本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、参照によりそれらの全体が援用される。矛盾が生じる場合は、定義を含めて本明細書が優先される。加えて、節の見出し、これらの材料、方法、及び例は例示に過ぎず、限定することは意図していない。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目１)
少なくとも２つの異なる核酸ベクターを含む組成物であって、
前記少なくとも２つの異なるアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターの各々が、支持細胞標的タンパク質の異なる部分をコードするコード配列を含み、前記コードされた部分の各々が、少なくとも３０アミノ酸残基の長さであり、前記コードされた部分の各々のアミノ酸配列が、任意選択で、前記コードされた部分のうちの異なる部分のアミノ酸配列と部分的に重複してもよく、
前記少なくとも２つの異なるベクターのいずれのベクターも、完全長の前記支持細胞標的タンパク質をコードせず、
前記コード配列のうちの少なくとも１つが、支持細胞標的ゲノムＤＮＡの２つの隣接するエクソンにまたがるヌクレオチド配列を含み、前記２つの隣接するエクソン間にイントロン配列を欠き、
霊長類細胞に導入されたときに、前記少なくとも２つの異なるベクターが互いにコンカテマー化または相同組換えを経て、それによって完全長の支持細胞標的タンパク質をコードする組換え核酸が形成される、前記組成物。
(項目２)
前記コードされた部分のうちの１つのアミノ酸配列が、前記コードされた部分のうちの異なる１つのアミノ酸配列と重複しない、項目１に記載の組成物。
(項目３)
前記コードされた部分の各々のアミノ酸配列が、前記コードされた部分のうちの異なるアミノ酸配列と部分的に重複する、項目２に記載の組成物。
(項目４)
前記重複するアミノ酸配列が、３０アミノ酸残基～約３９０アミノ酸残基の長さである、項目２に記載の組成物。
(項目５)
前記少なくとも２つの異なるベクターの各々が、イントロンの異なるセグメントを含み、前記イントロンが、支持細胞標的ゲノムＤＮＡに存在するイントロンのヌクレオチド配列を含み、前記２つの異なるセグメントの配列が、少なくとも１００ヌクレオチド重複する、項目１～４のいずれか１項に記載の組成物。
(項目６)
前記２つの異なるセグメントの配列が、約３０ヌクレオチド～約３９０ヌクレオチド重複する、項目５に記載の組成物。
(項目７)
前記少なくとも２つの異なるベクターの各々のヌクレオチド配列が、約３０ヌクレオチド～約３９０ヌクレオチドの長さである、項目１～６のいずれか１項に記載の組成物。
(項目８)
前記少なくとも２つの異なるベクターの各々のヌクレオチド配列が、３０ヌクレオチド～３４０ヌクレオチドの長さである、項目７に記載の組成物。
(項目９)
前記組成物中の異なるベクターの数が２つである、項目１～８のいずれか１項に記載の組成物。
(項目１０)
前記２つの異なるベクターのうちの第１のベクターが、前記支持細胞標的タンパク質のＮ末端部分をコードするコード配列を含む、項目９に記載の組成物。
(項目１１)
前記支持細胞標的タンパク質の前記Ｎ末端部分が、約３０アミノ酸～約３９０アミノ酸の長さである、項目１０に記載の組成物。
(項目１２)
前記支持細胞標的タンパク質の前記Ｎ末端部分が、約３０アミノ酸～約３４０アミノ酸の長さである、項目１１に記載の組成物。
(項目１３)
前記第１のベクターが、プロモーター及びコザック配列のうちの一方または両方をさらに含む、項目１０～１２のいずれか１項に記載の組成物。
(項目１４)
前記第１のベクターが、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、または組織特異的プロモーターであるプロモーターを含む、項目１３に記載の組成物。
(項目１５)
前記２つの異なるベクターのうちの第２のベクターが、前記支持細胞標的タンパク質のＣ末端部分をコードするコード配列を含む、項目１０～１４のいずれか１項に記載の組成物。
(項目１６)
前記支持細胞標的タンパク質の前記Ｃ末端部分が、３０アミノ酸～約３９０アミノ酸の長さである、項目１５に記載の組成物。
(項目１７)
前記支持細胞標的タンパク質の前記Ｃ末端部分が、３０アミノ酸～約３４０アミノ酸の長さである、項目１６に記載の組成物。
(項目１８)
前記第２のベクターが、ポリ（ｄＡ）配列をさらに含む、項目１５～１７のいずれか１項に記載の組成物。
(項目１９)
２つの異なる核酸ベクターを含む組成物であって、
前記２つの異なる核酸ベクターのうちの第１の核酸ベクターが、プロモーターと、前記プロモーターの３’側に位置する支持細胞標的タンパク質のＮ末端部分をコードする第１のコード配列と、前記第１のコード配列の３’末端に位置するスプライシングドナーシグナル配列とを含み、
前記２つの異なる核酸ベクターのうちの第２の核酸ベクターが、スプライシングアクセプターシグナル配列と、前記スプライシングアクセプターシグナル配列の３’末端に位置する支持細胞標的タンパク質のＣ末端部分をコードする第２のコード配列と、前記第２のコード配列の３’末端にあるポリアデニル化配列とを含み、
前記コードされた部分の各々が、少なくとも３０アミノ酸残基の長さであり、前記コードされた部分のアミノ酸配列が重複せず、前記２つの異なるベクターのいずれのベクターも、完全長の前記支持細胞標的タンパク質をコードせず、前記コード配列が霊長類細胞内で転写されてＲＮＡ転写物を産生したときに、一方の転写物上の前記スプライシングドナーシグナル配列と他方の転写物上の前記スプライシングアクセプターシグナル配列との間でスプライシングが生じ、それによって完全長の支持細胞標的タンパク質をコードする組換えＲＮＡ分子が形成される、前記組成物。
(項目２０)
前記コード配列のうちの少なくとも１つが、支持細胞標的ゲノムＤＮＡの２つの隣接するエクソンにまたがるヌクレオチド配列を含み、前記隣接するエクソン間にイントロン配列を欠く、項目１９に記載の組成物。
(項目２１)
組成物であって、
プロモーターと、前記プロモーターの３’側に位置する支持細胞標的タンパク質のＮ末端部分をコードする第１のコード配列と、前記第１のコード配列の３’末端に位置するスプライシングドナーシグナル配列と、前記スプライシングドナーシグナル配列の３’側に位置する第１の検出可能マーカー遺伝子とを含む、第１の核酸分子ベクター、及び
第２の検出可能マーカー遺伝子と、前記第２の検出可能マーカー遺伝子の３’側に位置するスプライシングアクセプターシグナル配列と、前記スプライシングアクセプターシグナル配列の３’末端に位置する支持細胞標的タンパク質のＣ末端部分をコードする第２のコード配列と、前記第２のコード配列の３’末端に位置するポリアデニル化配列とを含む、前記第１の核酸ベクターとは異なる第２の核酸ベクターを含み、
前記コードされた部分の各々が、少なくとも３０アミノ酸残基の長さであり、前記コードされた部分のそれぞれのアミノ酸配列が互いに重複せず、前記２つの異なるベクターのいずれのベクターも、完全長の前記支持細胞標的タンパク質をコードせず、前記コード配列が霊長類細胞内で転写されてＲＮＡ転写物を産生したときに、一方の転写物上の前記スプライシングドナーシグナルと他方の転写物上の前記スプライシングアクセプターシグナルとの間でスプライシングが生じ、それによって完全長の支持細胞標的タンパク質をコードする組換えＲＮＡ分子が形成される、前記組成物。
(項目２２)
前記コード配列のうちの少なくとも１つが、支持細胞標的ゲノムＤＮＡの２つの隣接するエクソンにまたがるヌクレオチド配列を含み、前記隣接するエクソン間にイントロン配列を欠く、項目２１に記載の組成物。
(項目２３)
前記第１または第２の検出可能マーカー遺伝子がアルカリホスファターゼである、項目２１に記載の組成物。
(項目２４)
前記第１及び第２の検出可能マーカー遺伝子が同じである、項目２１または２３に記載の組成物。
(項目２５)
組成物であって、
プロモーターと、前記プロモーターに対し３’側に位置する支持細胞標的タンパク質のＮ末端部分をコードする第１のコード配列と、前記第１のコード配列の３’末端に位置するスプライシングドナーシグナル配列と、前記スプライシングドナーシグナル配列に対し３’側に位置するＦ１ファージ組換え誘導領域とを含む、第１の核酸分子ベクター、及び
第２のＦ１ファージ組換え誘導領域と、前記第２のＦ１ファージ組換え誘導領域の３’側に位置するスプライシングアクセプターシグナル配列と、前記スプライシングアクセプターシグナル配列の３’末端に位置する支持細胞標的タンパク質のＣ末端部分をコードする第２のコード配列と、前記第２のコード配列の３’末端に位置するポリアデニル化配列とを含む、前記第１の核酸ベクターとは異なる第２の核酸ベクターを含み、
前記コードされた部分の各々が、少なくとも３０アミノ酸残基の長さであり、前記コードされた部分のそれぞれのアミノ酸配列が互いに重複せず、前記２つの異なるベクターのいずれのベクターも、完全長の前記支持細胞標的タンパク質をコードせず、前記コード配列が霊長類細胞内で転写されてＲＮＡ転写物を産生したときに、一方の転写物上の前記スプライシングドナーシグナルと他方の転写物上の前記スプライシングアクセプターシグナルとの間でスプライシングが生じ、それによって完全長の支持細胞標的タンパク質をコードする組換えＲＮＡ分子が形成される、前記組成物。
(項目２６)
前記コード配列のうちの少なくとも１つが、支持細胞標的ゲノムＤＮＡの２つの隣接するエクソンにまたがるヌクレオチド配列を含み、前記２つの隣接するエクソン間にイントロン配列を欠く、項目２５に記載の組成物。
(項目２７)
単一のアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物であって、前記単一のＡＡＶベクターが、支持細胞標的タンパク質をコードする核酸配列を含み、
霊長類細胞に導入されたときに、前記支持細胞標的遺伝子の座位で完全長の支持細胞標的タンパク質をコードする核酸が生成され、前記霊長類が前記支持細胞標的タンパク質を発現する、前記組成物。
(項目２８)
前記支持細胞標的遺伝子がギャップ結合タンパク質ベータ２（ＧＪＢ２）である、項目１～２７のいずれか１項に記載の組成物。
(項目２９)
前記支持細胞標的遺伝子が溶質担体ファミリー２６メンバー４（ＳＬＣ２６Ａ４）である、項目１～２７のいずれか１項に記載の組成物。
(項目３０)
少なくとも２つの異なる核酸ベクターを含む組成物であって、
前記少なくとも２つの異なるアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターの各々が、有毛細胞標的タンパク質の異なる部分をコードするコード配列を含み、前記コードされた部分の各々が、少なくとも３０アミノ酸残基の長さであり、前記コードされた部分の各々のアミノ酸配列が、任意選択で、前記コードされた部分のうちの異なる部分のアミノ酸配列と部分的に重複してもよく、
前記少なくとも２つの異なるベクターのいずれのベクターも、完全長の前記有毛細胞標的タンパク質をコードせず、
前記コード配列のうちの少なくとも１つが、有毛細胞標的ゲノムＤＮＡの２つの隣接するエクソンにまたがるヌクレオチド配列を含み、前記２つの隣接するエクソン間にイントロン配列を欠き、
霊長類細胞に導入されたときに、前記少なくとも２つの異なるベクターが互いにコンカテマー化または相同組換えを経て、それによって完全長の有毛細胞標的タンパク質をコードする組換え核酸が形成される、前記組成物。
(項目３１)
前記コードされた部分のうちの１つのアミノ酸配列が、前記コードされた部分のうちの異なる１つのアミノ酸配列と重複しない、項目３０に記載の組成物。
(項目３２)
前記コードされた部分の各々のアミノ酸配列が、前記コードされた部分のうちの異なるアミノ酸配列と部分的に重複する、項目３１に記載の組成物。
(項目３３)
前記重複するアミノ酸配列が、３０アミノ酸残基～約３９０アミノ酸残基の長さである、項目３１に記載の組成物。
(項目３４)
前記少なくとも２つの異なるベクターの各々が、イントロンの異なるセグメントを含み、前記イントロンが、有毛細胞標的ゲノムＤＮＡに存在するイントロンのヌクレオチド配列を含み、前記２つの異なるセグメントの配列が、少なくとも１００ヌクレオチド重複する、項目３０～３３のいずれか１項に記載の組成物。
(項目３５)
前記２つの異なるセグメントの配列が、約３０ヌクレオチド～約３９０ヌクレオチド重複する、項目３４に記載の組成物。
(項目３６)
前記少なくとも２つの異なるベクターの各々のヌクレオチド配列が、約３０ヌクレオチド～約３９０ヌクレオチドの長さである、項目３０～３５のいずれか１項に記載の組成物。
(項目３７)
前記少なくとも２つの異なるベクターの各々のヌクレオチド配列が、３０ヌクレオチド～３４０ヌクレオチドの長さである、項目３６に記載の組成物。
(項目３８)
前記組成物中の異なるベクターの数が２つである、項目３０～３７のいずれか１項に記載の組成物。
(項目３９)
前記２つの異なるベクターのうちの第１のベクターが、前記有毛細胞標的タンパク質のＮ末端部分をコードするコード配列を含む、項目３８に記載の組成物。
(項目４０)
前記有毛細胞標的タンパク質の前記Ｎ末端部分が、約３０アミノ酸～約３９０アミノ酸の長さである、項目３９に記載の組成物。
(項目４１)
前記有毛細胞標的タンパク質の前記Ｎ末端部分が、約３０アミノ酸～約３４０アミノ酸の長さである、項目４０に記載の組成物。
(項目４２)
前記第１のベクターが、プロモーター及びコザック配列のうちの一方または両方をさらに含む、項目３９～４１のいずれか１項に記載の組成物。
(項目４３)
前記第１のベクターが、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、または組織特異的プロモーターであるプロモーターを含む、項目４２に記載の組成物。
(項目４４)
前記２つの異なるベクターのうちの第２のベクターが、前記有毛細胞標的タンパク質のＣ末端部分をコードするコード配列を含む、項目３９～４１のいずれか１項に記載の組成物。
(項目４５)
前記有毛細胞標的タンパク質の前記Ｃ末端部分が、３０アミノ酸～約３９０アミノ酸の長さである、項目４４に記載の組成物。
(項目４６)
前記有毛細胞標的タンパク質の前記Ｃ末端部分が、３０アミノ酸～約３４０アミノ酸の長さである、項目４５に記載の組成物。
(項目４７)
前記第２のベクターが、ポリ（ｄＡ）配列をさらに含む、項目４４～４６のいずれか１項に記載の組成物。
(項目４８)
２つの異なる核酸ベクターを含む組成物であって、
前記２つの異なる核酸ベクターのうちの第１の核酸ベクターが、プロモーターと、前記プロモーターの３’側に位置する有毛細胞標的タンパク質のＮ末端部分をコードする第１のコード配列と、前記第１のコード配列の３’末端に位置するスプライシングドナーシグナル配列とを含み、
前記２つの異なる核酸ベクターのうちの第２の核酸ベクターが、スプライシングアクセプターシグナル配列と、前記スプライシングアクセプターシグナル配列の３’末端に位置する有毛細胞標的タンパク質のＣ末端部分をコードする第２のコード配列と、前記第２のコード配列の３’末端にあるポリアデニル化配列とを含み、
前記コードされた部分の各々が、少なくとも３０アミノ酸残基の長さであり、前記コードされた部分のアミノ酸配列が重複せず、前記２つの異なるベクターのいずれのベクターも、完全長の前記有毛細胞標的タンパク質をコードせず、前記コード配列が霊長類細胞内で転写されてＲＮＡ転写物を産生したときに、一方の転写物上の前記スプライシングドナーシグナル配列と他方の転写物上の前記スプライシングアクセプターシグナル配列との間でスプライシングが生じ、それによって完全長の有毛細胞標的タンパク質をコードする組換えＲＮＡ分子が形成される、前記組成物。
(項目４９)
前記コード配列のうちの少なくとも１つが、有毛細胞標的ゲノムＤＮＡの２つの隣接するエクソンにまたがるヌクレオチド配列を含み、前記隣接するエクソン間にイントロン配列を欠く、項目４８に記載の組成物。
(項目５０)
組成物であって、
プロモーターと、前記プロモーターの３’側に位置する有毛細胞標的タンパク質のＮ末端部分をコードする第１のコード配列と、前記第１のコード配列の３’末端に位置するスプライシングドナーシグナル配列と、前記スプライシングドナーシグナル配列の３’側に位置する第１の検出可能マーカー遺伝子とを含む、第１の核酸分子ベクター、及び
第２の検出可能マーカー遺伝子と、前記第２の検出可能マーカー遺伝子の３’側に位置するスプライシングアクセプターシグナル配列と、前記スプライシングアクセプターシグナル配列の３’末端に位置する有毛細胞標的タンパク質のＣ末端部分をコードする第２のコード配列と、前記第２のコード配列の３’末端に位置するポリアデニル化配列とを含む、前記第１の核酸ベクターとは異なる第２の核酸ベクターを含み、
前記コードされた部分の各々が、少なくとも３０アミノ酸残基の長さであり、前記コードされた部分のそれぞれのアミノ酸配列が互いに重複せず、前記２つの異なるベクターのいずれのベクターも、完全長の前記有毛細胞標的タンパク質をコードせず、前記コード配列が霊長類細胞内で転写されてＲＮＡ転写物を産生したときに、一方の転写物上の前記スプライシングドナーシグナルと他方の転写物上の前記スプライシングアクセプターシグナルとの間でスプライシングが生じ、それによって完全長の有毛細胞標的タンパク質をコードする組換えＲＮＡ分子が形成される、前記組成物。
(項目５１)
前記コード配列のうちの少なくとも１つが、有毛細胞標的ゲノムＤＮＡの２つの隣接するエクソンにまたがるヌクレオチド配列を含み、前記隣接するエクソン間にイントロン配列を欠く、項目５０に記載の組成物。
(項目５２)
前記第１または第２の検出可能マーカー遺伝子がアルカリホスファターゼである、項目５０に記載の組成物。
(項目５３)
前記第１及び第２の検出可能マーカー遺伝子が同じである、項目５０または５２に記載の組成物。
(項目５４)
組成物であって、
プロモーターと、前記プロモーターに対し３’側に位置する有毛細胞標的タンパク質のＮ末端部分をコードする第１のコード配列と、前記第１のコード配列の３’末端に位置するスプライシングドナーシグナル配列と、前記スプライシングドナーシグナル配列に対し３’側に位置するＦ１ファージ組換え誘導領域とを含む、第１の核酸分子ベクター、及び
第２のＦ１ファージ組換え誘導領域と、前記第２のＦ１ファージ組換え誘導領域の３’側に位置するスプライシングアクセプターシグナル配列と、前記スプライシングアクセプターシグナル配列の３’末端に位置する有毛細胞標的タンパク質のＣ末端部分をコードする第２のコード配列と、前記第２のコード配列の３’末端に位置するポリアデニル化配列とを含む、前記第１の核酸ベクターとは異なる第２の核酸ベクターを含み、
前記コードされた部分の各々が、少なくとも３０アミノ酸残基の長さであり、前記コードされた部分のそれぞれのアミノ酸配列が互いに重複せず、前記２つの異なるベクターのいずれのベクターも、完全長の前記有毛細胞標的タンパク質をコードせず、前記コード配列が霊長類細胞内で転写されてＲＮＡ転写物を産生したときに、一方の転写物上の前記スプライシングドナーシグナルと他方の転写物上の前記スプライシングアクセプターシグナルとの間でスプライシングが生じ、それによって完全長の有毛細胞標的タンパク質をコードする組換えＲＮＡ分子が形成される、前記組成物。
(項目５５)
前記コード配列のうちの少なくとも１つが、有毛細胞標的ゲノムＤＮＡの２つの隣接するエクソンにまたがるヌクレオチド配列を含み、前記２つの隣接するエクソン間にイントロン配列を欠く、項目５４に記載の組成物。
(項目５６)
前記有毛細胞標的遺伝子が、ＯＴＯＦ遺伝子、ＴＲＩＯＢＰ遺伝子、またはＳＴＲＣ遺伝子である、項目３０～５５のいずれか１項に記載の組成物。
(項目５７)
単一のアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物であって、前記単一のＡＡＶベクターが、有毛細胞標的タンパク質をコードする核酸配列を含み、
霊長類細胞に導入されたときに、前記有毛細胞標的遺伝子の座位で完全長の有毛細胞標的タンパク質をコードする核酸が生成され、前記霊長類が前記有毛細胞標的タンパク質を発現する、前記組成物。
(項目５８)
前記有毛細胞標的遺伝子が、ＰＪＶＫ遺伝子、ＯＴＯＦ遺伝子、ＮＤＰ遺伝子、ＣＬＲＮ１遺伝子、ＴＲＩＯＢＰ遺伝子、ＳＴＲＣ遺伝子、ＴＭＣ１遺伝子、ＶＥＧＦ遺伝子、またはＨＳＰＡ１Ａ遺伝子である、項目５７に記載の組成物。
(項目５９)
医薬的に許容される賦形剤をさらに含む、項目１～５８のいずれか１項に記載の組成物。
(項目６０)
項目１～５９のいずれか１項に記載の組成物を含むキット。
(項目６１)
前記組成物を含む充填済みシリンジをさらに含む、項目６０に記載のキット。
(項目６２)
霊長類における内耳の支持細胞における支持細胞標的遺伝子欠陥を修正する方法であって、
項目１～２９のいずれか１項に記載の組成物の治療有効量を前記霊長類の前記内耳に投与することを含み、
前記投与することが、前記霊長類の前記内耳の前記支持細胞における前記支持細胞標的遺伝子欠陥を修復する、前記方法。
(項目６３)
霊長類の内耳の支持細胞における支持細胞標的タンパク質の発現レベルを増加させる方法であって、項目１～２９のいずれか１項に記載の組成物の治療有効量を前記霊長類の前記内耳に投与することを含み、
前記投与することが、前記霊長類の前記内耳の前記支持細胞における前記支持細胞標的タンパク質の発現量の増加をもたらす、前記方法。
(項目６４)
前記霊長類が、支持細胞標的遺伝子に欠陥があると過去に判定されている、項目６３に記載の方法。
(項目６５)
支持細胞標的遺伝子に欠陥があると同定された霊長類における非症候性感音性難聴を治療する方法であって、
項目１～２９のいずれか１項に記載の組成物の治療有効量を前記霊長類の前記内耳に投与することを含む、前記方法。
(項目６６)
前記投与するステップの前に、前記霊長類の支持細胞標的遺伝子に欠陥があると判定することをさらに含む、項目６５に記載の方法。
(項目６７)
難聴を有すると同定または診断された霊長類における聴力を回復させる方法であって、項目１～２９のいずれか１項に記載の組成物の治療有効量を前記霊長類の前記内耳に投与することを含む、前記方法。
(項目６８)
前記投与するステップの前に、前記霊長類の支持細胞標的遺伝子に欠陥があると判定することをさらに含む、項目６７に記載の方法。
(項目６９)
内耳障害を有すると同定または診断された霊長類におけるシナプスを回復させる及び／またはらせん神経節神経を保存する方法であって、
項目１～２９のいずれか１項に記載の組成物の治療有効量を前記霊長類の前記内耳に投与することを含む、前記方法。
(項目７０)
前記投与するステップの前に、前記霊長類の支持細胞標的遺伝子に欠陥があると判定することをさらに含む、項目６９に記載の方法。
(項目７１)
項目１～２９のいずれか１項に記載の組成物の治療有効量を霊長類の内耳に投与することを含む、方法。
(項目７２)
前記霊長類が、支持細胞標的遺伝子に欠陥があると過去に同定されている、項目７１に記載の方法。
(項目７３)
霊長類における内耳の有毛細胞における有毛細胞標的遺伝子欠陥を修正する方法であって、
項目３０～５９のいずれか１項に記載の組成物の治療有効量を前記霊長類の前記内耳に投与することを含み、
前記投与することが、前記霊長類の前記内耳の前記有毛細胞における前記有毛細胞標的遺伝子欠陥を修復する、前記方法。
(項目７４)
霊長類の内耳の有毛細胞における有毛細胞標的タンパク質の発現レベルを増加させる方法であって、項目３０～５９のいずれか１項に記載の組成物の治療有効量を前記霊長類の前記内耳に投与することを含み、
前記投与することが、前記霊長類の前記内耳の前記有毛細胞における前記有毛細胞標的タンパク質の発現量の増加をもたらす、前記方法。
(項目７５)
前記霊長類が、有毛細胞標的遺伝子に欠陥があると過去に判定されている、項目７４に記載の方法。
(項目７６)
有毛細胞標的遺伝子に欠陥があると同定された霊長類における非症候性感音性難聴を治療する方法であって、
項目３０～５９のいずれか１項に記載の組成物の治療有効量を前記霊長類の前記内耳に投与することを含む、前記方法。
(項目７７)
前記投与するステップの前に、前記霊長類の有毛細胞標的遺伝子に欠陥があると判定することをさらに含む、項目７６に記載の方法。
(項目７８)
難聴を有すると同定または診断された霊長類における聴力を回復させる方法であって、
項目３０～５９のいずれか１項に記載の組成物の治療有効量を前記霊長類の前記内耳に投与することを含む、前記方法。
(項目７９)
前記投与するステップの前に、前記霊長類の有毛細胞標的遺伝子に欠陥があると判定することをさらに含む、項目７８に記載の方法。
(項目８０)
内耳障害を有すると同定または診断された霊長類におけるシナプスを回復させる及び／またはらせん神経節神経を保存する方法であって、
項目３０～５９のいずれか１項に記載の組成物の治療有効量を前記霊長類の前記内耳に投与することを含む、前記方法。
(項目８１)
前記投与するステップの前に、前記霊長類の有毛細胞標的遺伝子に欠陥があると判定することをさらに含む、項目８０に記載の方法。
(項目８２)
項目３０～５９のいずれか１項に記載の組成物の治療有効量を霊長類の内耳に投与することを含む、方法。
(項目８３)
前記霊長類が、有毛細胞標的遺伝子に欠陥があると過去に同定されている、項目８２に記載の方法。
(項目８４)
前記第２の核酸ベクターが不安定化配列をさらに含む、項目１～２６または３０～５６のいずれか１項に記載の組成物。
(項目８５)
前記第２の核酸ベクターがＦＫＢＰ１２不安定化配列をさらに含む、項目８４に記載の組成物。
(項目８６)
前記核酸ベクターが不安定化配列をさらに含む、項目２７～２９または５７～５９のいずれか１項に記載の組成物。
(項目８７)
前記核酸ベクターがＦＫＢＰ１２不安定化配列を含む、項目８６に記載の組成物。
All publications, patent applications, patents, and other references mentioned herein are incorporated by reference in their entirety. In case of conflict, the present specification, including definitions, will control. In addition, section headings, these materials, methods, and examples are illustrative only and not intended to be limiting.
The present invention provides, for example, the following items.
(Item 1)
A composition comprising at least two different nucleic acid vectors,
each of said at least two different adeno-associated virus (AAV) vectors comprising coding sequences encoding different portions of a feeder cell target protein, each of said encoded portions being at least 30 amino acid residues in length; , the amino acid sequence of each of said encoded portions may optionally partially overlap with the amino acid sequence of a different portion of said encoded portions;
neither of said at least two different vectors encodes the full length of said feeder cell targeting protein;
at least one of said coding sequences comprises a nucleotide sequence spanning two adjacent exons of feeder cell target genomic DNA and lacking intron sequences between said two adjacent exons;
said composition, wherein said at least two different vectors undergo concatemerization or homologous recombination with each other when introduced into a primate cell, thereby forming a recombinant nucleic acid encoding a full-length feeder cell target protein. .
(Item 2)
The composition of item 1, wherein the amino acid sequence of one of said encoded portions does not overlap with the amino acid sequence of a different one of said encoded portions.
(Item 3)
3. The composition of item 2, wherein the amino acid sequence of each of said encoded portions partially overlaps with a different amino acid sequence of said encoded portions.
(Item 4)
3. The composition of item 2, wherein said overlapping amino acid sequences are from 30 amino acid residues to about 390 amino acid residues in length.
(Item 5)
each of said at least two different vectors comprises a different segment of an intron, said intron comprising a nucleotide sequence of an intron present in the feeder cell target genomic DNA, and the sequences of said two different segments overlap by at least 100 nucleotides. , the composition according to any one of items 1 to 4.
(Item 6)
The composition of item 5, wherein the sequences of the two different segments overlap from about 30 nucleotides to about 390 nucleotides.
(Item 7)
7. The composition of any one of items 1-6, wherein the nucleotide sequence of each of said at least two different vectors is from about 30 nucleotides to about 390 nucleotides in length.
(Item 8)
8. The composition of item 7, wherein the nucleotide sequence of each of said at least two different vectors is between 30 and 340 nucleotides in length.
(Item 9)
9. The composition of any one of items 1-8, wherein the number of different vectors in said composition is two.
(Item 10)
10. The composition of item 9, wherein the first of said two different vectors comprises a coding sequence encoding the N-terminal portion of said feeder cell targeting protein.
(Item 11)
11. The composition of item 10, wherein said N-terminal portion of said feeder cell targeting protein is from about 30 amino acids to about 390 amino acids in length.
(Item 12)
12. The composition of item 11, wherein said N-terminal portion of said feeder cell targeting protein is from about 30 amino acids to about 340 amino acids in length.
(Item 13)
13. The composition of any one of items 10-12, wherein said first vector further comprises one or both of a promoter and a Kozak sequence.
(Item 14)
14. The composition of item 13, wherein said first vector comprises a promoter that is an inducible promoter, a constitutive promoter, or a tissue-specific promoter.
(Item 15)
15. The composition of any one of items 10-14, wherein the second of said two different vectors comprises a coding sequence encoding the C-terminal portion of said feeder cell targeting protein.
(Item 16)
16. The composition of item 15, wherein said C-terminal portion of said feeder cell targeting protein is from 30 amino acids to about 390 amino acids in length.
(Item 17)
17. The composition of item 16, wherein said C-terminal portion of said feeder cell targeting protein is from 30 amino acids to about 340 amino acids in length.
(Item 18)
18. The composition of any one of items 15-17, wherein said second vector further comprises a poly(dA) sequence.
(Item 19)
A composition comprising two different nucleic acid vectors,
A first of said two different nucleic acid vectors comprises a promoter, a first coding sequence encoding an N-terminal portion of a feeder cell targeting protein located 3′ to said promoter, and said first a splicing donor signal sequence located at the 3' end of the coding sequence;
a second nucleic acid vector of said two different nucleic acid vectors encoding a splicing acceptor signal sequence and a C-terminal portion of a feeder cell targeting protein located 3′ of said splicing acceptor signal sequence; a coding sequence and a polyadenylation sequence at the 3' end of said second coding sequence;
each of said encoded portions is at least 30 amino acid residues in length, the amino acid sequences of said encoded portions do not overlap, and either of said two different vectors is a full-length feeder cell; said splicing donor signal sequence on one transcript and said splicing acceptor on the other transcript when said coding sequence does not encode a target protein and is transcribed in a primate cell to produce an RNA transcript. Said composition, wherein splicing occurs between the signal sequence, thereby forming a recombinant RNA molecule encoding a full-length feeder cell targeting protein.
(Item 20)
20. The composition of item 19, wherein at least one of said coding sequences comprises a nucleotide sequence spanning two flanking exons of feeder cell target genomic DNA and lacking intron sequences between said flanking exons.
(Item 21)
A composition comprising:
a promoter, a first coding sequence encoding an N-terminal portion of a feeder cell targeting protein located 3' of said promoter, a splicing donor signal sequence located 3' of said first coding sequence, said a first detectable marker gene located 3′ to the splicing donor signal sequence; and
a second detectable marker gene, a splicing acceptor signal sequence located 3′ to said second detectable marker gene, and a feeder cell target protein C located 3′ to said splicing acceptor signal sequence a second nucleic acid vector, different from said first nucleic acid vector, comprising a second coding sequence encoding a terminal portion and a polyadenylation sequence located at the 3' end of said second coding sequence;
each of said encoded portions is at least 30 amino acid residues in length, the amino acid sequences of each of said encoded portions do not overlap with each other, and neither vector of said two different vectors is a full-length said splicing donor signal on one transcript and said splicing on the other transcript when said coding sequence does not encode said feeder cell target protein and is transcribed in a primate cell to produce an RNA transcript. Said composition, wherein splicing occurs with the acceptor signal, thereby forming a recombinant RNA molecule encoding a full-length feeder cell targeting protein.
(Item 22)
22. The composition of item 21, wherein at least one of said coding sequences comprises a nucleotide sequence spanning two flanking exons of feeder cell target genomic DNA and lacking intron sequences between said flanking exons.
(Item 23)
22. The composition of item 21, wherein said first or second detectable marker gene is alkaline phosphatase.
(Item 24)
24. The composition of item 21 or 23, wherein said first and second detectable marker genes are the same.
(Item 25)
A composition comprising:
a promoter, a first coding sequence encoding an N-terminal portion of a feeder cell targeting protein located 3' to said promoter, a splicing donor signal sequence located 3' to said first coding sequence; an F1 phage recombination-inducing region located 3′ to said splicing donor signal sequence; and
a second F1 phage recombination-inducing region, a splicing acceptor signal sequence located on the 3′ side of said second F1 phage recombination-inducing region, and a supporting cell located at the 3′ end of said splicing acceptor signal sequence A second nucleic acid vector, different from said first nucleic acid vector, comprising a second coding sequence encoding a C-terminal portion of a target protein and a polyadenylation sequence located at the 3' end of said second coding sequence. including
each of said encoded portions is at least 30 amino acid residues in length, the amino acid sequences of each of said encoded portions do not overlap with each other, and neither vector of said two different vectors is a full-length said splicing donor signal on one transcript and said splicing on the other transcript when said coding sequence does not encode said feeder cell target protein and is transcribed in a primate cell to produce an RNA transcript. Said composition, wherein splicing occurs with the acceptor signal, thereby forming a recombinant RNA molecule encoding a full-length feeder cell targeting protein.
(Item 26)
26. The composition of item 25, wherein at least one of said coding sequences comprises a nucleotide sequence spanning two adjacent exons of feeder cell target genomic DNA and lacking intron sequences between said two adjacent exons.
(Item 27)
1. A composition comprising a single adeno-associated viral (AAV) vector, said single AAV vector comprising a nucleic acid sequence encoding a feeder cell targeting protein;
said composition, wherein when introduced into a primate cell, a nucleic acid encoding a full-length feeding cell target protein is produced at said feeding cell target gene locus, said primate expressing said feeding cell target protein.
(Item 28)
28. The composition of any one of items 1-27, wherein said supporting cell target gene is gap junction protein beta 2 (GJB2).
(Item 29)
28. The composition of any one of items 1-27, wherein said supporting cell target gene is solute carrier family 26 member 4 (SLC26A4).
(Item 30)
A composition comprising at least two different nucleic acid vectors,
each of said at least two different adeno-associated virus (AAV) vectors comprising coding sequences encoding different portions of a hair cell target protein, each of said encoded portions being at least 30 amino acid residues in length; wherein the amino acid sequence of each of said encoded portions optionally partially overlaps with the amino acid sequence of a different portion of said encoded portions;
neither vector of said at least two different vectors encodes full-length said hair cell targeting protein;
at least one of said coding sequences comprises a nucleotide sequence spanning two adjacent exons of hair cell target genomic DNA and lacking intron sequences between said two adjacent exons;
said composition, wherein said at least two different vectors undergo concatemerization or homologous recombination with each other when introduced into a primate cell, thereby forming a recombinant nucleic acid encoding a full-length hair cell target protein. thing.
(Item 31)
31. The composition of item 30, wherein the amino acid sequence of one of said encoded portions does not overlap with the amino acid sequence of a different one of said encoded portions.
(Item 32)
32. The composition of item 31, wherein the amino acid sequence of each of said encoded portions partially overlaps with a different amino acid sequence of said encoded portions.
(Item 33)
32. The composition of item 31, wherein said overlapping amino acid sequences are from 30 amino acid residues to about 390 amino acid residues in length.
(Item 34)
each of said at least two different vectors comprises a different segment of an intron, said intron comprises a nucleotide sequence of an intron present in the hair cell target genomic DNA, and said sequences of said two different segments overlap by at least 100 nucleotides. The composition according to any one of items 30 to 33.
(Item 35)
35. The composition of item 34, wherein the sequences of the two different segments overlap from about 30 nucleotides to about 390 nucleotides.
(Item 36)
36. The composition of any one of items 30-35, wherein the nucleotide sequence of each of said at least two different vectors is from about 30 nucleotides to about 390 nucleotides in length.
(Item 37)
37. The composition of item 36, wherein the nucleotide sequence of each of said at least two different vectors is between 30 and 340 nucleotides in length.
(Item 38)
38. The composition of any one of items 30-37, wherein the number of different vectors in said composition is two.
(Item 39)
39. The composition of item 38, wherein the first of said two different vectors comprises a coding sequence encoding the N-terminal portion of said hair cell targeting protein.
(Item 40)
40. The composition of item 39, wherein said N-terminal portion of said hair cell targeting protein is from about 30 amino acids to about 390 amino acids in length.
(Item 41)
41. The composition of item 40, wherein said N-terminal portion of said hair cell targeting protein is from about 30 amino acids to about 340 amino acids in length.
(Item 42)
42. The composition of any one of items 39-41, wherein said first vector further comprises one or both of a promoter and a Kozak sequence.
(Item 43)
43. The composition of item 42, wherein said first vector comprises a promoter that is an inducible promoter, a constitutive promoter, or a tissue-specific promoter.
(Item 44)
42. The composition of any one of items 39-41, wherein the second of said two different vectors comprises a coding sequence encoding the C-terminal portion of said hair cell targeting protein.
(Item 45)
45. The composition of item 44, wherein said C-terminal portion of said hair cell targeting protein is from 30 amino acids to about 390 amino acids in length.
(Item 46)
46. The composition of item 45, wherein said C-terminal portion of said hair cell targeting protein is from 30 amino acids to about 340 amino acids in length.
(Item 47)
47. The composition of any one of items 44-46, wherein said second vector further comprises a poly(dA) sequence.
(Item 48)
A composition comprising two different nucleic acid vectors,
A first nucleic acid vector of the two different nucleic acid vectors comprises a promoter, a first coding sequence encoding an N-terminal portion of a hair cell target protein located 3′ to the promoter, and the first a splicing donor signal sequence located at the 3' end of the coding sequence of
a second nucleic acid vector of said two different nucleic acid vectors encoding a splicing acceptor signal sequence and a C-terminal portion of a hair cell targeting protein located at the 3' end of said splicing acceptor signal sequence; and a polyadenylation sequence at the 3' end of said second coding sequence;
each of said encoded portions is at least 30 amino acid residues in length, the amino acid sequences of said encoded portions do not overlap, and neither vector of said two different vectors is full length of said hairy does not encode a cellular target protein, and when said coding sequence is transcribed in a primate cell to produce an RNA transcript, said splicing donor signal sequence on one transcript and said splicing accessor on the other transcript; Said composition, wherein splicing occurs between the sceptor signal sequence, thereby forming a recombinant RNA molecule encoding a full-length hair cell target protein.
(Item 49)
49. The composition of item 48, wherein at least one of said coding sequences comprises a nucleotide sequence spanning two adjacent exons of hair cell target genomic DNA and lacking intron sequences between said adjacent exons.
(Item 50)
A composition comprising:
a promoter, a first coding sequence encoding an N-terminal portion of a hair cell target protein located 3′ to said promoter, a splicing donor signal sequence located 3′ to said first coding sequence; a first detectable marker gene located 3' to said splicing donor signal sequence; and
a second detectable marker gene, a splicing acceptor signal sequence located 3′ to said second detectable marker gene, and a hair cell target protein located 3′ to said splicing acceptor signal sequence. a second nucleic acid vector, different from said first nucleic acid vector, comprising a second coding sequence encoding a C-terminal portion and a polyadenylation sequence located at the 3' end of said second coding sequence;
each of said encoded portions is at least 30 amino acid residues in length, the amino acid sequences of each of said encoded portions do not overlap with each other, and neither vector of said two different vectors is a full-length said splicing donor signal on one transcript and said splicing donor signal on the other transcript when said coding sequence is transcribed in a primate cell to produce an RNA transcript that does not encode said hair cell target protein; Said composition, wherein splicing occurs between the splicing acceptor signal, thereby forming a recombinant RNA molecule encoding a full-length hair cell target protein.
(Item 51)
51. The composition of item 50, wherein at least one of said coding sequences comprises a nucleotide sequence spanning two adjacent exons of hair cell target genomic DNA and lacking intron sequences between said adjacent exons.
(Item 52)
51. The composition of item 50, wherein said first or second detectable marker gene is alkaline phosphatase.
(Item 53)
53. The composition of items 50 or 52, wherein said first and second detectable marker genes are the same.
(Item 54)
A composition comprising:
a promoter, a first coding sequence encoding an N-terminal portion of a hair cell target protein located 3' to said promoter, and a splicing donor signal sequence located 3' to said first coding sequence. an F1 phage recombination-inducing region located 3′ to said splicing donor signal sequence; and
a second F1 phage recombination-inducing region, a splicing acceptor signal sequence located on the 3' side of the second F1 phage recombination-inducing region, and a hairy region located at the 3' end of the splicing acceptor signal sequence A second nucleic acid, different from said first nucleic acid vector, comprising a second coding sequence encoding a C-terminal portion of a cellular targeting protein and a polyadenylation sequence located 3' of said second coding sequence. contains a vector,
each of said encoded portions is at least 30 amino acid residues in length, the amino acid sequences of each of said encoded portions do not overlap with each other, and neither vector of said two different vectors is a full-length said splicing donor signal on one transcript and said splicing donor signal on the other transcript when said coding sequence is transcribed in a primate cell to produce an RNA transcript that does not encode said hair cell target protein; Said composition, wherein splicing occurs between the splicing acceptor signal, thereby forming a recombinant RNA molecule encoding a full-length hair cell target protein.
(Item 55)
55. The composition of item 54, wherein at least one of said coding sequences comprises a nucleotide sequence spanning two adjacent exons of hair cell target genomic DNA and lacking intron sequences between said two adjacent exons.
(Item 56)
56. The composition of any one of items 30-55, wherein the hair cell target gene is the OTOF gene, the TRIOBP gene, or the STRC gene.
(Item 57)
1. A composition comprising a single adeno-associated virus (AAV) vector, said single AAV vector comprising a nucleic acid sequence encoding a hair cell targeting protein;
a nucleic acid encoding a full-length hair cell target protein is produced at the hair cell target gene locus when introduced into a primate cell, and the primate expresses the hair cell target protein; Composition.
(Item 58)
58. The composition of item 57, wherein the hair cell target gene is the PJVK gene, OTOF gene, NDP gene, CLRN1 gene, TRIOBP gene, STRC gene, TMC1 gene, VEGF gene, or HSPA1A gene.
(Item 59)
59. The composition of any one of items 1-58, further comprising a pharmaceutically acceptable excipient.
(Item 60)
A kit comprising a composition according to any one of items 1-59.
(Item 61)
61. The kit of item 60, further comprising a pre-filled syringe containing said composition.
(Item 62)
1. A method of correcting a supporting cell target gene defect in supporting cells of the inner ear in a primate comprising:
administering a therapeutically effective amount of the composition of any one of items 1-29 to the inner ear of the primate;
The method wherein said administering repairs said supporting cell target gene defect in said supporting cells of said inner ear of said primate.
(Item 63)
A method of increasing expression levels of a supporting cell target protein in supporting cells of the inner ear of a primate, comprising administering a therapeutically effective amount of the composition of any one of items 1-29 to the inner ear of the primate. including
The above method, wherein said administering results in increased expression of said supporting cell target protein in said supporting cells of said inner ear of said primate.
(Item 64)
64. The method of item 63, wherein said primate has been previously determined to be defective in a supporting cell target gene.
(Item 65)
A method of treating non-syndromic sensorineural hearing loss in a primate identified as defective in a supporting cell target gene, comprising:
30. The method, comprising administering a therapeutically effective amount of the composition of any one of items 1-29 to the inner ear of the primate.
(Item 66)
66. The method of item 65, further comprising determining that a supporting cell target gene of said primate is defective prior to said administering.
(Item 67)
A method of restoring hearing in a primate identified or diagnosed as having hearing loss, comprising administering a therapeutically effective amount of the composition of any one of items 1-29 to the inner ear of the primate. The above method, comprising
(Item 68)
68. The method of item 67, further comprising determining that a supporting cell target gene of said primate is defective prior to said administering.
(Item 69)
1. A method of restoring synapses and/or preserving spiral ganglion nerves in a primate identified or diagnosed with an inner ear disorder, comprising:
30. The method, comprising administering a therapeutically effective amount of the composition of any one of items 1-29 to the inner ear of the primate.
(Item 70)
70. The method of item 69, further comprising determining that a supporting cell target gene of said primate is defective prior to said administering.
(Item 71)
A method comprising administering a therapeutically effective amount of the composition of any one of items 1-29 to the inner ear of a primate.
(Item 72)
72. The method of item 71, wherein said primate has been previously identified as defective in a supporting cell target gene.
(Item 73)
1. A method of correcting a hair cell target gene defect in a hair cell of the inner ear in a primate comprising:
administering to the inner ear of the primate a therapeutically effective amount of the composition of any one of items 30-59;
The method, wherein the administering restores the hair cell target gene defect in the hair cells of the inner ear of the primate.
(Item 74)
60. A method of increasing expression levels of a hair cell target protein in hair cells of the inner ear of a primate, comprising administering a therapeutically effective amount of the composition of any one of items 30-59 to the inner ear of the primate. including administering to
The above method, wherein said administering results in increased expression of said hair cell target protein in said hair cells of said inner ear of said primate.
(Item 75)
75. The method of item 74, wherein said primate has been previously determined to be defective in a hair cell target gene.
(Item 76)
A method of treating non-syndromic sensorineural hearing loss in a primate identified as defective in a hair cell target gene comprising:
60. Said method comprising administering a therapeutically effective amount of the composition of any one of items 30-59 to said inner ear of said primate.
(Item 77)
77. The method of item 76, further comprising determining that the primate hair cell target gene is defective prior to the administering step.
(Item 78)
A method of restoring hearing in a primate identified or diagnosed as having hearing loss comprising:
60. Said method comprising administering a therapeutically effective amount of the composition of any one of items 30-59 to said inner ear of said primate.
(Item 79)
79. The method of item 78, further comprising, prior to said administering, determining that said primate hair cell target gene is defective.
(Item 80)
1. A method of restoring synapses and/or preserving spiral ganglion nerves in a primate identified or diagnosed with an inner ear disorder comprising:
60. Said method comprising administering a therapeutically effective amount of the composition of any one of items 30-59 to said inner ear of said primate.
(Item 81)
81. The method of item 80, further comprising, prior to said administering, determining that said primate hair cell target gene is defective.
(Item 82)
A method comprising administering a therapeutically effective amount of the composition of any one of items 30-59 to the inner ear of a primate.
(Item 83)
83. The method of item 82, wherein said primate has been previously identified as defective in a hair cell target gene.
(Item 84)
The composition of any one of items 1-26 or 30-56, wherein said second nucleic acid vector further comprises a destabilizing sequence.
(Item 85)
85. The composition of item 84, wherein said second nucleic acid vector further comprises an FKBP12 destabilization sequence.
(Item 86)
60. The composition of any one of items 27-29 or 57-59, wherein said nucleic acid vector further comprises a destabilizing sequence.
(Item 87)
87. The composition of item 86, wherein said nucleic acid vector comprises an FKBP12 destabilization sequence.