JPS63226276A - 補酵素の電気化学的再生方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は補酵素の電気化学的再生方法およびこの技術を
有機化学薬品の合成に対し適用する方法に関する。

生体はこれらの細胞構造内で広汎かつ複雑な化学変化を
逐行する。これらの操作は通常の温度および圧力条件下
で、ぞして適度のｐＨ値で行なわれる。これは生体に存
在する酵素と呼ばれるタン白触媒の節度のある作用によ
ってのみ可能である。

Ｎ素は起こすことを助ける反応のタイプにより、例えば
酸化還元酵素、転移酵素、加水分解酵素、異性化酵素な
どに分類される。生活細胞におけるこれらの反応の駆動
力は結局生体が間貸する食粋に由来するが、最終的には
鎖を伝わるように１エネルギーの流れ１は酸化−還元酵
素反応の場合、補酵素、例えば二」ヂンアミドアデニン
ジニュクレオチド（ＮＡＤＨ）、フラビンアデニンジニ
ュクレオブド（ＦＡＤ＋）、二］チンアミドアデニンジ
ニ］−クレオチドホスフェート（ＮＡＤＰ　　）、など
になる。これらの補酵素の酸化還元反応を制御し、電気
化学技術を使用してこれらを人工的に再生できる場合、
前のバイオ反応の動力学とは関係なく、前後いずれかの
方向に高い割合で任意の特別の酵素触媒反応を駆動でき
る。酵素触媒反応の温和な条件および既知特異性のため
に、このバイオ−電気化学に基づく合成方法は特製品お
よびファインケミカルおよび通常１個の官能基の修蝕を
必要どする一方、しばしば不安定な分子の残部をもとの
まま保有づ−る医薬品の製造に特に適する。

従来問題は補酵素カップルの利用の可逆性の性質を適当
にまねすることであった。

生体では、ＮＡＤＨおよびＮＡＤＨは前の酵素反応を経
て任意の特別の反応における使用に対し生成し、酵素分
子の三次元構造内で反応の正確な立体特異的および熱力
学整合のためＮＡＤＨからＮＡＤＨ（又は逆に）への収
量および変換は１００％の所望１．４−異性体である。

しかし、ＮＡＤ”／ＮＡＤＩ−ｆｉｌ化還元カップルの
人工的変換方法は敏感で複雑な補酵素を損傷し、又は二
ｈ１体および所望の１．４−形部外の異性体を生成しう
る。これは非常に多くの場合、正確な１ネルギー吊が供
給されないためで、又酵素分子の立体特異的拘束が溶液
中で、あるいは電極表面で行なわれる場合反応を制御す
るために存在しないためである。

これらの問題に打勝つ電気化学的技術により補酵素を人
工的に再生する方法を開発した。

従って、本発明は補酵素の電気化学的再生方法を供する
。この方法は、 （ｉｌ　　酸化した補酵素および生化学的に不活性の補
酵素異性体を含む溶液又はエマルジョンを電気化学的に
酸化して生化学的に不活性の異性体を酸化し、 （１１）電気化学セルに水銀アマルガムを生成させ、（
ｉｉｉｌ　　反応容器中で水銀アマルガムおよび［程（
ｉ）からの酸化補酵素の溶液又はエマルジ」ンを接触さ
せ、アマルガム又は酸化補酵素のいずれかは枚数の小滴
形である、 の工程を含む。

酸化補酵素および生化学的に不活性の補酵素異性体を含
む溶液又はエマルジョンは、任意には酵素反応により生
成した一１成物をそこから分離後の、固定化酸化還元酵
素、例えばアル」−ルデヒド［１ゲナーゼ、マレートデ
ヒドロゲナーゼなどを含む酵素リアクターからの溶液又
はエマルジョンであ　９　一 つてよい。本発明方法の工程ｌｉｔおよび（ｉｉｉ）の
条件に敏感である場合、生成物は溶液から分離する必要
があることは理解されるであろう。

電気化学的Ａキシダイザ−（ｏｘｉｄｉｓｅｒ）では生
化学的に不活性の補酵素異性体は補酵素の活性酸化形に
酸化される。例えば、ＮＡＤ）−１の不活性１゜（３−
および１．２−ジヒド１］異性体はＮＡＤ”に電気化学
的に酸化される。次にＮＡＤ＋溶液は本発明方法に従っ
てＮＡＤＨに還元され、ＮＡＤＨ異性体の混合物はアマ
ルガム噴霧リデューサ−（ｒｅｄｕｃｅｒ　）を使用し
゛Ｃ形成する（約７０％１゜４−１２７％、１．２−Ｊ
５よび３％１．６−ジヒドＯ）。所要の酸化反応を行な
いうる任意の電気化学セルを使用しうろことは理解され
るであろう。

本発明方法を行なう場合、アマルガムはリチウム、ナト
リウム又はノｊリウムのアマルガムが好ましい。しかし
、十分に高い還元ポテンシャルを有する他の金属アマル
ガムも使用できる。反応容器は円筒形が好ましい。アマ
ルガムが複数の小滴形である場合、円筒は１０ｃｍ〜２
．５ｍの範囲の長さを有することが好ましく、酸化補酵
素の複数の小滴形である場合、２〜１００ｃｍの長さが
好ましい。

反応体小滴が水銀アマルガムである場合、垂直反応容器
の上部に導入することが好ましく、酸化補酵素の溶液又
はエマルジョンは反応容器を自流で通すことが好ましい
。部分的に消耗した水銀アマルガムは集めて、電気化学
セルに戻ずことが好ましい。反応容器が垂直する場合、
部分消粍水銀アマルガムは重力下に電気化学セルに戻す
ことができる。水銀アマルガムは伯の金属を完全に消耗
させてはならない。その場合水銀は酵素を変性さけるか
らである。酸化補酵素の溶液又はエマルジョンは反応容
器から取り出す。

反応体小滴が酸化補酵素のものである場合、これらは垂
直反応容器の底部に導入することが好ましく、水銀アマ
ルガムは反応容器を共流で通すことが好ましい。除去水
銀アマルガムは集め、重力下に電気化学セルに戻すこと
が好ましい。酸化補酵素の溶液又は１マルジヨンは反応
容器から取り出す。

還元反応度を調整する」−なパラメータは＝（の　アマ
ルガムの還元ポテンシャル、これは溶液中の金属、例え
ばリチウム、ナトリウム又はカリウムの性質により、お
よび電気化学アマルガムセル中の流れおＪ：び反応容器
を通してアマルガムを生成する電気化学セルから電気化
学セルに戻るアマルガムの通過人１１合により決定され
る金属淵麿により支配される、 （ｃ）　反応体小滴の表面積、 （ｃ）　溶液又はエマルジョンの酸化補酵素のｍ痕、（
ｃ）　溶液又はエマルジョンの組成、づなわちｐＨおよ
び任意の緩衝イオンの存在、 （ｅ）　　アマルガムと酸化補８ｖ素の接触時間、これ
は反応容器の長さおよびアスペクト比および反応容器を
通るアマルガムおよび酸化補酵素の溶液又はエマルジョ
ンの通過割合により決定される、（［）温度、 である。

本発明は酵素還元反応の実施方法をも供する。

この方法は、 （０還元補酵素の溶液又はエマルジョンと酸化還元酵素
により遠丸する化合物の溶液又はエマルジョンを酵素リ
アクター中で接触させ、（ｃ）　還元生成物、生化学的
に不活性の補酵素異性体および酸化補酵素を含む溶液又
はエマルジョンを酵素リアクターから取り出し、任意に
はそこから生成物を９岨し、 （→　ＩＮ（ハ）からの溶液又はエマルジョンを電気化
学的に酸化して生化学的に不活性の異性体を酸化し、 （ｃ）　水銀アマルガムを電気化学セルに生成させ、（
ｅ）　　工程ゆからの水銀アマルガムと工程に）からの
酸化補酵素の溶液又はエマルジョンを反応容器中で接触
させ、アマルガム又は酸化補酵素のいずれか１つは複数
の小滴形である、 を含む。

酵素リアクターに含まれる酸化還元酵素は支持体に固定
化Ｊることが好ましい、酸化還元酵素の例はアルコール
デヒドロゲナーゼおよびマレートデヒドロゲナーゼであ
る。

上記方法に従って酵素還元できる化合物は例えば、アセ
トアルデヒド、オクタＪ”−ル又はオキザロ酢酸である
。酵素リアクターから出てくる溶液は還元生成物、例え
ば、エタノール、オクタツール又はリンゴ酸を、酸化補
酵素および任意の未反応補酵素異性体と共に含有Ｊる。

酵素リアクターから出てくる溶液はそこから生成物を除
去するために処理できる。これは溶液を分１ｌｌｉ機を
通すことにより達成できる。別法ではこの■稈は生成物
が電気化学的に安定である場合省略でき、酵素リアクタ
ーから出る全溶液を電気化学的酸化処理することができ
る。電気化学的酸化工程では任意の不活性補酵素の異性
体、例えば、ＮΔＤ　Ｈの１．６−および１，２−ジヒ
ドロ異性体は電気化学的に酸化する。次に酸化補酵素は
アマルガム反応容器中で上記のように還元形に変換する
。

補酵素は一般に８〜１２の範囲のｌ）Ｈの水性緩衝溶液
中に存在することが認められるであろう。

上記方法は連続的に又は半連続的に行ないうろことは理
解されるであろう。この方法で方法を実施する能力上の
決定的因子は補酵素の寿命、すなわち、４ノイクル数で
あり、特別の補酵素はその活性を失なう前に実施できる
。所望および不所望の、これらの反応度を調整する主な
パラメータは上記論議した。

本発明はその範囲内に酵素還元反応を実施する装置を含
む。この装置は； （ｉｌ　　還元する生成物の溶液又は１マルジコンおよ
び還元補酵素の溶液又は１マルジヨン、又はこれらの混
合物の導入用入口、および還元生成物、生化学的に不活
性の補酵素異性体および酸化補酵素を含有する溶液又は
エマルジョンを酵素リアクターから取り出す排出口、を
有する固定化酸化還元酵素を含む酵素リアクター、 （ｉｉ）　　酵ふりアクタ−から取り出した溶液又はエ
マルジョンから還元生成物を分離する任意の分離機、 （ｉｉｉｌ　　酵素リアクターから取り出した補酵素の
溶液又はエマルジョンを酸化する電気化学酸化セル、（
Ｍ　陽極、水銀陰極おにび金属水酸化物溶液から成る電
ｗＩ−質を有号ろ水銀アマルガム発生■電気化学セル、 （Ｖ）　　水銀アマルガム、又は補酵素の溶液又はエマ
ルジョンの小滴製造用要素および他の反応体の通過用入
口および出口を有する反応容器、Ｍ）電気化学セルから
反応容器への水銀アマルガムの通過用要素、 （ｖｉｉ）　　反応容器から電気化学セルへの消耗水銀
アマルガムの通過用要素、 （ｖｉｉｉ）　　酵素リアクター（１）Ｉこ戻る還元補
酵素の通過用要素、 から成る。

本発明は図面を引用してさらに記載する。図面において
： 第１図は酵素反応を実施する本発明方法を例示する、お
よび 第２図は補酵素を再生する本発明方法を例示する。

第１図を引用するとアマルガム発生器１はニッケル陽極
２および水銀陰極３を有する電気化学［ルを含む。カリ
ウムアマルガムの製造に対し、電気化学セルは苛性カリ
溶液４を含有する。電気化学セルはポンプ５を経てに応
力ラム６の頭部に連結する。水銀アマルガムは電気化学
セルから反応容器にポンプ輸送し、そこで反応容器の土
部に位冒する多孔性ガラスフリット７を通して微細噴霧
として導入する。カリウム消耗水銀は反応容器の底部８
で集め、ライン９を経て電気化学セルに重力で戻す。サ
イクルは再び開始できる。

第１図に示す配置では還元補酵素、例えばＮ　Ａ　Ｄ　
ｌ−１の溶液又はエマルジョンはライン１０を経て反応
器６の底部８を出る。次Ｇ、：Ｆｌ１１調整器１２を設
置した貯蔵所１１に移し、還元する生成物の溶液又はエ
マルジョンと混合した。次に混合物はライン１３に沿っ
て固定化酸化還元酵素を含有する酵素リアクター１４に
ポンプ輸送覆る。所望の酵素反応は酵素リアクター１４
で行ない、ライン１５に沿って酵素リアクターから出る
溶液又は工マルジ」ンは還元生成物、酸化補酵素および
生化学的に不活性の補酵素異性体を含有する。所望の場
合又は必要の場合、生成物は分ｌ１ｌＩｔ機１６で溶液
又はエマルジョンから分離し、ライン１７に沿って取り
山号ことができる。次に残留溶液はライン１８に沿って
オキシダイザ−セル１９に移し、そこで生化学的に不活
性の異性体を酸化する。酸化補酵素、例えばＮΔＬ）＋
を含有する溶液又はエマルジョンはライン２０に沿って
アマルガムリアクター６の上部に移し、そこで水銀アマ
ルガム小滴ににり還元処理する。還元生成物、例えばＮ
ＡＤＨは上記のようにライン１０に沿って反応器６を出
る。

第２図に示す配置では、酸化補酵素の溶液又はエマルジ
ョンはｒｌＨ調整器２８を設置した貯蔵所２７に入れる
。酸化補酵素の１マルジヨン又は溶液はライン３０に沿
って反応器６の底部にポンプ２９によりポンプ輸送し、
そこで多数の微細小滴として垂直撒布バイブ３２を通し
て反応容器３１に導入する。反応容器３１は第１図に引
用記載したアマルガム発生器１で発生した水銀アマルガ
ムのカラムを満たす。水銀アマルガムはアマルガムリゾ
ユーザー３１の底部にポンプ５によりらポンプ輸送する
。水銀アマルガムはオーバノロ−３３のレベルまで反応
容器３１に満たし、オーバフローを経てアマルガムはア
マルガム発生器１の底部に戻る。反応容器３１はパドル
攪拌機３４を備え、アマルガムと酸化補酵素の完全混合
を確保する。

還元補酵素を含有する溶液又はエマルジョンは反応容器
３１から排出口３５を経て取り出し、排出口３５はアマ
ルガム排出口３３より反応容器の高いレベルに位置する
。還元補酵素の溶液又はエマルジョンはｐＨ調整器３７
を設置した貯蔵所３６に移す。次に還元補酵素の溶液又
はエマルジョンはライン３９に沿って貯蔵所３６から酸
化を行なうオキシダイザ−セル４０にポンプ３８により
ポンプ輸送する。次に貯蔵所２７に移す。

第１図および第２図でそれぞれ図示したオーヤシダイザ
−セル１９および４０は多段階に配置集合した一連の軸
方向流れのセルから成る。各セルはニッケル電極を備え
、陰極は膨化ニッケルから製造し、陽極はニッケル気泡
体から製造して補酵素に最大表面積を確実に供する。溶
液は電極を通り、こうして緊密接触および撹拌を供する
ようにセルを設計する。セルは電気化学的にパラレルに
連結し、電圧コントロールを有するので所望の電気−活
性種の酸化が行なわれ、他のものは起らない。

本発明は次側を引用してさらに記載する。

例　　１ リデューサ−およびオキシダイザ−の組み合せアマルガ
ムリデューサ−および電気化学的オキシダイザ−を第２
図に示づ゛ように組み合せ、システムは閉鎖ループ操作
で循環した。試料はループの各諸点から回収し、補酵素
の濃度および活性を分析した。このｈ法で各成分の性能
および「総モジュール」を算定することができる。

水銀アマルガムはニッケルディスク陽極および水銀陰極
を使用して苛性カリ溶液（ＩＯＭ）を通して１０８電流
を通すことによりアマルガムセルに発生させた。アマル
ガムはアマルガム発生器からアマルガムリゾユーザーに
１０ｄ分−１の割合でポンプ輸送した。アマルガムリデ
ューサ−は直径１．８ｃｍで２５．０ｃｍの高さの水銀
カラムを有した。システムの容積は約７００ｄで、ＮＡ
Ｄ＋濃度は０．５Ｍ　Ｋ４Ｐ２０□緩衝溶液中で１．０
％ト］であった。貯蔵所溶液のｐＨはりデューサー前に
はＤＨｌｏに、オキシダイザ−セル前にはｐＨ９に、そ
れぞれ１０Ｍ　　ＫＯＨ溶液および濃リン酸を使用して
連続的に修正した。

補酵素水性溶液の流速はシステムを通して１００−「１
に調整した。オキシダイザ−セルは電圧を調整して３ａ
へ４ａの電流を得た。

第１表はりデューサー前（ＢＲ）、リデュー勺−後（Ａ
Ｒ）、オキシダイデー前（１３０）およびオキシダイザ
−後（ＡＯ）の諸点で時間の函数として補酵素に対する
損傷レベルを例示する。

第１表 損傷（初めの補酵素の％） 時間　　ＢＲＡＲＡＲＢＯＡＯＡＯ （分）　　　　　　　補正　　　　　　　補正１　　１
．４　１６．２　　　　１０．３　０２　　２．９　２
．９　　　　８．８　７．３３　　４．４　４．４　　
　　７．４　１．４４　　４．４　４．４　３．６　７
．４　０６　　５．９　５．９．　４．５　７．４　４
．４　３．０Ｂ　　　８，８　８．８　７．０　１０．
３　５．９　４．０１０　　８．８　１０．３　８．３
　１３．２　１０．３　８．３１５　　１０．３　１１
．７　８．５　１３．２　１０．３　７．０３９　　−
　　１６．２　１０．７　　−　２０．６　１５．４６
０　　−　　３０．９　２１．１　　−　４１．２　３
２．９１２０　　−　　５８．８　４５．７　　−　６
３．２　５３．２これらのデータかられかるように、こ
の小規模の装置は約０．４％分−１の損傷割合で１時間
に６０ｇの補酵素を処理できた、ずなわら１分当り処理
する補酵素の９９．６％は好結果で再生サイクルを通過
した。

例　　２ アセトアルデヒ゛のバイオ電気　　ド−−全体のシステ
ム システムは下記する反応パラメータにより第１図に例示
のように組み立てた。アセトアルデヒドは化学量論的に
、かつ連続的に混合容器に添加し、固定化アルコールデ
ヒドロゲナーゼを充填した酵素リアクターでエタノール
に変換した。ｐＨは自動ｐＨ調整器により７．０に保持
した。各種時間における各モジュールに対する性能特徴
は第２表に示す。

第２表 固定化酵素による閉鎖ザイクル反応 総容積７５０７．　０．１％ＮＡＤ、ｐＨ７ポンプ輸送
割合瑣分−１ 電流１００／　８００　ｍＡ　（アマルガムセル）　　
５／２５ｍ＾（酸化剤セル） ５５分時の変換、酵素セルにおける一２０％５５分時の
変換、オキシダイザ−セルにおける＝２３％ ５５分１）の変換、リデューサ−における一４３％９０
分時の変換、酵素セルにおける＝１９％９０分時の変換
、オキシダイザ−セルにお【ノる一１７％ ｇｏ分時の変換、リデューサ−セルにおける一３６％ １２０分時の変換、酵素セルにおける＝１７％１２０分
時の変換、オキシダイザ−にお【ノる−６．６％ １２０分時の変換、リデュサーセルにおける一２４％ １５０分時の変換、酵素における一１７％１５０分時の
変換、オキシダイザ−における−１１％ １５０分時の変換、リデューサ−における＝２９％ 変換は存在する総補酵素の％により表わした。

アルコールデヒドロゲナーゼの固定し 上記試験で使用したアルコールデヒドロゲナーゼを次の
ように固定した。フルオルシル（６０／１００メツシユ
、１０ｇ）をｐＨ２、０（ｐＨはリン酸により調整）の
３−アミノ−プロピルトリメトキシシランの１０％水溶
液でおおい、４時間放置した。次に上澄液をデカントし
、物質は水試料を反復添加し、デカントして洗滌した。

透明の場合、物質は濾過し、水により洗滌し、ペトリ皿
に移し、１２０°のオーブンで一夜乾燥した。冷却後、
物質は滅菌ガラス器具（すなわち、１％のピロ亜硫酸犬
トリウム溶液中ですすぐ）中で処理し、ｐＨ７，５の０
．３Ｍ　　Ｋ４ｐ、、ｏ７緩物液中に調整した２、５％
ゲルタールアルデヒド溶液によりおおった。これは時々
攪拌しながら４時間放置し、次にｐＨ１７，５のに４Ｐ
２０７緩笥溶液によりすすいだ。濾過用漏斗を使用して
液体を除去後、固体を滅菌ビーカーに入れ、１０ｇ１ｇ
／ｍｅのアルコールデヒドロゲナーゼ（すなわち、２０
０ＶＡ　Ｄ　Ｈ）を含有する２０ｄの０．３Ｍ　　Ｋ４
Ｐ２０□緩衝溶液（ｐｌｉ７．５）でおおい、２日放置
した。次に固定化酵素を洗滌し、濾過し、Ｍ素すアクタ
ーで使用する前に緩衝溶液ですすいだ。使用後固定化酵
素はに４Ｐ２０７　　（ｐＨ７，５）緩衝溶液中の１％
ピロ亜硫酸ナトリウム溶液中で冷蔵貯蔵した。

例　　３ アセトアルデヒドのバイオ−電気化学還元システムは第
１図に例示のように組み立てた。

緩衝水溶液（７５０ｄ、ｐＨ８，０，０，１Ｍ　ピロリ
ン酸カリ＋Ｋ　０１−１溶液）中のＮＡＤ”（０，１％
Ｗ／Ｗ）はアマルガム発生器セル（９００ｍａ、１０Ｍ
　　ＫＯＨ溶液）で製造したカリウムアマルガムと向流
でアマルガム囁霧反応カラムを通過させた。生成するＮ
ＡＤＨ溶液は固定化アルコールデヒドロゲナーゼを含有
するＷｇ素リすクター中にポンプ輸送し、そこにアセト
アルデヒドを化学量論的に、連続的に添加した。Ｍ素す
アクターからの溶液は次にオキシダイザ−セル（１００
ｍａ）を通し、そこでＮＡＤＨを再酸化してＮＡＤ　　
に戻し、別のサイクルを始めるために貯蔵所に戻した。

試料はシステム周辺の各地点から回収し、通例方法で補
Ｎ素瀾痕および活性を分析した。代表的結果は第３表に
示す。

第３表 Ｔ２Ｏにおける変換、ｖＪ索セルにおける一１７％Ｔ２
０における変換、オキシダイザ−における−２０％ ”２０における変換、リデューサ−における−３７％”
３０にお【ノる変換、酵素セルにおける一１３％”３０
にお＆プる変換、オキシダイザ−にお【プるー２０％ ’３０における変換、リデューサ−における−３３％Ｔ
５ｏにおける変換、酵素セルにおける一１３％Ｔ　５０
における変換、オキシダイザ−にお１プる一９０％ Ｔ５Ｏにおける変換、リアニー（Ｊ−における−２３％
例　　４ ＮＡＤ’の水溶液（１，０％、ｐＨｉｏ）を高速攪拌機
の直下の再生カリウムアマルガム（Ｉ＝１５００ｍａ）
のカラムの底部に注入し、緊密接触を確保した。カリウ
ム濃度、ｐＨ、カラムの深さ、攪拌速度および接触時間
の適当＜↑調整はＮＡＤ４のＮＡＤＨへの還元割合およ
びこうむる損傷量を調整した。代表的試験結果は下記す
る。

ＮＡＤＨ監視　　変換　　活性Ｎ　Ａ　Ｄ　Ｈ損傷通過
容量−〇１１　　　　％　　　生成　　　％５０　　　
１２．１５　　１００　　　６３．６　　　０１００　
　　１２．１２　　１００　　　　Ｂ３．６　　　０２
００　　　１２．０９　　１００　　　６５．８　　　
０３００　　　１２．１７　　１００　　　６５．８　
　　０４００　　　１２．０７　　１００　　　６５．
８　　　０４８０　　　１２．０４　　１００　　　６
５．８　　　０

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明による酵素反応の実施方法を示す工程図
である。 第２図は本発明による補酵素の再生方法を実施する工程
図を示す。

Claims (18)

【特許請求の範囲】
1. （１）補酵素の電気化学的再生方法において、 （ｉ）酸化補酵素および生化学的に不活性の補酵素異性
   体を含有する溶液又はエマルジヨンを電気化学的に酸化
   して生化学的に不活性の異性体を酸化し、 （ｉｉ）電気化学セルに水銀アマルガムを生成させ、 （ｉｉｉ）反応容器で水銀アマルガムと工程（ｉ）から
   の酸化補酵素の溶液又はエマルジョンを接触させ、アマ
   ルガム又は酸化補酵素のいずれか１つは複数の小滴形で
   ある、 の工程を特徴とする、上記再生方法。
2. （２）酸化補酵素および生化学的に不活性の補酵素異性
   体を含有する溶液又はエマルジヨンは、任意には酵素反
   応により生成した生成物をそこから分離後、固定化酸化
   還元酵素を含有する酵素リアクターからの溶液又はエマ
   ルジヨンである、特許請求の範囲第１項記載の方法。
3. （３）水銀アマルガムはリチウム、ナトリウム又はカリ
   ウムアマルガムである、特許請求の範囲第１項又は第２
   項記載の方法。
4. （４）水銀アマルガムは小滴形で反応させ、反応容器は
   １０ｃｍ〜２．５ｍの範囲の長さを有する円筒形である
   、特許請求の範囲第１項から第３項のいずれか１項に記
   載の方法。
5. （５）酸化補酵素は小滴形で反応させ、反応容器は２〜
   １００ｃｍの範囲の長さを有する円筒形である、特許請
   求の範囲第１項から第３項のいずれか１項に記載の方法
   。
6. （６）酸化補酵素は水性溶液中に含む、特許請求の範囲
   第１項から第５項のいずれか１項に記載の方法。
7. （７）酸化補酵素は有機溶媒溶液中に含む、特許請求の
   範囲第１項から第５項のいずれか１項に記載の方法。
8. （８）水銀アマルガムの小滴は垂直反応容器の上部に導
   入し、酸化補酵素の溶液又はエマルジヨンは反応容器を
   向流で通す、特許請求の範囲第１項から第４項のいずれ
   か１項、第６項又は第７項に記載の方法。
9. （９）酸化補酵素の溶液又はエマルジヨンの小滴は垂直
   反応容器の底部に導入し、水銀アマルガムは反応容器を
   共流で通す、特許請求の範囲第１項から第３項又は第５
   項から第７項のいずれか１項に記載の方法。
10. （１０）部分消耗水銀アマルガムを集め、電気化学アマ
    ルガム発生セルに戻す、特許請求の範囲第１項から第９
    項のいずれか１項に記載の方法。
11. （１１）酵素還元反応の実施方法において、 （ａ）酵素リアクターで還元補酵素の溶液又はエマルジ
    ヨンと酸化還元酵素により還元する化合物の溶液又はエ
    マルジヨンを接触させ、 （ｂ）還元生成物、生化学的に不活性の補酵素異性体お
    よび酸化補酵素を含有する溶液又はエマルジヨンを酵素
    リアクターから取り出し、任意には生成物をそこから分
    離し、 （ｃ）工程（ｂ）からの溶液又はエマルジヨンを電気化
    学的に酸化して生化学的に不活性の異性体を酸化し、 （ｄ）水銀アマルガムを電気化学セルに発生させ、 （ｅ）工程（ｄ）からの水銀アマルガムと工程（ｃ）か
    らの酸化補酵素の溶液又はエマルジヨンを反応容器で接
    触させ、アマルガム又は酸化補酵素のいずれか１つは複
    数の小滴形である、 ことを特徴とする、上記実施方法。
12. （１２）酵素リアクターに含まれる酸化還元酵素は支持
    体に固定する、特許請求の範囲第１１項記載の方法。
13. （１３）酸化還元酵素はアルコールデヒドロゲナーゼ又
    はマレートデヒドロゲナーゼである、特許請求の範囲第
    １１項又は第１２項記載の方法。
14. （１４）化合物はアセトアルデヒド、オクタナール又は
    オキザロ酢酸に還元する、特許請求の範囲第１１項から
    第１３項のいずれか１項に記載の方法。
15. （１５）補酵素はジヒドロニコチンアミドアデニンジニ
    ユクレオチド（ＮＡＤＨ）である、特許請求の範囲第１
    １項から第１４項のいずれか１項に記載の方法。
16. （１６）酵素リアクターから出る溶液又はエマルジヨン
    は分離機を通し、生成物をそこから除去する、特許請求
    の範囲第１１項から第１５項のいずれか１項に記載の方
    法。
17. （１７）連続的又は半連続的に実施する、特許請求の範
    囲第１１項から第１５項のいずれか１項に記載の方法。
18. （１８）酵素還元反応を実施する装置であつて、 （ｉ）還元する生成物の溶液又はエマルジヨンおよび還
    元補酵素の溶液又はエマルジヨン、又はこれらの混合物
    の導入用入口、および還元生成物、生化学的に不活性の
    補酵素異性体および酸化補酵素を含有する溶液又はエマ
    ルジヨンを酵素リアクターから取り出す排出口、を有す
    る固定化酸化還元酵素を含む酵素リアクター、 （ｉｉ）酵素リアクターから取り出した溶液又はエマル
    ジヨンから還元生成物を分離する任意の分離機、 （ｉｉｉ）酵素リアクターから取り出した補酵素の溶液
    又はエマルジヨンを酸化するための電気化学酸化セル、 （ｉｖ）陽極、水銀陰極および金属水酸化物溶液から成
    る電解質を有する水銀アマルガム発生用電気化学セル、 （ｖ）水銀アマルガム、又は補酵素の溶液又はエマルジ
    ヨンの小滴製造用要素および他の反応体の通過用入口お
    よび出口を有する反応容器、 （ｖｉ）電気化学セルから反応容器への水銀アマルガム
    の通過用要素、 （ｖｉｉ）反応容器から電気化学セルへの消耗水銀アマ
    ルガムの通過用要素、 （ｖｉｉｉ）酵素リアクター（ｉ）に戻る還元補酵素の
    通過用要素、 から成ることを特徴とする、上記装置。