JPS63238023A - 抗腫瘍イムノトキシン及び腫瘍壊死因子を含んで成る医薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 この発明は、温血動物の癌の処置における、腫瘍壊死因
子（ＴＮＦ）と適切なイムノトキシンとの組合わせの使
用に関する。特に、この発明は、これらの成分の同時投
与又は個別の投与を用いての、咄乳頻における治療的又
は予防的抗−腫瘍処置に関する。

〔従来の技術〕

イムノトキシン及びＴＮＦの両者は温血動物において抗
腫瘍活性を生じさせることが証明されている０強力な化
学療法剤を用いるすべて処置において毒性の副作用が生
ずるであろう。投与量レベルができるだけ低く保持され
る場合これらの副作用は最小にされるであろう。ＴＮＦ
及び適当なイムノトキシンの組合わせを用いることによ
り、各成分の投与量レベルを低下せしめることができ、
従って、そうでなければ通常使用される投与量レベルに
おいて遭遇されるかもしれない毒性が回避される。

ＴＮＦそれ自体は、言うまでもなく、腫瘍の増殖を阻止
しそして腫瘍細胞を殺すその能力のために注目される。

ＴＮＦ自体についての広範な文献が存在し、そして天然
のＴＮＦ蛋白質をコードする遺伝子がクローン化されそ
して発現されている。

腫瘍壊死因子はまず、Ｃａｒｓｗｅｌ１等Ｐｒｏ、Ｎａ
ｔｌ。

Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＩＪＳＡ（１９７５）、　７２：３
６６６　３６７０により、マウスにおいて増殖する場合
に、化学的に形質転換された腫瘍細胞の壊死を惹起する
、エンドトキシンにより誘導される血清因子として記載
された。

ネズミＴＮＦの精製された調製物がインビトロにおいて
ネズミ及びヒトのセルラインに対して試験された（Ｉｌ
ａｒａｎａｋａ、に、及びＳａｔｏｍｉ、Ｎ、、　７ム
且Ｊ到−（１９８１）　５１　：　１９１　）。正常細
胞とは対照的に、両種からのＩｌ！ｉ瘍細胞系はマウス
ＴＮＦの細胞毒性活性に対して感受性である。さらに、
ネズミＴＮＦはヌードマウスにおけるヒト移植腫瘍及び
マウス移植腫瘍の両者に対して毒性であることが報告さ
れた。Ｈａｒａｎａｋａ、　Ｋ等１ｎｔ、Ｊ、Ｃａｎｃ
ｅｒ（１９８４）３４：　　２６３−２６７を参照のこ
と。ヒトＴＮＦはまた新生物細胞（ｎｅｏｐｌａｓｔｉ
ｃ　ｃｅｌｌｓ）　　に対して細胞変性的であることが
知られており、そして組換形で生産されているｍ　　Ｐ
ｅｎｎ１ｃａ等、Ｎａｔｕｒｅ　（１９８４）３１２゜
２７２２７９　；　５ｈｉｒａｉ等、Ｎａｔｕｒｅ　（
１９８５）　３１３　：　８０３８０６　；　Ｗａｎｇ
等、５ｃｉｅｎｃｅ　（１９８５）　２２８　：　１４
９−１５４を参照のこと。

ラビットＴＮＦのクローニングが、１９８５年６月２６
日に公開されたＨＰ　１４６　、０２６（大日本製薬）
、及び１９８５年７月１７日に公開されたＥＰ　１４８
　、３１１（旭化成工業）に開示されている。１５１個
及び１５５個のアミノ酸（ヒト天然形よりも２個及び６
個少ない）を有するヒトＴＮＦのクローニングが、１９
８５年９月２５日に公開されたＥＰ　１５５　、５４９
（大日本製薬）に開示されており、そして１５５個のア
ミノ酸を有するヒトＴＮＦが、１９８５年１１月２０日
に公開されたＧＢ　２．１５８，８２９Ａに対応する、
１９８５年１０月１６日に公開されたＵＰ　１５８．２
８６　（旭化成工業）に記載されている。成熟Ｔ　Ｎ　
Ｆ　（１５７アミノ酸）及びその種々の変形体（ミニ−
ティン）が１９８６年１月１５日に公開されたＩＭＰ　
１６８．２１４　（ゼネンテック）、及び１９８５年３
月３日に出願され、１９８６年４月に公開されたＰＣＴ
　ＵＳ８５１０１９２１（シタス）に開示されている。

腫瘍に対する潜在的なイムノトキシンについての文献も
また広範である。はとんどの造成物において、腫瘍特異
性は、腫瘍表面抗原と免疫反応性である抗体又はその断
片により提供される。腫瘍抗原に対して生じたポリクロ
ーナル血清及びモノクローナル抗体調製物の両者を使用
した。イムノトキシンの残りの部分は細胞変性成分であ
って、これは広範囲の候補から選択され得る。

種々の腫瘍に対する抗血清及びモノクローナル抗体調製
物が調製されており、そして当業界において知られてい
る。特に、ヒト乳癌細胞に選択的に結合するネズミモノ
クローナル抗体が調製されている。リジンＡに結合して
イムノトキシンを形成した場合、これらの抗体は、ＭＣ
Ｆ　−７、ＣＡＭＡ　−、、５ＫＢＲ−３又はＢＴ　−
２０細胞の少なくとも１つに対して約１０ｎＭ未満のＴ
Ｃ（Ｄ　５０％〔対照（未処理）蛋白質合成の５０％〕
をもたらす組織培養阻害投与量を示す。これらの抗体は
、１９８５年８月２８日に公開されたＥＰＣ特許公開１
１ｈ１５３．１１４により詳細に記載されている。

類似のネズミモノクローナル抗体がイメージングのため
に使用された。これらの抗体は血液細胞に結合せず、そ
して少なくとも０．２５の乳癌結合範囲を有する（すな
わち、これらは試験された乳癌の２５％以上に結合する
）。これらの抗体は前記の抗体のほとんどを包含し、そ
して１９８５年１０月１１日に公開されたヨーロッパ出
願公開ＥＰ　２２０　、８５８に記載されている。

ヒトにおける悪性腫瘍を処置するために２以上の抗−瘍
剤を一般に使用する組合せ化学療法は現在研究において
そして臨床的に使用されている。

抗癌剤は抗代謝剤、アルキル化剤、抗生物質、一般毒等
であることができる。はとんどの癌、例えば癌、黒色腫
、リンパ腫、及び肉腫に対する相乗的細胞変性効果を得
るため、並びに薬剤耐性細胞の出現を減少し又は排除し
そして各薬剤の副作用を減少するための試みにおいて、
薬剤の組み合わせが投与される。Ｔｈｅ　Ｐｒｅｃｌｉ
ｎｉｃａｌ　ＳｃｒｅｅｎｉｎｇＬａｂ、　ＢＲＭＰの
Ｔａ１ｎ＋ａｄｇｅ博士は、マウスにおいて転移疾患を
治療するためにＴＮＦ及びｒ−［ＦＮを使用することに
よる増強効果を１９８６年に報告した。

１９８５年１月２３日に公開されたＥＰ公開１３１　、
７ｓ９（スローン・ケソタリング癌研究所）は、マウス
における種々の腫瘍を治療するためのＴＮＦとλＩＦＮ
との相乗効果を開示している。しかしながら、本発明者
は、適当なイムノトキシンとＴＮＦとの組合わせによる
相乗効果の証明を全く知らない。

〔発明の概要〕

本発明は、イムノトキシン及びＴＮＦｆｉ製物の組合わ
せを交互に又は同時に投与することによる、個々のイム
ノトキシン及びＴＮＦの投与量を低下せしめるだめの手
段を提供する。これらの調製物は組み合わせて投与され
た場合、それぞれ単独で投与した場合の効果の合計より
も実質的に高い治療及び／又は予防効果を腫瘍組織に対
して有する。

組み合わせて投与された場合、各成分の投与レベルは実
質的に低下するため、低い毒性副作用又は他の不所望の
副作用を伴って同じ効果をもたらす。

従って、１つの観点においてこの発明は、適当なイムノ
トキシンとＴＮＦの組合わせの投与による、温血動物対
象中の腫瘍の治療的又は予防的処置の方法に向けられる
。他の観点において、この発明は、イムノトキシン及び
ＴＮＦの組合せを含有する医薬組成物、及びこれらの２
つの薬剤のための特定の投与形態に関する。

この発明の医薬は、マウス、ラビット、ヒトを含む霊長
類、鳥類、又は他の温血動物種に、治療されるべき腫瘍
に対して適切なイムノトキシン及びＴＮＦの薬理学的に
有効な量において投与される。２つの活性成分は、いず
れも化学的に影否を受けずそして両者が生物活性を維持
する限り、投与前に生体外で混合され得る。しかしなが
ら、これらは交互に又は同時に対象又は患者に別々に投
与することができ、しかしいずれにしても同じ処方の一
部としてである。

以下余白 〔発明の具体的な記載〕 Ａ、定−且 この明細書において“治療的”処置とは、Ｍ！ＩＩ瘍罹
患が決定された後に、当業界において知られている任意
の方法を用いて、そして腫瘍罹患の低下又は除去を伴っ
て、対象に対して本発明の組合わせを投与することを意
味する。

“予防的”処置とは、治療的処置が行われた後に腫瘍罹
患の再発を防止するための投与を意味する。

“腫瘍罹患”とは、例えば腎臓細胞癌カポシ肉腫、慢性
白血病、乳癌、肉腫、鳥類癌、直腸癌、咽喉癌、黒色腫
、結腸癌、膀胱癌、肥満細胞腫、肺癌、及び胃腸管又は
胃癌のごとき細胞性疾患を包含するあらゆる腫瘍性疾患
を意味する。この発明の方法において、標的腫瘍罹患は
有利には結腸癌、黒色腫、腎細胞癌、肺癌、腺癌、乳癌
、又は卵巣癌であり、最も有利には乳癌及び／又は卵巣
癌である。

“薬理学的に有効な量”とは、ｍ瘍罹患に対する治療的
及び／又は予防的効果を生じさせるために十分な、本発
明の方法及び医薬中の活性成分の合計量を意味する。言
うまでもなく、単独で投与される個々の活性成分に適用
される場合、“薬理学的に活性な量”はその単独成分に
関する。しかしながら、この発明の組合わせが使用され
る場合、“薬理学的に有効な量”は、組合せの治療的又
は予防的効果をもたらす調製物中の合計量に関する。

“医薬として許容される賦形剤”とは、活性成分の有効
性を妨害せず、且つ投与対象に対して毒性でない賦形剤
に関する。

“対象腫瘍細胞への選択的結合”とは、正常な健全な細
胞ではなく腫瘍細胞に優先的に結合するイムノトキシン
の能力に関する。この選択的結合は、通常は抗体である
か又は抗体に由来するイムノトキシンの部分、例えば免
疫反応性断片により付与される。広範囲の抗体が従来技
術において入手可能であり、この従来技術は前に腫′ｆ
！Ｊｊ罹患の定義において挙げた種々の腫瘍を含む多数
の腫瘍について選択的な抗体を提供する。処置されるべ
き腫瘍罹患のために適切なイムノトキシンを作製する場
合に、これらの抗体又°はその断片の間で選択が行われ
る。

アメリカン・タイプ・カルチュア・コレクション（ＡＴ
ＣＣ）、ロックビル、ＭＤ、米国は、標的腫瘍に対する
モノクローナル抗体を生産する多数のセルラインを保管
している。例えば、ヒト非−小細胞肺癌に対するモノク
ローナル抗体を生産するセルラインには７０３０４　（
＾ＴＣＣ隘ＨＢ８３０Ｌとして寄託されている）が含ま
れる。ヒト黒色腫細胞に対するモノクローナル抗体を生
産するセルラインには７０４Ａ１　（ＡＴＣＣ隘）ＩＢ
８３０２として寄託されている）が含まれる。小細胞癌
に対するモノクローナル抗体を生産するセルラインには
ＡＴＣＣＨＢ８４６２及びＡＴＣＣＨＢ８７１１として
寄託されているセルラインが含まれる。管起原のすい臓
癌に対する抗体を生産するセルラインにはＡＴＣＣ１１
８８５０４として寄託されているハイブリドーマが含ま
れる。胃、結腸及びすい臓の腺癌上に存在するエピトー
プに、並びにＣ５ＬＥＸＩとして知られる鳥類癌、乳癌
及び食道癌に結合する抗体を生産するセルラインにはＡ
ＴＣＣＩＩＢ８５８０として寄託されている。

例示された抗体、例えば例示されたモノクローナル抗ヒ
ト乳癌抗体に関して、“機能的同等物”なる語は、標準
的イムノアッセイ法において、例示されたモノクローナ
ル抗体と交叉反応する抗体調製物に関する。交叉反応性
は、同じエピトープに、又は例示された抗体により結合
されるエピトープに十分に接近して位置する領域に結合
する結果である。

“適切なイムノトキシン”は、抗体又は免疫的に反応性
の抗体断片と細胞変性成分との接合体に関し、ここで、
使用される該抗体又はその断片は腫瘍罹患細胞に選択的
に結合し、そしてそれがトキシンと接合している状態で
もそうである。従って、“適切なイムノトキシン゛は、
正常細胞との実質的な結合を伴わないで、特定のタイプ
の腫瘍に選択的に結合する。イムノトキシンの細胞変性
成分には、細菌又は植物由来の毒性物質又は酵素的活性
物質が含まれる。酵素的活性物質にはジフテリアトキシ
ンＡｔｆｆ、ジフテリアトキシンの非結合断片、エキソ
トキシンＡＩＭ（シュードモナス・７　Ｘ　ルー￥　／
　−ｆ　（Ｐｓｅｕｄ吋姐且　且匹旺匣且）カラのもの
〕、リジンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシン（ｍｏｄｅ
ｘｃｃｉｎ）　　Ａ　Ｉ￥、α−サルシン、アレウリテ
ス・フォリディ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ　　ｆｏｒｄｉｉ
）蛋白質、ジアンチン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）蛋白質、フ
ィトラッカ・アメリカーナ（ハ旦１Ｕ姐ａｍｅｒｉｃａ
ｎａ）蛋白質（ＰＡＰＩ　、　　ＰＡＰＩＩ、及びＩ’
ＡＰ−３）、モモルジカ・カランチア（ｍｏｍｏｒｄｉ
ｃａ　　ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン（ｃｕ
ｒｃｉｎ）、クロチン（ｃｒｏＬｉｎ）、サボナリア・
オフィシナリス（ｓａｐｏｎａｒｉａ　ｏｆｆｉｃｉｎ
ａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリフ
トシン、フェノマイン、及びエンドマイシンが含まれる
。リジンＡ鎖、ジフテリアトキシンの非結合活性断片、
アブリンＡｔＡ、及びＰＡＰ　Ｉｔが好ましく、リシン
Ａ鎖が最も好ましい。

“交互”処置法とは、少なくとも１セツトのＴＮＦ及び
イムノトキシンの個々の投与の間に少なくとも２４時間
の時間的間隔がある組合せ投与療法を意味する。“同時
的”処方においては、各別々のＴＮＦ投与が各イムノト
キシン投与の２４時間以内である。言うまでもなく、こ
れらの薬剤の混合物を用いる処置法は“同時的”である
。

Ｂ、二数ｍ附蔵 この明細書に記載するイムノトキシン及びＴＮＦは独立
に使用することができるが、しかしながら、この発明に
従えば、ＴＮＦ又は適切なイムノトキシンのいずれかの
効果が他方の存在により相乗的に増強される。すなわち
、それぞれの抗腫瘍活性は、処理を行う際の同じ処置法
における両因子の使用により顕著に上昇することができ
る。従って、これらの両者を含有する製剤は特にこの発
明の方法の実施において有用である。組合せ療法の投与
レベルは言うまでもなく、いずれかが単独で投与される
場合に望ましいレベルよりも低い。

この発明の実施のための組合せ又は個々の成分は、蛋白
質性物質の投与のために当業界において標準的な常法に
より製剤化することができる。例えば、ｋ１皿封絋鉱ハ
肛懸匹１旦１」ユニ憇ｈマソク・パブリジング社、イー
ストン、ＰＡ、ｉ新版を参照のこと。注射による投与が
好ましく、製剤には溶液又は懸濁液、乳剤、あるいは注
射可能に再構成するための固体組成物が好ましい。適当
な試剤には、例えばリンゲル液、バンク液、水、食塩水
、グリセリン、グルコース溶液、等が含まれる。

この発明の方法は、マウス、ラビット、霊長類、鳥類、
又は他の温血動物種を含む温血動物宿主に、薬理学的有
効量のＴＮＦ及び処置されるべき腫瘍に対して適切なイ
ムノトキシンを（組み合わせて）投与することを含む。

２種類の活性成分を、いずれも化学的に不都合な影口を
受けずそして両者が活性なままである限り、投与前にイ
ンビトロで混合することができる。しかしながらこれら
は、交互に又は同時的に、しかしいずれにしても同じ処
置方法の一部分として、別々に患者に投与することがで
きる。例えば、イムノトキシン及びＴＮＦを日毎に代る
代る、２〜３日に１回置時に投与することができる。

投与は任意の適当な方法により行われ、これには非経口
投与、例えば静脈内投与、動脈内投与、筋肉内投与、皮
下投与、又はこれらの組合わせにより投与することがで
きる。対象は例えば特定の腫瘍のためには局所的に、又
は全身的に投与され得る。投与量及び治療方法は腫瘍の
種類、特定の剤形、及び投与態様に依存する。投与は宿
主に対して毒性でない量で行い、毒性は種々の副作用、
例えば発熱、悪感、及び全身倦怠、等の程度及びタイプ
によりモニターすることができる。

典型的な療法においては、ＴＮＦ及びイムノトキシンは
反復投与により、通常は数日又は数週間にわたって、あ
るいは腫瘍が完全に退縮するまで投与される。°１つの
典型的な療法は、ＴＮＦ及びイムノトキシンの組み合わ
せを第１日月（０日）に投与し、次に３日目及び６日目
に両成分の類似の投与を行う。これに代えて、例えばＴ
ＮＦを０゜２．４、及び６日目に投与し、他方適切なイ
ムノトキシンを１．３．５及び７日目に投与する。これ
らの反復投与のための適当な投与量範囲は、ＴＮＦにつ
いては投与当り０．１　ｎ／　ｋｇ〜３　ｍｇ／　ｋｇ
の範囲であり、そして適切なイムノトキシンについては
投与当り１０ｘ／ｋｇ〜３■／　ｋｇの範囲である０画
成分について宿主及び腫瘍の種類は非常に重要であるか
ら、これらの投与量範囲は言うまでもなく単なる目安に
過ぎず、さらに適切なイムノトキシンについては投与量
は、腫瘍に選択的に結合する成分の種類及びトキシンの
種類に依存するであろう。−最に、腫瘍罹患細胞タイプ
に対して結合成分が選択的である程、イムノトキシンは
少なくてよく、さらに、毒性成分の毒性が強い程、量が
少なくてよい。

Ｃ０盾性威分■週１ この発明の組成物において活性成分として有用なＴＮＦ
及びそのミューティンは、それらを生産する細胞からの
直接単離により、又は前記した組換技法により製造され
る０Ｍｉ換形のＴＮＦの使用は、前記の刊行物に記載さ
れており、そして特に有利である。ＴＮＦ蛋白質は原核
生物発現系及び真核生物発現系の両方において便利に製
造することができる。１５７個のアミノ酸を含有する“
成熟”ヒトＴＮＦの完全なアミノ酸配列、及びその組換
生産の記載は−ａｎｇ、Ａ、等、５ｃｉｅｎｃｅ　（１
９８５）　２２８　：１４９−１５３により与えられて
いる。この組換生産された成熟ヒ）ＴＮＦは、処置され
るべき対象がヒトである場合、この発明の組合わせのＴ
ＮＦ成分として特に好ましい。さらに、この成１ｔｊＴ
ＮＦの特定のミューティン形、すなわちＮ−末端から４
個又は８個のアミノ酸が欠けているミューティンも好マ
シク、これらはＰＣＴ／１ｌｓ８５１０１９２１　ニ記
載されている。ヒト以外の動物種のための好ましいＴＮ
Ｆは典型的には、対応する種に由来するＴＮＦである。

イムノトキシンの製造もまた当業界においてよく知られ
ている。接合体の抗体成分は処置されるべき腫瘍の種類
により選択され、そしてトキシンは対象の種類及び考慮
されるべき特定の腫瘍に注意を払って選択される。とも
かく、抗体部分はポリクローナルもしくはモノクローナ
ル調製物のごとき全体抗体でもよく、又は抗体の免疫的
に活性な断片、例えばＦａｂ’　、Ｆａｂ　ｓ又はＦ　
（ａｂ）　を部分であってもよい。すべての場合におい
て、これらの材料は対象腫瘍に選択的に結合するように
選択される。従って、言うまでもなく、乳癌が治療され
るべき場合には抗乳癌抗体が選択され、卵巣腫瘍が対象
であれば抗卵巣腫瘍抗体が選択される、等々であろう。

トキシンは前記の種々の材料のいずれであってもよく、
そして当業界においてよく知られた手段により所望の抗
体に接合され得るものである。これらの手段には三官能
リンカ−及び脱水剤の使用が含まれる。このようなイム
ノトキシンの製造技法は、１９８５年２月８日に公開さ
れたＥＰ公開Ｎ１１５３．１１４に記載されている。

Ｄ、Ｍ 次の例は、この発明を説明するものであって、限定する
ことを意図するものではない。これらの例は、後で使用
するモノクローナル抗体２６０Ｆ９が結合することがで
きるヒト乳腺癌由来の腫瘍セルラインであるＭＸ−１を
使用するヌードマウスにおける腫瘍モデル系を用いる。

このモデル系は当業界においてよく知られている。使用
される特定のイムノトキシン（ＩＭＴ）は２６０Ｆ９−
　ｉ　ｔ　−５ｒＲＴ＾であり、このものは、組換生産
された可溶性のりシントキシンＡ　（ｓｒＲＴＡ）に２
−イミノチオラン（ｉ　ｔ）を用いて接合されたヒト抗
乳癌抗体２６０Ｆ９を含有する。このモノクローナル抗
体２６０Ｆ９は、１９８５年２月８日に出願されたヨー
ロッパ特許出願Ｎ１８５．３００８７７．９に記載され
ている。さらに、この抗体を生産するセルラインはアメ
リカン・タイプ・カルチュアー・コレクションにＡＴＣ
ＣＮ１１（８８４８Ｂとして寄託されている。可溶性リ
シントキシンＡは、１９８６年１１月１３日に出願され
たヨーロッパ特許出願１’ｈ８６．３０８８７７．９に
記載されている。２−イミノチオランを用いる接合は前
記のＢＰ、公開Ｎａ１５３．１１４に記載されている。

これらの例において使用されたＴＮＦは、Ｗａｎｇ＋Ａ
０等、５ｃｉｅｎｃｅ（１９８５）２２８　：　１４９
−１５３に記載されている成熟ＴＮＦのＮ−末端アミノ
酸８個を欠く組換生産されたミューティンであった。Ａ
ＴＧにより先行される、このミューティンをコードする
ｃＤＮＡが適当な発現ベクターを用いてＥ、コリ中で発
現され、そして得られた蛋白質が標準的技法を用いて精
製された。精製された蛋白質は凍結乾燥され、そしてこ
の形態で貯蔵された。これらの例において使用するため
、使用前４日以内にＰＢＳ中に再溶解され、そして４℃
にて貯蔵された。このＴＮＦは蛋白質■当り６ｐｇのエ
ンドトキシンを含有していた。

ＭＸ−１腫瘍を皮下注射されたマウス群を用い、そして
ＴＮＦ及び／又は２６０Ｆ９−　ｉ　ｔ　−ｓ　ｒＲＴ
Ａの静脈内注射を用いる種々の処置方法を下記のように
して行った。すべての場合において、対象のｌＩｉ！瘍
の縮小及び寿命の延長について、組み合わせは相加効果
より高い効果を示した。

氾 ７日日の皮下ＭＸ−１腫瘍を有する無胸腺マウス（群当
り５匹）を−８７ＮＦ　ミューティンを用いて、投与当
り２５ｎ／ｋｇ及び１２５ｎ／ｋｇで、３日間隔で合計
３回（ｑ３ｄＸ３）０日から開始して、そして投与当り
３．５　ｎ及び７鱈（これは１７５又は３５０屑／　ｋ
ｇに相当する）のイムノトキシンで、２日間隔で合計６
回（ｑ２ｄＸ　６　）　、やはり０日に開始して、静脈
内処置した。

ＩＭＴ（３，５）　　１．８６　１．２Ｌ　　Ｌ７．０
　４３．０１１５（ｄ８）　　　　　（９）＃σ、０）
　　Ｌ、０２　１．１４　７．７　２５．９２１５（ｄ
４〕３１第１表は、ＴＮＦ又はイムノトキシン（表中で
はＩＭＴとして示す）単独及びこれらの組合わせについ
て、１４Ｂ目及び２１Ｂ目の腫瘍の重量の変化（ΔＴＷ
）により結果を示す、毒性を示すものとして体重の変化
（ΔＢＷ）も記録した。これらは、最終腫瘍重量又は体
重と対応する最初の値との比として与えられる。

第１表に示すように、腫瘍はすべての場合に増殖を続け
たが、ＴＮＦ又はイムノトキシンを投与した場合、増殖
速度は非常に低下した。組合せ投与の効果は相加的より
大であった。すなわち、例えば、２１Ｂ目に、非処置に
ついては腫瘍体重の増加は４７．０　ｇであり、ＴＮＦ
単独については４５．０又は４０．０であり；そしてイ
ムノトキシン単独については４３．０又は２５．９であ
った。しかしながら２５ｎ／ｋｇのＴＮＦ及び７．　Ｏ
ｐｇのイムノトキシンの両者を投与した場合、腫瘍増殖
の増加はわずかに３．２であった。

炎ム 他の処置方法において、ＴＮＦ及びイムノトキシンの同
時投与の効果と交互投与の効果を比較した。すべての投
与は■与えられた。

薬剤の同時投与の処置方法において、投与当りＴＮＦを
２５μｇ／ｋｇ又は５０ｎ／ｋｇのレベルで与え、他方
イムノトキシンは投与当り３．５犀又は７、　Ｏｎのレ
ベル（これは１７５１ｒｇ／ｋｇ又は３５０ｕｇ／ｋｇ
に相当する）で与えた。交互投与の処置方法においては
、同じ合計投与量を与えたが、しかしＴＮＦは各投与に
おいて５０ｎ／ｋｇ又は１００Ｉ！ｇ／ｋｇを与えて同
じ合計投与レベルとした。各場合に陽性対照としてサイ
トキサン（ｃｙｔｏｘａｎ）を投与し、陰性対照として
ＰＢＳを投与し、そして例１と同様に各群５匹のマウス
とした。

同時処置法においては、各薬剤をｑ２ｄＸ６、すなわち
２日ごとに６投与で与え、他方交互投与においては、Ｔ
ＮＦをＯ日日から始めてｑ４ｄＸ３で与え、そしてイム
ノトキシンを１日日から始めてｑ２ｄＸ６で与えた。す
なわち、ＴＮＦは４日こ゛とに合計３回投与し、他方イ
ムノトキシン（ＩＭＴ）は２日間隔で６回投与した。

これらの各処置方法の結果を第２表及び第３表に示す、
結果を腫瘍重量によって表示し、死亡数もまた示し、そ
して毒性の指標として体重の変化を示す。ＴＧＩ（％）
は、ＰＢＳ陰性対照と比較した腫瘍増殖阻害の％を示す
。

第２表に示すように、高ＴＮＦ投与においては単に相加
的結果が得られるが、低ＴＮＦ投与レベルにおいては腫
瘍増殖阻害の％（ＴＧ１％）は相加的よりわずかに高い
。これは、低投与量において最適効果が達成される相乗
的挙動の場合に共通的である。

一群エ　　　ΔＢＷ　　死−立　　ΔＴＷ　　ＴＧＩ（
％）対照（ＰＢＳ）　　　　１．１６　　０１５　　　
２５．３　　０第３表において、両ＴＮＦレベル（対応
するＩＭＴ単独のレベルは第２表に示す）において、相
加的より実質的に高い結果が得られた。

Ｃ裏下（砲し１轡ツ 望」し表 ２群−ΔＢＷ　　ｌ　　　ΔＴＷ　　ＴＧＩ（％）対照
　　１．１１　、０１５　２．４　９０．５（サイトキ
サン） （ＴＮＦ５０　＋　ＩＭＴ７．０、及びＴＮＦｌｏｏ　
＋　ＩＭＴ３．５ニー’）　イテのΔＴＷは生存動物に
基いて決定した。）これらの同時投与及び交互投与の比
較を第４表に示す。これは、使用された８個の投与レベ
ルの組合わせにおける腫瘍重量の変化の平均を示す。

以下余自 第−（−表 ＩＭＴ投与ｆｆｉ　　３．５　　　　　　７．０　　　
　　　３．５　　　　　　７．０同時投与　　詔、３（
０１５）　　　　１１．８（２１５）　　　　５．９（
０１５）　　　　３．８（０１５）交互投与　　３．８
（０１５）　　　　４．４（３１５）　　　　２．５（
４１５）　　　　５．２（１１５）この結果はＴＮＦの
低投与量レベルにおいて最も顕著であり、この場合交互
処置法が卓越した結果をもたらすことが明らかであり、
同時投与と比較して、腫瘍重量の変化の劇的な減少が示
される。

しかしながら、この結果はまた、交互投与に比べて同時
投与は幾分毒性が少ないことを示している。

以下余白

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、温血動物における腫瘍罹患の治療的又は予防的処置
   法であって、腫瘍壊死因子と、腫瘍罹患細胞に選択的に
   結合する適切なイムノトキシンとの組合せの薬理学的有
   効量を前記動物に投与することを含んで成る方法。 ２、腫瘍壊死因子とイムノトキシンとの組合せを単一の
   組成物として、又は別々に投与する、請求項１に記載の
   方法。 ３、腫瘍壊死因子とイムノトキシンとを交互に又は同時
   に、別々に投与する、請求項１に記載の方法。 ４、前記イムノトキシンがリシンＡトキシンを含んで成
   る、請求項１に記載の方法。 ５、腫瘍が乳癌であり、そして前記イムノトキシンが２
   ６０Ｆ９又は機能的に同等な抗体、あるいは抗体断片を
   含んで成る、請求項１に記載の方法。 ６、対象がヒトであり、、そして前記腫瘍壊死因子がヒ
   ト腫瘍壊死因子である、請求項１に記載の方法。 ７、前記の組合せが静脈内に投与される、請求項１に記
   載の方法。 ８、前記組合せが反復投与で投与される、請求項１に記
   載の方法。 ９、前記組合わせが反復投与で投与される、請求項３に
   記載の方法。 １０、投与当りの腫瘍壊死因子の量が約０．１μｇ／ｋ
   ｇ〜３ｍｇ／ｋｇであり、そして投与当りイムノトキシ
   ンの量が約１０μｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇである、請求
   項８に記載の方法。 １１、前記ヒト腫瘍壊死因子が成熟ヒト腫瘍壊死因子、
   Ｎ−末端の４個のアミノ酸を欠くミューテイン、及びＮ
   −末端の８個のアミノ酸を欠くミューテインから選択さ
   れたものである、請求項６に記載の方法。 １２、前記腫瘍壊死因子が組換生産されたものである、
   請求項１に記載の方法。 １３、腫瘍に罹った細胞に選択的に結合する適切なイム
   ノトキシンと腫瘍壊死因子との薬理学的に有効な混合物
   を含んで成る、温血動物における腫瘍罹患の予防的又は
   治療的処置のための組成物。 １４、医薬として許容される賦形剤をさらに含んで成る
   請求項１３に記載の組成物。 １５、前記イムノトキシンがリシンＡトキシンを含んで
   成る請求項１３に記載の組成物。 １６、前記腫瘍壊死因子が組換生産されたヒト腫瘍壊死
   因子である請求項１３に記載の組成物。 １７、前記ヒト腫瘍壊死因子が成熟ヒト腫瘍壊死因子、
   Ｎ−末端の４個のアミノ酸を欠く成熟ヒト腫瘍壊死因子
   のミューテイン、及びＮ−末端の８個のアミノ酸を欠く
   成熟ヒト腫瘍壊死因子のミューテインから選択されたも
   のである請求項１６に記載の組成物。