JPWO2003068796A1 - 4'-C-cyano-2'-deoxypurine nucleoside - Google Patents

Abstract

Excellent anti-HIV activity, especially effective against multi-drug resistant HIV strains resistant to multiple drugs such as AZT, ddI, ddC, d4T, 3TC, etc. 4′-C-cyano-2′-deoxypurine nucleoside, and a pharmaceutical composition comprising the compound and a pharmaceutically acceptable carrier. (In the formula, B represents a purine base, and R represents a hydrogen atom or a phosphate residue.)

Description

（式中、Ｂはプリン塩基を示し、Ｒは水素原子またはリン酸残基を示す。）で表される４’−Ｃ−シアノ−２’−デオキシプリンヌクレオシド、その製造方法、および当該化合物と薬学的に許容される担体とを含有してなる医薬組成物に関するものである。
また、本発明は、上記式［Ｉ］化合物またはそれを含む医薬組成物をヒトを含む動物に投与することを特徴とするエイズの治療方法に関するものである。
発明を実施するための最良の形態
（１）化合物
本発明化合物は、前記式［Ｉ］で表されるものであり、式中のＢで表される塩基は、アザプリン及びデアザプリンを含むプリン塩基を示す。
このようなプリン塩基は、ハロゲン原子、アルキル基、ハロアルキル基、アルケニル基、ハロアルケニル基、アルキニル基、アミノ基、アルキルアミノ基、水酸基、ヒドロキシアミノ基、アミノキシ基、アルコキシ基、メルカプト基、アルキルメルカプト基、アリール基、アリールオキシ基、シアノ基などの置換基を有していてもよく、置換基の数及び位置は特に制限されるものではない。
置換基としてのハロゲン原子としては、塩素、フッ素、ヨウ素、臭素が例示される。アルキル基としては、メチル、エチル、プロピルなどの炭素数１〜７の低級アルキル基が例示される。ハロアルキル基としては、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、ブロモメチル、ブロモエチルなどの炭素数１〜７のアルキルを有するハロアルキル基が例示される。アルケニル基としては、ビニル、アリルなどの炭素数２〜７のアルケニル基が例示される。ハロアルケニル基としては、ブロモビニル、クロロビニルなどの炭素数２〜７のアルケニルを有するハロアルケニル基が例示される。アルキニル基としては、エチニル、プロピニルなどの炭素数２〜７のアルキニル基が例示される。アルキルアミノ基としては、メチルアミノ、エチルアミノなどの炭素数１〜７のアルキルを有するアルキルアミノ基が例示される。
アルコキシ基としては、メトキシ、エトキシなどの炭素数１〜７のアルコキシ基が例示される。アルキルメルカプト基としては、メチルメルカプト、エチルメルカプトなどの炭素数１〜７のアルキルを有するアルキルメルカプト基が例示される。アリール基としては、フェニル基；メチルフェニル、エチルフェニルなどの炭素数１〜５のアルキルを有するアルキルフェニル基；メトキシフェニル、エトキシフェニルなどの炭素数１〜５のアルコキシを有するアルコキシフェニル基；ジメチルアミノフェニル、ジエチルアミノフェニルなどの炭素数１〜５のアルキルアミノを有するアルキルアミノフェニル基；クロロフェニル、ブロモフェニルなどのハロゲノフェニル基などが例示される。
プリン系の塩基を具体的に例示すれば、プリン、６−アミノプリン（アデニン）、６−ヒドロキシプリン、６−フルオロプリン、６−クロロプリン、６−メチルアミノプリン、６−ジメチルアミノプリン、６−トリフルオロメチルアミノプリン、６−ベンゾイルアミノプリン、６−アセチルアミノプリン、６−ヒドロキシアミノプリン、６−アミノオキシプリン、６−メトキシプリン、６−アセトキシプリン、６−ベンゾイルオキシプリン、６−メチルプリン、６−エチルプリン、６−トリフルオロメチルプリン、６−フェニルプリン、６−メルカプトプリン、６−メチルメルカプトプリン、６−アミノプリン−１−オキシド、６−ヒドロキシプリン−１−オキシド、２−アミノ−６−ヒドロキシプリン（グアニン）、２，６−ジアミノプリン、２−アミノ−６−クロロプリン、２−アミノ−６−ヨードプリン、２−アミノプリン、２−アミノ−６−メルカプトプリン、２−アミノ−６−メチルメルカプトプリン、２−アミノ−６−ヒドロキシアミノプリン、２−アミノ−６−メトキシプリン、２−アミノ−６−ベンゾイルオキシプリン、２−アミノ−６−アセトキシプリン、２−アミノ−６−メチルプリン、２−アミノ−６−シクロプロピルアミノメチルプリン、２−アミノ−６−フェニルプリン、２−アミノ−８−ブロモプリン、６−シアノプリン、６−アミノ−２−クロロプリン（２−クロロアデニン）、６−アミノ−２−フルオロプリン（２−フルオロアデニン）、６−アミノ−３−デアザプリン、６−アミノ−８−アザプリン、２−アミノ−６−ヒドロキシ−８−アザプリン、６−アミノ−７−デアザプリン、６−アミノ−１−デアザプリン、６−アミノ−２−アザプリンなどが挙げられる。
このようなプリン塩基の中でも、２位にアミノ基を有していないプリン塩基が好ましく、好ましい本発明化合物を具体的に例示すれば、たとえば４’−Ｃ−シアノ−２’−デオキシアデノシン、４’−Ｃ−シアノ−２’−デオキシイノシンまたはそれらの５’−リン酸エステルが挙げられる。
本発明化合物は、塩、水和物または溶媒和物の形態であってもよい。そのような塩としては、Ｒが水素原子である場合には塩酸塩または硫酸塩などの酸付加物、Ｒがリン酸残基である場合にはナトリウム塩、カリウム塩またはリチウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウム塩などのアルカリ土類金属塩もしくはアンモニウム塩などの薬学的に許容される任意の塩が例示される。
また、水和物または溶媒和物としては、本発明の化合物またはその塩１分子に対し、０．１〜３．０分子の水または溶媒が付着したものを例示することができる。さらに、本発明の化合物には、互変異性体などの各種異性体も包含されうる。
（２）製造法
本発明化合物は、以下に説明する工程により製造することができる。
第１工程；
第１工程は式［ＩＩ］で表される化合物の３’位水酸基を保護し、式［ＩＶ］で表される化合物を得る工程である。

（式中、Ｂはプリン（アザプリンまたはデアザプリンも含む）塩基を示し、Ｒ_１、Ｒ_２は保護基を示す。）
式［ＩＶ］で表される化合物は、式［ＩＩ］で表される化合物の５’位水酸基を保護した後、３’位水酸基を５’位保護基とは除去法の異なる保護基で保護し、引き続き、５’位水酸基の保護基を選択的に除去して得ることができる。
Ｒ_１で表される５’位水酸基の保護基としては、ヌクレオシドの５’位水酸基の保護基として常用されているものであればよく、具体的には、ジメトキシトリチル、メトキシトリチル、トリチル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、ベンゾイル基などが例示される。また、Ｒ_２で表される３’位水酸基の保護基としては、水酸基などで通常使用されるものであればよく、たとえばエーテル系保護基、アシル系保護基、シリル系保護基、アセタール系保護基などを例示することができる。
より具体的には、エーテル系保護基としては、メチルエーテル、第３級ブチルエーテル、ベンジルエーテル、メトキシベンジルエーテル、トリチルエーテルなどを、アシル系保護基としてはアセチル、ベンゾイル、ピバロイルなどを、シリル系保護基としてはｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、トリメチルシリル、トリエチルシリルなどを、アセタール系保護基としてはイソプロピリデン、エチリデン、メチリデン、ベンジリデン、テトラヒドロピラニル、メトキシメチルなどをそれぞれ使用することができる。
各保護基の導入は、当該技術分野において知られる通常の方法によって行われる。
引き続き行う５’位保護基の除去は、使用した保護基に応じ、酸性加水分解、アルカリ性加水分解、フッ化テトラブチルアンモニウム処理、接触還元などの通常の処理方法から適宜選択して行えばよい。
第２工程；
第２工程は、式［ＩＶ］で表される化合物の４’位にヒドロキシメチル基を導入し、式［Ｖ］で表される化合物を得る工程である。

（式中、Ｂはプリン（アザプリンまたはデアザプリンも含む）塩基を示し、Ｒ_２は保護基を示す。）
式［Ｖ］で表される化合物は、式［ＩＶ］で表される化合物の５’−ヒドロキシメチル基をアルデヒド基へ変換後、ホルムアルデヒドとのアルドール反応による４’位へのヒドロキシメチル基の導入及びアルデヒド基の還元を経て合成することができる。
式［ＩＶ］で表される化合物の５’−ヒドロキシメチル基をアルデヒドに変換する場合の酸化剤としては、無水クロム酸、ピリジンと無水酢酸との複合試薬、ピリジンクロロクロメート、ピリジンジクロメートなどのクロム系酸化剤；デス−マーチン試薬などの高原子価ヨウ素酸化剤；ジメチルスルホキシドと無水酢酸、塩化オキサリルまたはジシクロヘキシルカルボジイミドとを組み合わせて用いるジメチルスルホキシド系酸化剤などを例示することができる。
反応条件は用いる酸化剤により異なり、たとえば、１−エチル−３−（ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩とジメチルスルホキシドを用いて酸化する場合、トルエンなどの有機溶媒とジメチルスルホキシドの混合溶媒中、必要によりアルゴン、窒素などの不活性ガス雰囲気下、式［ＩＶ］化合物１モルに対して１−エチル−３−（ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩を１〜５モル用い、１０〜５０℃で１〜２時間程度反応させることにより実施できる。
次に、４’位へのヒドロキシメチル基の導入は、得られたアルデヒド化合物とホルムアルデヒドとのアルドール反応により実施することができる。
アルドール化は、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどの有機溶媒中、１〜５モルの水酸化ナトリウムなどの塩基存在下、アルデヒド化合物１モルに対して１〜１０モルのホルムアルデヒドを用い、反応させることにより実施することができる。
引き続き行うアルデヒド基の還元は、メタノール、エタノール、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン等の有機溶媒中、アルデヒド化合物１モルに対して、１〜５モルの水素化ホウ素ナトリウム、水素化リチウムアルミニウムなどの還元剤を用い、−７８℃から室温で１５分から１時間程度反応させればよい。
第３工程；
第３工程は、式［Ｖ］で表される化合物の５’位に保護基を導入する工程である。

（式中、Ｂはプリン（アザプリンまたはデアザプリンも含む）塩基を示し、Ｒ_２〜Ｒ_４は保護基を示す。）
式［ＶＩＩ］で表される化合物は、式［Ｖ］で表される化合物の４’位ヒドロキシメチル基を保護した後、５’位水酸基を４’位ヒドロキシメチル基の保護基とは除去法の異なる保護基で保護し、引き続き、４’位ヒドロキシメチル基の保護基を選択的に除去して得られる。
Ｒ_３で表される４’位ヒドロキシメチル基の保護基としては、ヌクレオシドの５’位水酸基の保護基として常用されているものであればよく、具体的には、前記第１工程で例示したものを使用することができる。
各保護基の導入は、当該技術分野において知られる通常の方法によって行われる。
４’位ヒドロキシメチル基の保護基の除去は、使用した保護基に応じ、酸性加水分解、アルカリ性加水分解、フッ化テトラブチルアンモニウム処理、接触還元などの通常の処理方法から適宜選択して行えばよい。
第４工程；
第４工程は、式［ＶＩＩ］で表される化合物の４’位ヒドロキシメチル基をシアノ基に変換する工程である。

（式中、Ｂはプリン（アザプリンまたはデアザプリンも含む）塩基を示し、Ｒ_２とＲ_４は保護基を示す。）
式［ＶＩＩＩ］で表される化合物は、式［ＶＩＩ］の４’位ヒドロキシメチル基をアルデヒド基へと酸化した後、これをオキシム基へと変換し、引き続き、得られたオキシム化合物を脱水することにより合成できる。
式［ＶＩＩ］で表される化合物の４’−ヒドロキシメチル基をアルデヒドに変換する場合、用いる酸化剤としては、前記第２工程で例示したものを使用することができる。
反応条件は用いる酸化剤により異なり、たとえば、１−エチル−３−（ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩とジメチルスルホキシドを用いて酸化する場合、トルエンなどの有機溶媒とジメチルスルホキシドの混合溶媒中、必要によりアルゴン、窒素などの不活性ガス雰囲気下、式［ＶＩＩ］化合物１モルに対して１−エチル−３−（ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩を１〜５モル用い、１０〜５０℃で１〜２時間程度反応させることにより実施できる。
アルデヒド化合物のオキシム化合物への変換は、ピリジンなどの有機溶媒中、アルデヒド化合物１モルに対して、１〜５モルの塩酸ヒドロキシルアミンを使用し、室温〜１００℃で３０分〜３時間反応させることにより実施できる。
オキシム化合物の脱水は、ジクロロメタン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン等の有機溶媒中、ピリジン、トリエチルアミン、酢酸ナトリウム等の塩基存在下、ホスゲン、カルボニルジイミダゾール、塩化メタンスルホニル、無水酢酸等の脱水剤を用いることで実施できる。
脱水反応条件は用いる脱水剤により異なり、たとえば、塩化メタンスルホニルを用いて脱水する場合、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、ピリジンなどの有機溶媒中、式［ＶＩＩ］化合物１モルに対して塩化メタンスルホニルとトリエチルアミンをそれぞれ１〜５モル、５〜１０モル用い、−５０℃〜室温で１５分〜２時間程度反応させることにより実施できる。
こうして得られた化合物［ＶＩＩＩ］の保護基を除去して、Ｒが水素である本発明化合物を得、必要に応じてリン酸化して本発明化合物を得る。

（式中、Ｂはプリン（アザプリンまたはデアザプリンも含む）塩基を示し、Ｒは水素原子またはリン酸残基を示し、Ｒ_２とＲ_４は保護基を示す。）
保護基の除去は、使用した保護基に応じ、酸性加水分解、アルカリ性加水分解、フッ化テトラブチルアンモニウム処理、接触還元などの通常の処理方法から適宜選択して行えばよい。
さらに、所望により塩基中のアミノ基を脱アミノしたい場合には、アデノシンデアミナーゼ、シチジンデアミナーゼなどの各種デアミナーゼを用いて常法により脱アミノすることも可能である。
また、Ｒがモノリン酸残基、ジリン酸残基などのリン酸残基である化合物を得る場合には、Ｒが水素原子である化合物をオキシ塩化リン、テトラクロロピロリン酸などのヌクレオシドの５’位の選択的なリン酸化に使用されるリン酸化剤と反応させることにより、遊離酸型または塩型の目的化合物を得ることができる。
上記各反応の実施に際し、必要に応じて、プリン塩基中の官能基を通常の方法で保護し、ついで、脱保護することができる。
本発明化合物は、一般のヌクレオシド、ヌクレオチドの単離精製に使用されている方法（例えば、再結晶法、イオン交換カラムクロマトグラフィー、吸着カラムクロマトグラフィーなど）を適宜組み合わせて分離精製することができる。このようにして得られた化合物は、必要に応じて塩型とすることもできる。
（３）用途
本発明化合物は、抗ウィルス作用を有し、後述の試験例に示すようにレトロウイルスに対して優れた抗ウイルス作用を有することから、これらを有効成分とする本発明組成物は医薬としての使用、具体的にはレトロウイルスの感染症の処置、特にヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染に起因するＨＩＶ感染症（たとえば、エイズなど）の治療に有用である。
本発明の医薬組成物が有効に使用できるヒト以外の動物としては、家畜、家禽類のほか、実験動物が含まれる。
本発明化合物の投与量は、患者の年齢、体重、疾病、疾病の重篤度、薬物に対する忍容性、投与方法などにより異なり、これらの条件を総合した上で適宜決定されるものであるが、通常１日当たり０．００００１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内から選ばれ、一回または複数回に分けて投与される。
投与方法は、経口、非経口、経皮、経腸、局所投与などのいずれの経路によっても投与することができる。
本発明化合物の製剤化に際しては、通常使用される製剤用担体、賦形剤、その他の添加剤を含む組成物として使用するのが普通である。担体としては、乳糖、カオリン、ショ糖、結晶セルロース、コーンスターチ、タルク、寒天、ペクチン、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、レシチン、塩化ナトリウムなどの固体状担体、グリセリン、落花生油、ポリビニルピロリドン、オリーブ油、エタノール、ベンジルアルコール、プロピレングリコール、水などの液状担体を例示することができる。
剤型としては任意の形態を採ることができ、たとえば固体状製剤としては錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル化剤、座剤、トローチ剤、バッカル剤、貼付剤などを、液状製剤としてはシロップ剤、乳液剤、軟ゼラチンカプセル剤、クリームないしペースト剤、ゲル剤、スプレー剤、リポソーム剤、注射剤などをそれぞれ例示することができる。
本発明の医薬組成物と該医薬組成物の使用に関する説明を記載した記載物を含むパッケージにおいて、記載物としては、用途・効能や投与方法などに関する説明事項を記載したいわゆる能書などが挙げられる。
また、本発明の化合物およびその医薬組成物は、ＡＺＴ、ｄｄＩ、ｄｄＣ、ｄ４Ｔ、３ＴＣなどの他の抗ウィルス剤と併用投与することができる。
実施例
以下、本発明を合成例、試験例、製剤例などをあげて具体的に説明するが、本発明はこれらによって何等限定されるものではない。
以下の各式中、Ａはアデニン、Ａ^ＢＺはＮ^６−ベンゾイル−アデニン、Ｈはイノシン、Ｇはグアニン、ＤＡＰは２，６−ジアミノプリン、ＤＡＰ^ＢＺ２は２，６−ジベンズアミドプリン、ＤＭＴｒはジメトキシトリチル、ＴＢＳはｔ−ブチルジメチルシリルを示す。
合成例１：４’−Ｃ−シアノ−２’−デオキシアデノシンの合成
（１）Ｎ^６−ベンゾイル−３’−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−２’−デオキシアデノシン（化合物２）の合成

Ｎ^６−ベンゾイル−２’−デオキシ−５’−Ｏ−ジメトキシトリチルアデノシン１（２．００ｇ、３．０４ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（６．００ｍｌ）に溶解し、イミダゾール（０．８３ｇ、１２．２ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチルクロロジメチルシラン（０．９２ｇ、６．１０ｍｍｏｌ）を加え、室温で終夜撹拌した。
メタノールを加えて反応を停止させた後、反応液を酢酸エチルで希釈し、有機層を水洗、乾燥（無水硫酸マグネシウム）した。乾燥剤をろ去後、ろ液を減圧下濃縮した。得られた残さをクロロホルム（７０．０ｍｌ）に溶解し、氷冷下、トルエンスルホン酸１水和物（２．００ｇ）のメタノール溶液（３０．０ｍｌ）を滴下し、同温度で３０分間撹拌した。
反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え撹拌した後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶液を減圧下濃縮し、残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル １００ｃｃ、ヘキサン：酢酸エチル＝１：３）により精製し、白色泡状の化合物２（１．２０ｇ、２．５６ｍｍｏｌ、８４．２％）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ ９．０５（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），８．７８（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８），８．１０（１Ｈ，ｓ，Ｈ−２），８．０９−７．５２（５Ｈ，ｍ，ａｒｏｍａｔｉｃ），６．３７（１Ｈ，ｄｄ，Ｈ−１’，Ｊ＝５．３６，９．２８），５．７８（１Ｈ，ｄｄ，５’−ＯＨ，Ｊ＝１．９２，１１．２），４．７４（１Ｈ，ｄ，Ｈ−３’，Ｊ＝４．８８），４．１７（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４’），４．００−３．７４（２Ｈ，ｍ，Ｈ−５’），３．０７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’ａ），２．２７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’ｂ），０．９４（９Ｈ，ｓ，ｔ−Ｂｕ），０．１３（６Ｈ，ｓ，Ｍｅ）．
（２）Ｎ^６−ベンゾイル−３’−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−２’−デオキシ−４’−Ｃ−ヒドロキシメチルアデノシン（化合物３）の合成

化合物２（２．５５ｇ、５．４３ｍｍｏｌ）をトルエン（１０．０ｍｌ）、ジメチルスルホキシド（１５．０ｍｌ）に溶解し、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（３．１２ｇ、１６．３ｍｍｏｌ）、ピリジン（０．４１ｍｌ）、トリフルオロ酢酸（０．２１ｍｌ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応液を酢酸エチルで希釈した後、有機層を水洗、乾燥（無水硫酸マグネシウム）した。乾燥剤をろ去後、ろ液を減圧下濃縮し、粗アルデヒドを得た。粗アルデヒドをジオキサン（１５．０ｍｌ）に溶解し、３７％ ホルムアルデヒド水溶液（２．８６ｍｌ）、２Ｎ 水酸化ナトリウム水溶液（２．８６ｍｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。
反応液を酢酸で中和後、酢酸エチルで希釈し、水洗、乾燥した。乾燥剤をろ去後、ろ液を減圧下濃縮して得られた残さをエタノール（２５．０ｍｌ）に溶解し、氷冷下、水素化ホウ素ナトリウム（０．２１ｇ、５．５５ｍｍｏｌ）を加え、３０分間撹拌した。反応液を酢酸で中和後、酢酸エチルで希釈し、水洗、乾燥（無水硫酸マグネシウム）した。乾燥剤をろ去後、ろ液を減圧下濃縮し、残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル ３００ｃｃ、ヘキサン：酢酸エチル＝１：３〜１：４〜１：５）により精製し、淡黄色泡状の化合物３（１．６８ｇ、３．３６ｍｍｏｌ、６１．９％）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ ９．０５（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），８．７９（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８），８．０８（１Ｈ，ｓ，Ｈ−２），８．０４−７．５２（５Ｈ，ｍ，ａｒｏｍａｔｉｃ），６．４４（１Ｈ，ｄｄ，Ｈ−１’），５．５６（１Ｈ，ｂｒ．ｄ，ＯＨ），４．９４（１Ｈ，ｄｄ，Ｈ−３’，Ｊ＝１．４８，５．８８），３．８６−３．６３（４Ｈ，ｍ，Ｈ−５’ ａｎｄ Ｈ−６’），３．２４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’ａ），２．６７（１Ｈ，ｂｒ．ｓ，ＯＨ），２．３８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’ｂ），０．９６（９Ｈ，ｓ，ｔ−Ｂｕ），０．１９，０．１８（ｅａｃｈ ３Ｈ，ｓ，Ｍｅ）．
（３）Ｎ^６−ベンゾイル−３’−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−４’−Ｃ−ジメトキシトリチルオキシメチルアデノシン（化合物４）の合成

化合物３（０．８４ｇ、１．６８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１７．０ｍｌ）に溶解し、氷冷下、トリエチルアミン（０．４７ｍｌ、３．３７ｍｍｏｌ）、塩化ジメトキシトリチル（０．８５ｇ、２．５１ｍｍｏｌ）を加え、３０分間撹拌した。メタノールを加えて反応を停止させた後、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮し、残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル ２００ｃｃ、ヘキサン：酢酸エチル＝２：１〜１：１）により精製し、淡黄色泡状の化合物４（０．９１ｇ、１．１３ｍｍｏｌ、６７．３％）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ ９．３０（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ），８．９４（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８），８．２４（１Ｈ，ｓ，Ｈ−２），８．１８−６．９４（１８Ｈ，ｍ，ａｒｏｍａｔｉｃ），６．４１（１Ｈ，ｄｄ，Ｈ−１’，Ｊ＝５．８４，８．８０），５．３６（１Ｈ，ｂｒ．ｓ，ＯＨ），４．８５（１Ｈ，ｄ，Ｈ−３’，Ｊ＝３．９２），４．４２（１Ｈ，ｂｒ．ｄ，Ｈ−５’ａ），３．９１（６Ｈ，ｓ，ＯＭｅ），３．７８（１Ｈ，ｂｒ，ｔ，Ｈ−５’ｂ），３．６６（１Ｈ，ｄ，Ｈ−６’ａ，Ｊ＝１０．７６），３．２８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’ａ），３．２０（１Ｈ，ｄ，Ｈ−６’ｂ，Ｊ＝１０．７６），２．４１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’ｂ），０．８９（９Ｈ，ｓ，ｔ−Ｂｕ），０．１３，０．１１（ｅａｃｈ ３Ｈ，ｓ，Ｍｅ）．
（４）Ｎ^６−ベンゾイル−３’，５’−ジ−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−２’−デオキシ−４’−Ｃ−ヒドロキシメチルアデノシン（化合物５）の合成

化合物４（１．６１ｇ、２．０１ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（８．００ｍｌ）に溶解し、イミダゾール（０．４１ｇ、６．０２ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチルクロロジメチルシラン（０．４５ｇ、２．９９ｍｍｏｌ）を加え、室温で終夜撹拌した。メタノールを加えて反応を停止させた後、反応液を酢酸エチルで希釈し、有機層を水洗、乾燥（無水硫酸マグネシウム）した。乾燥剤をろ去し、ろ液を減圧下濃縮した。得られた残さをクロロホルム（７０．０ｍｌ）に溶解し、氷冷下、トルエンスルホン酸１水和物（１．００ｇ）のメタノール溶液（３０．０ｍｌ）を滴下し、同温度で３０分間撹拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え撹拌した後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。得られた溶液を減圧下濃縮し、残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル ２００ｃｃ、ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）により精製し白色泡状の化合物５（１．００ｇ、１．６３ｍｍｏｌ、８１．１％）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ ９．０９（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ），８．８０（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８），８．２８（１Ｈ，ｓ，Ｈ−２），８．０４−７．５１（５Ｈ，ｍ，ａｒｏｍａｔｉｃ），６．５２（１Ｈ，ｔ，Ｈ−１’，Ｊ＝６．３２），４．８７（１Ｈ，ｄｄ，Ｈ−３’，Ｊ＝４．４０，６．３６），３．９０−３．７２（４Ｈ，ｍ，Ｈ−５’ ａｎｄ Ｈ−６’），３．０３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’ａ），２．６０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’ｂ），２．５３（１Ｈ，ｂｒ．ｓ，ＯＨ），０．９５，０．８９（ｅａｃｈ ９Ｈ，ｓ，ｔ−Ｂｕ），０．１６，０．０６（ｅａｃｈ ６Ｈ，ｓ，Ｍｅ）．
（５）Ｎ^６−ベンゾイル−３’，５’−ジ−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−４’−Ｃ−シアノ−２’−デオキシアデノシン（化合物６）の合成

化合物５（１．００ｇ、５．４３ｍｍｏｌ）をトルエン（３．００ｍｌ）とジメチルスルホキシド（６．００ｍｌ）に溶解し、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（０．９４ｇ、４．９０ｍｍｏｌ）、ピリジン（０．１３ｍｌ）、トリフルオロ酢酸（６２．８μｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応液を酢酸エチルで希釈した後、有機層を水洗、乾燥（無水硫酸マグネシウム）した。乾燥剤をろ去後、ろ液を減圧下濃縮し、粗アルデヒドを得た。粗アルデヒドをピリジン（１０．０ｍｌ）に溶解し、塩酸ヒドロキシルアミン（０．１７ｇ、２．４５ｍｍｏｌ）を加え、室温で３０分間撹拌した。反応液を減圧下濃縮し、残さを酢酸エチル−水で分配した。有機層を無水硫酸マグネシウム上で乾燥した後、減圧下乾固し、粗オキシムを得た。粗オキシムをジクロロメタン（１０．０ｍｌ）に溶解し、氷冷下、トリエチルアミン（０．４５ｍｌ、３．２３ｍｍｏｌ）、塩化メタンスルホニル（０．１９ｍｌ、２．４５ｍｍｏｌ）を加え、３０分間撹拌した。反応液をクロロホルムで希釈した後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧下乾固し、残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル ２００ｃｃ、クロロホルム：メタノール＝１００：１）により精製した。エタノール−水から結晶化し、化合物６（０．８７ｇ、１．４１ｍｍｏｌ、８７．７％）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ ９．００（１Ｈ，ｂｒ．ｓ，ＮＨ），８．７８（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８），８．１３（１Ｈ，ｓ，Ｈ−２），８．０３−７．５１（５Ｈ，ｍ，ａｒｏｍａｉｃ），６．５２（１Ｈ，ｔ，Ｈ−１’，Ｊ＝５．８８），５．０２（１Ｈ，ｔ，Ｈ−３’，Ｊ＝５．８４），４．０５（１Ｈ，ｄ，Ｈ−５’ａ，Ｊ＝１１．２４），３．８９（１Ｈ，ｄ，Ｈ−５’ｂ，Ｊ＝１１．２４），３．２４，２．６２（ｅａｃｈ １Ｈ，ｍ，Ｈ−２’），０．９８，０．８７（ｅａｃｈ ９Ｈ，ｓ，ｔ−Ｂｕ），０．２１，０．１９，０．０８，０．０３（ｅａｃｈ ３Ｈ，ｓ，Ｍｅ）．
（６）４’−Ｃ−シアノ−２’−デオキシアデノシン（化合物７）の合成

化合物６（０．７０ｇ、１．１５ｍｍｏｌ）をメタノール（１０．５ｍｌ）に溶解し、２８％ アンモニア水（３．５０ｍｌ）を加え、室温で終夜撹拌した。析出した結晶をテトラヒドロフラン（７．８０ｍｌ）に溶解し、フッ化テトラブチルアンモニウム（１Ｍ テトラヒドロフラン溶液、２．１８ｍｌ、２．１８ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５分間撹拌した。反応液を減圧下濃縮した後、残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル ５０ｃｃ、酢酸エチル：メタノール＝２０：１〜１０：１）により精製した。水から結晶化し、化合物７（０．２１ｇ、０．７６ｍｍｏｌ、６６．１％）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ ８．３２（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８），８．１５（１Ｈ，ｓ，Ｈ−２），７．３３（２Ｈ，ｂ．ｓ，ＮＨ_２），６．５２（１Ｈ，ｔ，Ｈ−１’，Ｊ＝６．８４），６．３１（１Ｈ，ｄ，３’−ＯＨ，Ｊ＝５．４０），５．８３（１Ｈ，ｔ，５’−ＯＨ，Ｊ＝５．８８），４．７５（１Ｈ，ｄｄ，Ｈ−３’，Ｊ＝５．３６，５．８８），３．８４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５’），３．６７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５’），２．９９（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’），２．４７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’）．
ＦＡＢＭＳ ｍ／ｚ：２７７（ＭＨ^＋）．
合成例２：４’−Ｃ−シアノ−２’−デオキシイノシン（化合物８）の合成

化合物７（０．１５ｇ、０．５４ｍｍｏｌ）を５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ ７．５０、３０．０ｍｌ）に溶解し、アデノシンデアミナーゼ（０．３０ｍｌ、１３５ｕｎｉｔ）を加え、４０℃で２時間撹拌した。反応液を減圧下濃縮した後、ＯＤＳシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＯＤＳシリカゲル ５０ｃｃ、Ｈ_２Ｏ〜２．５％エタノール）で精製した。水から結晶化し、化合物 ８（９０．０ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ、５９．３％）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ １２．３６（１Ｈ，ｂ．ｓ，ＮＨ），８．３１（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８），８．０９（１Ｈ，ｓ，Ｈ−２），６．５０（１Ｈ，ｔ，Ｈ−１’，Ｊ＝６．８４），６．３４（１Ｈ，ｂ．ｓ，ＯＨ），５．７４（１Ｈ，ｂ．ｓ，ＯＨ），４．６９（１Ｈ，ｔ，Ｈ−３’，Ｊ＝５．８４），３．７９（１Ｈ，ｄ，Ｈ−５’ａ），３．６６（１Ｈ，ｄ，Ｈ−５’ｂ），２．９３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’ａ），２．５０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’ｂ）．
ＦＡＢＭＳ ｍ／ｚ：２７８（ＭＨ^＋）．
合成例３：９−（２−デオキシ−４−Ｃ−シアノ−β−Ｄ−リボ−ペントフラノシル）−２，６−ジアミノプリンの合成
（１）９−（２−デオキシ−β−Ｄ−リボ−ペントフラノシル）−２，６−ジベンズアミドプリン（化合物１０）の合成

化合物９（２６．２ｇ、１００ｍｍｏｌ）をピリジンで２回共沸した後、ピリジン（４００ｍｌ）に懸濁させ、０℃でクロロトリメチルシラン（８８ｍｌ、７００ｍｍｏｌ）を１０分かけて滴下した。０℃で３０分間撹拌した後、塩化ベンゾイル（８２ｍｌ、７００ｍｍｏｌ）を２０分かけて滴下し、さらに室温で２時間撹拌した。０℃で反応液に氷水（２００ｍｌ）をゆっくり注ぎ、１５分間撹拌した後、同温度で濃アンモニア水（３００ｍｌ）を滴下し３０分間撹拌した。減圧下で溶媒を留去し、残さに酢酸エチル（６００ｍｌ）、飽和重曹水（６００ｍｌ）を注ぎ、０℃で１時間撹拌した。析出した結晶をろ取し、水、酢酸エチルで洗浄後、真空乾燥して無色結晶状の化合物１０（３６．２２ｇ、７６％）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ １１．１９、１０．９８（ｅａｃｈ １Ｈ，ｓ，ＮＨ），８．６１（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８），８．０７−７．５０（１０Ｈ，ｓ，ａｒｏｍａｔｉｃ），６．４２（１Ｈ，ｔ，Ｈ−１’，Ｊ＝７．３２），５．３３（１Ｈ，ｄ，３’−ＯＨ，Ｊ＝３．８８），４．９３（１Ｈ，ｔ，５’−ＯＨ，Ｊ＝５．３６），４．４４（１Ｈ，ｂ．ｍ，Ｈ−３’），３．８８（１Ｈ，ｂ．ｍ，Ｈ−４’），３．６２（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５’ａ），３．５５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５’ｂ），２．７９（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’ａ），２．３３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’ｂ）．
（２）９−（２−デオキシ−３−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−β−Ｄ−リボ−ペントフラノシル）−２，６−ジベンズアミドプリン（化合物１１）の合成

化合物１０（３６．２２ｇ、７６．４ｍｍｏｌ）をピリジンで２回共沸脱水した後、ピリジン（３００ｍｌ）に溶解し、室温で塩化ジメトキシトリチル（３７．６ｇ、１１１ｍｍｏｌ）を加え、３時間撹拌した。反応液にエタノール（１０ｍｌ）を加え、減圧下、溶媒を留去した。残さを酢酸エチル（２５０ｍｌ）に懸濁させ、水を加えた後、セライトろ過して不溶物を除去した。有機層を回収し、さらに水で２回、飽和食塩水で１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル ３００ｇ、クロロホルム〜クロロホルム：メタノール＝２００：１〜１００：１〜５０：１）にて精製した。得られた残さ（６９．９ｇ）をジメチルホルムアミドで２回共沸脱水した後、ジメチルホルムアミド（３７０ｍｌ）に溶解し、イミダゾール（８．８ｇ、１２９ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチルクロロジメチルシラン（１６．５ｇ、１０９ｍｍｏｌ）を加え室温で一晩攪拌した。
反応液に水を注ぎ、減圧下で溶媒を留去した。残さを酢酸エチル（５００ｍｌ）に溶解し、水（５００ｍｌｘ３）、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、得られた残さをクロロホルム（５１０ｍｌ）に溶解し、０℃でトルエンスルホン酸１水和物−メタノール溶液（２２０ｍｌのＭｅＯＨ中に１４．６ｇ、７６．８ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下した（５分間）。０℃で１５分間攪拌した後、飽和重曹水（６００ｍｌ）を加えて中和し、有機層を回収後、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、さらに酢酸エチル（１５０ｍｌ）で共沸した。残さに酢酸エチル（３００ｍｌ）を加え、室温で３０分間攪拌した後、析出した結晶をろ取した。結晶を酢酸エチルで洗浄後、真空乾燥して無色結晶状の化合物１１（２８．７６ｇ、６４％）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ ９．３３，９．１７（ｅａｃｈ １Ｈ，ｓ，ＮＨ），８．０７−７．４５（１０Ｈ，ｍ，ａｒｏｍａｔｉｃ），６．２９（１Ｈ，ｄｄ，Ｈ−１’，Ｊ＝６．３６，７．８０），４．９５（１Ｈ，ｂ．ｍ，Ｈ−３’），４．８６（１Ｈ，ｂ．ｔ，５’−ＯＨ），４．０４（１Ｈ，ｂ．ｄ，Ｈ−４’），３．９５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５’ａ），３．８５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５’ｂ），１．４２（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’ａ），２．３０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’ｂ）．
（３）９−（２−デオキシ−３−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−４−Ｃ−ヒドロキシメチル−β−Ｄ−リボ−ペントフラノシル）−２，６−ジベンズアミドプリン（化合物１２）の合成

化合物１１（５０．０ｇ、８５．０ｍｍｏｌ）をジメチルスルホキシド（２９０ｍｌ）−トルエン（１９０ｍｌ）に溶解し、室温下で１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（２４．６ｇ、１２７．５ｍｍｏｌ）、ピリジン（６．９ｍｌ、８５．０ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸（３．３ｍｌ、４２．５ｍｍｏｌ）を加え２時間攪拌した。反応液に０℃で酢酸エチル（７５０ｍｌ）、氷水（７５０ｍｌ）を加え１時間攪拌した。析出した結晶（一部のホルミル体）をろ取し、ろ液の有機層を回収した。有機層を水で２回、飽和食塩水で１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、残さとろ取した結晶をあわせて、粗アルデヒドを得た。粗アルデヒドをジオキサン（２４０ｍｌ）に溶解し、室温下で３７％ホルムアルデヒド水溶液（４５ｍｌ）、２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（４５ｍｌ）を加え、室温で３時間攪拌した。反応液を氷酢酸（８．６ｍｌ）で中和し、酢酸エチル（７００ｍｌ）で抽出した。有機層を水、飽和重曹水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、得られた残さをエタノール（３６０ｍｌ）に溶解し、０℃で水素化ホウ素ナトリウム（３．２ｇ、８５．０ｍｍｏｌ）を加え、同温で３０分間攪拌した。反応液に氷酢酸（２．５ｍｌ）を加えて反応を停止し、クロロホルム−メタノール（１０：１）（１．１Ｌ）で抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、さらに酢酸エチル（２００ｍｌ）で共沸した。残さに酢酸エチル（５００ｍｌ）を加え、室温で５分間攪拌した後、析出した結晶をろ取した。結晶を酢酸エチルで洗浄し、真空乾燥して化合物１２を無色の結晶として３０．８３ｇ（５９％）得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ １１．２１，１１．０１（ｅａｃｈ １Ｈ，ｓ，ＮＨ），８．６３−７．５０（１２Ｈ，ｍ，ａｒｏｍａｔｉｃ），６．４３（１Ｈ，ｔ，Ｈ−１’，Ｊ＝６．３２），４．９１（１Ｈ，ｔ，ＯＨ，Ｊ＝５．３６），４．７８（１Ｈ，ｔ，Ｈ−３’，Ｊ＝５．８４），４．４７（１Ｈ，ｔ，ＯＨ，Ｊ＝６．３６），３．６５−３．５２（４Ｈ，ｍ，Ｈ−５’ ａｎｄ Ｈ−６’），２．９６（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’ａ），２．４３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’ｂ），０．８９（９Ｈ，ｓ，ｔ−Ｂｕ），０．１０（６Ｈ，ｓ，Ｍｅ）．
（４）９−（２−デオキシ−３−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−４−Ｃ−ジメトキシトリチルオキシメチル−β−Ｄ−リボ−ペントフラノシル）−２，６−ジベンズアミドプリン（化合物１３）の合成

化合物１２（２４．８ｇ、４０．０ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミドで１回共沸脱水した後、ジメチルホルムアミド（２００ｍｌ）に溶解し、トリエチルアミン（１１．２ｍｌ、８０．０ｍｍｏｌ）、塩化ジメトキシトリチル（２０．３ｇ、６０．０ｍｍｏｌ）を加え室温で１時間攪拌した。反応液を酢酸エチル（６００ｍｌ）で抽出し、水（６００ｍｌｘ３）、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル ６００ｇ、クロロホルム〜クロロホルム−酢酸エチル５：１〜２：１〜１：２〜１：３〜酢酸エチル）にて精製し、化合物１３（２２．２ｇ、６０％）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ ９．３３，９．２４（ｅａｃｈ １Ｈ，ｓ，ＮＨ），８．１３−６．８９（２５Ｈ，ｍ，ａｒｏｍａｔｉｃ），６．２７（１Ｈ，ｔ，Ｈ−１’，Ｊ＝６．８４），５．１４（１Ｈ，ｄｄ，Ｈ−３’，Ｊ＝３．９２，６．３６），４．５９（１Ｈ，ｄｄ，５’−ＯＨ，Ｊ＝５．４０，８．３２），４．３０（１Ｈ，ｄｄ，Ｈ−５’ａ，Ｊ＝５．３６，１２．７２），３．８７（６Ｈ，ｓ，ＯＭｅ），３．８２（１Ｈ，ｄｄ，Ｈ−５’ｂ，Ｊ＝８．８０，１２．２），３．５９（１Ｈ，ｄ，Ｈ−６’ａ，Ｊ＝１０．７６），３．２７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’ａ），３．１８（１Ｈ，ｄ，Ｈ−６’ｂ，Ｊ＝１０．７２），２．４８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’ｂ），０．８４（９Ｈ，ｓ，ｔ−Ｂｕ），０．０９，０．０７（ｅａｃｈ ３Ｈ，Ｍｅ）．
（５）９−（２−デオキシ−３，５−ジ−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−４−Ｃ−ヒドロキシメチル−β−Ｄ−リボ−ペントフラノシル）−２，６−ジベンズアミドプリン（化合物１４）の合成

化合物１３（２９．９ｇ、３２．５ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミドで２回共沸脱水した後、ジメチルホルムアミド（１００ｍｌ）に溶解し、イミダゾール（３．３ｇ、４８．８ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチルクロロジメチルシラン（５．９ｇ、３９．０ｍｍｏｌ）を加え室温で一晩攪拌した。反応液を酢酸エチル（３００ｍｌ）で抽出し、水（３００ｍｌｘ３）、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、得られた残さをクロロホルム（６２０ｍｌ）に溶解し、−１０℃でトルエンスルホン酸−メタノール溶液（１９０ｍｌのＭｅＯＨ中に６．２ｇ、３２．５ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下した（５分間）。同温で２０分間攪拌した後、飽和重曹水（３００ｍｌ）を加えて中和した。有機層を回収し、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル ３００ｇ、クロロホルム〜クロロホルム−酢酸エチル２：１〜１：１〜１：２）にて精製し、無色結晶の化合物１４（１７．５ｇ、７４％）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ ９．２０，９．１６（ｅａｃｈ １Ｈ，ｓ，ＮＨ），８．１３（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８），８．０３−７．４８（１０Ｈ，ｍ，ａｒｏｍａｔｉｃ），６．４５（１Ｈ，ｔ，Ｈ−１’，Ｊ＝６．３２），４．９９（１Ｈ，ｔ，Ｈ−３’，Ｊ＝６．３６），３．９１−３．７３（４Ｈ，ｍ，Ｈ−５’ ａｎｄ Ｈ−６’），３．１２（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’ａ），２．７１（１Ｈ，ｂ．ｄｄ，ＯＨ），２．５４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’ｂ），０．９３，０．８６（ｅａｃｈ ９Ｈ，ｓ，ｔ−Ｂｕ），０．１６，０．１５，０．０２，０．００７（ｅａｃｈ ３Ｈ，ｓ，Ｍｅ）．
（６）９−（２−デオキシ−３，５−ジ−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−４−Ｃ−シアノ−β−Ｄ−リボ−ペントフラノシル）−２，６−ジベンズアミドプリン（化合物１５）の合成

化合物１４（１．００ｇ、５．４３ｍｍｏｌ）をトルエン（６．００ｍｌ）、ジメチルスルホキシド（１２．０ｍｌ）に溶解し、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（１．５７ｇ、８．１９ｍｍｏｌ）、ピリジン（０．２２ｍｌ）、トリフルオロ酢酸（０．１１ｍｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応液を酢酸エチルで希釈した後、有機層を水洗、乾燥（無水硫酸マグネシウム）した。乾燥剤をろ去後、ろ液を減圧下濃縮し、粗アルデヒドを得た。粗アルデヒドをピリジン（２０．０ｍｌ）に溶解し、塩酸ヒドロキシルアミン（０．２８ｇ、４．０３ｍｍｏｌ）を加え、室温で３０分間撹拌した。反応液を減圧下濃縮し、残さを酢酸エチル−水で分配した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧下乾固し、粗オキシムを得た。粗オキシムをジクロロメタン（２０．０ｍｌ）に溶解し、氷冷下、トリエチルアミン（０．７６ｍｌ、５．４５ｍｍｏｌ）、塩化メタンスルホニル（０．３２ｍｌ、４．１３ｍｍｏｌ）を加え、３０分間撹拌した。反応液をクロロホルムで希釈した後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧下乾固し、残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル ２００ｃｃ、ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）により精製し、淡黄色泡状の化合物１５（１．７７ｇ、２．４３ｍｍｏｌ、８９．０％）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ ９．１５，９．１１（ｅａｃｈ １Ｈ，ｓ，ＮＨ），８．０１−７．４８（１１Ｈ，ｍ，ａｒｏｍａｔｉｃ），６．４０（１Ｈ，ｔ，Ｈ−１’，Ｊ＝６．３６），５．２０（１Ｈ，ｔ，Ｈ−３’，Ｊ＝５．３６），４．２１（１Ｈ，ｄ，Ｈ−５’ａ，Ｊ＝１１．２４），３．９９（１Ｈ，ｄ，Ｈ−５’ｂ，Ｊ＝１０．７６），３．４０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’ａ），２．５３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’），０．９７（９Ｈ，ｓ，ｔ−Ｂｕ），０．８６（９Ｈ，ｓ，ｔ−Ｂｕ），０．２３（３Ｈ，ｓ，Ｍｅ），０．１７（３Ｈ，ｓ，Ｍｅ），０．０５（６Ｈ，ｓ，Ｍｅ）．
（７）９−（２−デオキシ−４−Ｃ−シアノ−β−Ｄ−リボ−ペントフラノシル）−２，６−ジアミノプリン（化合物１６）の合成

化合物１５（１．００ｇ、１．３７ｍｍｏｌ）をメタノール（１０．０ｍｌ）に溶解し、４０％ メチルアミン水溶液（１０．０ｍｌ）を加え、室温で３日間撹拌した。析出した結晶（０．２５ｇ、０．４８ｍｍｏｌ、３５．０％）をテトラヒドロフラン（９．００ｍｌ）に溶解し、フッ化テトラブチルアンモニウム（１Ｍ テトラヒドロフラン溶液、１．００ｍｌ、１．００ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５分間撹拌した。反応液を減圧下濃縮した後、残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル １００ｃｃ、酢酸エチル：メタノール＝１０：１）により精製した。２−プロパノールから結晶化し、化合物１６（０．１０ｇ、０．３４ｍｍｏｌ、２４．８％）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ ７．９５（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８），６．７５（２Ｈ，ｂ．ｓ，ＮＨ_２），６．３５（１Ｈ，ｔ，Ｈ−１’，Ｊ＝６．８４），６．２５（１Ｈ，ｄ，３’−ＯＨ，Ｊ＝４．８５），５．８５（１Ｈ，ｔ，５’−ＯＨ，Ｊ＝６．３６），５．８３（２Ｈ，ｂ．ｓ，ＮＨ_２），４．６４（１Ｈ，ｄｄ，Ｈ−３’，Ｊ＝４．８８，５．８４），３．７８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５’ａ），３．６７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５’ｂ），２．８８（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’ａ），２．３７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’ｂ）．
ＦＡＢＭＳ ｍ／ｚ：２９２（ＭＨ^＋）．
合成例４：４’−Ｃ−シアノ−２’−デオキシグアノシン（化合物１７）の合成

化合物１６（７０．０ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．５０、１３．３ｍｌ）に加熱溶解し、アデノシンデアミナーゼ（０．１３ｍｌ、５８．５ｕｎｉｔ）を加え、４０℃で１時間撹拌した。析出した結晶を水から再結晶化し、化合物１７（５６．０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ、７９．２％）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ １０．６８（１Ｈ，ｓ，ＮＨ），７．９３（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８），６．５３（２Ｈ，ｂ．ｓ，ＮＨ_２），６．２９（１Ｈ，ｔ，Ｈ−１’，Ｊ＝６．８４），６．２７（１Ｈ，ｄ，３’−ＯＨ，Ｊ＝４．８８），５．７３（１Ｈ，ｔ，５’−ＯＨ，Ｊ＝５．８４），４．６０（１Ｈ，ｄｄ，Ｈ−３’，Ｊ＝４．８８，５．８８），３．７３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５’ａ），３．６５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５’ｂ），２．８０（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’ａ），２．４１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’ｂ）．
ＦＡＢＭＳ ｍ／ｚ：２９３（ＭＨ^＋）．
製剤例１：錠剤
本発明化合物 ３０．０ｍｇ
微粉末セルロース ２５．０ｍｇ
乳糖 ３９．５ｍｇ
スターチ ４０．０ｍｇ
タルク ５．０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム ０．５ｍｇ
上記組成から常法によって錠剤を調製する。
製剤例２：カプセル剤
本発明化合物 ３０．０ｍｇ
乳糖 ４０．０ｍｇ
スターチ １５．０ｍｇ
タルク ５．０ｍｇ
上記組成から常法によってカプセル剤を調製する。
製剤例３：注射剤
本発明化合物 ３０．０ｍｇ
グルコース １００．０ｍｇ
上記組成を注射用精製水に溶解して注射剤を調製する。
以下に試験例を示す。試験においては薬剤として以下の２つの本発明化合物と２つの公知化合物を使用した。
本発明化合物：
化合物７：４’−Ｃ−シアノ−２’−デオキシアデノシン
化合物８：４’−Ｃ−シアノ−２’−デオキシイノシン
公知化合物：
アジドチミジン（ＡＺＴ）
２’，３’−ジデオキシ−３’−チアシチジン（３ＴＣ）
試験例
＜方法＞ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）活性
１）ＭＴ−４細胞を用いたＭＴＴ法
１．９６ウエルプレートを用いて被験薬剤を希釈する（１００μｌ）。ここに１ウエルあたり１００００個になるようにＨＩＶ−１（ＩＩＩｂ株；１００ＴＣＩＤ_５０）感染および非感染ＭＴ−４細胞を加えて、３７℃で５日間培養する。
２．ＭＴＴ（２０μｌ、７．５ｍｇ／ｍｌ）を加えてさらに２〜３時間培養する。
３．培養終了後、１２０μｌをとり、ＭＴＴ停止液（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００ ４％、ＨＣｌ ０．０４Ｎを加えたイソプロパノール（Ｉｓｏｐｒｏｐａｎｏｌ））を加え、撹拌して生成したホルマザン（ｆｏｒｍａｚａｍ）を溶解し、５４０ｎｍにおける吸光度を測定する。この測定値は生細胞数に比例するため、感染ＭＴ−４細胞を用いた試験の測定値が５０％になった被験薬剤の濃度をＥＣ_５０、また非感染ＭＴ−４細胞を用いた試験の測定値が５０％になった被験薬剤の濃度をＣＣ_５０とする。
２）ＨｅＬａ ＣＤ４／ＬＴＲ−ｂｅｔａ−Ｇａｌ細胞を用いたＭＡＧＩアッセイ
１．ＨｅＬａ ＣＤ４／ＬＴＲ−ｂｅｔａ−Ｇａｌ細胞を１ウエルあたり１００００個の割合で９６ウエルに加える。１２〜２４時間後に培養液を捨て、希釈した被験薬剤（１００μｌ）を加える。
２．各種ＨＩＶ株（薬剤耐性株：ＭＤＲ、Ｍ１８４Ｖ；各５０ＴＣＩＤ_５０相当）を加えて４８時間培養する。
３．培養終了後、１％ホルムアルデヒド（ｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ）、０．２％グルタルアルデヒド（ｇｌｕｔａｒａｌｄｅｈｙｄｅ）を加えたＰＢＳで細胞を５分間固定する。
４．ＰＢＳで３回洗浄後、０．４ｍｇ／ｍｌ Ｘ−Ｇａｌで１時間染色し、青く染色された細胞の数を透過型実体顕微鏡下で数え、青染された細胞を５０％減少させる被験薬剤の濃度をＥＣ_５０とする。
＜結果＞ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）活性および細胞毒性
表１〜２は２〜５回の測定値の平均を示したものである。
１）ＭＴ−４細胞を用いたＭＴＴ法

２）ＨｅＬａ ＣＤ４／ＬＴＲ−ｂｅｔａ−Ｇａｌ細胞を用いたＭＡＧＩアッセイ

これらの結果は、本発明の化合物が、多剤耐性株に対して顕著に優れた抗ウィルス活性を示し、細胞毒性も低いことを示している。
産業上の利用可能性
本発明化合物は、優れた抗ＨＩＶ作用、特にＡＺＴ、ｄｄＩ、ｄｄＣ、ｄ４Ｔ、３ＴＣなどの抗ＨＩＶ剤の複数の薬剤に耐性を有する多剤耐性ＨＩＶ株にも有効であり、細胞毒性も低いことから、医薬品、特にＨＩＶ感染症治療薬として有用である。
本出願は、日本で出願された特願２００２−３８０７８、及び特願２００２−２５６６３４を基礎としており、それらの内容は、本明細書に全て包含される。Technical field
The present invention relates to 4′-C-cyano-2′-deoxypurine nucleosides and their pharmaceutical uses, in particular for the treatment of HIV infections (eg AIDS).
Background art
Nucleoside reverse transcriptase inhibitors (NRIs) ) And so-called “highly active antiretroviral chemotherapy (HAART)” has changed the clinical picture of AIDS and drastically reduced the number of AIDS deaths in each country. (Textbook of AIDS Medicine, p751 (Williams & Wilkins, Baltimore 1999)).
However, while HAART drastically reduces AIDS deaths, multi-drug resistant HIV-1 (human immunological virus-1) strains that exhibit cross-resistance to multiple drugs have emerged, for example, in both AZT and 3TC It has been reported that patients infected with resistant HIV were rare in early 1990, up to 42% in 1995-1996 (AIDS, 11, 1184 (1997)). ).
As a result of synthesizing 4′-C-ethynyl nucleoside and measuring the anti-HIV activity of these compounds, the class of 4′-C-ethynyl nucleoside having a specific structure is superior to AZT or superior to AZT. It has been demonstrated that it has activity and is also effective against multidrug resistant virus strains resistant to a plurality of anti-HIV agents such as AZT, ddI, ddC, d4T, 3TC (J. Med. Chem., 43 (2000 ), 4516-4525).
Moreover, 4'-C-cyanothymidine, 4'-C-cyano-2'-deoxycytidine, etc. were synthesized by Yang et al. As nucleosides having a cyano group at the 4 'position, and their anti-HIV activity has been evaluated. . As a result, although 4'-C-cyanothymidine (4'-C-cyano-2'-deoxy-5-methyluridine) has been confirmed to have anti-HIV activity, it is highly toxic and has not yet been put into practical use as a pharmaceutical product. (Tetrahedron Letters. 33 (1992), 37-40, US Pat. No. 5,192,749).
The above US patent specification describes a general formula including a purine nucleoside derivative having a cyano group at the 4′-position, but the purine nucleoside derivative is not actually synthesized, and confirmation of anti-HIV activity is also possible. Not done.
As a method of synthesizing 4′-C-cyanopurine nucleoside, a method of synthesizing a saccharide-containing sugar and a nucleobase using a saccharide as a starting material is generally used. This is not always a simple method. Such difficulty in synthesis has contributed to delaying research and development of 4′-C-cyanopurine nucleosides.
Disclosure of the invention
The present inventors have used purine nucleoside as a starting material in the process of finding a compound having antiviral activity higher than AZT and also effective in drug-resistant HIV strains, which has been considered a problem in recent years. As a result of establishing a simple method for synthesizing 4′-C-cyanopurine nucleoside, synthesizing various 4′-C-cyanopurine nucleosides and measuring the antiviral activity, 4′-C-cyanopurine nucleoside having a specific structure was obtained. C-cyanopurine nucleoside has excellent anti-HIV activity, is effective against multi-drug resistant virus strains that are resistant to multiple anti-HIV agents such as AZT, ddI, ddC, d4T, 3TC, etc. and has low cytotoxicity As a result, the present invention has been completed.
That is, the present invention provides a compound of the formula [I]

(Wherein B represents a purine base, and R represents a hydrogen atom or a phosphate residue), a 4′-C-cyano-2′-deoxypurine nucleoside represented by The present invention relates to a pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically acceptable carrier.
The present invention also relates to a method for treating AIDS, which comprises administering the compound of the above formula [I] or a pharmaceutical composition containing the compound to animals including humans.
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
(1) Compound
The compound of the present invention is represented by the formula [I], and the base represented by B in the formula represents a purine base including azapurine and deazapurine.
Such purine bases are halogen atoms, alkyl groups, haloalkyl groups, alkenyl groups, haloalkenyl groups, alkynyl groups, amino groups, alkylamino groups, hydroxyl groups, hydroxyamino groups, aminoxy groups, alkoxy groups, mercapto groups, alkyl mercapto groups. It may have a substituent such as a group, an aryl group, an aryloxy group, or a cyano group, and the number and position of the substituents are not particularly limited.
Examples of the halogen atom as a substituent include chlorine, fluorine, iodine and bromine. Examples of the alkyl group include lower alkyl groups having 1 to 7 carbon atoms such as methyl, ethyl, and propyl. Examples of the haloalkyl group include haloalkyl groups having 1 to 7 carbon atoms such as fluoromethyl, difluoromethyl, trifluoromethyl, bromomethyl, bromoethyl and the like. Examples of the alkenyl group include C2-C7 alkenyl groups such as vinyl and allyl. Examples of the haloalkenyl group include haloalkenyl groups having 2 to 7 carbon atoms such as bromovinyl and chlorovinyl. Examples of the alkynyl group include alkynyl groups having 2 to 7 carbon atoms such as ethynyl and propynyl. Examples of the alkylamino group include alkylamino groups having 1 to 7 carbon atoms such as methylamino and ethylamino.
Examples of the alkoxy group include C1-C7 alkoxy groups such as methoxy and ethoxy. Examples of the alkyl mercapto group include alkyl mercapto groups having 1 to 7 carbon atoms such as methyl mercapto and ethyl mercapto. The aryl group includes a phenyl group; an alkylphenyl group having 1 to 5 carbon atoms such as methylphenyl and ethylphenyl; an alkoxyphenyl group having 1 to 5 carbon atoms such as methoxyphenyl and ethoxyphenyl; dimethylamino Examples thereof include alkylaminophenyl groups having 1 to 5 carbon atoms such as phenyl and diethylaminophenyl; halogenophenyl groups such as chlorophenyl and bromophenyl.
Specific examples of purine bases include purine, 6-aminopurine (adenine), 6-hydroxypurine, 6-fluoropurine, 6-chloropurine, 6-methylaminopurine, 6-dimethylaminopurine, 6 -Trifluoromethylaminopurine, 6-benzoylaminopurine, 6-acetylaminopurine, 6-hydroxyaminopurine, 6-aminooxypurine, 6-methoxypurine, 6-acetoxypurine, 6-benzoyloxypurine, 6-methyl Purine, 6-ethylpurine, 6-trifluoromethylpurine, 6-phenylpurine, 6-mercaptopurine, 6-methylmercaptopurine, 6-aminopurine-1-oxide, 6-hydroxypurine-1-oxide, 2- Amino-6-hydroxypurine (guanine), 2,6-diaminopri 2-amino-6-chloropurine, 2-amino-6-iodopurine, 2-aminopurine, 2-amino-6-mercaptopurine, 2-amino-6-methylmercaptopurine, 2-amino-6-hydroxy Aminopurine, 2-amino-6-methoxypurine, 2-amino-6-benzoyloxypurine, 2-amino-6-acetoxypurine, 2-amino-6-methylpurine, 2-amino-6-cyclopropylaminomethyl Purine, 2-amino-6-phenylpurine, 2-amino-8-bromopurine, 6-cyanopurine, 6-amino-2-chloropurine (2-chloroadenine), 6-amino-2-fluoropurine (2 -Fluoroadenine), 6-amino-3-deazapurine, 6-amino-8-azapurine, 2-amino-6-hydroxy-8-azap Emissions, 6-amino-7-deazapurine, 6-amino-1-deazapurine, such as 6-amino-2-azapurine the like.
Among such purine bases, a purine base having no amino group at the 2-position is preferable, and specific examples of preferred compounds of the present invention include 4′-C-cyano-2′-deoxyadenosine, 4 '-C-cyano-2'-deoxyinosine or their 5'-phosphate esters.
The compound of the present invention may be in the form of a salt, hydrate or solvate. Such a salt includes an acid adduct such as hydrochloride or sulfate when R is a hydrogen atom, and an alkali metal such as sodium salt, potassium salt or lithium salt when R is a phosphoric acid residue. Illustrative are pharmaceutically acceptable salts such as salts, alkaline earth metal salts such as calcium salts, or ammonium salts.
Examples of the hydrate or solvate include those in which 0.1 to 3.0 molecules of water or solvent is attached to one molecule of the compound of the present invention or a salt thereof. Furthermore, the compound of the present invention may include various isomers such as tautomers.
(2) Manufacturing method
The compound of the present invention can be produced by the steps described below.
First step;
The first step is a step of protecting the 3′-position hydroxyl group of the compound represented by the formula [II] to obtain a compound represented by the formula [IV].

(Wherein B represents a purine (including azapurine or deazapurine) base, and R ₁ , R ₂ Represents a protecting group. )
In the compound represented by the formula [IV], the 5′-position hydroxyl group of the compound represented by the formula [II] is protected, and then the 3′-position hydroxyl group is protected with a protecting group having a different removal method from the 5′-position protecting group. Subsequently, the 5′-position hydroxyl protecting group can be selectively removed.
R ₁ As the protecting group for the 5′-position hydroxyl group represented by the formula, any protecting group commonly used as the protecting group for the 5′-position hydroxyl group of the nucleoside may be used. Specifically, dimethoxytrityl, methoxytrityl, trityl, t-butyl Examples include dimethylsilyl, t-butyldiphenylsilyl, benzoyl group and the like. R ₂ As the protecting group for the 3′-position hydroxyl group represented by the formula, any hydroxyl group or the like can be used, and examples thereof include ether-based protecting groups, acyl-based protecting groups, silyl-based protecting groups, and acetal-based protecting groups. can do.
More specifically, ether protecting groups include methyl ether, tertiary butyl ether, benzyl ether, methoxybenzyl ether, trityl ether, and acyl protecting groups include acetyl, benzoyl, pivaloyl, and silyl protecting. T-butyldimethylsilyl, t-butyldiphenylsilyl, trimethylsilyl, triethylsilyl, etc. can be used as groups, and isopropylidene, ethylidene, methylidene, benzylidene, tetrahydropyranyl, methoxymethyl, etc. can be used as acetal-based protecting groups, respectively. it can.
Introduction of each protecting group is carried out by a conventional method known in the art.
The subsequent removal of the 5′-position protecting group may be appropriately selected from ordinary treatment methods such as acidic hydrolysis, alkaline hydrolysis, tetrabutylammonium fluoride treatment, and catalytic reduction according to the protecting group used.
Second step;
The second step is a step of obtaining a compound represented by the formula [V] by introducing a hydroxymethyl group into the 4′-position of the compound represented by the formula [IV].

(Wherein B represents a purine (including azapurine or deazapurine) base, and R ₂ Represents a protecting group. )
In the compound represented by the formula [V], the 5′-hydroxymethyl group of the compound represented by the formula [IV] is converted into an aldehyde group, and then the hydroxymethyl group is introduced into the 4 ′ position by an aldol reaction with formaldehyde. And can be synthesized through reduction of the aldehyde group.
Examples of the oxidizing agent for converting the 5′-hydroxymethyl group of the compound represented by the formula [IV] into an aldehyde include chromic anhydride, a complex reagent of pyridine and acetic anhydride, pyridine chlorochromate, pyridine dichromate, and the like. Examples include chromium-based oxidants; high-valent iodine oxidants such as Dess-Martin reagent; dimethyl sulfoxide-based oxidants using a combination of dimethyl sulfoxide and acetic anhydride, oxalyl chloride or dicyclohexylcarbodiimide.
The reaction conditions differ depending on the oxidizing agent used. For example, in the case of oxidizing with 1-ethyl-3- (dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride and dimethyl sulfoxide, it is necessary if necessary in a mixed solvent of an organic solvent such as toluene and dimethyl sulfoxide. In an inert gas atmosphere such as argon or nitrogen, 1 to 5 mol of 1-ethyl-3- (dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride is used with respect to 1 mol of the compound of formula [IV] and 1 to 2 at 10 to 50 ° C. It can be carried out by reacting for about an hour.
Next, introduction of a hydroxymethyl group at the 4′-position can be carried out by an aldol reaction between the obtained aldehyde compound and formaldehyde.
Aldolization should be carried out in an organic solvent such as tetrahydrofuran or dioxane by using 1 to 10 mol of formaldehyde per 1 mol of aldehyde compound in the presence of a base such as 1 to 5 mol of sodium hydroxide. Can do.
Subsequent reduction of the aldehyde group uses a reducing agent such as 1 to 5 moles of sodium borohydride and lithium aluminum hydride with respect to 1 mole of the aldehyde compound in an organic solvent such as methanol, ethanol, diethyl ether, and tetrahydrofuran. The reaction may be performed at −78 ° C. to room temperature for 15 minutes to 1 hour.
Third step;
The third step is a step of introducing a protecting group at the 5 ′ position of the compound represented by the formula [V].

(Wherein B represents a purine (including azapurine or deazapurine) base, and R ₂ ~ R ₄ Represents a protecting group. )
The compound represented by the formula [VII] is a method for removing the 5′-hydroxy group from the protective group for the 4′-hydroxymethyl group after protecting the 4′-hydroxymethyl group of the compound represented by the formula [V]. And then selectively removing the protecting group of the 4′-hydroxymethyl group.
R ₃ As the protecting group for the 4′-position hydroxymethyl group represented by the above, any protecting group commonly used as the protecting group for the 5′-position hydroxyl group of the nucleoside may be used, and specifically, those exemplified in the first step may be used. Can be used.
Introduction of each protecting group is carried out by a conventional method known in the art.
The removal of the protecting group of the 4′-position hydroxymethyl group can be appropriately selected from ordinary treatment methods such as acidic hydrolysis, alkaline hydrolysis, tetrabutylammonium fluoride treatment, and catalytic reduction depending on the protecting group used. Good.
4th process;
The fourth step is a step of converting the 4′-position hydroxymethyl group of the compound represented by the formula [VII] into a cyano group.

(Wherein B represents a purine (including azapurine or deazapurine) base, and R ₂ And R ₄ Represents a protecting group. )
The compound represented by the formula [VIII] is obtained by oxidizing the 4′-position hydroxymethyl group of the formula [VII] into an aldehyde group, converting it to an oxime group, and subsequently dehydrating the obtained oxime compound. Can be synthesized.
When the 4′-hydroxymethyl group of the compound represented by the formula [VII] is converted into an aldehyde, the oxidizing agent used in the second step can be used.
The reaction conditions differ depending on the oxidizing agent used. For example, in the case of oxidizing with 1-ethyl-3- (dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride and dimethyl sulfoxide, it is necessary if necessary in a mixed solvent of an organic solvent such as toluene and dimethyl sulfoxide. In an inert gas atmosphere such as argon or nitrogen, 1 to 5 mol of 1-ethyl-3- (dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride is used per 1 mol of the compound of the formula [VII] and 1 to 2 at 10 to 50 ° C. It can be carried out by reacting for about an hour.
Conversion of the aldehyde compound to the oxime compound is performed by using 1 to 5 moles of hydroxylamine hydrochloride in 1 mole of the aldehyde compound in an organic solvent such as pyridine, and reacting at room temperature to 100 ° C. for 30 minutes to 3 hours. Can be implemented.
Dehydration of oxime compounds is carried out in organic solvents such as dichloromethane, acetonitrile, tetrahydrofuran, etc. in the presence of bases such as pyridine, triethylamine, sodium acetate, using dehydrating agents such as phosgene, carbonyldiimidazole, methanesulfonyl chloride, acetic anhydride, etc. it can.
The dehydration reaction conditions differ depending on the dehydrating agent used. For example, when dehydrating using methanesulfonyl chloride, methanesulfonyl chloride and triethylamine are each added to 1 mol of the compound of formula [VII] in an organic solvent such as dichloromethane, tetrahydrofuran, pyridine and the like. The reaction can be carried out by using 1 to 5 mol, 5 to 10 mol, and reacting at −50 ° C. to room temperature for 15 minutes to 2 hours.
The protecting group of the compound [VIII] thus obtained is removed to obtain the compound of the present invention in which R is hydrogen, and phosphorylation is performed as necessary to obtain the compound of the present invention.

In the formula, B represents a purine (including azapurine or deazapurine) base, R represents a hydrogen atom or a phosphate residue, R ₂ And R ₄ Represents a protecting group. )
The removal of the protecting group may be appropriately selected from ordinary treatment methods such as acidic hydrolysis, alkaline hydrolysis, tetrabutylammonium fluoride treatment and catalytic reduction according to the used protecting group.
Furthermore, if it is desired to deaminate the amino group in the base, it can be deaminated by a conventional method using various deaminases such as adenosine deaminase and cytidine deaminase.
In addition, when obtaining a compound in which R is a phosphate residue such as a monophosphate residue or a diphosphate residue, a compound in which R is a hydrogen atom is converted to a 5 ′ of a nucleoside such as phosphorus oxychloride or tetrachloropyrophosphate. By reacting with a phosphorylating agent used for selective phosphorylation of the target, the desired compound in free acid form or salt form can be obtained.
In carrying out each of the above reactions, the functional group in the purine base can be protected by a usual method and then deprotected as necessary.
The compound of the present invention can be separated and purified by appropriately combining methods used for isolation and purification of general nucleosides and nucleotides (for example, recrystallization method, ion exchange column chromatography, adsorption column chromatography, etc.). The compound thus obtained can be converted into a salt form as necessary.
(3) Applications
Since the compound of the present invention has an antiviral action and has an excellent antiviral action against retroviruses as shown in the following test examples, the composition of the present invention comprising these as active ingredients is used as a medicine. Specifically, it is useful for the treatment of retroviral infections, particularly for the treatment of HIV infections (eg, AIDS, etc.) resulting from human immunodeficiency virus (HIV) infection.
Non-human animals in which the pharmaceutical composition of the present invention can be used effectively include domestic animals, poultry, and laboratory animals.
The dose of the compound of the present invention varies depending on the patient's age, weight, disease, severity of the disease, tolerability of the drug, administration method, etc., and may be appropriately determined based on these conditions. In general, the dose is selected from the range of 0.00001 to 1000 mg / kg body weight, preferably 0.0001 to 100 mg / kg body weight per day, and administered in one or more divided doses.
The administration method can be administered by any route such as oral, parenteral, transdermal, enteral and topical administration.
When the compound of the present invention is formulated, it is usually used as a composition containing a commonly used pharmaceutical carrier, excipient, and other additives. Carriers include solid carriers such as lactose, kaolin, sucrose, crystalline cellulose, corn starch, talc, agar, pectin, stearic acid, magnesium stearate, lecithin, sodium chloride, glycerin, peanut oil, polyvinylpyrrolidone, olive oil, ethanol And liquid carriers such as benzyl alcohol, propylene glycol, and water.
The dosage form can take any form, for example, tablets, powders, granules, capsules, suppositories, troches, buccals, patches etc. as solid preparations, and syrups as liquid preparations , Emulsions, soft gelatin capsules, creams or pastes, gels, sprays, liposomes, injections, and the like.
In a package including the pharmaceutical composition of the present invention and a description that describes the use of the pharmaceutical composition, the description includes a so-called booklet that describes the use / efficacy, the administration method, and the like. .
Moreover, the compound of the present invention and the pharmaceutical composition thereof can be administered in combination with other antiviral agents such as AZT, ddI, ddC, d4T, and 3TC.
Example
Hereinafter, the present invention will be specifically described with reference to synthesis examples, test examples, formulation examples, etc., but the present invention is not limited to these.
In the following formulas, A is adenine, A ^BZ Is N ⁶ -Benzoyl-adenine, H for inosine, G for guanine, DAP for 2,6-diaminopurine, DAP ^BZ2 Represents 2,6-dibenzamidopurine, DMTr represents dimethoxytrityl, and TBS represents t-butyldimethylsilyl.
Synthesis Example 1: Synthesis of 4′-C-cyano-2′-deoxyadenosine
(1) N ⁶ -Benzoyl-3'-O-tert-butyldimethylsilyl-2'-deoxyadenosine (compound 2) synthesis

N ⁶ -Benzoyl-2'-deoxy-5'-O-dimethoxytrityl adenosine 1 (2.00 g, 3.04 mmol) was dissolved in dimethylformamide (6.00 ml), imidazole (0.83 g, 12.2 mmol), tert-butylchlorodimethylsilane (0.92 g, 6.10 mmol) were added, Stir at room temperature overnight.
After adding methanol to stop the reaction, the reaction solution was diluted with ethyl acetate, and the organic layer was washed with water and dried (anhydrous magnesium sulfate). The desiccant was removed by filtration, and the filtrate was concentrated under reduced pressure. The obtained residue was dissolved in chloroform (70.0 ml), and a methanol solution (30.0 ml) of toluenesulfonic acid monohydrate (2.00 g) was added dropwise under ice cooling, followed by stirring at the same temperature for 30 minutes. .
A saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution was added to the reaction mixture and stirred, and then the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate. The solution was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by silica gel column chromatography (silica gel 100 cc, hexane: ethyl acetate = 1: 3) to give a white foamy compound 2 (1.20 g, 2.56 mmol, 84.2%) was obtained.
¹ H-NMR (CDCl ₃ ) Δ 9.05 (1H, s, NH), 8.78 (1H, s, H-8), 8.10 (1H, s, H-2), 8.09-7.52 (5H, m) , Aromatic), 6.37 (1H, dd, H-1 ′, J = 5.36, 9.28), 5.78 (1H, dd, 5′-OH, J = 1.92, 11.2). ), 4.74 (1H, d, H-3 ′, J = 4.88), 4.17 (1H, s, H-4 ′), 4.00-3.74 (2H, m, H− 5 ′), 3.07 (1H, m, H-2′a), 2.27 (1H, m, H-2′b), 0.94 (9H, s, t-Bu), 0.13 (6H, s, Me).
(2) N ⁶ Synthesis of -benzoyl-3'-O-tert-butyldimethylsilyl-2'-deoxy-4'-C-hydroxymethyladenosine (compound 3)

Compound 2 (2.55 g, 5.43 mmol) was dissolved in toluene (10.0 ml) and dimethyl sulfoxide (15.0 ml), and 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (3.12 g, 16 .3 mmol), pyridine (0.41 ml) and trifluoroacetic acid (0.21 ml) were added, and the mixture was stirred at room temperature for 2 hours. After the reaction solution was diluted with ethyl acetate, the organic layer was washed with water and dried (anhydrous magnesium sulfate). After removing the desiccant by filtration, the filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain a crude aldehyde. The crude aldehyde was dissolved in dioxane (15.0 ml), 37% aqueous formaldehyde solution (2.86 ml) and 2N aqueous sodium hydroxide solution (2.86 ml) were added, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour.
The reaction solution was neutralized with acetic acid, diluted with ethyl acetate, washed with water and dried. After removing the desiccant by filtration, the filtrate was concentrated under reduced pressure, and the resulting residue was dissolved in ethanol (25.0 ml). Under ice cooling, sodium borohydride (0.21 g, 5.55 mmol) was added, Stir for 30 minutes. The reaction solution was neutralized with acetic acid, diluted with ethyl acetate, washed with water, and dried (anhydrous magnesium sulfate). After removing the desiccant by filtration, the filtrate was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by silica gel column chromatography (silica gel 300 cc, hexane: ethyl acetate = 1: 3 to 1: 4 to 1: 5) to give a pale yellow foam. Compound of 3 (1.68 g, 3.36 mmol, 61.9%) was obtained.
¹ H-NMR (CDCl ₃ ) Δ 9.05 (1H, s, NH), 8.79 (1H, s, H-8), 8.08 (1H, s, H-2), 8.04-7.52 (5H, m) , Aromatic), 6.44 (1H, dd, H-1 ′), 5.56 (1H, br. D, OH), 4.94 (1H, dd, H-3 ′, J = 1.48, 5.88), 3.86-3.63 (4H, m, H-5 'and H-6'), 3.24 (1H, m, H-2'a), 2.67 (1H, br .S, OH), 2.38 (1H, m, H-2′b), 0.96 (9H, s, t-Bu), 0.19, 0.18 (each 3H, s, Me).
(3) N ⁶ -Benzoyl-3'-O-tert-butyldimethylsilyl-4'-C-dimethoxytrityloxymethyladenosine (compound 4) synthesis

Compound 3 (0.84 g, 1.68 mmol) was dissolved in dichloromethane (17.0 ml), and triethylamine (0.47 ml, 3.37 mmol) and dimethoxytrityl chloride (0.85 g, 2.51 mmol) were added under ice cooling, Stir for 30 minutes. Methanol was added to stop the reaction, and the organic layer was washed with a saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution. The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography (silica gel 200 cc, hexane: ethyl acetate = 2: 1 to 1: 1) to give a pale yellow foamy compound. 4 (0.91 g, 1.13 mmol, 67.3%) was obtained.
¹ H-NMR (CDCl ₃ ) Δ 9.30 (1H, bs, NH), 8.94 (1H, s, H-8), 8.24 (1H, s, H-2), 8.18-6.94 (18H, m) , Aromatic), 6.41 (1H, dd, H-1 ′, J = 5.84, 8.80), 5.36 (1H, br.s, OH), 4.85 (1H, d, H -3 ′, J = 3.92), 4.42 (1H, br.d, H-5′a), 3.91 (6H, s, OMe), 3.78 (1H, br, t, H) −5′b), 3.66 (1H, d, H-6′a, J = 10.76), 3.28 (1H, m, H-2′a), 3.20 (1H, d, H-6′b, J = 10.76), 2.41 (1H, m, H-2′b), 0.89 (9H, s, t-Bu), 0.13, 0.11 (each) 3H, s, Me).
(4) N ⁶ Synthesis of benzoyl-3 ′, 5′-di-O-tert-butyldimethylsilyl-2′-deoxy-4′-C-hydroxymethyladenosine (compound 5)

Compound 4 (1.61 g, 2.01 mmol) was dissolved in dimethylformamide (8.00 ml), imidazole (0.41 g, 6.02 mmol), tert-butylchlorodimethylsilane (0.45 g, 2.99 mmol) were added, Stir at room temperature overnight. After adding methanol to stop the reaction, the reaction solution was diluted with ethyl acetate, and the organic layer was washed with water and dried (anhydrous magnesium sulfate). The desiccant was removed by filtration, and the filtrate was concentrated under reduced pressure. The obtained residue was dissolved in chloroform (70.0 ml), and a methanol solution (30.0 ml) of toluenesulfonic acid monohydrate (1.00 g) was added dropwise under ice cooling, followed by stirring at the same temperature for 30 minutes. . A saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution was added to the reaction mixture and stirred, and then the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate. The resulting solution was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by silica gel column chromatography (silica gel 200 cc, hexane: ethyl acetate = 3: 1) to give a white foamy compound 5 (1.00 g, 1.63 mmol, 81.1%) was obtained.
¹ H-NMR (CDCl ₃ ) Δ 9.09 (1H, bs, NH), 8.80 (1H, s, H-8), 8.28 (1H, s, H-2), 8.04-7.51 (5H, m) , Aromatic), 6.52 (1H, t, H-1 ′, J = 6.32), 4.87 (1H, dd, H-3 ′, J = 4.40, 6.36), 3. 90-3.72 (4H, m, H-5 ′ and H-6 ′), 3.03 (1H, m, H-2′a), 2.60 (1H, m, H-2′b) , 2.53 (1H, br.s, OH), 0.95, 0.89 (each 9H, s, t-Bu), 0.16, 0.06 (each 6H, s, Me).
(5) N ⁶ Synthesis of -benzoyl-3 ', 5'-di-O-tert-butyldimethylsilyl-4'-C-cyano-2'-deoxyadenosine (compound 6)

Compound 5 (1.00 g, 5.43 mmol) was dissolved in toluene (3.00 ml) and dimethyl sulfoxide (6.00 ml), and 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (0.94 g, 4 .90 mmol), pyridine (0.13 ml) and trifluoroacetic acid (62.8 μl) were added, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour. After the reaction solution was diluted with ethyl acetate, the organic layer was washed with water and dried (anhydrous magnesium sulfate). After removing the desiccant by filtration, the filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain a crude aldehyde. The crude aldehyde was dissolved in pyridine (10.0 ml), hydroxylamine hydrochloride (0.17 g, 2.45 mmol) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure, and the residue was partitioned with ethyl acetate-water. The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate and then dried under reduced pressure to obtain a crude oxime. The crude oxime was dissolved in dichloromethane (10.0 ml), and triethylamine (0.45 ml, 3.23 mmol) and methanesulfonyl chloride (0.19 ml, 2.45 mmol) were added under ice cooling, followed by stirring for 30 minutes. The reaction solution was diluted with chloroform and then washed with a saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution. The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate and then dried under reduced pressure, and the residue was purified by silica gel column chromatography (silica gel 200 cc, chloroform: methanol = 100: 1). Compound crystallized from ethanol-water 6 (0.87 g, 1.41 mmol, 87.7%) was obtained.
¹ H-NMR (CDCl ₃ ) Δ 9.00 (1H, br. S, NH), 8.78 (1H, s, H-8), 8.13 (1H, s, H-2), 8.03-7.51 (5H) , M, aromaic), 6.52 (1H, t, H-1 ′, J = 5.88), 5.02 (1H, t, H-3 ′, J = 5.84), 4.05 ( 1H, d, H-5′a, J = 111.24), 3.89 (1H, d, H-5′b, J = 111.24), 3.24, 2.62 (each 1H, m , H-2 ′), 0.98, 0.87 (each 9H, s, t-Bu), 0.21, 0.19, 0.08, 0.03 (each 3H, s, Me).
(6) Synthesis of 4′-C-cyano-2′-deoxyadenosine (compound 7)

Compound 6 (0.70 g, 1.15 mmol) was dissolved in methanol (10.5 ml), 28% aqueous ammonia (3.50 ml) was added, and the mixture was stirred at room temperature overnight. The precipitated crystals were dissolved in tetrahydrofuran (7.80 ml), tetrabutylammonium fluoride (1M tetrahydrofuran solution, 2.18 ml, 2.18 mmol) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 15 minutes. The reaction solution was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by silica gel column chromatography (silica gel 50 cc, ethyl acetate: methanol = 20: 1 to 10: 1). Compound crystallized from water 7 (0.21 g, 0.76 mmol, 66.1%) was obtained.
¹ H-NMR (DMSO-d ₆ ) Δ 8.32 (1H, s, H-8), 8.15 (1H, s, H-2), 7.33 (2H, b.s, NH) ₂ ), 6.52 (1H, t, H-1 ′, J = 6.84), 6.31 (1H, d, 3′-OH, J = 5.40), 5.83 (1H, t, 5′-OH, J = 5.88), 4.75 (1H, dd, H-3 ′, J = 5.36, 5.88), 3.84 (1H, m, H-5 ′), 3.67 (1H, m, H-5 ′), 2.99 (1H, m, H-2 ′), 2.47 (1H, m, H-2 ′).
FABMS m / z: 277 (MH ⁺ ).
Synthesis Example 2: Synthesis of 4′-C-cyano-2′-deoxyinosine (Compound 8)

Compound 7 (0.15 g, 0.54 mmol) was dissolved in 50 mM Tris-HCl buffer (pH 7.50, 30.0 ml), adenosine deaminase (0.30 ml, 135 units) was added, and the mixture was stirred at 40 ° C. for 2 hours. After the reaction solution was concentrated under reduced pressure, ODS silica gel column chromatography (ODS silica gel 50 cc, H ₂ (O-2.5% ethanol). Compound crystallized from water 8 (90.0 mg, 0.32 mmol, 59.3%) was obtained.
¹ H-NMR (DMSO-d ₆ ) Δ 12.36 (1H, bs, NH), 8.31 (1H, s, H-8), 8.09 (1H, s, H-2), 6.50 (1H, t, H) -1 ′, J = 6.84), 6.34 (1H, bs, OH), 5.74 (1H, bs, OH), 4.69 (1H, t, H-3 ′, J = 5.84), 3.79 (1H, d, H-5′a), 3.66 (1H, d, H-5′b), 2.93 (1H, m, H-2′a) ), 2.50 (1H, m, H-2′b).
FABMS m / z: 278 (MH ⁺ ).
Synthesis Example 3: Synthesis of 9- (2-deoxy-4-C-cyano-β-D-ribo-pentofuranosyl) -2,6-diaminopurine
(1) Synthesis of 9- (2-deoxy-β-D-ribo-pentofuranosyl) -2,6-dibenzamidopurine (Compound 10)

Compound 9 (26.2 g, 100 mmol) was azeotroped twice with pyridine, suspended in pyridine (400 ml), and chlorotrimethylsilane (88 ml, 700 mmol) was added dropwise at 0 ° C. over 10 minutes. After stirring at 0 ° C. for 30 minutes, benzoyl chloride (82 ml, 700 mmol) was added dropwise over 20 minutes, and the mixture was further stirred at room temperature for 2 hours. Ice water (200 ml) was slowly poured into the reaction solution at 0 ° C. and stirred for 15 minutes, and then concentrated aqueous ammonia (300 ml) was added dropwise at the same temperature and stirred for 30 minutes. The solvent was distilled off under reduced pressure, and ethyl acetate (600 ml) and saturated aqueous sodium hydrogen carbonate (600 ml) were poured into the residue, followed by stirring at 0 ° C. for 1 hour. The precipitated crystals are collected by filtration, washed with water and ethyl acetate, and then dried in vacuo to give colorless crystals. 10 (36.22 g, 76%) was obtained.
¹ H-NMR (DMSO-d ₆ ) Δ 11.19, 10.98 (each 1H, s, NH), 8.61 (1H, s, H-8), 8.07-7.50 (10H, s, aromatic), 6.42 ( 1H, t, H-1 ′, J = 7.32), 5.33 (1H, d, 3′-OH, J = 3.88), 4.93 (1H, t, 5′-OH, J = 5.36), 4.44 (1H, b.m, H-3 '), 3.88 (1H, b.m, H-4'), 3.62 (1H, m, H-5 ') a), 3.55 (1H, m, H-5'b), 2.79 (1H, m, H-2'a), 2.33 (1H, m, H-2'b).
(2) Synthesis of 9- (2-deoxy-3-O-tert-butyldimethylsilyl-β-D-ribo-pentofuranosyl) -2,6-dibenzamidopurine (Compound 11)

Compound 10 (36.22 g, 76.4 mmol) was azeotropically dehydrated twice with pyridine, dissolved in pyridine (300 ml), dimethoxytrityl chloride (37.6 g, 111 mmol) was added at room temperature, and the mixture was stirred for 3 hours. Ethanol (10 ml) was added to the reaction solution, and the solvent was distilled off under reduced pressure. The residue was suspended in ethyl acetate (250 ml), water was added, and the insoluble material was removed by Celite filtration. The organic layer was collected, further washed twice with water and once with saturated brine, and dried over anhydrous sodium sulfate. The solvent was distilled off, and the residue was purified by silica gel column chromatography (silica gel 300 g, chloroform to chloroform: methanol = 200: 1 to 100: 1 to 50: 1). The obtained residue (69.9 g) was azeotropically dehydrated twice with dimethylformamide, dissolved in dimethylformamide (370 ml), imidazole (8.8 g, 129 mmol), tert-butylchlorodimethylsilane (16.5 g, 109 mmol) and stirred at room temperature overnight.
Water was poured into the reaction solution, and the solvent was distilled off under reduced pressure. The residue was dissolved in ethyl acetate (500 ml), washed with water (500 ml × 3) and saturated brine, and dried over anhydrous sodium sulfate. The solvent was distilled off, and the resulting residue was dissolved in chloroform (510 ml), and toluenesulfonic acid monohydrate-methanol solution (14.6 g, 76.8 mmol in 220 ml of MeOH) was slowly added dropwise at 0 ° C. (5 minutes). After stirring at 0 ° C. for 15 minutes, the mixture was neutralized by adding saturated aqueous sodium hydrogen carbonate (600 ml), and the organic layer was collected, washed with saturated brine, and dried over anhydrous sodium sulfate. The solvent was distilled off and further azeotroped with ethyl acetate (150 ml). Ethyl acetate (300 ml) was added to the residue, and the mixture was stirred at room temperature for 30 minutes, and the precipitated crystals were collected by filtration. The crystals are washed with ethyl acetate and dried in vacuo to give colorless crystals. 11 (28.76 g, 64%) was obtained.
¹ H-NMR (CDCl ₃ ) Δ 9.33, 9.17 (each 1H, s, NH), 8.07-7.45 (10H, m, aromatic), 6.29 (1H, dd, H-1 ′, J = 6. 36, 7.80), 4.95 (1H, b.m, H-3 ′), 4.86 (1H, b.t, 5′-OH), 4.04 (1H, b.d, H -4 ′), 3.95 (1H, m, H-5′a), 3.85 (1H, m, H-5′b), 1.42 (1H, m, H-2′a), 2.30 (1H, m, H-2′b).
(3) of 9- (2-deoxy-3-O-tert-butyldimethylsilyl-4-C-hydroxymethyl-β-D-ribo-pentofuranosyl) -2,6-dibenzamidopurine (compound 12) Composition

Compound 11 (50.0 g, 85.0 mmol) was dissolved in dimethyl sulfoxide (290 ml) -toluene (190 ml), and 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (24.6 g, 127. 5 mmol), pyridine (6.9 ml, 85.0 mmol) and trifluoroacetic acid (3.3 ml, 42.5 mmol) were added and stirred for 2 hours. Ethyl acetate (750 ml) and ice water (750 ml) were added to the reaction solution at 0 ° C. and stirred for 1 hour. The precipitated crystals (partial formyl form) were collected by filtration, and the organic layer of the filtrate was recovered. The organic layer was washed twice with water and once with saturated brine, and dried over anhydrous sodium sulfate. The solvent was distilled off, and the residue and the collected crystals were combined to obtain a crude aldehyde. The crude aldehyde was dissolved in dioxane (240 ml), 37% formaldehyde aqueous solution (45 ml) and 2N aqueous sodium hydroxide solution (45 ml) were added at room temperature, and the mixture was stirred at room temperature for 3 hours. The reaction mixture was neutralized with glacial acetic acid (8.6 ml) and extracted with ethyl acetate (700 ml). The organic layer was washed with water, saturated aqueous sodium hydrogen carbonate, and saturated brine, and then dried over anhydrous sodium sulfate. The solvent was distilled off, the obtained residue was dissolved in ethanol (360 ml), sodium borohydride (3.2 g, 85.0 mmol) was added at 0 ° C., and the mixture was stirred at the same temperature for 30 min. Glacial acetic acid (2.5 ml) was added to the reaction solution to stop the reaction, and the mixture was extracted with chloroform-methanol (10: 1) (1.1 L). The organic layer was washed with water and saturated brine, and then dried over anhydrous sodium sulfate. The solvent was distilled off and further azeotroped with ethyl acetate (200 ml). Ethyl acetate (500 ml) was added to the residue, and the mixture was stirred at room temperature for 5 minutes, and the precipitated crystals were collected by filtration. The crystals are washed with ethyl acetate and dried in vacuo 12 Was obtained as colorless crystals (30.83 g, 59%).
¹ H-NMR (DMSO-d ₆ ) Δ 11.21, 11.01 (each 1H, s, NH), 8.63-7.50 (12H, m, aromatic), 6.43 (1H, t, H-1 ′, J = 6. 32), 4.91 (1H, t, OH, J = 5.36), 4.78 (1H, t, H-3 ′, J = 5.84), 4.47 (1H, t, OH, J = 6.36), 3.65-3.52 (4H, m, H-5 ′ and H-6 ′), 2.96 (1H, m, H-2′a), 2.43 (1H , M, H-2′b), 0.89 (9H, s, t-Bu), 0.10 (6H, s, Me).
(4) 9- (2-Deoxy-3-O-tert-butyldimethylsilyl-4-C-dimethoxytrityloxymethyl-β-D-ribo-pentofuranosyl) -2,6-dibenzamidopurine (Compound 13 ) Synthesis

Compound 12 (24.8 g, 40.0 mmol) was azeotropically dehydrated once with dimethylformamide, then dissolved in dimethylformamide (200 ml), triethylamine (11.2 ml, 80.0 mmol), dimethoxytrityl chloride (20.3 g, 60 ml). 0.0 mmol) and stirred at room temperature for 1 hour. The reaction mixture was extracted with ethyl acetate (600 ml), washed with water (600 ml × 3) and saturated brine, and dried over anhydrous sodium sulfate. The solvent was distilled off, and the residue was purified by silica gel column chromatography (silica gel 600 g, chloroform to chloroform-ethyl acetate 5: 1 to 2: 1 to 1: 2 to 1: 3 ethyl acetate) to obtain a compound. 13 (22.2 g, 60%) was obtained.
¹ H-NMR (CDCl ₃ ) Δ 9.33, 9.24 (each 1H, s, NH), 8.13-6.89 (25H, m, aromatic), 6.27 (1H, t, H-1 ′, J = 6. 84), 5.14 (1H, dd, H-3 ′, J = 3.92, 6.36), 4.59 (1H, dd, 5′-OH, J = 5.40, 8.32). 4.30 (1H, dd, H-5′a, J = 5.36, 12.72), 3.87 (6H, s, OMe), 3.82 (1H, dd, H-5′b). , J = 8.80, 12.2), 3.59 (1H, d, H-6′a, J = 10.76), 3.27 (1H, m, H-2′a), 3. 18 (1H, d, H-6′b, J = 10.72), 2.48 (1H, m, H-2′b), 0.84 (9H, s, t-Bu), 0.09 , 0.07 (each 3H, Me).
(5) 9- (2-deoxy-3,5-di-O-tert-butyldimethylsilyl-4-C-hydroxymethyl-β-D-ribo-pentofuranosyl) -2,6-dibenzamidopurine ( Synthesis of compound 14)

Compound 13 (29.9 g, 32.5 mmol) was azeotropically dehydrated twice with dimethylformamide, then dissolved in dimethylformamide (100 ml), imidazole (3.3 g, 48.8 mmol), tert-butylchlorodimethylsilane (5. 9 g, 39.0 mmol) was added and stirred at room temperature overnight. The reaction mixture was extracted with ethyl acetate (300 ml), washed with water (300 ml × 3) and saturated brine, and dried over anhydrous sodium sulfate. The solvent was distilled off, and the resulting residue was dissolved in chloroform (620 ml), and toluenesulfonic acid-methanol solution (6.2 g, 32.5 mmol in 190 ml MeOH) was slowly added dropwise at -10 ° C (5 minutes). ). After stirring at the same temperature for 20 minutes, a saturated aqueous sodium bicarbonate solution (300 ml) was added for neutralization. The organic layer was collected, washed with saturated brine, and dried over anhydrous sodium sulfate. The solvent was distilled off, and the residue was purified by silica gel column chromatography (silica gel 300 g, chloroform-chloroform-ethyl acetate 2: 1 to 1: 1 to 1: 2) to give a colorless crystalline compound 14 (17.5 g, 74%) was obtained.
¹ H-NMR (CDCl ₃ ) Δ 9.20, 9.16 (each 1H, s, NH), 8.13 (1H, s, H-8), 8.03-7.48 (10H, m, aromatic), 6.45 ( 1H, t, H-1 ′, J = 6.32), 4.99 (1H, t, H-3 ′, J = 6.36), 3.91-3.73 (4H, m, H− 5 'and H-6'), 3.12 (1H, m, H-2'a), 2.71 (1H, b. Dd, OH), 2.54 (1H, m, H-2'b) ), 0.93, 0.86 (each 9H, s, t-Bu), 0.16, 0.15, 0.02, 0.007 (each 3H, s, Me).
(6) 9- (2-deoxy-3,5-di-O-tert-butyldimethylsilyl-4-C-cyano-β-D-ribo-pentofuranosyl) -2,6-dibenzamidopurine (compound 15) Synthesis

Compound 14 (1.00 g, 5.43 mmol) was dissolved in toluene (6.00 ml) and dimethyl sulfoxide (12.0 ml), and 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (1.57 g, 8 .19 mmol), pyridine (0.22 ml) and trifluoroacetic acid (0.11 ml) were added, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour. After the reaction solution was diluted with ethyl acetate, the organic layer was washed with water and dried (anhydrous magnesium sulfate). After removing the desiccant by filtration, the filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain a crude aldehyde. The crude aldehyde was dissolved in pyridine (20.0 ml), hydroxylamine hydrochloride (0.28 g, 4.03 mmol) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure, and the residue was partitioned with ethyl acetate-water. The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate and then dried under reduced pressure to obtain a crude oxime. The crude oxime was dissolved in dichloromethane (20.0 ml), and triethylamine (0.76 ml, 5.45 mmol) and methanesulfonyl chloride (0.32 ml, 4.13 mmol) were added under ice cooling, followed by stirring for 30 minutes. The reaction solution was diluted with chloroform and then washed with a saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution. The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate and then dried under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography (silica gel 200 cc, hexane: ethyl acetate = 1: 1) to give a pale yellow foamy compound. 15 (1.77 g, 2.43 mmol, 89.0%) was obtained.
¹ H-NMR (CDCl ₃ ) Δ 9.15, 9.11 (each 1H, s, NH), 8.01-7.48 (11H, m, aromatic), 6.40 (1H, t, H-1 ′, J = 6. 36), 5.20 (1H, t, H-3 ′, J = 5.36), 4.21 (1H, d, H-5′a, J = 111.24), 3.99 (1H, d, H-5′b, J = 10.76), 3.40 (1H, m, H-2′a), 2.53 (1H, m, H-2 ′), 0.97 (9H, s, t-Bu), 0.86 (9H, s, t-Bu), 0.23 (3H, s, Me), 0.17 (3H, s, Me), 0.05 (6H, s, Me).
(7) Synthesis of 9- (2-deoxy-4-C-cyano-β-D-ribo-pentofuranosyl) -2,6-diaminopurine (Compound 16)

Compound 15 (1.00 g, 1.37 mmol) was dissolved in methanol (10.0 ml), 40% aqueous methylamine solution (10.0 ml) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 3 days. The precipitated crystals (0.25 g, 0.48 mmol, 35.0%) were dissolved in tetrahydrofuran (9.00 ml), tetrabutylammonium fluoride (1M tetrahydrofuran solution, 1.00 ml, 1.00 mmol) was added, and room temperature was added. For 15 minutes. The reaction solution was concentrated under reduced pressure, and the residue was purified by silica gel column chromatography (silica gel 100 cc, ethyl acetate: methanol = 10: 1). Compound crystallized from 2-propanol 16 (0.10 g, 0.34 mmol, 24.8%) was obtained.
¹ H-NMR (DMSO-d ₆ ) Δ 7.95 (1H, s, H-8), 6.75 (2H, bs, NH) ₂ ), 6.35 (1H, t, H-1 ′, J = 6.84), 6.25 (1H, d, 3′-OH, J = 4.85), 5.85 (1H, t, 5′-OH, J = 6.36), 5.83 (2H, b.s, NH ₂ ), 4.64 (1H, dd, H-3 ′, J = 4.88, 5.84), 3.78 (1H, m, H-5′a), 3.67 (1H, m, H −5′b), 2.88 (1H, m, H-2′a), 2.37 (1H, m, H-2′b).
FABMS m / z: 292 (MH ⁺ ).
Synthesis Example 4: Synthesis of 4′-C-cyano-2′-deoxyguanosine (Compound 17)

Compound 16 (70.0 mg, 0.24 mmol) was dissolved in 50 mM Tris-HCl buffer (pH 7.50, 13.3 ml) with heating, adenosine deaminase (0.13 ml, 58.5 units) was added, and the mixture was stirred at 40 ° C. for 1 hour. did. The precipitated crystals are recrystallized from water and compound 17 (56.0 mg, 0.19 mmol, 79.2%) was obtained.
¹ H-NMR (DMSO-d ₆ ) Δ 10.68 (1H, s, NH), 7.93 (1H, s, H-8), 6.53 (2H, bs, NH) ₂ ), 6.29 (1H, t, H-1 ′, J = 6.84), 6.27 (1H, d, 3′-OH, J = 4.88), 5.73 (1H, t, 5′-OH, J = 5.84), 4.60 (1H, dd, H-3 ′, J = 4.88, 5.88), 3.73 (1H, m, H-5′a) 3.65 (1H, m, H-5′b), 2.80 (1H, m, H-2′a), 2.41 (1H, m, H-2′b).
FABMS m / z: 293 (MH ⁺ ).
Formulation Example 1: Tablet
This invention compound 30.0mg
Finely powdered cellulose 25.0mg
Lactose 39.5mg
Starch 40.0mg
Talc 5.0mg
Magnesium stearate 0.5mg
A tablet is prepared from the above composition by a conventional method.
Formulation Example 2: Capsule
This invention compound 30.0mg
Lactose 40.0mg
Starch 15.0mg
Talc 5.0mg
Capsules are prepared from the above composition by conventional methods.
Formulation Example 3: Injection
This invention compound 30.0mg
Glucose 100.0mg
An injection is prepared by dissolving the above composition in purified water for injection.
Test examples are shown below. In the test, the following two compounds of the present invention and two known compounds were used as drugs.
Compound of the present invention:
Compound 7: 4′-C-cyano-2′-deoxyadenosine
Compound 8: 4′-C-cyano-2′-deoxyinosine
Known compounds:
Azidothymidine (AZT)
2 ', 3'-dideoxy-3'-thiacytidine (3TC)
Test example
<Method> Human immunodeficiency virus (HIV) activity
1) MTT method using MT-4 cells
1. Dilute the test drug using a 96-well plate (100 μl). HIV-1 (IIIb strain; 100 TCID) so that there are 10,000 per well ₅₀ ) Add infected and uninfected MT-4 cells and incubate at 37 ° C. for 5 days.
2. MTT (20 μl, 7.5 mg / ml) is added and incubated for an additional 2-3 hours.
3. After completion of the culture, 120 μl is taken, MTT stop solution (Tripropanol X-100 4%, isopropanol added with HCl 0.04N) is added, and the formazan produced by stirring is dissolved to absorb the absorbance at 540 nm. Measure. Since this measurement value is proportional to the number of living cells, the concentration of the test drug at which the measurement value of the test using infected MT-4 cells reached 50% was determined as EC. ₅₀ In addition, the concentration of the test drug at which the measured value of the test using non-infected MT-4 cells became 50% was determined as CC ₅₀ And
2) MAGI assay using HeLa CD4 / LTR-beta-Gal cells
1. HeLa CD4 / LTR-beta-Gal cells are added to 96 wells at a rate of 10,000 cells per well. After 12 to 24 hours, the culture solution is discarded, and a diluted test drug (100 μl) is added.
2. Various HIV strains (drug resistant strains: MDR, M184V; 50 TCID each ₅₀ Cultivated for 48 hours.
3. After completion of the culture, the cells are fixed with PBS containing 1% formaldehyde (formaldehyde) and 0.2% glutaraldehyde for 5 minutes.
4). After washing with PBS three times, staining with 0.4 mg / ml X-Gal for 1 hour, counting the number of blue stained cells under a transmission stereomicroscope, and reducing the blue stained cells by 50% EC concentration ₅₀ And
<Results> Human immunodeficiency virus (HIV) activity and cytotoxicity
Tables 1-2 show the average of 2-5 measurements.
1) MTT method using MT-4 cells

2) MAGI assay using HeLa CD4 / LTR-beta-Gal cells

These results indicate that the compounds of the present invention have significantly superior antiviral activity against multidrug resistant strains and low cytotoxicity.
Industrial applicability
The compound of the present invention is effective for multi-drug resistant HIV strains having resistance to a plurality of anti-HIV agents such as AZT, ddI, ddC, d4T, and 3TC, and has low cytotoxicity. Therefore, it is useful as a pharmaceutical, particularly a therapeutic agent for HIV infection.
This application is based on patent application Nos. 2002-38078 and 2002-256634 filed in Japan, the contents of which are incorporated in full herein.

Claims (11)

Formula [I]

(In the formula, B represents a purine base, and R represents a hydrogen atom or a phosphate residue.) 4′-C-cyano-2′-deoxypurine nucleoside. The compound according to claim 1, wherein B is a purine base having no amino group at the 2-position. 2. The compound of claim 1 which is 4'-C-cyano-2'-deoxyadenosine. The compound of claim 1 which is 4'-C-cyano-2'-deoxyinosine. A pharmaceutical composition comprising the 4'-C-cyano-2'-deoxypurine nucleoside according to any one of claims 1 to 4 and a pharmaceutically acceptable carrier. The pharmaceutical composition according to claim 5, which is an antiviral agent. The pharmaceutical composition according to claim 6, which is a therapeutic agent for HIV infection. A 4'-C-cyano-2'-deoxypurine nucleoside or a pharmaceutical composition comprising the same according to any one of claims 1 to 7, which is administered to an animal including a human, Method of treatment. Use of a 4'-C-cyano-2'-deoxypurine nucleoside according to any one of claims 1 to 4 for the manufacture of an antiviral agent. A package comprising a pharmaceutical composition comprising the 4'-C-cyano-2'-deoxypurine nucleoside according to any one of claims 5 to 7, and a description describing the use of the pharmaceutical composition. (1) Formula [V]

(In the formula, B represents a purine base and R ₂ represents a protecting group.) 4′-position hydroxymethyl group of 3′-protected-2′-deoxy-4′-C-hydroxymethylpurine nucleoside represented by Next, after protecting the hydroxyl group at the 5′-position with a protecting group having a different removal method from the protecting group at the 4′-position hydroxymethyl group, the protecting group at the 4′-position hydroxymethyl group is selectively removed. Formula [VII]

(Wherein B represents a purine base and R ₂ and R ₄ represent a protecting group), a step of obtaining a 3 ′, 5′-protected-2′-deoxypurine nucleoside compound represented by:
(2) The compound represented by the formula [VII] is reacted with an oxidizing agent to oxidize the 4 ′ position to an aldehyde group, and then the aldehyde compound is reacted with hydroxylamine in an organic solvent to form an oxime compound, and further the oxime By reacting a compound with a dehydrating agent in an organic solvent in the presence of a base, the compound of formula [VIII]

(In the formula, B represents a purine base, and R ₂ and R ₄ represent a protecting group.) 3 ′, 5′-protected-4′-C-cyano-2′-deoxypurine nucleoside represented by Process,
(3) removing the 5′-hydroxyl protecting group in the compound represented by the formula [VIII], and optionally phosphorylating the 5′-hydroxyl group;
The formula [I] consisting of

(In the formula, B represents a purine base, and R represents a hydrogen atom or a phosphate residue.) A method for producing a 4′-C-cyano-2′-deoxypurine nucleoside represented by: