JPWO2013005595A1 - エタノールの新規生産方法 - Google Patents
エタノールの新規生産方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2013005595A1 JPWO2013005595A1 JP2013522836A JP2013522836A JPWO2013005595A1 JP WO2013005595 A1 JPWO2013005595 A1 JP WO2013005595A1 JP 2013522836 A JP2013522836 A JP 2013522836A JP 2013522836 A JP2013522836 A JP 2013522836A JP WO2013005595 A1 JPWO2013005595 A1 JP WO2013005595A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- phosphatase
- fermentation
- ethanol
- microorganism
- producing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 317
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 83
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 82
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 82
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 claims abstract description 74
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 73
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 claims abstract description 58
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims abstract description 50
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 36
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 32
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 20
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 20
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 102
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 claims description 82
- HYBBIBNJHNGZAN-UHFFFAOYSA-N furfural Chemical compound O=CC1=CC=CO1 HYBBIBNJHNGZAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 48
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 44
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 43
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 43
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 30
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 26
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims description 22
- -1 furan compound Chemical class 0.000 claims description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 18
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 16
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 claims description 10
- 101100371504 Arabidopsis thaliana UBC24 gene Proteins 0.000 claims description 7
- 101100057317 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) OLI1 gene Proteins 0.000 claims description 7
- 101100324965 Saccharomyces paradoxus ATP9 gene Proteins 0.000 claims description 7
- 101150063702 pho2 gene Proteins 0.000 claims description 7
- 101150018363 APL6 gene Proteins 0.000 claims description 6
- 101150080600 apl5 gene Proteins 0.000 claims description 6
- 101150090871 APM3 gene Proteins 0.000 claims description 4
- 101150072884 pho4 gene Proteins 0.000 claims description 4
- 101150012394 PHO5 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 101150043271 PHO85 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 101100494731 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) PEP4 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 101100083263 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) PHO80 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 101100083264 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) PHO81 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 230000001629 suppression Effects 0.000 claims description 2
- 101100030177 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) PHO13 gene Proteins 0.000 claims 2
- 150000002240 furans Chemical class 0.000 abstract description 6
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 abstract 1
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 26
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 20
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 12
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 12
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 11
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 10
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 10
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 8
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 7
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 7
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 6
- NOEGNKMFWQHSLB-UHFFFAOYSA-N 5-hydroxymethylfurfural Chemical compound OCC1=CC=C(C=O)O1 NOEGNKMFWQHSLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 5
- 229920002488 Hemicellulose Polymers 0.000 description 5
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 5
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 229920005610 lignin Polymers 0.000 description 4
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 4
- 239000010902 straw Substances 0.000 description 4
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 4
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 3
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 3
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 3
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 3
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 3
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 3
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 3
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 3
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 3
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 3
- QVYAWBLDJPTXHS-UHFFFAOYSA-N 5-Hydroxymethyl-2-furfural Natural products OC1=CC=C(C=O)O1 QVYAWBLDJPTXHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 240000000111 Saccharum officinarum Species 0.000 description 2
- 235000007201 Saccharum officinarum Nutrition 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 2
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 2
- RRAFCDWBNXTKKO-UHFFFAOYSA-N eugenol Chemical compound COC1=CC(CC=C)=CC=C1O RRAFCDWBNXTKKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LHGVFZTZFXWLCP-UHFFFAOYSA-N guaiacol Chemical compound COC1=CC=CC=C1O LHGVFZTZFXWLCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010335 hydrothermal treatment Methods 0.000 description 2
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- KCDXJAYRVLXPFO-UHFFFAOYSA-N syringaldehyde Chemical compound COC1=CC(C=O)=CC(OC)=C1O KCDXJAYRVLXPFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- COBXDAOIDYGHGK-UHFFFAOYSA-N syringaldehyde Natural products COC1=CC=C(C=O)C(OC)=C1O COBXDAOIDYGHGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000969 xylosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO1)* 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- 108010053754 Aldehyde reductase Proteins 0.000 description 1
- 241000609240 Ambelania acida Species 0.000 description 1
- 241001474374 Blennius Species 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- 229920003043 Cellulose fiber Polymers 0.000 description 1
- NPBVQXIMTZKSBA-UHFFFAOYSA-N Chavibetol Natural products COC1=CC=C(CC=C)C=C1O NPBVQXIMTZKSBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N D-Cellobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N 0.000 description 1
- 108010058076 D-xylulose reductase Proteins 0.000 description 1
- 239000005770 Eugenol Substances 0.000 description 1
- BJIOGJUNALELMI-ONEGZZNKSA-N Isoeugenol Natural products COC1=CC(\C=C\C)=CC=C1O BJIOGJUNALELMI-ONEGZZNKSA-N 0.000 description 1
- 240000003433 Miscanthus floridulus Species 0.000 description 1
- 244000130556 Pennisetum purpureum Species 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000273256 Phragmites communis Species 0.000 description 1
- 235000014676 Phragmites communis Nutrition 0.000 description 1
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 1
- UVMRYBDEERADNV-UHFFFAOYSA-N Pseudoeugenol Natural products COC1=CC(C(C)=C)=CC=C1O UVMRYBDEERADNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000793189 Saccharomyces cerevisiae BY4741 Species 0.000 description 1
- 241000311449 Scheffersomyces Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- 102100029089 Xylulose kinase Human genes 0.000 description 1
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002154 agricultural waste Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- 239000010905 bagasse Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- BJIOGJUNALELMI-ARJAWSKDSA-N cis-isoeugenol Chemical compound COC1=CC(\C=C/C)=CC=C1O BJIOGJUNALELMI-ARJAWSKDSA-N 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000000081 effect on glucose Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 229960002217 eugenol Drugs 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 239000000446 fuel Substances 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 229960001867 guaiacol Drugs 0.000 description 1
- 229940059442 hemicellulase Drugs 0.000 description 1
- 108010002430 hemicellulase Proteins 0.000 description 1
- RJGBSYZFOCAGQY-UHFFFAOYSA-N hydroxymethylfurfural Natural products COC1=CC=C(C=O)O1 RJGBSYZFOCAGQY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000012269 metabolic engineering Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 239000008104 plant cellulose Substances 0.000 description 1
- RWPGFSMJFRPDDP-UHFFFAOYSA-L potassium metabisulfite Chemical compound [K+].[K+].[O-]S(=O)S([O-])(=O)=O RWPGFSMJFRPDDP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000010263 potassium metabisulphite Nutrition 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- BJIOGJUNALELMI-UHFFFAOYSA-N trans-isoeugenol Natural products COC1=CC(C=CC)=CC=C1O BJIOGJUNALELMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MWOOGOJBHIARFG-UHFFFAOYSA-N vanillin Chemical compound COC1=CC(C=O)=CC=C1O MWOOGOJBHIARFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FGQOOHJZONJGDT-UHFFFAOYSA-N vanillin Natural products COC1=CC(O)=CC(C=O)=C1 FGQOOHJZONJGDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012141 vanillin Nutrition 0.000 description 1
- 108091022915 xylulokinase Proteins 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
- C12P7/04—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic
- C12P7/06—Ethanol, i.e. non-beverage
- C12P7/08—Ethanol, i.e. non-beverage produced as by-product or from waste or cellulosic material substrate
- C12P7/10—Ethanol, i.e. non-beverage produced as by-product or from waste or cellulosic material substrate substrate containing cellulosic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
- Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
- Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
1.セルロース系バイオマスを原料とし、微生物の発酵によりエタノールを産生させる方法において、微生物が本来保有するホスファターゼのうち、少なくとも1種のホスファターゼの発現が抑制されるように組換えられた微生物を用いて、発酵阻害作用のある弱酸物質及び/又はフラン化合物を含む条件下で発酵させることを特徴とするエタノールの生産方法。
2.少なくとも1種のホスファターゼの発現抑制が、前記微生物のゲノム上に有するホスファターゼ遺伝子のうち、少なくとも1種のホスファターゼ遺伝子の一部又は全部を欠損することにより達成される、前項1に記載のエタノールの生産方法。
3.発現が抑制されるホスファターゼが、APM3、PHO2、APL5、APL6、PHO4、PHO13、PHO85、PHO80、PHO9、PHO5及びPHO81からなるホスファターゼより選択される少なくとも1種のホスファターゼである、前項1又は2に記載のエタノールの生産方法。
4.発現が抑制されるホスファターゼが、PHO2、PHO13、APL5及びAPL6からなるホスファターゼより選択される少なくとも1種のホスファターゼである、前項3に記載のエタノールの生産方法。
5.弱酸物質が、酢酸、ギ酸から選択される少なくとも1種の物質である前項1〜4のいずれか1に記載のエタノールの生産方法。
6.酢酸が10 mM〜100 mM含まれている条件下で、発酵させることを特徴とする前項5に記載のエタノールの生産方法。
7.ギ酸が5 mM〜50 mM含まれている条件下で、発酵させることを特徴とする前項5に記載のエタノールの生産方法。
8.フラン化合物が、フルフラールである前項1〜7のいずれか1に記載のエタノールの生産方法。
9.フルフラールが10 mM〜100 mM含まれている条件下で、発酵させることを特徴とする前項8に記載のエタノールの生産方法。
10.微生物が、Saccharomyces属に属する酵母である、前項1〜9のいずれか1に記載のエタノールの生産方法。
11.Saccharomyces属に属する酵母が、キシロース資化性の酵母である、前項10に記載のエタノールの生産方法。
12.ゲノム上に有するホスファターゼ遺伝子のうち、少なくとも1種のホスファターゼ遺伝子の一部又は全部が欠損し、前項1〜11のいずれか1に記載のエタノールの生産方法に利用される微生物。
13.微生物のゲノム上に有するホスファターゼ遺伝子のうち、少なくとも1種のホスファターゼ遺伝子の一部又は全部を欠損させることを特徴とする、酢酸、ギ酸、及びフルフラールから選択されるいずれか1種又は複数種の発酵阻害物質を含むバイオマス糖化液を原料としてエタノールを生産しうる微生物の作製方法。
14.バイオマス糖化液に含まれる発酵阻害物質が、10 mM〜100 mMの酢酸、5 mM〜50 mMのギ酸、及び10 mM〜100 mMのフルフラールから選択されるいずれか1種又は複数種である、前項13に記載の微生物の作製方法。
15.微生物がSaccharomyces属に属し、キシロース資化性の酵母である、前項13又は14に記載の微生物の作製方法。
本参考例では、稲わらを原料とし、水熱処理(条件130 - 300℃、1 - 10 MPa)を行ったバイオマス糖化液中に存在する発酵阻害物質について、確認した。稲わらを水熱処理後、固液分離を行い、液体画分を回収し、その後pHをNaOHで5に合わせ、1 %(w/v)のヘミセルラーゼ(G-Amano;アマノエンザイム社製)を添加し、37℃で72時間処理したのち、15000g、4℃にて60分間の遠心分離を行い、上清を回収し、これをバイオマス糖化液とした。
本参考例では、バイオマス糖化液のモデル系としてグルコース及びキシロースを炭素源とする溶液に、酢酸を添加した場合と添加しない場合で、キシロース資化能が付与された酵母菌(S. cerevisiae MN8140X:非特許文献3)における各種炭素源の消費及びアルコールの生産能を確認した。グルコース及びキシロースを炭素源とする溶液は、10 g/L 酵母抽出液, 20 g/L ポリペプトン, 80 g/L グルコース, 60 g/L キシロースからなる培地を用いた。当該培地に上記菌体を初期濃度50 g/Lとなるように加え、発酵温度30℃で発酵処理を行った。
本参考例では、非特許文献3で開示する方法と同手法によりS. cerevisiae BY4741株にキシロース資化能を付与したS. cerevisiae BY4741X株(以下、「BY4741X株」という。)について、アルカリホスファターゼ(PHO13)を欠損させた株(以下、「△PHO13株」ともいう。)を用いて、炭素源をキシロースとしたときの資化能を確認した。キシロース資化能をもたせたのみで、PHO13を欠損さていない酵母菌(BY4741X株)を対照とした。
キシロースを炭素源とする材料として、YP培地(1 % 酵母エキス、2 % ペプトン、0.5 % 二亜硫酸二カリウム)に、80 g/Lのキシロースを含む溶液を用いた。当該溶液に上記各菌体を初期濃度50 g/Lとなるように加え、発酵温度30℃で発酵処理を行った。
△PHO13株が優れたエタノール生産能を有することが確認されたことより、△PHO13株について発酵阻害活物質の存在下においても、グルコース及びフルクトース、キシロースなどを消費してエタノールを生産することができるかを確認した。原料として、参考例1(表1)に示す各種発酵阻害物質を含むバイオマス糖化液を用い、参考例2に記載の発酵条件に従って発酵処理した。参考例3と同様にBY4741X株を対照とした。
本実施例では△PHO13株について発酵阻害活性のある酢酸存在下においても、キシロースを消費してエタノールをどの程度生産することができるかを対照(BY4741X株)と比較した。発酵条件は0、30、60 mM各濃度の酢酸を加えたほかは参考例3と同様にキシロースを炭素源とする材料を用いて検討した。
本実施例では、0、15、30 mM各濃度のギ酸を加えたほかは実施例2と同様に発酵処理を行い、エタノールの生産能を確認した。
本実施例では、0、60、90 mM各濃度のフルフラールを加えたほかは実施例2と同様に発酵処理を行い、エタノールの生産能を確認した。
本実施例では、各種ホスファターゼ欠損株について、30 mMの酢酸を加えた場合と酢酸を加えない場合でのエタノールの生産能を比較した。以下の各種ホスファターゼ遺伝子を欠損させた酵母菌を用いたほかは実施例2と同様に発酵処理を行い、エタノールの生産能を確認した。
Claims (15)
- セルロース系バイオマスを原料とし、微生物の発酵によりエタノールを産生させる方法において、微生物が本来保有するホスファターゼのうち、少なくとも1種のホスファターゼの発現が抑制されるように組換えられた微生物を用いて、発酵阻害作用のある弱酸物質及び/又はフラン化合物を含む条件下で発酵させることを特徴とするエタノールの生産方法。
- 少なくとも1種のホスファターゼの発現抑制が、前記微生物のゲノム上に有するホスファターゼ遺伝子のうち、少なくとも1種のホスファターゼ遺伝子の一部又は全部を欠損することにより達成される、請求項1に記載のエタノールの生産方法。
- 発現が抑制されるホスファターゼが、APM3、PHO2、APL5、APL6、PHO4、PHO13、PHO85、PHO80、PHO9、PHO5及びPHO81からなるホスファターゼより選択される少なくとも1種のホスファターゼである、請求項1又は2に記載のエタノールの生産方法。
- 発現が抑制されるホスファターゼが、PHO2、PHO13、APL5及びAPL6からなるホスファターゼより選択される少なくとも1種のホスファターゼである、請求項3に記載のエタノールの生産方法。
- 弱酸物質が、酢酸、ギ酸から選択される少なくとも1種の物質である請求項1〜4のいずれか1に記載のエタノールの生産方法。
- 酢酸が10 mM〜100 mM含まれている条件下で、発酵させることを特徴とする請求項5に記載のエタノールの生産方法。
- ギ酸が5 mM〜50 mM含まれている条件下で、発酵させることを特徴とする請求項5に記載のエタノールの生産方法。
- フラン化合物が、フルフラールである請求項1〜7のいずれか1に記載のエタノールの生産方法。
- フルフラールが10 mM〜100 mM含まれている条件下で、発酵させることを特徴とする請求項8に記載のエタノールの生産方法。
- 微生物が、Saccharomyces属に属する酵母である、請求項1〜9のいずれか1に記載のエタノールの生産方法。
- Saccharomyces属に属する酵母が、キシロース資化性の酵母である、請求項10に記載のエタノールの生産方法。
- ゲノム上に有するホスファターゼ遺伝子のうち、少なくとも1種のホスファターゼ遺伝子の一部又は全部が欠損し、請求項1〜11のいずれか1に記載のエタノールの生産方法に利用される微生物。
- 微生物のゲノム上に有するホスファターゼ遺伝子のうち、少なくとも1種のホスファターゼ遺伝子の一部又は全部を欠損させることを特徴とする、酢酸、ギ酸、及びフルフラールから選択されるいずれか1種又は複数種の発酵阻害物質を含むバイオマス糖化液を原料としてエタノールを生産しうる微生物の作製方法。
- バイオマス糖化液に含まれる発酵阻害物質が、10 mM〜100 mMの酢酸、5 mM〜50 mMのギ酸、及び10 mM〜100 mMのフルフラールから選択されるいずれか1種又は複数種である、請求項13に記載の微生物の作製方法。
- 微生物がSaccharomyces属に属し、キシロース資化性の酵母である、請求項13又は14に記載の微生物の作製方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2011146931 | 2011-07-01 | ||
JP2011146931 | 2011-07-01 | ||
PCT/JP2012/066115 WO2013005595A1 (ja) | 2011-07-01 | 2012-06-25 | エタノールの新規生産方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2013005595A1 true JPWO2013005595A1 (ja) | 2015-02-23 |
JP5935020B2 JP5935020B2 (ja) | 2016-06-15 |
Family
ID=47436950
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2013522836A Active JP5935020B2 (ja) | 2011-07-01 | 2012-06-25 | エタノールの新規生産方法 |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20140120598A1 (ja) |
JP (1) | JP5935020B2 (ja) |
WO (1) | WO2013005595A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2015039348A (ja) * | 2013-08-22 | 2015-03-02 | 国立大学法人 筑波大学 | 微生物変異株、当該微生物変異株を用いた廃水処理方法及び廃水処理装置 |
US10280437B2 (en) | 2013-12-12 | 2019-05-07 | Jgc Corporation | Method for producing ethanol |
JP6887149B2 (ja) * | 2016-06-10 | 2021-06-16 | 国立大学法人北見工業大学 | 発酵阻害物質への耐性を有する新規ピキア属酵母 |
-
2012
- 2012-06-25 US US14/128,633 patent/US20140120598A1/en not_active Abandoned
- 2012-06-25 JP JP2013522836A patent/JP5935020B2/ja active Active
- 2012-06-25 WO PCT/JP2012/066115 patent/WO2013005595A1/ja active Application Filing
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
JPN6015053174; 日本農芸化学会2011年度大会講演要旨集 , 20110305, p. 272 (3C28p07) * |
JPN6015053175; Applied and Environmental Microbiology Vol.73, No.7, 2007, p. 2061-2066 * |
JPN6015053176; Metabolic Engineering Vol.10, 2008, p. 360-369 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2013005595A1 (ja) | 2013-01-10 |
JP5935020B2 (ja) | 2016-06-15 |
US20140120598A1 (en) | 2014-05-01 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Ma et al. | Combination of biological pretreatment with mild acid pretreatment for enzymatic hydrolysis and ethanol production from water hyacinth | |
Karagöz et al. | Alkaline peroxide pretreatment of rapeseed straw for enhancing bioethanol production by same vessel saccharification and co-fermentation | |
JP5325793B2 (ja) | リグニンを除去するために、アルカリ溶液で固体リグノセルロース材料を処理するステップを含む、固体リグノセルロース材料からのエタノールの発酵生産のための方法 | |
Yu et al. | Onsite bio-detoxification of steam-exploded corn stover for cellulosic ethanol production | |
US20210348198A1 (en) | Methods and systems for starch based propagation of a microorganism | |
Favaro et al. | Processing wheat bran into ethanol using mild treatments and highly fermentative yeasts | |
Montipó et al. | Integrated production of second generation ethanol and lactic acid from steam-exploded elephant grass | |
Kim | Enhancing bioethanol productivity using alkali‐pretreated empty palm fruit bunch fiber hydrolysate | |
WO2018072472A1 (zh) | 一种降低木质纤维素碱法预处理液中副产物抑制效应的方法及基于此方法制备纤维素乙醇 | |
US20150018584A1 (en) | Methods and Systems for Saccharification of Biomass | |
Guan et al. | Effects of Tween 80 on fermentative butanol production from alkali-pretreated switchgrass | |
Yu et al. | Production of bio-ethanol by integrating microwave-assisted dilute sulfuric acid pretreated sugarcane bagasse slurry with molasses | |
Jain et al. | Ethanol production from rice straw using thermotolerant Kluyveromyces sp. IIPE453 | |
JP5935020B2 (ja) | エタノールの新規生産方法 | |
Xie et al. | Efficient hydrolysis of corncob residue through cellulolytic enzymes from Trichoderma strain G26 and l-lactic acid preparation with the hydrolysate | |
Al-Tabib et al. | Production of acetone, butanol, and ethanol (ABE) by Clostridium acetobutylicum YM1 from pretreated palm kernel cake in batch culture fermentation | |
Avila-Gaxiola et al. | Ethanol production from Agave tequilana leaves powder by Saccharomyces cerevisiae yeast applying enzymatic saccharification without detoxification | |
US20220315886A1 (en) | Methods for propagating microorganisms for fermentation & related methods & systems | |
Sathendra et al. | Production of bioethanol from lignocellulosic banana peduncle waste using Kluveromyces marxianus | |
JP2014176351A (ja) | エタノールの生産方法 | |
JP5715930B2 (ja) | 新規酵母及びこれを用いたエタノールの生産方法 | |
Buyukoztekin et al. | Enzymatic hydrolysis of organosolv-pretreated corncob and succinic acid production by Actinobacillus succinogenes | |
US20160281117A1 (en) | Processes for consuming acetic acid during fermentation of cellulosic sugars, and products produced therefrom | |
Bhagwat et al. | Design and optimisation of enzymatic saccharification for bioethanol production from Parthenium hysterophorus biomass using response surface methodology | |
JP6327822B2 (ja) | 糸状菌を用いる木質系バイオマスからのエタノールの製造方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20141210 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20150304 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160107 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160215 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20160316 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20160404 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5935020 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |