JPS63263460A - 酵素免疫測定法 - Google Patents
酵素免疫測定法Info
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- JPS63263460A JPS63263460A JP62098934A JP9893487A JPS63263460A JP S63263460 A JPS63263460 A JP S63263460A JP 62098934 A JP62098934 A JP 62098934A JP 9893487 A JP9893487 A JP 9893487A JP S63263460 A JPS63263460 A JP S63263460A
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Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は酵素免疫センサを用いた酵素免疫測定法の改良
に関する。
に関する。
酵素免疫センサは、酵素活性を指標として、抗原抗体反
応を利用して測定すべき抗原の量を測定するバイオセン
サであシ、タンパク質、ホルモン、有機薬品などの極微
量を分析、検知できるので、医療分野、産業分野などで
広く利用できる。
応を利用して測定すべき抗原の量を測定するバイオセン
サであシ、タンパク質、ホルモン、有機薬品などの極微
量を分析、検知できるので、医療分野、産業分野などで
広く利用できる。
従来の技術
従来、酵素免疫センサの基本となっている酵素免疫測定
法には、いろいろの種類が知られている。
法には、いろいろの種類が知られている。
そのうち、比較的高感度な測定法として、不均一法があ
り、この方法には固相法での競争反応と置換反応による
分析法がある。このうち、競争反応を用いる酵素免疫セ
ンサでは、一般には電極表面に抗体を固定化し、ついで
測定すべき抗原と既知量の酵素標認抗原を同時に入れて
、この両者を競争反応的に結合させる。この操作にょシ
、測定すべき抗原の量が多ければ、電極に結合した酵素
の量は少なくなる。そこで、電極に結合している酵素の
活性を測定するために、従来この電極を取り出し、付着
している遊離の酵素標識抗原を水洗除去し、ついで基質
が含まれている別の電解液中に入れ、酵素の活性を測定
する。すなわち、電極を水洗することと、別の電解液中
に入れ変えることなどの操作を要する。
り、この方法には固相法での競争反応と置換反応による
分析法がある。このうち、競争反応を用いる酵素免疫セ
ンサでは、一般には電極表面に抗体を固定化し、ついで
測定すべき抗原と既知量の酵素標認抗原を同時に入れて
、この両者を競争反応的に結合させる。この操作にょシ
、測定すべき抗原の量が多ければ、電極に結合した酵素
の量は少なくなる。そこで、電極に結合している酵素の
活性を測定するために、従来この電極を取り出し、付着
している遊離の酵素標識抗原を水洗除去し、ついで基質
が含まれている別の電解液中に入れ、酵素の活性を測定
する。すなわち、電極を水洗することと、別の電解液中
に入れ変えることなどの操作を要する。
発明が解決しようとする問題点
このように、このセンサは高感度であるが、取り扱いが
やや複雑であり、これが欠点となっているので、取り扱
いが容易で、構造が簡単なセンサの開発が待たれている
。
やや複雑であり、これが欠点となっているので、取り扱
いが容易で、構造が簡単なセンサの開発が待たれている
。
問題点を解決するための手段
酵素活性を指標とし、抗原抗体反応を利用して抗原の量
をｍｌり定する酵素免疫測定法において、対極と照合電
極を用い、酵素免疫電極と対極の間で非定常電解法によ
り、電流あるいは電位を急激に変え、この時の電流電圧
特性により、電極に結合している酵素のみの活性を測る
。
をｍｌり定する酵素免疫測定法において、対極と照合電
極を用い、酵素免疫電極と対極の間で非定常電解法によ
り、電流あるいは電位を急激に変え、この時の電流電圧
特性により、電極に結合している酵素のみの活性を測る
。
作 用
電極の電位や電流を急激に変化させると、電極の沖合の
浴組成には無関係になり、電極の表面の状態のみに、電
極の電流、電位は依存するようになシ、その結果、従来
例のように水洗、液替の必要が無くなる。
浴組成には無関係になり、電極の表面の状態のみに、電
極の電流、電位は依存するようになシ、その結果、従来
例のように水洗、液替の必要が無くなる。
実施例
本発明の酵素免疫センサを実施例を参照にして説明する
。
。
第１図は本発明の詳細な説明するための装置の断面概略
図である。１と２はそれぞれ抗体を固定化した白金製酵
素免疫電極とその端子、３と４はそれぞれ対極とその端
子、６と６はそれぞれ照合電極とその端子であり、７は
ガラス製の容器、８は緩衝溶液、９は各電極を固定する
ためのゴム栓、および１ｏは多孔性ガラスフィルターで
ある。
図である。１と２はそれぞれ抗体を固定化した白金製酵
素免疫電極とその端子、３と４はそれぞれ対極とその端
子、６と６はそれぞれ照合電極とその端子であり、７は
ガラス製の容器、８は緩衝溶液、９は各電極を固定する
ためのゴム栓、および１ｏは多孔性ガラスフィルターで
ある。
つぎに、具体例を挙げて本発明をさらに詳細に説明する
。
。
分析すべき抗原としてカフェインを選ぶ。そこで抗体に
は抗力Ｚエイ７・モノクロナル抗体（２Ｘ １０ ｍ
ｍｏｌ）、酵素としてはグルコースオキシダーゼ（６％
Ｗ／Ｖ ）、基質にはグルコース、および電解液にはリ
ン酸緩衝液（２０ｍｍｏｌ 、ｐＨ＝７．３）をそれぞ
れ用いた。また、白金電極の大きさは５×２鵡であり、
抗体の電極上への固定化は公知のグルタルアルデヒド包
括ポリピロール法を用いた。
は抗力Ｚエイ７・モノクロナル抗体（２Ｘ １０ ｍ
ｍｏｌ）、酵素としてはグルコースオキシダーゼ（６％
Ｗ／Ｖ ）、基質にはグルコース、および電解液にはリ
ン酸緩衝液（２０ｍｍｏｌ 、ｐＨ＝７．３）をそれぞ
れ用いた。また、白金電極の大きさは５×２鵡であり、
抗体の電極上への固定化は公知のグルタルアルデヒド包
括ポリピロール法を用いた。
つぎに測定法を示す。標準液として、酵素標識カフェイ
ンを２０ ｍｍｏ ｌそれぞれ含み、カフェインはそれ
ぞれ０，５，１０．１５および２０ｍｍｏ ｌずつ含む
緩衝溶液１０ｍ１を用い、室温のもとて約３０分間、電
極表面の抗体と競争反応的に結合させた。その後、非定
常分極法の一例として、酵素免疫電極を１Ｖ／ｓａ：の
電位走査速度で平衡電位より卑の方向に分極させて、生
じた過酸化水素の還元ピーク電流値を求めた。
ンを２０ ｍｍｏ ｌそれぞれ含み、カフェインはそれ
ぞれ０，５，１０．１５および２０ｍｍｏ ｌずつ含む
緩衝溶液１０ｍ１を用い、室温のもとて約３０分間、電
極表面の抗体と競争反応的に結合させた。その後、非定
常分極法の一例として、酵素免疫電極を１Ｖ／ｓａ：の
電位走査速度で平衡電位より卑の方向に分極させて、生
じた過酸化水素の還元ピーク電流値を求めた。
その結果、加えたカフェインの濃度とピーク電流値はほ
ぼ比例関係にあり、未知量の抗原での電流値よシ、カフ
ェインの濃度が分析できることが分かった。
ぼ比例関係にあり、未知量の抗原での電流値よシ、カフ
ェインの濃度が分析できることが分かった。
その他の実験条件として、上記の電位走査速度を０．５
、２．０ 、３．ＯＶ／気と変えて調べたところ、走
査速度にほぼ比例した傾斜ち検量線を得ることができ、
その結果分析できることが分かった。また、連続的々電
位走査でなく、ステップ的に電位を変化させても同様に
検量線を得ることができた。
、２．０ 、３．ＯＶ／気と変えて調べたところ、走
査速度にほぼ比例した傾斜ち検量線を得ることができ、
その結果分析できることが分かった。また、連続的々電
位走査でなく、ステップ的に電位を変化させても同様に
検量線を得ることができた。
さらに比較的大きい定電流を流した時の電極電位の変化
を求める方法でも、同様に検量線を引くことができた〇 なお、測定精度を高めるためには、測定すべき抗原の濃
度によって、酵素標識抗原と抗体の使用量を変える必要
があった。例えば、被測定物の抗原と酵素標識抗原はほ
ぼ同一濃度が好ましく、また抗体の量は酵素標識抗原と
被測定物の抗原の和に等しいか、あるいは若干大きい付
近が適切であった０ 以上の実施例では競争反応の例を示したが、別の例とし
て、まず全ての抗体に酵素標識抗原を結合させた後、被
測定物の抗原を加えて平衡的に置換反応させて測定する
場合にも、同様に測定することができた。
を求める方法でも、同様に検量線を引くことができた〇 なお、測定精度を高めるためには、測定すべき抗原の濃
度によって、酵素標識抗原と抗体の使用量を変える必要
があった。例えば、被測定物の抗原と酵素標識抗原はほ
ぼ同一濃度が好ましく、また抗体の量は酵素標識抗原と
被測定物の抗原の和に等しいか、あるいは若干大きい付
近が適切であった０ 以上の実施例では競争反応の例を示したが、別の例とし
て、まず全ての抗体に酵素標識抗原を結合させた後、被
測定物の抗原を加えて平衡的に置換反応させて測定する
場合にも、同様に測定することができた。
発明の効果
以上のように、本酵素免疫センサを用いれば、従来例の
ような水洗、液層の操作を必要としないので、簡便に極
微量の有機物が分析、検知できる。
ような水洗、液層の操作を必要としないので、簡便に極
微量の有機物が分析、検知できる。
第１図は本発明の一実施例における酵素免疫センサの構
成を示す概略断面図、第２図は本発明による酵素免疫測
定法を用いて得た分析結果を示すグラフである。 １・・・・・・酵素免疫電極、３・・・・・・対極、６
・・・・・・照合電極。 代理人の氏名 弁理士 中 尾 敏 男 ほか１名第１
図 第２図
成を示す概略断面図、第２図は本発明による酵素免疫測
定法を用いて得た分析結果を示すグラフである。 １・・・・・・酵素免疫電極、３・・・・・・対極、６
・・・・・・照合電極。 代理人の氏名 弁理士 中 尾 敏 男 ほか１名第１
図 第２図
Claims (2)
- （１）酵素活性を指標とし、抗原抗体反応を利用して抗
原の量を測定する方法であって、抗体を固定化した電極
を入れた電解液中に既知量の酵素標認抗原と測定すべき
抗原を加えて競争反応によって両抗原の存在量に比例し
た割合で電極上の抗体と結合させ、この電解液中に配し
た対極および照合電極を用いて、上記の酵素免疫電極と
対極の間での非定常電解を行って前記電極に固定した酵
素のみの活性による分極特性を求め、この時の瞬間電流
値あるいは電位変化の大小より抗原の量を測定すること
を特徴とする酵素免疫測定法。 - （２）電極に固定化させたすべての抗体に予め酵素標識
抗原を結合させ、この電極を電解液中に入れ、ついで測
定すべき抗原を加えて酵素標識抗原と置換反応させ、平
衡状態での電極に結合した酵素のみの活性による分極特
性を測定することを特徴とする特許請求の範囲第１項記
載の酵素免疫測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62098934A JPS63263460A (ja) | 1987-04-22 | 1987-04-22 | 酵素免疫測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62098934A JPS63263460A (ja) | 1987-04-22 | 1987-04-22 | 酵素免疫測定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63263460A true JPS63263460A (ja) | 1988-10-31 |
Family
ID=14232954
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62098934A Pending JPS63263460A (ja) | 1987-04-22 | 1987-04-22 | 酵素免疫測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS63263460A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5063081A (en) * | 1988-11-14 | 1991-11-05 | I-Stat Corporation | Method of manufacturing a plurality of uniform microfabricated sensing devices having an immobilized ligand receptor |
| US5328847A (en) * | 1990-02-20 | 1994-07-12 | Case George D | Thin membrane sensor with biochemical switch |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60242361A (ja) * | 1984-01-26 | 1985-12-02 | セロノ・デイアグノスチツクス・リミテツド | 酸化還元酵素を用いる化学的分析法 |
-
1987
- 1987-04-22 JP JP62098934A patent/JPS63263460A/ja active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60242361A (ja) * | 1984-01-26 | 1985-12-02 | セロノ・デイアグノスチツクス・リミテツド | 酸化還元酵素を用いる化学的分析法 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5063081A (en) * | 1988-11-14 | 1991-11-05 | I-Stat Corporation | Method of manufacturing a plurality of uniform microfabricated sensing devices having an immobilized ligand receptor |
| US5328847A (en) * | 1990-02-20 | 1994-07-12 | Case George D | Thin membrane sensor with biochemical switch |
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