNA、ホスフェート、ホスホネート、ホスホルアミデート、エステル、アミド、トリアゾール、およびこれらの組み合わせから選択され、ここで、式(I)は場合により、1つまたはそれ以上の分岐点B、および1つまたはそれ以上のスペーサーSをさらに含んでいてよく(ここで、
Bは、出現するごとに独立して、多価有機種またはその誘導体であり;
Sは、出現するごとに独立して、エチレングリコール鎖、アルキル鎖、ペプチド、RNA、DNA、ホスフェート、ホスホネート、ホスホルアミデート、エステル、アミド、トリアゾール、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される);
Nは、センス鎖およびアンチセンス鎖を含む15～35塩基長の二本鎖核酸であり、ここで、
アンチセンス鎖は、5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'と実質的に相補的な相補性領域を含み;
センス鎖およびアンチセンス鎖は、それぞれ独立して、1つまたはそれ以上の化学修飾を含み;そして、
nは、2、3、4、5、6、7または8である］
で示される化合物であって、
好ましくは、式(I-1)～(I-9):
Figure 2020205605000002
 から選択される構造を有し、好ましくは、アンチセンス鎖は、
Figure 2020205605000003
 からなる群から選択される5'末端基Rを含み、
場合により、
i)式(II):
Figure 2020205605000004
 ［式中、
Xは、出現するごとに独立して、アデノシン、グアノシン、ウリジン、シチジン、およびそれらの化学修飾誘導体から選択され;
Yは、出現するごとに独立して、アデノシン、グアノシン、ウリジン、シチジン、およびそれらの化学修飾誘導体から選択され;
-は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を示し;
=は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を示し;そして、
---は、出現するごとに単独に、塩基対合の相互作用またはミスマッチを示す］
の構造を有するか；
ii)式(III):
Figure 2020205605000005
 ［式中、
Xは、出現するごとに独立して、2'-デオキシ-2'-フルオロ修飾を含むヌクレオチドであり;
Xは、出現するごとに独立して、2'-O-メチル修飾を含むヌクレオチドであり;
Yは、出現するごとに独立して、2'-デオキシ-2'-フルオロ修飾を含むヌクレオチドであり;そして、
Yは、出現するごとに独立して、2'-O-メチル修飾を含むヌクレオチドである］
の構造を有するか；
iii)式(IV):
Figure 2020205605000006
 ［式中、
Xは、出現するごとに独立して、アデノシン、グアノシン、ウリジン、シチジン、およびそれらの化学修飾誘導体から選択され;
Yは、出現するごとに独立して、アデノシン、グアノシン、ウリジン、シチジン、およびそれらの化学修飾誘導体から選択され;
-は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を示し;
=は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を示し;そして、
---は、出現するごとに単独に、塩基対合の相互作用またはミスマッチを示す］
の構造を有するか；
または
iv)式(V):
Figure 2020205605000007
 ［式中、
Xは、出現するごとに独立して、2'-デオキシ-2'-フルオロ修飾を含むヌクレオチドであり;
Xは、出現するごとに独立して、2'-O-メチル修飾を含むヌクレオチドであり;
Yは、出現するごとに独立して、2'-デオキシ-2'-フルオロ修飾を含むヌクレオチドであり;そして、
Yは、出現するごとに独立して、2'-O-メチル修飾を含むヌクレオチドである］
の構造を有し；
好ましくは、
i)Lは、構造L1:
Figure 2020205605000008
 であるか、または
Lは、構造L2:
Figure 2020205605000009
 であり；
および／または
ii)RはR 3 であり、そして、nは2である、化合物。 Formula (I):
Figure 2020205605000001
 [In the formula (I),
L is selected from ethylene glycol chains, alkyl chains, peptides, RNA, DNA, phosphates, phosphonates, phosphoramidates, esters, amides, triazoles, and combinations thereof, wherein formula (I) is optionally It may further comprise one or more branch points B and one or more spacers S (wherein
B is independently at each occurrence a multivalent organic species or derivative thereof;
S is independently selected at each occurrence from the group consisting of ethylene glycol chains, alkyl chains, peptides, RNA, DNA, phosphates, phosphonates, phosphoramidates, esters, amides, triazoles, and combinations thereof. );
N is a double-stranded nucleic acid 15-35 bases in length comprising a sense strand and an antisense strand, where:
the antisense strand comprises a complementary region substantially complementary to 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3';
the sense strand and the antisense strand each independently contain one or more chemical modifications; and
n is 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8]
A compound represented by
Preferably, formulas (I-1) to (I-9):
Figure 2020205605000002
 and preferably the antisense strand has a structure selected from
Figure 2020205605000003
 comprising a 5' terminal group R selected from the group consisting of
In some cases
i) Formula (II):
Figure 2020205605000004
 [In the formula,
X is independently selected at each occurrence from adenosine, guanosine, uridine, cytidine, and chemically modified derivatives thereof;
Y is independently selected at each occurrence from adenosine, guanosine, uridine, cytidine, and chemically modified derivatives thereof;
- indicates a phosphodiester internucleoside linkage;
= indicates a phosphorothioate internucleoside linkage; and
--- indicates a base-pairing interaction or mismatch in each occurrence]
has the structure of
ii) Formula (III):
Figure 2020205605000005
 [In the formula,
X is independently at each occurrence a nucleotide containing a 2'-deoxy-2'-fluoro modification;
X is, independently at each occurrence, a nucleotide containing a 2'-O-methyl modification;
Y is, independently at each occurrence, a nucleotide containing a 2'-deoxy-2'-fluoro modification; and
Y is independently at each occurrence a nucleotide containing a 2'-O-methyl modification]
has the structure of
iii) Formula (IV):
Figure 2020205605000006
 [In the formula,
X is independently selected at each occurrence from adenosine, guanosine, uridine, cytidine, and chemically modified derivatives thereof;
Y is independently selected at each occurrence from adenosine, guanosine, uridine, cytidine, and chemically modified derivatives thereof;
- indicates a phosphodiester internucleoside linkage;
= indicates a phosphorothioate internucleoside linkage; and
--- indicates a base-pairing interaction or mismatch in each occurrence]
has the structure of
or
iv) Formula (V):
Figure 2020205605000007
 [In the formula,
X is independently at each occurrence a nucleotide containing a 2'-deoxy-2'-fluoro modification;
X is, independently at each occurrence, a nucleotide containing a 2'-O-methyl modification;
Y is, independently at each occurrence, a nucleotide containing a 2'-deoxy-2'-fluoro modification; and
Y is independently at each occurrence a nucleotide containing a 2'-O-methyl modification]
having the structure of
Preferably,
i) L is structure L1:
Figure 2020205605000008
 or _
L is structure L2:
Figure 2020205605000009
 is;
and/or
ii) compounds wherein R is R3 and n is 2; 式(VI):
Figure 2020205605000010
 ［式(VI)中、
Lは、エチレングリコール鎖、アルキル鎖、ペプチド、RNA、DNA、ホスフェート、ホスホネート、ホスホルアミデート、エステル、アミド、トリアゾール、およびこれらの組み合わせからなる群から選択され、ここで、式(VI)は場合により、1つまたはそれ以上の分岐点B、および1つまたはそれ以上のスペーサーSをさらに含んでいてよく(ここで、
Bは、出現するごとに独立して、多価有機種またはその誘導体であり;
Sは、出現するごとに独立して、エチレングリコール鎖、アルキル鎖、ペプチド、RNA、DNA、ホスフェート、ホスホネート、ホスホルアミデート、エステル、アミド、トリアゾール、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される);
各cNAは、独立して、1つまたはそれ以上の化学修飾を含む担体核酸であり;
各cNAは、独立して、5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'の少なくとも15個の連続するヌクレオチドを含み;そして、
nは、2、3、4、5、6、7または8である］
の構造を有する、治療的核酸のための送達システムであって、
好ましくは、
式(VI-1)～(VI-9):
Figure 2020205605000011
 から選択される構造を有し、
場合により、
i)各cNAは、独立して、化学修飾ヌクレオチドを含み、
ii)n個の治療的核酸(NA)をさらに含み、ここで、各NAは、少なくとも1つのcNAにハイブリダイズしており、好ましくは、各NAは、独立して、少なくとも16個の連続するヌクレオチド、好ましくは16～20個の連続するヌクレオチドを含み、好ましくは、ここで、各NAは、少なくとも2個のヌクレオチドの不対突出部を含み、好ましくは、ここで、該突出部のヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合を介して結合されており、
好ましくは、各NAは、独立して、DNA、siRNA、アンタゴmiR、miRNA、ギャップマー、ミックスマー、またはガイドRNAからなる群から選択される、送達システム。 Formula (VI):
Figure 2020205605000010
 [In formula (VI),
L is selected from the group consisting of ethylene glycol chains, alkyl chains, peptides, RNA, DNA, phosphates, phosphonates, phosphoramidates, esters, amides, triazoles, and combinations thereof, wherein formula (VI) is Optionally, it may further comprise one or more branch points B and one or more spacers S, where
B is independently at each occurrence a multivalent organic species or derivative thereof;
S is independently selected at each occurrence from the group consisting of ethylene glycol chains, alkyl chains, peptides, RNA, DNA, phosphates, phosphonates, phosphoramidates, esters, amides, triazoles, and combinations thereof. );
each cNA is independently a carrier nucleic acid containing one or more chemical modifications;
each cNA independently comprises at least 15 contiguous nucleotides 5' AAGAAAAGACCUGAUAAAGAUUAACCAGAAGAAAACAAGGAGGGA 3'; and
n is 2, 3, 4, 5, 6, 7 or 8]
A delivery system for therapeutic nucleic acids having the structure of
Preferably,
Formulas (VI-1) to (VI-9):
Figure 2020205605000011
 having a structure selected from
In some cases
i) each cNA independently comprises a chemically modified nucleotide;
ii) further comprising n therapeutic nucleic acids (NA), wherein each NA is hybridized to at least one cNA, preferably each NA independently comprises at least 16 contiguous Nucleotides , preferably 16-20 contiguous nucleotides, preferably wherein each NA comprises an unpaired overhang of at least 2 nucleotides, preferably wherein said overhang are linked via phosphorothioate linkages,
Preferably, each NA is independently selected from the group consisting of DNA, siRNA, antagomiRs, miRNAs, gapmers, mixmers, or guide RNAs. 生物においてC9ORF72遺伝子の発現を阻害するための医薬組成物であって、請求項3または4に記載のdsRNA、請求項9～10のいずれか一項に記載の分岐状オリゴヌクレオチド化合物または請求項11に記載の送達システム、および薬学的に許容できる担体を含み、好ましくは、該分岐状オリゴヌクレオチド化合物または該送達システムは、該C9ORF72遺伝子の発現を少なくとも50％、または少なくとも90％阻害する、医薬組成物。 A pharmaceutical composition for inhibiting expression of the C9ORF72 gene in an organism, comprising the dsRNA of claim 3 or 4, the branched oligonucleotide compound of any one of claims 9-10 or claim 11 and a pharmaceutically acceptable carrier , preferably said branched oligonucleotide compound or said delivery system inhibits expression of said C9ORF72 gene by at least 50 %, or at least 90% . pharmaceutical composition. 細胞内でのC9ORF72遺伝子の発現を阻害するインビトロ方法であって、
(a)請求項9～10のいずれか一項に記載の分岐状オリゴヌクレオチド化合物または請求項11に記載の送達システムを細胞に導入すること;および
(b)工程(a)で作製された細胞を、C9ORF72遺伝子のmRNA転写産物を得るのに十分な時間維持することを含み、それによって細胞内でのC9ORF72遺伝子の発現を阻害する；
または
(a)請求項3に記載の二本鎖リボ核酸(dsRNA)を細胞に導入すること；および
(b)工程(a)で作製された細胞を、C9ORF72遺伝子のmRNA転写産物を得るのに十分な時間維持することを含み、それによって細胞内でのC9ORF72遺伝子の発現を阻害する、方法。 An in vitro method of inhibiting expression of a C9ORF72 gene in a cell, comprising:
(a) introducing into a cell the branched oligonucleotide compound of any one of claims 9-10 or the delivery system of claim 11 ; and
(b) maintaining the cell produced in step (a) for a time sufficient to obtain an mRNA transcript of the C9ORF72 gene, thereby inhibiting expression of the C9ORF72 gene within the cell ;
or
(a) introducing into a cell the double-stranded ribonucleic acid (dsRNA) of claim 3; and
(b) A method comprising maintaining the cell produced in step (a) for a time sufficient to obtain an mRNA transcript of the C9ORF72 gene, thereby inhibiting expression of the C9ORF72 gene within the cell. それぞれ独立して15～35塩基長である二つの核酸を含む分岐状オリゴヌクレオチド化合物であって、各核酸は、C9ORF72 mRNAと実質的に相補的な相補性領域を含み、ここで、該二つの核酸は、リンカー、スペーサーおよび分岐点からなる群から独立して選択される1つまたはそれ以上の部分によって互いに結合されており、好ましくは、
各核酸は、独立して、表1、表2、表3、表4、または表5に記載のC9ORF72遺伝子における遺伝子領域と実質的に相補的な相補性領域を含み、好ましくは、
各核酸は、独立して、一本鎖(ss)RNAまたは二本鎖(ds)RNAである、分岐状オリゴヌクレオチド化合物、
あるいは
第一のガイド鎖、第二のガイド鎖、第一のパッセンジャー鎖、第二のパッセンジャー鎖、およびリンカーを含むジ分岐状オリゴヌクレオチド化合物であって、
第一のガイド鎖および第二のガイド鎖は、それぞれ独立して、5' GAUUAACCAGAAGAA 3'と実質的に相補的な相補性領域を含み;そして、
第一のパッセンジャー鎖および第二のパッセンジャー鎖は、リンカーを介して互いに結合されており、好ましくは、
第一のガイド鎖および第二のガイド鎖は、それぞれ独立して、5' VP(mU)#(fU)#(mC)(fU)(fU)(fC)(mU)(fG)(mG)(fU)(mU)(fA)(mA)#(fU)#(mC)#(mU)#(mU)#(mU)#(mA)#(fU) 3'を含み、場合により、
第一のパッセンジャー鎖および第二のパッセンジャー鎖はそれぞれ、5' (mG)#(mA)#(fU)(mU)(fA)(mA)(fC)(mC)(fA)(mG)(mA)(mA)(fG)#(mA)#(mA) 3'を含み、
好ましくは、
リンカーは、エチレングリコール鎖、アルキル鎖、ペプチド、RNAオリゴヌクレオチド、DNAオリゴヌクレオチド、ホスフェート、ホスホネート、ホスホルアミデート、エステル、アミド、トリアゾール、およびこれらの組み合わせからなる群から選択されるか;
リンカーのいずれかの炭素または酸素原子は場合により、窒素原子によって置き換えられていてよく、ヒドロキシル置換基を有していてよく、またはオキソ置換基を有していてよいか、
または
リンカーは、グリセロールまたは式-O-(CH2)o-CH(OH)-(CH2)p-O-［式中、oおよびpは、独立して、1～約6の整数である］のグリセロールホモログ鎖;および
式-O-(CH2)m-C(O)NH-CH2-CH(OH)-CH2-NHC(O)-(CH2)m-O-［式中、mは、0～約10の整数である］の1,3-ジアミノ-2-ヒドロキシプロパンの誘導体からなる群から選択され、好ましくは、第一のパッセンジャー鎖の3'末端は、リンカーを介して第二のパッセンジャー鎖の3'末端に結合されている、ジ分岐状オリゴヌクレオチド化合物。 A branched oligonucleotide compound comprising two nucleic acids that are each independently 15-35 bases long, each nucleic acid comprising a complementary region substantially complementary to C9ORF72 mRNA, wherein the two The nucleic acids are linked together by one or more moieties independently selected from the group consisting of linkers, spacers and branch points, preferably
Each nucleic acid independently comprises a region of complementarity substantially complementary to a gene region in the C9ORF72 gene listed in Table 1, Table 2, Table 3, Table 4, or Table 5 , preferably
branched oligonucleotide compounds, wherein each nucleic acid is independently a single-stranded (ss) RNA or a double-stranded (ds) RNA ;
or
A di-branched oligonucleotide compound comprising a first guide strand, a second guide strand, a first passenger strand, a second passenger strand, and a linker,
the first guide strand and the second guide strand each independently comprise a complementary region substantially complementary to 5' GAUUAACCAGAAGAA 3'; and
The first passenger strand and the second passenger strand are attached to each other via a linker, preferably
The first guide strand and the second guide strand are each independently 5'VP(mU)#(fU)#(mC)(fU)(fU)(fC)(mU)(fG)(mG)(fU)(mU)(fA)(mA)#(fU)#(mC)#(mU)#(mU)#(mU)#(mA)#(fU)3' , optionally including
The first passenger strand and the second passenger strand are each 5'(mG)#(mA)#(fU)(mU)(fA)(mA)(fC)(mC)(fA)(mG)(mA)(mA)(fG)# ( mA)#(mA) 3',
Preferably,
is the linker selected from the group consisting of ethylene glycol chains, alkyl chains, peptides, RNA oligonucleotides, DNA oligonucleotides, phosphates, phosphonates, phosphoramidates, esters, amides, triazoles, and combinations thereof ;
any carbon or oxygen atom of the linker may optionally be replaced by a nitrogen atom, may have a hydroxyl substituent, or may have an oxo substituent ;
or
The linker is glycerol or of the formula -O-( CH2 ) o -CH(OH)-( CH2 ) p -O-, where o and p are independently integers from 1 to about 6. and a glycerol homolog chain of the formula -O-( CH2 ) m -C(O)NH- CH2 -CH(OH) -CH2- NHC(O)-( CH2 ) m -O-, where m is an integer from 0 to about 10] , preferably the 3' end of the first passenger strand is connected via a linker attached to the 3' end of the second passenger strand with a di- branched oligonucleotide compound. 神経変性疾患の処置または管理に使用するための、治療有効量の請求項8、９もしくは13のいずれか一項に記載の分岐状オリゴヌクレオチド化合物または請求項11に記載の送達システムであって、そのような処置または管理を必要とする患者に、治療有効量の該分岐状オリゴヌクレオチド化合物または該送達システムを投与することを含み、ここで、該分岐状オリゴヌクレオチド化合物または該送達システムは、患者の脳に投与されるか、あるいは脳室内(ICV)または髄腔内(IT)注射によって投与され、さらに好ましくは、A therapeutically effective amount of a branched oligonucleotide compound of any one of claims 8, 9 or 13 or a delivery system of claim 11 for use in the treatment or management of a neurodegenerative disease, comprising: administering a therapeutically effective amount of the branched oligonucleotide compound or the delivery system to a patient in need of such treatment or management, wherein the branched oligonucleotide compound or the delivery system is administered to the patient or by intracerebroventricular (ICV) or intrathecal (IT) injection, more preferably
該分岐状オリゴヌクレオチド化合物または該送達システムの投与により、脳において、好ましくは脊髄においてC9ORF72遺伝子mRNAの低減を引き起こし、好ましくは、 administration of said branched oligonucleotide compound or said delivery system causes a reduction of C9ORF72 gene mRNA in the brain, preferably in the spinal cord, preferably
該分岐状オリゴヌクレオチド化合物または該送達システムにより、C9ORF72遺伝子の発現を少なくとも50％、または少なくとも90％阻害する、分岐状オリゴヌクレオチド化合物または送達システム； a branched oligonucleotide compound or delivery system that inhibits expression of the C9ORF72 gene by at least 50%, or at least 90% by said branched oligonucleotide compound or said delivery system;
あるいはor
神経変性疾患の処置または管理に使用するための、治療有効量の請求項3に記載のdsRNAであって、そのよう処置または管理を必要とする患者に、治療有効量の該dsRNAを投与することを含み、好ましくは、 4. A therapeutically effective amount of the dsRNA of claim 3 for use in the treatment or management of a neurodegenerative disease, wherein administering the therapeutically effective amount of the dsRNA to a patient in need of such treatment or management. preferably comprising
i)該dsRNAは、患者の脳に投与されるか； i) whether the dsRNA is administered to the patient's brain;
またはor
ii)該dsRNAは、脳室内(ICV)または髄腔内注射によって投与され； ii) the dsRNA is administered by intracerebroventricular (ICV) or intrathecal injection;
および／またはand/or
dsRNAの投与により、脳において、または脊髄においてC9ORF72遺伝子mRNAの低減を引き起こし、好ましくは Administration of dsRNA causes reduction of C9ORF72 gene mRNA in the brain or in the spinal cord, preferably
該dsRNAにより、該C9ORF72遺伝子の発現を少なくとも50％、または少なくとも90％阻害する、dsRNA。 A dsRNA that inhibits expression of said C9ORF72 gene by at least 50%, or at least 90% by said dsRNA.
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