JPWO2006006634A1 - 疲労度評価方法およびその利用 - Google Patents
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Abstract
Description
[1]
体液中のヒトヘルペスウイルスの量を指標として、被験者の疲労度を評価することを特徴とする疲労度評価方法。
[2]
上記ヒトヘルペスウイルスの量が多ければ、疲労度が高いと評価することを特徴とする[1]に記載の疲労度評価方法。
[3]
ヒトヘルペスウイルス量を、ヒトヘルペスウイルス遺伝子の発現量として測定する、[2]に記載の疲労度評価方法。
[4]
上記ヒトヘルペスウイルス量が多ければ、被験者が日常生活で生じる中長期的急性疲労の蓄積による過労状態にあると評価することを特徴とする[1]ないし[3]のいずれか一項に記載の疲労度評価方法。
[5]
上記ヒトヘルペスウイルスのウイルス量が多ければ、被験者が疾患による慢性疲労の状態であると評価することを特徴とする、[1]ないし[3]のいずれか一項に記載の疲労度評価方法。
[6]
上記疲労度が、日常生活で生じる中長期的疲労または疾患による疲労であって、精神疲労および/または複合的な疲労による疲労度であることを特徴とする、[1]ないし[5]のいずれか一項に記載の疲労度評価方法。
[7]
上記体液は、血液、唾液、脳骨髄液および尿から選ばれる少なくとも一種類であることを特徴とする[1]ないし[6]のいずれか一項に記載の疲労度評価方法。
[8]
上記ヘルペスウイルスは、ヒトヘルペスウイルス6、ヒトヘルペスウイルス7、ヒトサイトメガロウイルスおよびエプシュタイン・バーウイルス(EBV)から選ばれる少なくとも一種であることを特徴とする[1]ないし[7]のいずれか一項に記載の疲労度評価方法。
[9]
上記[1]ないし[8]のいずれか一項に記載の疲労度評価方法を実施するための疲労度評価キット。
[10]
採取した体液中のHHVの量を測定する手段を含むキットであって、体液中のヒトヘルペスウイルスの量を指標として被験者の疲労度を評価するために使用できることが表示されている、[9]に記載のキット。
[11]
(i) 被験者が抗疲労物質の候補である物質を摂取する前に当該被験者の体液を採取し、体液中のHHVの量を測定する摂取前HHV量測定工程と、
(ii) 被験者が抗疲労物質の候補である物質を摂取した後に当該被験者の体液を採取し、体液中のHHVの量を測定する摂取後HHV量測定工程と、
(iii) (i)の摂取前HHV量測定工程、及び(ii)の摂取後HHV量測定工程によって得られた、当該抗疲労物質の候補である物質の摂取前後におけるHHV量の変化の測定結果に基づき、当該抗疲労物質の候補である物質の摂取前後における体液中のHHV量の変化を算出するウイルス量変化算出工程と、
(iv) (iii)のウイルス量変化算出工程によって得られた当該抗疲労物質の候補である物質の摂取前後における体液中のHHV量変化に基づき、当該抗疲労物質の候補である物質の生体における抗疲労力を測定する抗疲労力測定工程
とを含む、抗疲労物質の候補である物質の抗疲労効果評価方法。
[12]
(i) 抗疲労物質の候補である物質を摂取した被験者と、抗疲労物質の候補である物質を摂取しなかった被験者からそれぞれ体液を採取し、それぞれの体液中のHHVの量を測定するHHV量測定工程と、
(ii) (i)のHHV量測定工程によって得られた、当該抗疲労物質の候補である物質の摂取の有無によるHHV量の変化の測定結果に基づき、当該抗疲労物質の候補である物質の摂取の有無による体液中のHHV量の変化を算出するウイルス量変化算出工程と、
(iii) (ii)のウイルス量変化算出工程によって得られた当該抗疲労物質の候補である物質の摂取の有無による体液中のHHV量変化に基づき、当該抗疲労物質の候補である物質の生体における抗疲労力を測定する抗疲労力測定工程
とを含む、抗疲労物質の候補である物質の抗疲労効果評価方法。
[13]
上記[1]ないし[8]のいずれか一項に記載の疲労度評価方法および[9]または[10]のいずれか一項に記載の疲労度評価キットのいずれかを用いて、抗疲労物質の候補である物質の抗疲労効果を測定することを特徴とする、[11]または[12]のいずれか一項に記載の抗疲労効果評価方法。
[14]
抗疲労物質をスクリーニングするための、[11]ないし[13]のいずれか一項に記載の抗疲労物質の候補である物質の抗疲労効果評価方法。
本発明者は、被験者の体液を採取し、体液中のHHVの量を測定することにより、ヒトの疲労度を簡便かつ定量的に測定することができることを見出した。この方法は、大掛かりな装置が必要ないだけでなく、体液の採取時間が短いことから、被験者にとって時間的拘束が少なく、また、方法の実施者にとっても非常に簡便な方法である。
次に、本発明にかかる疲労度評価キットについて説明する。本発明にかかる疲労度評価キットは、ヒトにおける疲労度を評価するキットである。すなわち、上記(1)欄で説明した本発明にかかる疲労度評価方法を実施するためのキットであればよい。詳細には、被験者の体液中のHHVの量を測定する手段を含むキットであればよい。本発明における体液中のHHVの量を測定する手段としては、従来公知の測定方法を実施するために必要な手段であればよい。従来公知の測定方法を実施するために必要な手段とは、具体的には、例えば、上記(1)欄で説明した体液中のHHVの量を測定する方法を実施するために必要な試薬、器具、装置、触媒その他のものをいう。本発明にかかる疲労度評価キットは、被験者の体液を採取するための手段を含んでいてもよい。また、その包装材に付されたラベル又は添付された文書に、体液中のヒトヘルペスウイルス(HHV)の量を指標として被験者の疲労度を評価するために使用できることが表示されていてもよい。
以上のように、本発明にかかる疲労度評価方法、疲労度評価キットによれば、被験者が抗疲労物質を摂取する前後において、被験者の体液中のHHVの量を測定することで、当該抗疲労物質の被験者生体内における抗疲労力を定量的に測定・評価することができる。さらに、かかる方法、キットはいずれも簡便であるだけでなく、大掛かりな装置や長時間における拘束が必要ないため、被験者及び実施者の両者にとって非常に取り扱いやすいものであるという利点がある。
(i) 被験者が抗疲労物質の候補である物質を摂取する前に当該被験者の体液を採取し、体液中のHHVの量を測定する摂取前HHV量測定工程と、
(ii) 被験者が抗疲労物質の候補である物質を摂取した後に当該被験者の体液を採取し、体液中のHHV量を測定する摂取後HHV量測定工程と、
(iii) (i)の摂取前HHV量測定工程、及び(ii)の摂取後HHV量測定工程によって得られた、当該抗疲労物質の候補である物質の摂取前後におけるHHV量の変化の測定結果に基づき、当該抗疲労物質の候補である物質の摂取前後における体液中のHHV量の変化を算出するウイルス量変化算出工程と、
(iv) (iii)のウイルス量変化算出工程によって得られた当該抗疲労物質の候補である物質の摂取前後における体液中のHHV量変化に基づき、当該抗疲労物質の候補である物質の生体における抗疲労力を測定する抗疲労力測定工程
とを含む方法と換言することもできる。
なお本明細書において引用された全ての先行技術文献は、参照として本明細書に組み入れられる。
(1−1)試験日程
被験者は、図1に示す試験日程に従って、唾液採取をおこなった。休暇期間中、被験者は一切の労作は行わず、また過度の運動は避けている。
検査当日は、前日の夜9時より絶食とした。被験者は、唾液採取の直前に蒸留水で口腔内を2度ゆすいだ後、2分間、サリベット(SARSTED社製)の中綿を口腔内に含み、唾液を採取した。
採取した唾液は、即日、凍結保存(-80℃)した。
市販のDNA精製キット(QIAamp MinElute Virus Spin Kit、QIAGEN社製)を使用し、採取した唾液サンプルより、キャリアーRNA存在下でDNA精製を行った。
ヘルペスウイルスDNA量の測定は、HHV-6、HHV-7、ヒトサイトメガロウイルス、及びエプシュタイン・バーウイルス(EBV)の4種に関し、それぞれ特異的なPCRプライマーを用いて、ダブルネステッドPCR法を用いて測定した。なお、HHV-6に特異的なPCRプライマー配列であって、1stPCRプライマー配列を配列番号:1および配列番号:2、および2ndPCRプライマー配列を配列番号:3および配列番号:4に、HHV-7に特異的なPCRプライマー配列であって、1stPCRプライマー配列を配列番号:5および配列番号:6、および2ndPCRプライマー配列を配列番号:7および配列番号:8に、ヒトサイトメガロウイルスに特異的なPCRプライマー配列であって、1stPCRプライマー配列を配列番号:9および配列番号:10、および2ndPCRプライマー配列を配列番号:11および配列番号:12に、ならびにエプシュタイン・バーウイルス(EBV)に特異的なPCRプライマー配列であって、1stPCRおよび2ndPCRプライマー配列を配列番号:13および配列番号:14に記載する。なお、エプシュタイン・バーウイルス(EBV)は、1stPCRおよび2ndPCRにおいて同じプライマー配列を用いた。
Journal of Virol. 2002, 76(8): 4145-4151, K. Kondo他、”Identification of human herpesvirus 6 latency-associated transcripts.”
ヒトサイトメガロウイルスのDNA量測定に関する参考文献
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1996, 93: 11137-11142, K. Kondo他、”Human cytomegalovirus latent gene expression in granulocyte-macrophage progenitors in culture and in healthy seropositive individuals.”
上記4種のウイルスのうち、HHV-6及びHHV-7が健康な成人の唾液から高頻度に検出されることが見出された。一方、ヒトサイトメガロウイルスおよびエプシュタイン・バーウイルスの検出率は、HHV-6及びHHV-7と比べて低いものであった。
(3−1)試験方法
慢性疲労症候群(CFS)患者24名および実施例1の健常者20名を対象とした。患者は、大阪大学医学部附属病院のCFS外来を受診したCFS患者で、厚生労働省の診断基準を満たす患者を対象とした。 本実施例は、インフォームド・コンセントの条件を満たした上で、本研究に参加した被験者から得られた試料を用いて実施したものである。
被験者は、唾液採取の直前に蒸留水で口腔内を2度ゆすいだ後、2分間、サリベット(SARSTED社製)の中綿を口腔内に含み、唾液を採取した。
実施例1における項目(1−3)から(1−5)と同様に、HHVの検出及び測定を行なった。
上記4種のウイルスのうち、特にHHV-7が患者の唾液から高頻度、かつ大量に検出されることが見出された。一方、HHV-7に比べ、ヒトサイトメガロウイルス、HHV-6、およびエプシュタイン・バーウイルスの検出頻度及び検出量は、低レベルであった。
Claims (14)
- 体液中のヒトヘルペスウイルスの量を指標として、被験者の疲労度を評価することを特徴とする疲労度評価方法。
- 上記ヒトヘルペスウイルスの量が多ければ、疲労度が高いと評価することを特徴とする請求項1に記載の疲労度評価方法。
- ヒトヘルペスウイルス量を、ヒトヘルペスウイルス遺伝子の発現量として測定する、請求項2に記載の疲労度評価方法。
- 上記ヒトヘルペスウイルス量が多ければ、被験者が日常生活で生じる中長期的急性疲労の蓄積による過労状態にあると評価することを特徴とする請求項1ないし3のいずれか一項に記載の疲労度評価方法。
- 上記ヒトヘルペスウイルスのウイルス量が多ければ、被験者が疾患による慢性疲労の状態であると評価することを特徴とする、請求項1ないし3のいずれか一項に記載の疲労度評価方法。
- 上記疲労度が、日常生活で生じる中長期的疲労または疾患による疲労であって、精神疲労および/または複合的な疲労による疲労度であることを特徴とする、請求項1ないし5のいずれか一項に記載の疲労度評価方法。
- 上記体液は、血液、唾液、脳骨髄液および尿から選ばれる少なくとも一種類であることを特徴とする請求項1ないし6のいずれか一項に記載の疲労度評価方法。
- 上記ヘルペスウイルスは、ヒトヘルペスウイルス6、ヒトヘルペスウイルス7、ヒトサイトメガロウイルスおよびエプシュタイン・バーウイルス(EBV)から選ばれる少なくとも一種であることを特徴とする請求項1ないし7のいずれか一項に記載の疲労度評価方法。
- 上記請求項1ないし8のいずれか一項に記載の疲労度評価方法を実施するための疲労度評価キット。
- 採取した体液中のHHVの量を測定する手段を含むキットであって、体液中のヒトヘルペスウイルスの量を指標として被験者の疲労度を評価するために使用できることが表示されている、請求項9に記載のキット。
- (i) 被験者が抗疲労物質の候補である物質を摂取する前に当該被験者の体液を採取し、体液中のHHVの量を測定する摂取前HHV量測定工程と、
(ii) 被験者が抗疲労物質の候補である物質を摂取した後に当該被験者の体液を採取し、体液中のHHVの量を測定する摂取後HHV量測定工程と、
(iii) (i)の摂取前HHV量測定工程、及び(ii)の摂取後HHV量測定工程によって得られた、当該抗疲労物質の候補である物質の摂取前後におけるHHV量の変化の測定結果に基づき、当該抗疲労物質の候補である物質の摂取前後における体液中のHHV量の変化を算出するウイルス量変化算出工程と、
(iv) (iii)のウイルス量変化算出工程によって得られた当該抗疲労物質の候補である物質の摂取前後における体液中のHHV量変化に基づき、当該抗疲労物質の候補である物質の生体における抗疲労力を測定する抗疲労力測定工程
とを含む、抗疲労物質の候補である物質の抗疲労効果評価方法。 - (i) 抗疲労物質の候補である物質を摂取した被験者と、抗疲労物質の候補である物質を摂取しなかった被験者からそれぞれ体液を採取し、それぞれの体液中のHHVの量を測定するHHV量測定工程と、
(ii) (i)のHHV量測定工程によって得られた、当該抗疲労物質の候補である物質の摂取の有無によるHHV量の変化の測定結果に基づき、当該抗疲労物質の候補である物質の摂取の有無による体液中のHHV量の変化を算出するウイルス量変化算出工程と、
(iii) (ii)のウイルス量変化算出工程によって得られた当該抗疲労物質の候補である物質の摂取の有無による体液中のHHV量変化に基づき、当該抗疲労物質の候補である物質の生体における抗疲労力を測定する抗疲労力測定工程
とを含む、抗疲労物質の候補である物質の抗疲労効果評価方法。 - 上記請求項1ないし8のいずれか一項に記載の疲労度評価方法および請求項9または10のいずれか一項に記載の疲労度評価キットのいずれかを用いて、抗疲労物質の候補である物質の抗疲労効果を測定することを特徴とする、請求項11または12のいずれか一項に記載の抗疲労効果評価方法。
- 抗疲労物質をスクリーニングするための、請求項11ないし13のいずれか一項に記載の抗疲労物質の候補である物質の抗疲労効果評価方法。
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