JPS63501074A - 特異的および総ＩｇＥを定量する粘膜アレルギ−試験および関連デバイス - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は特異的および総ＩｇＥ　ｆ　ｉｎ　ｓｊ、ｔｕにおいて検知する粘膜ア レルギー試験ならびにこの試験を実施するだめのデバイスに関する。さらに詳し くは、本発明は、いずれも支持体に連結させたアレルゲンまたは抗ＩｇＥ抗体を 、適用デバイスによって直接粘膜好ましくは鼻粘膜に接触させて粘膜ＩｇＥとｊ ｎｓｊｔｕインキュベーションを行い、ついで特異的および総工ｇＥのｊｎｖｊ 　ｔｒｏ定量を実施するアレルギー試験に関する。さらに、この試験操作および それ全実行するだめのデバイスはまた、同時に、特定の特異的誘発試験たとえば 特異的誘発試験を実施するために使用できる。

本技術分野の現状では、アレルギー疾患の診断はよく知られているように、以上 の基礎的試験によって実施される。すなわち、 Ａ：皮膚試験 Ｂ：血中の免疫グロブリンＥ　（ＩｇＥ　）量の定量Ｃ：特異的誘発試験 である。

皮膚試験（Ａ）は、疑わしいアレルゲンをたとえば注射または乱切によって患者 の皮膚に適用する方法で、これによってアレルゲンとＩｇＥの結合によシ生じる 局所反応（発赤および腫張）が刺激される。

静脈穿刺によって採取した患者の血液中におけるＩｇＥ量の〕ｎ　ｖｊｔｒｏで の定量（Ｂ）は放射免疫法または免疫酵素法によって実施される。この定量は、 患者の血清ｆ　ｊ、ｎ　ｖｊ　ｔｒｏで、アレルゲンまたは抗ＩｇＥ抗体を結合 させた支持体と接触させ、それに結合した患者のＩｇＥを継続的に測定すること によシ行われる。

特異的誘発試験（Ｃ）は主として、鼻、眼窩または気管支等の粘膜表面に、たと えばスプレー、エアゾルの形でまたは注入等によって疑わしいアレルゲンを投与 して直接接触させ、鼻、眼窩または気管支等の症状を惹起させるものである。

臨床検査後、最初に行われる診断的アプローチは皮膚試験（Ａ）でらシ、皮膚試 験の実施が不可能な場合または何らかの理由で診断が疑わしい場合に血清中の特 異的１ｇＥの定量（Ｂ）が実施される。

第２の検査でも満足できる結果が得られなかった場合には特異的誘発試験（Ｃ） を行う。

このような診断方法にはいくつかの制限がある。皮膚試験の場合には、 ａ）広範な皮膚疾患（重症の湿疹、尋麻疹）を有する患者では試験の実施は不可 能である、ｂ）不適当アレルゲン抽出物（低純度、過大な濃度）の使用によシ、 または明瞭な病因的意義の不存在に対しく症状発現前、無症状または症状消退後 アレルギー）、試験結果が誤った陽性を示す、 Ｃ）たとえば抗ヒスタミン化合物によるアレルギー治療時、皮膚反応性が低下し ている場合（たとえば小児前期、老齢者または皮膚の色素沈着過多もしくは重篤 な苔痒を有する患者）、免疫グロブリンＥが粘膜表面レベルにのみ存在し皮膚お よび血液には存在しないため、その他、アレルゲン抽出物の分解によシ、試験結 果の誤った陰性を生じることがある、ｄ）試験操作が比較的痛く、患者側にある 程度の協力を依頼しなければならないので、小児前期の患者の場合、この方法に 耐え難く困難を伴う、ｅ）稀ではあるが、アレルゲンの循環系への吸収の結果、 重篤な全身反応（アナフィラキシ−ショック）全誘発する可能性がある、 などである。

上述のような場合、そして臨床的疑惑と皮膚反応（Ａ）の間に一致をみないとき には、血清中の特異的および総ＩｇＥ量の定量（Ｂ）を実施する必要がある。

第二の方法は、高感度、優れた標準化、結果の良好な再現性とともに、患者に危 険がない、免疫グロブリンＥレベルを定量的に測定できる可能性があるなどの利 点がある。

この２種の方法（すなわち、皮膚試験と血清中の特異的ＩｇＥの定量）には、各 種アレルゲンによる金側の６０〜９０係でたがいに相関のある結果を与える。

しかしながら、この方法にも制限があって、欠点がないわけではない。とくに、 ａ）この方法の実施には長時間を要す、ｂ）アレルゲン中に免疫学的にではなく 結合する不純物が存在するためおよび／または総工ｇＥが高レベルに存在してこ れがアレルゲンと非特異的に結合するため、誤って陽性の結果を与える可能性が ある、Ｃ）血中にＩｇＥ量よシも著しく多量に存在する他の免疫グロブリン（Ｉ ｇＧ　）がアレルゲンと結合し、工ｇＥがアレルゲンと結合して検出、同定され るのが妨害されるため、誤って陰性の結果を与える可能性がある（試験の誤った 陰性結果は、アレルゲンが弱い場合に、またＩｇＥが罹患した粘膜表面にもっば ら局在している場にも起こる）、 ｄ）患者が採血を拒否した場合、また小児であって採血がとくに困難な場合には 、試験の実施が不可能である、 などを挙げることができる。

誘発試験（Ｃ）は一方、他の２種の試験でさらにある種の診断的疑問が生じたと きに使用される。

この試験は総例の８０係で血清中の特異的ＩｇＥ定量試験および皮膚試験の結果 と一致し、他の２種の試験で疑わしい結果が得られた例の５〜１０％に確定診断 を与える。

さらに、この試験は、標的臓器の症状を検知できるという利点がある（この症状 は必ずしも皮膚また拡血清の症状と類似しない）。またこの試験は、予防薬の有 効性ならびに免疫療法の効果の検討にも有用でらる＠しかしながら、このような 誘発試験には重大な欠点がある。すなわち、 ａ）試験を実施するには正常な基礎状態にあることが必要、 ｂ）薬剤（コルチコステロイド、気管支拡張剤、ＤＳＣＧ　）の投与を予め中断 することが必要、Ｃ）時間がかかる、 ｄ）患者にとってやっかいである、 ｅ）非特異的反応による陽性の誤った結果または使用アレルゲンの低用量による 陰性の誤った結果を生じる可能性がある、 ｆ）高価な装置の使用 ｇ）非協力的患者（小児患者）の場合には試験の実施は不可能、 ｈ）重篤なアレルギー反応を誘発する可能性による危険、 などがある。

以上述べた考ａｔ要約すると、一般に用いられる診断方法の主要な限界は次のと おシである。

Ａ−皮膚試験および特異的工ｇＥ定量試験の両者に約２５係と推定される誤った 陽性結果の可能性、Ｂ−皮膚試験および特異的ＩｇＥ定量試験の両者に約２０％ のオーダーと推定される誤った陰性結果の可能性、 Ｃ−誘発試験における実施および標準化の困難性ならびに非特異的反応の可能性 。

このような問題を除去するために、アレルギー疾患の基底にある発病の直接原因 であって主として粘膜に認められるＩｇＥの量を定量する目的で、その粘膜を浸 潤させる生物学的液体について多くの研究が行われてきた。

このような研究で提起されたとくに興味ある事柄は、粘膜上に見いだされる特異 的抗体が進行中の疾患過程の実際の表現であるという事実である。

実際、このような抗体は粘膜表面のみに限定され、皮膚や血清レベルには検出さ れない。皮膚や血清中にも特異的免疫グロブリンＥは存在するが、このＩｇＥは 進行中の疾患の原因となるものではなく、以前の状態または無症状段階の疾患に 関係するものである。

現在までにこのような研究で得られた結果は研究同観点からは興味あるものと考 えられるが、適当なサンプル採取の困難性ならびにＩｇＥの分解や生物学的液体 から得られたデータの標準化、再現性に関する問題により、臨床的診断への応用 という点では興味は薄い。

実際、粘膜分泌液内に含まれるＩｇＥはその分子の分解過程を経ている場合があ って、その定量は信頼性に乏しい。

この分泌液の採取には粘膜を洗浄するための溶液の導入を必要とし、その溶液が 本来の分泌液の濃度を正確な定量が不可能々程度に希釈してしまう。

免疫グロブリンＥの実際の濃度を得るために採用される関連化合物、たとえば蛋 白質または塩を定量しても、粘膜分泌液組成の変動に関連した問題は克服されな い。

粘膜から採取されたサンプルは、粘膜片、細胞層等のような粗大物質を含有して いて、たとえば濾過、遠心分離、分画化のような精製過程が必要となる。定量に 適当なＩｇＥ量を得るために必要な濃縮過程に加えて、上述のような操作によっ て、免疫グロブリンのロスを生じるばかシでなく、その分子構造の変化が起こる ことがある。

したがって、免疫グロブリンＥの検出が直接粘膜表面上で実施可能なアレルギー 試験および方法を自由に選択できることの重要性は明らかである。

実際、このような方法を使用すれば、現在用いられている方法の少なくとも２者 （特異的ＩｇＥ量の定量と特異的誘発試験）の利点のみを加えて、現在用いられ ている方法の制限が克服される。

本発明によれば、アレルゲン特異性免疫グロブリンＥ結合が直接粘膜表面上で、 また鼻粘膜上に特殊な方法で行われるので、分泌液中のＩｇＥ量の定量に固有の 難点は有利に解消される。すなわち、本発明の基本的特徴によれば、粘膜工ｇＥ とアレルゲンのインキュベーションはｊｎｓｊｔｕで行われ、したがって、血液 や生物学的サンプルの場合のように、サンプル中に含まれるＩｇＥとアレルゲン のｊ、ｎ　ｖｊ　ｔｒｏでのインキュ・ベーションの必要は消失する。

本発明によれば、上述の方法は、１種または２種以上の支持体に予めアレルゲン または抗ＩｇＥ抗体を結合させたデバイスを、直接、たとえば鼻、眼、直腸等の 粘膜と接触させることによシ行われる。

以上概述した本発明技術によれば上述の常法に比して多くの利点が得られる。利 点を詳述すれば、試験の操作は簡便、迅速で、皮膚試験の場合よシも短時間もし くはせいぜい同程度の時間で実施できる、試験操作には血液を必要とせず、痛み もないので、どのような年齢の患者にもきわめて受けいれられやすい、 試験操作は患者の空腹時に実施等の制限がないので１日のうちのいつでも試験を 実施できる、抗アレルギー剤の同時使用による妨害がない、アレルゲンは即時、 完全に除去されるので患者に危険がない、 広範囲の皮膚疾患を有する患者、皮膚の反応性が著しく高い患者（試験結果の誤 まった陽性）、皮膚の反応性が低下している患者（たとえば小児前期の患者、試 験結果の誤まった陰性）にも試験を実施できる、血清や皮膚に存在する１ｇＥレ ベルは疾患の原因である粘膜に存在するＩｇＥに二次的なものであるので、皮膚 試験や血清中のＩｇＥ量の定量に比べて特異性が高い、迅速な〕ｎ５ｉｔｕでの インキュベーションは大量のＩｇ（）免疫グロブリンの存在によって影響されな いので、血清中の特異的ＩｇＥ量の定量に比して信頼性が高い、１回の操作に特 異重工ｇＥの定量と誘発試験を包含させることができる、 本発明の試験では、同じ支持体を用いた特異的ＩｇＥの連続定量によシ非特異的 反応の可能性をチェックできるので、特異的誘発試験に比して信頼性が高い、な どを挙げることができる。

上述の要求を満足するために、本発明はその特定の目的として、特異的および総 Ｉｇ、Ｅｆ：ｊ、ｎ　５ｊｔｕで定量する粘膜アレルギー試験を提供するもので あシ、本発明の試験は、 ａ）アレルゲンまたは抗Ｉｇｇ抗体を予め結合させた少なくとも１種の支持体を 粘膜と接触させ、ｂ）上記支持体を、粘膜表面上に存在するｒｇＦ、と上記アレ ルゲンまたは抗１ｇＥ抗体の間に結合を生成させるｊ、ｎ５ｊｔｕインキユベー シヨンに十分な時間、粘膜に付着させて保持し、 Ｃ）上記支持体を回収し、それを試験管に挿入し、ついで総および特異的ＩｇＥ の放射免疫または免疫酵素法による定量を実施する各操作からなることを特徴と する。

さらに詳しくは、上記粘膜表面は鼻粘膜、結膜、直腸粘膜等でらシ、とくに鼻粘 膜が好ましい。

上記ｉｎ　５ｉｔｕインキユベーシヨンの時間は１分以下から約２０分までの間 とすることが好ましい。

特異的または総ＩｇＥ量の定量は、支持体を４力月までの期間、約−２０℃の温 度に保存したのち、その支持体上で有利に実施される。

すでに上に述べたように、本発明の試験によれば、そのａ）およびｂ）の２段階 において、アレルゲンを結合させていない支持体（陰性対照）、次に試験アレル ゲンを結合させた支持体を粘膜上の分泌液と接触させて、特異的誘発試験、とく に鼻粘膜誘発試験（ＮＶＴ　）を実施するとともできる。

アレルゲンは不溶性で支持体に強く結合しているので、接触面に限定された櫨痒 感を誘発し、それは患者によって自覚的に検出される。したがって、この誘発試 験では、遊離アレルケ゛ンの場合にみられるような大量に粘膜から吸収されたシ 、深く吸入されて望ましくない反応を起こす危険がない。すなわち、本発明の試 験は医師によって実施され、結果を評価される必要がない。

さらに、本発明は総もしくは特異的粘膜工区Ｅの１ｎｓｊｔｕにおける定量ヲ行 うためのデバイスを提供する。

すなわち、上述の支持体を固定し、粘膜表面との接触を実現するのに適当な手段 から構成されることを特徴とするデバイスである。さちに詳しくは、鼻腔自活膜 上に置くデバイスに特定すれば−１薄い、端と縁を円くした桿状体で、その上に 少なくとも１個の収納部を設け、この収納部は透過性の材料で作られ、内部に支 持体を収容できるように設計される。この収納部は桿状体の両表面に設けてもよ い。

薄い桿状体はプラスチック、紙もしくはゴム等のよう々材料で製造するのが好ま しい。薄い桿状体には、固相全最大限に暴露できるように開口部もしくは窓を設 けるのが有利である。

上記収納部は１枚または２枚のシートで作られ、縁部に沿って、支持体を導入す るだめの開口部分を除く全周を閉鎖し、この開口部分は支持体導入後、たとえば 場合によ１１曲げることができ、引きさいて開口できるタブによって覆ってもよ い。

さらに特定すれは、収納部は人工繊維で作られる。

本発明における収納部は、 支持体を粘膜と接触させ、粘膜ＩｇＥとアレルゲンもしくは抗ＩｇＥ抗体の間に 結合を生じさせることができる、 粘液物質は前述したように除去に煩雑な操作を必要とするので、粘液物質や他の 生物学的物質の支持体（これにアレルゲンまたは抗ＩｇＥ抗体を結合させる）へ の付着を防止できる、 アレルゲンまたは抗ＩｇＥ抗体が結合している支持体が吸入されたシ、はずれた シすることを防止できる、ことを目的に設計されることに留意すべきである。

支持体が、水不溶性でアレルゲンまたは抗ＩｇＥ抗体と安定な結合を形成する任 意の材料（重合材料）、たとえば紙〜　５ｅｐｈａｄｅｘ　％　ポリスチレン、 ポリビニルもしくはその他の材料で製造できることは自明のとおシである。

支持体は任意の形状とすることができる。たとえば平面状もしくは卵形状とする ことができる。支持体の形状に先に開示した収納部に挿入できるような形状とす る゛。デバイス全体は、無菌、非毒性であることが必要である。本発明の方法に 用いられる定量操作には、予めインキュベーションに付された対照標準の使用が 包含される。この対照標準はアレルゲンまたは抗ＩｇＥ抗体を結合した支持体を 、アレルゲンに対する特異的ＩｇＥまたは総ＩｇＥそれぞれの既知量を含有する 血清とインキュベートして得られる。この血清としては、標準曲線を得るために ４種の適当な濃度のものが使用される。

適当にたとえば０．９％食塩水で洗浄したのち、支持体＋アレルゲン＋ＩｇＥま たは支持体十抗ＩｇＥ　＋　ＩｇＥからなる予めインキュベートした対照標準は 一２０°Ｃで０〜４力月間保存するか、または直ちに使用する。

本発明を以下、特定例について図面を参照しながら説明するが、これは本発明を いかなる意味でも限定するものではなく、単なる例示である。

第１図は本発明の薄い桿状体、収納部および使用する支持体の第一の例を示す図 である。

第２図および第３図はそれぞれ、収納部に一部および完全に支持体が挿入された 図である。

第４図は薄い桿状体を鼻腔内に適用した場合を示す図である。

第５図は、薄い桿状体’ｉ　ＩｇＥが結合される支持体とともに取出した場合を 示す図である。

第６図は、支持体の試験管内部への挿入を示す図である。

第７ａ図および第７ｂ図は、本発明のデバイスの第二の例を示す図であシ、第７ ｃ図および第７ｂ図は、本発明のデバイスの第三の例を示す図である。

図面において、適用デバイスの１で示された薄い桿状体は上端が円形とされ、収 納部２が固定され、また支持体３が収容されている。

第４図では、薄い桿状体が鼻腔内に適用されたところで、必要なインキュベーシ ョン時間後に鼻腔から取シ出される（第５図参照）。

桿状体１からビンセット４を用いて支持体３を取シ出し、試験管５に支持体を入 れ、ついでこれを保存するか直ちに使用して、特異的または総ＩｇＥｉ１ｔ−放 射免疫定量法または免疫酵素定量法で定量する。

第７ａ図および第７ｂ図は、好ましい別の態様を示す図であシ、桿状体１には固 相（支持体３）が最大限に暴露されるように開口部もしくは窓が６に設けられ、 この支持体３は透過性膜２からなる収納部から膜をひきさくことによって取シ出 される（第７ｂ図）。

第７Ｃ図および第７ｄ図は本発明のデバイスのさらに好ましい変更を示す図であ シ、薄い桿状体１には収納部２が設けられ、この収納部内に何対かの支持体３が 収容されている。この場合も、支持体３は同様に収納部２をはがすことによって 行われる（第７ｄ図）。

以後の試験操作は上述したと同じに実施される。

本発明の方法によって得られる結果の信頼性および特異性は以下に述べる実験で 得られるデータによって立証される。この実験は、３０例の正常被検者および呼 吸器系のアレルギー疾患（鼻結膜炎、気管支喘息）を有する６２例の患者につい て実施したものである鼻粘膜ＩｇＥを定量するための新試験（ＮＴ　）は、季節 性（Ｓ）および慢性（Ｃ）両者の鼻炎（Ｒ）および／もしくは結膜炎（Ｃ）また は喘息（Ａ）に罹患した小児１６例ならびに非ア）ｆ−性の、健康な１〜１４歳 の対照被検者３０例について実施した（第２表）。

鼻粘膜の機能的および解剖学的差異を考慮し、左右の鼻腔の同じ粘膜領域に置い たデバイスによシ同じインキュベーション時間で２個のサンプルを取シ、試験の 変動を検討した。ＮＴと現在、粘膜表面上のＩｇＥの定量のために用いられてい る試験方法との差を明らかにするため、そのままの希釈しない鼻分泌液について ７例の患者で特異的ＩｇＥの定量も行った。サンプルは同シインキュベーション 時間（２，５，１０および３０分）に付し、比較した。

６例については、関連アレルゲンを結合させた２種の固相（ポリスチレンおよび 紙）を用いて鼻の特異的ＩｇＥ　１に定量した。

総鼻粘膜１ｇＥのＮＴは患者６６例と健康、非アトー一対照被検者２０例につい て実施した。

病歴または治療歴が正確に考察された全患者に、皮膚穿刺試験（ＳＰＴ　）なら びに血清および鼻粘膜の特異的ＩｇＥの定量を実施した。

アレルゲンは病歴に基づいて選択した。

Ｐｈａｒｍａｃｉａから入手したアレルゲンエキスで実施シたＳＰＴは、ヒスタ ミンに対する反応とアレルゲン反応とを比較し、ヒスタミンと同−刊斗、ヒスタ ミンに対する反応の５０％丹、ヒスタミンに対する反応の２倍器→で評価した。

血清中の特異的ＩｇＥはＰｈａｄｅｚｙｍ　ＲＡＳＴ　Ｐｈａｒｍａｃｉａを用 いて定量した。０．３５　ＰＲＵ　／　ｍ、ｇ以上の値を陽性とした。総ＩｇＥ は、Ｐｈａｄｅｚｙｍ　ＰＲＩＳＴ　Ｐｈａｒｍａｃｊａを用いて定量した。

鼻粘膜１ｇ、Ｅの値は、すでに上述した方法（ＮＴ　）により　ｊｎ　５ｊｔｕ でインキュベートしたのちめた。

総および特異的鼻粘膜ＩｇＥの定量には、Ｐｈａｒｍａｃｉａから入手したアレ ルゲンまたは抗ＩｇＥ抗体を結合畑せたペーパーディスクと、Ｐｈａｃｌｅｚｙ ｍ　ＲＡＳＴおよびＰｈａｄｅｚｙｍ　ＰＲＩＳＴ試験のＰｈａｒｍａｃ　ｊ　 ａ試薬を使用した。

６例にはアレルゲン（ＬＯＦＡＲＭＡ　）に結合させたポリスチレン固相も用い た。このような場合には、鼻および血清サンプルを試験した。

結果 鼻粘膜の解剖学的および機能的差異を考慮して行われた変動試験で得られたデー タは、変化を吸収（４２０ｎｍ　）のパーセント変化率として表したところ、変 動範囲は６〜６２係（文士５Ｄ＝１９±１３）であった。

このデータはＮＴの良好な信頼性を示すものである。

ＮＴとそのままの希釈しない鼻分泌液で実施した】、ｎ　ｖｊｔｒｏ試験の比較 では、ＮＴのみで２分から５分の値に有意な増加が認められた（第１表）。さら に、すべてのサンプルで鼻分泌液（ＮＳ　）に関する値に比して、ＮＴＯ値が著 しく高い値を示した。実際、２．５．１０および６０分間インキュベートしたサ ンプルの場合、変動の平均百分率はそれぞれ６５％、７８．９％、７６％、７４ ％であった（第１表）。

ＮＴは、そのままの非希釈分泌液中の特異的ＩｇＥ量のｊｎ　ｖｉｔｒｏ定量に 比し、有意に高い感度を示す。

２種の異なる固相（紙およびポリエチレン）による鼻粘膜特異的ＩｇＥの定量結 果は、ＲＡＳＴ評点（クラス１．２．６および４）で表した結果とよく一致した （第６表）。

ＮＴと血清中特異的１ｇＥがいずれも陽性であった患者は６２例中４６例（７４ ，２％）、いずれも陰性であった患者は１０例（１６，１％　）でちった。合計 、６２例中５６例（９０，３％）が同じ結果を示した。血清で陰性であった症例 ５例（８，１％）がＮＴでは陽性の結果を与えた（第２表）。

ＮＴと皮膚穿刺試験（ＳＰＴ　）両者が陽性であった症例は６２例中４６例（７ ４，２Ｌ）、いずれも陰性であった症例は９例（１４，５％）であった。合計、 ６２例中５５例（８８，７％　）が同じ結果を示した。ＳＰＴが陰性、ＮＴが陽 性であった症例は４例（６，４％）でちった（第２表）Ｄ アレルゲンに関して、血清中特異的ＩｇＥとＮ　Ｔ　ｆ比較すると、次のような 結果が得られた。アレルゲンに対していずれも陽性７９／１９５（４０，５％） 、いずれも陰性７３／１９５　（３７，４％）。計１９５例中１５２例（７７， ９％）がアレルゲンに対して同じ結果が得られた。血清中でのみアレルゲンにつ いて陽性の結果は１１／１９５（５，７％）、ＮＴでのみ陽性の結果は３２／１ ９５　（１６，４係）であった（第２表）。

アレルゲンに関して、皮膚穿刺試験とＮＴｔｌ−比較した場合は以下の結果が得 られた。アレルゲンに対していずれも陽性１９５例中８６例（４４，１％　）、 いずれも陰性１９５例中６８例（３５，４％　）。合計するとアレルゲンについ ての結果が一致したものは１９５例中１５５例（７９，５％）であった。ＳＰＴ でのみアレルゲンに陽性であった例は１９５例中１５例（７，７％）、ＮＴでの み陽性であった例は１９５例中２５例（１２，８％）であった（第２表）。

以上総合すると、ＮＴの結果は、血清中特異的ＩｇＥ量の定量および皮膚穿刺試 験の結果と有意に一致することから、信頼できるものと考えられる。

さらにＮＴは、血清中特異的ＩｇＥの定量に比べて高い感度を示している。実際 、５例（８，１％）および、アレルゲンに関しては、６２例（１６，４％）がＮ Ｔでのみ陽性の結果を与え、病歴と一致した。

血清およびＮＴで得られたデータを統計的に評価すると有意な正の相関（ｒ＝０ ．７８６、ｐ＜０．０００１）を示した。

３０例の健康、非アトピ一対照被検者では、５種の得られたデータはＮＴの高い 特異性を示している。

３３例中２４例の患者で、ＮＴによって調べた総ＩｇＥが陽性の結果（＞　０− ５　ＩＵ　／ｍｌ　）　２示した（第４表）。血清中総ＩｇＥは３３例中２８例 で高い値を示した。結論は２９例（８７，８％　）で一致した。２０例の健康、 非アトピ一対照被検者では、１９例がＮＴで調べた総ＩｇＥが陰性であった。

総ＩｇＥ量の定量におけるＮＴの信頼性および感度は、血清中総１ｇｇについて 得られた値との良好な相関（８７，７％　）および対照における陰性結果のきわ めて高い値（９５％）によシ証明された。

結論として、ＮＴは、上述の再現性、特異性および感度の特徴に加えて、現在性 われている試験に比べ、危険がない、血液を使用しないという利点があシ、実施 が簡単で、患者が自分で試験を行い検査室に送ることもできる。

第　１　表 アレルゲン　時間　ＮＴ　ＮＳ 第２ａ表 Ｍ、Ｅ、Ａ、Ｃ，Ｄｅｒｍａｔ、Ｐ、丹杆　＞１７．５　４　＞１７．５　４Ｌ ｏ］ｊｕｒｎ　Ｐ−→＋　＜０．３５　［３＜０．３５　０Ｐａｒｊ、ｅｔ、○ 、−−−＜コ］、３ｓ　ｏ　＜０．：５５　０Ｓ、Ｍ−Ａ、Ｃ，Ｄｅｒｍａｔ、 Ｐ、　−Ｈ−＞１７．５　４　７−２８５Ｒ，ｃ、ＬｏｌｉｕｍＰ、　−）−Ｈ −１−５３２１，５４２Ｒ，Ａ、　ＥＣ，ｓ、　Ｌｏｌｉｕｍ　Ｐ、←杆　５　 ３　７．００３Ｄｅｒｍａｔ、Ｐ、　−−−＜０−３５０　＜Ｄ−３５０Ｆ、Ａ 、　ＦＣ，ｃ、　Ｄｅｒ聰ｔ、Ｐ、丹杆　＞１７．５　４　８．１　！ＩＤｅｒ ｍａｔ、Ｆ、　＋−Ｈ＋　＞１７−５　４　２−３９２Ｌｏｌｊｕｍ　Ｐ、　← 　９．４７　３　４．６１　２Ｐａｒｊ　ｅｔ、Ｊ、÷１−　＜０．３５　０　 ’＜［１，３５０Ｆ、Ｐ、Ａ、ｃ、ＬｏｌｊｕｍＰ、→−＋−）−＞１７．５４ １．１３２ＰＣ，ｃ、　Ｄｅｒｍａｔ、Ｐ、←　＞１７．５　４　１０．６　３ Ｃ，Ａ、、んｃ、ＰｈｌｅｕｍＰ、−）−＋−＋＋　＞１７．５　４　９−２５ 　３ＦＣ，ｃ、　Ｄｅｒｍａｔ、Ｐ、　−Ｈ−）−＞１７．’５　４　８−６３ ３Ｐａｒｊａｔ、Ｊ、　−−−＜コニ］、３５０　＜Ｉコ、６５　０Ｔ、Ｅ、　 Ａ、Ｓ、ＰｈｌｅｕｍＰ、　−）＋ｔ＋　＞１７−５　４　＞１７．５　４ＦＣ ，ｓ、　Ａｒｔｅ：ｎｉ、Ｖ、←　１．９　２　０．８８２０１ｅａ　Ｅｕｒ、 ←　２．６２１．２２Ｄｅｒｍａｔ、、Ｐ、　−ｈ）−３，４２１，１７２Ｐａ ｒｉｅｔ、Ｊ、　−＝　１．４５２　１−２（Ｓ　２第２ｂ表 Ｎ、Ｆ、Ａ、、ｓ、　ＰｈｌｅｕｍＰ、　−Ｈ−Ｈ−＞１７．５　４　＞１７− ５　４Ｒ，ｓ、　Ｔａｒａｘａ、Ｖ、　−１−）−）−０，７５２４３−５５０ Ｃ−ｃ＋　Ｐｌａｎｔａ、Ｌ、　−１−）−１−＜０．３５　０　０−７９２Ｐ ａｒｉｓｌＯ，−）−＋−）−２，１２１−７２Ｄｅｒｍａｔ、Ｐ、　−１−） −）＋　＜０．３５　０　０−４３１Ｐｏｐｕｌｕｓ　−）−−＜Ｄ−３５０＜ ０−３５０Ｂ、Ｆ、Ａ−、Ｃ，Ｄｅｒｍａｔ、Ｐ、−）−＋−２−８２＜Ｄ−３ ５０Ｐａｒｉｅｔ、Ｏ，−−−＜０．３５　０　＜Ｄ−３５０Ａｌｔｅｒｎ、Ｔ 、　−−−＜Ｄ−３５Ｄ　ぐ、６５０Ｒ，Ｅ、Ａ、ｃ、　Ｄｅｒｍａｔ、Ｐ、− −一＜Ｄ−３５００−５５１Ｒ６ｃ、　Ｐａｒｉｅｔ、Ｊ、−−−＜０．３５　 ［３１，２５２Ｂ、Ｂ、Ａ−ｓ、　Ｃｙｎｏｄｏ、Ｄ、　−−−＜Ｄ−３５００ −６１Ｒ，ｓ、　ＰｏａＰｒａｔ、　−−−＜［１，３５００−５１Ｐａｒｉｅ ｔ、０．−−−　＜Ｄ、３５　ｆｌ　＜０−３５０Ｓ、Ｆ、Ａ−ｃ、Ｄｅｒｍａ ｔ、Ｐ、−−−＜０．５５　０　０．３７　１Ｅ、Ｐａｒｉｅｔ、Ｊ、　−−− ＜０．３５　０　＜０．３５　ＯＲ，Ｓ、Ｒ，ｃ、　Ｄｅｒｍａｔ、Ｐ、←　＜ Ｄ、３５　０　＜０．３５０Ｃ，ｃ、　Ｄｅｒｍａｔ、Ｆ、　−）−）＋　＜Ｄ −３５０＜Ｄ−３５０Ｐａｒｉｅｔ、Ｊ、　−−−＜Ｄ−３５０＜０．３５０Ｍ −Ｇ、Ｒ，ｃ、ｓ、Ｄｅｒｍａｔ、Ｐ、　−−−０−３８１０，４５１Ｐａｒｉ ｅｔ、Ｊ、　−−−＜０−３５　０　０．３５１Ａユｔｅｒｎ、Ｔ、−−−＜肌 ３５　０　＜０．３５ＤＣ６ＷＬ　Ｒ，ｃ、　Ｐａｒｉｅｔ、Ｊ−−−−＜０− ３５　０　＜Ｄ、３５０Ｄｅｒｍａｔ、Ｐ、　−一−〈、３５　０　０．５３１ ＡＳｐｅｒｇ、Ｆ、−−−＜０−５５　０　０−３６　１第２ｃ表 Ｒｒ＋ｓ、　０１ｅａＥｕｒ、　−＋＋−１−０５２０−４１ＰａｒｊｅｔＪ、 　→＋　０．９８　２　０−４２１Ａ１ｔｅｒｎ、Ｔ、　−＋−＋＋　４−６８ 　３　０−７７２ＭｕｃｏｒＲａ、　−−−＜Ｄ−３５００−４７１Ｆ、Ｆ、Ｆ Ｃ，Ｓ、　ＬｏｌｊｕｍＰ、　−）−＋−１＋　＞１７．５　４　＞１７−５　 ４Ａ、ｓ、　Ｄｅｒｍａｔ、Ｐ−−−−ぐ、３５　０　＜０．３５　Ｏ８，Ａ、 Ａ、Ｃ，Ｄｅｒｍａｔ、Ｐ、　−１−＋−＋−１４−５３１５，３５３Ｐａｒｊ 、ｅｔ、Ｏ，＋Ｈ”　１４．８　３　１５−１１　３Ｔ、Ｆ、Ａ、ｃ、　Ｄｅｒ ｍａｔ、Ｐ、　−Ｈ−）＋　＞１７．５　４　＞１７．５　４Ｐａｒｊｅｔ、Ｏ ，−−−ぐ、３５　０　＜０．３５０第２ｄ表 Ｍ、Ｃ，Ｒ，ｓ、　Ｌｏｌｊｕｍ　Ｐ、丹什＞１７．５　４　＞１７．５　４０ １ｅａＥｕｒ、　−−−＜０．３５　０　＜０−３５０Ｍ、Ｆ、　Ａ、ｃ、　Ｌ ｏｌｊ、ｕｍ　Ｐ、←　４．６９　３　１．６２２Ｒ，ｃ、　Ｐａｒｊｅｔ−Ｊ 、　−）−）−＜０−３５　０　０．５１　１Ｐｏｐｕｌｕｓ　−−−＜Ｄ−３ ５０１−６２Ｄｅｒｍａｔ、Ｐ、　＋Ｈ−）−＞１７−５　４　１４−９　３Ａ ］Ｊｅｒｎ、Ｔ、　−−−＜０−３５　０　０−９　２０１ｅａＥ；ａｒ、−Ｈ −＜０−３５　０　＜Ｄ−３５０Ｂ、Ｄ、Ａ、Ｃ，ＬｏｌｊｕｍＰ、　＋＋＋　 ＜０．３５　０　０．４９　１Ｒ，ｃ、　Ｄｅｒｍａｔ、Ｐ、　−）−）−）− ）−３−４５２０−６４１Ｐａｒｊｅｔ、Ｏ，−−−＜０．３５　０　＜０．３ ５０Ｍ、Ａ、Ａ、ｓ、　ＬｏｌｉｕｍＰ、　−Ｈ＋　＞１７−５　４　１０．４ ６５ＦＣ，ｓ　Ｐａｒｉｅｔ、ｔ７．−Ｈ−ｏ、ｓ　２　０．５７１０１ｅａ　 Ｅｕｒ、　−Ｈ−０−８２＜Ｄ、３５　０Ｄｅｒｍａｔ、Ｐ、←　１．９１　２ 　０−７１２Ａｌｔｅｒｎ、Ｔ、　−−−＜Ｄ、乙５［］［：１．６９１Ｃｕｐ ｒｅｓｓ、−−−１−８２１，３６２Ａｒｔｅｍｉｓ、Ｖ、−−−０−５８１ぐ 工６５０Ｆ、Ｄ、Ａ、ｃ、　ＬｏｌｊｕｍＰ、　−１−）−１−＞１７−５　４ 　８−３３３Ｒ，ｃ、　ＰｏａＰｒａｔ、、　−）−）−＋−＞１７．５　４　 ４Ａ７３Ａｒｔｅｍｉｍ、Ｖ、−）−）−１−４６２１−３６２０１ｅａ　Ｅｕ ｒ、÷　４．４１　３　１．４５２Ｐａｒｉｅｔ、Ｊ、　＋＋＋　０．７　２　 ０．６８１Ｄｅｒｍａｔ、Ｐ、　−）＋−＜０．３５　０　１．０９２Ａ１ｔｅ ｒｎａ、Ｔ、÷　０．９　２　０．７５２Ｍ、Ｍ、Ａ、ｃ、　Ｄｅｒｍａｔ、Ｐ 、　−１＋−１−７２０−９２ＰｈｌｅｕｍＰ、　−１−）−）−）−１，８２ ＜Ｄ−３５０第２ｅ表 Ｂ、Ｍ）、　Ａ、Ｃ，Ｄｅｒｍａｔ−Ｐ、　−＋＋＋　０−５７　１　４３−５ ５　ＯＲ，ｃ、　Ｐａｒｉｅｔ、Ｏ，＋＋−０，５６１１，２７２Ｌｏ１ｉｕｍ Ｐ、　−Ｈ−Ｈ−６−２２３４，４２３０１ｅａ　Ｅｕｒ、←　１　２　１．０ ９２Ａ、Ａ、Ａ、Ｓ、　ＬｏｌｉｕｍＰ、　−）＋ｌ−２−５９２１，２２Ｒ， ｓ、Ｐａｒｊｅｔ、Ｊ、→−十−ト６３３．４２Ｃｙｎｏａｏ、Ｄ、　＋＋−＜ ０．５５　０　２．５　２Ｄｅｒｍａｔ、Ｐ、　−−−＜０−３５　０　０．５ ６１ｐｏｐｕｌｕｓ　−−−＜０．３５　０　０−５３１ＨｏｕｓｅＤ、−−− ＜０．３５　０　＜０−３５０Ａ、Ｍ、Ａ、ｃ、　Ｐａｒｊｅｔ−Ｊ−＋＋＋　 ＜０−３５　０　１　、ＤＯ２Ｄｅｒｍａｔ、Ｐ、　−Ｈ−１−１７，５４６， ２６５Ｆ、ＣＬＡ、ｃ、　Ｐａｒｊｅｔ、Ｏ，→←トド　０．９５　２　＜［１ ，３５０Ｄｅｒｍａｔ、ｐ、　−＋＋＋　０．９５　２　１．０７２Ａ、Ｌ、Ｆ ｃ、ｓ、　Ｄｅｒｒｎ＆ｔ、ｐ、　＋＋＋　０．７５　２　＜０．３５０Ｐａｒ ｊｅｔ、Ｊ、　−１−１−−＜０．３５　０　０−６　１０１ｅａ　Ｅｕｒ、モ Ｉ−＜０．３５　０　１．２　２ＬｏｌｉｕｍＰ、＋−−＜０．５５　（：ｌ　 Ｉ：１．３５　１Ｃ，Ｍ、　ｐｃ、ｓ、　Ｌｏｌｊｕｍ　Ｐ、　−）−Ｈ−０， ９２＜０．３５０Ｐａｒｉｅｌｔ、、Ｊ、　什−０，４１０，４３１Ｐｏｐｕｌ ｕｓ　−−−０−３８１＜０．３５０Ｔ、Ｍ、Ａ、ｃ、　Ｐａｒｉｅｔ、Ｏ，− −−＜０．３５　０　０−４２１Ｒ，ｃ、　Ｄｅｒｍａｔ、Ｐ、　＋）−）−５ ３＞１７．５　４０ｘｅａＥｕｒ、−−−＜０．３５　０　０−３８　１ｃ、兎 Ａ−Ｃ−Ｄｅｒｍａｔ、ＩＰ、丹什＞１７．５　４　１４．８　３Ｒ，ｃ、　Ｐ ｈｌｅｕｍＰ、　＋＋＋　＜０−３５　０　０−６　１第２ｆ表 Ｒ＋ｃ、Ｐａｒｉｅｔ、Ｊ、−−−＜０．３５　０　＜０．３５　０Ｓ、Ｒ，Ｒ ，ｃ、Ｄｅｒｍａｔ、Ｐ、＋＋−Ｈ−＞１７．５　４　＞１７．５　４Ｐａｒｉ ｅｔ、Ｊ、−−−＜０−３５　０　＜０．３５　ＯＲ，ｃ、　Ｐａｒｊｅｔ、Ｏ ，−−−＜０．３５　０　＜０．３５　０Ｂ、Ｍ、Ａ、Ｃ，Ｄｅｒｍａｔ、Ｐ、 −）−）−＋−０，３５１５−３１３Ｒ，ｃ、Ｐａｒｊｅｔ、Ｊ、−−−＜０． ３５０＜コ１．３５０Ｔ−Ｆ、Ｒ，ｃ、ＬｏｌｉｕｍＰ、−１＋）＋　＞１７． ５　４　＞１７．５　４Ｄｅｒｍａｔ、Ｐ、−＋−＋−１４−３１３１５３第２ ｇ表 第２ｈ表 Ｖ、Ｒ，Ａ−ｓ、ＰｈｌｅｕｍＰ、　−−−ぐ、３５　０　＜０．３５　０Ｐａ ｒｊｅｔ、Ｊ−＋＋＋　＜Ｄ−３５０ぐ、３５　。

０１ｅａＥｕｒ、−−−＜０−３５　０　＜Ｄ、３５　０Ｐｏｐｕｌｕｓ　−− −＜０．３５０＜０−３５　０Ｐ１ａｎｔａ、Ｌ、　−−−＜０．３５　０　＜ ０−３５　０Ｆ、Ｌ、Ｃ，ｃ、　Ｄｅｒｍａｔ、Ｐ、−−−＜０．３５　０　＜ ［工３５　０Ｄｅｒｍａｔ、Ｆ、　−−−＜０．３５　０　＜１．３５　０Ｐａ ｒｊｅｔ、Ｏ，−−−ぐ、３５　０　＜０．３５　０Ａｓｐｅｒｇ−Ｆ、　−− −ぐ、３５　０　＜）、３５　［１Ｂｇｇ　Ｗｈｊｔｓ　−−−＜Ｂ−３５０＜ コニ１．３５　０Ｍｊ１に−−−ぐ、３５　０　＜１．３５　０第６表 アレルゲンを結合させた２種の固相（ポリスチレンと紙）の、鼻および血清特異 的１ｇＥがいずれも陽性の患者６例での比較 ポリスチレン　紙 Ｂ、Ｆ、Ｌｏｌｉｕｍｐ、　旧−−２１２２Ｐａｒｉｅｔａｒｉａ　＋＋−−１ １１１（）、Ｒ，Ｄｅｒｍ、Ｐｔｅｒｏｎ、−）＋＋−２１２１Ｔ、Ｆ、Ｌｏｌ ｉＵｐ、　÷Ｈ斗　４　３　４　４Ｄｅｒｍ、Ｐｔｅｒｏｎ−＋＋＋−３３３５ Ｒ，Ａ、Ｌｏｌｉｕｍｐ−＋＋＋）−３３４３Ｓ、Ｒ，Ｄｅｒｍ、Ｐｔｅｒｏｎ 、←　３　６　３　３Ｃ，Ａ、Ｐｈｌｅｕｍｐ、　＋）−）−）−４２４５Ｄｅ ｒｍ、Ｐｔｅｒｏｎ−−１−）−＋−２２３３第４表 ＰＲＩＳＴ　（インキュベーション時間２分）によシ患者３３例について測定し た総ＩｇＥ Ｃ，Ｆ、１０８　７．１５　Ｃ，Ｍ、５１０　６２．１Ｂ、Ｍ−１０８１１，４ Ｍ、１．　２０９　２．２Ｒ−Ｆ；、　７１　３１．７ ２症例の例を以下に示す（第２ｅ表、症例Ｂ、Ｍ（）おしアレルゲンについて血 清特異的ＩｇＥはクラス２であった。他については陰性、）２回くシ返した鼻特 異的ＩｇＥはダニに対して陰性の結果を与え、一方、ヒカグミズおよびドクムギ に対しては陽性で、鼻粘膜誘発試験および病歴と一致した。との患者は以前にダ ニについて特異的免疫療法を受けたことがあったが、免疫療法は無効で、花粉の 季節になると症状を示した。

”ｅ”、０１ｅａ　Ｅｕｒ−に対して陽性で、同じアレルゲンに対する血清特異 的１ｇＥも陽性で前二者のアレルーグンに対粘膜の特異約１ｇＥはダニについて は陰性で、他の６種の７レルグンには陽性で１、鼻粘膜誘発試験および病歴と一 致した。

本発明は、以上、本発明の一部の特定の実施態様を参照しながら説明したが、本 発明の技術分野の熟練者によれば、優先権を請求した本発明の精神、範囲から逸 脱することなく変更および改変が可能なことは自明であり、これらも本発明の範 囲内に包含されるものである。

ＩＮ＋ａｎｖ１ｍＭ＠ｌ＾ｅｅｌｌｃＩＩｉ。ｌｌ−０ＰＣＴ／工Ｔ　８６１０ ００３６ＡＮＮＥＸ　Ｔｏ　ＴＨＥ　ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡＬ　５ＥＡＲＣ ＨＲＸ？ＯＲＴ　ＯＮ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．ａ）アレルゲンまたは抗ＩｇＥ抗体を予め結合させた少なくとも１種の支持 体を粘膜と接触させ、ｂ）上記支持体を、粘膜表面上に存在するＩｇＥと上記ア レルゲンまたは抗ＩｇＥ抗体の間に結合を生成させるｉｎｓｉｔｕインキュベー ションに十分な時間、粘膜に付着させて保持し、ｃ）上記支持体を回収し、それ を試験管に挿入し、ついで特異的および総ＩｇＥ量を放射免疫法または免疫酵素 法で定量することを特徴とする特異的および総ＩｇＥのｉｎ　ｓｉｔｕ定量のた めの粘膜アレルギ−試験 ２．段階ｂ）におけるインキユベーシヨン時間を１分以下〜２０分とする請求の 範囲第１項に記載の粘膜アレルギー試験 ３．特異的および総ＩｇＥ量の定量は支持体について、それを約−２０℃に４カ 月間までのある時間保存したのちに実施する請求の範囲第１項または第２項のい ずれかに記載の粘膜アレルギ−試験 ４．最初アレルゲンを結合させていない支持体を粘膜と接触させ、次に試験する アレルゲンを適当な方法で結合させた支持体をその粘膜と接触させることを特徴 とする、請求の範囲第１項から第３項までの工程ａ）およびｂ）に従つた特異的 誘発による粘膜アレルギ−試験 ５．粘膜表面は鼻粘膜である請求の範囲第１項から第４項までのいずれかに記載 の粘膜アレルギ−試験６．粘膜表面は結膜粘膜、直腸粘膜等である請求の範囲第 １項から第４項までのいずれかに記載の粘膜アレルギ−試験 ７．請求の範囲第１項から第４項までのいずれかに記載の特異的および総ＩｇＥ 量のｉｎ　ｓｉｔｕ定量を行う粘膜アレルギ−試験を実施するためのデバイスに おいて、支持体を固定しそれを粘膜表面に接触させる手段から構成されることを 特徴とするデバイス ８．支持体を固定しそれを鼻粘膜と接触させる手段は、薄い、縁が円形の桿状体 であり、これには透過性の材料で作られ支持体を収容するための収納部少なくと も１個が設けられている請求の範囲第５項に記載の粘膜アレルギ−試験用デバイ ス ９．収納部は、桿状体の縁部に沿つて支持体を挿入するための開口部分を除く全 周を閉鎖する２枚のシートで構成され、この開口部分は支持体の挿入後、曲げて はがすことができるタブによつて閉鎖されることを特徴とする請求の範囲第８項 に記載の粘膜アレルギー試験用デバイス １０．支持体を固定しそれを粘膜表面と接触させる手段は、アレルゲンを結合さ せた支持体を収容するための１個または２個以上の開口部もしくは窓を設けた薄 い桿状体であり、開口部はその上部で、桿状体の両側に付着させた透過性膜から なる収納部で覆われている請求の範囲第５項に記載の粘膜アレルギ−試験用デバ イス １１．薄い桿状体の両面に２個もしくはそれ以上の支持体を収容するための２個 もしくはそれ以上の収納部を設けた請求の範囲第８項に記載の粘膜アレルギ−試 験用デバイス １２．薄い桿状体はプラスチック、ゴムまたは紙材料から作られる請求の範囲第 ７項から第１１項までのいずれかに記載の粘膜アレルギ−試験用デバイス１３． 収納部は人工繊維で作られる請求の範囲第８項または第９項のいずれかに記載の 粘膜アレルギ−試験用デバイス １４．上述の各請求の範囲ならびに前述の例示および開示の記載に実質的に従い 、粘膜上の特異的および総ＩｇＥをｉｎ　ｓｉｔｕにおいて定量する粘膜アレル ギ−試験ならびにそれを実施するためのデバイス