JPS6363393A - 酵素によるβ−ラクタム類の製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はβ−ラクタム抗生物質の製造方法に関するもの
である。更に詳しくは、ペニシリンおよびセファロスポ
リン抗生物質の酵素（＝よる製造方法に関するものであ
る。イソペニシリンＮシンセターゼ酵素（［シクラーゼ
（ｃｙｃｌａｓｅ、）　Ｊ　ＩＰＮＳ）は、２−（Ｌ−
α−アミノアジポイル’１−Ｌ−システイニル−Ｄ−バ
リンをインペニシリンＮに環化することができることで
よく知られている。Ｊ。

Ｅ、ボールドワイン（Ｂａｌｄｗｉｎ）らのジャーナル
・オブ・ケミカル・ソサイアテイー、ケミカル・コミュ
ニケーション（Ｊ、Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、、　Ｃｈｅｍ
、　Ｃｏｍｍｕｎ）はセファム（ｃｅｐｈａｍ　）環骨
−を形成させることができると開示されている。

本発明は、式（■）： Ｃｏ２Ｈ 〔式中、Ｑは式： （ここで、ＲとＲは独立して水素またはＣ，−Ｃ４アル
キシであるか、あるいはＲとＲ１のどちらか一方が水素
またはＣ，−Ｃ４アルキルであり、他方がＣ０−％アル
コキシ、Ｃ２−Ｃ４アルケニルまたはアレニルである）
で示される基を表わす〕 で示されるβ−ラクタムの製造方法を提供するものであ
る。本発明方法は、ｐＨ約６〜約９の水性媒質中で、酸
素、第一鉄イオンおよびアスコルビン酸の存在下、式（
■）： （ここで、ＲおよびＲ工は前記の定義と同意義である）
で示される基を表わす〕 で示されるジペプチドを、イソペニシリンＮシンセター
ゼと接触させることからなる。

本明細書で使用するＣニーＣ４アルキルという用語は、
メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブ
チル、５ｅｃ−ブチル、インブチルおよびｔ−ブチルを
意味し、Ｃニー０３アルコキシは、メトキシ、エトキシ
、ｎ−プロポキシおよびインプロポキシを意味している
。アレニルという用語ハ、プロパンジエン基：　ＣＨ２
＝Ｃ＜Ｈ−を意味している。

本発明方法に使用されるイソペニシリンＮ・シンセター
ゼは、セファロスポリウム・アクレモニウム（Ｃｅｐｈ
ａｌｏｓｐｏｒｉｕｍ　ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ　）　Ａ
ＴＣＣ４８２７２およびＡＴＣＣ３６２２５の如きＣ，
アクレモニウム、ヘニシリウム・クリソゲナム（Ｐｅｎ
ｉｃｉｌｌｉｕｍｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ　）、アスペ
ルギルス・ニデユランス（Ａｓｐｅｒｇｉ　１１ｕｓ　
ｎ１ｄｕｌａｎｓ　）、ストレプトマイセス・クラブリ
ゲ／Ｌ／　ｘ　（Ｓ　ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｃｌａ
ｖｕｌｉｇｅｒｕｓ　）　ＡＴＣＣ２７０６４およびス
トレプトマイセス・リパニー（Ｓ、　１ｉｐａｎｉｉ　
）　ＡＴＣＣ２７３５７等の多数の供給源から入手する
ことができる。この酵素は、半端製状態の細胞不含抽出
物として、または好ましくは、例えばパンダ（Ｐａｎｇ
）らのバイオケム・ジャーナル（Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｊ−
）　（１９８４）、２２２．７８９−７９５、およびＪ
、Ｅ、ボルドウィンらのＦＥＢＳレター（ＦＥＢＳＬｅ
ｔｔｅｒ　）、１９８５．１８８．２５３に開示の如く
して製造される精製酵素の形で使用される。この酵素の
好ましい供給源は、Ｃ，アクレモニウムである。

式（ＩＩ）で示される基質ジペプチドは、既知の共役反
応（カップリング）法によって製造することができる。

例えば、Ｓ−保護・カルボキシル−保護Ｌ−システイニ
ルーＤ−バリンあるいはＬ−システイニル−Ｄ−修飾バ
リンをＥＥＤＱ法によって、３−（保護−カルボキシル
）フェニル酢酸ヲ用いてアシル化した後、保護基を取り
除くことによって製造される。

「修飾バリン」という用語は、本明細書では、システィ
ンとカップリングすることにより式（ＩＩ）で示される
基質ジペプチドの前駆体を形成することのできる式（■
）： ■ Ｈ２Ｎ−ＣＨ−ＣＨ−Ｒ，（ＩＩＩ） Ｏ２Ｈ で示される種々のアミノ酸を表わすために便宜的に使用
されるものである。これらの修飾バリン・アミノ酸類は
、天然型トリペプチドのバーリンに取って代わることが
でき、広い意味でバリンの修飾形を表わしている。

ジペプチドの製造に使用される修飾バリンの例トシては
、Ｄ−インロイシン、Ｄ−ノルバリン、Ｄ−セリン・Ｏ
−メチルエーテル、Ｄ−セリン・〇−エチルエーテル、
２−アミノ−３−メトキシ酪酸、２−アミノ−３−イン
プロポキシ酪酸、２−アミノ−４，５−へキサジエン酸
、２−アミノ−３−メチル−４，５−へキサジエン酸、
２−アミノ酪酸、２−アミノ−３−メチル吉草酸、２−
アミ／−３−二チル吉草酸、２−アミノ−３−メチルペ
ンタ−４−エノアートおよび２−アミノ−３−エチルペ
ンタ−４−二／アートがある。

前記の「修飾バリン」は、本明細書において以下の製造
例に示すように既知の方法、またはその変法によって製
造される。

式（ＩＩ）のジペプチド基質は、一般に濃度的０．１ｍ
Ｍ〜約５ｍＭの範囲で本発明の方法に使用される。基質
は、比較的純度の高い例えば酵素を阻害する重金属類に
汚染されていないものを用いるへきである。

Ｉ　Ｐ　Ｎ　Ｓ酵素を基質に対し大過剰量で使用すれば
、最良の効果が得られる。本発明方法で使用される酵素
の活性は、上記のパンダらの検定法によつて測定できる
。その活性は、天然のトリペプチシステイニルーＤ−バ
リンメ分間にイソペニシリンＮ、１μｍｏｌ　　に変換
するのに必要な酵素量を活性の１単位（１ｕｎｉｔ　）
とする単位で表わされる。

本発明の方法は、第一鉄イオンおよびアスコルビン酸（
好ましくはＬ−アスコルビン酸）の存在下で実施する。

ｐＨによって、アスコルビン酸はアスコルビン酸塩に変
換され得る。これらの共同因子（コファクター）によっ
て酵素活性は増強される。第一鉄イオンは、酵素を活性
化するのに必要である最小量を使用する。通常、第一鉄
イオンの濃度は約５０μＭ〜約０．２　ｍＭの範囲であ
る。酵素の精製度が高い程、最良の酵素活性を得るのに
必要な第一鉄イオンは少量でよい。第一鉄イオンと一緒
に使用されるし一アスコルビン酸は、一般にＦｅ２＋濃
度とほぼ同濃度で使用するが、それよりも高い濃度で使
用してもよい。第一鉄イオンは、塩類、即ち硫酸第一鉄
、塩化第一鉄、炭酸第一鉄、あるいはその他の適当な塩
から供給される。

本方法は、酸素の存在下で実施する。小規模、例えば実
験室規模では、開放容器により本方法を行なうことで、
十分な量の酸素を供給することができる。大規模、特に
大過剰の酵素を使用する時は、インキュベーション混合
物中に空気または酸素を通気させることにより酸素を供
給することができる。この工程を行う間中、インキュベ
ーション混合物を、撹拌または振盪により混合する。

本方法では、過酸化水素が発生する。従って酵素、基質
または生成物にとって有害となり得る過酸化物が過剰に
ならないように、生肝カタラーゼのようなカタラーゼを
インキュベーション混合物に加えることができる。

本方法は、温度約２０℃〜約４０℃で実施するが、約り
５℃〜約３０℃で実施するのか好ましい。Ｎ−（３−カ
ルボキシフェニルアセチル）−Ｌ−システイニルーＤ−
バリン基質を用い、温度約２７℃で実施することで、最
良の収率を得た。

本発明の方法は、ｐＨ約６〜約９で実施するが、ｐＨ約
７．５〜約８．５で行なうのが好ましい。炭酸アンモニ
ウム、トリス・バッファーまたはＭＯＰＳバッファー（
３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸）のような
バッファーを用いることにより、インキュベーション混
合物を所望のｐＨに維持することができる。

本方法においては、適当な還元剤をインキュベーション
混合物に加える。即ち、本方法は酸化反応であるので、
還元剤はシステイニルのスルフヒドリル基によるジスル
フィドの形成を妨げ、あるいは遅延させる役目をすると
思われるからである。更に、還元剤には第一鉄イオンか
ら第二鉄イオンへの酸化反応を阻害する効果もある。第
二鉄イオンは、Ｉ　ＰＮＳ刺激剤作用において第一鉄イ
オンよりもはるかに劣っている。

ペニシリンの製造は、高純度の基質と共に過剰に精製酵
素を使用すれば、前記の製造条件下で急速に進行する。

実験室規模では、本方法は約１０分〜約２時間で実施す
ることができるが、酵素と基質との大規模インキュベー
ションでは、それよりも若干長い時間を要するだろう。

アセトンあるいはエチルアルコールの如き溶媒をインキ
ュベーション混合物に添加することにより反応工程を終
了させる。沈殿したタンパク質を、例えば遠心分離によ
って分離し、生成物を常法により上澄液から単離する。

生成物を含有する水相を凍結乾燥し、逆相オクタデシル
ンランＨＰＬＣの如きクロマトグラフィーにかければ、
生成物を単離することができる。別法として、タンパク
質を分離した後に、インキュベーション混合物を抽出す
ることによって生成物ペニシリンを単離することもでき
る。

本発明方法の好ましい態様では、Ｎ−（３−カルボキシ
フェニルアセチル）−Ｌ−システイニル−Ｄ−バリンを
過剰の精製Ｉ　ＰＮＳ酵素とインキュベートＬ、て６−
（３−カルボキシフェニルアセチルアミ／）−２，２−
ジメチルペナム−３−カルボン酸を形成させる。

本発明で得られるペニシリンの例としては、以下のもの
かある： ６−（３−カルポキシフェニルアセチルアミノ）−２α
−ビニル−２β−メチルペナム−３−カルボン酸、 ６−（３−カルボキシフェニルアセチルアミ／）−２，
２−ジエチル−ペナム−３−カルボン酸、６−（３−カ
ルボキシフェニルアセチルアミノ）−２ｄ−メトキシ−
２−β−メチルペナム−３−カルボン酸、 ６−（３−カルボキシフェニルアセチルアミノ）−２ｃ
ｔ−メトキシ−ペナム−３−カルボン酸、６−（３−カ
ルボキシフェニルアセチルアミノ）−２α−エトキシペ
ナム−３−カルボン酸、６−（３−カルボキシフェニル
アセチルアミノ）−２α−アレニルペナム−３−カルボ
ン酸、６−（３−カルボキシフェニルアセチルアミノ）
−２Ｃｔ−アレニル−２β−メチルペナム−３−カルボ
ン酸および ６−（３−カルボキシフェニルアセチルアミ）−２α−
メトキシ−２β−（ｎ−プロピル）ペナム−３−カルボ
ン酸。

本発明の第１の目的は、式： （式中、ＲおよびＲｏは独立して水素またはＣ，−Ｃ４
アルキルであるか、あるいはＲとＲ１のどちらか一方は
水素、またはＣニー０４アルキルであり、他方はＣ１−
０３アルコキシ、Ｃ２−ｃ４アルケニルまたはアレニル
である） で示される６−（３−カルボキシフェニルアセチルアミ
ノ）ペナム−３−カルボン酸の製造方法を提供すること
である。本方法は、ｐＨ約６〜約９の水性媒質中で、酸
素、第一鉄イオンおよびアスコルビン酸の存在下、式（
ＩＩ）　−　１　：Ｏ２Ｈ （式中、ＲおよびＲｏは前記の定義と同意義）で示され
るジペプチドと、酵素イソペニシリンＮシンセターゼと
を接触させることからなる。

本発明の第２の目的は、以下の反応式に示すように、Ｎ
−（３−カルボキシフェニルアセチル）−Ｌ−システイ
ニル−Ｄ−β，γ−ジデヒドロバリンをＩ　ＰＮＳ酵素
とインキュベートし、７−（３−カルボキシフェニルア
セチルアミノ）−３−エクソメチレンセファムー４ーカ
ルボン酸を製造することである。

ド ＣＯ。Ｈ 本発明の方法で得られる３−エクソメチレンセファムー
４ーカルボン酸は、既知である３−アルコキシ−３−セ
フェムおよび３−ハロゲン−３−セフェム（　ｃｅｐｈ
ｅｍ骨格）抗生物質における有用な中間物質である。例
えば本発明の生成物を、エステル化してカルボキシル基
を保護し、得られたジエステル生成物を米国特許第３，
６　９　７，５１５号に記載の方法に従ってＮ−説アシ
ル化し、次いで脱エステル化スると、３−エキソメチレ
ンセファム骨格化合物を得ることができる。この骨格化
合物は、米国特許第３，９　３　２，３　９　３号に開
示されており、式：で示される化合物である。

３−エキソメチレンセファム骨格化合物は、米国特許第
３，９１７，５　８　８号に記載の方法によって３−メ
トキシ−３−セフェム骨格抗生物質に変換させることが
でき、更に米国特許第３．９　２　５，３　７　２号に
記載の方法に従えば、３−ハロゲン−３−セフェム骨格
抗生物質に変換させることができる。

あるいは、本発明方法の生成物を３−ハロゲン−３−セ
フェムまたは３−メトキシ−３−セフエム誘導体に変換
させた後、Ｎ−説アシル化することで、既知である３−
ハロゲン−３−セフェムと３−メトキシ−３−セフェム
骨格化合物とすることもできる。後者の化合物を再度ア
シル化すると所望の７β−アシルアミノ誘導体を得るこ
とができる。

式（Ｉ）で示される２−ビニル−置換ペナム−３−カル
ボン酸は、前記の抗生物質とは別の６−アシルアミノペ
ナム抗生物質に変換させることができる。例えば２−ビ
ニル化合物である式（Ｉ）の化合物ヲエステル化して３
−カルボキシル基と３−７　カルボキシフェニル基を保
護し、得られたジエステル化合物を既知の方法により脱
アシル化することで６−アミノ−２−ビニルペナム−３
−カルボン酸エステルとすることができる。このペナム
骨格エステル化合物を所望のカルボン酸を用いてＮ−７
シル化シ、得られたＮ−アシル化エステル生成物を脱エ
ステル化することで、抗生物質を得ることかできる。例
えば６−アミ／−２−ビニルペナムエステルヲ、アミノ
保護−Ｄ−フェニルグリシンの活性カルボキシル誘導体
を用いてアシル化し、アミノ保護基とカルボキシルエス
テル基ヲ取り除くと、６β−（Ｄ−フェニルグリシルア
ミノ）−２−ビニルペナム−３−カルボン酸を得ること
ができる。通常、６−アミノ−２−ビニルペナム−３−
カルボン酸エステルのＮ−アシル化は、６−アミノペニ
シラン酸またはそのエステル化合物をＮ−アシル化する
のに用いられるアシル化法を用いて実施される。

式（Ｉ）で示される２−アルコキシペナムは、メトキシ
ル化α−アミノアルカン酸とＳ−保１Ｎ−（３−カルボ
キシフェニルアセチル）−Ｌ−システィンとから製造さ
れるジペプチド（式（ＩＩ）　−１）から得られる。こ
のようなジペプチドは、Ｄ−セリン・Ｏ−メチルエーテ
ル、Ｄ−セリン・０−エチルエーテル、２Ｒ，３Ｒ−２
−アミノ−３−メトキシ酪酸、２Ｒ，３Ｒ−２−アミ／
−３−メトキシ吉草酸などのメトキシル化アルカン酸か
う製造される。このようなアミノ酸は、欧州特許出願第
８５３０５９１１．１（ＥＰＯ公開番号０，１７４，１
２９　’）において開示されている。例えば、２−アミ
ノ−３−メトキシ酪酸のベンジルエステル化合物を、２
−エトキシ−Ｎ−エトキシカルボニル−１，２−ジヒド
ロキノリン（ＥＥＤＱ）　　を用いて、アミノ−保護・
５−（４−メトキシベンジル）システィンとカップリン
グさせることで、アミノ−保護エステル・ジペプチドを
製造する。アミノ保護基ヲ取す除いて、得られたシステ
ィンの遊離アミ７基を３−（保護−カルボキシ）フェニ
ル酢酸を用いてアシル化する。その保護基を取り除くこ
とで、Ｒがメチルであり、Ｒｏがメトキシである式（Ｉ
ｔ）　−１で示される基質が得られる。

あるいは、システィンのＳ−保護エステル化合物を既知
の方法により３−（保護−力ルボキシ）フェニル酢酸を
用いてアシル化し、システィンのカルボキシル基の保護
基を取り除いて得られた酸を、ＥＥＤＱ（２−エトキシ
−Ｎ−エトキシ力ルボニ／Ｌ／−１，２−ジヒドロキノ
リン）を介するカップリングによって、アルコキシル化
α−アミノアルカン酸エステルとカップリングさせる。

Ｒ工がアレニルである式（ＩＩ）　−１で示される化合
物は、アミノジエン酸エステル、例えば２−アミノ−４
，５−へキサジエン酸・ジフェニルメチルエステルを用
いて前記と同様の方法により製造される。

以下の製造例および実施例において、本発明を更に詳し
く説明する。

’ＪＪａ　例Ｉ　　Ｎ　−（３−カルボキシフェニルア
セチル）−Ｌ−システイニル−Ｄ−バリンＡ、イソーフ
タル酸・モノベンジルエステルイソフタル酸（１１，２
，９１０，１モル）のメチルアルコール（２００ｍＱ）
と水（１０ｍＱ）との懸濁液に、水酸化カリウム（１１
，２，ｐ、　０．２モル）のメチルアルコール溶液（１
００ｍｆｆｉ）を加え、この混合物を室温で一晩撹拌し
た。減圧下にて溶媒を取り除き、ＤＭＦ　（２５０ｍＱ
）とベンジルプロミド（１３，５ｍＬ１．１ｇ）を加え
た。この混合物を１００℃で２時間加熱し、重炭酸すｌ
−ＩＪウム（１０ｇ）の水溶液（５００ｍＱ）に注加し
、酢酸エチルで抽出した。水層を濃塩酸を用いて酸性に
して酢酸エチルで抽出した後、沈殿したインフタル酸を
戸取した。酢酸エチル層を塩水（ブライン）で洗浄し、
乾燥（Ｎａ２Ｓ０４）して蒸発させた。得られた残留物
（モノベンジルエステル生成物とイン−フタル酸）をシ
リカゲルクロマトグラフィーにかけ、モノベンジルエス
テル生成物（３，７３，９，１５％）を得た。

’ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ　、　ＣＤＣ１３）　：δ５
．４２　（２Ｈ。

ｓ）、７．３０−７．５０（５Ｈ，ｍ）、７．５９（Ｉ
Ｈ，ｔ、Ｊ＝７．７Ｈｚ）、８．３２（２Ｈ，ｔ、Ｊ＝
４．５Ｈｚ）、８．８１（ＩＨ，ｓ）。

ＩＲ（ＣＨＣ１３）：２７００−３４００（ＣＯＯＨ）
、１７２０（ｓ）、１７００（ｓ）傷−１゜ Ｂ、　　２，２．２−　トリクロロエチル・３−（ベン
ジルオキシカルボニル）フェニルアセテートイソ−フタ
ル酸・モノベンジルエステル（２，６ｙ）、乾燥ベンゼ
ン（８ｍｆｆｉ）および純品チオニル・クロライド（２
，６ｍｆ、３当量）の混合物を８０℃で１時間加熱した
。減圧下にて溶媒を取り除き、次いで未反応の微量のチ
オニル・クロライドを除去するために、乾燥ベンゼン（
１０ｍＱ）を再び加え、その溶媒を減圧下にて除去した
。得られた酸クロライドを乾燥ベンゼン（２，０ｍｆｆ
１）に溶解し、この溶液を０℃においてジアゾメタン（
過剰量）のエーテル溶液に注加した。この溶液を０℃に
て２０分間撹拌した後、室温で１晩撹拌した。その後、
減圧下にて溶媒と余剰のジアゾメタンを除去した。

得られたジアゾケトンに２．２．２−トリクロロエタノ
ール（１２ｍＱ）を加え、５０〜６０℃に温められた溶
液に酸化銀（０，３９）を加えた。窒素を放出させ、２
時間後に酸化銀（０，３，９）を追加し、３０分間加温
した。更に酸化銀（０，２Ｆ　）を加えた後、３０分間
後には、ジアゾケトンは反応し尽していた（ＴＬＣによ
り確認）。得られた混合物をクロロホルムを用いて希釈
し、活性炭処理して濾過し、蒸発させて濃縮した。残留
物をフラッシュクロマトグラフィー（ｆｌａｓｈ　ｃｈ
ｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　）　（ベンゼン／石油エー
テル（１：１））にかけて精製した。これにより、２，
２．２−トリクロロエチルエステル生成物（３，６，ｐ
、収率８８％）を収得した。使用したジアゾメタンは、
Ｎ−ニトロンメチル尿素より入手した。

’ＨＮＭＲ（ＣＤＣＩ３　、３００ＭＨｚ　）　’δ３
．８３　Ｃ２Ｈ。

ｓ）、４．７６（２Ｈ，ｓ）、５．３７（２Ｈ，ｓ）、
７．３０−７．６０（７Ｈ，ｍ）、８．０４（２Ｈ，ｍ
）。

ＩＲ（ＣＨＣ１３）：３０２０（ｍ）、２９６０（ｗ）
、１７５５（ｓ）、１７４０（ｓ）、１６１０（Ｗ）、
１５９０（ｗ）、１５００（ｗ）、１４５０（ｍ）、１
３７５（ｍ）、１２８０（ｓ）ＣＭ−１゜ＭＳ　ｍ／ｅ
　：　９１　（１００）　、　２２５　［２２、Ｍ−（
Ｃ１３ＣＨ２０Ｃ（０））、２９３［４５，Ｍ−Ｐｈ（
Ｈ２Ｏ））、２９５（４２）　、２９７（１４）　、４
００（７，７、Ｍ＋３５Ｃ１３）　、４０２Ｃ６，９Ｍ
＋−２）　、　４０４　Ｃ２，８Ｍモ４）、。

Ｃ，３−（ベンジルオキシカルボニル）フェニル酢酸 前記の如くに製造した２、２．２−）リクロロエチルエ
ステル生成物（３，６，９）のテトラヒドロ７ラン浴液
（３６ｍｌりを室温にて高速撹拌しながら、その中に亜
鉛末（７，２ｇ）を加えた後、Ｉ　Ｍ　ＩＪン酸二水素
カリウム（ＫＨ２ＰＯ４）水溶液（７，２ｎ＋ｅ）を加
えた。１５分後のＴＬＣては、反応が起こっていなかっ
たので、更に亜鉛末（７，２，ｐ）を加えた。数分後に
、温度が上昇した。３０分後に亜鉛末を濾過して取り除
き、減圧下にて溶媒を除去した。残留物をクロロホルム
に溶解シ、２ＮＨＣｌ（（２０ｍＡ’）を加え、得られ
た混合物を１時間撹拌した。クロロホルム層を分取し、
水層をクロロホルムで抽出した。抽出液を先のクロロホ
ルム層と一諸にし、塩水で洗浄して硫酸ナトリウムで乾
燥し、蒸発させた。残留物をフラッンユクロマトグラフ
イ−（酢酸エチル）にかけて精製し、３−（ベンジルオ
キシカルボニル）フェニル酢酸（８６９■、収率３７％
）を得た。

融点：９５〜９６°（エーテルから再結晶）元素分析：
Ｃ１６Ｈ１４ｏ４ 理論値　Ｃ，７１，１０ｉＨ，５，２２実測値　Ｃ，’
７１．２２；Ｈ，５，２７１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、
ＣＤＣ１３）：δ３．７２　（２Ｈ。

ｓ）、５．３７（２Ｈ，ｓ）、７．３０−７．５５（７
Ｈ，ｍ）、７．９８−８．０９（２Ｈ，ｍ）、。

ＭＳ　ｍ／ｅ：９１（３４）、１６３［１００，Ｍ−Ｐ
ｈ（Ｈ２Ｏ））、２５２（６，７，Ｍ−Ｈ２Ｏ）、２７
０（Ｍ＋、１０）。

ＩＲ（ＣＨＣＩ３）：２８００〜３４００（ＣＯＯＨ）
、１７１５（Ｃ＝Ｏ）１　つ り、５−（４−メトキシベンジル）−Ｌ−システイニル
−Ｄ−バリン・ジフェニルメチルエステルのアシル化 ３−（ベンジルオキシカルボニル）フェニル酢酸（４２
７！１９．１．５８ミリモル）、ＥＥＤＱ（３９０〜、
１当量）および５−（４−メトキシベンジル）−Ｌ−シ
ステイニル−Ｄ−バリン・ベンズヒドリルエステル（１
当量）との乾燥塩化メチレン（ｔｏｍＱ）中温合物を室
温で１晩撹拌した。溶媒を留去し、残留物を酢酸エチル
（８０ｍＱ）に溶解した。得られた溶液を重炭酸す）　
ＩＪウム水溶液、塩水、クエン酸（１０％）水溶液、更
に再度塩水で洗浄し、硫酸すｌ−ＩＪウムにより乾燥し
た。溶媒を留去して残留物をフラッシュクロマトグラフ
ィー（２０％酢酸エチル−石油エーテル）にかけて精製
し、Ｎ−４３−（ベンジルオキシカルボニル）フェニル
アセチル）−３−（４−メトキシベンジル）−Ｌ−シス
テイニル−Ｄ−バリン・ジフェニルメチルエステル（１
，００５ｐ）を得た。

融点：約り３６℃〜約１３７℃（ジエチルエーテル） 元素分析”４５Ｈ４６Ｎ２０７Ｓ 理論値　Ｃ，７１，２２；Ｈ，６，１１ｉＮ、３．６９
実測値　Ｃ，７１，１２，Ｈ，６，０２ｉＮ、３．５９
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣ１３）（３００ＭＨｚ）：６０．７
３および０．８５ゼ゛悲ふ、　３Ｈ，ｄ　、　Ｊ＝６．
９Ｈｚ）、　２．２３　（ＩＨ，ｍ）。

２．６２（ＬＨ，ｄｄ、Ｊ＝１４．０．７．５Ｈｚ）、
２．８２（ＬＨ，ｄｄ、Ｊ＝１４．０，５．４Ｈｚ）、
３．５６（２Ｈ，ｓ）、３．６９（２Ｈ。

ｓ）、３．７６（３Ｈ，ｓ）、４．５２（ＩＨ，ｄｄ、
Ｊ＝７．５，５．４Ｈｚ）、４．６３（ＩＨ，ｄｄ、Ｊ
＝８．５．４．４Ｈｚ）、５．３５（２Ｈ）、６．９１
（ＬＨ，ｓ）、７．２８〜７．４８（１７Ｈ，ｒｎ）、
７．９６（２Ｈ，ｍ）。

ＩＲ（ＣＨＣ１３）：３４００．３０１０，２９６０，
１７２０゜１６７０．１６１０．１５１５，１５００α
−１゜ＭＳニア５８（Ｍ　）。

３保護されたＮ−アシル化生成物（１５Ｃ１’１０．２
ミリモル）を塩化メチレン（３耐）に溶解し、アニソー
ル（０，３６ｍＱ）を加えた。得られた溶液を水浴中に
て冷却し、０．５Ｍ塩化アルミニウムのニトロメタン溶
液（２ｍｅ）を加えた。この混合物を０℃にて２時間撹
拌した後、室温にて３時間撹拌した。得られた反応混合
物を酢酸エチルで希釈し、ＩＮ塩酸で洗浄して５％重炭
酸す）　ＩＪウム水溶液で抽出した。抽出液を酢酸エチ
ルで洗浄して塩酸を用いて酸性にし、脱保護されたペプ
チドを酢酸エチルを用いて抽出した。抽出液を塩水で洗
浄して乾燥し、蒸発させることで、標題化合物（７０１
！ｔｇ、収率９３％）を得た。

融点（分解点）：約り９６℃〜約１９７℃（アセトン） 元素分析：Ｃ１７Ｈ２２Ｎ２０６Ｓ 理論値　Ｃ、５３，３９逼Ｈ，５，８０ｉＮ、７．３２
実測値　Ｃ、，５，３，５５・ｉ）ｌ、！５．８２　；
Ｎ、７．２３１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤ３０Ｄ）
：δ０．８９および０９４（各々３Ｈ，ｄ、Ｊ＝６．９
Ｈ２）、２．１５（ＩＨ，ｍ）　。

２８１　　および２．９０　＜各々ＬＨ，ｄｄ、Ｊ＝１
４．０．６．５Ｈｚ）　、３．６７（２Ｈ，ｓ）　、４
．３１（ＩＨ，ｄ、　Ｊ＝５．４Ｈｚ）。

４．５８（ＬＨ，ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ）、７．４２（Ｉ
Ｈ，ｔ、Ｊ＝７．７Ｈｚ）、７．５６（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝
７．７Ｈｚ）、７．９０（ＩＨ，ｄ。

Ｊ＝７．７Ｈｚ）、８．０１（ＬＨ，ｓ）。

ＭＳ（ＦＡＢ　ＥＸグリセロール／シュウ酸）ｍ／ｅ：
３８３（Ｍ＋−１）。

ＩＲ（ＫＢｒ）：３３００．２８００〜３３００　（ブ
ロード）、２６８０（ｗ）、２５６０（ｗ）、１７３０
．１７００．１６５０．１６０５０−１゜ 製ａ例２　　Ｄ−ジフェニルメチル・２−アミ／ヘキサ
ン−４，５−シェフエート・ｐ−トルエンスルホネート Ｎ−［（１，１−ジメチルエトキシ）カルボニル〕−３
−ヨードーＤ−アラニン・ジフェニルメチルエステル（
４８’１■）、トリフェニル・プロパルギル錫（７８０
ＭＦＩ’）およびアゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢ
Ｎ）（０，１５当量）を乾燥脱気ベンゼン（２ｍｅ）に
溶解し、得られた溶液を窒素雰囲気下８０℃にて１８時
間還流させた。調製したてのいくらかの錫試薬（１当量
）とＡＩＢＮ（Ｎｏ■）とを４，８および１２時間後に
加えた。反応混合物を冷部後、蒸発乾固させ、得られた
残渣をアセトニトリル中に入れ、ヘキサンで洗浄した。

次いで、蒸発して油状の残留物を得、これをフラッシュ
シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（ジクロロ
メタンにより溶離）にかけ、石油エーテル−２４７■）
（融点５３※を収得した。

無水ｐ−）ルエンスルホン酸（１５＃）のエタノール溶
液を、−５℃〜−１０℃の間にてアミノ酸エステル（３
４■）のエーテル溶液に徐々に（１５分間）加えた。得
られた溶液をアルゴン雰囲気上室温で３時間撹拌した後
、蒸発乾固させ、標題化℃ 合物（４０１９）（融点１２８〜１３０Ａ）を収得した
。

製造例３　ｏ−メチル−Ｄ−セリン・ベンジルエステル
・塩酸塩 Ａ、Ｎ−ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル−Ｄ　
−セリン・ベンジルエステル Ｎ−ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル−Ｄ−セリ
ン（５，３９ｆｆＺ、２．００ミリモル）〔ウェイガン
トおよびフンガー（Ｗａｙｇａｎｄ　ａｎｄ　Ｈｕｎｇ
ｅｒ　）のベリクチ（Ｂｅｒｉｃｈｔｅ　）、１９６２
、拉（１）、ｌに記載の方法により製造し、収率６０％
で融点９６〜９７℃の無色の固形物を得た〕をメタノー
ルに溶解し、炭酸カリウム（１３８循、１．００ミリモ
ル）の水溶液（２ｍＱ）で処理した。この混合物を蒸発
乾固し、それにＮ、Ｎ−ジメチル−ホルムアミド（ＤＭ
Ｆ）を加えて再蒸発させ（２Ｘ２ｍＱ）、次いで得られ
た固形状残渣を温ＤＭＦ　（乾燥）に溶解してベンジル
・プロミド（２４８μ敷２．１　　ミリモル）を加え、
この溶液を密閉フラスコ（乾燥）中にて５０℃で１時間
加温した。得られた混合物をエーテル（１０ｍＱ）と水
（１０ｍＱ）に分配させ、水層をエーテルで抽出した（
２Ｘ１０ｍＱ）。エーテル抽出液をまとめて重炭酸すｌ
−’ＩＪウム飽和溶液（５ｍＱ）および飽和食塩水（５
ｍｆｆｉ）にて順次洗浄し、乾燥して蒸発乾固した。得
られた残渣を酢酸エチル二石油エーテル（１：１ｖ／ｖ
）の溶離溶媒を用いてシリカゲルカラムにかけて精製す
ることにより、均質な油状の標題化合物（５９０ｍ９．
８２％）を収得した。得られた油をジエチルエーテル中
に放置して結晶化させ、無色の固形物を得た（融点６７
〜６８℃、〔α）”ｏ”　６−３°（ｑ４．０、ｃＨｃ
ｇ３　）　）。

Ｂ、Ｎ−ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル−０−
メチル−Ｄ−セリン・ベンジルエステルＮ−ｐ−メトキ
シベンジルオキシカルボニル−Ｄ−セリン・ベンジルエ
ステル（７２０Ｍｇ、２．００ミリモル）を乾燥ジクロ
ロメタン（２０ｎｄりに溶解し、この溶液をドライアイ
ス／アセトン中で冷却した。３フツ化ホウ素エーテラー
ト（１００μｌ）を加えた後、ジアゾメタン（３０ミリ
モル、ＣＨ２Ｃｅ２溶液（２０ｍＲ１））を数回に分け
て加えた。約３０分後、この溶液を濾過し、水（１０ｍ
Ｑ）で−回洗浄した後、乾燥（ＭｇＳ０４）して蒸発乾
固した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー
にかけてクロロホルムを用いて溶離し、油状の精製され
た標題化合物（５２０１！！９．７０％）を得た。

これを放置して結晶化すると無色の固形物を収得した（
融点６８〜６９℃、〔α〕っ−↓、３（ｃ４．ｏ、ＣＨ
ＣＥ３）。

０．０−メチル−Ｄ−セリン・ベンジルエステル・塩酸
塩 Ｎ−ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル−０−メチ
ル−Ｄ−セリン・ベンジルエステル（１３０■、０．３
５ミリモル）に、冷トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）：アニ
ソール（４，８：　１　（ｖ／ｖ）　）の混合液（０，
６ｎ＋ｆ）を加えた。固形物が溶解するまで、この混合
液を水浴中で振盪させ、次いで、まず０℃の回転エバポ
レーターを用い、次に高真空ポンプを用いてＴＦＡを留
去した。得られた残留物をシリカゲルクロマトグラフィ
ーにかけ、クロロホルム：メタノール（９８：　２　（
ｖ／ｖ）　）で溶離して精製し、帯黄色部として塩基形
の標題化合物（３８１Ｒ９，５５％）を得た。これを白
色固形の塩酸塩に変換した（融点１００〜１０１℃、〔
α〕２０モ１５．５゜（ｃ２．０、ＣＨ３０Ｈ）　）。

製造例４　２Ｒ，３Ｒ−および２Ｓ、３Ｓ−２−ブロモ
−３−メトキシ酪酸・ベンジルエステルクロトン酸（８
，６Ｉｉ、１００ミリモル）をメタノール（５０ｍＱ）
に溶解し、Ｎ−ブロモアセトアミド（１３，８，！ｉ！
、１０ミリモル）を３０分にわたり数回に分けて加えた
。この溶液を２５℃にて１５時間撹拌し、次いで溶媒を
蒸発させ、残渣をジエチルエーテルと水とに分配させた
。エーテル層を乾燥（Ｎ　ａ２ｓＯ４）　　シ、濾過し
て蒸発させ、残留物を蒸留することにより、無色の油状
の標題化合物（１４，３，ｐ、７２％）を収得した（沸
点８８〜８９℃／　０．５　ｆｌ　）。

製造例５　２Ｒ，３Ｒ−および２Ｓ、３Ｓ−２−アミノ
−３−メトキシ酪酸 ２Ｒ，３Ｒ−および２Ｓ、３Ｓ−２−ブロモ−３−メト
キシ酪酸（１４，７，７１ミリモル）をアンモニア（例
えば０．８８．２５０ｍＱ）に溶解し、この混合物をオ
ートクレーブにて、９５℃で８時間加温した。混合物を
２５℃まで冷却させた後、蒸発し、得られた残渣をアセ
トンに懸濁させた。生じた無色固形物を戸数し、アセト
ンで洗浄することで残留アンモニウム・プロミドを含有
した無色固形物として標題化合物（１２，１，ｐ）（融
点１８０〜１８４℃（分解点））を収得した。

ンジルオキシカルボニルー２−アミノ−３−メトキシ酪
酸・ベンジルエステル ２Ｒ，３Ｒ−および２Ｓ、３Ｓ−２−アミ／−３−メト
キシ酪酸（３，１ｇ）を１Ｍ水酸化ナトリウム（２７ｍ
Ｑ）と水（２０ｍｆりとジオキサン（４０ｍＱ）との混
液に溶解した。この溶液に、ベンジル・クロロホルメー
ト（３，８ｍＱ１２２ミリモル）のジオキサン（２０ｍ
ｌり溶液および１Ｍ水酸化ナトリウム（２７ｍＱ）溶液
を各々２５分間にわたり同一の速度で加えた。この混合
物を１時間撹拌し、酢酸エチル中に抽出しく３Ｘ２００
ｍＱ）、２Ｎ塩酸を用いて酸性（１）Ｈｌ）にして再び
酢酸エチル中に抽出した（３ｘ２００ｍＱ）。有機抽出
液をまとめて乾燥し、濾過して蒸発することで油を収得
した。この油を乾燥ジメチルホルムアミド（２０ｍＱ）
に溶解し、得られた溶液に炭酸水素ナトリウム（３，１
４ｇ、４１ミリモル）、ベンジル・プロミド（３，８ｍ
ｌ！、　３３ミリモル）、無水硫酸す）　ＩＪウム（２
００＃＋９）およびヨウ化す）　ＩＪウム（１０ｍ＋１
９）を加え、全体を２５℃において２４時間撹拌した。

次いでこの混合物をジクロロメタン（２００ｍＱ）で抽
出して水で洗浄しく４×３００ｍＱ）、乾燥（硫酸すｌ
−ＩＪウム）し、濾過して蒸発すせた。シリカゲルクロ
マトグラフィーにかけ、連続溶離溶媒として酢酸エチル
と石油エーテルを用いて精製することにより、無色の油
の標題化合物（４，２，９，６５％）を収得した。これ
を放置して固化させた（融点４４℃）。

製造例７　２Ｒ，３Ｒ−および２３．３Ｓ−２−アミノ
−３−メトキシ酪酸・ベンジルエステルシカルボニルー
２−アミ／−３−メトキシ酪酸・ベンジルエステル（５
００ｊ１１７．１．４ミリモル）をＥ燥ジクロロメタン
（３ｍＱ）に溶解し、臭化水素酸（４５％酢酸溶液、２
　ｍｌ　）を加えた。この混合物をアルゴン雰囲気下、
２０分間撹拌した後、蒸発させた。得られた残留物をジ
クロロメタンに溶解しく３Ｘ３ｔｄ）、再び蒸発させ（
３ｘ）、更に得られた残留物をキシレンに溶解しく２Ｘ
３ｍＱ）、再蒸発させた（２Ｘ）。次いで、石油エーテ
ル（５ｍＱ）を加え、生成物を５分間粉砕（トリテユレ
ート）シた後、母液を除去して得られた固形状残渣をジ
クロロメタン（５ｍｌりに溶解した。トリエチルアミン
（１ｍＱ）をジクロロメタン溶液に加え、次いて２分間
撹拌して蒸発させた。残渣をジクロロメタンに溶解（３
Ｘ５ｍＦ）して再蒸発（３Ｘ）Ｌ。

、更に得られた残渣を、ジエチルエーテル（５ｍｆｆｉ
）と共にトリチュレートした。得られた固形物を戸数し
、ジエチルエーテルを用いて再抽出しく２Ｘ５ｍＱ）、
エーテル層をまとめて蒸発させ、無色油の標題化合物（
２９０Ｍ９．９３％）を収得した。

製造例８　ベンジル・２−アミノ−３−メチルペンタ≠
−４−エノアート・ギ酸塩 Ａ、ベンジル・２−（ｔ−ブチルオキシカルボニルアミ
ノ）−３−メチルペンタ−４−エノアート Ｐ、Ａ、　　バートレット（Ｂａｒｔｌｅｔｔ　）　　
らのジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー（
Ｊ、○ｒｇ。

Ｃｈｅｍ、　）、１９８２．４７　３９３３　の方法に
より製造した２−（ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ
）−３−メチルペンタ−４−エン酸（２Ｒ，３Ｓｉ３Ｓ
、２Ｒ）（４，４ミリモル）を、ベンジルプロミド（４
，４ミリモル）、重炭酸ナトリウム（４，４ミリモル）
およびヨウ化ナトリウム（１０１ｆｆ９）を含有する乾
燥ＤＭＦ（１０ｍＱ）に入れ、得られた混合物を２０℃
にて１５分間撹拌した。この混合物を酢酸エチルに溶解
し、得られた溶液を水で３回洗浄して硫酸すｌ−ＩＪウ
ムで乾燥し、濾過して蒸発させた。得られたエステル生
成物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにかけ
て精製した。収率８０％で油状のエステル生成物を得た
。

ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣ１３）：δ１．０１（３
Ｈ，ｄ、Ｊ６Ｈｚ、３−ＣＨ５）、１．４４（９Ｈ，ｓ
、ｔ−ブチル）。

２．５８−２．７１（ＩＨ，ｍ、３−Ｈ）、４．３２−
４．４０（ＩＨ，ｍ。

２−Ｈ）　、　５．０１−５．２７　（５Ｈ、ｍ、　５
−Ｈ、ＮＨ、ＣＨ２Ｃ６Ｈ３）、５．０５−５．３７（
ＬＨ，ｍ、４−Ｈ）、７．３３−７．４１（５Ｈ。

ｍ　、　Ｃ６Ｈ５−Ｈ）。

ＩＲ（ＣＨＣＩ３溶液）：３００５ｍ、１７３０ｓ（Ｃ
Ｏ２）。

１７１０Ｓ（ＣＯ２）、１６００ｗ、１５０２ｍ、１２
０５ｓ。

１１６０ｍα　。

ｍ／ｅ（ＮＨ３，電界脱離化学的イオン化法）：３２０
（ＭＨ＋、１００％） Ｂ、ベンジル・２−アミノ−３−メチルペンタ−４−エ
ノアート・ギ酸塩 ベンジルエステル生成物（０，４０ミリモル）ヲギ酸（
１ｍｌりに溶解し、この溶液を２０℃にて２時間撹拌し
た。得られた溶液を蒸発させることで粗ギ酸塩を得た。

実施例Ｉ　Ｎ−（３−カルボキシフェニルアセチル）−
Ｌ−システイニル−Ｄ−バリンの酵Ｘ的環化 Ｎ−（３−カルボキシフェニルアセチル）−り一システ
イニルーＤ−バリン（１，４■、３．６６Ｘ１０−３ミ
リモル）、１００ｍｍｏｌ／ｌジチオトレイトール（１
００ｐｇ　）、５ｍｍｏｌ／ｆｆ硫酸第一鉄（１００μ
ｉｌ）、５０　ｍｍｏｌ／Ａ！　Ｌ−アスコルビン酸（
１００μｇ）、１／１０希釈カタラーゼ（５０μｅ　）
、５０　ｍｒｒ、ｏｌ／ｅ重炭酸アンモニウム（１ｍＱ
）および５０ｍｍｏｌ／ｌ　重炭酸アンモニウム中のイ
ソペニシリンＮシンセターゼ溶液（３，５ｍ１ｊ）　〔
Ｉ　ＰＮＳ　　トリスＨＣｇバッファー（活性２７００
　Ｃ，Ｕ　、ｍＱ−１、比活性１０９．８Ｃ，Ｕ。

ｍＱ−１）　１　ｍＱから調製〕との混合物を等容量の
２つに分け、各半分を開口バイアル（管）に入れた。

各バイアルの内容物を３０℃にて（開放状態で）２５　
Ｏｒｐｍでインキュベートした。３０分後、各バイアル
に１００　ｍｍｏｌ／ｆｆジチオトレイトール（５０ｐ
（１）と５　ｍｍｏｌ／ｆｆ硫酸第一鉄（５０ｐｅ）を
加え、３０分間インキュベーションを行った。インキュ
ベーション混合物をまとめ、アセトン（１２ｍｆりを加
えて混合物を遠心分離した。上澄液をデカントし、蒸発
乾固して生成物の残留物を凍結乾燥した。この生成物を
３％アセトニトリル−９０％１０ｍｍｏｌ／ｎ重炭酸ア
ンモニウムを用いた逆相Ｃ１８分析用カラムにかけて精
製した。

１５．０Ｈｚ）、４．０７（ＩＨ，ｓ）、５．２５お、
！、、５．３５　（各久ＩＨ，ｄ、Ｊ＝３．８Ｈｚ）、
７．３５（２Ｈ，ｍ）、７．７１（２Ｈ。

ｍ）。

得られた生成物を、β−ラクタムの確認のためにトリメ
チルシリル・プロピオン酸ナトリウム−ｄ　　（１，８
３ｘｌＯ−’ミリモル）を用い、ＮＭＲを測定した。生
成物、６β−（３−カルボキシフェニルアセチルアミノ
）ペニシラン酸の収率は６８％であった。

実施例２ 実施例１に記載の方法により、基質Ｎ−（３−カルボキ
シフェニルアセチル）−Ｌ−システイニル−Ｄ−γ、δ
−ジデヒドロインロイシンヲ用いて、６β−（３−カル
ボキシフェニルアセチルアミ／）−２α−ビニル−２β
−メチルペナム−３−カルボン酸を収得した。

実施例３ 実施例１に記載の方法により、基質Ｎ−（３−カルボキ
シフェニルアセチル）−Ｌ−システイニル−（２Ｒ，３
Ｒ−２−アミノ−３−メトキシ酪酸ヲ用いて、６β−（
３−カルボキシフェニルアセチルアミノ）−２α−メト
キシ−２β−メチルペナム−３−カルボン酸を収得した
。

実施例４ 実施例１に記載の方法により、基質Ｎ−（３−カルボキ
シフェニルアセチル）−Ｌ−システイニ／ｌ／−Ｄ−β
−ｒ−ジデヒドロバリンヲ用いテ、７β−（３−カルボ
キシフェニルアセチルアミノ）−３−エクソメチレンセ
ファムー４−カルボン酸を収得した。

実施例５ 実施例１に記載の方法により、基質Ｎ−（３−カルボキ
シフェニルアセチル）−Ｌ−システイニル−（２Ｒ−２
−アミノへキサン−４，５−ジエンカルボン＃）を用い
て、６β−（３−カルボキシフェニルアセチルアミノ）
−２α−アレニルペナム−３−カルボン酸を収得した。

特許出願人　ザ・チャンセラー・マスターズ・アンド・
スカラーズ・オプ・ザ・ユニバーシティ・オブ・オック
スフォード

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ｐＨ約６〜約９の水性媒質中で、酸素、第一鉄イオ
   ンおよびアスコルビン酸の存在下、式：▲数式、化学式
   、表等があります▼ 〔式中、Ｊは式： ▲数式、化学式、表等があります▼または▲数式、化学
   式、表等があります▼ （ここで、ＲとＲ＿１は独立して水素またはＣ＿１−Ｃ
   ＿４アルキルであるか、あるいはＲとＲ＿１のどちらか
   一方が水素またはＣ＿１−Ｃ＿４アルキルであり、他方
   がＣ＿１−Ｃ＿３アルコキシ、Ｃ＿２−Ｃ＿４アルケニ
   ルまたはアレニルである）で示される基を表わす〕 で示されるジペプチドを、イソペニシリンＮシンセター
   ゼ酵素と接触させることからなる、式：▲数式、化学式
   、表等があります▼ 〔式中、Ｑは式： ▲数式、化学式、表等があります▼または▲数式、化学
   式、表等があります▼ （ここで、ＲおよびＲ＿１は前記の定義と同意義である
   ）で示される基を表わす〕 で示されるβ−ラクタムの製造方法。 ２、式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、ＲおよびＲ＿１は独立して水素またはＣ＿１−
   Ｃ＿４アルキルであるか、あるいはＲとＲ＿１のどちら
   か一方が水素またはＣ＿１−Ｃ＿４アルキルであり、他
   方がＣ＿１−Ｃ＿３アルコキシ、ビニルまたはアレニル
   である）で示されるジペプチドを、イソペニシリンＮシ
   ンセターゼ酵素と接触させることからなる、式：▲数式
   、化学式、表等があります▼ （式中、ＲおよびＲ＿１は前記の定義と同意義である）
   で示される６−（３−カルボキシフェニルアセチルアミ
   ノ）ペナム−３−カルボン酸の、第１項に記載の製造方
   法。 ３、式中、ＲおよびＲ＿１がメチルである、化合物の第
   ２項に記載の製造方法。 ４、式： ▲数式、化学式、表等があります▼ で示されるジペプチドを、イソペニシリンＮシンセター
   ゼ酵素と接触させることからなる、式：▲数式、化学式
   、表等があります▼ で示される３−エクソメチレンセフアム−４−カルボン
   酸の、第１項に記載の製造方法。 ５、式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、ＲとＲ＿１は独立して水素またはＣ＿１−Ｃ＿
   ４アルキルであるか、あるいはＲとＲ＿１のどちらか一
   方が水素またはＣ＿１−Ｃ＿４アルキルであり、他方が
   Ｃ＿１−Ｃ＿３アルコキシ、Ｃ＿２−Ｃ＿４アルケニル
   またはアレニルである） で示される化合物。 ６、ＲおよびＲ＿１がメチルである第５項に記載の化合
   物。 ７、ＲおよびＲ＿１のどちらか一方が水素またはＣ＿１
   −Ｃ＿４アルキルであり、他方がビニルである第５項に
   記載の化合物。 ８、式： ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される化合物。