JPS6379837A - 抗ウイルス処置に用いるバクテリオシン及びその組成物 - Google Patents
抗ウイルス処置に用いるバクテリオシン及びその組成物Info
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
白血球は、Ｔ−及びＢ−細胞（リンパ球°）並びにその
他の成分から成る。
他の成分から成る。
従来の技術、発明が解決しようと る間狽点Ｔ−細胞に
感染することが知られているタイルスのうち医学的に極
めて重要なものはレトロウイルスＨＴＬＶ −ＩＩＩで
ありそれは、、後天性免疫不全症候群あるいはＡＩＤＳ
の原因となっていることが最近確かめられた。ＡＩＤＳ
に関わるＨＴＬＶ−ＩＩＩウィルス（現在ＨＩＶとして
知られている）は血液中のＴ４細胞に感染し結果的には
それらを破壊してしまうことが示された。Ｔ、サプレッ
サー細胞はそうした感染を受けない。
感染することが知られているタイルスのうち医学的に極
めて重要なものはレトロウイルスＨＴＬＶ −ＩＩＩで
ありそれは、、後天性免疫不全症候群あるいはＡＩＤＳ
の原因となっていることが最近確かめられた。ＡＩＤＳ
に関わるＨＴＬＶ−ＩＩＩウィルス（現在ＨＩＶとして
知られている）は血液中のＴ４細胞に感染し結果的には
それらを破壊してしまうことが示された。Ｔ、サプレッ
サー細胞はそうした感染を受けない。
他の医学的に重要なウィルス感染はＥｐｓｔｅｉｎ −
Ｂａｒｒクイルス（ＥＢＶ ）によって引き起こされる
感染性単核球症である。哺乳類細胞に感染するウィルス
は他にも多く知られており、それらにはインフルエンザ
ウィルス等も含まれる。
Ｂａｒｒクイルス（ＥＢＶ ）によって引き起こされる
感染性単核球症である。哺乳類細胞に感染するウィルス
は他にも多く知られており、それらにはインフルエンザ
ウィルス等も含まれる。
ＡＩＤＳウィルスについては一般に利用可能な効果的治
療手段が存在せず、それは現在緊急の医学的課題となっ
ている。ＡＩＤＳウィルスは患者の血液のＴ−、ｉｌｌ
胞に感染しそこに長期間休止状態のまま潜伏し得る。し
かしなんらかの因・子が引き金となってその複製を誘導
されるとそれは急速に宿主Ｔ−細胞を変化させ、やがて
、それらＴ−細胞は体内への侵入者に対抗する免疫機能
を発揮することができなくなる。
療手段が存在せず、それは現在緊急の医学的課題となっ
ている。ＡＩＤＳウィルスは患者の血液のＴ−、ｉｌｌ
胞に感染しそこに長期間休止状態のまま潜伏し得る。し
かしなんらかの因・子が引き金となってその複製を誘導
されるとそれは急速に宿主Ｔ−細胞を変化させ、やがて
、それらＴ−細胞は体内への侵入者に対抗する免疫機能
を発揮することができなくなる。
先に、研究者らは、現在バクテリオシンとして呼ばれて
いるバクテリア由来タンパク質を同定し分離している。
いるバクテリア由来タンパク質を同定し分離している。
これらのタンパク質は、ダラム陽性及びダラム陰性の双
方の広範囲にわたる多種のバクテリアによって生産され
、生産株の名称に基づき命名されている。バクテリオシ
ンは、通常、その生産菌に密接に関係する特定のバクテ
リア菌株に作用し、それらを殺すことによつ℃それらの
増殖を阻止する。そうした特異性は、バクテリオシンの
抗ＩＩＣＪ％質性及びバクテリアの感受性株の細胞表面
上の特異的レセプターとそれらとの作用に帰因する。標
的バクテリアに対するバクテリオシンの攻撃様式には種
々のタイプがあり得る。それらは、高分子合成の全℃を
阻害することによって作用するかもしれないし、あるい
は、Ｋ＋伝達及びＡＴＰ生産に影響を与え、選択的電子
伝達依存プロセスな医書することにより作用するかもし
れない。あるバクテリオシンはリポソームに作用してタ
ンパク質合成に特に影響し、あるものはＤＮＡの分解を
起こして細胞増殖を阻害する。作用様式が共通なバクテ
リオシンが必ずしも荊造的あるいは抗原的に関連をもつ
というわけではない。
方の広範囲にわたる多種のバクテリアによって生産され
、生産株の名称に基づき命名されている。バクテリオシ
ンは、通常、その生産菌に密接に関係する特定のバクテ
リア菌株に作用し、それらを殺すことによつ℃それらの
増殖を阻止する。そうした特異性は、バクテリオシンの
抗ＩＩＣＪ％質性及びバクテリアの感受性株の細胞表面
上の特異的レセプターとそれらとの作用に帰因する。標
的バクテリアに対するバクテリオシンの攻撃様式には種
々のタイプがあり得る。それらは、高分子合成の全℃を
阻害することによって作用するかもしれないし、あるい
は、Ｋ＋伝達及びＡＴＰ生産に影響を与え、選択的電子
伝達依存プロセスな医書することにより作用するかもし
れない。あるバクテリオシンはリポソームに作用してタ
ンパク質合成に特に影響し、あるものはＤＮＡの分解を
起こして細胞増殖を阻害する。作用様式が共通なバクテ
リオシンが必ずしも荊造的あるいは抗原的に関連をもつ
というわけではない。
新生及び腫瘍発生＃！胞の増殖の選択的阻害剤としての
バクテリオシンの有用性については最近認識され報告さ
れている。ＩＣＲ８Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃ
ａｌＳｃｉｅｎｃｅ 、第４＄２９１−２９５頁、 １
９７６年７月、においてＦａｒｋａｓ −Ｈｉｍｓｌｅ
ｙは、マウステ、ＫＨＴ線維肉腫細胞によって誘導され
た腫瘍の生育がバクテリオシンパイオシン１−４によっ
て阻止され得、またパイオシン１−４は非腫瘍細胞に対
しては毒性を示さないことを報告している。Ｅｕｒ。
バクテリオシンの有用性については最近認識され報告さ
れている。ＩＣＲ８Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃ
ａｌＳｃｉｅｎｃｅ 、第４＄２９１−２９５頁、 １
９７６年７月、においてＦａｒｋａｓ −Ｈｉｍｓｌｅ
ｙは、マウステ、ＫＨＴ線維肉腫細胞によって誘導され
た腫瘍の生育がバクテリオシンパイオシン１−４によっ
て阻止され得、またパイオシン１−４は非腫瘍細胞に対
しては毒性を示さないことを報告している。Ｅｕｒ。
Ｊ、 Ｃｌ１ｎ、 ０ｎｃｏ１．１９１６３−１７１
（１９８３）では、コリシンＨＳＣ−１０，すなわちバ
クテリオシン、が正常リンパ球及びガン化していない近
隣の骨髄細胞に影響を与えることなく選択的に白血病末
梢血液リンパ球の増殖を狙害し得ることが報告されてい
る。
（１９８３）では、コリシンＨＳＣ−１０，すなわちバ
クテリオシン、が正常リンパ球及びガン化していない近
隣の骨髄細胞に影響を与えることなく選択的に白血病末
梢血液リンパ球の増殖を狙害し得ることが報告されてい
る。
バクテリオシンが健康な細胞と悪性ａ胞とを識別し得る
ことから、それが標的悪性細胞に特異的に作用する様式
を有することが推測される。バクテリオシンが悪性細胞
の発ガン性の表ｙ１．型を認識し、それによってその標
的細胞の代置的または遺伝的機構たる最終標的に作用す
ることを示唆する仮説が提案されている。この仮説は、
発ガン性の表現型及び転移能力を欠く正常、健康な細胞
はバクテリオシンによって害されないという観察事実に
依拠する。
ことから、それが標的悪性細胞に特異的に作用する様式
を有することが推測される。バクテリオシンが悪性細胞
の発ガン性の表ｙ１．型を認識し、それによってその標
的細胞の代置的または遺伝的機構たる最終標的に作用す
ることを示唆する仮説が提案されている。この仮説は、
発ガン性の表現型及び転移能力を欠く正常、健康な細胞
はバクテリオシンによって害されないという観察事実に
依拠する。
問題点を解決するための手段
本発明の目的は、ウィルス感染哺乳類細胞の検出手段を
提供することである。
提供することである。
本発明の更なる目的は、ウィルスによって引き起こされ
た種々の感染症及び疾患の治療に使用し得る物質及び組
成物を提供することである。
た種々の感染症及び疾患の治療に使用し得る物質及び組
成物を提供することである。
本発明は、バクテリオシンがウィルス感染哺乳類細胞と
健康な正常哺乳類細胞とを識別し得るという観察事実に
基づくものである。この観察事実は、バクテリオシンが
悪性細胞の発ガン状態によって出現した細胞形態のある
要素を認識するのに違いないという推測を与えた、バク
テリオシンによるガン細胞の攻撃という以前からの観察
事実と同義のものではない。悪性細胞は一般に自己を限
定しナイ（ｎｏｎ −５ｅｌｆ −ｌｉｍｉｔｉｎｇ
） 、統制されない、それによって転移を起こし得る、
増殖特性を細胞に与える細胞膜構成成分を有するとされ
ている。一方、悪性でない、ウィルス感染哺乳類細胞は
その増殖パターンに関し自己に限定的である。
健康な正常哺乳類細胞とを識別し得るという観察事実に
基づくものである。この観察事実は、バクテリオシンが
悪性細胞の発ガン状態によって出現した細胞形態のある
要素を認識するのに違いないという推測を与えた、バク
テリオシンによるガン細胞の攻撃という以前からの観察
事実と同義のものではない。悪性細胞は一般に自己を限
定しナイ（ｎｏｎ −５ｅｌｆ −ｌｉｍｉｔｉｎｇ
） 、統制されない、それによって転移を起こし得る、
増殖特性を細胞に与える細胞膜構成成分を有するとされ
ている。一方、悪性でない、ウィルス感染哺乳類細胞は
その増殖パターンに関し自己に限定的である。
このような細胞がバクテリオシンの作用を受けるという
ことは現在知られていない。
ことは現在知られていない。
ここで使用きれているゞ悪性（ｍａｌｉｇｎａｎｔ ）
’という語は、１局所侵襲的、破壊的増殖及び転移の
特性を有する′という意味であり、これは、Ｓｔｅｄｍ
ａｎ ＯＭｅｄｉｃａｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒ 、 ２
４版、 Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ 、 Ｂａ
ｌｔｉｍｏｒｅ 、 Ｌｏｎｄｏｎ 、１９８２による
定義である。
’という語は、１局所侵襲的、破壊的増殖及び転移の
特性を有する′という意味であり、これは、Ｓｔｅｄｍ
ａｎ ＯＭｅｄｉｃａｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒ 、 ２
４版、 Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ 、 Ｂａ
ｌｔｉｍｏｒｅ 、 Ｌｏｎｄｏｎ 、１９８２による
定義である。
従ってここで言及するウイルス感染哺乳類細胞は、自己
に限定的な増殖を行ない、悪性細胞の性質ではないと思
われる増殖パターンを有することにおいて腫瘍発生性あ
るいは悪性の細胞ではないことが容易に通解される。
に限定的な増殖を行ない、悪性細胞の性質ではないと思
われる増殖パターンを有することにおいて腫瘍発生性あ
るいは悪性の細胞ではないことが容易に通解される。
本発明に依れば、従って、ウィルス８染補乳類細胞の処
置に使用するバクテリオシン及びその組成物を提供され
る。
置に使用するバクテリオシン及びその組成物を提供され
る。
又、本発明の範囲内において、ウィルス感染性非悪性哺
乳類細胞をバクテリオシンによって処置することにより
これらの細胞の増殖を検出する手段及び組成物が提供さ
れる。
乳類細胞をバクテリオシンによって処置することにより
これらの細胞の増殖を検出する手段及び組成物が提供さ
れる。
本発明において有用なバクテリオシンはウィルス感染細
ＵＫ特異的選択的に作用する認識部位をその化学構造に
有すると思われる。更に、バクテリオシンは適切な用量
作用させることにより正常で健康な細胞に影響を与える
ことなくウィルス感染細胞を選択的に殺すものと思われ
る。
ＵＫ特異的選択的に作用する認識部位をその化学構造に
有すると思われる。更に、バクテリオシンは適切な用量
作用させることにより正常で健康な細胞に影響を与える
ことなくウィルス感染細胞を選択的に殺すものと思われ
る。
そうしたバクテリオシンは、多くの場合、線維肉腫、急
性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、子宮頚癌、腺癌、扁
平上皮癌、慢性骨髄性白血病、＃リンパ球性白血病、肥
肝細胞腫、その他多種の癌細胞を選択的に殺し、または
その生長を阻害するバクテリオシンと同一である。本発
明において特に有用なバクテリオシンとしては、パイオ
シン、ビプリオシン、マイフパクテリオシン及びコリシ
ンが例示される。ここで、その使用が特に望ましいもの
は、パイオシンＩ−４及びコリシンＨＳＣ１０である。
性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、子宮頚癌、腺癌、扁
平上皮癌、慢性骨髄性白血病、＃リンパ球性白血病、肥
肝細胞腫、その他多種の癌細胞を選択的に殺し、または
その生長を阻害するバクテリオシンと同一である。本発
明において特に有用なバクテリオシンとしては、パイオ
シン、ビプリオシン、マイフパクテリオシン及びコリシ
ンが例示される。ここで、その使用が特に望ましいもの
は、パイオシンＩ−４及びコリシンＨＳＣ１０である。
ウィルス感染非悪性咄乳類細胞は、本発明の範囲内にお
いて、これらの細胞をバクテリオシンによって処置する
ことで検出できる。更に詳しくは、ウィルスに感染した
細胞はバクテリオシンで処置された細胞の増殖又は死に
よって検出できる。
いて、これらの細胞をバクテリオシンによって処置する
ことで検出できる。更に詳しくは、ウィルスに感染した
細胞はバクテリオシンで処置された細胞の増殖又は死に
よって検出できる。
結合測定法（酵ｇ ＩＪランク螢光及び放射能結合（ｒ
ａｄｉｏｂｉｎｄｉｎｇ ） ） 、及び三重水素化さ
れたチミジンの摂取を含む代謝摂取測定法、フロー血球
計算（ｆｌｏｗ −ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ）等に限らず
、バクテリオシンで処置したウィルス感染非悪性ｍ胞を
検出するのに効果的に使用できる方法は当業者に数多く
知られている。
ａｄｉｏｂｉｎｄｉｎｇ ） ） 、及び三重水素化さ
れたチミジンの摂取を含む代謝摂取測定法、フロー血球
計算（ｆｌｏｗ −ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ）等に限らず
、バクテリオシンで処置したウィルス感染非悪性ｍ胞を
検出するのに効果的に使用できる方法は当業者に数多く
知られている。
バクテリオシンは、バクテリオシン産生能を有するバク
テリアの菌株を用い既知の椋準的発酵技術によって調製
することができろ。バクテリアは、発酵槽の中で指数的
生長相に達する迄生育させる。
テリアの菌株を用い既知の椋準的発酵技術によって調製
することができろ。バクテリアは、発酵槽の中で指数的
生長相に達する迄生育させる。
次いで、適当な化学的あるいは物理的作用を加えて誘導
し、それにより大部分の細胞（９０−９９パーセント）
がバクテリオシンを合成する。適切な誘導剤の一つとし
てミリリットル当り凡そ０．５マイクログラムのマイト
マイシンＣが例示される。
し、それにより大部分の細胞（９０−９９パーセント）
がバクテリオシンを合成する。適切な誘導剤の一つとし
てミリリットル当り凡そ０．５マイクログラムのマイト
マイシンＣが例示される。
そして、さらに該細胞はインキュベートされる。
ある培養物の場合にはバクテリオシンは発酵培地中に分
泌されるが他のある培養物の場合には培養物がバクテリ
オシンを遊離しない為、細胞壁を破壊しなければならな
い。その破壊処理はフレンチプレッシャーセルを用い圧
力（例えば２（１０（１０ ｐｓｉにて）下行なうこと
ができる。粗バクテリオシンは遠心に付して細胞片から
分離することができ、そし【、上澄液に含まれる。
泌されるが他のある培養物の場合には培養物がバクテリ
オシンを遊離しない為、細胞壁を破壊しなければならな
い。その破壊処理はフレンチプレッシャーセルを用い圧
力（例えば２（１０（１０ ｐｓｉにて）下行なうこと
ができる。粗バクテリオシンは遠心に付して細胞片から
分離することができ、そし【、上澄液に含まれる。
上滑を回収した後標準の生化学的分離法を用い【バクテ
リオシンを精製し得る。例えば最初に種種の濃度の硫酸
アンモニウムを使用することが好ましい。そして残った
硫酸アンモニウムは水に対する透析により除去する。次
いで所望のバクテリオシンを含む沈澱物を弱陽イオン交
換体である８ｅｐｈａｄｅｘ ＤＲＡＥ −５Ｑのよう
なからム上でりＯ−ｙトゲラフイーに付し２８０ ｊｌ
ｆｆｌにおける吸収をモニターすることによりその種々
のタンパク質が分離され得る。このようにして分離され
たタンパク質のうち活性画分を決定し、そのバクテリオ
シンに感受性を有することの知られているバクテリアの
菌株、すなわち指示菌株、をそれらのアリコートが殺す
能力により画分を選択することができる。
リオシンを精製し得る。例えば最初に種種の濃度の硫酸
アンモニウムを使用することが好ましい。そして残った
硫酸アンモニウムは水に対する透析により除去する。次
いで所望のバクテリオシンを含む沈澱物を弱陽イオン交
換体である８ｅｐｈａｄｅｘ ＤＲＡＥ −５Ｑのよう
なからム上でりＯ−ｙトゲラフイーに付し２８０ ｊｌ
ｆｆｌにおける吸収をモニターすることによりその種々
のタンパク質が分離され得る。このようにして分離され
たタンパク質のうち活性画分を決定し、そのバクテリオ
シンに感受性を有することの知られているバクテリアの
菌株、すなわち指示菌株、をそれらのアリコートが殺す
能力により画分を選択することができる。
活性タンパク質両分をこのようＫしてプールする。
タンパク質の荷電に基づき高性能液体クロマトグラフィ
ー（ＨＰＬＣ） Ｋよって更に′＃！！製を行う。２８
０ｎｍにおける吸収のモニターにより得られた種々のピ
ークを分離し指示株に対する活性について再度テストす
る。ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電
気泳動（５ＤＳＰＡＧＢ ）によって最終的に純粋なタ
ンパク質バタテリオシンを決定することができる。クー
マシープルー染色後−本の主要なバンドの存在が認めら
れることから純バクテリオシンの得られたことが示され
る。ビブリ、ｔ Ｃ／ ７及びコリシンの精製例は、Ｍ
ｉｃｒｂｉｏｓ 、 １９６９＋ＩＢ８７−８９及びＣ
ｙｔｏｂｉｏｓ 、 １９８５ ＋土主：１９３−２０
７．にそれぞ九記載されている。
ー（ＨＰＬＣ） Ｋよって更に′＃！！製を行う。２８
０ｎｍにおける吸収のモニターにより得られた種々のピ
ークを分離し指示株に対する活性について再度テストす
る。ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電
気泳動（５ＤＳＰＡＧＢ ）によって最終的に純粋なタ
ンパク質バタテリオシンを決定することができる。クー
マシープルー染色後−本の主要なバンドの存在が認めら
れることから純バクテリオシンの得られたことが示され
る。ビブリ、ｔ Ｃ／ ７及びコリシンの精製例は、Ｍ
ｉｃｒｂｉｏｓ 、 １９６９＋ＩＢ８７−８９及びＣ
ｙｔｏｂｉｏｓ 、 １９８５ ＋土主：１９３−２０
７．にそれぞ九記載されている。
このように本発明において使用する適切なバクテリオシ
ンの選択分離及び精製は、本発明の属する技術分野の熟
練者によって十分に再現され得る。
ンの選択分離及び精製は、本発明の属する技術分野の熟
練者によって十分に再現され得る。
上記のような通常のバクテリオシン製造方法及び分離方
法によって熟練者は、ウィルス感染補乳類細胞に対して
活性を有する特異的バクテリオシンを容易に取得し得る
。次に示す個々の本発明実施例は特定のウィルス感染Ｂ
−及びＴ−細胞に対して活性を示し効果のあることの認
められた特定のバクテリオシンを各々示すものであるが
、本発明は、例示された特定のバクテリオシンの使用に
のみ限定されるわけではない。
法によって熟練者は、ウィルス感染補乳類細胞に対して
活性を有する特異的バクテリオシンを容易に取得し得る
。次に示す個々の本発明実施例は特定のウィルス感染Ｂ
−及びＴ−細胞に対して活性を示し効果のあることの認
められた特定のバクテリオシンを各々示すものであるが
、本発明は、例示された特定のバクテリオシンの使用に
のみ限定されるわけではない。
毒性に関する間頂点を考慮し、本発明に使用し得るバク
テリオシンは比較的少量使用されるべきである。マウス
について行なった毒性試験によれば、動物１匹に対して
１０マイクログラムの効果的用量を反復して投与した場
合には、マクスに対する毒性効果をなんら生じることな
く１（１０％の効果が得られた。しかしながらバクテリ
オシン濃度を増加していくと毒性はＷ！著になった。０
３Ｈ７Ｊ系マウスではマウス当り８０乃至１（１０マイ
クログラムが致死量であった。雑種Ｃ３ＤＸ２Ｆ１／Ｊ
のような他のマウス種でＣ３Ｈ／Ｊマウスの十倍の抵抗
力が認められ、マウス当り１（１００マイクログラムで
毒性が認められた。
テリオシンは比較的少量使用されるべきである。マウス
について行なった毒性試験によれば、動物１匹に対して
１０マイクログラムの効果的用量を反復して投与した場
合には、マクスに対する毒性効果をなんら生じることな
く１（１０％の効果が得られた。しかしながらバクテリ
オシン濃度を増加していくと毒性はＷ！著になった。０
３Ｈ７Ｊ系マウスではマウス当り８０乃至１（１０マイ
クログラムが致死量であった。雑種Ｃ３ＤＸ２Ｆ１／Ｊ
のような他のマウス種でＣ３Ｈ／Ｊマウスの十倍の抵抗
力が認められ、マウス当り１（１００マイクログラムで
毒性が認められた。
バクテリオシンの単位用量によって１（１０万個のウィ
ルス感染細胞を処置することが望ましいので一回の処置
で０．０１μｇ乃至ｌＯμｑ１より好まＬ ＜ ハ０．
１μｇ乃至１μｇのバクテリオシン投与が望まれる。こ
の範囲における反復投与を行うこともできる。バクテリ
オシンはある一定のリンパ球群に対して、標的細胞あた
りバクテリオシン１１０−５ｎ乃至１１０−２ｎ 、、
最も好ましくは１０−’ ｎｇ乃至１０−’ ｎｇの比
率に達するよう添加することが好ましい。この投与量は
ガン細胞の処理に要する用量よりも少なく、その差は有
意である。
ルス感染細胞を処置することが望ましいので一回の処置
で０．０１μｇ乃至ｌＯμｑ１より好まＬ ＜ ハ０．
１μｇ乃至１μｇのバクテリオシン投与が望まれる。こ
の範囲における反復投与を行うこともできる。バクテリ
オシンはある一定のリンパ球群に対して、標的細胞あた
りバクテリオシン１１０−５ｎ乃至１１０−２ｎ 、、
最も好ましくは１０−’ ｎｇ乃至１０−’ ｎｇの比
率に達するよう添加することが好ましい。この投与量は
ガン細胞の処理に要する用量よりも少なく、その差は有
意である。
本発明の組成物の投与形態は、その消費形態から当然に
決まる。バクテリオシンはタンパク質であり胃の酵素に
よって消化されることから、また、組成物はリンパ球の
攻シに使用されることが好ましいことから、組成物は溶
液として注射により投与されることが望まれる。従って
その担体としては緩衝液及び塩化ナトＩＪウムを含育す
る水溶液が好ましい。こうした溶液は、標準的技術によ
り処方され得る。
決まる。バクテリオシンはタンパク質であり胃の酵素に
よって消化されることから、また、組成物はリンパ球の
攻シに使用されることが好ましいことから、組成物は溶
液として注射により投与されることが望まれる。従って
その担体としては緩衝液及び塩化ナトＩＪウムを含育す
る水溶液が好ましい。こうした溶液は、標準的技術によ
り処方され得る。
実施例
本発明は下記の実施例により更に詳細に説明される。
実施例１−バクテリオシンＨＳＣ１０ｃＤ ２Ｊ ：’
１２（１０ Ｕットルの脳心ａ浸出液培地（ＢＩ（工）
（Ｄｉｆｃｏ Ｌａｂｓ、 Ｄｅｔｒｏｉｔ、 Ｍｉｃ
ｈ、 ）に生産菌株Ｅ。
１２（１０ Ｕットルの脳心ａ浸出液培地（ＢＩ（工）
（Ｄｉｆｃｏ Ｌａｂｓ、 Ｄｅｔｒｏｉｔ、 Ｍｉｃ
ｈ、 ）に生産菌株Ｅ。
ｃｏｌｉ Ｉ（ＳＧ−１０の懸濁液を加え一晩生育させ
た。
た。
バクテリアの増殖が指数的生長相（（達する迄培養物を
３７℃にて生育させた。次いで誘導剤、すなわちマイト
マイシンＣ０１５マイクログラム／ミリリツトルを培養
物に加え、更に４−５時ｌ１３継続して生育させた。
３７℃にて生育させた。次いで誘導剤、すなわちマイト
マイシンＣ０１５マイクログラム／ミリリツトルを培養
物に加え、更に４−５時ｌ１３継続して生育させた。
得られた培養物を９０分間５ｈａｒｐｌｅｓ遠心に付し
、上清、固形ペレット及び半固形物を得、上清は除去し
た。ペレットの生重量は５０５ｇであった。ペレット中
の菌体な７レンチプレツシヤーセルを用いて破砕し残り
の物質をその元の体積に対し１％のＴｒｉｓ （０，０
５Ｍ 、 ｐｈ ７．８ ）に懸濁した。
、上清、固形ペレット及び半固形物を得、上清は除去し
た。ペレットの生重量は５０５ｇであった。ペレット中
の菌体な７レンチプレツシヤーセルを用いて破砕し残り
の物質をその元の体積に対し１％のＴｒｉｓ （０，０
５Ｍ 、 ｐｈ ７．８ ）に懸濁した。
懸濁液を遠心に付し残渣のペレットを除去した。
得られた上清には粗バタテリオシンを含むリゼイトが含
まれるので、これを更なる処理に付し下記実施例２に記
載のように精製した。
まれるので、これを更なる処理に付し下記実施例２に記
載のように精製した。
実施例２−バクテリオシンの精製
実施例１で得られた粗バクテリオシン含有上清について
、各種濃度の硫酸アンモニウム沈澱によって活性バクテ
リオシン以外のタンパク質を除去した。上清中、３５−
５０％濃度の硫酸アンモニウムで塩析したタンノイク質
を保留し、上清を除去した。保留した物質を水に対して
透析し、４６，（１００ｘｇにて遠心し、次いで上清を
次の精製過程に付する前に一２０℃で保存した。
、各種濃度の硫酸アンモニウム沈澱によって活性バクテ
リオシン以外のタンパク質を除去した。上清中、３５−
５０％濃度の硫酸アンモニウムで塩析したタンノイク質
を保留し、上清を除去した。保留した物質を水に対して
透析し、４６，（１００ｘｇにて遠心し、次いで上清を
次の精製過程に付する前に一２０℃で保存した。
凍結上清ハ、融解後、５ｅｐｈａｄｅｘ −ＤＢＡＥ
Ａ−５０を用いてクロマトグラフィーに付し、０．０−
１．０Ｍ ＮａＣ１含有０．０１ Ｍ Ｔｒｉｓ、 ｐ
Ｈ８，２を溶離剤に用い、２８０ｎｍにおける吸収をモ
ニターして、別々の両分に集めた。
Ａ−５０を用いてクロマトグラフィーに付し、０．０−
１．０Ｍ ＮａＣ１含有０．０１ Ｍ Ｔｒｉｓ、 ｐ
Ｈ８，２を溶離剤に用い、２８０ｎｍにおける吸収をモ
ニターして、別々の両分に集めた。
次いで所望画分をプールし、混濁度テストによって指示
棒Ｅ、 ｃｏｉｌ ｙ７’ｏに対する活性を調べた。
棒Ｅ、 ｃｏｉｌ ｙ７’ｏに対する活性を調べた。
すなわち、脳心臓浸出液培地中で３７℃にて一晩生育さ
せた指示棒を接種物として使用し、特定口数になる迄指
数的増加をさせた。これらのバクテリアを、上述のよう
に部分精製したバクテリオシンの２倍希釈液と混合し、
分光光度計により指示棒の生育阻害を記録した。培地中
の指示棒の既知菌数に対し加えられたバクテリオシンの
既知濃度から、混濁度測定によって得られた生育反応曲
線ニ基づきコリシンＨＳＣ１０のミリリットル当り致死
単位数が算定された。第１表に指示棒の５０％を殺す為
に要するｔ Ｕ ＩＪットル当りの致死単位数。
せた指示棒を接種物として使用し、特定口数になる迄指
数的増加をさせた。これらのバクテリアを、上述のよう
に部分精製したバクテリオシンの２倍希釈液と混合し、
分光光度計により指示棒の生育阻害を記録した。培地中
の指示棒の既知菌数に対し加えられたバクテリオシンの
既知濃度から、混濁度測定によって得られた生育反応曲
線ニ基づきコリシンＨＳＣ１０のミリリットル当り致死
単位数が算定された。第１表に指示棒の５０％を殺す為
に要するｔ Ｕ ＩＪットル当りの致死単位数。
ＬＵ ５０を示し、それに関し以下に論じる。
プールされた両分は、高性能液体クロマトグラフィー（
ＨＰＬＣ）を用いて更に精製し、２８０ ｎｍＫおける
吸収ピークで集められた両分をプールし、そのアリコー
トにつき上記と同様の混濁度テストを行った。
ＨＰＬＣ）を用いて更に精製し、２８０ ｎｍＫおける
吸収ピークで集められた両分をプールし、そのアリコー
トにつき上記と同様の混濁度テストを行った。
この最終画分についてＳＤＳ −ＰＡＧＥ分析を行ない
、クーフシ−染色後１本の主要バンドの存在が認められ
たことから、純バタテリオシンを確認した０ 上記方法の各段階で回収されたバクテリオシンの量及び
それらの殺バクテリア活性を下記第１表に示す。
、クーフシ−染色後１本の主要バンドの存在が認められ
たことから、純バタテリオシンを確認した０ 上記方法の各段階で回収されたバクテリオシンの量及び
それらの殺バクテリア活性を下記第１表に示す。
第１表
粗すゼイト １５，６７４ １（１０ ０．６７
４．３Ｘ１０４ａ）混濁度テストにより、バクテリアに
対して測定 培養物のリゼイト由来のコリシンＨＳＣ１０の量はわず
か、元のリゼイトの重量の約０．１０％であり、従って
必要量のバクテリオシンを生産するには大量のバクテリ
アを＠養すべきことが好ましいと示唆される。このタン
パク質の殺バクテリア活性に依れば、ここで採られたｍ
製法を用いて十分９３０の精製ファクタを確立し得、指
示棒の５０％の生育な■害するのにわずか０．６３μｇ
のバクテリオシンで足りる。次に行なった実施例３，４
及び５に使用する部分離し、以下ＨＳＣ−ＩＱと称する
画分は、５ｅｐｈａｄｅｘ ＤシＩＪ−Ａ５０処理後の
沈澱から得られたものである。
４．３Ｘ１０４ａ）混濁度テストにより、バクテリアに
対して測定 培養物のリゼイト由来のコリシンＨＳＣ１０の量はわず
か、元のリゼイトの重量の約０．１０％であり、従って
必要量のバクテリオシンを生産するには大量のバクテリ
アを＠養すべきことが好ましいと示唆される。このタン
パク質の殺バクテリア活性に依れば、ここで採られたｍ
製法を用いて十分９３０の精製ファクタを確立し得、指
示棒の５０％の生育な■害するのにわずか０．６３μｇ
のバクテリオシンで足りる。次に行なった実施例３，４
及び５に使用する部分離し、以下ＨＳＣ−ＩＱと称する
画分は、５ｅｐｈａｄｅｘ ＤシＩＪ−Ａ５０処理後の
沈澱から得られたものである。
実施例３− ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるコリシンＨ３Ｃ
１０のウィルス感染白血球に対する選択 的認識 １４人の異なるＡＩＤＳ患者から取得したリンパ球をＦ
ｉｃｏｌｌ −Ｐａｑｕｅ” （Ｐｈａｒｍａｃｉａ
Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉ−ｃａｌｓ、 Ｄｏｒｖａｌ、
Ｑｕｅｂｅｃ ）で強化培養し、計数して実験用及び対
照用グループに分けた。上述のように抽出、精製した；
リシンＨＳＣ１０をｐ）１７．４ トリス緩衝液で希釈
し、標的細胞当り１０ 乃至１１０−２ｎのバクテリ
オシンの割合となるように実験用グループのリンパ球に
加えた。対照用グループにはトリス緩衝希釈液のみを加
えた。
１０のウィルス感染白血球に対する選択 的認識 １４人の異なるＡＩＤＳ患者から取得したリンパ球をＦ
ｉｃｏｌｌ −Ｐａｑｕｅ” （Ｐｈａｒｍａｃｉａ
Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉ−ｃａｌｓ、 Ｄｏｒｖａｌ、
Ｑｕｅｂｅｃ ）で強化培養し、計数して実験用及び対
照用グループに分けた。上述のように抽出、精製した；
リシンＨＳＣ１０をｐ）１７．４ トリス緩衝液で希釈
し、標的細胞当り１０ 乃至１１０−２ｎのバクテリ
オシンの割合となるように実験用グループのリンパ球に
加えた。対照用グループにはトリス緩衝希釈液のみを加
えた。
２種の細胞群をマイクロウェルに入れ、３７℃にて５Ｈ
−チミジン及び５％ＣＯ□を含有する湿らせた空気の存
在下−晩生前させた。その後細胞を集め余分な５Ｈ−チ
ミジンを洗浄により除去し、シンチレーションカウンタ
に通して、細胞の代謝及び生育を示す放射能の摂取を測
定した。バクテリオシンの効果は、バクテリオシンを加
えたグループにおける１分当りの崩壊（ｄｐｍ ）の減
少パーセンテージにより対照グループと対比して測定し
た。
−チミジン及び５％ＣＯ□を含有する湿らせた空気の存
在下−晩生前させた。その後細胞を集め余分な５Ｈ−チ
ミジンを洗浄により除去し、シンチレーションカウンタ
に通して、細胞の代謝及び生育を示す放射能の摂取を測
定した。バクテリオシンの効果は、バクテリオシンを加
えたグループにおける１分当りの崩壊（ｄｐｍ ）の減
少パーセンテージにより対照グループと対比して測定し
た。
並行実験として、９名の健常者から取得したリンパ球に
バクテリオシンを加え、ｓＨ−チミジン摂取テストによ
りトリス緩衝液バクテリオシン希釈液のみで処理した対
照の健康なリンパ球と比較した。
バクテリオシンを加え、ｓＨ−チミジン摂取テストによ
りトリス緩衝液バクテリオシン希釈液のみで処理した対
照の健康なリンパ球と比較した。
ハイリスクＡＩＤＳグループ（例えば血友病患者）に属
する３人の患者から成るグループを第３のグループとし
てテストした。これらの患者についてのＡＩＤＳの存在
は確認されていない。
する３人の患者から成るグループを第３のグループとし
てテストした。これらの患者についてのＡＩＤＳの存在
は確認されていない。
３グループの各々における！Ｈ−チミジン摂取を、バク
テリオシンによる処置をしていない患者から成る対照グ
ループに対するパーセンテージで測定した。
テリオシンによる処置をしていない患者から成る対照グ
ループに対するパーセンテージで測定した。
採用された濃度においては、ＡＩＤＳ患者からのＨＴＬ
Ｕ −ＩＩＩ感染（ＡＩＤＳ ）リンパ球の数、及び疑
似ＡＩＤＳ患者及び健常者のリンパ球の数に対し影響を
示し、それは第２表に示す通りである０第２表 ＡＩＤＳ患者 １５例 （１４人の異なる患者） 促進 ）１１０ ２７０ １５中５（３３％）（１
４患者中５人） 第２表（継き） 疑似ＡＩＤＳ患者 ３例 （３人の異なった患者） 阻害 ３中
０促進 ）１１０ １４５
３中１健常者 １４例 （９人の異なった健常者） 促＊ ＞１１０ １６６ に
九８□８７％）”上述の様にＡＩＤＳウィルスを保有し
ないことが知られている１健常者′グループからのサン
プルのうちの４例がｓＨ−チミジン阻害試験においてバ
クテリオシンに対する感受性を示し、ウィルス感染を示
唆している。こうした１偽−陽性′の被験者は、他のウ
ィルスに感染していることが後の３Ｈ−チミジン摂取に
よって確認され、２人は、２−５Ａシンセターゼテスト
によって確認キれた。
Ｕ −ＩＩＩ感染（ＡＩＤＳ ）リンパ球の数、及び疑
似ＡＩＤＳ患者及び健常者のリンパ球の数に対し影響を
示し、それは第２表に示す通りである０第２表 ＡＩＤＳ患者 １５例 （１４人の異なる患者） 促進 ）１１０ ２７０ １５中５（３３％）（１
４患者中５人） 第２表（継き） 疑似ＡＩＤＳ患者 ３例 （３人の異なった患者） 阻害 ３中
０促進 ）１１０ １４５
３中１健常者 １４例 （９人の異なった健常者） 促＊ ＞１１０ １６６ に
九８□８７％）”上述の様にＡＩＤＳウィルスを保有し
ないことが知られている１健常者′グループからのサン
プルのうちの４例がｓＨ−チミジン阻害試験においてバ
クテリオシンに対する感受性を示し、ウィルス感染を示
唆している。こうした１偽−陽性′の被験者は、他のウ
ィルスに感染していることが後の３Ｈ−チミジン摂取に
よって確認され、２人は、２−５Ａシンセターゼテスト
によって確認キれた。
後に行なったこのテストは、広く知られており、ウィル
ス感染の早期診断法として関連技術において認められて
いる。これは、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉ
ｏｎｓＤｉｓｅａｓｅｓ Ｒｅａｄ、 Ｓ、Ｅ、他１
９８５年９月に記載されている。後の研究では、一過性
のウィルス感染に従いゝ偽−陽性“患者のうち１人に３
Ｈ−チミジン阻害とは反対にその促進が認められた。
ス感染の早期診断法として関連技術において認められて
いる。これは、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉ
ｏｎｓＤｉｓｅａｓｅｓ Ｒｅａｄ、 Ｓ、Ｅ、他１
９８５年９月に記載されている。後の研究では、一過性
のウィルス感染に従いゝ偽−陽性“患者のうち１人に３
Ｈ−チミジン阻害とは反対にその促進が認められた。
ＡＩＤＳ患者について行なわれた１５例のうちの５３％
でチミジン摂取の阻害が認められ、１３％で臨界的阻害
が認められた。それに対し健常者について行なわれた１
４例のうちの５７％でチミジン摂取の促進が、１４％で
臨界的阻害が、そして２９％（１４人中４人）で阻害が
それぞれ認められた。
でチミジン摂取の阻害が認められ、１３％で臨界的阻害
が認められた。それに対し健常者について行なわれた１
４例のうちの５７％でチミジン摂取の促進が、１４％で
臨界的阻害が、そして２９％（１４人中４人）で阻害が
それぞれ認められた。
疑似ＡＩＤＳ患者３人についてはいずれもバクテリオシ
ンに対する感受性を示さなかった。この試験の行なわれ
た時点でこれらの患者のいずれもＡＩＤＳウィルスを保
有していなかったことがテスト及び観察により確認され
ている。
ンに対する感受性を示さなかった。この試験の行なわれ
た時点でこれらの患者のいずれもＡＩＤＳウィルスを保
有していなかったことがテスト及び観察により確認され
ている。
要すれば、第２表に示す結果から顕著な効果が認められ
る。先ず、放射能吸収を示すＡＩＤＳ １７２８球の数
は、バクテリオシンが加えられると有意に減少している
。次に１これは重要な事実であるが、同一濃度のバクテ
リオシンに晒された正常リンパ球は損傷を受けていない
ようである（７１％）。
る。先ず、放射能吸収を示すＡＩＤＳ １７２８球の数
は、バクテリオシンが加えられると有意に減少している
。次に１これは重要な事実であるが、同一濃度のバクテ
リオシンに晒された正常リンパ球は損傷を受けていない
ようである（７１％）。
更に興味深いことに、バクテリオシンに晒されたこれら
正常リンパ球の５７％は、それに晒されていない正常リ
ンパ球に比べ放射能測定による数を増加させている。こ
の事実は、正常リンパ球の増殖促進を示すもので、バク
テリオシンによる処置を受けた多くの患者は、こうした
反応により、ＡＩＤＳ患者が有する他の感染症に対し【
もより強力な免疫機能を獲得し得ると考えられる。
正常リンパ球の５７％は、それに晒されていない正常リ
ンパ球に比べ放射能測定による数を増加させている。こ
の事実は、正常リンパ球の増殖促進を示すもので、バク
テリオシンによる処置を受けた多くの患者は、こうした
反応により、ＡＩＤＳ患者が有する他の感染症に対し【
もより強力な免疫機能を獲得し得ると考えられる。
ＡＩＤＳ ／ｐＨリンパ球に対するバクテリオシンの攻
撃対象を更に詳細に同定する為、モノクローナル抗体を
使用した。サブセットヘルパーインデューサー細胞（Ｔ
４）とＡＩＤＳ患者の免疫反応を妨げるサブセットサプ
レッサー細胞（Ｔ、） トの比率、即ち、Ｔ４／／ｆｒ
８はＡＩＤＳ患者の具合、減少することが知られている
一Ｂｖａｔｔ等、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎ
ａｌｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、 ３１３巻、４８３頁参
照。免疫反応を活性化し、従って体の防ｇ！！機構に不
可欠な要素であるサブセットヘルパーインデユー？−ａ
肥（Ｔ４） ハＩ（ＴＬＶ −ＩＩＩ ウ（ルｘ Ｋ７
ｇ染Ｌ、ソｏｅ能は損なわれ、あるいは失なわれる。そ
こで、Ｔ４細胞に特異性を有するモノクローナル抗体（
ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ 、カタログ番
号ＮＥＮ −０３８）及びＴ、細胞に対するモノクロー
ナル抗体（Ｎｅｗ Ｅｈｇ−Ｉａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ
、カタログ番号ＮＥＩ −０３９）を用い、バクテリ
オシン処理後のＡＩＤ８患者由来リンパ球についてＴ４
及びＴ、リンパ球の存在及びその数を測定する実験を行
なった。
撃対象を更に詳細に同定する為、モノクローナル抗体を
使用した。サブセットヘルパーインデューサー細胞（Ｔ
４）とＡＩＤＳ患者の免疫反応を妨げるサブセットサプ
レッサー細胞（Ｔ、） トの比率、即ち、Ｔ４／／ｆｒ
８はＡＩＤＳ患者の具合、減少することが知られている
一Ｂｖａｔｔ等、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎ
ａｌｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、 ３１３巻、４８３頁参
照。免疫反応を活性化し、従って体の防ｇ！！機構に不
可欠な要素であるサブセットヘルパーインデユー？−ａ
肥（Ｔ４） ハＩ（ＴＬＶ −ＩＩＩ ウ（ルｘ Ｋ７
ｇ染Ｌ、ソｏｅ能は損なわれ、あるいは失なわれる。そ
こで、Ｔ４細胞に特異性を有するモノクローナル抗体（
ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ 、カタログ番
号ＮＥＮ −０３８）及びＴ、細胞に対するモノクロー
ナル抗体（Ｎｅｗ Ｅｈｇ−Ｉａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ
、カタログ番号ＮＥＩ −０３９）を用い、バクテリ
オシン処理後のＡＩＤ８患者由来リンパ球についてＴ４
及びＴ、リンパ球の存在及びその数を測定する実験を行
なった。
サブセットＴ、サプレッサーリンパ球はバクテリオシン
処理後もその数が不変であったのに対し、感染Ｔ４細胞
の数は有意に減少していることがわかった。
処理後もその数が不変であったのに対し、感染Ｔ４細胞
の数は有意に減少していることがわかった。
このテストは、ハイブリドーマテクニックと呼ばれる方
法により作製された上述のＴ４及びＴ８細胞に対するモ
ノクローナル抗体を用いて行なった。
法により作製された上述のＴ４及びＴ８細胞に対するモ
ノクローナル抗体を用いて行なった。
この技法は本発ｒ！ＡＩＢ８連技術の熟練者によって広
く応用されている。
く応用されている。
このようにして作製したＴ４あるいはＴ、 Ｋ対するモ
ノクローナル抗体を螢光化合物（例えばイソチオシアン
酸フルオレセイン）で標識し、それが紫外繰下染料の螢
光によって検出されるようにする。
ノクローナル抗体を螢光化合物（例えばイソチオシアン
酸フルオレセイン）で標識し、それが紫外繰下染料の螢
光によって検出されるようにする。
Ｔ４及びＴ８細胞を各々の螢光抗体と反応させ紫外繰下
計数する。
計数する。
試験を行なったＡＩＤＳ患者はいずれも１４９７８球の
１４乃至２１％の減少を示した。Ｔ、リンパ球について
は、全く影響を受けなかったかもしくはわずかに有意差
を認めない程に促進あるいは■害されたにすぎない。
１４乃至２１％の減少を示した。Ｔ、リンパ球について
は、全く影響を受けなかったかもしくはわずかに有意差
を認めない程に促進あるいは■害されたにすぎない。
ここに記載した実施例により、バクテリオシンが、ウィ
ルス感染Ｔ−リンパ球の数を効果的に減少することを示
した。詳細には、正常なＴｉＢＩＭに害を与えずむしろ
その生長を促進しつつＴ４細飽の数を減少させるという
ことにおいてコリシンＨＳＣ−１０等のバクテリオシン
の有用性が確立された。
ルス感染Ｔ−リンパ球の数を効果的に減少することを示
した。詳細には、正常なＴｉＢＩＭに害を与えずむしろ
その生長を促進しつつＴ４細飽の数を減少させるという
ことにおいてコリシンＨＳＣ−１０等のバクテリオシン
の有用性が確立された。
実施例４
ＡＩＤＳ患者のリンパ球及び扁桃炎インフルエンザ（５
ｏｒｅ ｔｈｒｏａｔ １ｎｆｌｕｅｎｚａ ）や感染
性単核球症等の他のウィルスに感染したリンパ球に対す
るバクテリオシン処理後は、ＩＲＣ８Ｍｅｄｉｃａｌ
５ｃｉｅｎｃｅ。
ｏｒｅ ｔｈｒｏａｔ １ｎｆｌｕｅｎｚａ ）や感染
性単核球症等の他のウィルスに感染したリンパ球に対す
るバクテリオシン処理後は、ＩＲＣ８Ｍｅｄｉｃａｌ
５ｃｉｅｎｃｅ。
１１ 、２３６−２３７ （１９８３）に開示されたも
のに類似した技術を用いフローサイトメトリ（ｆｌｏ１
％Ｆ−ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ）によって測定することが
できる。
のに類似した技術を用いフローサイトメトリ（ｆｌｏ１
％Ｆ−ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ）によって測定することが
できる。
一般に、この方法は、細胞サイクルの特定の１時点にお
いて存在する細胞のパーセンテージを決定する為に特定
サンプルの各細胞のＤＮＡ含有量を分析することから成
る。バクテリオシンはＤＮＡを分解してヌクレオチド漏
出を起こすことにより感受性細胞に作用するので、バク
テリオシンの処理を受けてＤＮＡのほとんど存在しない
細胞の数の増加をフローサイトメトリによって確認する
ことができる。バクテリオシンに対して感受性の細胞で
あってバクテリオシンで処理したものは、その結果をヒ
ストグラムにプロットすると、一般にゝｐｒｅ−Ｇ、′
チャンネル内に蓄積するのが観察され、それは、これら
の細胞のＤＮＡが分解されることによるＤＮＡ含有量の
減少を示すものである。
いて存在する細胞のパーセンテージを決定する為に特定
サンプルの各細胞のＤＮＡ含有量を分析することから成
る。バクテリオシンはＤＮＡを分解してヌクレオチド漏
出を起こすことにより感受性細胞に作用するので、バク
テリオシンの処理を受けてＤＮＡのほとんど存在しない
細胞の数の増加をフローサイトメトリによって確認する
ことができる。バクテリオシンに対して感受性の細胞で
あってバクテリオシンで処理したものは、その結果をヒ
ストグラムにプロットすると、一般にゝｐｒｅ−Ｇ、′
チャンネル内に蓄積するのが観察され、それは、これら
の細胞のＤＮＡが分解されることによるＤＮＡ含有量の
減少を示すものである。
より詳細に記せば、以前（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウ
ィルス感染による）感染性単核症を保有すると診断され
た患者から取得したリンパ球をＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕ
ｅ（Ｐｈａｒｍａｃｌａ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ
ｓ、 Ｍｏｎｔｒｅａｌ ）によって分離し、ヨウ化プ
ロビジクムで染色した。分離されたリンパ球のサンプル
に、実施例１のように抽出し精製したコリシンＨＳＣ−
１０を加えた。
ィルス感染による）感染性単核症を保有すると診断され
た患者から取得したリンパ球をＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕ
ｅ（Ｐｈａｒｍａｃｌａ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ
ｓ、 Ｍｏｎｔｒｅａｌ ）によって分離し、ヨウ化プ
ロビジクムで染色した。分離されたリンパ球のサンプル
に、実施例１のように抽出し精製したコリシンＨＳＣ−
１０を加えた。
フローサイトメータ（ＦＣＭ ）中で生長相の細胞螢光
を測定した。バクテリオシンの加えられていないリンパ
球は、Ｇ０／Ｇ、相の細胞をスタンダードに対して調整
するのに使用した。測定された細胞の総数は数字による
データ出力により得られた。
を測定した。バクテリオシンの加えられていないリンパ
球は、Ｇ０／Ｇ、相の細胞をスタンダードに対して調整
するのに使用した。測定された細胞の総数は数字による
データ出力により得られた。
’ ｐｒｅ −Ｇ、 ’及び″Ｇ０／Ｇ、 ’相ニ存在
スｙｂｍｕｃｖ総数に対するパーセンテージはピーク下
の１Ｍｍ数の積分によって算出した。対照、すなわちバ
クテリオシンに晒されていないウィルス感染細胞、の細
胞数について変化したパーセンテージを引き、あるいは
加えた後最終的な結果が表される。
スｙｂｍｕｃｖ総数に対するパーセンテージはピーク下
の１Ｍｍ数の積分によって算出した。対照、すなわちバ
クテリオシンに晒されていないウィルス感染細胞、の細
胞数について変化したパーセンテージを引き、あるいは
加えた後最終的な結果が表される。
結果は第３表に示す。
第３表
細胞の検出された位置
患者＃ テスト４１ Ｐｒｅ−Ｇ、 ピーク
Ｇ、／Ｇ、 ５０２Ｍ 感受性１ １
＋３３ −１＝１ −３１ −２．０
＋２ ＋２４ ４１７ −２４ ＋０
．２ ＋２ ３ ＋１７ ＋１
１ −１８ ＋１．０ ＋４ ＋
２１ ＋３０ −２２ ＋１．３ ＋３
５ ＋１５ ＋１４ −１３
４６ ＋４ ６ ４４ ４１３
−５．１ ＋７．６ ＋５７＋０．５＋４．
６−０．８−ト０．３−６ ８ −４３
”７．５ ＋２−０ ＋１２ ±７
９ ＋１．３ −１．１ −０．３
−１．２ −７人の被験者に対して９例の試験が行
われた。
Ｇ、／Ｇ、 ５０２Ｍ 感受性１ １
＋３３ −１＝１ −３１ −２．０
＋２ ＋２４ ４１７ −２４ ＋０
．２ ＋２ ３ ＋１７ ＋１
１ −１８ ＋１．０ ＋４ ＋
２１ ＋３０ −２２ ＋１．３ ＋３
５ ＋１５ ＋１４ −１３
４６ ＋４ ６ ４４ ４１３
−５．１ ＋７．６ ＋５７＋０．５＋４．
６−０．８−ト０．３−６ ８ −４３
”７．５ ＋２−０ ＋１２ ±７
９ ＋１．３ −１．１ −０．３
−１．２ −７人の被験者に対して９例の試験が行
われた。
試験した７人の患者のうち６人はヒストグラムにＧ、／
Ｇ、相（コラム５参照）の細胞の減少が認められ、７人
のうち５人はｐｒｅ−Ｇ、相（＝ラム３参照）の細胞の
蓄積が認められた。従って要約すると、試験の７８％に
おいて患者のサンプルはコリシンＮ５Ｃ−１０に対する
感受性を示した。
Ｇ、相（コラム５参照）の細胞の減少が認められ、７人
のうち５人はｐｒｅ−Ｇ、相（＝ラム３参照）の細胞の
蓄積が認められた。従って要約すると、試験の７８％に
おいて患者のサンプルはコリシンＮ５Ｃ−１０に対する
感受性を示した。
実施例５
実施例３の第１セクシヨンの健常者で、臨床的にインフ
ルエンザの症状が認められた４人は、バクテリオシンに
対して一時的に陽性の反応を示すことがわかった。次い
でこれらの者に対し、ウィルス感染を示唆する２−５Ａ
シンセターゼ（Ｊ。
ルエンザの症状が認められた４人は、バクテリオシンに
対して一時的に陽性の反応を示すことがわかった。次い
でこれらの者に対し、ウィルス感染を示唆する２−５Ａ
シンセターゼ（Ｊ。
Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ、 Ｒｅａｄ
、 Ｓ、Ｅ、 ｅｔ ａｌ、 ５ｅｐｔ。
、 Ｓ、Ｅ、 ｅｔ ａｌ、 ５ｅｐｔ。
／８５）の存在につきテストしたところ陽性であった。
インフルエンザが回復するのを待った俵これらの患者の
バクテリオシンに対する感受性について再度テストした
ところ陰性であることがわかった。これらの結果から少
なくとも数種類のウィルス感染はバクテリオシンＨＳＣ
−１０の影響を受けるということを一応結論することが
できる。
バクテリオシンに対する感受性について再度テストした
ところ陰性であることがわかった。これらの結果から少
なくとも数種類のウィルス感染はバクテリオシンＨＳＣ
−１０の影響を受けるということを一応結論することが
できる。
Claims (35)
- （１）細胞の増殖を抑制し殺すことのできる量のバクテ
リオシンで細胞を処理することから成るウイルス感染非
悪性哺乳類細胞の増殖を抑制する方法。 - （２）前記ウイルス感染哺乳類細胞がＨＴＬＶ−ＩＩＩ
ウイルス及び感染性単核球症ウイルスから選択されるウ
イルスに感染した白血球である特許請求の範囲第（１）
項に記載の方法。 - （３）前記ウイルス感染細胞がＨＴＬＶ−ＩＩＩウイル
スに感染したＴ−細胞である特許請求の範囲第（１）項
に記載の方法。 - （４）前記ウイルス感染細胞がＨＴＬＶ−ＩＩＩウイル
スに感染したＴ＿４細胞である特許請求の範囲第（１）
項に記載の方法。 - （５）バクテリオシンがパイオシン、ビプリオシン、マ
イコバクテリオシン及びコリシンから選択される特許請
求の範囲第（２）項に記載の方法。 - （６）バクテリオシンがパイオシン及びコリシンから選
択される特許請求の範囲第（８）項に記載の方法。 - （７）バクテリオシンがパイオシン及びコリシンから選
択される特許請求の範囲第（４）項に記載の方法。 - （８）バクテリオシンがパイオシンＩ−４及びコリシン
ＨＳＣ−１０から選択される特許請求の範囲第（４）項
に記載の方法。 - （９）バクテリオシンがコリシンＨＳＣ−１０である特
許請求の範囲第（４）項に記載の方法。 - （１０）細胞が哺乳類の体内から得られた生物学的サン
プル中に存在し、且つ標的細胞当り凡そ１０＾−＾５ｎ
ｇ乃至１０＾−＾２ｎｇの範囲の量のバクテリオシンで
処理される特許請求の範囲第（１）項に記載の方法。 - （１１）バクテリオシンがＨＳＣ−１０であり、標的細
胞当り凡そ１０＾−＾４ｎｇ乃至１０＾−＾５ｎｇの範
囲の量投与される特許請求の範囲第（１０）項に記載の
方法。 - （１２）処理される感染非悪性哺乳類細胞が哺乳類の生
体に含まれるリンパ球から成る特許請求の範囲第（１）
項に記載の方法。 - （１３）生きた哺乳類に凡そ０．０１μｇ乃至１０μｇ
の用量でバクテリオシンを投与する特許請求の範囲第（
１１）項に記載の方法。 - （１４）バクテリオシンがコリシンＨＳＣ−１０であり
、凡そ０．１μｇ乃至１μｇの範囲の量を投与する特許
請求の範囲第（１３）項に記載の方法。 - （１５）薬学的に許容し得る希釈剤と混合した活性成分
としてのバクテリオシンから成り、ウイルス感染哺乳類
細胞の増殖を抑制し、殺すのに有用な医薬組成物。 - （１６）バクテリオシンがパイオシン、ビプリオシン、
マイコバクテリオシン及びコリシンから選択される特許
請求の範囲第（１５）項に記載の組成物。 - （１７）バクテリオシンがパイオシンＩ−４及びコリシ
ンＨＳＣ−１０から選択される特許請求の範囲第（１５
）項に記載の組成物。 - （１８）パイオシン、ビプリオシン、マイコバクテリオ
シン及びコリシンから選択される効果的な量のバクテリ
オシンを投与することから成る、ＡＩＤＳ感染及び感染
性単核球症ウイルス感染から選択される白血球ウイルス
感染を有する患者の治療方法。 - （１９）患者がＡＩＤＳ感染を有し、バクテリオシンが
コリシンＨＳＣ−１０である特許請求の範囲第（１８）
項に記載の方法。 - （２０）コリシンＨＳＣ−１０の投与量が標的細胞当り
凡そ１０＾−＾５ｎｇ乃至１０＾−＾２ｎｇの範囲の量
のバクテリオシンでウイルス感染リンパ球の処置を行な
うに十分な量である特許請求の範囲第（１９）項に記載
の方法。 - （２１）バクテリオシンの投与量が標的細胞当り凡そ１
０＾−＾４ｎｇ乃至１０＾−＾３ｎｇの範囲である特許
請求の範囲第（２０）項に記載の方法。 - （２２）ウイルス感染非悪性哺乳類細胞とバクテリオシ
ンとの相互作用によつて該細胞を検出する方法。 - （２３）バクテリオシンでの処置の後に細胞増殖抑制を
測定することによつてウイルス感染非悪性哺乳類細胞を
検出する方法。 - （２４）バクテリオシンでの処置の後の細胞死を表示す
ることによつてウイルス感染非悪性哺乳類細胞を検出す
る方法。 - （２５）バクテリオシンがパイオシン、ビプリオシン、
マイコバクテリオシン及びコリシンから選択される特許
請求の範囲第（２２）、（２３）又は（２４）項に記載
の方法。 - （２６）ウイルス感染非悪性哺乳類細胞がリンパ球から
成る特許請求の範囲第（２２）、（２３）又は（２４）
項に記載の方法。 - （２７）細胞増殖を結合測定法によつて測定する特許請
求の範囲第（２３）項に記載の方法。 - （２８）細胞増殖を細胞による放射活性成分の摂取量を
測ることによつて測定する特許請求の範囲第（２３）項
に記載の方法。 - （２９）細胞死をフロー血球計算（ｆｌｏｗ−ｃｙｔｏ
ｍｅｔｒｙ）によって表示する特許請求の範囲第（２４
）項に記載の方法。 - （３０）ウイルス感染非悪性哺乳類細胞の検出用試薬と
してのバクテリオシン。 - （３１）薬学的に許容される液状担体を伴つたバクテリ
オシンを有するウイルス感染非悪性哺乳類細胞のｉｎ
ｖｉｔｒｏ診断用液状調製品。 - （３２）バクテリオシンの水懸濁液又は溶液を有する特
許請求の範囲第（３１）項に記載の調製品。 - （３３）懸濁液又は溶液が緩衝液である特許請求の範囲
第（３２）項に記載の調製品。 - （３４）緩衝液がトリス緩衝液又はリン酸塩緩衝生理食
塩水である特許請求の範囲第（３３）項に記載の調製品
。 - （３５）バクテリオシンがコリシンＨＳＣ−１０である
特許請求の範囲第（３２）項に記載の調製品。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US86825086A | 1986-05-28 | 1986-05-28 | |
| US868250 | 1986-05-28 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6379837A true JPS6379837A (ja) | 1988-04-09 |
Family
ID=25351316
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62130040A Pending JPS6379837A (ja) | 1986-05-28 | 1987-05-28 | 抗ウイルス処置に用いるバクテリオシン及びその組成物 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0247873A3 (ja) |
| JP (1) | JPS6379837A (ja) |
| AU (1) | AU7360387A (ja) |
| DK (1) | DK273087A (ja) |
| FI (1) | FI872363A (ja) |
| IL (1) | IL82627A0 (ja) |
| MC (1) | MC1822A1 (ja) |
| NO (1) | NO872223L (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63290824A (ja) * | 1987-05-22 | 1988-11-28 | Sumitomo Chem Co Ltd | ウイルス感染症治療剤 |
| IL88480A0 (en) * | 1987-11-27 | 1989-06-30 | Univ Toronto | Proteinaceous compositions |
| CN1314806C (zh) * | 2005-01-14 | 2007-05-09 | 四川大学 | 小型化抗eb病毒肿瘤多肽及其应用与制备方法 |
| EP4125970A4 (en) * | 2020-04-03 | 2024-04-10 | Blis Technologies Limited | ANTIVIRAL TREATMENT INCLUDING PROBIOTIC PRODUCTS CONTAINING BLIS |
-
1987
- 1987-05-22 IL IL82627A patent/IL82627A0/xx unknown
- 1987-05-27 FI FI872363A patent/FI872363A/fi not_active IP Right Cessation
- 1987-05-27 MC MC871890A patent/MC1822A1/xx unknown
- 1987-05-27 NO NO872223A patent/NO872223L/no unknown
- 1987-05-27 DK DK273087A patent/DK273087A/da not_active Application Discontinuation
- 1987-05-28 AU AU73603/87A patent/AU7360387A/en not_active Abandoned
- 1987-05-28 EP EP87304731A patent/EP0247873A3/en not_active Withdrawn
- 1987-05-28 JP JP62130040A patent/JPS6379837A/ja active Pending
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|---|---|
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| FI872363A (fi) | 1987-11-29 |
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| AU7360387A (en) | 1987-12-03 |
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| EP0247873A2 (en) | 1987-12-02 |
| MC1822A1 (fr) | 1988-03-18 |
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