本発明は、ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）を有効成分とする皮膚バリア機能改善作用及び保湿作用及び肌荒れ改善作用を有する皮膚状態改善剤に関する。
さらに詳しくは、ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）を含有することによって、皮膚の表皮機能の低下による表皮増殖性異常等を防止するために有用な皮膚バリア機能改善作用、紫外線を浴びたりすることによる皮膚のバリア機能障害を改善する皮膚バリア機能障害抑制作用及び外用剤に適した効果の優れた肌荒れ防止・改善作用を有することによる総合的に皮膚の諸症状を改善し、皮膚本来の機能を維持・正常化する皮膚状態改善剤に関する。The present invention relates to a skin condition improving agent having a skin barrier function improving action, a moisturizing action, and a rough skin improving action, comprising a zinc hyaluronate complex (aggregate) as an active ingredient.
More specifically, by containing a zinc hyaluronate complex (aggregate), the skin barrier function improving action useful for preventing epidermal growth abnormalities due to a decrease in skin epidermal function, exposure to ultraviolet rays, etc. Improves skin barrier dysfunction due to skin barrier dysfunction inhibiting action and excellent skin roughening prevention and improvement action suitable for external preparations comprehensively improves various skin symptoms and improves the original function of the skin The present invention relates to a skin condition improving agent that maintains and normalizes.
近年、環境の変化（オゾン層の破壊、温暖化、環境汚染など）や加齢、疾患、食生活の変化、精神ストレスや日焼け（紫外線の皮膚への影響）など外的または内的ストレス要因の増加により、肌のトラブル・悩みが多発してきている。このように、皮膚は物理的、化学的及び生物学的な種々の外的刺激を受けている。
皮膚は解剖学的に表皮、真皮、皮下組織に大別され、そのうちの表皮は基底層、有棘層、顆粒層、及び角層から構成されている。表皮の角層は非常に薄く、厚さ２０μｍにも満たないため、上記要因により、乾燥や肌荒れを引き起こしやすい。
皮膚症状の悪化は、掻痒、丘診、体液浸出、皮膚剥離、疥癬を伴うことが多く、これらを含めた総合的な改善効果がなければ、健康な皮膚を維持することはできない。従来、皮膚症状の総合的な改善のために、ステロイド剤の使用や漢方薬の内服などが行われているが、これらの作用は十分であるとはいえない。
本来、皮膚には皮膚バリア機能があり、上記の要因から生体を防御するものである。この機能が低下すると外界からの刺激で、肌荒れ、皮膚の汚染及び様々な皮膚炎等を起こす。さらに皮膚バリア機能の低下は、皮膚からの水分蒸散量を増加させ、皮膚の乾燥（ドライスキン）や痒みを引き起こす。
皮膚バリア機能低下を起こした場合、皮膚からの水分蒸散量が増加し、皮膚のかさつき、落屑の増加など乾燥肌症状が観察されることが報告されている。
種々の皮膚疾患等に見られる肌荒れ症状においては、皮膚からの水分の消失が、健常な皮膚に比べて盛んであることが知られている。このいわゆる経表皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ：Ｔｒａｎｓｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｗａｔｅｒ Ｌｏｓｓ）の増加には、表皮内において水分の保持やバリアとしての機能を担っていると考えられる成分の減少が関与しているものと考えられてきた。通常、皮膚バリア機能は、皮膚からの水分蒸散量（経表皮水分蒸散量；ＴＥＷＬ）で評価される。
皮膚バリア機能が低下すると、皮膚機能が低下し、皮膚増殖性異常等が起こることが報告されている。特に、高齢者の場合は、低下した皮膚バリア機能の回復には長い時間がかかり、加齢に伴う皮膚機能の低下による皮膚増殖性異常等を防止するために有効な新規の皮膚バリア機能改善剤の開発が要望されていた。
従来から、肌荒れ改善・予防効果を有する物質については多くの研究がなされてきたが、皮膚バリア機能の改善若しくは回復効果を有する物質についての研究は十分ではなく、皮膚バリア機能に対する改善効果と肌荒れ改善・予防効果との関係は明らかになっていないため、肌荒れ改善・予防効果がある物質が必ずしも皮膚バリア機能に対する改善効果があるとは限らない。
上記のような乾燥や肌荒れに対して、尿素、ヘパリン類似物質の様な保湿剤、ワセリンの様な皮膚からの水分蒸散を防ぐバリア機能改善剤又は高分子被覆フィルム等、その他ヒアルロン酸等のムコ多糖あるいはこれらの類似物質が、化粧料や皮膚外用剤に配合されている。
しかし、これらは効果が十分ではなかったり、また、べたつき感、違和感又は刺激感といった不快な使用感がある。また、乾燥による痒みを改善することができない。
これに対して、特開平１０−１８２３３２号公報や特開２０００−２１２２０３号公報等には化粧品用原料として、キトサン及びその誘導体が記載されているが、皮膚バリア機能改善作用や止痒効果については記載されていない。
また、本発明の構成物質であるヒアルロン酸を用いた皮膚バリア機能改善作用の特許出願もあるが、同様に皮膚バリア機能改善作用は十分であるとはいえない。
一方、健康な肌はしっとりと潤った状態となっているが、これは、皮脂膜と角質層が一体となって対外刺激から肌を守り、角質層の水分を維持しているためである。
しかし、湿度・気温の低下、紫外線、冷暖房による影響、新陳代謝機能の低下等の様々な原因により、皮膚細胞の生まれ変わりのリズムが狂ったり、十分な皮脂膜が形成されないと、肌に必要な水分が保てなくなり、カサついたり、肌荒れが起こるようになる。
そのため、皮膚表面の水分を調節して肌の乾燥を防ぐために様々な保湿剤が提案されている。従来、保湿成分としては、例えば、グリセリン、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、その他の多価アルコールをはじめ、油脂成分、アミノ酸、蛋白質、多糖類、ムコ多糖類等が利用されている。中でもヒアルロン酸は１ｇで６Ｌもの水分保持力があるといわれる保湿性の非常に高い保湿剤である。例えば、特許第２５４９１１９号には、ヒアルロン酸を含むことにより皮膚に対する不快感をなくした外用剤が提案されている。また、特公平１０−７０４３号公報には、ヒアルロン酸を含めて皮膚との親和性をよくした化粧料が提案されている。
特開平１０−１８２３３２号公報
特開２０００−２１２２０３号公報等
特許第２５４９１１９号
特公平１０−７０４３号公報
In recent years, external or internal stress factors such as environmental changes (depletion of the ozone layer, global warming, environmental pollution, etc.), aging, diseases, changes in dietary habits, mental stress and sunburn (effects of ultraviolet rays on the skin) Due to the increase, skin troubles and worries are occurring frequently. Thus, the skin is subjected to various physical, chemical and biological external stimuli.
Skin is anatomically divided into epidermis, dermis, and subcutaneous tissue, of which the epidermis is composed of a basal layer, a spiny layer, a granular layer, and a horny layer. Since the stratum corneum of the epidermis is very thin and less than 20 μm in thickness, it tends to cause dryness and rough skin due to the above factors.
Deterioration of skin symptoms is often accompanied by pruritus, palpation, fluid leaching, skin peeling, and scabies, and healthy skin cannot be maintained without comprehensive improvement effects including these. Conventionally, the use of steroids and oral medicines have been used to comprehensively improve skin symptoms, but these actions are not sufficient.
Originally, the skin has a skin barrier function and protects the living body from the above factors. When this function is reduced, external skin irritation causes rough skin, skin contamination, various dermatitis, and the like. Further, the decrease in the skin barrier function increases the amount of water transpiration from the skin, causing dry skin and itching.
It has been reported that when skin barrier function declines, the amount of water transpiration from the skin increases, and dry skin symptoms such as skin roughness and increased desquamation are observed.
It is known that in the rough skin symptoms seen in various skin diseases, the loss of moisture from the skin is more active than that of healthy skin. It has been considered that this increase in so-called transepidermal water loss (TEWL) is associated with a decrease in components that are thought to be responsible for moisture retention and barrier functions within the epidermis. It was. Usually, the skin barrier function is evaluated by the amount of water transpiration from the skin (transepidermal water transpiration amount; TEWL).
It has been reported that when the skin barrier function is lowered, the skin function is lowered and skin proliferative abnormality occurs. In particular, in the case of elderly people, it takes a long time to recover the lowered skin barrier function, and a novel skin barrier function improving agent that is effective for preventing abnormal skin growth due to a decrease in skin function with aging. The development of was requested.
Conventionally, many studies have been made on substances that have an effect of improving and preventing rough skin, but research on substances having an effect of improving or recovering skin barrier function is not sufficient, and an improvement effect on skin barrier function and an improvement of rough skin. -Since the relationship with the preventive effect has not been clarified, substances having a rough skin improving / preventing effect do not necessarily have an improving effect on the skin barrier function.
Against dryness and rough skin such as the above, moisturizers such as urea and heparin-like substances, vaseline-like barrier function improving agents that prevent the evaporation of moisture from the skin, polymer-coated films, and other mucos such as hyaluronic acid Polysaccharides or similar substances are blended in cosmetics and skin external preparations.
However, these are not effective enough and have an unpleasant feeling of use such as stickiness, discomfort or irritation. Further, it is not possible to improve stagnation due to drying.
On the other hand, chitosan and its derivatives are described as cosmetic raw materials in JP-A-10-182332 and JP-A-2000-212203, etc., but the skin barrier function improving action and antipruritic effect are described. Not listed.
There is also a patent application for improving skin barrier function using hyaluronic acid which is a constituent of the present invention, but it cannot be said that the skin barrier function improving action is also sufficient.
On the other hand, healthy skin is moist and moist, because the sebum membrane and the stratum corneum are integrated to protect the skin from external stimuli and maintain the moisture in the stratum corneum.
However, due to various causes such as lowering of humidity and temperature, ultraviolet rays, effects of heating and cooling, deterioration of metabolic function, etc., the renewal rhythm of skin cells will be out of order or sufficient sebum film will not be formed. You can't keep it, it will become dry and rough.
Therefore, various moisturizing agents have been proposed in order to adjust the moisture on the skin surface and prevent the skin from drying. Conventionally, as a moisturizing component, for example, glycerin, propylene glycol, 1,3-butylene glycol, other polyhydric alcohols, oil and fat components, amino acids, proteins, polysaccharides, mucopolysaccharides, and the like are used. Among them, hyaluronic acid is a moisturizing agent having a very high moisturizing property that is said to have a water holding capacity of 6 liters per gram. For example, Japanese Patent No. 2549119 proposes an external preparation containing hyaluronic acid that eliminates skin discomfort. In addition, Japanese Patent Publication No. 10-7043 proposes a cosmetic material including hyaluronic acid and having good affinity with the skin.
JP 10-182332 A JP 2000-212203 A, etc. Japanese Patent No. 2549119 Japanese Patent Publication No. 10-7043
本発明は、前記従来の課題に鑑みなされたもので、優れた皮膚バリア機能改善作用、皮膚保湿作用及び肌荒れ防止改善作用を有する皮膚状態改善剤を提供することを目的とする。すなわち、本発明者らは、従来技術の欠点のない、安定性が高く、外用に適した、皮膚の表皮機能の低下による表皮増殖性異常等を防止するために有用な皮膚バリア機能改善作用、紫外線を浴びたりすることによる皮膚のバリア機能障害を改善する皮膚バリア機能障害抑制作用及び効果の優れた肌荒れ防止・改善作用を有することによる総合的に皮膚の諸症状を改善し、皮膚本来の機能を維持・正常化する皮膚状態改善剤を提供することを目的とする。
本発明者らは、鋭意検討した結果、ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）を用いた外用剤が、優れた皮膚バリア機能改善効果及び保湿効果を有しており、皮膚状態改善剤として有用であることを見出し、本発明を完成させた。
すなわち、皮膚バリア機能の低下、すなわち、ＴＥＷＬの変化に対して修復・改善する物質について広く研究した結果、ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）がダメージを受けた皮膚バリア機能を極めて有意に回復させるという新たな知見を見出した。
また、本発明者らは、ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）を用いた外用剤が、皮膚からの水分蒸散を抑制する効果に優れていることを見出した。
そして、これらの個々の作用は、単独に観察される効果としても優れていることが実験結果によっても裏付けられているものであるが、これらの効果が総合されることにより、本発明が皮膚状態改善剤として特にすぐれた効果を有することを見出したものである。
従って、本発明は、ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）を含んで成る、皮膚状態改善剤を提供する。
本発明はまた、皮膚状態改善剤の製造のための、ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）の使用を提供する。
本発明はまた、皮膚状態の改善を必要とする患者に、ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）を投与することを特徴とする、皮膚状態の改善方法を提供する。
［発明の効果］
本発明によれば、優れた皮膚バリア機能改善効果と保湿効果を有する皮膚状態改善剤を提供することができる。さらにこれらの効果と共に良好な使用感とを両立することができる組成物を提供することができる。
本発明の皮膚状態改善組成物は、皮膚からの水分蒸散を抑制する効果に優れ、使用感がよく、乾燥した皮膚を健やかに保つ効果を有する。即ち、種々原因による皮膚の乾燥、例えば、環境の湿度低下、栄養障害、高齢化、皮膚疾患等による乾燥皮膚を改善することができる。本発明は、医薬品、化粧品等の分野に利用することができる。
本発明のヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）は、ヒアルロン酸（ナトリウム塩）、亜鉛（塩化物）及びこれらの単なる混合物に比べて高い効果を示し、複合体（会合物）であることによる相乗効果を示す。また、現在使用されている薬剤（尿素製剤やヘパリン類似物質製剤）よりも高い効果を示す。This invention is made | formed in view of the said conventional subject, and it aims at providing the skin condition improving agent which has the outstanding skin barrier function improvement effect | action, skin moisturizing effect, and rough skin prevention improvement effect. That is, the present inventors have a skin barrier function improving action useful for preventing epidermal growth abnormalities due to a decrease in skin epidermal function, which is free from defects of the prior art, is highly stable and suitable for external use, Improves skin barrier dysfunction caused by exposure to ultraviolet rays, and improves skin various symptoms due to skin barrier dysfunction inhibiting effect and effective skin roughening prevention / improving effect. An object of the present invention is to provide a skin condition improving agent that maintains and normalizes the skin.
As a result of intensive studies, the present inventors have found that an external preparation using a zinc hyaluronate complex (associate) has an excellent skin barrier function improving effect and moisturizing effect, and is useful as a skin condition improving agent. As a result, the present invention was completed.
That is, as a result of extensive research on substances that repair and improve the decrease in skin barrier function, that is, changes in TEWL, the zinc hyaluronate complex (associate) significantly restores damaged skin barrier function. I found a new finding.
In addition, the present inventors have found that an external preparation using a zinc hyaluronate complex (aggregate) is excellent in the effect of suppressing moisture evaporation from the skin.
And these individual actions are also proved by the experimental results that they are excellent as the effects that are observed independently, but by combining these effects, the present invention It has been found that it has a particularly excellent effect as an improving agent.
Therefore, the present invention provides a skin condition improving agent comprising a zinc hyaluronate complex (aggregate).
The present invention also provides the use of a zinc hyaluronate complex (associate) for the manufacture of a skin condition improving agent.
The present invention also provides a method for improving skin condition, comprising administering a zinc hyaluronate complex (aggregate) to a patient in need of improvement of skin condition.
[The invention's effect]
ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, the skin condition improving agent which has the outstanding skin barrier function improvement effect and moisturizing effect can be provided. Furthermore, it is possible to provide a composition capable of achieving both a good usability together with these effects.
The skin condition improving composition of the present invention is excellent in the effect of suppressing moisture transpiration from the skin, has a good feeling of use, and has an effect of keeping dry skin healthy. That is, it is possible to improve dryness of the skin due to various causes, for example, dryness due to a decrease in humidity of the environment, nutritional disorders, aging, skin diseases and the like. The present invention can be used in fields such as pharmaceuticals and cosmetics.
The zinc hyaluronate complex (associate) of the present invention exhibits a higher effect than hyaluronic acid (sodium salt), zinc (chloride) and a simple mixture thereof, and is synergistic by being a complex (associate). Show the effect. In addition, it shows a higher effect than currently used drugs (urea preparations and heparin analog preparations).
図１は、ブタの皮膚バリア機能障害部位にゲル基剤、０．１２５％、０．２５％、０．５％又は１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルを塗布したときのＴＥＷＬの経時的変化を示すグラフである。
図２は、ブタの皮膚バリア機能障害部位にゲル基剤、０．１２５％、０．２５％、０．５％又は１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルを塗布したときのＴＥＷＬのＡＵＣを示すグラフである。ゲル基剤及びヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルの傾向性検定において危険率１％で有意差がある事を示す（Ｊｏｎｃｋｈｅｅｒｅの傾向性検定）。
図３は、ブタの皮膚バリア機能障害部位に１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲル、０．３％ヘパリン類似物質軟膏、２０％尿素軟膏、ゲル基剤又は親水軟膏基剤を塗布したときのＴＥＷＬの経時的変化を示すグラフである。
図４は、ブタの皮膚バリア機能障害部位に１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲル、０．３％ヘパリン類似物質軟膏、２０％尿素軟膏、ゲル基剤又は親水軟膏基剤を塗布したときのＴＥＷＬのＡＵＣを示すグラフである。
図５は、ブタの皮膚バリア機能障害部位に１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲル、０．９７６％ヒアルロン酸ナトリウムゲル、０．１６６％塩化亜鉛ゲル、ヒアルロン酸ナトリウム−塩化亜鉛の混合物ゲル、ゲル基剤又はＮａＣｌ含有ゲル基剤を塗布したときのＴＥＷＬの経時的変化を示すグラフである。１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルとヒアルロン酸ナトリウム−塩化亜鉛の混合物ゲルとの二元配置分散分析の結果、４、２４及び９６時間目に１％、４８時間目に５％の有意差が存在する。
図６は、ブタの皮膚バリア機能障害部位に１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲル、０．９７６％ヒアルロン酸ナトリウムゲル、０．１６６％塩化亜鉛ゲル、ヒアルロン酸ナトリウム−塩化亜鉛の混合物ゲル、ゲル基剤又はＮａＣｌ含有ゲル基剤を塗布したときのＴＥＷＬのＡＵＣを示すグラフである。
図７は、ＳＬＳによる皮膚バリア機能障害を誘発させたモルモットにゲル基剤、０．１２５％、０．２５％、０．５％、０．７５％又は１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルを塗布したときのＴＥＷＬの経時的変化を示すグラフである。
図８は、ＳＬＳによる皮膚バリア機能障害を誘発させたモルモットにゲル基剤、０．１２５％、０．２５％、０．５％、０．７５％又は１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルを塗布したときのＴＥＷＬの６日間の累計を示すグラフである。ゲル基剤及びヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルの傾向性検定において危険率１％で有意差が存在する（Ｊｏｎｃｋｈｅｅｒｅの傾向性検定）。
図９は、ＳＬＳによる皮膚バリア機能障害を誘発させたモルモットにゲル基剤、０．５％、１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲル、親水軟膏基剤、０．３％ヘパリン類似物質軟膏又は２０％尿素軟膏を塗布したときのＴＥＷＬの経時的変化を示すグラフである。
図１０は、ＳＬＳによる皮膚バリア機能障害を誘発させたモルモットにゲル基剤、０．５％、１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲル、親水軟膏基剤、０．３％ヘパリン類似物質軟膏又は２０％尿素軟膏を塗布したときのＴＥＷＬの６日間の累計を示すグラフである。
図１１は、ＳＬＳによる皮膚バリア機能障害を誘発させたモルモットに１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲル、０．９７６％ヒアルロン酸ナトリウムゲル、０．１６６％塩化亜鉛ゲル、ヒアルロン酸ナトリウム−塩化亜鉛の混合物ゲル、ゲル基剤又はＮａＣｌ含有ゲル基剤を塗布したときのＴＥＷＬの経時的変化を示すグラフである。
図１２は、ＳＬＳによる皮膚バリア機能障害を誘発させたモルモットに１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲル、０．９７６％ヒアルロン酸ナトリウムゲル、０．１６６％塩化亜鉛ゲル、ヒアルロン酸ナトリウム−塩化亜鉛の混合物ゲル、ゲル基剤又はＮａＣｌ含有ゲル基剤を塗布したときのＴＥＷＬの６日間の累計を示すグラフである。
図１３は、ＳＬＳによる皮膚障害モデルを誘発させたモルモットにゲル基剤、０．１２５、０．２５、０．５、０．７５又は１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルを塗布したときの角層水分量の経時変化を示すグラフである。数値は１５例の平均値及び標準誤差を示す。
図１４は、ＳＬＳによる皮膚障害モデルを誘発させたモルモットに、ゲル基剤、１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）、０．９７６％ヒアルロン酸ナトリウムゲル、又は０．１６６ＺｎＣｌ２ゲルを塗布したときの角層水分量の経時変化を示すグラフである。数値は１５例の平均値及び標準誤差を示す。
図１５は、ＳＬＳによる皮膚障害モデルを誘発させたモルモットに、ゲル基剤、１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲル又は混合物ゲルを塗布したときの角層水分量の経時変化を示すグラフである。数値は１５例の平均値及び標準誤差を示す。
図１６は、ＳＬＳによる皮膚障害モデルを誘発させたモルモットに、ゲル基剤、０．５％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲル又は１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルを塗布したときの角層水分量の経時変化を示すグラフである。数値は１５例の平均値及び標準誤差を示す。
図１７は、ＳＬＳによる皮膚障害モデルを誘発させたモルモットに、０．５％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲル、１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲル、０．３％ヘパリン類似物質軟膏、又は２０％尿素軟膏を塗布したときの角層水分量の経時変化を示すグラフである。数値は１５例の平均値及び標準誤差を示す。FIG. 1 shows that TEWL when a gel base, 0.125%, 0.25%, 0.5%, or 1% zinc hyaluronate complex (associate) gel is applied to a skin barrier dysfunction site in pigs. It is a graph which shows a time-dependent change.
FIG. 2 shows that TEWL when a gel base, 0.125%, 0.25%, 0.5%, or 1% zinc hyaluronate complex (associate) gel was applied to a skin barrier dysfunction site in pigs. It is a graph which shows AUC. In the tendency test of the gel base and the zinc hyaluronate complex (aggregate) gel, it is shown that there is a significant difference at a risk rate of 1% (Jonckheere's tendency test).
FIG. 3 shows that 1% zinc hyaluronate complex (aggregate) gel, 0.3% heparin analog ointment, 20% urea ointment, gel base or hydrophilic ointment base was applied to the skin barrier dysfunction site in pigs. It is a graph which shows a time-dependent change of TEWL at the time.
FIG. 4 shows that 1% zinc hyaluronate complex (aggregate) gel, 0.3% heparin analog ointment, 20% urea ointment, gel base or hydrophilic ointment base was applied to the skin barrier dysfunction site in pigs. It is a graph which shows AUC of TEWL at the time.
FIG. 5 shows a 1% zinc hyaluronate complex (associate) gel, 0.976% sodium hyaluronate gel, 0.166% zinc chloride gel, sodium hyaluronate-zinc chloride mixture at the skin barrier dysfunction site in pigs. It is a graph which shows a time-dependent change of TEWL when apply | coating a gel, a gel base, or a NaCl containing gel base. Two-way ANOVA of 1% zinc hyaluronate complex (associate) gel and sodium hyaluronate-zinc chloride mixture gel showed 1% at 4, 24 and 96 hours and 5% at 48 hours. There is a significant difference.
FIG. 6 shows a 1% zinc hyaluronate complex (associate) gel, 0.976% sodium hyaluronate gel, 0.166% zinc chloride gel, sodium hyaluronate-zinc chloride mixture at the skin barrier dysfunction site in pigs. It is a graph which shows AUC of TEWL when apply | coating a gel, a gel base, or a NaCl containing gel base.
FIG. 7 shows a gel base, 0.125%, 0.25%, 0.5%, 0.75%, or 1% zinc hyaluronate complex (associate) on guinea pigs that induced skin barrier dysfunction by SLS. ) It is a graph showing a change with time of TEWL when a gel is applied.
FIG. 8 shows a gel base, 0.125%, 0.25%, 0.5%, 0.75% or 1% zinc hyaluronate complex (associate) on guinea pigs in which skin barrier dysfunction was induced by SLS. ) A graph showing the cumulative total of 6 days of TEWL when a gel is applied. There is a significant difference in the tendency test of gel base and zinc hyaluronate complex (aggregate) gel with a risk rate of 1% (Jonckheere's tendency test).
FIG. 9 shows a gel base, 0.5%, 1% zinc hyaluronate complex (associate) gel, hydrophilic ointment base, 0.3% heparin-like substance in guinea pigs in which skin barrier dysfunction was induced by SLS. It is a graph which shows a time-dependent change of TEWL when an ointment or 20% urea ointment is applied.
FIG. 10 shows a gel base, 0.5%, 1% zinc hyaluronate complex (associate) gel, hydrophilic ointment base, 0.3% heparin-like substance in guinea pigs in which skin barrier dysfunction was induced by SLS. It is a graph which shows the total for 6 days of TEWL when an ointment or 20% urea ointment is applied.
FIG. 11 shows that 1% zinc hyaluronate complex (aggregate) gel, 0.976% sodium hyaluronate gel, 0.166% zinc chloride gel, sodium hyaluronate-in guinea pigs in which skin barrier dysfunction induced by SLS was induced. It is a graph which shows a time-dependent change of TEWL when apply | coating the mixture gel of a zinc chloride, a gel base, or a NaCl containing gel base.
FIG. 12 shows that a 1% zinc hyaluronate complex (associate) gel, 0.976% sodium hyaluronate gel, 0.166% zinc chloride gel, sodium hyaluronate- It is a graph which shows the cumulative total for 6 days of TEWL when a zinc chloride mixture gel, gel base or NaCl-containing gel base is applied.
FIG. 13 shows that a gel base, 0.125, 0.25, 0.5, 0.75, or 1% zinc hyaluronate complex (associate) gel was applied to a guinea pig that induced a skin damage model by SLS. It is a graph which shows a time-dependent change of a stratum corneum moisture content. The numerical value shows the average value and standard error of 15 cases.
FIG. 14 shows that a gel base, 1% zinc hyaluronate complex (aggregate), 0.976% sodium hyaluronate gel, or 0.166 ZnCl 2 gel was applied to a guinea pig in which a skin damage model by SLS was induced. It is a graph which shows a time-dependent change of a stratum corneum moisture content. The numerical value shows the average value and standard error of 15 cases.
FIG. 15 is a graph showing the time course change of the stratum corneum water content when a gel base, 1% zinc hyaluronate complex (aggregate) gel or mixture gel was applied to a guinea pig in which a skin damage model by SLS was induced. It is. The numerical value shows the average value and standard error of 15 cases.
FIG. 16 shows that a gel base, 0.5% zinc hyaluronate complex (aggregate) gel or 1% zinc hyaluronate complex (aggregate) gel was applied to a guinea pig in which a skin damage model by SLS was induced. It is a graph which shows a time-dependent change of a stratum corneum moisture content. The numerical value shows the average value and standard error of 15 cases.
FIG. 17 shows that 0.5% zinc hyaluronate complex (aggregate) gel, 1% zinc hyaluronate complex (aggregate) gel, 0.3% heparin-like was applied to a guinea pig in which the skin damage model by SLS was induced. It is a graph which shows a time-dependent change of the stratum corneum moisture content when a substance ointment or 20% urea ointment is applied. The numerical value shows the average value and standard error of 15 cases.
ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）
本発明の活性成分は、ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）である。ヒアルロン酸は通常ナトリウム塩として存在し、Ｍｅｙｅｔら、Ｊ，ＢｉｏｌＣｈｅｍ、Ｖｏｌ，１０７，ｐ，６２９（１９３４）により記載された巨大分子である。ヒアルロン酸は、β１，３−グルクロン酸成分とβ１，４−グルコサミン成分とを交互に有する高粘性グルコサミノグリカンであり、その分子量は５０ｋＤ〜数百万Ｄである。ヒアルロン酸はすべての哺乳類の結合組織に見出され、皮膚、目の硝子体、滑液、麟帯及び軟骨組織に高レベルで存在する。ヒアルロン酸は結合組織の基礎的な成分であるため、生物適合性であり、生物吸着性であり、且つ免疫原性でない。このため、ヒアルロン酸は、関節軟骨の潤滑性及び保護のごとき多くの生物学的機能を演じている。
本発明のヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）において、ヒアルロン酸と亜鉛との比率は、これらの成分が、皮膚バリア機能改善剤として相乗的作用を発揮する範囲であり、重量比として、ヒアルロン酸：亜鉛が約５：１〜２０：１の範囲であり、好ましくは約１０：１である。本発明において使用するヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）の平均分子量は好ましくは約１００ｋＤ〜２，０００ｋＤであり、更に好ましくは安定性や製剤設計性の観点から約４００〜１，２００ｋＤの範囲であり、例えば約１０００ｋＤの平均分子量が好ましい。本発明の、ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）は、例えばヒアルロン酸ナトリウムの水溶液と亜鉛塩、例えば塩化亜鉛の水溶液とを混合することにより製造することができる（ヨーロッパ特許明細書Ｎｏ−ＥＰ０４１３０１６）。
ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）は、物理的最大投与量２００ｍｇ／ｋｇでラット及びマウスに皮下投与しても、全身性の毒性症状は認められなかった。
添加物など
上記皮膚バリア機能障害改善剤を皮膚外用剤に用いる場合、本発明必須成分に加えて、化粧品及び／又は皮膚科学的領域において常套的に使用される付加的な成分を必要に応じて適宜配合することができる。すなわち、本発明の効果を損なわない範囲内で、通常化粧料や医薬品等の皮膚外用剤に用いられる他の成分、例えば、保湿剤、油性成分、界面活性剤、ビタミン類、蛋白分解酵素、増粘剤、防腐剤、粉体、酸化防止剤、紫外線吸収剤、乳化剤、香料、化粧品用又は製薬用活性剤、ビタミン類、必須脂肪酸、スフィンゴ脂質、自己サンタン剤、サンスクリーン剤、皮膜形成ポリマー、着色料、顔料、アルコール類、色材、水性成分、水、各種皮膚栄養剤等を必要に応じて適宜配合することができる。言うまでもなく、当業者であれば、考えられる添加により、本発明の組成物の有利な特性が悪影響を受けないか、実質的に受けないように留意して、任意の付加的な化合物及び／又はその量を選択するであろう。
保湿剤
保湿剤としては、例えば、グリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、１、３−ブチレングリコール等の多価アルコール、ソルビット、マンニット等の糖アルコール、コンドロイチン硫酸塩、キトサン等の水溶性高分子、尿素、乳酸ナトリウム、ピロリドンカルボン酸、コラーゲン、乳酸ナトリウム、ｄｌ−ピロリドンカルボン酸塩、ヨクイニン抽出物、黒糖抽出物及びキトサン誘導体塩等が挙げられ、その他にも、ヘパリン類似物質、コラーゲン、γ−オリザノール、γ−リノレイン酸、リノール酸、ビタミンＥ、ビタミンＤ、ビタミンＡ、スクワレン、スクワラン、コレステロール、トリグリセリド、セラミド等が挙げられる。
油性成分
油性成分としては、例えば、大豆油、ヌカ油、アボガド油、アーモンド油、オリーブ油、カカオ脂、ゴマ油、パーシック油、ヒマシ油、ヤシ油、ミンク油、牛脂、豚脂等の天然油脂、これらの天然油脂を水素添加して得られる硬化油及びミリスチン酸グリセリド、２−エチルヘキサン酸グリセリド等の合成グリセリド、ジグリセリド等の油脂類、ホホバ油、カルナウバロウ、鯨ロウ、ミツロウ、ラノリン等のロウ類、流動パラフィン、ワセリン、パラフィン、マイクロクリスタリンワックス、セレシン、スクワラン、プリスタン等の炭化水素類、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ラノリン酸、イソステアリン酸等の高級脂肪酸類、ラウリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、コレステロール、２−ヘキシルデカノール、ホホバアルコール等の高級アルコール類、オクタン酸セチル、乳酸ミリスチル、乳酸セチル、ミリスチン酸ミリスチル、ミリスチン酸オクチルドデシル、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、アジピン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、オレイン酸デシル、イソステアリン酸コレステロール等のエステル類、精油類及びシリコーン油類が挙げられる。
界面活性剤
界面活性剤としては、例えば、グリセリン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、テトラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビット、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンヒマシ油、ポリグリセリン脂肪酸エステル、脂肪酸モノグリセライド、ショ糖脂肪酸エステル、高級脂肪酸アルカノールアミド等の非イオン性界面活性剤、α−オレフィンスルホン酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、セチル硫酸ナトリウム、ポリオキシエチレンラウリル硫酸ナトリウム、スルホコハク酸ラウリル二ナトリウム、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、分岐鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、アルキル硫酸塩、アルケニル硫酸塩、エチレンオキサイド及び／又はプロピレンオキサイドを付加したアルキルエーテルカルボン酸塩又はアルケニルエーテルカルボン酸塩、α−スルホ脂肪酸エステル、アミノ酸型界面活性剤、リン酸エステル型界面活性剤、タウリン型界面活性剤、アマイドエーテルサルフェート型界面活性剤等の陰イオン性界面活性剤、カルボキシベタイン型、アミノカルボン酸、スルホベタイン型等の両性界面活性剤及び４級アンモニウム塩等の陽イオン性界面活性剤が挙げられるが、安全性の面から非イオン性界面活性剤が特に好ましい。
ビタミン類
ビタミン類としては、例えば、ビタミンＡ、ビタミンＢ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＦ、ビタミンＫ、ビタミンＰ、ビタミンＵが挙げられる。
蛋白分解酵素
蛋白分解酵素としては、例えば、ペプシン、トリプシン、キモトリプシン、カテプシン、パパイン、ブロメライン、フィシン及び細菌、酵母、カビ由来のプロテアーゼ等が挙げられる。
増粘剤
増粘剤としては、例えばカルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルアルコール、カラギーナン、ゼラチン、キサンタンガム、ポリアクリル酸塩等の水溶性高分子化合物、塩化カリウム等の無機塩が挙げられる。
防腐剤
防腐剤としては、例えばフェノキシエタノール、メチルパラベン、エチルパラベン、ブチルパラベン、安息香酸ナトリウム等が挙げられる。
粉体
粉体としては、例えばタルク、セリサイト、マイカ、カオリン、シリカ、ベントナイト、バーミキュライト、亜鉛華、雲母、雲母チタン、酸化チタン、酸化マグネシウム、酸化ジルコニウム、硫酸バリウム、ベンガラ、酸化鉄、群青等が挙げられる。その他の成分としては、香料、色素、殺菌剤等を挙げることができる。
剤形
本発明の皮膚バリア機能改善組成物の剤形としては特に限定されず、例えば、軟膏剤、クリーム剤、液剤、ゲル剤、ゾル剤、水溶液剤、アルコール剤、グリセリン・グリコール剤、油剤、懸濁型ローション剤、乳剤型ローション剤、ニス剤、湿布剤、噴霧剤等が挙げられる。
軟膏剤
軟膏剤は、通常の軟膏剤を製造する方法を用いることにより製造できる。例えば、活性成分と基剤とを加温攪拌し、加温分散させた後、攪拌下、室温に冷却することにより製造できる。
クリーム剤
クリーム剤は、通常、クリーム剤を製造する方法を用いることにより製造できる。例えば、まず基剤を加熱攪拌下に製造し、これに、活性成分自体又はこれを含有する溶液を、加熱撹件下に添加し、生じた乳化液を室温に冷却することにより製造できる。
ローション剤
ローション剤は、通常、ローション剤を製造する方法を用いることにより製造でき、例えば、油性基剤又は、加温融解した油性基剤と水性基剤の混合基剤に、活性成分自体又はこれを含有する溶液を加熱攪拌下に添加し、次いで、水性基剤を添加して、生じた液体を室温に冷却することにより製造できる。
貼付剤
貼付剤は、通常、貼付剤を製造する方法を用いることにより製造でき、例えば、加温融解した油性基剤と水性基剤の混合基剤に、添加剤を攪拌しながら加え、これに、活性成分自体又はこれを含有する溶液を加熱攪拌下に添加し、得られた膏体を不織布に展延し、適当な大きさに裁断することにより、または、加温融解した油性基剤の混合基剤に、活性成分自体又はこれを含有する溶液を加熱攪拌下に添加し、次いで、これを、合成樹脂の加温融解した混合物に攪拌しながら添加し、得られた膏体を不織布又は織布に展延し、適当な大きさに裁断することにより製造できる。
支持体
支持体を用いる場合は、その剤型に応じて適宜選択されるが、有効成分が不透過又は難透過性で柔軟なものが好ましく、例えば、酢酸セルロース、エチルセルロース、ポリエチレン、ポリプロピレン、ボリ塩化ビール、酢酸ビニル−塩化ビニル共重合体、エチレン−酢酸ビニル共重合体、エチレン−酢酸ビニル−一酸化炭素共重合体、エチレン−ブチルアクリレート−一酸化炭素共重合体、ポリ塩化ビニリデン、ポリウレタン、ナイロン、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート等の樹脂フィルム、アルミニウムシート、織布、不織布等、及びこれらの積層シート等が挙げられる。
粘着剤
粘着剤を使用する場合は、薬学的に許容しうるものであればよく、従来公知のものを用いることができ、例えば、アクリル系粘着剤、ゴム系粘着剤、シリコン系粘着剤、ウレタン系粘着剤等が挙げられ、アクリル系粘着剤、ゴム系粘着剤が好適に用いられる。また上記支持体上に展延する際には、粘着剤の性状としては、溶剤系、エマルジョン系ホソトメルト系等の任意のものを用いることができる。
さらに必要に応じて、カオリン、ベントナイト、酸化チタン等の無機充填剤、粘度調整剤、老化防止剤、ｐＨ調整剤、グリセリン、ブロピレングリコール等の保湿剤、緩衝剤、防腐剤、香料等を添加してもよい。
ゲル剤
ゲル剤は、通常、ゲル剤を製造する方法を用いることにより製造でき、例えば、ゲル基剤を均一に溶解した後、有効成分を加え、加温し、溶解、分散等させることにより製造できるなど、いずれの剤形も通常の製法で造ることができる。
また、その使用形態も任意であり、例えば化粧水、クリーム、乳液、ローション、パック、軟膏、ムース、及び石けんの他、ファンデーション、アイシャドー、しみ・隈カバー、リップクリーム、マスカラ、口紅、ボディ用メークアップ製品等のメークアップ化粧料、ヘアーリンス、シャンプー、皮膚の日焼け止めクリームまたは日焼け用クリーム、さらには皮膚科用軟膏、浴用剤等、従来化粧品及び／又は皮膚科学的領域において用いるものであれば何れの形態でも使用することができる。
本発明の皮膚バリア機能改善組成物の製造方法としては特に限定されず、従来公知の方法により製造することができる。
本発明の皮膚バリア機能障害改善剤は皮膚外用剤として用いられ、上記のような組成物を被験者の皮膚局所または身体の皮膚全体へ経皮的に投与する。その場合のヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）の配合量は、外用剤全量中に乾燥重量として０．０００１〜５％配合するのが好ましく、特に０．０１〜３％が好ましい。この範囲を下回ると表皮水分蒸散量抑制効果、つまり皮膚バリア機能障害改善効果が十分に発揮され難く、この範囲を越えて配合するとべたつき、使用感の低下の問題などが起こるので好ましくない。
本発明の皮膚バリア機能改善組成物の適用量は、濃度や塗布する部位の状態により特に限定されないが、通常は１日に１〜数回、０．０１〜１０ｇ／１回程度で適用することが好ましい。
効果確認実験
皮膚バリア機能改善効果試験
本発明において、皮膚バリア機能改善効果は様々な方法で評価することができ、例えば、哺乳動物（例えばヒト、マウス、ラット、ウサギ等）の皮膚にテープストリッピングを施すことによって破壊された皮膚バリア機能がもとの状態へ回復していく過程を経表皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ）を指標として評価することにより、定量的又は定性的に測定することができる。かかる測定は、例えば下記の通りにして実施することができる。
皮膚保湿作用効果試験
本発明において、皮膚保湿作用効果は様々な方法で評価することができ、例えば、哺乳動物（例えばモルモット等）の皮膚にＳＬＳ（ラウリル硫酸ナトリウム）誘発による紅斑程度の皮膚炎を伴う皮膚障害モデル対するヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）の角層水分量に及ぼす影響を見ることで測定することができる。かかる測定は、例えば下記の通りにして実施することができる。 Zinc hyaluronate complex (aggregate)
The active ingredient of the present invention is a zinc hyaluronate complex (associate). Hyaluronic acid usually exists as a sodium salt and is a macromolecule described by Meyet et al., J, BiolChem, Vol, 107, p, 629 (1934). Hyaluronic acid is a highly viscous glucosaminoglycan having a β1,3-glucuronic acid component and a β1,4-glucosamine component alternately, and has a molecular weight of 50 kD to several million D. Hyaluronic acid is found in all mammalian connective tissues and is present at high levels in the skin, the vitreous body of the eye, synovial fluid, ligaments and cartilage tissue. Since hyaluronic acid is a fundamental component of connective tissue, it is biocompatible, biosorbable and not immunogenic. For this reason, hyaluronic acid performs many biological functions such as lubricity and protection of articular cartilage.
In the zinc hyaluronate complex (associate) of the present invention, the ratio of hyaluronic acid to zinc is a range in which these components exert a synergistic action as a skin barrier function improving agent, and the hyaluronic acid as a weight ratio. : Zinc ranges from about 5: 1 to 20: 1, preferably about 10: 1. The average molecular weight of the zinc hyaluronate complex (aggregate) used in the present invention is preferably about 100 kD to 2,000 kD, and more preferably about 400 to 1,200 kD from the viewpoint of stability and formulation design. For example, an average molecular weight of about 1000 kD is preferred. The zinc hyaluronate complex (associate) of the present invention can be produced, for example, by mixing an aqueous solution of sodium hyaluronate and a zinc salt such as an aqueous solution of zinc chloride (European Patent Specification No. EP0413016). .
The zinc hyaluronate complex (aggregate) was not subcutaneously administered to rats and mice at a physical maximum dose of 200 mg / kg, and no systemic toxic symptoms were observed.
When the above-mentioned skin barrier dysfunction improving agent such as an additive is used in a skin external preparation, in addition to the essential components of the present invention, additional components that are conventionally used in the cosmetics and / or dermatological field are added as necessary. It can mix | blend suitably. That is, within the range not impairing the effects of the present invention, other ingredients usually used in external preparations for skin, such as cosmetics and pharmaceuticals, such as moisturizers, oily ingredients, surfactants, vitamins, proteolytic enzymes, Sticky agent, preservative, powder, antioxidant, UV absorber, emulsifier, fragrance, cosmetic or pharmaceutical active agent, vitamins, essential fatty acids, sphingolipids, self-suntan agent, sunscreen agent, film-forming polymer, Colorants, pigments, alcohols, color materials, aqueous components, water, various skin nutrients, and the like can be appropriately blended as necessary. Of course, one skilled in the art will note that any additional compound and / or that the addition of possible additions does not adversely affect or substantially affect the advantageous properties of the composition of the present invention. You will choose that amount.
Moisturizer Examples of the moisturizer include polyhydric alcohols such as glycerin, propylene glycol, polyethylene glycol, and 1,3-butylene glycol, sugar alcohols such as sorbit and mannitol, water-soluble polymers such as chondroitin sulfate and chitosan, Urea, sodium lactate, pyrrolidone carboxylic acid, collagen, sodium lactate, dl-pyrrolidone carboxylate, yokuinin extract, brown sugar extract, chitosan derivative salt, etc., other heparin analogs, collagen, γ-oryzanol , Γ-linolenic acid, linoleic acid, vitamin E, vitamin D, vitamin A, squalene, squalane, cholesterol, triglyceride, ceramide and the like.
Oily components Examples of oily components include soybean oil, nutka oil, avocado oil, almond oil, olive oil, cacao butter, sesame oil, persic oil, castor oil, coconut oil, mink oil, beef tallow, pork fat, and the like. Hardened oil obtained by hydrogenation of natural fats and oils, synthetic glycerides such as myristic acid glyceride and 2-ethylhexanoic acid glyceride, fats and oils such as diglyceride, jojoba oil, carnauba wax, whale wax, beeswax, waxes such as lanolin, Hydrocarbons such as liquid paraffin, petrolatum, paraffin, microcrystalline wax, ceresin, squalane, pristane, lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, behenic acid, oleic acid, linoleic acid, linolenic acid, lanolinic acid, isostearin Higher fatty acids such as acids, lauryl alcohol, Higher alcohols such as til alcohol, stearyl alcohol, oleyl alcohol, cholesterol, 2-hexyldecanol, jojoba alcohol, cetyl octoate, myristyl lactate, cetyl lactate, myristyl myristate, octyldodecyl myristate, isopropyl myristate, isopropyl palmitate, Examples include esters such as isopropyl adipate, butyl stearate, decyl oleate, and cholesterol isostearate, essential oils, and silicone oils.
Surfactant As the surfactant, for example, glycerin fatty acid ester, propylene glycol fatty acid ester, sorbitan fatty acid ester, polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester, tetraoleic acid polyoxyethylene sorbitol, polyoxyethylene alkyl ether, polyoxyethylene polyoxy Nonionic such as propylene alkyl ether, polyoxyethylene alkyl phenyl ether, polyoxyethylene fatty acid ester, polyethylene glycol fatty acid ester, polyoxyethylene castor oil, polyglycerin fatty acid ester, fatty acid monoglyceride, sucrose fatty acid ester, higher fatty acid alkanolamide Surfactant, sodium α-olefin sulfonate, sodium lauryl sulfate, sodium cetyl sulfate, Sodium oxyethylene lauryl sulfate, disodium lauryl sulfosuccinate, linear alkyl benzene sulfonate, branched alkyl benzene sulfonate, alkyl sulfate, alkenyl sulfate, alkyl ether carboxylate added with ethylene oxide and / or propylene oxide or Anionic surfactants such as alkenyl ether carboxylate, α-sulfo fatty acid ester, amino acid type surfactant, phosphate ester type surfactant, taurine type surfactant, amide ether sulfate type surfactant, carboxybetaine Type, aminocarboxylic acid, sulfobetaine type and other amphoteric surfactants and quaternary ammonium salt and other cationic surfactants. Nonionic surfactants are particularly preferred from the viewpoint of safety.
Vitamins Examples of vitamins include vitamin A, vitamin B, vitamin C, vitamin D, vitamin E, vitamin F, vitamin K, vitamin P, and vitamin U.
Proteolytic enzymes Examples of the proteolytic enzymes include pepsin, trypsin, chymotrypsin, cathepsin, papain, bromelain, ficin, bacteria, yeast, and mold-derived protease.
Thickener Examples of the thickener include water-soluble polymer compounds such as carboxyvinyl polymer, carboxymethylcellulose, polyvinyl alcohol, carrageenan, gelatin, xanthan gum, polyacrylate, and inorganic salts such as potassium chloride.
Preservative Examples of the preservative include phenoxyethanol, methyl paraben, ethyl paraben, butyl paraben, sodium benzoate and the like.
Powder Examples of powder include talc, sericite, mica, kaolin, silica, bentonite, vermiculite, zinc white, mica, mica titanium, titanium oxide, magnesium oxide, zirconium oxide, barium sulfate, bengara, iron oxide, ultramarine, etc. Is mentioned. Examples of other components include fragrances, pigments, and bactericides.
Dosage form The dosage form of the skin barrier function improving composition of the present invention is not particularly limited, and examples thereof include ointments, creams, liquids, gels, sols, aqueous solutions, alcohols, glycerin / glycols, oils, Suspension lotions, emulsion lotions, varnishes, poultices, sprays and the like can be mentioned.
Ointment An ointment can be manufactured by using the method of manufacturing a normal ointment. For example, the active ingredient and the base can be heated and stirred, dispersed by heating, and then cooled to room temperature with stirring.
Cream The cream can be usually produced by using a method for producing a cream. For example, it can be produced by first preparing the base under heating and stirring, adding the active ingredient itself or a solution containing the base to the heating under stirring, and cooling the resulting emulsion to room temperature.
Lotions Lotions can usually be produced by using a method for producing a lotion. For example, an active ingredient itself or a mixture of an oily base or a heated and melted oily base and an aqueous base can be used. Can be prepared by adding a solution containing the solution under heating and stirring, then adding an aqueous base and cooling the resulting liquid to room temperature.
A patch patch can be usually produced by using a method for producing a patch. For example, an additive is added to a mixed base of a heated and melted oily base and an aqueous base with stirring. The active ingredient itself or a solution containing it is added under heating and stirring, and the resulting plaster is spread on a non-woven fabric and cut into an appropriate size or by heating and melting the oily base. To the mixed base, the active ingredient itself or a solution containing the active ingredient is added with heating and stirring, and then this is added to the heated and melted mixture of the synthetic resin with stirring, and the resulting plaster is added to the nonwoven fabric or It can be manufactured by spreading on a woven fabric and cutting it into an appropriate size.
When the support is used, it is appropriately selected depending on the dosage form, but the active ingredient is preferably impermeable or hardly permeable and flexible, for example, cellulose acetate, ethyl cellulose, polyethylene, polypropylene, polychlorinated Beer, vinyl acetate-vinyl chloride copolymer, ethylene-vinyl acetate copolymer, ethylene-vinyl acetate-carbon monoxide copolymer, ethylene-butyl acrylate-carbon monoxide copolymer, polyvinylidene chloride, polyurethane, nylon Resin films such as polyethylene terephthalate and polybutylene terephthalate, aluminum sheets, woven fabrics, nonwoven fabrics, and laminated sheets thereof.
In the case of using the pressure- sensitive adhesive pressure-sensitive adhesive, any pharmaceutically acceptable one can be used, and conventionally known pressure-sensitive adhesives can be used. For example, acrylic pressure-sensitive adhesive, rubber pressure-sensitive adhesive, silicon pressure-sensitive adhesive, urethane An acrylic adhesive and a rubber-based adhesive are preferably used. In addition, when spreading on the support, any property such as a solvent-based or emulsion-based photomelt system can be used as the property of the pressure-sensitive adhesive.
In addition, inorganic fillers such as kaolin, bentonite, and titanium oxide, viscosity modifiers, anti-aging agents, pH adjusters, humectants such as glycerin and propylene glycol, buffering agents, preservatives, and fragrances are added as necessary. May be.
Gel agents Gel agents can usually be produced by using a method for producing a gel agent, for example, by dissolving a gel base uniformly, adding an active ingredient, heating, dissolving, dispersing, etc. Any dosage form can be made by a normal manufacturing method.
The use form is also arbitrary, for example, lotion, cream, emulsion, lotion, pack, ointment, mousse, soap, foundation, eye shadow, stain / saddle cover, lip balm, mascara, lipstick, body Makeup products such as make-up products, hair rinses, shampoos, sunscreen creams or sun creams for skin, as well as dermatological ointments, bath preparations, etc., which are conventionally used in cosmetics and / or dermatological fields Any form can be used.
It does not specifically limit as a manufacturing method of the skin barrier function improvement composition of this invention, It can manufacture by a conventionally well-known method.
The skin barrier dysfunction-improving agent of the present invention is used as an external preparation for skin, and the composition as described above is transdermally administered to the skin of the subject or the entire skin of the body. In this case, the blending amount of the zinc hyaluronate complex (associate) is preferably 0.0001 to 5%, particularly preferably 0.01 to 3% as a dry weight in the total amount of the external preparation. Below this range, the effect of suppressing epidermal water transpiration, that is, the effect of improving skin barrier dysfunction is hardly exhibited, and if it exceeds this range, stickiness and problems of lowering the feeling of use occur, such being undesirable.
The application amount of the composition for improving skin barrier function of the present invention is not particularly limited depending on the concentration and the state of the site to be applied, but is usually applied once to several times a day, about 0.01 to 10 g / time. Is preferred.
Effect Confirmation Experiment Skin Barrier Function Improvement Effect Test In the present invention, the skin barrier function improvement effect can be evaluated by various methods. For example, tape stripping is applied to the skin of a mammal (eg, human, mouse, rat, rabbit, etc.). It is possible to quantitatively or qualitatively measure by evaluating the process in which the skin barrier function destroyed by application is restored to the original state using the transepidermal water transpiration (TEWL) as an index. Such measurement can be performed, for example, as follows.
Skin moisturizing effect test In the present invention, skin moisturizing effect can be evaluated by various methods. For example, erythema of erythema level caused by SLS (sodium lauryl sulfate) is induced on the skin of a mammal (eg, guinea pig). It can be measured by observing the effect of the zinc hyaluronate complex (associate) on the stratum corneum moisture content for the accompanying skin disorder model. Such measurement can be performed, for example, as follows.
次に、実施例により、本願発明を更に具体的に説明する。
［実施例１］ アセトン脱脂によるブタの皮膚バリア機能障害モデルにおけるＴＥＷＬに対するヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）の作用（用量反応性試験）
アセトン脱脂によるブタの皮膚バリア機能障害モデルにおけるＴＥＷＬに対する０．１２５％、０．２５％、０．５％及び１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルの作用及び用量反応性について検討した。
除毛翌日、ブタの背部の中心から左右対称に各々６箇所、合計１２箇所に直径３ｃｍの塗布部位を設定した。その中心部に内径１．８ｃｍのステンレス製円筒をあてがい、脱脂用のアセトン５ｍＬを注入し、５分後に全量回収した後、更に天然保湿因子除去のため、注射用水５ｍＬを注入し、３分後に全量回収し、皮膚バリア機能障害モデルを作製した。１箇所当たりの塗布量は直径３ｃｍの円に対してヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲル（０．１２５％、０．２５％、０．５％及び１％）又はゲル基剤を各々０．０２ｍＬ、１日２回開放塗布し、無塗布を設け、モデル作製前、作製４、２４、４８、７２及び９６時間後のＴＥＷＬを測定した。
０．２５％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルで４時間後に、０．５％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルで４、２４、４８及び７２時間後に、１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルでは全ての測定時点で有意なＴＥＷＬの改善作用が認められた（図１）。また、ＴＥＷＬ−時間曲線下面積（以下、ＡＵＣという。）は、ゲル基剤に比べてヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルの０．２５％以上の濃度で有意なＴＥＷＬの改善作用が認められ、傾向性検定において濃度に応じた改善作用が確認された（図２）。
［実施例２］ アセトン脱脂によるブタの皮膚バリア機能障害モデルにおけるＴＥＷＬに対するヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）の作用（他剤との比較試験）
アセトン脱脂によるブタの皮膚バリア機能障害モデルにおけるＴＥＷＬに対するヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）の作用強度を確認するため、繁用の保湿剤である０．３％ヘパリン類似物質軟膏及び２０％尿素軟膏と１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルの効力比較試験を実施した。
除毛翌日、ブタの背部の中心から左右対称に各々６箇所、合計１２箇所に直径３ｃｍの塗布部位を設定した。その中心部に内径１．８ｃｍのステンレス製円筒をあてがい、脱脂用のアセトン５ｍＬを注入し、５分後に全量回収した後、更に天然保湿因子除去のため、注射用水５ｍＬを注入し、３分後に全量回収し、皮膚バリア機能障害モデルを作製した。１箇所当たりの塗布量は直径３ｃｍの円に対してゲル基剤、親水軟膏基剤、１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲル、０．３％ヘパリン類似物質軟膏又は２０％尿素軟膏を各々０．０１５ｍＬ、１日２回開放塗布し、無塗布を設け、モデル作製前、作製４、２４、４８、７２及び９６時間後のＴＥＷＬを測定した。
１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルは、２４、４８、７２及び９６時間後で０．３％ヘパリン類似物質軟膏及び２０％尿素軟膏に比べて有意なＴＥＷＬの改善作用が認められた（図３）。また、ＴＥＷＬのＡＵＣにおいても、０．３％ヘパリン類似物質軟膏及び２０％尿素軟膏に比べて有意な改善作用が認められたことから、１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルの方がＴＥＷＬの改善作用は強いと考えられた（図４）。
［実施例３］ アセトン脱脂によるブタの皮膚バリア機能障害モデルにおけるＴＥＷＬに対するヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）の作用（ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）とヒアルロン酸ナトリウム、塩化亜鉛及びこれらの混合物との比較試験）
アセトン脱脂によるブタの皮膚バリア機能障害モデルにおけるＴＥＷＬに対する１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルの作用について、０．９７６％ヒアルロン酸ナトリウムゲル、０．１６６％塩化亜鉛ゲル及びこれらの混合物ゲル（ヒアルロン酸ナトリウムと塩化亜鉛が複合体を形成しないように塩化ナトリウムを０．０９％添加したヒアルロン酸ナトリウムと塩化亜鉛の混合物ゲル）と効果を比較し、ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）の錯体としての意義を検討した。
除毛翌日、ブタの背部の中心から左右対称に各々７箇所、合計１４箇所に直径３ｃｍの塗布部位を設定した。その中心部に内径１．８ｃｍのステンレス製円筒をあてがい、脱脂用のアセトン５ｍＬを注入し、５分後に全量回収した後、更に天然保湿因子除去のため、注射用水５ｍＬを注入し、３分後に全量回収し、皮膚バリア機能障害モデルを作製した。１箇所当たりの塗布量は直径３ｃｍの円に対して１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲル、０．９７６％ヒアルロン酸ナトリウムゲル、０．１６６％塩化亜鉛ゲル、ヒアルロン酸ナトリウム−塩化亜鉛の混合物ゲル、ゲル基剤又は混合物ゲルの基剤（以下、ＮａＣｌ含有ゲル基剤という。）を各々０．０２ｍＬ、１日２回開放塗布し、無塗布を設け、モデル作製前、作製４、２４、４８、７２及び９６時間後のＴＥＷＬを測定した。
１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルは、ゲル基剤に比べて塗布後全ての測定時点で有意なＴＥＷＬの改善作用が認められた。ヒアルロン酸ナトリウム−塩化亜鉛の混合物ゲルもＮａＣｌ含有ゲル基剤に比べて塗布後４８及び７２時間で有意なＴＥＷＬの改善作用が認められたが、その作用はヒアルロン酸ナトリウム−塩化亜鉛の混合物ゲルよりも１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルの方が強かった（図５、６）。
これらの結果から、ブタの皮膚バリア機能障害モデルにおいて１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルはＴＥＷＬの改善作用が認められ、その改善作用にはヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）の存在が重要であると推察された。
［実施例４］ モルモットのＳＬＳ（ラウリル硫酸ナトリウム）誘発による紅斑程度の皮膚炎を伴う皮膚バリア機能障害モデルに対するヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）の作用（用量反応性試験）
モルモットを用いたＳＬＳ誘発による紅斑程度の皮膚炎を伴う皮膚バリア機能障害モデルにおける０．１２５％、０．２５％、０．５％、０．７５％及び１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルのＴＥＷＬの改善作用及び用量反応性について検討した。
除毛翌日、Ｓｔｄ：Ｈａｒｔｌｅｙ系モルモットの背部に２％ＳＬＳ水溶液をパッチテスト用絆創膏に５０μＬ滴下し、右背側部に１２時間貼付して皮膚バリア機能障害モデルを作製した。１箇所当たり２ｃｍ２にヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲル（０．１２５％、０．２５％、０．５％及び１％）又はゲル基剤を各々０．０２ｍＬ、１日２回開放塗布し、無塗布を設け、薬剤塗布前及び塗布６日後までの各日にＴＥＷＬを測定した。
０．７５％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルは２日目に、１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルは２及び４日目にゲル基剤に比べ有意なＴＥＷＬの改善作用が認められた（図７）。また、経時的に測定したＴＥＷＬの６日間の累計では、ゲル基剤と比べて０．７５％及び１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルは有意なＴＥＷＬの改善作用が認められ、傾向性検定において濃度に応じた改善作用が認められた（図８）。
［実施例５］ モルモットのＳＬＳ（ラウリル硫酸ナトリウム）誘発による紅斑程度の皮膚炎を伴う皮膚バリア機能障害モデルに対するヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）の作用（他剤との比較試験）
モルモットを用いたＳＬＳ誘発による紅斑程度の皮膚炎を伴う皮膚バリア機能障害モデルに対するヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）のＴＥＷＬの改善作用の強さを評価するため、０．５％及び１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルと繁用の保湿剤である０．３％ヘパリン類似物質軟膏及び２０％尿素軟膏との効力比較試験を実施した。
除毛翌日、Ｓｔｄ：Ｈａｒｔｌｅｙ系モルモットの背部に２％ＳＬＳ水溶液をパッチテスト用絆創膏に５０μＬ滴下し、右背側部に１２時間貼付して皮膚バリア機能障害モデルを作製した。１箇所当たり２ｃｍ２にヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲル（０．５％及び１％）、０．３％ヘパリン類似物質軟膏、２０％尿素軟膏、ゲル基剤又は親水軟膏基剤を各々０．０２ｍＬ、１日２回開放塗布し、無塗布を設け、薬剤塗布前及び塗布６日後までの各日にＴＥＷＬを測定した。
０．５％及び１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルは、３〜６日目に０．３％ヘパリン類似物質軟膏に比べて、０．５％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルは３〜５日目、１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルは３〜６日目に２０％尿素軟膏に比べ有意なＴＥＷＬの改善作用が認められた（図９）。また、経時的に測定したＴＥＷＬの６日間の累計からも０．５％及び１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルは、０．３％ヘパリン類似物質軟膏及び２０％尿素軟膏より皮膚バリア機能改善作用が優れていると考えられた（図１０）。
［実施例６］ モルモットのＳＬＳ（ラウリル硫酸ナトリウム）誘発による紅斑程度の皮膚炎を伴う皮膚バリア機能障害モデルに対するヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）の作用（ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）とヒアルロン酸ナトリウム、塩化亜鉛及びこれらの混合物との比較試験）
モルモットを用いたＳＬＳ誘発による紅斑程度の皮膚炎を伴う皮膚バリア機能障害モデルにおけるＴＥＷＬに対する１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルの作用について、０．９７６％ヒアルロン酸ナトリウムゲル、０．１６６％塩化亜鉛ゲル及びヒアルロン酸ナトリウム−塩化亜鉛の混合物ゲルと効果を比較し、ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）の複合体としての意義を検討した。
除毛翌日、Ｓｔｄ：Ｈａｒｔｌｅｙ系モルモットの背部に２％ＳＬＳ水溶液をパッチテスト用絆創膏に５０μＬ滴下し、右背側部に１２時間貼付して皮膚バリア機能障害モデルを作製した。１箇所当たり２ｃｍ２に１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲル、０．９７６％ヒアルロン酸ナトリウムゲル、０．１６６％塩化亜鉛ゲル、ヒアルロン酸ナトリウム−塩化亜鉛の混合物ゲル、ゲル基剤又はＮａＣｌ含有ゲル基剤を各々０．０２ｍＬ、１日２回開放塗布し、無塗布を設け、薬剤塗布前及び塗布６日後までの各日にＴＥＷＬを測定した。
１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルは、ゲル基剤に比べて２、４及び５日目で有意なＴＥＷＬの改善作用が認められ、相当濃度のヒアルロン酸ナトリウムゲル及び塩化亜鉛ゲルの効果を上回った。また、ヒアルロン酸ナトリウム−塩化亜鉛の混合物ゲルも３日目でＮａＣｌ含有ゲル基剤と比べて有意なＴＥＷＬの改善作用が認められたが、その作用は１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルの方が強かった（図１１、１２）。
これらの結果から、モルモットの皮膚バリア機能障害モデルにおいて１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルはＴＥＷＬの改善作用が認められ、その改善作用には複合体（会合物）の存在が重要であると推察された。
［実施例７］ モルモットのＳＬＳ（ラウリル硫酸ナトリウム）誘発による紅斑程度の皮膚炎を伴う皮膚障害モデルに対するヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）の角層水分量に及ぼす影響（用量反応性試験）
モルモットを用いたＳＬＳ誘発による紅斑程度の皮膚炎を伴う皮膚障害モデルにおける０．１２５％、０．２５％、０．５％、０．７５％及び１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルの角層水分量の増加作用における用量反応性について検討した。
除毛翌日、Ｓｔｄ：Ｈａｒｔｌｅｙ系モルモットの背部に２％ＳＬＳ水溶液をパッチテスト用絆創膏に５０μＬ滴下し、右背側部に１２時間貼付して皮膚障害モデルを作製した。１箇所当たり２ｃｍ２にヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲル（０．１２５％、０．２５％、０．５％及び１％）又はゲル基剤を各々０．０２ｍＬ、１日２回開放塗布し、無塗布を設け、薬剤塗布前及び塗布６日後までの各日に角層水分量を測定した。
０．７５％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルは３日目、１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルは３、４、５及び６日目にゲル基剤に比べ有意な角層水分量の増加が認められた（それぞれｐ＜０．０１、ｐ＜０．０１、ｐ＜０．０１、ｐ＜０．０５及びｐ＜０．０１）。また、傾向性検定において濃度に応じた改善作用が各時点で認められた（いずれもｐ＜０．０１）（図１３）。
［実施例８］ モルモットのＳＬＳ（ラウリル硫酸ナトリウム）誘発による紅斑程度の皮膚炎を伴う皮膚障害モデルに対するヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）の角質水分量に及ぼす影響（ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）とヒアルロン酸ナトリウム、塩化亜鉛及びこれらの混合物との比較試験）
モルモットを用いたＳＬＳ誘発による紅斑程度の皮膚炎を伴う皮膚障害モデルに対する１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルの角質水分量の増加作用について、０．９７６％ヒアルロン酸ナトリウムゲル、０．１６６％塩化亜鉛ゲル及びヒアルロン酸ナトリウム−塩化亜鉛の混合物ゲルと効果を比較し、ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）の錯体としての意義を検討した。
除毛翌日、Ｓｔｄ：Ｈａｒｔｌｅｙ系モルモットの背部に２％ＳＬＳ水溶液をパッチテスト用絆創膏に５０μＬ滴下し、右背側部に１２時間貼付して皮膚障害モデルを作製した。１箇所当たり２ｃｍ２に１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲル、０．９７６％ヒアルロン酸ナトリウムゲル、０．１６６％塩化亜鉛ゲル、ヒアルロン酸ナトリウム−塩化亜鉛の混合物ゲル、ゲル基剤又はＮａＣｌ含有ゲル基剤を各々０．０２ｍＬ、１日２回開放塗布し、無塗布を設け、薬剤塗布前及び塗布６日後までの各日に角層水分量を測定した。
１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルは、ゲル基剤に比べて塗布開始２日目以降の全ての測定時点において有意な角層水分量の増加作用を示し（それぞれｐ＜０．０１）、０．９７６％ＮａＨＡゲル及び０．１６６％ＺｎＣｌ２ゲルの効果を上回った（図１４）。また、混合物ゲルも塗布開始２日目以降の全ての測定時点においてＮａＣｌ含有ゲル基剤と比べて有意（２〜５日目はｐ＜０．０１、６日目はｐ＜０．０５）な増加を示したが、その作用は１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルの方が強かった（図１５）。
［実施例９］ モルモットのＳＬＳ誘発による紅斑程度の皮膚炎を伴う皮膚バリア機能障害モデルに対するヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）の角層水分量に及ぼす影響（他剤との比較試験）
モルモットを用いたＳＬＳ誘発による紅斑程度の皮膚炎を伴う皮膚障害モデルに対するヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）の角層水分量の増加作用の強さを評価するため、０．５％及び１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルと繁用の保湿剤である０．３％ヘパリン類似物質軟膏及び２０％尿素軟膏との効力比較試験を実施した。
除毛翌日、Ｓｔｄ：Ｈａｒｔｌｅｙ系モルモットの背部に２％ＳＬＳ水溶液をパッチテスト用絆創膏に５０μＬ滴下し、右背側部に１２時間貼付して皮膚バリア機能障害モデルを作製した。１箇所当たり２ｃｍ２にヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲル（０．５％及び１％）、０．３％ヘパリン類似物質軟膏、２０％尿素軟膏、ゲル基剤又は親水軟膏基剤を各々０．０２ｍＬ、１日２回開放塗布し、無塗布を設け、薬剤塗布前及び塗布６日後までの各日に角層水分量を測定した。
ゲル基剤と比べて０．５％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルは、塗布開始２及び６日目において（それぞれｐ＜０．０５）、１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルは、塗布開始２、３、４、５及び６日目において（２、４、５及び６日目はｐ＜０．０１、３日目はｐ＜０．０５）有意な角質水分量の増加作用を示した（図１６）。０．３％ヘパリン類似物質軟膏と比べて、０．５％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルは６日目（ｐ＜０．０１）、１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルは４〜６日目に有意（４日目はｐ＜０．０５、５及び６日目はｐ＜０．０１）な増加を示した。２０％尿素軟膏と比較して、０．５％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルは塗布開始４日目（ｐ＜０．０５）、１％ヒアルロン酸亜鉛複合体（会合物）ゲルは、２〜６日目に有意（それぞれｐ＜０．０１）な増加を示した（図１７）。
製剤実施例
（１）調製方法
下記処方中のヒアルロン酸亜鉛複合体及び疎水化ヒドロキシプロピルメチルセルロースを除く処方成分すべてを約８０重量部の精製水に溶解させた。この溶液にヒアルロン酸亜鉛複合体を少量ずつ加えて溶解させた後，約７０℃に加温して疎水化ヒドロキシプロピルメチルセルロースを少量ずつ加えて分散させた。この懸濁液を精製水で全量を１００重量部とした後，室温まで冷却してゲルとした。このゲルをアルミラミネートチューブに充填して密封した。
（２）処方
ヒアルロン酸亜鉛複合体 ０．１２５〜１ 重量部
疎水化ヒドロキシプロピルメチルセルロース９０Ｌ
１．０ 重量部
濃グリセリン １０．０ 重量部
パラオキシ安息香酸メチル ０．１５重量部
パラオキシ安息香酸プロピル ０．０２重量部
精製水 適量
全 量 １００．０ 重量部
製剤比較例
（１）調製法
下記処方中の疎水化ヒドロキシプロピルメチルセルロースを除く処方成分すべてを約８０重量部の精製水に溶解させた。この溶液を約７０℃に加温して疎水化ヒドロキシプロピルメチルセルロースを少量ずつ加えて分散させた。この懸濁液を精製水で全量を１００重量部とした後，室温まで冷却してゲルとした。このゲルをアルミラミネートチューブに充填して密封した。
（２）処方
疎水化ヒドロキシプロピルメチルセルロース９０Ｌ
１．０ 重量部
濃グリセリン １０．０ 重量部
パラオキシ安息香酸メチル ０．１５重量部
パラオキシ安息香酸プロピル ０．０２重量部
精製水 適量
全 量 １００．０ 重量部Next, the present invention will be described more specifically with reference to examples.
[ Example 1 ] Effect of zinc hyaluronate complex (associate) on TEWL in a model of porcine skin barrier dysfunction caused by acetone defatting (dose response test)
The effects and dose response of 0.125%, 0.25%, 0.5% and 1% zinc hyaluronate complex (aggregate) gels on TEWL in a porcine skin barrier dysfunction model due to acetone defatting were examined.
On the next day after hair removal, 6 sites were set symmetrically from the center of the back of the pig, and a coating site having a diameter of 3 cm was set at a total of 12 sites. Attach a stainless steel cylinder with an inner diameter of 1.8 cm to the center, inject 5 mL of acetone for degreasing, collect all after 5 minutes, and then inject 5 mL of water for injection to remove natural moisturizing factor, and 3 minutes later. The whole amount was collected and a skin barrier dysfunction model was prepared. The coating amount per spot is 0 for each of the hyaluronate composite (aggregate) gel (0.125%, 0.25%, 0.5% and 1%) or gel base with respect to a circle having a diameter of 3 cm. .02 mL, applied twice a day, provided with no application, and measured TEWL before model preparation, 4, 24, 48, 72 and 96 hours after preparation.
4% after 0.25% zinc hyaluronate complex (associate) gel, 1% zinc hyaluronate complex after 4, 24, 48 and 72 hours after 0.5% zinc hyaluronate complex (associate) gel In the body (aggregate) gel, significant improvement of TEWL was observed at all measurement points (FIG. 1). In addition, the area under the TEWL-time curve (hereinafter referred to as AUC) has a significant effect of improving TEWL at a concentration of 0.25% or more of the zinc hyaluronate complex (aggregate) gel as compared with the gel base. In the tendency test, the improvement effect according to the concentration was confirmed (FIG. 2).
[ Example 2 ] Effect of zinc hyaluronate complex (associate) on TEWL in a model of porcine skin barrier dysfunction caused by acetone degreasing (comparison test with other agents)
In order to confirm the strength of action of zinc hyaluronate complex (associate) on TEWL in a model of porcine skin barrier dysfunction caused by acetone degreasing, 0.3% heparin analog ointment and 20% urea ointment are common moisturizers. And 1% zinc hyaluronate complex (associate) gels were tested for efficacy.
On the next day after hair removal, 6 sites were set symmetrically from the center of the back of the pig, and a coating site having a diameter of 3 cm was set at a total of 12 sites. Attach a stainless steel cylinder with an inner diameter of 1.8 cm to the center, inject 5 mL of acetone for degreasing, collect all after 5 minutes, and then inject 5 mL of water for injection to remove natural moisturizing factor, and 3 minutes later. The whole amount was collected and a skin barrier dysfunction model was prepared. The coating amount per spot is a gel base, hydrophilic ointment base, 1% zinc hyaluronate complex (associate) gel, 0.3% heparin analog ointment or 20% urea ointment for a circle with a diameter of 3 cm. Each 0.015 mL was applied openly twice a day, an application was not applied, and TEWL was measured before model preparation, 4, 24, 48, 72 and 96 hours after preparation.
The 1% zinc hyaluronate complex (aggregate) gel showed a significant TEWL improvement effect after 24, 48, 72 and 96 hours compared to 0.3% heparin analog ointment and 20% urea ointment. (Figure 3). Also, in TEWL AUC, a significant improvement effect was observed compared with 0.3% heparin analog ointment and 20% urea ointment, so 1% zinc hyaluronate complex (aggregate) gel was better. The improvement effect of TEWL was considered to be strong (FIG. 4).
[ Example 3 ] Effect of zinc hyaluronate complex (associate) on TEWL in a model of porcine skin barrier dysfunction caused by acetone degreasing (zinc hyaluronate complex (associate) and sodium hyaluronate, zinc chloride and mixtures thereof) Comparison test)
Regarding the effect of 1% zinc hyaluronate complex (aggregate) gel on TEWL in a model of porcine skin barrier dysfunction due to acetone degreasing, 0.976% sodium hyaluronate gel, 0.166% zinc chloride gel and a mixture gel thereof (Sodium hyaluronate and zinc chloride mixed gel added with 0.09% sodium chloride so that sodium hyaluronate and zinc chloride do not form a complex) and the effect of the zinc hyaluronate complex (associate) The significance as a complex was examined.
On the next day after depilation, application sites with a diameter of 3 cm were set at a total of 14 locations, 7 each symmetrically from the center of the back of the pig. Attach a stainless steel cylinder with an inner diameter of 1.8 cm to the center, inject 5 mL of acetone for degreasing, collect all after 5 minutes, and then inject 5 mL of water for injection to remove natural moisturizing factor, and 3 minutes later. The whole amount was collected and a skin barrier dysfunction model was prepared. The coating amount per spot is 1% zinc hyaluronate complex (aggregate) gel, 0.976% sodium hyaluronate gel, 0.166% zinc chloride gel, sodium hyaluronate-zinc chloride with respect to a circle having a diameter of 3 cm. 0.02 mL each of the mixture gel, gel base, or mixture gel base (hereinafter referred to as NaCl-containing gel base) was applied twice a day, provided no application, and before model preparation, preparation 4, TEWL was measured after 24, 48, 72 and 96 hours.
The 1% zinc hyaluronate complex (aggregate) gel showed a significant improvement in TEWL at all measurement points after application compared to the gel base. The sodium hyaluronate-zinc chloride mixture gel also showed a significant improvement in TEWL at 48 and 72 hours after application compared to the NaCl-containing gel base, but the effect was greater than that of the sodium hyaluronate-zinc chloride mixture gel. 1% zinc hyaluronate complex (aggregate) gel was stronger (FIGS. 5 and 6).
From these results, in the porcine skin barrier dysfunction model, 1% zinc hyaluronate complex (associate) gel was found to have an effect of improving TEWL, and the presence of zinc hyaluronate complex (associate) in the improvement effect Was presumed to be important.
[ Example 4 ] Effect of zinc hyaluronate complex (associate) on model of skin barrier dysfunction associated with erythema-like dermatitis induced by SLS (sodium lauryl sulfate) in guinea pigs (dose response test)
0.125%, 0.25%, 0.5%, 0.75% and 1% zinc hyaluronate complexes (associates) in a model of skin barrier dysfunction with SLS-induced erythema-like dermatitis using guinea pigs ) The improvement effect and dose response of the TEWL of the gel were examined.
On the next day after hair removal, 50 μL of 2% SLS aqueous solution was dropped on the bandage for patch test on the back of Std: Hartley guinea pig and applied to the right back for 12 hours to prepare a skin barrier dysfunction model. Zinc hyaluronate complex per 2 cm 2 1 point (association of) gel (0.125%, 0.25%, 0.5% and 1%) or gel base each 0.02 mL, opened twice a day Coating was carried out, no coating was provided, and TEWL was measured on each day before and 6 days after coating.
0.75% zinc hyaluronate complex (associate) gel on day 2, 1% zinc hyaluronate complex (aggregate) gel on days 2 and 4 significantly improved TEWL compared to gel base Was observed (FIG. 7). In addition, in the cumulative total of TEWL measured over time for 6 days, the 0.75% and 1% zinc hyaluronate complex (aggregate) gels compared to the gel base showed a significant TEWL improving action, and the trend In the sex test, an improvement effect corresponding to the concentration was observed (FIG. 8).
[ Example 5 ] Effect of zinc hyaluronate complex (associate) on skin barrier dysfunction model with erythema-like dermatitis induced by SLS (sodium lauryl sulfate) in guinea pigs (comparison test with other agents)
To evaluate the strength of TEWL-improving effect of zinc hyaluronate complex (aggregate) on skin barrier dysfunction model with erythema-like dermatitis induced by SLS using guinea pig, 0.5% and 1% hyaluron A comparative efficacy test was conducted between zinc acid complex (associate) gel and 0.3% heparin analog ointment and 20% urea ointment, which are common moisturizers.
On the next day after hair removal, 50 μL of 2% SLS aqueous solution was dropped on the bandage for patch test on the back of Std: Hartley guinea pig and applied to the right back for 12 hours to prepare a skin barrier dysfunction model. Zinc hyaluronate complex (aggregate) gel (0.5% and 1%), 0.3% heparin analog ointment, 20% urea ointment, gel base or hydrophilic ointment base each 2 cm 2 0.02 mL, open application twice a day, no application was provided, and TEWL was measured on each day before drug application and 6 days after application.
The 0.5% and 1% zinc hyaluronate complex (associate) gels were 0.5% zinc hyaluronate complex (associate) compared to 0.3% heparin analog ointment on days 3-6. On the 3rd to 5th day of the gel, the 1% zinc hyaluronate complex (aggregate) gel showed a significant TEWL improving effect on the 3rd to 6th days compared to the 20% urea ointment (FIG. 9). In addition, from the cumulative total of 6 days of TEWL measured over time, 0.5% and 1% zinc hyaluronate complex (associate) gels were better than 0.3% heparin analog ointment and 20% urea ointment. It was considered that the function improving action was excellent (FIG. 10).
[ Example 6 ] Effect of zinc hyaluronate complex (associate) on skin barrier dysfunction model with erythema degree dermatitis induced by SLS (sodium lauryl sulfate) in guinea pigs (zinc hyaluronate complex (associate)) Comparative tests with sodium hyaluronate, zinc chloride and mixtures thereof)
Regarding the effect of 1% zinc hyaluronate complex (associate) gel on TEWL in a model of skin barrier dysfunction with erythema-like dermatitis induced by SLS using guinea pigs, 0.976% sodium hyaluronate gel, 0.166% % Zinc chloride gel and sodium hyaluronate-zinc chloride mixed gel were compared in effect, and the significance of the zinc hyaluronate complex (associate) as a complex was examined.
On the next day after hair removal, 50 μL of 2% SLS aqueous solution was dropped on the bandage for patch test on the back of Std: Hartley guinea pig and applied to the right back for 12 hours to prepare a skin barrier dysfunction model. 1 cm zinc hyaluronate complex (aggregate) gel, 0.976% sodium hyaluronate gel, 0.166% zinc chloride gel, sodium hyaluronate-zinc chloride mixture gel, gel base or 2 cm 2 per site 0.02 mL each of the NaCl-containing gel base was applied openly twice a day, a non-application was provided, and TEWL was measured on each day before application of the drug and 6 days after application.
The 1% zinc hyaluronate complex (aggregate) gel showed significant improvement in TEWL on the second, fourth and fifth days compared to the gel base. It exceeded the effect. Further, the sodium hyaluronate-zinc chloride mixed gel also showed a significant improvement in TEWL compared to the NaCl-containing gel base on the third day, but the effect was 1% zinc hyaluronate complex (associate). The gel was stronger (FIGS. 11 and 12).
From these results, in the guinea pig skin barrier dysfunction model, 1% zinc hyaluronate complex (associate) gel was found to have an effect of improving TEWL, and the presence of the complex (associate) was important for the improvement. It was inferred that there was.
[ Example 7 ] Effect of zinc hyaluronate complex (aggregate) on stratum corneum water content in a skin injury model with erythema-like dermatitis induced by SLS (sodium lauryl sulfate) in guinea pigs (dose responsiveness test)
0.125%, 0.25%, 0.5%, 0.75%, and 1% zinc hyaluronate complex (aggregate) gels in a skin injury model with SLS-induced erythema-like dermatitis using guinea pigs The dose-response in increasing the stratum corneum water content was investigated.
On the next day after depilation, 50 μL of 2% SLS aqueous solution was dropped on a patch test adhesive bandage on the back of a Std: Hartley guinea pig and applied to the right dorsal side for 12 hours to prepare a skin disorder model. Zinc hyaluronate complex per 2 cm 2 1 point (association of) gel (0.125%, 0.25%, 0.5% and 1%) or gel base each 0.02 mL, opened twice a day It was applied and uncoated, and the stratum corneum moisture content was measured on each day before and 6 days after application.
The 0.75% zinc hyaluronate complex (aggregate) gel is on the third day, and the 1% zinc hyaluronate complex (aggregate) gel is on the third, fourth, fifth and sixth days with a significant angle compared to the gel base. An increase in layer water content was observed (p <0.01, p <0.01, p <0.01, p <0.05 and p <0.01, respectively). In addition, an improvement effect corresponding to the concentration was observed at each time point in the tendency test (both p <0.01) (FIG. 13).
[ Example 8 ] Effect of zinc hyaluronate complex (associate) on keratinous water content of guinea pig SLS (sodium lauryl sulfate) -induced skin lesion model with erythema-like dermatitis (zinc hyaluronate complex (association)) Test) and sodium hyaluronate, zinc chloride and mixtures thereof)
Regarding the increasing effect of 1% zinc hyaluronate complex (associate) gel on the skin damage model with erythema-like dermatitis induced by SLS using guinea pig, 0.976% sodium hyaluronate gel, 0. The effect of the 166% zinc chloride gel and the sodium hyaluronate-zinc chloride mixed gel was compared, and the significance of the zinc hyaluronate complex (associate) as a complex was examined.
On the next day after depilation, 50 μL of 2% SLS aqueous solution was dropped on a patch test adhesive bandage on the back of a Std: Hartley guinea pig and applied to the right dorsal side for 12 hours to prepare a skin disorder model. 1 cm zinc hyaluronate complex (aggregate) gel, 0.976% sodium hyaluronate gel, 0.166% zinc chloride gel, sodium hyaluronate-zinc chloride mixture gel, gel base or 2 cm 2 per site 0.02 mL each of the NaCl-containing gel base was applied openly twice a day, a non-application was provided, and the stratum corneum moisture content was measured on each day before application of the drug and 6 days after application.
The 1% zinc hyaluronate complex (aggregate) gel has a significant increase in stratum corneum moisture content at all measurement points after the second day after application compared to the gel base (p <0.01 respectively). ), Exceeding the effect of 0.976% NaHA gel and 0.166% ZnCl 2 gel (FIG. 14). In addition, the mixture gel is also significant (p <0.01 on the 2nd to 5th days, p <0.05 on the 6th day) compared with the NaCl-containing gel base at all measurement points after the 2nd day from the start of application. Although an increase was shown, the effect was stronger in the 1% zinc hyaluronate complex (aggregate) gel (FIG. 15).
[ Example 9 ] Effect of zinc hyaluronate complex (aggregate) on stratum corneum moisture content in a model of skin barrier dysfunction with erythema-like dermatitis induced by SLS induction in guinea pigs (comparison test with other agents)
In order to evaluate the strength of the increase in stratum corneum moisture content of the zinc hyaluronate complex (associate) on the skin damage model with erythema-like dermatitis induced by SLS using guinea pigs, 0.5% and 1% A comparative efficacy test was conducted between the zinc hyaluronate complex (associate) gel and the conventional moisturizer 0.3% heparin analog ointment and 20% urea ointment.
On the next day after hair removal, 50 μL of 2% SLS aqueous solution was dropped on the bandage for patch test on the back of Std: Hartley guinea pig and applied to the right back for 12 hours to prepare a skin barrier dysfunction model. Zinc hyaluronate complex (aggregate) gel (0.5% and 1%), 0.3% heparin analog ointment, 20% urea ointment, gel base or hydrophilic ointment base each 2 cm 2 0.02 mL, open application twice a day, no application was provided, and the stratum corneum water content was measured on each day before and 6 days after application.
Compared to the gel base, 0.5% zinc hyaluronate complex (associate) gel was applied on the 2nd and 6th days after application (p <0.05 respectively), and 1% zinc hyaluronate complex (associate). The gel had a significant amount of stratum corneum on days 2, 3, 4, 5 and 6 (p <0.01 on days 2, 4, 5 and 6) and p <0.05 on day 3. An increasing effect was shown (FIG. 16). Compared with 0.3% heparin analog ointment, 0.5% zinc hyaluronate complex (associate) gel is 6 days (p <0.01), 1% zinc hyaluronate complex (associate) gel Showed a significant increase on days 4-6 (p <0.05 on day 4 and p <0.01 on days 5 and 6). Compared to 20% urea ointment, 0.5% zinc hyaluronate complex (associate) gel is 4 days after application start (p <0.05), 1% zinc hyaluronate complex (associate) gel is On days 2-6, there was a significant increase (p <0.01 each) (FIG. 17).
Formulation Example (1) Preparation Method All the formulation components except the zinc hyaluronate complex and the hydrophobized hydroxypropylmethylcellulose in the following formulation were dissolved in about 80 parts by weight of purified water. The zinc hyaluronate complex was added to this solution little by little and dissolved, and then heated to about 70 ° C., and hydrophobized hydroxypropylmethylcellulose was added little by little to disperse. The suspension was made up to 100 parts by weight with purified water and then cooled to room temperature to form a gel. This gel was filled into an aluminum laminate tube and sealed.
(2) Prescription zinc hyaluronate complex 0.125 to 1 part by weight Hydrophobized hydroxypropylmethylcellulose 90L
1.0 part by weight Concentrated glycerin 10.0 part by weight Methyl paraoxybenzoate 0.15 part by weight Propyl paraoxybenzoate 0.02 part by weight
Purified water
Total amount 100.0 parts by weight
Formulation Comparative Example (1) Preparation Method All the formulation components except the hydrophobized hydroxypropylmethylcellulose in the following formulation were dissolved in about 80 parts by weight of purified water. This solution was heated to about 70 ° C., and hydrophobized hydroxypropylmethylcellulose was added little by little to disperse. The suspension was made up to 100 parts by weight with purified water and then cooled to room temperature to form a gel. This gel was filled into an aluminum laminate tube and sealed.
(2) Formulation Hydrophobized hydroxypropylmethylcellulose 90L
1.0 part by weight Concentrated glycerin 10.0 part by weight Methyl paraoxybenzoate 0.15 part by weight Propyl paraoxybenzoate 0.02 part by weight
Purified water
Total amount 100.0 parts by weight
