JPS6327762A - 血中フィブリン単量体検出用テスト配合剤および検出方法 - Google Patents
血中フィブリン単量体検出用テスト配合剤および検出方法Info
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- JPS6327762A JPS6327762A JP62163834A JP16383487A JPS6327762A JP S6327762 A JPS6327762 A JP S6327762A JP 62163834 A JP62163834 A JP 62163834A JP 16383487 A JP16383487 A JP 16383487A JP S6327762 A JPS6327762 A JP S6327762A
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Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
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-
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は人体血漿中のフィブリン単量体の検出テスト用
配合剤および検出方法に関するものである。血液中のフ
ィブリン単量体の出現は、止血系の活性化を証明する。
配合剤および検出方法に関するものである。血液中のフ
ィブリン単量体の出現は、止血系の活性化を証明する。
これは、臨床においてしばしば見られる多数の基礎疾患
の随伴症状である。
の随伴症状である。
この場合、過多凝結期を過ぎて局所的血栓症または重い
出血症状を伴なう全身的消耗性凝血疾患が発生する。凝
固活性のできるだけ早期の検出が盲動な治療の前提であ
る。
出血症状を伴なう全身的消耗性凝血疾患が発生する。凝
固活性のできるだけ早期の検出が盲動な治療の前提であ
る。
すでにフィブリン単量体の多数の検出原理が知られてい
る。最も古い方法はゴダールによるエタノールゼラチン
テスト法（Ｈ，ＧＯＤＡＬおよびＵ、ＡＢＩＬＧＡＡＲ
Ｄ、５ｃａｎｄ、Ｊ。
る。最も古い方法はゴダールによるエタノールゼラチン
テスト法（Ｈ，ＧＯＤＡＬおよびＵ、ＡＢＩＬＧＡＡＲ
Ｄ、５ｃａｎｄ、Ｊ。
Ｈａｅｍ、３，１９６６．３４２）およびリピンスキー
による硫酸プロタミンテスト法（Ｂ。
による硫酸プロタミンテスト法（Ｂ。
ＬＩＰＩＮＳＫＩおよびに、ＷＡＲＯＷＳＫＩ。
Ｔｈｒｏｍｂ、Ｄｉａｔｈ、Ｈａｅｍ、２０゜１９６８
．４４）である。これらの方法は実施しやすいが、感度
と特異性が不十分である。これより特異的なテスト法は
、ラルゴによるフィブリン単量体が装入された赤血球の
凝集テストである（Ｒ，ＬＡＲＧＯほか、Ｂ１ｏｏｄ４
ヱ。
．４４）である。これらの方法は実施しやすいが、感度
と特異性が不十分である。これより特異的なテスト法は
、ラルゴによるフィブリン単量体が装入された赤血球の
凝集テストである（Ｒ，ＬＡＲＧＯほか、Ｂ１ｏｏｄ４
ヱ。
１９７６．９９１）。さらに、フィブリン単量体の検出
用沈降剤リストセチン−Ａ（リストマイシン−Ａ）によ
る自発的火傷症の診断テストが行なわれている（Ｋ、Ｗ
ＡＴＡＮＡＢＥおよびＬ９ＴＵＬＬＩＳ、Ａｍｅｒ、Ｊ
、Ｃｌ１ｎ。
用沈降剤リストセチン−Ａ（リストマイシン−Ａ）によ
る自発的火傷症の診断テストが行なわれている（Ｋ、Ｗ
ＡＴＡＮＡＢＥおよびＬ９ＴＵＬＬＩＳ、Ａｍｅｒ、Ｊ
、Ｃｌ１ｎ。
Ｐａｔｈｏｌ、７０，１９７８，６９１；Ｇ。
ＰＥＬ Ｉ ＥＧＬＥＲほか、Ａｂｓｔｒ、Ｉｎｔ。
Ｃｏｎｇｒ、ｌ５Ｈ−ＳＩＢＴ。
Ｂｕｄａｐｅｓｔ、１９８２．８月、３８０頁）。
包括的比較研究の結果、前記の沈降剤を使用すれば、フ
ィブリン分裂生成物を伴う非特異的沈降が生じ、また検
出のために使用される血漿の血小板の増大に伴って、偽
陽性反応が生じるので、このテストの信頼性は保証され
ないことが示されている。これらの方法のほか、費用の
かかる分析技術に結びついた種々の方法が存在する（ア
フィニティー・クロマトグラフィー、ゲル濾過法）。
ィブリン分裂生成物を伴う非特異的沈降が生じ、また検
出のために使用される血漿の血小板の増大に伴って、偽
陽性反応が生じるので、このテストの信頼性は保証され
ないことが示されている。これらの方法のほか、費用の
かかる分析技術に結びついた種々の方法が存在する（ア
フィニティー・クロマトグラフィー、ゲル濾過法）。
本発明の目的は、新規テスト用配合剤の使用により、人
体血漿中のフィブリン単量体の検出法を改良するにある
。本発明の基本的課題は、提案されたテスト用配合剤に
基づいた沈降によるフィブリン単量体の経済的な検出方
法を開示するにある。
体血漿中のフィブリン単量体の検出法を改良するにある
。本発明の基本的課題は、提案されたテスト用配合剤に
基づいた沈降によるフィブリン単量体の経済的な検出方
法を開示するにある。
本発明によれば、この課題の解決のため、まず緩衝溶液
中に沈降剤としてピロールアミジン系列の抗生物質を含
有することを特徴とするテスト用配合剤を調製する。好
ましくは、本発明による新規なテスト用配合剤において
は、ＨＥＰＥＳ緩衝剤の中に配合されたネトロプシン、
ジスタマイシン、アンテルベンシンまたは類似物などの
ピロール・アミジン系抗生物質が使用される。好ましい
実施態様においては、選定されたピロールアミジン系抗
生物質はその塩の形で、例えば塩酸塩の形で使用される
。
中に沈降剤としてピロールアミジン系列の抗生物質を含
有することを特徴とするテスト用配合剤を調製する。好
ましくは、本発明による新規なテスト用配合剤において
は、ＨＥＰＥＳ緩衝剤の中に配合されたネトロプシン、
ジスタマイシン、アンテルベンシンまたは類似物などの
ピロール・アミジン系抗生物質が使用される。好ましい
実施態様においては、選定されたピロールアミジン系抗
生物質はその塩の形で、例えば塩酸塩の形で使用される
。
検出操作においては、まず人体の静脈血液を通常の技法
により凝固防止剤と混合し、次に遠心分離し、このクエ
ン酸塩血液を前記の新規配合物により沈降させる。次に
沈降反応、すなわち底部に沈澱した沈降物を通常の方法
で計測する。沈降剤すなわちテスト配合物を含有する血
漿を計測のため室温に放置し、次に遠心分離する。
により凝固防止剤と混合し、次に遠心分離し、このクエ
ン酸塩血液を前記の新規配合物により沈降させる。次に
沈降反応、すなわち底部に沈澱した沈降物を通常の方法
で計測する。沈降剤すなわちテスト配合物を含有する血
漿を計測のため室温に放置し、次に遠心分離する。
本発明の利点は、例えば塩酸ネトロプシンなどの安価な
沈降剤を使用し、また診断信頼度の高い事にある。
沈降剤を使用し、また診断信頼度の高い事にある。
下記の実施例によって本発明によるフィブリン単量体検
出法をさらに詳細に説明する。
出法をさらに詳細に説明する。
実施例１
血液凝固検査の規則に正確に従って静脈血液を採取し、
通常の方法によってクエン酸塩血漿を調製する。
通常の方法によってクエン酸塩血漿を調製する。
ネトロプシン−ＨＣＬを必要に応じて１５Ｉｉ１ｇネト
ロプシン／ｍｌの濃度でＨＥＰＥＳ−緩衝剤（０，１５
モル、ｐＨ７，５）に溶解する（テスト配合剤ネトロプ
シンＲＬ）。
ロプシン／ｍｌの濃度でＨＥＰＥＳ−緩衝剤（０，１５
モル、ｐＨ７，５）に溶解する（テスト配合剤ネトロプ
シンＲＬ）。
０．４ｍｌのクエン酸塩血漿を遠心分離ガラス容器の中
で０．１ｍｌのネトロプシンＲＬと混合し、３０分間、
常ＩＨに放置する。次にこの試料を５分間、最高５０の
ＲＺＢで遠心分離する。底部に形成された沈降物を斜方
向透過光線の中で下記の基準で評価した。
で０．１ｍｌのネトロプシンＲＬと混合し、３０分間、
常ＩＨに放置する。次にこの試料を５分間、最高５０の
ＲＺＢで遠心分離する。底部に形成された沈降物を斜方
向透過光線の中で下記の基準で評価した。
小片状の緩い沈降物 十
繊維状の脱落物 ＋＋
緻密な沈澱物 ＋＋十
このような方法で陰性評証された試料は黒色のブロック
シャーレに移され、あらためて斜方向光線の中で評価さ
れる。
シャーレに移され、あらためて斜方向光線の中で評価さ
れる。
それぞれの計測シリーズについて、陽性の比較対照を用
いた。
いた。
実施例２
沈降物の調製、操作および評価は実施例１と同様に実施
された。しかし沈降剤として、ＨＥＰＥＳ−緩衝剤の中
に６ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解されたジスタマイシンーＨ
ＣＬを使用した（テスト配合剤：ジスタマイシンＲＬ）
。
された。しかし沈降剤として、ＨＥＰＥＳ−緩衝剤の中
に６ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解されたジスタマイシンーＨ
ＣＬを使用した（テスト配合剤：ジスタマイシンＲＬ）
。
沈降物の感度はネトロプシンと比較して約５０％である
。
。
本発明によるテスト配合物ネトロプシンＲＬと対応の方
法を使用した臨床実験のシリーズ調査で次のような結果
が得られた。
法を使用した臨床実験のシリーズ調査で次のような結果
が得られた。
テスト方法の分析応用可能性の評価
−試験管中で調製されたフィブリン単量体含有血漿は明
白に陽性反応を示した。
白に陽性反応を示した。
−それぞれの標本中で得られたフィビリノーゲンおよび
フィブリン分裂生成物（ｅ−ＦＤＰ、１−ＦＤＰ、
ｅ−ｆ ｄｐ、 １−ｆ ｄｐ）のうち、早期フィブ
リン分裂生成物（ｅ−ｆｄｐ）分画のみを捕集した。ま
たｅ−ｆｄｐはトロンビンによって条件づけられたフィ
ビリノーゲン転化の結果であるから、これによってテス
トの特異性は影響されない。低分子量分裂生成物の分画
りとＥの濃度（それぞれ９．３ｇ、Ｑ、０．１５ｇ／Ｉ
）から沈降の減衰が観察された。
フィブリン分裂生成物（ｅ−ＦＤＰ、１−ＦＤＰ、
ｅ−ｆ ｄｐ、 １−ｆ ｄｐ）のうち、早期フィブ
リン分裂生成物（ｅ−ｆｄｐ）分画のみを捕集した。ま
たｅ−ｆｄｐはトロンビンによって条件づけられたフィ
ビリノーゲン転化の結果であるから、これによってテス
トの特異性は影響されない。低分子量分裂生成物の分画
りとＥの濃度（それぞれ９．３ｇ、Ｑ、０．１５ｇ／Ｉ
）から沈降の減衰が観察された。
−テスト結果のフィビリノーゲンによる影響は、１９ｇ
／ｆｌの血漿フィビリノーゲン濃度を除いては見られな
かった。
／ｆｌの血漿フィビリノーゲン濃度を除いては見られな
かった。
一沈降に対するヘパリンの影響度は観察されなかった。
一使用された血漿の血小板含有量に対する沈降の依存性
はない。
はない。
一デキストランベースおよびゼラチンベースに対するプ
ラズマエキスパンダーの影響は観察されなかった。
ラズマエキスパンダーの影響は観察されなかった。
−テストは、血漿のアルブミン濃度、アルファーグロブ
リン濃度、免疫性グロブリン−Ｇ−濃度、および全卵白
濃度の変化による影響を示さない。
リン濃度、免疫性グロブリン−Ｇ−濃度、および全卵白
濃度の変化による影響を示さない。
テスト方法の特異性に関する試験
止血学的に健康な４０人の入院患者について血液凝固検
査に一般に使用される技術を用いて調査し、すべての場
合に陰性のテスト結果を得た（特異性率−１，０＞。
査に一般に使用される技術を用いて調査し、すべての場
合に陰性のテスト結果を得た（特異性率−１，０＞。
テスト方法の感度の試験
臨床的にまた実験診断的に確認された播種性血管内凝血
症の４０人の患者を前記のテスト法によって検査し、そ
の結果３７ケースにおいて陽性反応が見られた。この故
に、この方法は、０．９３の感度率を有し、播種性血管
内凝血症の診断の実験パラメータとしてを効である事が
判明した。
症の４０人の患者を前記のテスト法によって検査し、そ
の結果３７ケースにおいて陽性反応が見られた。この故
に、この方法は、０．９３の感度率を有し、播種性血管
内凝血症の診断の実験パラメータとしてを効である事が
判明した。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、緩衝液中に沈降剤として、ピロールアミジン系列の
抗生物質を含有することを特徴とする血中フィブリン単
量体検出用テスト配合剤。 ２、ＨＥＰＥＳ緩衝液中に沈降剤として、ネトロプシン
、ジスタマイシン、アンテルベンシン、または類似物の
ピロールアミジン系列の抗生物質を含有することを特徴
とする特許請求の範囲第１項記載のテスト配合剤。 ３、抗生物質はネトロプシンまたはその塩の形で利用さ
れることを特徴とする特許請求の範囲第２項によるテス
ト配合剤。 ４、静脈血液を凝固防止剤と混合し、次に遠心分離し、
クエン酸塩血漿を採取するテスト配合剤を使用して血中
フィブリン単量体を検出する方法において、沈降剤とし
て、ピロールアミジン系列の抗生物質を使用し、その後
に公知の手法で沈降反応を測定することを特徴とする方
法。 ５、ピロールアミジン系列の抗生物質がネトロプシン、
ジスタマイシン、アンテルベンシン、または類似物であ
る特許請求の範囲第４項記載の方法。 ６、沈降剤はＨＥＰＥＳ−緩衝液中に添加されることを
特徴とする特許請求の範囲第４項による方法。 ７、沈降剤を添加した血漿を好ましくは常温に放置し、
次に遠心分離することを特徴とする特許請求の範囲第４
項乃至第６項のいずれか１項による方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DD01N/292298-1 | 1986-07-09 | ||
| DD86292298A DD261844A1 (de) | 1986-07-09 | 1986-07-09 | Verfahren zur praezipitation von fibrinmonomeren |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6327762A true JPS6327762A (ja) | 1988-02-05 |
Family
ID=5580752
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62163834A Pending JPS6327762A (ja) | 1986-07-09 | 1987-06-30 | 血中フィブリン単量体検出用テスト配合剤および検出方法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4960694A (ja) |
| EP (1) | EP0253255A3 (ja) |
| JP (1) | JPS6327762A (ja) |
| DD (1) | DD261844A1 (ja) |
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|---|---|---|---|---|
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| US5441892A (en) * | 1992-10-15 | 1995-08-15 | Medtronic Hemptec, Inc. | Blood clot mass measuring technique |
| EP0748247B1 (en) * | 1994-02-22 | 2012-06-20 | The Curators Of The University Of Missouri | Macrocyclic antibiotics as separation agents |
| US6436655B1 (en) | 1998-02-09 | 2002-08-20 | Medical Devices Corporation | Rapid quantitative measurement of soluble fibrin in opaque body fluids |
| ATE532058T1 (de) | 2004-05-17 | 2011-11-15 | Medtronic Inc | Point-of-care-heparinbestimmungssystem |
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|---|---|---|---|---|
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| US4145185A (en) * | 1977-02-25 | 1979-03-20 | Research Triangle Institute | Reagents for screening tests and bioassay of von Willebrand's factor (platelet aggregating factor) in blood plasmas |
| US4210420A (en) * | 1978-11-13 | 1980-07-01 | Ortho Diagnostics Inc. | Detection of fibrin monomer and composition therefor |
| DE3017707A1 (de) * | 1980-05-08 | 1981-11-12 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und reagens zum nachweis von fibrinmonomer |
| DE3330699A1 (de) * | 1983-08-25 | 1985-03-07 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur gleichzeitigen bestimmung von fibrinogen und fibrinogen-spaltprodukten im plasma |
| DE3430906A1 (de) * | 1984-08-22 | 1986-02-27 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur bestimmung von fibrinmonomer in plasma |
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-
1986
- 1986-07-09 DD DD86292298A patent/DD261844A1/de not_active IP Right Cessation
-
1987
- 1987-06-30 JP JP62163834A patent/JPS6327762A/ja active Pending
- 1987-07-06 EP EP87109687A patent/EP0253255A3/de not_active Withdrawn
- 1987-07-09 US US07/071,799 patent/US4960694A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0253255A2 (de) | 1988-01-20 |
| DD261844A1 (de) | 1988-11-09 |
| US4960694A (en) | 1990-10-02 |
| EP0253255A3 (de) | 1990-06-13 |
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