JPWO2015050259A1 - 腫瘍抗原ペプチド - Google Patents
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Abstract
Description
中でも特に、がん幹細胞を免疫的に排除することが可能な新しいがんワクチンの開発が望まれている(例えば特許文献1)。
[1]Y0−X0−Z0
で表されるペプチドであって、
X0が、以下の(1)〜(4):
(1)FAM83Bタンパク質の部分ペプチドであって、該タンパク質のアミノ酸配列中の連続する8〜14アミノ酸からなり、N末端から第2番目のアミノ酸がロイシン、イソロイシンもしくはメチオニンであり、および/または、C末端のアミノ酸がバリン、ロイシンもしくはイソロイシンであるペプチド;
(2)(1)の部分ペプチドにおいて、N末端から第2番目のアミノ酸がロイシン、イソロイシンもしくはメチオニンに置換されており、および/または、C末端のアミノ酸がバリン、ロイシンもしくはイソロイシンに置換されているペプチド;
(3)FAM83Bタンパク質の部分ペプチドであって、該タンパク質のアミノ酸配列中の連続する8〜14アミノ酸からなり、N末端から第2番目のアミノ酸がチロシン、フェニルアラニン、メチオニンもしくはトリプトファンであり、および/または、C末端のアミノ酸がロイシン、イソロイシンもしくはフェニルアラニンであるペプチド;または
(4)(3)の部分ペプチドにおいて、N末端から第2番目のアミノ酸がチロシン、フェニルアラニン、メチオニンもしくはトリプトファンに置換されており、および/または、C末端のアミノ酸がロイシン、イソロイシンもしくはフェニルアラニンに置換されているペプチド;
のいずれかであり、
Y0およびZ0が、互いに独立して0個から数個のアミノ酸からなるペプチド
である、前記ペプチド。
(1’)FAM83Bタンパク質の部分ペプチドであって、該タンパク質のアミノ酸配列中の連続する8〜11アミノ酸からなり、N末端から第2番目のアミノ酸がロイシン、イソロイシンもしくはメチオニンであり、および/または、C末端のアミノ酸がバリン、ロイシンもしくはイソロイシンであるペプチド;
(2’)(1’)の部分ペプチドにおいて、N末端から第2番目のアミノ酸がロイシン、イソロイシンもしくはメチオニンに置換されており、および/または、C末端のアミノ酸がバリン、ロイシンもしくはイソロイシンに置換されているペプチド;
(3’)FAM83Bタンパク質の部分ペプチドであって、該タンパク質のアミノ酸配列中の連続する8〜11アミノ酸からなり、N末端から第2番目のアミノ酸がチロシン、フェニルアラニン、メチオニンもしくはトリプトファンであり、および/または、C末端のアミノ酸がロイシン、イソロイシンもしくはフェニルアラニンであるペプチド;または
(4’)(3’)の部分ペプチドにおいて、N末端から第2番目のアミノ酸がチロシン、フェニルアラニン、メチオニンもしくはトリプトファンに置換されており、および/または、C末端のアミノ酸がロイシン、イソロイシンもしくはフェニルアラニンに置換されているペプチド;
のいずれかであり、
Y0およびZ0が、互いに独立して
0個もしくは1個のアミノ酸であるか;または
0〜3個のアミノ酸からなるペプチドであって、ここでY0−X0−Z0が全体で9〜14アミノ酸長であるFAM83Bタンパク質の部分ペプチドもしくはそのX0ホモログとなる;
であることを特徴とする、[1]のペプチド。
[4]X0が、配列番号3〜58、60、65、66、69〜78および80〜85のいずれかで表されるアミノ酸配列からなり、Y0およびZ0が存在しない、[1]または[2]のペプチド。
[5]X0が、配列番号8、 27〜58、60、71および81のいずれかで表されるアミノ酸配列において、N末端から第2番目のアミノ酸がメチオニン、ロイシンもしくはイソロイシンに置換されており、および/または、C末端のアミノ酸がロイシン、バリンもしくはイソロイシンに置換されているアミノ酸配列からなり、Y0およびZ0が存在しない、[1]または[2]のペプチド。
[7]X0が、[4]〜[6]のX0であり、Y0またはZ0のいずれか一方が1個のアミノ酸であり、もう一方が存在しない、[1]または[2]のペプチド。
[9]Y0−X0−Z0で表されるペプチドが、配列番号4、20、29〜33、35、37、38、47、57、60、65〜68および71〜73のいずれかで表されるアミノ酸配列からなる、[1]〜[3]のペプチド。
[10]Y0−X0−Z0で表されるペプチドが、配列番号4、6、9、12、14、15、20、23、24、47、65〜68、74、75および77〜80のいずれかで表されるアミノ酸配列からなる、[1]〜[3]のペプチド。
[11]Y0−X0−Z0で表されるペプチドが、配列番号4、20、47および65〜68のいずれかで表されるアミノ酸配列からなる、[1]〜[3]のペプチド。
[12]複数のエピトープペプチドが連結されたポリエピトープペプチドであって、該エピトープペプチドとして、[1]〜[11]のペプチドを少なくとも1つ含む、前記ポリエピトープペプチド。
[14]心臓、脳、胎盤、肺、肝臓、骨格筋、腎臓、膵臓、脾臓、胸腺、前立腺、精巣、卵巣、小腸、大腸および血液からなる群から選択される1または2以上の生体試料に由来する細胞を含む細胞集団においてがん幹細胞を検出するための、[13]のがん幹細胞検出剤。
[15]FAM83B遺伝子の発現産物が、mRNAおよび/または内在性ポリペプチドである、[13]または[14]のがん幹細胞検出剤。
[16]FAM83B遺伝子の発現産物がmRNAであり、RT−PCR法により検出することを含む、[13]〜[15]のがん幹細胞検出剤。
[17]FAM83B遺伝子の発現産物が内在性ポリペプチドであり、該内在性ポリペプチドと特異的に反応するFAM83B検出剤により検出することを含む、[13]〜[15]のがん幹細胞検出剤。
[18]FAM83B検出剤が、抗体である、[17]のがん幹細胞検出剤。
[19]FAM83B検出剤が、FAM83B遺伝子の発現産物であるmRNAを検出するための前記遺伝子に相補的な塩基配列を有するプローブおよび/またはプライマーである、[13]〜[16]のがん幹細胞検出剤。
[21](i)がん治療薬の候補化合物を、対象に投与する前に、該対象におけるFAM83B遺伝子の発現産物の検出量Aを測定する工程、
(ii)前記候補化合物を前記対象細胞集団に投与した後に、該対象におけるFAM83B遺伝子の発現産物の検出量Bを測定する工程、および
(iii)前記検出量AとBとを比較し、該検出量AがBより有意に大きい場合に、前記候補化合物を、がん幹細胞を標的とすることを特徴とするがん治療薬候補であると判定する工程、
を含む、がん治療薬のスクリーニング方法。
[22][1]〜[11]のペプチドまたは[12]のポリエピトープペプチドの少なくとも1つをコードするポリヌクレオチド。
[23][22]のポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
[24][23]の発現ベクターを含む、遺伝子導入用組成物。
(a)[1]〜[11]のペプチドまたは[12]のポリエピトープペプチド、
(b)[22]のポリヌクレオチド、
(c)[23]の発現ベクター、
(d)FAM83Bタンパク質、FAM83Bタンパク質をコードするポリヌクレオチドまたは該ポリヌクレオチドを含む発現ベクター
のいずれかを有効成分として含む、医薬組成物。
[26][1]〜[11]のペプチド、および/または、[12]のポリエピトープペプチドを有効成分として含む、[25]の医薬組成物。
[27]アジュバントをさらに含む、[25]または[26]の医薬組成物。
[28]がんの予防および/または治療剤である、[25]〜[27]の医薬組成物。
[29]がんの予防および/または治療用ワクチンである、[25]〜[28]の医薬組成物。
(a)[1]〜[11]のペプチドまたは[12]のポリエピトープペプチド、
(b)[22]のポリヌクレオチド、
(c)[23]の発現ベクター、
(d)FAM83Bタンパク質、FAM83Bタンパク質をコードするポリヌクレオチドまたは該ポリヌクレオチドを含む発現ベクター
のいずれかを有効成分として含有する、細胞傷害性T細胞の誘導剤。
[31](A)[1]〜[11]のペプチドまたは[12]のポリエピトープペプチド、あるいは、
(B)前記(A)のペプチドおよび/またはポリエピトープペプチドの少なくとも1つをコードするポリヌクレオチドと、抗原提示能を有する細胞とを、in vitroで接触させることを含む、抗原提示細胞の製造方法。
(B)前記(A)のペプチドおよび/またはポリエピトープペプチドの少なくとも1つをコードするポリヌクレオチド
と、末梢血リンパ球とを、in vitroで接触させることを含む、細胞障害性T細胞の誘導方法。
[33][1]〜[11]のペプチドとHLAとを含む、HLAマルチマー。
[34][33]のHLAマルチマーを含む、診断薬。
[35][1]〜[11]のペプチドとHLAとの複合体を認識する、T細胞受容体様抗体。
[37][1]〜[11]のペプチドとHLAとの複合体を認識する、 キメラ抗原受容体。
[38][1]〜[11]のペプチドとHLAとの複合体を認識するT細胞受容体を含む、人工CTL。
[40](I)細胞のライセートから、抗MHC抗体を用いてMHCとナチュラルペプチドとの複合体を単離する工程、
(II)工程(I)で得られた複合体からナチュラルペプチドを単離する工程、および、
(III)工程(II)で得られたナチュラルペプチドを配列解析する工程を含む、ナチュラルペプチドを同定する方法。
本発明において「エピトープペプチド」とは、MHC(ヒトにおいてはHLA)と結合して、細胞表面に抗原提示され、かつ抗原性を有する(T細胞に認識され得る)ペプチドを意味する。エピトープペプチドには、MHCクラスIと結合して抗原提示され、CD8陽性T細胞に認識されるエピトープペプチドであるCTLエピトープペプチド、およびMHCクラスIIと結合して抗原提示され、CD4陽性T細胞に認識されるエピトープペプチドであるヘルパーエピトープペプチドが含まれる。
本発明は一側面において、実際に細胞表面に抗原提示されているナチュラルペプチドを単離/同定する方法に関する。
本発明において、「ナチュラルペプチド」は、実際に細胞表面に抗原提示されているペプチドのことをいう。また「ナチュラル抗原ペプチド」は、ナチュラルペプチドのうち抗原性が確認できたものをいう。このナチュラル抗原ペプチドをがん細胞から単離し、配列およびその由来を決定することにより、CTLを用いたがんの標的治療に有用な知見を得ることが可能である。
本方法に用いる細胞は、ナチュラルペプチドを提示する細胞、すなわちMHCを発現する細胞であればとくに限定されないが、好ましくは腫瘍細胞、より好ましくはがん組織由来の腫瘍細胞、さらに好ましくはがん幹細胞である。とくにがん幹細胞を用いた場合、実際にがん幹細胞に抗原提示されているナチュラル抗原ペプチドを同定できるため、確実にがん幹細胞を標的とするCTLを誘導可能な腫瘍抗原ペプチドを得ることが可能となり、非常に有用である。
適切な抗MHC抗体は、用いた細胞などにより変化し得、当業者であれば目的や実験条件に応じて最適なものを選択し得る。具体的には例えば、ヒトの細胞を用いた場合、抗MHC抗体としては抗HLA抗体を用いる。抗HLA抗体としては、これに限定するものではないが、例えば抗HLA−A02抗体、抗HLA−A24抗体などの、HLAクラスIに対する抗体が挙げられる。
以上の工程により、実際に細胞表面に抗原提示されているナチュラルペプチドを同定することができる。
本明細書において、「ヒトFAM83Bタンパク質」は、J Proteome Res. 2012;11:982-94やJ Clin Invest. 2012;122:3197-210で報告されている公知のタンパク質を意味し、具体的には配列番号2に記載のアミノ酸配列(Genbank Accession No: NP_001010872.1)で表されるタンパク質、およびそのホモログをいう。当該ホモログとしては、例えばスプライシングバリアント、個体差に基づくSNP等のバリアント等が挙げられる。具体的には、(1)配列番号2に記載のアミノ酸配列において、90%以上、好ましくは95%以上、更に好ましくは98%以上の相同性を有するアミノ酸配列からなるタンパク質、(2)配列番号2に記載のアミノ酸配列において、1又は複数、好ましくは1〜数個、更に好ましくは、1〜10個、1〜5個、1〜3個、1もしくは2個のアミノ酸が置換、欠失、付加または挿入されたアミノ酸配列からなるタンパク質が挙げられる。そのようなバリアントとして、配列番号2において第640番目のアミノ酸がスレオニン(T)に置換され、第907番目のアミノ酸配列がアスパラギン(N)に置換されたアミノ酸配列からなるGenbank Accession No.:BC112275のタンパク質等を例示することができる。本明細書において単に「FAM83Bタンパク質」といった場合は、別段の記載のない限り、ヒトFAM83Bタンパク質を意味する。
本発明のペプチドは、一態様において、ヒトFAM83Bタンパク質の部分ペプチドであって、MHC、特にHLAと結合するペプチド、好ましくはMHC、特にHLAにより抗原提示されるペプチド、さらに好ましくはMHC、特にHLAにより抗原提示されてCTLを誘導可能なペプチドを含む。HLAにはいくつかの型が存在するが、本発明のペプチドは、好ましくはHLAクラスIに結合可能であり、より好ましくはHLA−A02またはHLA−A24に結合可能であり、さらに好ましくはHLA−A02およびHLA−A24の両方に結合可能である。本発明のペプチドは、MHCに結合する前にプロセシングなどの処理を経てもよく、それらの処理の結果エピトープペプチドを生成するようなペプチドも本発明のペプチドに含まれる。したがって、本発明のペプチドは、エピトープペプチドのアミノ酸配列を含む配列であれば、アミノ酸長は特に限定されない。しかしながら、本発明のペプチドそのものがエピトープペプチドであることが好ましく、したがってアミノ酸長は約8〜14アミノ酸程度が好ましく、約8〜11アミノ酸程度がより好ましく、約9〜約11アミノ酸程度が特に好ましい。
中でも特に好ましいのは、配列番号8、27〜58、60、71および81のいずれかで表されるアミノ酸配列からなるペプチド、該ペプチドにおいてN末端から第2番目のアミノ酸がロイシン、イソロイシンもしくはメチオニンに置換されており、および/または、C末端のアミノ酸がバリン、ロイシンもしくはイソロイシンに置換されているペプチド、配列番号3〜26、53、58、67および78のいずれかで表されるアミノ酸配列からなるペプチドあるいは該ペプチドにおいてN末端から第2番目のアミノ酸がチロシン、フェニルアラニン、メチオニンもしくはトリプトファンに置換されており、および/または、C末端のアミノ酸がロイシン、イソロイシンもしくはフェニルアラニンに置換されているペプチドにおいて、さらにN末端および/またはC末端に1個から数個のアミノ酸が付加されたペプチドである。
Y0−X0−Z0
と表すことが可能である。ここで、X0、Y0およびZ0はいずれもペプチドである。
かかる態様において、X0は以下の(1)〜(4):
(1)FAM83Bタンパク質の部分ペプチドであって、該タンパク質のアミノ酸配列中の連続する8〜14アミノ酸、好ましくは8〜11アミノ酸からなり、N末端から第2番目のアミノ酸がロイシン、イソロイシンもしくはメチオニンであり、および/または、C末端のアミノ酸がバリン、ロイシンもしくはイソロイシンであるペプチド;
(2)(1)の部分ペプチドにおいて、N末端から第2番目のアミノ酸がロイシン、イソロイシンもしくはメチオニンに置換されており、および/または、C末端のアミノ酸がバリン、ロイシンもしくはイソロイシンに置換されているペプチド;
(3)FAM83Bタンパク質の部分ペプチドであって、該タンパク質のアミノ酸配列中の連続する8〜14アミノ酸、好ましくは8〜11アミノ酸からなり、N末端から第2番目のアミノ酸がチロシン、フェニルアラニン、メチオニンもしくはトリプトファンであり、および/または、C末端のアミノ酸がロイシン、イソロイシンもしくはフェニルアラニンであるペプチド;または
(4)(3)の部分ペプチドにおいて、N末端から第2番目のアミノ酸がチロシン、フェニルアラニン、メチオニンもしくはトリプトファンに置換されており、および/または、C末端のアミノ酸がロイシン、イソロイシンもしくはフェニルアラニンに置換されているペプチド;
から選択されるペプチドである。ここで(2)は(1)の置換ホモログであり、(4)は(3)の置換ホモログであるため、X0が(2)または(4)のペプチドであるY0−X0−Z0を特に、「X0ホモログ」という。
ここでY0および/またはZ0を構成するアミノ酸には特に限定が無く、タンパク質を構成する天然アミノ酸20種類の任意のものが挙げられるが、好ましくは、生体内に存在する酵素によって切断され得るアミノ酸を挙げることができる。また、FAM83Bタンパク質のアミノ酸配列において前記部分ペプチドのN末端側および/またはC末端側のアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列であることが望ましい。
本発明のペプチドの合成については、通常のペプチド化学において用いられる既知の方法に準じて行うことができる。かかる既知の方法としては文献(Peptide Synthesis,Interscience,New York,1966; The Proteins,Vol 2,Academic Press Inc.,New York,1976;ペプチド合成,丸善(株),1975;ペプチド合成の基礎と実験、丸善(株),1985;医薬品の開発 続 第14巻・ペプチド合成,広川書店,1991、これらの文献は引用により本願の一部を構成する)などに記載されている方法が挙げられる。
本発明のポリエピトープペプチドは、具体的には、
(i)本発明のペプチド(エピトープペプチド)および任意の本発明のペプチド以外の1または2以上のCTLエピトープペプチドを直接、または適宜スペーサーを介して連結したペプチド、
(ii)本発明のペプチドおよび任意の1または2以上のヘルパーエピトープペプチドを直接、または適宜スペーサーを介して連結したペプチド、若しくは、
(iii)上記(i)に記載のポリエピトープペプチドに、さらに1または2以上ヘルパーエピトープペプチドを、直接、または適宜スペーサーを介して連結したペプチド
であって、抗原提示細胞内にてプロセッシングを受け、生じたエピトープペプチドが抗原提示細胞に提示され、CTL誘導活性を導くペプチドとして定義され得る。
スペーサーとしては、抗原提示細胞内におけるプロセッシングに悪影響を及ぼさないものであれば特に限定されず、好ましくはそれぞれのエピトープペプチドとペプチド結合で連結されるリンカーであり、例えばいくつかのアミノ酸が連結したペプチドリンカーや、両端にアミノ基およびカルボキシル基を有するリンカーなどが挙げられる。具体的にはグリシンリンカーやPEG(ポリエチレングリコール)リンカーなどが挙げられ、グリシンリンカーとしてはポリグリシン(例えばグリシン6個からなるペプチド;Cancer Sci, vol.103, p150-153)が挙げられ、PEGリンカーとしては、PEGの両端にアミノ基およびカルボキシ基を有する化合物由来のリンカーが挙げられる(例えば、H2N−(CH2)2−(OCH2CH2)3−COOH;Angew. Chem. Int. Ed. 2008, 47, 7551-7556)。
ここで、本発明のペプチドに連結させるエピトープペプチドがヘルパーエピトープペプチドの場合、用いられるヘルパーエピトープペプチドとしては、例えばB型肝炎ウイルス由来のHBVc128−140や破傷風毒素由来のTT947−967などが挙げられる。また当該ヘルパーエピトープペプチドの長さとしては、13〜30アミノ酸程度、好ましくは13〜17アミノ酸程度を挙げることができる。
すなわち、当該ポリヌクレオチドを周知の発現ベクターに挿入し、得られた組換え発現ベクターで宿主細胞を形質転換して作製された形質転換体を培養し、培養物より目的の複数のエピトープを連結させたポリエピトープペプチドを回収することにより製造することができる。これらの手法は、前述のように文献(Molecular Cloning, T.Maniatis et al., CSH Laboratory(1983)、DNA Cloning, DM.Glover, IRL PRESS(1985))に記載の方法などに準じて行うことができる。
本発明のペプチド(ポリエピトープペプチドを含む)は、本明細書に記載のとおり、がんの予防および/または治療などに有用であり、医薬組成物の有効成分とすることができる。また、本発明のペプチドは、がんの予防および/または治療のためのものであってもよい。さらに、本発明は、がんの予防および/または治療のための医薬の製造への本発明のペプチドの使用にも関する。
本発明のポリヌクレオチドは、前記本発明のペプチドを少なくとも1つコードするポリヌクレオチドを含む。本発明のポリヌクレオチドは、cDNAやmRNA、cRNA、または合成DNAのいずれであってもよい。また1本鎖、2本鎖のいずれの形態であってもよい。具体的には、これに限定するものではないが例えば配列番号3〜85に記載のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド、および配列番号3〜85から選択される任意の2以上のペプチド、または配列番号3〜85から選択されるペプチドおよびヘルパーエピトープを連結させたポリエピトープペプチドを、それぞれ発現可能なようにコードするヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドなどが挙げられる。
本発明のポリヌクレオチドは、本明細書に記載のとおり、がんの予防および/または治療などに有用であり、医薬組成物の有効成分とすることができる。また、本発明のポリヌクレオチドは、がんの予防および/または治療のためのものであってもよい。さらに、本発明は、がんの予防および/または治療のための医薬の製造への本発明のポリヌクレオチドの使用にも関する。
形質転換に用いられる宿主としては、本発明のポリペプチドが有する機能を損なわない限りいかなる細胞を用いてもよく、例えば大腸菌、酵母、昆虫細胞、動物細胞などが挙げられる。大腸菌としては、E.coli K−12系統のHB101株、C600株、JM109株、DH5α株、AD494(DE3)株などが挙げられる。また酵母としては、Saccharomyces cerevisiaeなどが挙げられる。動物細胞としては、L929細胞、BALB/c3T3細胞、C127細胞、CHO細胞、COS細胞、Vero細胞、HeLa細胞、293−EBNA細胞などが挙げられる。昆虫細胞としてはsf9などが挙げられる。
宿主細胞への発現ベクターの導入方法としては、前記宿主細胞に適合した通常の導入方法を用いればよい。具体的にはリン酸カルシウム法、DEAE−デキストラン法、エレクトロポレーション法、遺伝子導入用リピッド(Lipofectamine、Lipofectin; Gibco-BRL社)を用いる方法などが挙げられる。導入後、選択マーカーを含む通常の培地にて培養することにより、前記発現ベクターが宿主細胞中に導入された形質転換細胞を選択することができる。
本発明のペプチドをコードするポリヌクレオチドは、DNAの形態であってもRNAの形態であっても良い。これら本発明のポリヌクレオチドは、本発明のペプチドのアミノ酸配列情報およびそれによりコードされるDNAの配列情報に基づき、当該技術分野において知られた通常の方法を用いて容易に製造することができる。具体的には、通常のDNA合成やPCRによる増幅などによって、製造することができる。
本発明のペプチドをコードするポリヌクレオチドは、前記エピトープペプチドをコードするポリヌクレオチドを包含する。
本発明のペプチドはCTL誘導活性を有し、腫瘍抗原ペプチドとして、CTL誘導剤となり得る。また上述のとおり、本発明者らによりFAM83Bタンパク質が腫瘍抗原であること、FAM83Bタンパク質由来のペプチドが腫瘍細胞表面にHLAクラスI抗原と結合して複合体を形成し、細胞表面に運ばれて抗原提示されていることが初めて見出された。したがって、FAM83Bタンパク質そのものもまたCTL誘導剤となり得る。
すなわち、HLA−A02抗原またはHLA−A24抗原が陽性のヒトから末梢血リンパ球を単離し、in vitroで本発明のペプチドおよび/またはFAM83Bタンパク質を添加して刺激することにより、該ペプチドをパルスしたHLA−A02抗原陽性細胞、またはHLA−A24抗原陽性細胞を特異的に認識するCTLを誘導することができる(J.Immunol.,154,p2257,1995)。ここでCTLの誘導の有無は、例えば、抗原ペプチド提示細胞に反応してCTLが産生する種々のサイトカイン(例えばIFN−γ)の量を、例えばELISA法などによって測定することにより、確認することができる。また51Crで標識した抗原ペプチド提示細胞に対するCTLの傷害性を測定する方法(51Crリリースアッセイ、Int.J.Cancer,58:p317,1994)によっても確認することができる。
また、Int. J. Cancer, 39, 390-396, 1987、N. Eng. J. Med, 333, 1038-1044, 1995等に記載の方法により、CTLクローンを樹立することもできる。
本発明のペプチドおよび/またはFAM83Bタンパク質を有効成分として含有するCTL誘導剤をがん患者に投与すると、抗原提示細胞のHLA−A02抗原またはHLA−A24抗原に本発明のペプチドおよび/またはFAM83Bタンパク質由来のエピトープペプチドが提示され、HLA−A02抗原またはHLA−A24抗原と提示されたペプチドとの結合複合体特異的CTLが増殖してがん細胞を破壊することができ、その結果、がんを予防および/または治療することができる。したがって、本発明のペプチドおよび/またはFAM83Bタンパク質を有効成分とするCTLの誘導剤は、好ましくは、HLA−A02抗原またはHLA−A24抗原陽性の対象であって、FAM83B陽性のがんに罹患している対象に対して使用することができる。FAM83B陽性のがんとしては、例えば大腸癌、肺癌、乳癌、口腔癌、子宮頚部癌、甲状腺癌、精巣腫瘍、卵巣癌等のがん(腫瘍)などが挙げられ、本発明のCTL誘導剤は、これらのがんの予防および/または治療のために使用することができる。
また、本発明のペプチドおよび/またはFAM83Bタンパク質を有効成分とするCTL誘導剤/医薬組成物の剤形としては、特に限定はないが、油乳濁液(エマルション製剤)、高分子ナノ粒子、リポソーム製剤、直径数μmのビーズに結合させた粒子状の製剤、リピッドを結合させた製剤、マイクロスフェア製剤、マイクロカプセル製剤などが挙げられる。
本発明のペプチドを実際に医薬として作用させる手法としては、当該ペプチドを直接体内に導入するin vivo法の他に、ヒトからある種の細胞を採集し体外で本発明のペプチドを作用させ、その細胞を体内に戻すex vivo法があり(日経サイエンス,1994年4月号,20−45頁、月刊薬事,36(1),23−48(1994)、実験医学増刊,12(15),(1994)、およびこれらの引用文献等、これらの文献は引用により本願の一部を構成する)、当業者であれば、かかる手法に適切な細胞、投与方法、投与形態および投与量を選択することができる。
本発明のポリヌクレオチドおよび/またはFAM83Bタンパク質をコードするポリヌクレオチドを発現させた細胞は、本発明のペプチドおよび/または他のFAM83Bタンパク質由来のエピトープペプチドを抗原として提示する細胞となるため、T細胞受容体を介してT細胞に認識されるという特徴を有する。したがって、本発明のポリヌクレオチドおよび/またはFAM83Bタンパク質をコードするポリヌクレオチドもまたCTLの誘導剤となり得る。誘導されたCTLは、本発明のペプチドおよび/またはFAM83Bタンパク質によって誘導されたCTLと同様に、細胞傷害作用やリンフォカインの産生を介して抗腫瘍作用、好ましくは抗がん作用を発揮することができる。したがって本発明のポリヌクレオチドおよび/またはFAM83Bタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、がんの治療または予防のための医薬や医薬組成物の有効成分とすることができる。本発明のポリヌクレオチドおよび/またはFAM83Bタンパク質をコードするポリヌクレオチドを有効成分として含有するCTLの誘導剤は、例えば、本発明のポリヌクレオチドおよび/またはFAM83Bタンパク質をコードするポリヌクレオチドをがん患者に投与し発現させることで、がんを治療および/または予防し得るものである。
本発明のポリヌクレオチドおよび/またはFAM83Bタンパク質をコードするポリヌクレオチドを投与し細胞内に導入する方法としては、ウイルスベクターによる方法およびその他の方法(日経サイエンス,1994年4月号,20−45頁、月刊薬事,36(1),23−48(1994)、実験医学増刊,12(15),(1994)、およびこれらの引用文献等、これらの文献は引用により本願の一部を構成する)のいずれの方法も適用することができる。したがって、本発明の医薬組成物の一態様において、本発明のポリヌクレオチドおよび/またはFAM83Bタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含むベクターが有効成分として含有される。
その他の方法としては、発現プラスミドを直接筋肉内に投与する方法(DNAワクチン法)、リポソーム法、リポフェクチン法、マイクロインジェクション法、リン酸カルシウム法、エレクトロポレーション法等が挙げられ、特にDNAワクチン法、リポソーム法が好ましい。
本発明のポリヌクレオチドおよび/またはFAM83Bタンパク質をコードするポリヌクレオチドをin vivo法により投与する場合は、治療目的の疾患、症状等に応じた適当な投与経路および投与形態を適宜選択して投与し得る。例えば、静脈、動脈、皮下、皮内、筋肉内等に注射可能な形態で投与することができる。in vivo法により投与する場合は、例えば、液剤等の製剤形態をとりうるが、一般的には有効成分である本発明のポリヌクレオチドを含有する注射剤等とされ、必要に応じて、医薬上許容されるキャリアー(担体)を加えてもよい。また、本発明のポリヌクレオチドを含有するリポソームまたは膜融合リポソーム(センダイウイルス(HVJ)−リポソーム等)においては、懸濁剤、凍結剤、遠心分離濃縮凍結剤等のリポソーム製剤の形態とすることができる。
当業者であれば、好適な細胞、ベクター、投与方法、投与形態および投与量を適宜選択することが可能である。
したがって、本発明のペプチドをコードするポリヌクレオチドを1種または2種以上連結させることにより、また場合によっては他のペプチドをコードするポリヌクレオチドも連結させることにより作製されたポリヌクレオチドを、適当な発現ベクターに組み込むことにより、CTLの誘導剤の有効成分とすることができる。このようなCTLの誘導剤も、前記と同様の投与方法および投与形態をとることができる。
前記した本発明のペプチドおよびポリヌクレオチドは、例えば、以下のようにin vitroで利用することができる。すなわち本発明のペプチドおよびポリヌクレオチドのいずれかと抗原提示能を有する細胞とをin vitroで接触させることにより、抗原提示細胞を作製することができる。したがって本発明の一態様において、細胞表面にHLA−A02抗原またはHLA−A24抗原と本発明のペプチドとの複合体を提示させた抗原提示細胞、およびその製造方法を提供するものである。上述のとおり、本発明のペプチドおよびポリヌクレオチドはがんを予防および/または治療するために利用することが可能である。したがって本態様の抗原提示細胞またはその製造方法は、好ましくはがん患者由来の単離された細胞を利用するものである。具体的には、がん患者由来の単離された抗原提示能を有する細胞と、本発明のペプチドまたはポリヌクレオチドのいずれかをin vitroで接触させることにより、当該細胞の細胞表面にHLA−A02抗原またはHLA−A24抗原と本発明のペプチドとの複合体を提示させた抗原提示細胞を製造する。
また、前記抗原提示能を有する細胞から本発明の抗原提示細胞を調製するために添加される物質としては、本発明のペプチドまたはポリヌクレオチドのいずれであってもよい。
本発明の抗原提示細胞は、例えば、がん患者から抗原提示能を有する細胞を単離し、該細胞に本発明のペプチドをin vitroでパルスして、HLA−A02抗原またはHLA−A24抗原と本発明のペプチドとの複合体を提示させることにより得られる(Cancer Immunol.Immunother.,46:82,1998、J. Immunol.,158,p1796,1997、Cancer Res.,59,p1184,1999)。樹状細胞を用いる場合は、例えば、がん患者の末梢血からフィコール法によりリンパ球を分離し、その後非付着細胞を除き、付着細胞をGM−CSFおよびIL−4存在下で培養して樹状細胞を誘導し、当該樹状細胞を本発明のペプチドと共に培養してパルスすることなどにより、本発明の抗原提示細胞を調製することができる。
本発明のペプチドおよびポリヌクレオチドは、例えば以下のようにin vitroで利用することができる。すなわち本発明のペプチドおよびポリヌクレオチドのいずれかと末梢血リンパ球とをin vitroで接触させることにより、CTLを誘導することができる。したがって本発明の一態様において、本発明のペプチドを抗原提示する細胞を特異的に傷害するCTLおよびその誘導方法を提供するものである。上述のとおり、本発明のペプチドおよびポリヌクレオチドはがんを予防および/または治療するために利用することが可能である。したがって本態様のCTLおよびその誘導方法には、好ましくは癌患者由来の末梢血リンパ球を利用するものである。具体的には、がん患者由来の末梢血リンパ球と、本発明のペプチドまたはポリヌクレオチドのいずれかをin vitroで接触させることにより、本発明のペプチドを抗原提示する細胞を特異的に傷害するCTLを誘導する。
本発明のペプチド、特に配列番号3〜85に記載のアミノ酸配列からなるペプチドは、腫瘍特異的CTLに認識されるため、腫瘍特異的CTL検出剤の成分として有用である。したがって、本発明はまた、本発明のペプチドを含む、腫瘍特異的CTL検出剤に関する。一態様において、本発明の腫瘍特異的CTL検出剤は、本発明のペプチドとHLA−A02またはHLA−A24とを含有するHLAマルチマー(モノマー、ダイマー、テトラマー、ペンタマーおよびデキストラマー)を含む。
まずタンパク質を発現可能な大腸菌や哺乳動物細胞に、HLA−A24あるいはHLA−A02のα鎖発現ベクターおよびβ2ミクログロブリン発現ベクターを導入し発現させる。ここでは大腸菌(例えばBL21)を用いることが好ましい。得られた単量体HLA−A24あるいはHLA−A02複合体と本発明のペプチドとを混合し、可溶性のHLA−ペプチド複合体を形成させる。次にHLA−ペプチド複合体におけるHLA−A02あるいはHLA−A24のα鎖のC末端部位の配列をBirA酵素によりビオチン化する。このビオチン化されたHLA−ペプチド複合体と蛍光標識されたアビジンとを4:1のモル比で混合することにより、HLAテトラマーを調製することができる。なお、前記各ステップにおいて、ゲルろ過等によるタンパク精製を行うことが好ましい。
上述のとおり、本発明者らはFAM83Bががん幹細胞において特異的に高発現していることを初めて見出した。すなわち本発明者らにより、FAM83Bは、がん幹細胞を含まないがん細胞や、通常の体細胞においては発現が見られないが、がん幹細胞においては高発現している遺伝子であることが初めて明らかとなった。かかる知見からFAM83Bは、がん細胞、特にがん幹細胞を識別するためのマーカーとして利用可能であることが見出された。したがって本発明は一側面において、FAM83Bの発現産物を検出するためのFAM83B検出剤を含む、がん幹細胞検出剤に関する。
本発明において「遺伝子の発現」とは、該遺伝子の転写を起点とする一連の生体反応をいい、「発現産物」とは、例えばmRNAや内在性ポリペプチドなど、この一連の生体反応によって生成される分子をいう。遺伝子の発現産物である内在性ポリペプチドは、好ましくは当該遺伝子の発現により最終的に産生されるタンパク質である。
本発明において「FAM83B検出剤」とは、FAM83B遺伝子またはその発現産物を、定性的および/または定量的に検出するための剤を意味する。
検査対象である生物個体は、腫瘍を有し得る生物個体であればいかなる生物個体であってもよいが、好ましくはヒトおよび非ヒト哺乳動物(例えば、マウス、ラット、モルモット、ハムスターなどの齧歯類、チンパンジーなどの霊長類、ウシ、ヤギ、ヒツジなどの偶蹄目、ウマなどの奇蹄目、ウサギ、イヌ、ネコなど)の個体であり、より好ましくはヒトの個体である。
検出対象の細胞集団は、上記検査対象から得られた任意の生体試料由来の細胞集団に対して用いることが可能であるが、好ましくはヒトから得られた生体試料に由来する細胞集団であり、より好ましくは組織の細胞においてFAM83Bがほとんど発現していないことが確認されている、心臓、脳、胎盤、肺、肝臓、骨格筋、腎臓、膵臓、脾臓、胸腺、前立腺、精巣、卵巣、小腸、大腸および血液からなる群から選択される1または2以上の生体試料に由来する細胞を含む細胞集団である。
上述のとおり本発明のペプチドは、がん細胞、特にがん幹細胞によりCTLエピトープペプチドとして提示される。この際、MHCと複合体を形成して細胞表面に提示されるため、当該複合体を認識する抗体を用いることで、本発明のペプチドを腫瘍マーカーとして利用できる。このような抗体としては、例えば、本発明のペプチドとHLAとの複合体、好ましくはHLA−A24もしくはHLA−A02との複合体を認識するTCR(T細胞受容体)様抗体が挙げられる。したがって、本発明はまた、本発明のペプチドとMHCとの複合体を認識するT細胞受容体様抗体にも関する。
本発明において「TCR様抗体」は、断片化された抗原由来のペプチドと主要組織適合性抗原複合体(MHC)分子との複合体(pMHC)に対してTCR様の結合力(抗原認識能)を有する分子である。例えば、Eur J Immunol. 2004;34:2919-29等で報告されているように、腫瘍抗原由来のペプチドとMHCとの複合体を認識するTCR様抗体は、CTLが標的とし得る腫瘍抗原ペプチドを提示しているがん細胞、がん細胞を貪食してMHCクラスI上に腫瘍抗原ペプチドを提示している樹状細胞などを認識することができる。
前記TCR様抗体は、Eur J Immunol. 2004;34:2919-29等で記載されている方法で作製することができる。例えば、MHCとペプチド複合体をマウス等の動物に免疫することにより複合体特異的な抗体を取得できる。また、ファージディスプレイ法を利用して複合体特異的抗体を取得することも可能である。
また上述のとおり本発明のペプチドは、がん細胞、特にがん幹細胞によりCTLエピトープペプチドとして提示されるため、本発明のペプチドとHLAとの複合体、好ましくはHLA−A24もしくはHLA−A02との複合体を認識するTCR様抗体は、対象におけるがんの予防および/または治療剤としても有用である。したがって、本発明はまた、本発明のTCR様抗体を含む、がんの予防および/または治療剤にも関する。
本発明において、「キメラ抗原受容体」は、がん細胞の細胞表面に存在する分子を認識する抗体の抗体可変領域の軽鎖と重鎖を直列に結合させた単鎖抗体(scFv)をN末端側に、T細胞受容体(TCR)/CD3複合体を構成する分子のうちCD3ζ鎖をC末端側に持つように設計されたキメラタンパク分子である。このキメラ抗原受容体は、scFv領域で特定の抗原を認識すると、CD3ζ鎖を介してT細胞の活性化が生じる。T細胞の活性化を増強するために、scFvとζ鎖の間に1または2以上の共刺激分子(例えばCD28、4−1BB、ICOSなど)を組み込んでもよい。本発明においては、scFvとして、本態様のTCR様抗体(TCR様抗体から設計され得る抗体分子またはその断片を含む)を用いてCARを作製することができる。腫瘍抗原由来のペプチドとMHCとの複合体を認識するCARは、CTLが標的とし得る腫瘍抗原ペプチドを提示しているがん細胞、がん細胞を貪食してMHCクラスI上に腫瘍抗原ペプチドを提示している樹状細胞などを認識することができるため、前記CARを導入した遺伝子改変T細胞は、人工CTLと同様に、前記腫瘍抗原に特異的ながんの予防および/または治療剤として有用である。したがって、本発明はまた、本発明の腫瘍抗原由来のペプチドとMHCとの複合体を認識するCARを導入した遺伝子改変T細胞または人工CTLを含む、がんの予防および/または治療剤にも関する。
本発明は、前述した本発明のCTL検出剤、あるいはがん幹細胞検出剤または腫瘍検出剤を利用した腫瘍の検出方法(検査方法、診断方法)を提供するものである。
本発明のCTL検出剤を用いる本発明の検出方法(診断方法)は、典型的には、被験者の血液を採取するか、若しくは腫瘍が疑われる被験組織の一部をバイオプシ等で採取し、そこに含まれるFAM83B由来の腫瘍抗原ペプチドとHLA抗原との複合体を認識するCTLの量を、本発明のCTL検出剤によって検出・測定することにより、大腸癌、肺癌、乳癌、口腔癌、子宮頚部癌、甲状腺癌、精巣腫瘍、卵巣癌等のFAM83B陽性のがん(腫瘍)の罹患の有無またはその程度を検出、検査または診断するものである。
本発明の腫瘍検出剤を用いる本発明の検出方法(検査方法、診断方法)は、典型的には、被験者の血液を採取するか、若しくは腫瘍が疑われる被験組織の一部をバイオプシ等で採取し、そこに含まれるFAM83B由来の腫瘍抗原ペプチドとHLA抗原との複合体を提示する細胞の量を、本発明の腫瘍検出剤によって検出・測定することにより、大腸癌、肺癌、乳癌、口腔癌、子宮頚部癌、甲状腺癌、精巣腫瘍、卵巣癌等のFAM83B陽性のがん(腫瘍)の罹患の有無またはその程度を検出、検査または診断するものである。
(a)被験者から得られた生体試料と本発明のCTL検出剤とを接触させる工程、
(b)該生体試料中のFAM83B由来の腫瘍抗原ペプチドとHLA抗原との複合体を認識するCTLの量を、上記CTL検出剤が結合した細胞の量を指標として測定する工程、
(c)(b)の結果をもとに、がんの罹患を判断する工程。
本発明のCTL検出剤を用いる本発明の診断方法の特定の態様は、上記(a)、(b)および(c)の工程を含む。
(d)被験者から得られた生体試料と本発明のがん幹細胞検出剤とを接触させる工程、
(e)該生体試料中のFAM83B発現産物の量を測定する工程、
(f)(e)の結果をもとに、がんの罹患を判断する工程。
本発明のがん幹細胞検出剤を用いる本発明の診断方法の特定の態様は、上記(d)、(e)および(f)の工程を含む。
本発明のがん幹細胞検出剤を用いるがん幹細胞を検出する方法の態様は、上記(d)、(e)の工程および(f)に代えて下記(f’)の工程を含む:
(f’)(e)の結果をもとに、生体試料中のがん幹細胞の存在または不存在を決定する工程。
ここで用いられる生体試料としては、被験者の生体組織(がん細胞の存在が疑われる組織およびその周辺組織、または血液など)から調製される試料を挙げることができる。具体的には、該組織から採取された組織細胞を含む試料などを挙げることができる。
(g)被験者から得られた生体試料と本発明の腫瘍検出剤とを接触させる工程、
(h)該生体試料中のFAM83B由来の腫瘍抗原ペプチドとHLA抗原との複合体を提示する細胞の量を、上記腫瘍検出剤が結合した細胞の量を指標として測定する工程、
(i)(h)の結果をもとに、がんの罹患を判断する工程。
本発明の腫瘍検出剤を用いる本発明の診断方法の特定の態様は、上記(g)、(h)および(i)の工程を含む。
ここで用いられる生体試料としては、被験者の生体組織(がん細胞の存在が疑われる組織およびその周辺組織、または血液など)から調製される試料を挙げることができる。具体的には、該組織から採取された組織細胞を含む試料などを挙げることができる。
ここで被験者の被験組織と正常な対応組織との前記レベルの比較は、被験者の生体試料と正常者の生体試料を対象とした測定を並行して行うことで実施できる。並行して行わない場合は、複数(少なくとも2つ、好ましくは3以上、より好ましくは5以上)の正常な組織を用いて均一な測定条件で測定して得られた本発明のペプチド特異的CTLの量または本発明のペプチドを提示する細胞の量の平均値または統計的中間値を、正常者の値すなわち基準値として、比較に用いることができる。
また、本発明のペプチドまたはポリヌクレオチドを投与されている被験者において、本発明のペプチド特異的CTLの量を測定することにより、実際にCTLが誘導されているか否かを判定することも可能である。例えば、該被験者の組織における本発明のペプチド特異的CTLの量が、正常者のそれらのレベルと比較して例えば2倍以上、好ましくは3倍以上多いことを指標として、本発明のペプチドまたはポリヌクレオチドによる治療が有効であると判定することができる。本発明のペプチドまたはポリヌクレオチドは、主にワクチンとして作用し、CTLを誘導することにより抗腫瘍作用を発揮すると考えられることから、CTLの誘導は、投与した本発明のペプチドまたはポリヌクレオチドがワクチンとして作用しているか否かを確認するためのいわゆるPOM(Proof of Mechanism)マーカーとして用いることができる。したがって本発明のCTL検出剤は、POMマーカーとしてのCTLを検出することにより、投与対象において投与したペプチドまたはポリヌクレオチドがワクチンとして作用しているか否かを確認するための診断薬として用いることができる。
本発明はまた、対象におけるがんを予防および/または治療する方法であって、本発明のペプチド、ポリヌクレオチド、CTL、抗原提示細胞、TCR様抗体、人工CTL、遺伝子改変T細胞からなる群から選択される有効成分の有効量を、それを必要とする対象に投与する工程を含む方法にも関する。
本発明における「対象」は、がんに罹患し得る生物個体であればいかなる生物個体であってもよいが、好ましくはヒトおよび非ヒト哺乳動物(例えば、マウス、ラット、モルモット、ハムスターなどの齧歯類、チンパンジーなどの霊長類、ウシ、ヤギ、ヒツジなどの偶蹄目、ウマなどの奇蹄目、ウサギ、イヌ、ネコなど)の個体であり、より好ましくはヒトの個体である。本発明において、対象は健常であっても、何らかの疾患に罹患していてもよいものとするが、がんの予防および/または治療が企図される場合には、典型的にはがんに罹患しているか、罹患するリスクを有する対象を意味する。本発明の一態様において、対象はHLA−A02陽性またはHLA−A24陽性である。本発明の一態様において、対象はFAM83B陽性のがんに罹患しているか、罹患するリスクを有する。本発明の一態様において、対象はHLA−A02陽性またはHLA−A24陽性であり、かつ、FAM83B陽性のがんに罹患しているか、罹患するリスクを有する。
本発明のがん幹細胞検出剤を用いる態様において、検出対象におけるFAM83B発現産物の発現量は、検出対象中のがん幹細胞の量と相関していると考えられる。したがって、検出対象に対してがん治療薬の候補化合物を投与する前後におけるFAM83B発現産物の発現量を比較することで、投与した候補化合物ががん幹細胞を標的とするがん治療薬として有用であるか否かを判定することができる。
(I)がん治療薬の候補化合物を、対象に投与する前に、該対象におけるFAM83B遺伝子の発現産物の検出量Aを測定する工程、
(II)前記候補化合物を前記対象細胞集団に投与した後に、該対象におけるFAM83B遺伝子の発現産物の検出量Bを測定する工程、および
(III)前記検出量AとBとを比較し、該検出量AがBより有意に大きい場合に、前記候補化合物を、がん幹細胞を標的とすることを特徴とするがん治療薬候補であると判定する工程。
本発明のスクリーニング方法の特定の態様は、上記工程(I)〜(III)を含む。ここで工程(I)および(II)の検出量を測定する工程は、それぞれ上記検出(検査、診断)方法における工程(d)および(e)を含む。
以下、実施例により本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されない。
a)試薬の調製
培地として5%のウシ胎仔血清(FCS(HyClone Laboratories社))補充DMEM(Sigma-Alldrich社)培地を調製し、37℃に温めておいた。ベラパミル(Sigma-Aldrich社)は50mMに調整し、5%FCS補充DMEM培地で、5mMに希釈した。ヘキスト33342(Lonza社)は5%FCS補充DMEM培地で250μg/mLに調整した。DNase I(Qiagen社)はDDWで1mg/mLに調整し、0.2μmのフィルターでろ過滅菌した。
ヒト大腸がん細胞株(SW480(ATCC))を4mLの5%FCS補充DMEM培地で懸濁し、細胞数を数えた。さらに5%FCS補充DMEM培地を加えて細胞濃度を10×106個/mLに調整し、検体を得た。検体の一部を用いて分注し、主検体にはベラパミルを添加せず(ベラパミル(−)サンプル)、副検体にはベラパミルを最終濃度75μMになるように添加した(ベラパミル(+)検体)。その後、ベラパミル(+)検体およびベラパミル(−)検体にヘキスト33342の最終濃度が5.0μMとなるようにヘキスト33342溶液を添加した。
両検体を37℃で90分間振盪培養後、氷上にて冷却した。1500rpm、4℃で5分間遠心分離し、上清を取り除いた。5%FCS補充1×PBSで懸濁して、氷冷しておいたFACSチューブに移した。再び1500rpm、4℃で5分間遠心分離して上清を取り除き、5%FCS補充1×PBSで懸濁した。同様の洗浄を1回繰り返した後、2mMのEDTA入り2%FCS補充1×PBS2mLで懸濁した。DNase I液を2μL加え、混和後、FACS用フィルター(ベクトン・ディッキンソン(BD)社)にて細胞集塊を除去した。1mg/mLのプロピジウム・アイオダイド(PI)(Sigma-Aldrich社)を2μL添加後、フローサイトメーターとしてBD FACS Aria II special edition(登録商標)(BD社)を用い、流動速度1000〜2000個/秒で解析した。
FACSの操作は取扱説明書に従って行った。
先ず、ベラパミル(−)検体の細胞を解析し、主体となる細胞群(main population(MP))と比較して、発光強度の低い細胞群(side population(SP))細胞を検出した(図1)。SP細胞がABCトランスポーター特異的にヘキスト33342色素低染色性であることを確認するため、ベラパミル(+)検体を同じ条件で解析し、SP細胞が消失することを確認した(図1)。
SP細胞を単離し、細胞を4℃、1500rpmで15分間遠心分離し、上清を取り除いた後、100〜200μLの1×PBSで懸濁した。
SW480由来SP細胞を前記c)にて検出し、そのSPおよびMP細胞画分をそれぞれ96ウェルプレートに1細胞/1ウェルになるようにシングルセルソーティングを行った(図2−1)。各ウェルには1%ペニシリン・ストレプトマイシン添加10%FCS補充DMEM培地を予め入れておいた。
2〜3週間培養後、各ウェルにおいて増殖した細胞株をそれぞれ、SW480−SPクローン細胞株、SW480−MPクローン細胞株とした。「SW480−SP−X」または「SW480−MP−Y」のXおよびYはそれぞれクローン番号とする。
共焦点顕微鏡でその形態を観察したところ、MPクローン細胞株は主に単層で増殖し、各細胞は紡錘形を示した。一方で、SPクローン細胞株は重層化傾向を示し、各細胞は円形〜類円形を示した。得られた代表的なSPクローンおよびMPクローンの顕微鏡画像を図2−2に示す。
実験例1で得られたSW480−SPおよびSW480−MPクローン細胞株それぞれのin vivoにおける造腫瘍能を確認するために、SPクローンおよびMPクローンそれぞれの代表的な3クローンを用いて、NOD/SCID免疫不全マウス(オリエンタル工房社)に移植した。
具体的には、同数のSPおよびMPクローン細胞をそれぞれ氷上で100μLの1×PBSに懸濁し、100μLのマトリゲル(BD社)と混和した。100μLの細胞マトリゲル混合液をNOD/SCIDマウス(オリエンタル工房社)の背部皮下にSPおよびMPクローン細胞をそれぞれ、100個、1000個、10000個、各グループ5匹にて接種し、腫瘍形成を観察した。腫瘍長径・短径の長さを測り、腫瘍体積を(体積=長径×短形2/2)の計算式にて算出した。10000個移植したマウスの腫瘍増大曲線を図3に示す。
以下の手順にてヒト大腸癌細胞株SW480のSP画分細胞にのみ特異的に提示されるHLA−A24結合ナチュラルペプチドの溶出と配列解析とを行った。
a)細胞株
前記大腸がん細胞株由来クローンであるSW480−MPおよびSW480−SP系統は、10%FCSおよび1%ペニシリン・ストレプトマイシン(Gibco社)を添加したDMEM培地にて培養し、細胞数をそれぞれ1.5×109〜1.8×109個の範囲とした。
抗HLA−A24抗体(C7709A2)を産生するハイブリドーマは、P. G. Coulie博士(de Duve Institute, Brussel)より供与されたものである。ハイブリドーマを、10%FCS、1%ペニシリン・ストレプトマイシン、55μMの2−メルカプトエタノール(Gibco社)、1mMのピルビン酸ナトリウム(Gibco社)、2mMのL−グルタミン(Sigma-Aldrich社)および20mMのHEPES(Gibco社)を添加したRPMI−1640(Sigma-Aldrich社)培地にて培養し、培養上清からセルロースチューブとポリエチレングリコール(PEG-20000)とを用いた逆浸透法により濃縮抗体を得た。濃縮抗体は0.03%アジ化ナトリウムとプロテアーゼ阻害剤カクテル(Roche Diagnostics社)とを添加し、4℃にて保存した。
30〜40mLの濃縮抗体を、3mLのプロテインAセファロースビーズ(GE Healthcare社)と4℃で一晩撹拌し結合させ、その後0.1Mのホウ酸と0.2Mのトリエタノールアミン緩衝液(pH8.2)とで洗浄した。抗体とビーズとは20mMのピメルイミド酸ジメチル二塩酸塩含有トリエタノールアミン緩衝液(pH8.3)にて60〜90分間室温で撹拌し共有結合させた。
d)HLA−A24結合ペプチドの免疫沈降
0.5%NP−40、50mMトリス塩酸(pH8)、150mM塩化ナトリウムおよびプロテアーゼ阻害剤を含んだ緩衝液を用いて、実験例3a)の細胞(SW480−SPおよびSW480−MP)をそれぞれ溶解した。細胞溶解液は段階的に遠心分離を行い(2000gで10分間、38000gで30分間、100000gで90分間)、上清を回収した。回収した上清は0.5mLのプロテインAセファロース懸濁液カラムを通過させ、プロテインAセファロースと非特異的に結合する成分を除去した後、実験例3c)で作製した抗体結合プロテインAセファロースビーズと混合し、4℃にて一晩ゆっくりと撹拌しながら、ナチュラルペプチドとHLA−A24分子との複合体を抗体ビーズに結合させた。
実験例3d)で得られたサンプルを、ナノフローHPLC(Kya Technologies Corporation社)にて分画し、MALDI基質へスポットした後、マススペクトロメーター(Applied Biosystems社;MDS SCIEX 4800 MALDI TOF/TOF)にて解析した。マススペクトロメトリー解析およびペプチド配列解析には、Applied Biosystems 4000 Series Explorer software(ver. 3.5.3)、ProteinPilot 3.0ソフトウェア(Applied Biosystems社)、およびipi.HUMAN FASTA タンパクデータベース(ver. 3.71)を使用した。得られたペプチド配列のうち、SW480−SPに特異的であったもののうち、実験例4以降にて後述するFAM83B遺伝子に由来するペプチドの配列および解析スペクトラムを図4に示す。
抗HLA−A24抗体による免疫沈降とマススペクトロメトリー解析とを組み合わせた手法により、HLA−A24結合ペプチドの同定が可能であった。これらは大腸がん細胞の表面に提示されているナチュラルペプチドであると考えられる。また、MP分画細胞においても同様の手法を用いて解析を行い、両者を比較することにより、SP分画細胞に特異的に抗原提示されているナチュラルペプチドとして配列番号3で表されるアミノ酸配列を有するナチュラルペプチドなどが同定された。これらのナチュラルペプチドは、がんのSP分画細胞に特異的に抗原提示されているペプチドとしては初めての同定となる。
a)SP特異的な遺伝子発現
実験例3e)にてSP分画細胞に特異的なHLA−A24結合ナチュラルペプチドが複数同定された。このペプチドは大きく2つのグループに分類されると考えられる。すなわち、ペプチドをコードする遺伝子がSP分画細胞特異的に発現しているグループと、ペプチドをコードする遺伝子はSP分画細胞、MP分画細胞ともに発現しているが、タンパク質発現レベルまたはペプチドプロセシングの差から、MPではナチュラルペプチドとしてHLA−A24によって抗原提示されないグループである。
上記で同定されたナチュラルペプチドをこの分類目的において分類するため、SW480−SPおよびSW480−MPそれぞれのmRNAを抽出してRT−PCRによる遺伝子発現の検討を行ったところ、SP分画細胞特異的に発現する遺伝子の1つとしてFAM83B遺伝子を確認した。遺伝子発現解析の結果を図5に示す。mRNA抽出と逆転写にはそれぞれTRIzol(Invitrogen社)およびSuperScript(登録商標)III Reverse Transcriptase(Invitrogen社)を製品添付書に従って使用した。RT−PCRに用いたプライマーおよびサーマルサイクラーの条件を表1に示す。RT−PCR産物は1.5%アガロースゲルを用いて、100Vで25分間電気泳動を行った。
実験例4a)で確認されたFAM83Bについて、ヒト成人正常細胞において発現を調査した。ヒト成人正常組織由来mRNAパネルをクロンテック社から入手し、これを用いてRT−PCRを行った。mRNAパネルには、心臓、脳、胎盤、肺、肝臓、骨格筋、腎臓、膵臓、脾臓、胸腺、前立腺、精巣、卵巣、小腸、大腸、末梢血単核球の各成人正常細胞および組織由来のmRNAが含まれている。
まず、SuperScript(登録商標)III逆転写酵素(インビトロジェン社製)を用いて、キットのプロトコルに従ってmRNAからcDNAを合成した。合成したcDNAを、順行(Fw)プライマーおよび逆行(Rv)プライマー(表1)を用いて、RT−PCRによりFAM83BのcDNAを増幅した。またコントロールとして、GAPDHのcDNAを同様の方法で増幅した。PCR条件を表1に示す。増幅した増幅物に対して1.5%アガロースゲルを用いて、100Vで25分間電気泳動を行った。結果を図6に示す。
大腸がん細胞株4種類(HT15、HCT116、HT29、Colo205)、乳がん細胞株2種類(MCF7、HMC1)、口腔がん細胞株2種類(HSC3、HSC4)、肺がん細胞株1種類(LHK2)、膵がん細胞株1種類(Panc1)、メラノーマ細胞株2種類(1102mel、LG2mel)におけるFAM83B遺伝子発現を実験例4b)と同様の手法により確認した。結果を図7に示す。
実験例3e)で得られた8種類のHLA−A24結合ナチュラルペプチドが由来するタンパク質をコードする遺伝子のうち、FAM83BのみがSP特異的な発現パターンを示した。FAM83B遺伝子は新規がん遺伝子としての報告があるが、SP特異的な遺伝子発現については知られていない。さらにFAM83B遺伝子は各種臓器における正常細胞には発現がみられず、逆に多くの上皮性悪性腫瘍細胞株において発現が確認された(図6および図7)。すなわち、FAM83B遺伝子およびその産物であるペプチドは、がんの治療標的として理想的な資質を有すると考えられる。
a)ヒト末梢血単核細胞(PBMC)の分離
インフォームドコンセントを得たHLA−A24陽性大腸がん患者またはHLA−A24陽性健常者の末梢血をヘパリン添加50mLシリンジにて採血した。全血を、リンフォプレップ(Nycomed社)を13mL添加した50mLチューブ(ファルコン社)に重層し、2000rpm、30分間遠心分離した。リンフォプレップ層上に沈殿したPBMC層をピペットにて回収し、PBSにて3回洗浄し、ヒトPBMCとした。
前記のように分離したPBMCを10mLのAIM−V培養液(Life Technologies社)に懸濁後、10cmプラスチックシャーレにて約2時間37℃にて培養した。10cmシャーレをゆるやかに振盪し、浮遊細胞をAIM−V培養液とともに回収し、15mLチューブにて1500rpmで5分間遠心分離した。得られたペレットに、160μLの2mMのEDTA添加0.1%BSA補充PBSに懸濁し、40μLのCD8マイクロビーズ(Miltenyi Biotec社)を添加、混和後、4℃にて15分間培養し、2mMのEDTA添加0.1%BSA補充PBS5mLにて洗浄し、1500rpmで5分間遠心分離した。ペレットに、2mMのEDTA添加0.1%BSA補充PBS1mLを添加、混和し、マグネット装着カラムに添加し、2mMのEDTA添加0.1%BSA補充PBSにより5回洗浄後、カラムをマグネットから脱着しCD8+細胞を回収した。カラムに付着しなかった細胞をCD8−細胞とした。
CD8−細胞およびCD8+細胞を、10%ヒトAB血清(HS)添加AIM−V培養液にて培養した。一部のCD8−細胞に、1mg/mLのフィトヘマグルチニン(PHA)(WAKO chemicals社)および100U/mLのインターロイキン2(IL−2)(武田薬品工業社)を添加し、7日間培養し、PHA−blast細胞を作製した。PHA−blast細胞に、実験例3e)にて同定されたFAM83B由来の配列(配列番号3)を有する合成ペプチドを20μg/mL添加し、室温にて1時間培養した。ペプチドパルスPHA−blast細胞を放射線照射機(Softex社)にて100Gy照射し、10mLのPBS添加後、1500rpmで5分間遠心分離した。ペレットを1mLの10%HS添加AMI−Vに懸濁し、細胞濃度を計算した。4×105個のPHA−blast細胞を、2×106個のCD8+細胞に添加し、1mLの10%HS添加AIM−Vにて1週間37℃にて培養した。7日目に、同様にペプチドパルスしたPHA−blast細胞を100Gyの放射線で照射し、CD8+細胞に添加した。8日目、CD8+細胞に、20U/mLのIL−2を添加した。同様のPHA−blast細胞による刺激を14日目に行った。
a)ELISPOTプレートの作製
実験は、Human IFNγ ELISPOT set(BD社)を使用して行った。ELISPOTプレートに、200倍希釈した抗IFNγ抗体を4℃で一晩静置してコートした。10%FCS補充RPMI(Sigma-Aldrich社)にてプレートを室温にて2時間培養し、ブロッキングし、ELISPOTプレートとした。
20μg/mLの濃度にて各ペプチドを、ヒトリンパ芽球様細胞T2細胞にHLA−A2402遺伝子を導入して発現させた細胞株であるT2−A24細胞(葛島先生、愛知県がんセンターより供与)に室温にて1時間パルスした。ペプチドパルス群は[1]ペプチドパルス無し、[2]HIVペプチドパルス、[3]FAM83Bペプチドパルスの3群とした。ペプチドパルス後PBS添加、1500rpmで5分間遠心分離した。細胞ペレットを5×105個/mLになるように懸濁し、ELISPOTプレートに各ウェル5×104個ずつ播種した。CTLを各ウェル5×104個播種し、37℃にて一晩培養した。
一晩培養したELISPOTプレートから培養液および細胞を除去後、Milli Q水にて2回、wash bufferにて3回洗浄した。各ウェルに250倍希釈したビオチン化検出抗体を添加、室温にて2時間培養した。Wash bufferにて3回洗浄後、100倍希釈したHRP標識ストレプトアビジンを各ウェルに添加、室温にて1時間培養した。Wash bufferにて3回洗浄およびPBSにて2回洗浄後、発色試薬を各ウェルに添加、室温にて15〜30分間発色反応を行った。十分な可視スポット形成を確認後、Milli Q水にて洗浄し、反応を終了した。ニトロセルロース膜を乾燥後、KS ELISPOT(ZEISS社)にて検出、撮影した。図8に見られるように、FAM83Bペプチドパルス群にてIFNγスポットが検出された。
a)カルセイン染色
T2−A24細胞およびHLA−class I欠失の白血病細胞K562(ATCCから入手)を1×106個/mLの細胞濃度で、10%FBS補充RPMIに懸濁した。カルセイン(Dojindoから入手)を最終濃度10μg/mLで添加し、37℃で30分間培養した。10mLの10%FBS補充RPMIにて3回洗浄した。
カルセイン染色したT2−A24細胞に、20μg/mLの濃度にて各ペプチドを室温にて1時間パルスした。ペプチドパルス群は、[1]ペプチドパルス無し、[2]HIVペプチドパルス、[3]FAM83Bペプチドパルスの3群とした。ペプチドパルス後、PBSにて2回洗浄した。各群細胞を1×104個/50μLの各ウェルに播種した。各ウェルに播種された細胞の蛍光強度(0時間)をテラスキャン(ミネルバテック社)にて測定した。
0時間測定後、エフェクター細胞(CTL)をエフェクター/ターゲット比(E/T ratio)3、10、30となるように各個数のCTLを各ウェルに播種した。自然遊離ウェルとして80℃にて不活化したヒトPBMCを播種した。最大遊離ウェルには2%のNP−40添加PBSを添加した。37℃で4時間〜6時間培養後、各ウェルの蛍光強度をテラスキャンにて測定した。細胞傷害活性を下記計算式にて計算した。
細胞傷害活性=(実験群の遊離量−実験群の自然遊離量)/(実験群の最大遊離量−実験群の自然遊離量)×100
図9に示すとおり、CTLは、[1]ペプチドパルス無し群、[2]HIVペプチドパルス群、K562と比較して[3]FAM83Bペプチドパルス群に対して高い細胞傷害活性を示した。このことは、CTLがFAM83Bペプチドに対して特異的細胞傷害活性を示す事を示唆する。
MHCとペプチドの結合予測プログラムであるBIMAS(http://www-bimas.cit.nih.gov/molbio/hla_bind/)、SYFPEITHI(http://www.syfpeithi.de/)およびIEDB(MHC-I processing predictions;http://www.iedb.org/)などを用いて、HLA−A*02:01および/またはHLA−A*24:02への結合が予測されるFAM83B由来のペプチド(配列番号3〜35、37〜41、43〜60および65〜85で表されるペプチド)を抽出した。これらペプチドをFmoc法で化学合成した。合成したペプチドを以下の表2−1および2−2に示す。Startは、合成したペプチドのN末端アミノ酸の、FAM83B(配列番号2)におけるアミノ酸位置を示し、Endは合成したペプチドのC末端アミノ酸の、FAM83B(配列番号2)におけるアミノ酸位置を示す。Lengthは合成したペプチドのアミノ酸数を表す。
FAM83B由来ペプチドの各HLA分子への結合性評価はMHCクラスI発現安定化試験によって実施した。当試験ではヒトリンパ芽球様細胞株であるT2―A24細胞を利用した。T2細胞は細胞質から小胞体へのペプチドの輸送に関与するtransporter associated with antigen processing(TAP)を欠損している。MHCクラスI分子(HLA−A*02:01およびHLA−A*24:02)は、ペプチドが結合していない状態(empty MHC class I)では、構造が不安定であることが知られる。通常、T2細胞は細胞表面に低レベルのempty MHC class I分子しか発現できない。しかし、MHCクラスI分子に結合可能なペプチドを添加すると、empty MHC class I分子は該ペプチドと結合して細胞表面で安定化して存在できる。したがって、細胞表面MHCクラスI発現レベルはペプチドのMHCクラスI結合親和性に依存することとなる。
実施例9においてHLA−A*02:01またはHLA−A*24:02に対するMFIが1.5以上のFAM83B由来ペプチドについて、CTL誘導能を、HLA−A*02:01遺伝子導入マウスあるいはHLA−A*24:02遺伝子導入マウスを用いたin vivoのCTL誘導試験によって評価した。
HLA−A*02:01遺伝子導入マウス(C57BL/6CrHLA−A2.1DR1)は、マウスのMHCを欠損し、ヒトのMHCであるHLA−A*02:01およびHLA−DRB1*01:01を発現するマウスであり、本マウスを用いることで、ヒトでCTLを誘導し得るペプチドの選択が可能である。また、HLA−A*24:02遺伝子導入マウスはヒトのMHCであるHLA−A*24:02を発現するマウスであり、本マウスを用いることで、ヒトでCTLを誘導し得るペプチドの選択が可能である。そこで、各ペプチドがCTL誘導活性を有するか否かは、上記マウスへのペプチド投与によって投与ペプチドに反応可能なT細胞が誘導されるか否かで判断した。
本試験の結果、HLA−A*02:01遺伝子導入マウス由来の脾細胞において、ペプチド特異的なIFNγ産生が確認されたことより、配列番号4、20、29〜33、35、37、38、47、57、60、65〜68および71〜73で表されるFAM83B由来の各ペプチドがCTL誘導能を持つことがわかった。また、HLA−A*24:02遺伝子導入マウス由来の脾細胞において、ペプチド特異的なIFNγ産生が確認されたことより、配列番号4、6、9、12、14、15、20、23、24、47、65〜68、74、75および77〜80で表されるFAM83B由来のペプチドがCTL誘導能を持つことがわかった。したがって、配列番号4、20、47および65〜68で表されるFAM83B由来の各ペプチドが、HLA−A02型およびHLA−A24型の両方の対象においてCTL誘導能を有することが示された。
a)ヒト末梢血単核細胞(PBMC)の分離
インフォームドコンセントを得たHLA−A24陽性がん患者の末梢血をヘパリン添加50mLシリンジにて採血した。全血を、リンフォプレップ(Axis-Shield PoC AS社)を15mL添加したLeucosepリンパ球分離チューブ50ML(グライナー社)に重層し、1000gで30分間遠心分離した。リンフォプレップ層上に沈殿したPBMC層をピペットにて回収し、PBSにて3回洗浄し、ヒトPBMCとした。
前記のように分離したPBMCを2mLのAIM−V培養液(Life Technologies社)に懸濁後、24ウェルプレートにて約1時間37℃で培養した。リンパ球が沈んだことを確認し、1mL培養液を捨てた。FAM83B(F476_9:配列番号47)ペプチド40μg/mLを添加後ピペッティングし、室温で30分静置した。37℃に温めておいた10%ヒトAB血清(HS)添加AIM−Vにインターロイキン2(IL−2)50U/mLを加えた培養液を1mL添加し、ピペッティングした後に37℃で7日間培養した。
7日間培養後のPBMCを15mLチューブ(BD社)に回収し、1×PBSを培養液の2倍量入れた後に1500rpm、5分、室温で遠心分離した。上澄みを捨てて、溶血用Lysing Buffer(BD社)を10倍希釈した溶液を2mL入れてピペッティングし、室温15分静置した。1500rpm、5分、室温で遠心分離し、上澄みを除いた後に1×PBSを2mL入れ、再び1500rpm、5分、室温で遠心分離した。上澄みを捨てて2%FBS(Thermo社)を加えた1×PBSを1mL入れてセルカウントを行った。5mL FACSチューブ(BD社)に105〜106個/100μLとなるように調整した細胞を、機器調整用4本とネガティブコントロール用1本、FAM83Bテトラマー用1本の計6本に100μLずつ分注した。ネガティブコントロールチューブにはHIV−PE、HIV−FITCテトラマー(MBL社)を各5μLずつ添加し、FAM83BテトラマーチューブにはHIV−FITC、FAM83B(F476_9)−PEテトラマー(MBL社)を各5μLずつ添加して氷上で1時間、遮光でインキュベートした。CD8−PC5(ベックマン・コールター社)を上記それぞれのチューブに3μLずつ添加した。また、機器調整用チューブにはCD8−FITC(ベックマン・コールター社)、CD8−PE(BD社)そしてCD8−PC5を各チューブに3μLずつ入れた。CD8添加後は氷上で1時間、遮光でインキュベートを行った。インキュベーション後、2%FBS入りPBS1mLを各チューブに添加し、1500rpm、5分、4℃で遠心分離した。この洗浄をもう一度繰り返し、1%ホルマリン(和光社)入りPBS液を500μL添加した。サンプルはFACS Calibur(BD社)にて解析を行った。
Claims (40)
- Y0−X0−Z0
で表されるペプチドであって、
X0が、以下の(1)〜(4):
(1)FAM83Bタンパク質の部分ペプチドであって、該タンパク質のアミノ酸配列中の連続する8〜14アミノ酸からなり、N末端から第2番目のアミノ酸がロイシン、イソロイシンもしくはメチオニンであり、および/または、C末端のアミノ酸がバリン、ロイシンもしくはイソロイシンであるペプチド;
(2)(1)の部分ペプチドにおいて、N末端から第2番目のアミノ酸がロイシン、イソロイシンもしくはメチオニンに置換されており、および/または、C末端のアミノ酸がバリン、ロイシンもしくはイソロイシンに置換されているペプチド;
(3)FAM83Bタンパク質の部分ペプチドであって、該タンパク質のアミノ酸配列中の連続する8〜14アミノ酸からなり、N末端から第2番目のアミノ酸がチロシン、フェニルアラニン、メチオニンもしくはトリプトファンであり、および/または、C末端のアミノ酸がロイシン、イソロイシンもしくはフェニルアラニンであるペプチド;または
(4)(3)の部分ペプチドにおいて、N末端から第2番目のアミノ酸がチロシン、フェニルアラニン、メチオニンもしくはトリプトファンに置換されており、および/または、C末端のアミノ酸がロイシン、イソロイシンもしくはフェニルアラニンに置換されているペプチド;
のいずれかであり、
Y0およびZ0が、互いに独立して0個から数個のアミノ酸からなるペプチド
である、前記ペプチド。 - X0が、以下の(1’)〜(4’):
(1’)FAM83Bタンパク質の部分ペプチドであって、該タンパク質のアミノ酸配列中の連続する8〜11アミノ酸からなり、N末端から第2番目のアミノ酸がロイシン、イソロイシンもしくはメチオニンであり、および/または、C末端のアミノ酸がバリン、ロイシンもしくはイソロイシンであるペプチド;
(2’)(1’)の部分ペプチドにおいて、N末端から第2番目のアミノ酸がロイシン、イソロイシンもしくはメチオニンに置換されており、および/または、C末端のアミノ酸がバリン、ロイシンもしくはイソロイシンに置換されているペプチド;
(3’)FAM83Bタンパク質の部分ペプチドであって、該タンパク質のアミノ酸配列中の連続する8〜11アミノ酸からなり、N末端から第2番目のアミノ酸がチロシン、フェニルアラニン、メチオニンもしくはトリプトファンであり、および/または、C末端のアミノ酸がロイシン、イソロイシンもしくはフェニルアラニンであるペプチド;または
(4’)(3’)の部分ペプチドにおいて、N末端から第2番目のアミノ酸がチロシン、フェニルアラニン、メチオニンもしくはトリプトファンに置換されており、および/または、C末端のアミノ酸がロイシン、イソロイシンもしくはフェニルアラニンに置換されているペプチド;
のいずれかであり、
Y0およびZ0が、互いに独立して
0個もしくは1個のアミノ酸であるか;または
0〜3個のアミノ酸からなるペプチドであって、ここでY0−X0−Z0が全体で9〜14アミノ酸長であるFAM83Bタンパク質の部分ペプチドもしくはそのX0ホモログとなる;
であることを特徴とする、請求項1に記載のペプチド。 - X0が、配列番号3〜58、60、65、66、69〜78および80〜85のいずれかで表されるアミノ酸配列からなる、請求項1または2に記載のペプチド。
- X0が、配列番号3〜58、60、65、66、69〜78および80〜85のいずれかで表されるアミノ酸配列からなり、Y0およびZ0が存在しない、請求項1または2に記載のペプチド。
- X0が、配列番号8、27〜58、60、71および81のいずれかで表されるアミノ酸配列において、N末端から第2番目のアミノ酸がメチオニン、ロイシンもしくはイソロイシンに置換されており、および/または、C末端のアミノ酸がロイシン、バリンもしくはイソロイシンに置換されているアミノ酸配列からなり、Y0およびZ0が存在しない、請求項1または2に記載のペプチド。
- X0が、配列番号3〜26、53、58、78および80のいずれかで表されるアミノ酸配列において、N末端から第2番目のアミノ酸がメチオニンもしくはチロシンに置換されており、および/または、C末端のアミノ酸がロイシン、イソロイシンもしくはフェニルアラニンに置換されているアミノ酸配列からなり、Y0およびZ0が存在しない、請求項1または2に記載のペプチド。
- X0が、請求項4〜6のいずれか一項に記載のX0であり、Y0またはZ0のいずれか一方が1個のアミノ酸であり、もう一方が存在しない、請求項1または2に記載のペプチド。
- Y0−X0−Z0で表されるペプチドが、配列番号4、6、9、12、14、15、20、23、24、29〜33、35、37、38、47、57、60、65〜68、71〜75および77〜80のいずれかで表されるアミノ酸配列からなる、請求項1〜3のいずれか一項に記載のペプチド。
- Y0−X0−Z0で表されるペプチドが、配列番号4、20、29〜33、35、37、38、47、57、60、65〜68および71〜73のいずれかで表されるアミノ酸配列からなる、請求項1〜3のいずれか一項に記載のペプチド。
- Y0−X0−Z0で表されるペプチドが、配列番号4、6、9、12、14、15、20、23、24、47、65〜68、74、75および77〜80のいずれかで表されるアミノ酸配列からなる、請求項1〜3のいずれか一項に記載のペプチド。
- Y0−X0−Z0で表されるペプチドが、配列番号4、20、47および65〜68のいずれかで表されるアミノ酸配列からなる、請求項1〜3のいずれか一項に記載のペプチド。
- 複数のエピトープペプチドが連結されたポリエピトープペプチドであって、該エピトープペプチドとして、請求項1〜11のいずれか一項に記載のペプチドを少なくとも1つ含む、前記ポリエピトープペプチド。
- FAM83B遺伝子の発現産物を検出するためのFAM83B検出剤を含む、がん幹細胞検出剤。
- 心臓、脳、胎盤、肺、肝臓、骨格筋、腎臓、膵臓、脾臓、胸腺、前立腺、精巣、卵巣、小腸、大腸および血液からなる群から選択される1または2以上の生体試料に由来する細胞を含む細胞集団においてがん幹細胞を検出するための、請求項13に記載のがん幹細胞検出剤。
- FAM83B遺伝子の発現産物が、mRNAおよび/または内在性ポリペプチドである、請求項13または14に記載のがん幹細胞検出剤。
- FAM83B遺伝子の発現産物がmRNAであり、RT−PCR法により検出することを含む、請求項13〜15のいずれか一項に記載のがん幹細胞検出剤。
- FAM83B遺伝子の発現産物が内在性ポリペプチドであり、該内在性ポリペプチドと特異的に反応するFAM83B検出剤により検出することを含む、請求項13〜15のいずれか一項に記載のがん幹細胞検出剤。
- FAM83B検出剤が、抗体である、請求項17に記載のがん幹細胞検出剤。
- FAM83B検出剤が、FAM83B遺伝子の発現産物であるmRNAを検出するための前記遺伝子に相補的な塩基配列を有するプローブおよび/またはプライマーである、請求項13〜16のいずれか一項に記載のがん幹細胞検出剤。
- 請求項13〜19のいずれか一項に記載のがん幹細胞検出剤を使用して、検査対象においてがん幹細胞を検出する方法。
- (i)がん治療薬の候補化合物を、対象に投与する前に、該対象におけるFAM83B遺伝子の発現産物の検出量Aを測定する工程、
(ii)前記候補化合物を前記対象細胞集団に投与した後に、該対象におけるFAM83B遺伝子の発現産物の検出量Bを測定する工程、および
(iii)前記検出量AとBとを比較し、該検出量AがBより有意に大きい場合に、前記候補化合物を、がん幹細胞を標的とすることを特徴とするがん治療薬候補であると判定する工程、
を含む、がん治療薬のスクリーニング方法。 - 請求項1〜11のいずれか一項に記載のペプチドまたは請求項12に記載のポリエピトープペプチドの少なくとも1つをコードするポリヌクレオチド。
- 請求項22に記載のポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
- 請求項23に記載の発現ベクターを含む、遺伝子導入用組成物。
- 以下の(a)〜(d):
(a)請求項1〜11のいずれか一項に記載のペプチドまたは請求項12に記載のポリエピトープペプチド、
(b)請求項22に記載のポリヌクレオチド、
(c)請求項23に記載の発現ベクター、
(d)FAM83Bタンパク質、FAM83Bタンパク質をコードするポリヌクレオチドまたは該ポリヌクレオチドを含む発現ベクター
のいずれかを有効成分として含む、医薬組成物。 - 請求項1〜11のいずれか一項に記載のペプチド、および/または、請求項12に記載のポリエピトープペプチドを有効成分として含む、請求項25に記載の医薬組成物。
- アジュバントをさらに含む、請求項25または26に記載の医薬組成物。
- がんの予防および/または治療剤である、請求項25〜27のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- がんの予防および/または治療用ワクチンである、請求項25〜28のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 以下の(a)〜(d):
(a)請求項1〜11のいずれか一項に記載のペプチドまたは請求項12に記載のポリエピトープペプチド、
(b)請求項22に記載のポリヌクレオチド、
(c)請求項23に記載の発現ベクター、
(d)FAM83Bタンパク質、FAM83Bタンパク質をコードするポリヌクレオチドまたは該ポリヌクレオチドを含む発現ベクター
のいずれかを有効成分として含有する、細胞傷害性T細胞の誘導剤。 - (A)請求項1〜11のいずれか一項に記載のペプチドまたは請求項12に記載のポリエピトープペプチド、あるいは、
(B)前記(A)のペプチドおよび/またはポリエピトープペプチドの少なくとも1つをコードするポリヌクレオチドと、抗原提示能を有する細胞とを、in vitroで接触させることを含む、抗原提示細胞の製造方法。 - (A)請求項1〜11のいずれか一項に記載のペプチドまたは請求項12に記載のポリエピトープペプチド、あるいは、
(B)前記(A)のペプチドおよび/またはポリエピトープペプチドの少なくとも1つをコードするポリヌクレオチド
と、末梢血リンパ球とを、in vitroで接触させることを含む、細胞障害性T細胞の誘導方法。 - 請求項1〜11のいずれか一項に記載のペプチドとHLAとを含む、HLAマルチマー。
- 請求項33に記載のHLAマルチマーを含む、診断薬。
- 請求項1〜11のいずれか一項に記載のペプチドとHLAとの複合体を認識する、T細胞受容体様抗体。
- 請求項35に記載のT細胞受容体様抗体を含有する腫瘍検出剤。
- 請求項1〜11のいずれか一項に記載のペプチドとHLAとの複合体を認識する、キメラ抗原受容体。
- 請求項1〜11のいずれか一項に記載のペプチドとHLAとの複合体を認識するT細胞受容体を含む、人工CTL。
- 請求項25〜29のいずれか一項に記載の医薬組成物を用いたがんの処置方法が有効な治療対象患者を選択するための診断薬であって、請求項13〜19のいずれか一項に記載のがん幹細胞検出剤、請求項33に記載のHLAマルチマーおよび/または請求項35に記載のT細胞受容体様抗体を含む、前記診断薬。
- (I)細胞のライセートから、抗MHC抗体を用いてMHCとナチュラルペプチドとの複合体を単離する工程、
(II)工程(I)で得られた複合体からナチュラルペプチドを単離する工程、および、
(III)工程(II)で得られたナチュラルペプチドを配列解析する工程を含む、ナチュラルペプチドを同定する方法。
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Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH07509319A (ja) * | 1992-11-13 | 1995-10-12 | マックス−プランク ゲゼルシャフト ツール フェルデルング デル ヴィッセンシャフテン エー ファウ | Mhc分子上のペプチドモチーフの決定 |
JP2005521389A (ja) * | 2002-02-13 | 2005-07-21 | テクニオン リサーチ アンド ディベロップメント ファウンデーション リミテッド | T細胞受容体様特異性を有し、さらに高親和性の抗体ならびに癌、ウイルス感染、および自己免疫疾患の検出および治療でのその使用 |
JP2006511196A (ja) * | 2002-05-29 | 2006-04-06 | インマティクス バイオテクノロジーズ ゲーエムベーハー | Mhc分子に結合する腫瘍関連ペプチド |
JP2008501781A (ja) * | 2004-06-09 | 2008-01-24 | テクニオン リサーチ アンド ディベロップメント ファウンデーション リミテッド | 細胞の選択的アポトーシスのための抗体 |
WO2010050190A1 (ja) * | 2008-10-27 | 2010-05-06 | 北海道公立大学法人札幌医科大学 | がん幹細胞分子マーカー |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2001233114A1 (en) * | 2000-02-04 | 2001-08-14 | Aeomica, Inc. | Methods and apparatus for predicting, confirming, and displaying functional information derived from genomic sequence |
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Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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JPH07509319A (ja) * | 1992-11-13 | 1995-10-12 | マックス−プランク ゲゼルシャフト ツール フェルデルング デル ヴィッセンシャフテン エー ファウ | Mhc分子上のペプチドモチーフの決定 |
JP2005521389A (ja) * | 2002-02-13 | 2005-07-21 | テクニオン リサーチ アンド ディベロップメント ファウンデーション リミテッド | T細胞受容体様特異性を有し、さらに高親和性の抗体ならびに癌、ウイルス感染、および自己免疫疾患の検出および治療でのその使用 |
JP2006511196A (ja) * | 2002-05-29 | 2006-04-06 | インマティクス バイオテクノロジーズ ゲーエムベーハー | Mhc分子に結合する腫瘍関連ペプチド |
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Non-Patent Citations (4)
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---|
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日本病理学会会誌, vol. 101, no. 1, JPN6018031564, 2012, pages 349 - 1, ISSN: 0004000240 * |
日本病理学会会誌, vol. 99, no. 1, JPN6018031561, 2010, pages 246 - 1, ISSN: 0004000239 * |
日本病理学会会誌, vol. 99, no. 1, JPN6018031565, 2010, pages 187 - 1, ISSN: 0004000241 * |
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