JPS635024A - 動物の悪性腫瘍細胞増殖抑制剤 - Google Patents
動物の悪性腫瘍細胞増殖抑制剤Info
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- JPS635024A JPS635024A JP61148128A JP14812886A JPS635024A JP S635024 A JPS635024 A JP S635024A JP 61148128 A JP61148128 A JP 61148128A JP 14812886 A JP14812886 A JP 14812886A JP S635024 A JPS635024 A JP S635024A
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Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は、人を含む動物の悪性腫瘍細胞抑制剤に関する
ものである。
ものである。
従来の技術
動物の悪性１１瘍細胞の培養後培地より前記悪性ＩＩ！
１１５１細胞を除いて抽出したものからなる動物の悪性
腫瘍細胞増殖抑制剤は特開昭５９−３３２２３号として
提案されている。
１１５１細胞を除いて抽出したものからなる動物の悪性
腫瘍細胞増殖抑制剤は特開昭５９−３３２２３号として
提案されている。
発明が解決すべき問題点
本発明は前記従来の技術によって１与られた悪性腫瘍細
胞増殖抑制剤よりも純粋で抑制効果の高い動物の悪性腫
瘍細胞増殖抑制剤を提供することを目的とするものであ
る。
胞増殖抑制剤よりも純粋で抑制効果の高い動物の悪性腫
瘍細胞増殖抑制剤を提供することを目的とするものであ
る。
問題点を解決するための手段
本発明の人を含む動物の悪性腫瘍細胞増殖抑制剤は、ヒ
ト腎細胞癌由来樹立株細胞Ｈ−Ｒ−Ｃ、マウス由来の株
化細胞ＬＬＣ等の動物の悪性腫瘍細胞を１０％牛脂児血
清添加のＥ−ＭＥＭ（イーグルスミニマムエッセンシャ
ルメディアム）等の培地で培養し、その後無血清培地等
の抽出用培地に移して３５〜３７℃で４〜７日培養し、
それから前記悪性腫ｍ１ｌｌ＋胞を除くことにより、抽
出培養液を得、この粗製品に原液の１／２５ｆｆｉのメ
タノールを加えて溶解し、その上澄みをメタノールで膨
潤したビーズ状のハイドロキシプロピル化デキストラン
ゲル（米国ファルマシアファインケミカル社％ＡＬＨ２
０）ヲｉｉＷ径１０Ｃｆｆｌ、長さ１０００ｍ充填した
カラムで１時間８００ミリリットルの流量を通しメタノ
ールで溶出し、１０．７５〜１１゜８７５時間の間に流
出する区分を分画したものよりなることを特徴とする。
ト腎細胞癌由来樹立株細胞Ｈ−Ｒ−Ｃ、マウス由来の株
化細胞ＬＬＣ等の動物の悪性腫瘍細胞を１０％牛脂児血
清添加のＥ−ＭＥＭ（イーグルスミニマムエッセンシャ
ルメディアム）等の培地で培養し、その後無血清培地等
の抽出用培地に移して３５〜３７℃で４〜７日培養し、
それから前記悪性腫ｍ１ｌｌ＋胞を除くことにより、抽
出培養液を得、この粗製品に原液の１／２５ｆｆｉのメ
タノールを加えて溶解し、その上澄みをメタノールで膨
潤したビーズ状のハイドロキシプロピル化デキストラン
ゲル（米国ファルマシアファインケミカル社％ＡＬＨ２
０）ヲｉｉＷ径１０Ｃｆｆｌ、長さ１０００ｍ充填した
カラムで１時間８００ミリリットルの流量を通しメタノ
ールで溶出し、１０．７５〜１１゜８７５時間の間に流
出する区分を分画したものよりなることを特徴とする。
前記分取に際しての検出器としては２５４ ｎｍの波長
に対する吸光度を計測する紫外線検出器を用いる。この
分画は、数種のアミノ酸を主成分とし、糖質を含まず、
ＮＭＲ（核磁気共鳴吸収）、ガスクロマトグラフィーで
乳酸様シグナルを示す物質の含量は微小である。
に対する吸光度を計測する紫外線検出器を用いる。この
分画は、数種のアミノ酸を主成分とし、糖質を含まず、
ＮＭＲ（核磁気共鳴吸収）、ガスクロマトグラフィーで
乳酸様シグナルを示す物質の含量は微小である。
そして、分子量は１０００以下であり、水との親和性が
極めて高く、無機塩と結合し易く、水。
極めて高く、無機塩と結合し易く、水。
メタノールに可溶であって、−般に有機溶剤に溶けにく
い性状を有している。
い性状を有している。
また、沸騰水浴中に１時装置いた場合、ＰＨ２〜１０の
範囲で常温中に一昼夜放置した場合およびプロナーゼ処
理及びグリコシターゼ処理等に対してその活性は失われ
ないものである。
範囲で常温中に一昼夜放置した場合およびプロナーゼ処
理及びグリコシターゼ処理等に対してその活性は失われ
ないものである。
実施例
１）使用細胞
動物の悪性腫瘍細胞としてヒト腎柵胞癌由来樹立株細胞
ＨＲＣを使用した。
ＨＲＣを使用した。
２）培 養
成長用培地には１０％牛脂児血清を添加したＥ−ＭＥＭ
に４ｇ／ｌのグルコースを添加したものを用い、抽出用
培地としては、自消無添加のＥ−ＭＥＭにグルコースを
２〜５ｇ／ｌ添加したものを使用した。
に４ｇ／ｌのグルコースを添加したものを用い、抽出用
培地としては、自消無添加のＥ−ＭＥＭにグルコースを
２〜５ｇ／ｌ添加したものを使用した。
まず成長用培地を用い、培養器に飽和状態になるまで悪
性腫瘍細胞を増殖し、その後無血清のＥ−ＭＥＭ培地で
洗って血清を除く。次に、これを抽出用培地に移して３
５℃〜３７℃で培養し、抽出塔Ｍ液を１ｑる。
性腫瘍細胞を増殖し、その後無血清のＥ−ＭＥＭ培地で
洗って血清を除く。次に、これを抽出用培地に移して３
５℃〜３７℃で培養し、抽出塔Ｍ液を１ｑる。
３）ｆａ製法
まず、悪性ＩＩ！ｉ瘍細胞を除去して採取された抽出培
養液を直径６０ｍｍ、内容積２５０ｍ１．ポリカーボネ
ート製の蓋付容器に入れ遠心分離機にセットし毎分１万
回転で１０分間遠心分雛し、その上澄みを採取し、さら
にこれを減圧蒸発乾固して粗製品を得る。
養液を直径６０ｍｍ、内容積２５０ｍ１．ポリカーボネ
ート製の蓋付容器に入れ遠心分離機にセットし毎分１万
回転で１０分間遠心分雛し、その上澄みを採取し、さら
にこれを減圧蒸発乾固して粗製品を得る。
その後、これに抽出培養液の１／２５１のメタノールを
加え、溶解して直径５Ｑｍｍ、深さ１００ｍｍ、内容積
２５０ｍｕでポリカーボネート製の蓋付９瀉容器に入れ
遠心分ｍ！ａにセットし遠心分離（１万回転、１０分間
）し、その上澄み液３１分をメタノールで膨潤した米国
ファルマシアファインケミカル社製ＬＨ−２０よりなる
固定相充填のカラム（直径１０ＣＩｌｌ、ｉさ１０００
ｍ）に通し、メタノールで８００ｍ１／ｈの流量速度で
溶出する。
加え、溶解して直径５Ｑｍｍ、深さ１００ｍｍ、内容積
２５０ｍｕでポリカーボネート製の蓋付９瀉容器に入れ
遠心分ｍ！ａにセットし遠心分離（１万回転、１０分間
）し、その上澄み液３１分をメタノールで膨潤した米国
ファルマシアファインケミカル社製ＬＨ−２０よりなる
固定相充填のカラム（直径１０ＣＩｌｌ、ｉさ１０００
ｍ）に通し、メタノールで８００ｍ１／ｈの流量速度で
溶出する。
検出には２５４ ｎｍの波長に対する吸光度を計測する
紫外線検出器を使用し、図に示すように、１０゜７５〜
１１．８７５時間に流出する区分より分画を１！？だ。
紫外線検出器を使用し、図に示すように、１０゜７５〜
１１．８７５時間に流出する区分より分画を１！？だ。
なお、チャートスピードは４ ｃｍ／ｈｏｕ ｒである
。
。
次に、このようにして採取した分画を１０ｍｍ１−１９
．４０℃で減圧蒸発乾固し、さらにこれを１００倍濃濃
度濃縮水溶液とする。
．４０℃で減圧蒸発乾固し、さらにこれを１００倍濃濃
度濃縮水溶液とする。
４）検定
（イ）２４穴培養皿に２Ｘ１０５個／穴のヒト腎細胞癌
由来樹立株細胞ＨＲ’Ｃを植え込み、実験群を１０％牛
脂児血清をＥ−ＭＥＭに混合したものを培地として８穴
に１．５ｍｆ加え、３７℃、５％ＣＯ２，１００％湿度
で培養する。１日おきに培地交換し、７８目に細胞数を
計り増殖を調べた。
由来樹立株細胞ＨＲ’Ｃを植え込み、実験群を１０％牛
脂児血清をＥ−ＭＥＭに混合したものを培地として８穴
に１．５ｍｆ加え、３７℃、５％ＣＯ２，１００％湿度
で培養する。１日おきに培地交換し、７８目に細胞数を
計り増殖を調べた。
対照標準として新鮮培地で培養したヒト腎細胞癌由来樹
立株細胞１−Ｉ ＲＣの数を１００％とし、分画を原液
に換算して１０倍濃度としたものをＡとし、５製部度と
したものをＢとして新鮮培地に投与してその影響を検べ
た結果を第１表に示す。
立株細胞１−Ｉ ＲＣの数を１００％とし、分画を原液
に換算して１０倍濃度としたものをＡとし、５製部度と
したものをＢとして新鮮培地に投与してその影響を検べ
た結果を第１表に示す。
第１表
（ロ）マウスに０５７ＢＬを用い、このマウスにマウス
ルイス肺癌細胞１０６個を側背部皮下に移植し、分画の
５０倍濃縮水溶液を１日２回０．２５ｍ１注ｑ１によっ
て投与し、投与８８目の腫瘍の縦Ｘ横の大きさ及び投与
１２日目の解剖による腫瘍の重Ｒを計測した。対照標準
に対する計測値を第２表及び第４表に示す。
ルイス肺癌細胞１０６個を側背部皮下に移植し、分画の
５０倍濃縮水溶液を１日２回０．２５ｍ１注ｑ１によっ
て投与し、投与８８目の腫瘍の縦Ｘ横の大きさ及び投与
１２日目の解剖による腫瘍の重Ｒを計測した。対照標準
に対する計測値を第２表及び第４表に示す。
第２表
第３表
図は、本発明の動物の悪性ｌＩ！Ｉ瘍細胞増殖抑制剤の
分画抽出を示す線図である。 ヨ寺Ａ’ｔ
分画抽出を示す線図である。 ヨ寺Ａ’ｔ
Claims (1)
- 人を含む動物の悪性腫瘍細胞を培養増殖した後、抽出用
培地に移して３５〜３７℃で培養し、前記悪性腫瘍細胞
を除いたものを、メタノールで膨潤したビーズ状のハイ
ドロキシプロピル化デキストランゲルよりなる固定相を
直径１０ｃｍ、長さ１２０ｃｍ充填したカラムで１時間
８００ミリリットルの流量で溶出し、１０．７５〜１１
．８７５時間の間に流出する区分を分取したものよりな
ることを特徴とする人を含む動物の悪性腫瘍細胞増殖抑
制剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61148128A JPH0729931B2 (ja) | 1986-06-26 | 1986-06-26 | 動物の悪性腫瘍細胞増殖抑制剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61148128A JPH0729931B2 (ja) | 1986-06-26 | 1986-06-26 | 動物の悪性腫瘍細胞増殖抑制剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS635024A true JPS635024A (ja) | 1988-01-11 |
| JPH0729931B2 JPH0729931B2 (ja) | 1995-04-05 |
Family
ID=15445883
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61148128A Expired - Fee Related JPH0729931B2 (ja) | 1986-06-26 | 1986-06-26 | 動物の悪性腫瘍細胞増殖抑制剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0729931B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5703837A (en) * | 1994-03-31 | 1997-12-30 | Citizen Watch Co., Ltd. | Watch with light transmitting type display plate |
-
1986
- 1986-06-26 JP JP61148128A patent/JPH0729931B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5703837A (en) * | 1994-03-31 | 1997-12-30 | Citizen Watch Co., Ltd. | Watch with light transmitting type display plate |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0729931B2 (ja) | 1995-04-05 |
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Legal Events
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