JPS63235865A - 成分の分析方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、亜硝酸イオンの影響を回避した成分、特に生
体試料中の該成分の分析方法に関する。

〔従来技術〕

亜硝酸イオンは比較的不安定なイオンであり、酸化性と
還元性を有するため、試料中に存在する場合には該試料
中の他の成分の測定時に悪影習を及ぼすことが往々にし
て見られた。例えば、残留塩素のｏ−トリジン法又はヨ
ウ素法による測定時、塩素イオンのチオシアン酸第二水
銀比色法による測定時、硝酸イオンのフェノールジスル
ホン酸法による測定時、リン酸イオンのモリブデン置注
による測定時、イオウのＮ、Ｎ−ジメチル−ｐ−フ二二
しンジアミン法による測定時、微量蛋白のクマシーブリ
リアントブルーＧ−２５０法、ピロガロールレッド−モ
リブデン酸錯体法、ブロムピロガロールレット−タング
ステン酸錯体法、ピロカテコールバイオレット−タング
ステン酸錯体法又はクマシーブリリアントブルーＲ法等
による測定時等に於ては、その発色を妨げたり、ｉ検値
を上昇させたりして定量或は定性反応を妨げ或は誤差を
生じさせる場合がしばしばあった。特に尿中の微量蛋白
の測定に於ては、その正常値と異常値の境界が蛋白濃度
としてｌ０ｍｇ／ｄ！付近であるため亜硝酸イオンによ
り４〜６＋ｎｇ／ｄ！の負誤差を生じることはその患者
の病態、病勢を判断する上で大きな問題となっていた。

従って、上記各種測定法を実施する際に、検体中に亜硝
酸イオンの共存が考えられる場合には、予め別途に゛検
体の盲検値を調べるか、或は亜硝酸イオンを予め例えば
過酸化水素、過マンガン酸塩等で酸化分解して除いた検
体を用いて測定を行わなければ実際には正確な値が得ら
れているとは言えない訳であ、るが、それを実施するに
は、例えば測定操作のステップ数の増加や操作の煩雑化
等を伴うため進んでこの方法を取り入れるには抵抗があ
り、より簡便でより効果的に亜硝酸イオンのＪＩＢを回
避できる新たな方法の出現が強く望まれていた。

〔本発明の目的） 本発明の目的は、上記した如き種々の測定法に於て、測
定値に影響を及ぼす亜硝酸イオンを簡便に、且つ反応操
作ステップ数の増加や操作の煩雑化等を伴わずに除去す
る方法を提供することにある。

〔発明の構成〕

上記目的を達成するため本発明は次の構成よりなる。

［亜硝酸イオンにより影響を受ける、成分の分析方法に
於て、亜硝酸イオンの影響を除くため分析用試薬に、下
記に）〜に）から成る群より選ばれた１種又は２種以−
ヒの含窒素有機化合物を添加してこれを行うことを特徴
とする成分の分析方法。

Ｕ）式−１ （但し、Ｒ１へＲ５は夫々独立してスルホン酸基、カル
ホキシル基、水酸基、スルホニルアミノ基、ハロゲン原
子、炭素数１〜４のアルキル基、ニトロ基又は水素原子
を示し、Ｒ６は炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜
４のヒドロキシアルキル基、アミノ基又は水素原子を示
す。）で示されるアニリン誘導体及びその可溶性塩類。

（ロ）式　−２ Ｒフ　−　ＮＨ−Ｒ” ［但し、Ｒ７及びＲ８は夫々独立して炭素数１〜４のア
ルキル基、炭素数１〜４のヒドロキシアルキル基、炭素
数１〜４のアミノアルキル基又は水素原子を示す（但し
、Ｒ７とＲ８が共に水素原子である場合を除く、）。］
で示される脂肪族アミン類及びその可溶性塩類。

（ハ）式−３ Ｒ９−ＮｔｌＮＨ２ （但し、Ｒ９は炭素数１〜４のアルキル基又は水素原子
を示す。）で示されるヒドラジン誘導体及びそのＩＪＩ
溶性塩類。

に）式−４ （但し、　ＩＩＩＱ〜Ｒ１２は夫々独立して水素原子、
炭素数１〜４のアルキル基又はフェニル基を示す。）で
示されるチオ尿素誘導体及びその可溶性塩類。」 即ち本発明者らは、分析用試薬（測定試薬）中に特定の
芳香族或は脂肪族の第１又は第２アミン、ヒドラジン誘
導体、もしくはチオ尿素誘導体を添加し、それと試料中
の亜硝酸イオンとを反応させてジアゾ化合物、アルコー
ル、ニトロソアミン、窒素等を生成させて亜硝酸イオン
の除去を行う場合には、試料中の目的とする成分の測定
には何等影晋を与えずに亜硝酸イオンの除去と該分析を
同時に行うことが可能であることを見出し本発明を完成
するに到った。

誘導体のＲＩ、　Ｒ５は夫々独立してスルホン／ｌｅＥ
＆、カルボキシル基、水酸基、スルホニルアミノ基、例
えば塩素、臭素、沃素等のハロゲン原子、例えばメチル
基、エチル基、プロピル基、ブチル基環炭素数１〜４の
アルキル基、ニトロ基又は水素原子を示し、Ｒ′は例え
ばメチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基環炭素数
１〜４のアルキル基、例えばヒドロキシメチル基、ヒド
ロキシエチル基、ヒドロキシプロピル基、ヒドロキシブ
チル基環炭素数１〜４のヒドロキシアルキル基、アミノ
基又は水素原子を示す。また、この可溶性塩類としては
アニリン骨格に係わる鉱酸塩（例えば塩酸塩、硫酸塩等
）の他にＲ１−Ｒ５で示されるスルホン酸基、カルボキ
シル基のアルカリ金属塩若しくはアンモニウム塩、或−
はＲ１−Ｒ５で示されるスルホニルアミノ基、Ｒｂで示
されるアミン基の部分に係わる鉱酸塩（例えば塩酸塩、
硫酸塩等）も含まれる。

本発明に係わるＲ’−Ｎｉｌ−８８で表わされる脂肪族
アミン類の８７及びＲ８は夫々独立して、例えばメチル
基、エチル基、プロピル基、ブチル基環炭素数１〜４の
アルキル基、例えばヒドロキシメチル基。

ヒドロキシエチル基、ヒドロキシプロピル基。

ヒドロキシブチル基環炭素数１〜４のヒドロキシアルキ
ル基、例えばアミノメチル基、アミノエチル基、アミノ
プロピル基、アミノブチル基環炭素数１〜４のアミノア
ルキル基又は水素原子を示す（但し、Ｒ７とＲ８か共に
水素原子である場合を除く、）６また、この可溶性塩類
としては、Ｒ７−ＮＨ−Ｒ８の−ＮＨ一部分に係わる鉱
酸塩（例えば塩酸塩、硫酸塩等）の他に、１（７又はＲ
８で示されるアミノアルキル基の部分に係わる鉱酸塩（
例えば塩酸塩、硫酸塩等）も含まれる。

本発明に係わるＲ　９−　Ｎ　ＩＩ　Ｎ　Ｉｔ□で表わ
されるヒドラジン誘導体の８９は例えばメチル基、エチ
ル基、プロピル基、ブチル基環炭素数１〜４のアルキル
基又は水素原子を示す。また、この可溶性塩類とは、Ｒ
”Ｎ＋１Ｎｌｈのヒドラジノ基の部分に於て鉱酸（例え
ば塩酸、ｍ酸等）との塩を形成しているものをいう。

チオ尿素誘導体のＲＩＯ〜１（１２は夫々独立して水素
原子、例えばメチル基、エチル基、プロピル基。

ブチル基環炭素数１〜４のアルキル基、又はフェニル基
を示す。また、この可溶性塩類とはその塩酸塩、硫酸塩
等の鉱酸塩をいう。

これら、本発明に係わる含窒素有機化合物の具体例とし
ては、例えばｍ−アミノ安息香酸ナトリウム、ｐ−アミ
ノサリチル酸、スルファニル酸、スルファニルアミド、
ｐ−アミノフェノール、Ｎ−メチル−Ｎ−エタノールア
ミン、フェニルヒドラジン、塩酸ヒドラジン、チオ尿素
、フェニルチオ尿素等が挙げられるが、特にこれらに限
定されるものではない。

本発明の分析方法は亜硝酸イオンの影響を除く目的で、
上記（イ）〜に）の化合物を分析用試薬（測定試薬）中
に添加する以外は測定（分析）対象に応じた自体公知の
測定試薬を用い、自体公知の測定法（分析法）に従って
測定（分析）を行うことで足りる。亜硝酸イオンの影響
を除く目的で用いられる上記仔）〜に）の化合物は通常
測定試薬中に０．００１〜５．０％、好ましくは０．Ｏ
２Ｎ２．５％存在するように添加される。上記化合物は
また、測定に係わる反応を阻害しない限り、これを２種
以上組み合わせて用いることも可能である。また、ステ
ップ数か増えるが、上記した化合物を水溶液として調製
し予め試料に添加して亜硝酸イオンを処理した後に、通
常の測定試薬を用い通常の測定方法に従って測定を行っ
ても全く問題ないことは言うまでもない。

本発明の方法により測定（分＃）可能な測定対象物とし
ては、例えば残留塩素、塩素イオン、硝酸イオン、リン
酸イオン、微量蛋白等が挙げられるが、これらに限定さ
れるものでないことは言うまでもない。

本発明の分析方法は、用手法による分析にも、機器分析
にも適用可能である。また、本発明の方法は簡便な試験
紙法や、反応試薬を含有させた多層分析シート（多層一
体型定］１分析フィルム）を使用する所謂乾式定量法に
も応用することができる。

以下に実施例により本発明を更に具体的に説明するが、
本発明はこれらにより何等限定されるものではない。

〔実施例〕

実験例１．　亜硝酸イオンとの反応性の検討〈検討方法
−工〉 ０．１Ｍ塩化ナトリウム・塩酸緩衝液（ｐＨ２，０）に
本発明に係わる化合物０．１％を溶解した試液３．０−
及び０．１％亜硝酸ナトリウム溶液５０４を加え室温で
一定時間放置後の溶液の着色具合を調べた。

・結　果 結果を表−１に示す。尚、着色したものに関しては、こ
れを実際の測定に用いた場合に、該着色の影響を受けな
い測定波長を併せて示した。

く検討方法−２〉 ・試　薬 ピロガロールレッド　　　　　　　　　　２５ｍｇモリ
ブデン酸アンモニウム　　　　　　３０ｍｇアラビアゴ
ム　　　　　　　　　　　　２０ｇ酒石酸　　　　　　
　　　　　　　　　　１ｇ上記物質を０．１Ｍグリシン
緩衝液ＩＩｌに溶解し、これに本発明に係わる化合物を
０．１％％となるように添加して、塩酸でｐＨを２．２
に調整し試薬とした。

・試　料 アルブミンを７５ｍｇ／ｄｌ含存する溶液を調製し、そ
れを二分して一方にのみ亜硝酸ナトリウムを０．１％と
なるように添加し、夫々亜硝酸イオン含有試料及び亜硝
酸イオン無含有試料とした。

・操作法 試薬３．０ｍｌに試料５０４を加えてよく混合し、室温
で２０分間放置後に、　６００ｎｍに於ける吸光度を測
定した。亜硝酸イオン無含有試料による吸光度をＥＦｉ
＋とし、亜硝酸イオン含有試料による吸光度をＦ、ｓ２
とした。

また、試料の代わりに精製水を用いて同様の操作を行い
得られた吸光度をＥｆｌｔとした。これらの値を用いて
次式にしたがって判定値Ｖを求めた。

Ｖ　＝　［（Ｅ　３２−　Ｅ　１１．）÷（ＥＳＩ　　
ＥＢＩ）］Ｘ　１００Ｖの値に応じて次のように記号で
表示した。

○：９０≦Ｖ △：５０≦ｖく９０ ｘ　　：　　５０＞Ｖ ・結　果 結果を表−１に示す。

比較実験例 実験例１゛に於ける本発明に係わる化合物に代えて、本
発明の範すに入らない含窒素有機化合物を用い、実験例
と全く同様の方法により亜硝酸イオンとの反応を調べた
。結果を表−１に示す。また含窒素有機化合物を全く添
加しない場合の結果も併せて表−１に示した。

表−１から明らかなように、本発明に係わる化合物は亜
硝酸イオンを効果的に除去することができるが、同し含
窒素有機化合物でも本発明の範躊に入らないものは全く
効果がない。尚、本発明に係わる化合物中にも亜硝酸イ
オンとの反応により若干着色するものもあるか、同表中
に併せて記載されている如く夫々一定の波長以、トで測
定を行えば実用上全く問題とならない。

実験例２．必要濃度の検討 本発明に係る含窒素有機化合物としてスルファニル酸を
用い、アルブミンの測定を行フた場合のその必要濃度の
検討を行った。

〈検討方法〉 ・ピロガロールレッド−モリブデン酸錯体法用試薬ピロ
ガロールレッド　　　　　　　　　　２５ｍｇモリブデ
ン酸アンモニウム　　　　　　３０ｍｇアラビアゴム　
　　　　　　　　　　　２０ｇ酒石酸　　　　　　　　
　　　　　　　１ｇ上記物質を０．１Ｍグリシン緩衝液
ＩＪ２に溶解し、更にスルファニル酸を所定濃度となる
ように添加し、塩酸でｐＨを２．２に調整して試薬とし
た。

・クマシーブリリアントブルー法用試薬りマシーブリリ
アントブルーＧ−２５０１００ｍｇシュウ酸　　　　　
　　　　　　　　　　８０ｇ上記物質を精製水ｔｉに溶
解し、さらにスルファニル酸を所定濃度となるように添
加して試薬とした。

・試　料 アルブミンを７５Ｂ／ｄｊ含有する溶液を調製し、それ
にｄｆｉ硝酸ナトリウムを０．１％となるように添加し
て試料とした。

・操作法 試薬３．０ｒｒＬｌに試料５０４を加えてよく混合し、
室温で２０分間放置後に、　６００ｒ＋ｍに於ける吸光
度を測定し吸光度Ｅｓ（但し、スルファニル酸無添加の
試薬により得られた値をＥｓｏとした。）を得た。

試料の代りに精製水及びアルブミンを７５１ｎｇ／ｄ！
含有する溶液（亜硝酸イオンは含有せず。）を用いて同
様の操作を行い得られた吸光度をＥ８ｊ及びＥ　ＳＴＤ
とした。これらの値を用いて次式に従って亜硝酸イオン
除去率Ｊを求めた。

Ｊ　＝　［（Ｅ　ｓ−Ｅ　ｓｏ）÷（Ｅ　５ＴＤ−Ｅ　
３０月×１００・結　果 結果を表−２に示す。

この結果から明らかなように、ピロガロールレッド−モ
リブデン酸錯体法に於ては０．０３％の、また、ダマシ
ーブリリアントプル−法に於てはｏ、ｏｏａ％のスルフ
ァニル酸の添加により亜硝酸イオンの影習による負誤差
をほぼ完全に除去できることか判った。

実験例３．検量線への影響についての検討本発明に係わ
る含窒素有機化合物としてスルファニル酸を用いピロガ
ロールレッド−モリブデン酸錯体法によりアルブミンの
測定を行った場合のスルファニル酸による検量線への影
響の有無を調べた。

・試　薬 ピロガロールレッド　　　　　　　　　　２５ｒｎｇモ
リブデン酸アンモニウム　　　　　　３０ｍｇアラビア
ゴム　　　　　　　　　　　　２０ｇ泊石酸　　　　　
　　　　　　　　　　　１ｇ上記物質を０．１Ｍグリシ
ン緩衝液１１に溶解し、塩酸でｐｌ＋を２．２に調整し
た後二分し、一方にスルファニル酸１ｇを添加しスルフ
ァニル酸添加及び無添加の試゛薬とした。

・試　料 アルブミンを３５０ｍｇ／ｄ！含有する溶液を所定倍数
に希釈して試料とした。

・操作法 試薬３．０ｒｒＬｌに試料５０４を加えてよく混合し、
室温で２０分放置後に、６００ｎｍに於ける吸光度を測
定し吸光度Ｅｓを得た。

試料の代わりに精製水を用いて同様の操作を行い得られ
た吸光度をＥＢｔとした。

・結　果 測定結果を表−３に示す。

表−３から明らかな如く、スルファニル酸の添加による
検量線への影響は認められなかった。

尚、スルファニル酸の代わりにスルファニルアミドを用
いた場合にも全く同様の結果が得られた。

表−３ 実験例４．再現性 試料をアルブミンを７５ｍｇ／ｄ！含有する溶液とした
以外は実験例３と同様の試薬を用い、実験例３と全く同
様にして吸光度Ｅｓを求めた。また精製水とアルブミン
含量１００ｍｇ／ｄｊの溶液を試料として同様の操作を
行い各々の吸光度ＥＢｔとＥ　ＳＴｎを求めた。これら
の値から次式に従って試料中のアルブミン含量（ｍｇ／
ｄりを求めた。

アルブミン含量（ｍｇ／　ｄ！　） ＝　［（Ｅ　！Ｉ−Ｅ　１１（）÷（Ｅ５１７Ｉｌ−Ｅ
［ｌ／）ＩＸ　Ｉ　００・結　果 同−試料につき繰り返し１０回測定した結果を表−４に
示す。

表−４から明らかな如く、スルファニル酸の添加による
再現性への影響は認められなかった。

尚、スルファニル酸の代わりにチオ尿素を用いた場合に
も全く同様の結果が得られた。

表−４ 実験例５．　アルブミンとグロブリンの発色比率の検討 試料をアルブミン及び／又はグロブリンを所定濃度含有
する溶液とした以外は実験例３と同様の試薬を用い実験
例３と全く同様にして吸光度Ｅｓ及びＥＲＡを測定した
。アルブミンのみを１００ｍｇ／ｄ！含有する溶液によ
り得られたＥｓをＥｓ＋ｏｏとして次式によりアルブミ
ンとグロブリンの発色比率Ｇ／Ａを求めた。

Ｇ／　Ａ　＝［（Ｅｓ−Ｅａｔ）／　（Ｅｓ＋ｏｏ−Ｅ
ｎｚ）ＩＸ　１００・結　果 測定結果を表−５に示す。

表−５から明らかな如く、スルファニル酸の添加による
アルブミンとグαプリンの発色比率への影響は認められ
なかった。

尚、スルファニル酸の代わりにフェニルヒドラジンを用
いた場合にも全く同様の結果か得られた。

参考例１．　ビリルビン共存時の測定値への影響試料を
ビリルビン及び／又は亜硝酸ナトリウムを所定濃度含有
するアルブミンのｌｏＯｍｇ／ｄ！溶液とした以外は実
験例４と同様の試薬を用い実験例４と全く同様にして試
料中の見かけのアルブミン含量（ＩＩＩｇ／ｄりを求め
た。

・結　果 測定結果を表−６に示す。

表−６から明らかな如く、スルファニル酸は亜硝酸イオ
ンのを雪のみならずビリルビンの影響も回避できること
が判った。

実施例１．　ヒト尿中微量蛋白の定量 ・試　薬 ピロガロールレッド　　　　　　　　　　２５ｍｇモリ
ブデン酸アンモニウム　　　　　　３０Ｂアラビアゴム
　　　　　　　　　　　　２０ｇ酒石酸　　　　　　　
　　　　　　　　１ｇ上記物質を０．１Ｍグリシン緩衝
液ｉＩｌに溶解し、塩酸でｐＨを２．２に調整した後ス
ルファニル酸２ｇを添加して試薬とした。

・試　料 亜硝酸陰性ヒト尿１５検体（検体Ｎｏ、１〜１５）及び
亜硝酸陽性ヒト尿１５検体（検体Ｎｏ、１６〜３０）を
試料とした。

・操作法 試薬３．ＯｍＪに試料５０ＩＬ！を加えてよく混合し、
室温で２０分放置後に、６００ｎｌＩ＋に於ける吸光度
を測定し吸光度Ｅｓを得た。

また、試料の代わりに精製水及びアルブミン含１１００
ｍｇ／ｄｊの溶液を用いて同様の操作を行い得られた吸
光度を夫々ＥＢｊ及びＥ　ｓ’ｒｏとし、次式より試料
中の蛋白含量（アルブミンに換算した値、ｍｇ／ｃｆり
を求めた。

蛋白台１１ｔ（アルブミンに換算した値、ｍｇ／　ｄｔ
　）＝　［（Ｅ　ｓ−Ｅ　ａｚ）÷（Ｅ　５ＴＤ−Ｅ　
Ｒｚ）］Ｘ　１００・結　果 結果を表−７及び表−８に示す。尚、表中にはプレテス
トロＡ（和光純薬工業■製）による曲調酸塩測定値（亜
硝酸ナトリウムとして）及びｐＨ値を併せて示した。但
し、亜硝酸塩測定値の士は、１．０ｍｇ／ＬＯＵ以上、
廿は０．５ｍｇ／ｄ！前後、−はＯ，Ｉｍｇ／ｄ／以ド
を夫々表わす。

比較例１゜ ・試　薬 実施例１で用いた試薬からスルファニル酸を４いたもの
を、試薬とした。

・試　料 実施例１と同じ。

・操作法 実施例１と同じ。

・結　果 結果を表−７及び表−８に実施例１の結果と併せて示す
。

表−７及び表−８から明らかな如く、従来のスルファニ
ル酸無添加の試薬を用いた場合には亜硝酸陽性の試料の
測定時には亜硝酸イオンの影響により負誤差を生じるが
、本発明に係るスルファニル酸を添加した試薬を用いた
場合には亜硝酸陽性の試料でも、亜硝酸陰性の試料でも
共に正確な測定値が得られた。

表−７ 表−８ 実施例２゜ ・試薬 実施例１に同じ。

・試料 実施例１の亜硝酸陰性ヒト尿１５検体く検体Ｎｏ、１〜
１５）及び各々の検体に亜硝酸ナトリウムをＯ，１％と
なるように添加したものを試料とした。

・操作法 実施例１に同じ。

・結果 結果を表−９に示す。

比較例２゜ ・試薬 比較例１に同じ。

・試料 実施例２に同じ。

・操作法 実施例１に同じ。

・結果 結果を表−９に実施例２の結果と併せて示す。

表−９から明らかな如く、従来のスルファニル酸無添加
の試薬を用いた場合には亜硝酸添加の試料測定時には亜
硝酸イオンの影響により明らかに負誤差を生じるが、本
発明に係るスルファニル酸を添加した試薬を用いた場合
には亜硝酸添加の試料でも、亜硝酸無添加の試料と同様
の値が得られることがわかる。

表−９ ［発明の効果］ 以上述べた如く、本発明は種々の反応に影響を及ぼす亜
硝酸イオンの簡便な、反応操作ステップ数の増加や操作
の煩雑化等を伴わない除去方法と該方法により亜硝酸イ
オンの影響を回避した成分の分析方法を提供するもので
あり、斯業に貢献するところ甚だ大なる発明である。

特許出願人　和光純薬工業株式会社 手続補正書 印６５年６月２日 １、事件の表示 昭和６２年特許願第０７０５７４号 ２、発明の名称 成分の分析方法 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 郵便番号　５４１ 、住所　大阪府大阪市東区道修町３丁目１０番地４、補
正命令の日付 ５、補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄。

（刀明細書１８頁１５行目に記載のｒＪ＝［（Ｅｓ−ｇ
ｓｏ　）÷（ｇｓｙｏ−Ｅｓｏ）　）　Ｘ　１００　Ｊ
をｒＪ＝［（Ｒｓ　−Ｅｓｏ　）÷（Ｆ、５ｔｎ−＆１
））ｘｌｏｏＪと補正する。

以上

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）亜硝酸イオンにより影響を受ける、成分の分析方
   法に於て、亜硝酸イオンの影響に除くため分析用試薬に
   、下記（イ）〜（ニ）から成る群より選ばれた１種又は
   ２種以上の含窒素有機化合物を添加してこれを行うこと
   を特徴とする成分の分析方法。 （イ）式−１ ▲数式、化学式、表等があります▼ （但し、Ｒ＾１〜Ｒ＾５は夫々独立してスルホン酸基、
   カルボキシル基、水酸基、スルホニルアミノ基、ハロゲ
   ン原子、炭素数１〜４のアルキル基、ニトロ基又は水素
   原子を示し、Ｒ＾６は炭素数１〜４のアルキル基、炭素
   数１〜４のヒドロキシアルキル基、アミノ基又は水素原
   子を示す。）で示されるアニリン誘導体及びその可溶性
   塩類。 （ロ）式−２ Ｒ＾７−ＮＨ−Ｒ＾８ ［但し、Ｒ＾７及びＲ＾８は夫々独立して炭素数１〜４
   のアルキル基、炭素数１〜４のヒドロキシアルキル基、
   炭素数１〜４のアミノアルキル基又は水素原子を示す（
   但し、Ｒ＾７とＲ＾８が共に水素原子である場合を除く
   。）。］で示される脂肪族アミン類及びその可溶性塩類
   。 （ハ）式−３ Ｒ＾９−ＮＨＮＨ＿２ （但し、Ｒ＾９は炭素数１〜４のアルキル基又は水素原
   子を示す。）で示されるヒドラジン誘導体及びその可溶
   性塩類。 （ニ）式−４ ▲数式、化学式、表等があります▼ （但し、Ｒ＾１＾０〜Ｒ＾１＾２は夫々独立して水素原
   子、炭素数１〜４のアルキル基又はフェニル基を示す。 ）で示されるチオ尿素誘導体及びその可溶性塩類。
2. （２）成分の分析方法が、微量蛋白の分析方法である特
   許請求の範囲第１項に記載の分析方法。