JPWO2020058668A5 - - Google Patents

Claims (19)

1. シリカマトリックスを含む発光粒子コアと、前記発光粒子コアのシリカに共有結合した第１の表面基と、前記発光粒子コアのシリカに共有結合した第２の表面基とを含む発光マーカー粒子であって、前記発光コアが前記シリカマトリックスおよび発光材料を含み、前記第１の表面基が極性基を含み、前記第１の表面基が２５℃の水中で生体分子と接触した際に生体分子に結合しない不活性な表面基であり、前記第２の表面基が生体分子結合基を含み、前記第２の表面基のモル数が、前記第１の表面基と前記第２の表面基の総モル数の１０％未満である発光マーカー粒子。
2. 前記極性基がポリエーテル鎖を含む、請求項１に記載の発光マーカーナノ粒子。
3. 前記極性基が式（Ｉ）の基であり、
   －（（ＣＲ^１４Ｒ^１５）_ｂＯ）_ｃ－
   （Ｉ）
   式中、Ｒ^１４およびＲ^１５が、それぞれ独立してＨまたはＣ_１～６アルキルであり、ｂが、少なくとも１、場合により１～５、好ましくは２であり、ｃが、少なくとも２、場合により２～１，０００、好ましくは１０～５００、１０～２００、１０～１００または２０～５０である、請求項２に記載の発光マーカーナノ粒子。
4. 前記生体分子が、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ペプチド、炭水化物、抗体、抗原、酵素、タンパク質およびホルモンからなる群から選択される、請求項１から３のいずれか一項に記載の発光マーカー粒子。
5. 前記第２の表面基が、前記ナノ粒子コアと前記生体分子結合基との間に極性基を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の発光マーカー粒子。
6. 前記発光材料が発光ポリマーである、請求項１から５のいずれか一項に記載の発光マーカー粒子。
7. 前記第２の表面基のモル数が、前記第１の表面基と前記第２の表面基の総モル数の５％以下である、請求項１から６のいずれか一項に記載の発光マーカー粒子。
8. その表面に結合した複数の第１の反応性基を有する発光粒子コアを提供すること、
   前記第１の表面基を形成することであって、前記第１の表面基の形成が、前記第１の反応性基の一部と第１の化合物とを反応させることを含むこと、および
   前記第２の表面基を形成することであって、前記第２の表面基の形成が、前記第１の反応性基の一部と第２の化合物とを反応させることを含むこと、
   を含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の発光マーカー粒子を形成する方法。
9. 前記第１の反応性基が、第１および第２の化合物のうちの少なくとも１つと反応して、第１または第２の表面基を前記発光粒子コアに結合するアミド結合基を形成する、請求項８に記載の方法。
10. 前記第１の反応性基が、前記発光粒子コアの表面で式（Ｉ）の化合物とシリカとを反応させることによって、その表面に形成され、
    （Ｒ^７Ｏ）_３Ｓｉ－（Ｓｐ^１）_ｘ－ＲＧ１
    （Ｉ）
    式中、Ｒ^７が、Ｈまたは置換基であり、
    Ｓｐ^１がスペーサー基であり、
    ｘが０または１であり、
    ＲＧ１が前記第１の反応性基である、請求項８または９に記載の方法。
11. 液体中に懸濁された請求項１から７のいずれか一項に記載の発光マーカー粒子を含むコロイド。
12. 前記液体が水を含む、請求項１１に記載のコロイド。
13. 前記液体が緩衝液である、請求項１１または１２に記載のコロイド。
14. 前記発光マーカーナノ粒子の濃度が、０．１ｍｇ／ｍＬを超える、請求項１１から１３のいずれか一項に記載のコロイド。
15. 生体分子をマーキングする方法であって、請求項１から７のいずれか一項に記載の発光マーカー粒子に前記生体分子を結合する工程を含む方法。
16. 試料と、請求項１から７のいずれか一項に記載の発光マーカー粒子とを接触させること、および前記発光マーカーに対する標的分析物の何らかの結合を決定することを含む、標的分析物のアッセイ方法。
17. 前記発光マーカー粒子と接触した前記試料が、フローサイトメトリーによって分析される、請求項１６に記載のアッセイ方法。
18. 前記発光マーカー粒子に結合した標的分析物の量が決定される、請求項１７に記載のアッセイ方法。
19. 前記試料が、細胞の混合物を含み、前記発光マーカーに結合した１つの又は複数の異なるタイプの標的細胞が、同定および／または定量される、請求項１８に記載のアッセイ方法。