JPS647048B2

JPS647048B2 -

Info

Publication number: JPS647048B2
Application number: JP54034559A
Authority: JP
Inventors: Akimi Kadota; Yoshihiro Uchida
Original assignee: OOSAKA YAKUHIN KENKYUSHO KK
Current assignee: OOSAKA YAKUHIN KENKYUSHO KK
Priority date: 1979-03-24
Filing date: 1979-03-24
Publication date: 1989-02-07
Also published as: JPS55129228A

Description

【発明の詳細な説明】この発明は実質的にオタネニンジン中に存在す
るサポニン成分のみまたはその成分であるギンゼ
ノサイドRh₁、ギンゼノサイドRg₂、ギンゼノサ
イドRg₁、ギンゼノサイドRe、ギンゼノサイド
Rb₁の単一物もしくは混合物よりなる細胞賦活剤
に関する。ウコギ科に属するオタネニンジン（バナツクス
ギンゼング、シー．エイ．メイヤー；
Panaxginseng、C.A.MEYER）は一名チヨウセ
ンニンジンと呼ばれ、古来より疲労回復、強精、
消炎、利尿、胃腸衰弱改善、抗糖尿用の薬剤とし
て用いられてきたことは広く知られていることで
ある。近時、これらの薬効がチヨウセンニンジン
中のサボニン成分によるのではないかとの研究が
進められている。しかしながらこのサポニンがヒ
ト細胞賦活剤の効果を有することは全く知られて
いない。この発明はオタネニンジン中のサポニン成分が
細胞賦活作用を有し、特にギンゼノサイドRh₁：
20S−プロトパナキサトリオール−６−Ｏ−β−
Ｄ−グルコピラノシド、ギンゼノサイドRg₂：20S−プロトパナキサト
リオール−６−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル
（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド、ギンゼノサイドRg₁：20S−プロトパナキサト
リオール−6.20−ジ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノ
シド、ギンゼノサイドRe：20S−プロトパナキサトリ
オール−６−〔Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル
（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド〕−20−Ｏ
−β−Ｄ−グルコピラノシド、ギンゼノサイドRb₁：20S−プロトパナキサジ
オール−３−〔−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル
（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド〕−20−〔Ｏ
−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→６）−β−Ｄ
−グルコピラノシド〕にその効果が著しいという
新しい知見に基づいてなされたものである。我々は上記チヨウセンニンジンのサポニンがヒ
ト細胞に対し細胞賦活作用をもたらし寿命を延長
することを見出し、裏付けることができた。細胞
は生物生命の基本単位であることは広く知られる
ところであるが、ヒトにおける細胞は、皮フ、消
化管内壁の上皮、骨髄、リンパ系諸器官、精巣、
血液、肺臓、肝臓等の細胞を構成しかつ分裂を繰
返し体内で死んで行く細胞の補給を行う分裂細胞
群と筋肉、脳細胞等の細胞分裂能力はないが生理
的な機能を営む分裂終了細胞群に分類されてい
る。現在これらの基本単位である分裂細胞は、組
織より取出し特に適当な培地、例えば10％子牛血
清添加MEM培地の中で培養し分裂増殖させ殖え
継いでその生長衰退の性状、性質を検討すること
ができるようになつている。この継代培養の進行
は３期にわけられ、初代培養期の第１期の次に一
定の速度で増殖してゆく第期がつづき、いかよ
うに条件をととのえてやつても増殖度が次第に衰
え継代できずに死滅する第期に至る。第期の
期間がもつとも長くこの間は細胞自身に蛋白合成
機能が高まり、DNAがふえ、一定速度で分裂が
活発に行われる。第期となると細胞自体にリポ
ゾームの崩解が認められ、蛋白合成機能が低下し
継代不能となり死滅して細胞の寿命が消失する。
この細胞の寿命というべき継代不能となる継代回
数は同一培地を使用した場合細胞によつてほぼ定
まつている。例えばヒト胎児の肺より分離した正常２倍体線
維芽細胞（W1−１）の場合は10％牛血清添加
EME培地による培養で第期（増殖期）におけ
る細胞分裂の時間は35±２時間の速度で分裂を繰
返し増殖生存して行くが、第期に入り衰弱死滅
して51代で継代不能となる。また、ヒトのウイルナー症候群皮フ細胞を用い
た場合は22代の継代培養で継代不能となり死滅す
る。このとき第期の初めに培地に対し200μ
ｇ／ml濃度の朝鮮ニンジン総サポニン、
ginsenoside Rb₁.Rg₂.Rg₁.Re.Rb₁を添加すると細
胞賦活作用をもたらし、第期の細胞活動を長か
らしめ継代回数を延長せしめる。即ち、ヒト・ウイルナー症候群皮フ細胞の継代
培養に対して、１年性ニンジン総サポニンで4.5
％、４年性ニンジン総サポニンで22.7％、６年性
ニンジン総サポニン31.8％、ギンゼノサイドRh₁
で59％、ギンゼノサイドRg₂で50％、ギンゼノサ
イドRg₁で44.5％、ギンゼノサイドReで36.4％、
ギンゼノサイドRb₁で13.6％の継代回数の延長を
もたらす。また、ヒト胎児肺由来正常二培体線維芽細胞
（W1−１）に対してもほぼ同様継代培養回数の延
長効果を認めた。添加濃度の範囲は10μｇ〜300μ
ｇ／mlが適当であるが100μｇ〜200μｇ／mlの濃
度がもつとも望ましい。以上の如くチヨウセンニンジンサポニン並びに
ギンゼノサイドRh₁，Rg₂，Rg₁，Re，Rb₁が細
胞賦活作用を有し、細胞の寿命延長に効果をもた
らすことは明らかであるが、これを人体に投与す
る場合は１日20mg〜500mg好ましくは50mg〜200mg
を２〜３回に分けて投与することにより効力を発
揮できる。投与は、経口、非経口の何れであつてもよい。
経口投与の際は、散剤、丸剤、錠剤等とされる。
これらの剤型は、乳糖、澱粉、デキストリン等の
賦形剤に適宜他の添加剤を添加し、通常の製剤化
技術に従つて作られる。また非経口投与の際は、
例えば坐剤が注射剤とされる。注射剤とすれば、
例えばリンゲル液にこの発明の有効成分をそのま
ま又は予め適当な倍量に希釈した水性溶液を添加
して注射剤とするのが好ましい。坐剤は、通常の
坐剤の製造技術に従つて作られる。オタネニンジンの生薬からサポニン成分を得る
方法としては、例えば次のような方法で得ること
ができる。すなわち、原料となるニンジンを脱脂
せずに、あるいは通常の脂溶性有機溶媒を用いて
脱脂後、水または低級脂肪族アルコール類あるい
は含水低級脂肪族アルコールを用いてその有効成
分を抽出し、抽出液を蒸発濃縮して抽出エキスと
する。これをｎ−ブタノールに溶解し、該溶解液
に水を加えて振盪した後静置して不溶性物質を除
去し、ｎ−ブタノール層を蒸発乾固する。残留物
を低級脂肪族アルコールに溶解後、エーテル中に
撹拌注入して得られた析出物を取すればよい
（特公昭48−5016号参照）。このようにして得られた抽出物は実質的にサポ
ニン成分のみを含むものであつて、そのままこの
発明の有効成分として使用できる。この発明によるサポニン成分は、原料とするオ
タネニンジンの栽培年数などによつて構成される
成分の種類・量に若干の差があるが、後述するご
とき式（）、（）および（）の化合物を含有
するものである。サポニン成分の全体の性状とし
ては、いずれも黄白色〜かつ色の粉末で苦味を有
し、水、メタノール、希メタノールに易溶、エタ
ノールに可溶、クロロホルム、エーテル、四塩化
炭素に不溶である。また酸加水分解によつて必ず
水可溶部からブドウ糖が得られ、水不溶部からバ
ナキサザオール（C₃₀H₅₂O₃、mp205℃）およ
び／または、バナキサトリオール（C₃₀H₅₂O₄、
mp238〜239℃）が得られる。また組織培養によりサポニンを得るには例えば
ノツプ（Knop）培養液（硫酸カルシウム1000
mg／、硝酸カリウム250mg／、硫酸マグネシ
ウム250mg／、第１燐酸カリウム250mg／）
500ml、ヘラー（d′Heller）のミネラル液１ml／
、ブドウ糖５％、ビタミンB10^-6ｇ、ビオチン
10^-6ｇ、カイネチン10^-6ｇ、寒天１％よりなる培
地にオタネニンジンの根の組織片を入れ、26℃に
保つて培養増殖せしめ、ニンジンカルスを得る。
次いでこのカルスを同一の培地を用いて大量増殖
させ、このものを前記した抽出法と同様にして抽
出精製することによつてサポニン成分を得ること
ができる。また、この発明におけるサポニン成分中には次
の式（）または（）で表わされるギンゼノサ
イド（ginsenoside）類の少なくとも一種類が含
まれ、さらに場合により式（）で表わされるβ
−Ｄ−グルコピラノシルオレアネート−(3)−β−
Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グル
クロノピラノシドが含まれたものである。式（）：式中、R¹はβ−Ｄ−グルコピラノシル（１→
２）−β−Ｄ−グルコピラノシル基を示し、R²は
β−Ｄ−グルコピラノシル（１→６）−β−Ｄ−
グルコピラノシル基、α−Ｌ−アラビノピラノシ
ル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル基、β
−Ｄ−キシロピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グ
ルコピラノシル基、α−Ｌ−アラビノフラノシル
（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル基またはβ
−Ｄ−グルコピラノシル基を示す。式（）：式中、R³はα−Ｌ−アラノピラノシル（１→
２）−β−Ｄ−グルコピラノシル基、β−Ｄ−グ
ルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラ
ノシル基、β−Ｄ−グルコピラノシル基またはα
−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グ
ルコピラノシル基を示し、R⁴は水素原子または
β−Ｄ−グルコピラノシル基を示す。式（）：式中、R⁵はβ−Ｄ−グルコピラノシル基を示
し、R⁶はβ−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）・
−β−Ｄ−グルクロノピラノシル基を示す。式（）および式（）で表わされるサポニン
はトリテルペンのダンマラン系配糖体に属するサ
ポニンである。これら式（）および式（）の
サポニンは、現在のところオタネニンジンの如き
薬用ニンジンにのみに特異的に含まれることが判
明しているものである。式（）で表わされる化合物の個々の具体名と
しては、20S−プロトパナキサジオール−３−
〔Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−
Ｄ−グルコピラノシド〕−20−〔Ｏ−β−Ｄ−グル
コピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノ
シド〕（ギンゼノサイドRb₁）、20S−プロトパナ
キサジオール−３−〔Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノ
シル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド〕−20
−〔Ｏ−α−Ｌ−アラビノピラノシル（１→６）−
β−Ｄ−グルコピラノシド〕（ギンゼノサイド
Rb₂）、20S−プロトパナキサジオール−３−〔Ｏ
−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ
−グルコピラノシド〕−20−〔Ｏ−α−Ｌ−アラビ
ノフラノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノ
シド〕（ギンゼノサイドRc）、20S−プロトバナキ
サジオール−３−〔Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシ
ル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド〕−20−
〔Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→６）−β−
Ｄ−グルコピラノシド〕（ギンゼノサイドRb₂）
および20S−プロトパナキサジオール−３−〔Ｏ
−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ
−グルコピラノシド〕−20−〔Ｏ−β−Ｄ−グルコ
ピラノシド〕（ギンゼノサイドRd）が挙げられ
る。式（）で表わされる化合物の具体名としては
20S−プロトパナキサトリオール−６−〔Ｏ−β
−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グ
ルコピラノシド〕−20−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラ
ノシド（ギンゼノサイドRe）、20S−プロトパナ
キサトリオール−６−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノ
シル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド（ギ
ンゼノサイドRf）、20S−プロトパナキサトリオ
ール−6.20−ジ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド
（ギンゼノサイドRg₁）、20S−プロトバナキサト
リオール−６−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル
（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド（ギンゼノ
サイドRg₂）、20S−プロトパナキサトリオール−
６−〔Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−
β−Ｄ−グルコピラノシド〕−20−Ｏ−β−Ｄ−
グルコピラノシド（ギンゼノサイド20−グルコ−
Rf）および20S−プロトパナキサトリオール−６
−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（ギンゼノサイ
ドRh₁）が挙げられる。なお、オタネニンジン中には前述した式（），
（）および（）の構造式を有するサポニンの
他に、式（）の骨格を有すると考えられるギン
ゼノサイドRaと称せられている構造未定のサボ
ニンおよび式（）の骨格を有すると考えられる
ギンゼノサイドRh₂と称せられている構造末定の
サポニンも含まれており、これらの物質もこの発
明のサポニン成分に含まれる（Chem.Pharm.
Bull.，22(2)，421〜428（1974）および薬学雑誌94
(2)，252〜260（1974）参照）。また、ギンゼノサイドUh₁，Rg₂，Rg₁，Re，
Rb₁は前述の如くして得られたサポニン成分をク
ロロホルム／メタノール／水系あるいはｎ−ブタ
ノール／酢酸水系の展開溶剤を用いたシリカゲル
カラムクロマトグラフイー、高速液体クロマトグ
ラフイーなどにより各構成サポニンに分離、精製
することによつて得ることができる。夫々性状は次の通りである。１分子式、融点および比旋光度【表】２いずれも白色に結晶で苦味を有し水、メタノ
ール、希メタノールに易溶、エタノールに可
溶、クロロホルム、四塩化炭素に難溶である。３いずれも水と共に振るとき持続性の小泡を生
じ、リーベルマン反応、ザウコウスキー反応陽
性である。４酸加水分解反応によつて、水不溶部よりRb₁
よりはバナキサジオール（C₃₀H₅₂O₃.mp205
℃），Rh₁，Rg₂，Rg₁，Reよりはバナキサトリ
オール（C₃₀H₅₂O₄.mp238℃）が得られる。又
水可溶部より、Rb₁よりはグルコーゼが、Rh₁
よりはグルコーゼ、Rg₂よりはグリコーゼとラ
ムノーゼが、Rg₁よりはグリコーゼが、Reより
はグリコーゼとラムノーゼが得られる。５薄層クロマトグラフイーの展開位置は夫々
「図面の説明」の所に記載の通りである。次の実施例によつて、この発明のギンゼノサイ
ド類のヒト細胞に対する細胞賦活作用を示す。実施例１ヒトのウイルナー症候群の皮フ組織をトリブ
シン処理（0.05％トリブシン水溶液を用う）に
よつて細胞浮遊液とし、これをMEM培養液※
（10％子牛血清添加）にうえつぎ36℃で培養す
る（播種比１：４）。２〜３日で細胞はガラス
面を一面におおうようになる。これを再びトリ
ブシン処理して細胞浮遊液とし、１本の培養瓶
の内容を２本に分けてMEM培養液（10％子牛
血液添加）にうえつぎ継代培養を行う。同操作によつて週２回、規則的に継代培養を
繰返して行く。22代の継代培養によつて細胞の
増殖が全く認められず継代培養不能となる。これに対してオタネニンジンの１年性根の総
サポニン、４年性根の総サポニン、６年性根の
総サポニン、ギンゼノサイドRh₁，Rg₂，Rg₁，
Rge，Rb₁を夫々継代培養７代目より培養液中
に培養液に対し20μｇ／ml濃度となるよう添加
し、その後の継代培養においても培養液に同操
作をほどこし、継代培養を続行すると添加しな
い細胞の継代培養が22代で不能となるのに比
し、下記の如く細胞の寿命が著しく延長され継
代培養が延長される。【表】２ヒト胎児の肝由来の正常二倍体線維芽細胞
（W1−１）の細胞浮遊液を用いて１と同一条
件、同一操作で継代培養を行うと、51代の継代
培養で細胞の増殖は全く認められなくなり、継
代培養不能となつた。これに対し継代培養15代目より培地に対し
夫々200μｇ／ml濃度の朝鮮ニンジンン総サポ
ニン、ギンゼノサイドRh₁，Rg₂，Rg₁.Re，
Rb₁を添加したものは51代の継代培養寿命が下
記の如く延長される。【表】【表】 ※ MEM培養液（Minimm Essential
Medium for Suspension）Ｌ−塩酸アルギニン 126.4mg／Ｌ−シスチン 24.0 Ｌ−グルタミン 292.3 Ｌ−塩酸ヒスチジン 41.9 Ｌ−イソロイシン 52.5 Ｌ−ロイシン 52.5 Ｌ−塩酸リジン 73.1 Ｌ−メチオニン 14.9 Ｌ−フエニルアラニン 33.0 Ｌ−スレオニン 47.6 Ｌ−トリプト−フアン 10.2 Ｌ−チロジン 36.2 Ｌ−ヴアリン 46.9 Ｌ−塩化コリン 1.0 Ｄ−Caペントテナアート 1.0 葉酸 1.0

【図面の簡単な説明】

第１図は各サポニンを下記条件で薄層クロマト
グラフイーに付したときのクロマトグラムであ
る。（展開条件）担体：キーゼルゲルF254（メルク社製）溶剤：クロロホルム・メタノール・水（65：
35：10下層）展開距離：15cm 発色：１％第二硫酸セリウム−10％硫酸噴霧後
105℃５分加熱各サポニン紅紫色呈色。

Claims

【特許請求の範囲】１オタネニンジン（パナツクスギンゼング、
シー．エイ．メイヤー）のサポニン成分を有効成
分として含有する皮膚細胞賦活剤。２サポニン成分が、ギンゼノサイドRh₁：20S
−プロトパナキサトリオール−６−Ｏ−β−Ｄ−
グルコピラノシド、ギンゼノサイドRg₂：20S−プロトパナキサト
リオール−６−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル
（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド、ギンゼノサイドRg₁：20S−プロトパナキサト
リオール−6.20−ジ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノ
シド、ギンゼノサイドRe：20S−プロトパナキサトリ
オール−６−［Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル
（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド］−20−Ｏ
−β−Ｄ−グルコピラノシドおよびギンゼノサイドRb₁：20S−プロトパナキサジ
オール−３−［Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル
（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド］−20−［Ｏ
−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→６）−β−Ｄ
−グルコピラノシド］の単一物または混合物である特許請求の範囲第１
項記載の皮膚細胞賦活剤。