JPS63112525A - ピコルナウイルス感染の処置剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、一般にウィルスのプロテアーゼの阻害に関し
、さらに詳しくはピコルナウィルス（Ｐｉｃｏｒｎａｖ
ｉｒｕｓ）のブチアーゼ活性の特異的阻害剤として、あ
る種のペプチドのハロメチルケトン類を使用することに
関する。

プロテアーゼは蛋白質類を特定のペプチド結合において
切離す酵素類である。、生きている系において、高度に
特異的なプロテアーゼ類および相補的プロテアーゼ阻害
剤類は生物学的機能の広いスペクトルを仲介または制御
する。例えば、ピコルナウィルスは前駆体を切離してポ
リペプチドの翻訳後のプロセシング（ｐｏｓｔ−ｔｒａ
ｎｓｌａｔｉｏｎａｌ　　ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ）にお
いて活性な蛋白質類を形成し、酵素前駆体の活性化のカ
スケード、血液の凝固、フィブリツリシスおよびある種
の免疫学的反応の機作を提供し、そして選択した蛋白質
類の生物学的膜を横切る輸送を仲介する。したがって、
プロテアーゼ類はプロテアーゼ活性の特異的阻害剤とし
て機能するように設計された治療剤のための潜在的ター
ゲットを代表する。

ウィルスのゲノムにより暗号化されるプロテアーゼ類は
ウィルスの増殖において重要な役割を演する。ウィルス
のプロテアーゼ類は感染した細胞により生産された大き
い前駆体のポリペプチド類を小さい蛋白質成分またはサ
ブユニットに切離し、これらは引続いて組立てられて機
能的ウィルス構造体を形成する。ロジスキー（Ｌｏｚｉ
ｓｋｉｉ）、Ｕｓｐ、　　Ｓｏｖｒｅｍ、　　Ｂｉｏｌ
。

且３　：　３５２−３６２　（１９８２）は、鳥類およ
びＩ（ｉ乳類のウィルスの増殖における蛋白質分解の役
割を概観し、そしてウィルスのプロテアーゼ阻害剤に関
する文献の一部を概説している。

ピコルナウィルス類はヒトおよび他の１ｍＨ［動物類に
おけるウィルスの病原体の有意のクラスを提供する。こ
のクラスには、ポリオウィルス類、ライノウィルス類、
およびＡ型肝炎およびひずめ−および口の病気の病因学
的因子であるウィルス類が包含される。ピコルナウィル
スの増殖の間、ウィルスのｍＲＮＡは連続的継代培養（
ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ　　ｐａｓｓａｇｅ）においてウ
ィルスのｍＲＮＡの分子に沿って翻訳され、線状の蛋白
質産生物を生成し、この産生物は選択された部位でウィ
ルス特異的プロテアーゼにより切離された後、蛋白質／
リポソーム複合体は解離する。

ある数の研究者らはピコルナウィルスの特異的阻害剤を
探究した。二ラン）　（Ｋｏｒａｎｔ）。

ウィルス字詰（Ｊ、　　Ｖｉｒｏｌ、）よ旦、７５１−
７５９　（１９７２）は、単純アミノ酎のクロロメチル
ケトン誘導体類によるポリオウィルスおよびエコーウィ
ルス−１２蛋白質のプロセシングの阻害を開示している
。詳しくは、コラン）　（Ｋｏｒａｎｔ）ｆｆトリスル
ホニルフェニルクロロメチルケトン（Ｔ　Ｐ　ＣＫ）お
よびトリスルホニルリシルクロロメチルケトン（Ｔ　Ｌ
　ＣＫ）による阻害を開示している。サンマーズ（Ｓｕ
ｍｍｅｒｓ）ら、ウィルス字詰（Ｊ、　　Ｖｉｒｏｌ、
）旦。

８８０−８８４　（１９７２）は、同様に、ＴＰＣＫ、
ＴＬＣＫ、およびカルボベンジルオキシフェニルアラニ
ルクロロメチルケトン（ＺＰＣＫ）のＤ−異性体および
Ｌ−異性体による、大きいポリオウィルス−特異的ポリ
ペプチドのプロテアーゼの切離しの阻害を開示しいる。

引続く報告において、コラント（Ｋｏｒａｎｔ）ら、プ
ロシーディングスｅオブ・ナショナルφアカデミ−・オ
ブーＳｃｉ、）見ＳＡ、７６　：　２９９２−２９９５
（１９７９）は、カルポベンジルオキシエウシルクロロ
メチルケトン（Ｚ　Ｌ　ＣＫ）によるポリオウィルス蛋
白質のプロセシングの阻害を記載している。

プロテアーゼ活性を阻害する能力をもつ種々のプロテア
ーゼ誘導体類が知られている。パワーズ（Ｐｏｗｅｒｓ
）、　“蛋白質分解酵素類のハロケトン阻害剤類（Ｈａ
ｌｏｋｅｔｏｎｅ　　Ｉｎｎｈｉｂｉｔｏｒｓ　　ｏｆ
　　ＰｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃＥｎｚｙｍｅ　ｓ）”　　
、アミノ酸類、ペプチドスティン（Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ
）編、［マーセルデツカ−（Ｍａｒｃｅｌ　　Ｄｅｋｋ
ｅｒ）。

ニューヨーク、１９７７］　　、６５−１７８ページは
、アミノ酸類およびペプチド類のハロケトン類におるプ
ロテアーゼ活性の阻害を報告する文献を概観している。

パワーズ（Ｐｏｗｅｒｓ）ら。

Ａ）、±旦０，２４６−２６１　（１９７７）は、ｌ系
列のペプチドクロロメチルケトン類により、バクテリア
のプロテアーゼであるスブチリシンＢＰＮ’を阻害する
ことを開示している。試験された化合物のうちで、アセ
チル−し−フェニル−アラニル−Ｌ　−クリシル−Ｌ−
アラニル−Ｌ−ロイシルクロロメチルケトン（Ａｃ−Ｐ
ｈｅ−Ｇｌｙ−Ａ　Ｉ　ａ−Ｌｅ　ｕＣＨ２ＣＩ）は最
も早い阻害剤であった。関連する化合物のメトキシ−ス
クシニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−グリシル−Ｌ−
アラニル−Ｌ−ロイシルクロロメチルケトン（ＭｅＯＳ
ｕｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−ＬｅｕＣＨ２Ｃ１）は
、１９８１年の製品の報告中の酵素系の産生物（Ｅｎｚ
ｙｍｅ　　５ｙｓｔ　ｅｍｓ　　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ　　
　ｉｎ　　　ａ　　Ｎｏｖｅｍｂｅｒ１９８１　　ｐｒ
ｏｄｕｃｔ　　　ｂｕｌ　ｌｅｔ　ｉｎ）に開示されて
いる。

イトウ（Ｉ　ｔ　ｏ）ら、バイオケミカル・アンド４９
（１９７２）は、ある種のペプチドアルデヒド類による
消化プロテアーゼのキモトリプシンの阻害を含む実験を
記載している。イＩ・つ（ＩｔＯ）らは、また、Ａｃ−
Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−ＰｈｅＣＨ３すなわちトリペプチジル
メチルケトンによるキモトリプシンの阻害について試験
した。しかしながら、６００ｐｇ／ｍｌの阻害剤濃度で
阻害は観測されなかった。

最後に、フィツトカラ（Ｆ　ｉ　ｔ　ｔ　ｋａｕ）ら。

゛′ペプチドケトン類の合成および性質（Ｓ　ｙ　ｎ　
ｔｈｅｓｉｓ　　ａｎｄ　　Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　　
。

ｆ　　Ｐｅｐｔ　ｉｄｅ　　Ｋｅｔｏｎｅｓ）”、ベブ
天工ｍ（Ｐｅｐｔ　１ｄｅｓ）１９８２．ブラーハ（Ｂ
　ｌ　ａ　ｈ　ａ）ら編、［デ拳グルイタ−（ｄｅＧｒ
ｕｙｔｅｒ）、＝ニーＥ−り、１９８３］６１７−６２
２ページは、ある種のペプチドメチルｕ１ｇａｒｉｓ）
の熱安定性セリンプロテアーゼであるサーミスターゼの
阻害を開示している。

ピコルナウィルスのプロテアーゼ活性はある種のペプチ
ドハロメチルケトン類によって阻害できることが、今回
発見された。これらの化合物はＩ■ａ乳動物類における
ウィルスの感染の処置において使用することができる。

本発明によれば、有効成分として、式 ％式％ 式中、 ＡＩはＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉ　ｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔ
ｙｒ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、ＳｅｒおよびＴｈｒから成る群
より選択されるアミノ酸残基であり、 Ａ２はＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、およびＧｌｙ
から成る群より選択されるアミノ酸残基であり、 Ａ３はＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙ
ｒおよびＧｌｙから成る群より選択されるアミノ酸残基
であり。

Ｒ１はＮ−末端保護基であり、モして Ｒ２はメチル、イソプロピル、イソブチル、４−ヒドロ
キシベンジル、または ｌ −ＣＨ２ＣＨ２ＣＲ−３ であり、ここで Ｒ３はアミン、メトキシル、エトキシル、ベンジルオキ
シ、または１〜６個の炭素原子のアルキルであり、 ＸはＣＩまたはＢｒであり、そして ｎはＯまたはｌであり、ただしＡ３およびＡ１の両者は
同時にＡｌａではない、 の化合物または生理学的に許容されうるその塩を含有す
ることを特徴とする曲孔動物におけるピコルナウィルス
の感染の処置剤、が提供される。

また、本発明によれば、式 ％式％ 式中。

Ａ１．Ａ２．Ａ３．Ｒ１，Ｘおよびｎは上に定義した通
りであり、そして Ｒ２は ｌ −ＣＨ２ＣＨ２ＣＲ３ であり、ここでＲ３はメトキシルまたはエトキシルであ
る、 の化合物または生理学的に許容されうるその塩、が提供
される。

本発明における有効成分は、選択したトリペプチドおよ
びテトラペプチドのハロメチルケトン誘導体である。こ
れらの化合物はウィルスの暗号化プロテアーゼ類（ｖｉ
　ｒｕｓ−ｅｎｃｏｄｅｄｐｒｏｔｅａｓｅｓ）による
ピコルナウィルスのカプシド蛋白質のプロセシングを阻
害する。

この明細書を通じて使用するとき、アミノ酸残基または
アミノ酸について次の略号を適用する：Ａｌａ：Ｌ−ア
ラニン Ｇ１ｙ＋　　　グリシン Ｇｉｎ：Ｌ−グルタミン Ｇｌｕ：Ｌ−グルタミン酸 Ｌｅｕ：Ｌ−ロイシン １１ｅ：Ｌ−インロイシン Ｌｙｓ：Ｌ−リジン Ｐｈｅ　：　Ｌ−フェニルアラニン Ｐｒｏ：Ｌ−プロリン Ｓｅｒ：Ｌ−セリン Ｔｈｒ：Ｌ−スレオニン Ｖａｌ：Ｌ−バリン この明ｍ書を通じて使用するとき、「Ｎ−末端保護基」
は次の基を意味するニアリールカルボニル、アルキルカ
ルボニル、アルコキシカルボニル、アリールオキシカル
ボニル、アラルコキシカルボニル、アリールスルホニル
、アルキルスルホニル、またはアリールスルホニルペプ
チド保護基、あるいはペプチド合成の分野において当業
者に知られている他の同等な基。グロス（Ｇ　ｒ　ｏ　
ｓＳ）およびメイエンホウファー（Ｍｅｉｅｎｈ。

ｆ　ｅ　ｒ）編、ベノ±上３（Ｔｈｅ　　Ｐｅｐｔｉｄ
ｅｓ）、Ｖｏｌ、３　（アカデミ・ンク争プレス。

ニューヨーク）３’−８１ぺ′−ジ（その開示をここに
引用によって加える）は、多数のアミノ酸保護基を記・
敗している。ここで使用するとき、「アルキル」は、個
々にあるいは大きい部分の一部として、１〜１０炭素原
子の直鎖状、環状、あるいは分枝鎖状の脂肪族部分を意
味する；　「アリール」は、６〜１８個の炭素原子の芳
香族部分、例えば、フェニルを意味し、この部分は置換
されていないか、あるいは１または２以上のアルキル、
ニトロ、アルコキシまたはハロ基により置換されている
；　「アラルコキシ」は７〜１９個の炭素原子の芳香族
部分を意味し、この部分は脂肪族置換基、および、任意
に、他の置換基、例えば、１または２以上のアルキル、
アルコキシ、ニトロまたはハロ基を有する。ここで使用
するとき、「ハロ」はＣＩまたはＢｒを意味する。

Ｎ−末端保護基Ｒ１についての適当な意味の例は、次の
通りである：ホルミル、アセチル、トリフルオロアセチ
ル、ベンジルオキシカルボニル（カルボベンゾキシ）、
置換ベンジルオキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブチルオキ
シカルボニル、インプロピルオキシカルボニル、アリル
オキシカルボニル、フタロイル、ベンゾイル、アセトア
セチル、クロロアセチル、フェノキシカルボニル、メト
キシスクシニル、スクシニル、２，４−ジニトロフェニ
ル、タンシル、ｐ−メトキシベンゼンスルホニル、Ｐ−
１ルエンスルホニル、メタンスルホニルおよびフェニル
チオ。Ｒ１についてのとくに便利な意味は、カルボベン
ゾキシ（２）、１ｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂ
　ｏ　ｃ）およびアセチル（Ａｃ）である。

Ｎ−末端保護基についてのいくつかの意味を、この明細
書を通じて次のように略する：Ｚ　　　　　：カルボベ
ンゾキシ Ｂｏｃ　　　：　ｔ−ブチルオキシカルボニルＡｃ　　
　　　ニアセチル Ｅｔ　　　　　：エチル Ｓｕｃ　　　　ニスクシニル ＭｅＱＳｕｃ：メトキシスクシニル ＤＮＳ　　　　：ダンシル ＤＮＰ　　　　：２，４−ジニトロフェニル本発明の処
置剤において有用な化合物を命名するとき、Ｃ−末端ア
ミノ酸部分 −ＮＨＣＨＣ− は対応するアミノ酸の名称が割当てられる。こうして　
Ｒ１が２であり、Ａ１がＬｅｕであり、Ａ２がＧｌｙで
あり、Ａ３がＰｈｅ’であり　Ｒ２がイソブチルであり
、モしてＸがＣ１である上の式Ｉの化合物は１便利に、
Ｎ−カルボベンゾキシ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−グ
リシル−し−口イシル−Ｌ−ロイシンクロロメチルケト
ンと命名される；この化合物はＺ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌ
ｅｕ−Ｌｅ　ｕＣＨ２Ｃｌと略される。

本発明の種々の実施態様において好ましい化合物の考え
られるクラスは、次のものを包含する。

第１クラスは、ＨＩ　、Ｒ２、ＡＩ　、Ａ２　、Ａ３お
よびＸが上に定義した通りであり、そしてｎがＯである
化合物を包含する。第２クラスは、Ｒ１、Ｒ２およびＸ
がＦに定義した通りであり、ｎが１であり　ＡＩがＰｈ
ｅ、ｃｔｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、ＬｅｕおよびＳｅｒから
成る群より選択され、Ａ２がＡｌａ、Ｖａｔ、Ｌｅｕ、
ＩｌｅおよびＧｌｙから成る群より選択され、そしてＡ
３がＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉ　ｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙ
ｒおよびＧｌｙから成る群より選択される化合物を包含
する。

ウィルスの増殖を阻害する効果のすぐれることを基準に
すると、ｎが１であり、Ｒ２がイソブイルまたはメトキ
シカルボニルエチルであり、Ｒ１がＺまたはＭｅＱＳｕ
ｃであり、ＡＩがＡｌａ、ＧｌｙまたはＬｅｕであり、
Ａ２がＩｌｅまたはＧｌｙであり、モしてＡ３がＰｈｅ
、ＡｌａまたはＬｅｕである式Ｉの化合物は本発明の処
置剤における使用にとくに好ましい。

本発明の化合物は、Ｒ２がメトキシカルボニルエチルま
たはエトキシカルボこルエチルである上の弐工の化合物
である。この属の範囲内に入る考えられる化合物のクラ
スは、本発明の処理剤中に使用する化合物について上に
定義した化合物に範囲が相当するクラスを包含する。本
発明の好ましい化合物は、ｎが１であり、ＲＩがＺまた
はＭｅＯＳｕｃであり、Ｒ２がメトキンカルボニルエチ
ルＡ２がＧｌｙであり、そしてＡ３がＰｈｅまたはＡｌ
ａであるものである。とくに好ましい化合物は、Ａ１が
Ｌｅｕであり、Ａ３がＰｈｅであり、そしてＲ１がＭｅ
ＯＳｕｃである化合物である。

本発明の種々の実施態様において有用な化合物の特定の
例は、次のものを包含する： ＺーＰｈｅーＧｌｙーＬｅｕ−ＬｅｕＣＨ２　Ｃｌ、 Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−ＬｅｕＣＨ２　Ｃｌ、 Ａｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−ＬｅｕＣＨ２Ｃｌ、 Ｓｕｅ−Ｐｈｅ−Ｇｌ　ｙ−Ａｌａ−ＬｅｕＣＨ２Ｃｌ
、 ＭｅＯＳｕｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−ＬｅｕｃＨ２
ｃｌ、 ＤＮＳ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−ＬｅｕＣＨ２　Ｃｌ
、 ＤＮＰ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−ＬｅｕＣＨ２　Ｃｌ
、 Ｂ　ｏ　ｃ−Ｇ　ｌ　ｙ　−　１　ａ−Ｌｅ　ｕＣＨ２
　　Ｃ　１、Ｚ−Ｌｅ　ｕ−Ｇ　ｌ　ｙ−Ａ　ｌ　ａ−
Ｌｅ　ｕＣＨ２　　Ｃｌ、 Ｚ−Ｐｈｅ−ａｔｙ−Ｇｌｙ−ＬｅｕＣＨ２　　Ｃ１、 Ｚ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−ＬｅｕＣＨ２　　Ｃｌ、 Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−ＬｅｕＣＨ２　　Ｃ１、 Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−ＬｅｕＣＨ２　　Ｃｌ、 Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−ＬｅｕＣＨ２　Ｃｌ、 Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−ＬｅｕＣＨ２　ＣＭｅＯ
Ｓｕｃ−Ａｌａ−Ｉ　　１ｅ−Ｐｈｅ−ＬｅｕｃＨ２ｃ
１、 ＭｅＯＳｕｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ　　（
ＯＣＨ３　）ＣＨ２　　Ｃ　ｌ、ＭｅＯＳｕｃ−Ａｌａ
−Ｉ　　１ｅ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ　　（Ｏ　Ｃ　Ｈｓ　）
　　Ｃ　Ｒ２　　Ｃ　ｌ、Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ
−ＶａｌＣＨ２　Ｃｌ、および Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−ＴｙｒＣＨ２　Ｃｌ。

式１の化合物の生理学的に許容されうる塩類は、存在す
る場合、ｌｆｉ塩基の酸付加塩類を包含し、ここで酸は
有機酸または無機酸、例えば、塩酸、リン酸、マレイン
酸、酢酸，クエン酸、コ／＼り酸などであることができ
る。あるいは、ナトリウム、カリウムおよびアンモニウ
ムの塩類を包含する、ｉｌ！ペプチド酸の塩類は本発明
において有用な化合物の範囲内に包含される。

本発明の処理剤において、上の化合物を単独で、互いに
組み合わせて、他の治療剤と組み合わせて、あるいは種
々の不活性の製薬学的に許容されうる担体と組み合わせ
て、種々の投与形態で、経口的にあるいは非経口的に使
用することができる。投与の要件は化合物および使用す
る投与形態および処置される動物とともに変化するであ
ろう。典型的には、治療はより低い投与量で開始され、
そして所望の阻害効果が達成されるまで投与量は増加さ
れる。

本発明において使用する化合物は、ケラトナー（Ｋｅ　
ｔ　ｔ　ｎｅ　ｒ）ら、アーチーブスｅオブＯバ互ユ）
↓旦２：５６（１９７４）に開示される技術に一般に相
当する技術によって製造することができる。

まず、Ｎ−保護されたペプチド類またはアミノ酸類を約
１当量のＮ−メチルモルホリンおよび約Ｉｓ量のインブ
チルクロロホルメートと約−２０°Ｃにおいて反応させ
て、混合ペプチド−イン酪准無水物を生成させる。この
標準の技術は、アンダーソン（Ａｎｄｅｒｓｏｎ）ら、
ジャーナ／ｌｚｅ旦：　５０１２　（１９６７）に記載
されている。第２に、得られる混合無水物を約１当量の
ジアゾメタンとテトラヒドロフランまたは他の適当な不
活性非プロトン性溶媒中で０°Ｃで処理して、Ｎ−保護
されたペプチドまたはアミノ酸のジアゾメチルケトンを
生成させる。第３に、後者の化合物を無水のエタノール
またはエーテル中のＨＣＩまたはＨＢｒの溶液で処理し
て、Ｎ−保護されたハロメチルケトンを生成させる。

大きいペプチドハロメチルケトン類は、それぞれ脱保護
されたハロメチルケトンを、前の手順に従って生成した
他のＮ−保護ペプチドまたはアミノ酸の混合無水物と結
合させることによって組立てることができる。Ｎ−末端
アミン基の脱保護はは、トリフルオロ酢酸、無水ＨＦま
たは無水ＨＣ１で処理することにより、あるいはこの分
野において知られた他の方法により達成することができ
る。

本発明の範囲内の処置剤において使用する特定の化合物
の製造に適当な手順は、下記の実施例の前の節に記載す
る。製造手順および実施例において、特記しないかぎり
、すべての部および百分率は重量により、そしてすべて
の度はセ氏である。

一般の合成手順 １、混合無水物の結合手順 はぼ１ｇのＮ−保護されたアミノ酸またはペプチドを２
０ｍ１のテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中に溶解し、そ
して生ずる溶液を一２０’Ｃ！に冷却する。Ｎ−メチル
モルホリン（１当量）およびインブチルクロロホルメー
ト（１当量）を添加し、５分後、追加の１０ｍ１の冷Ｔ
ＨＦおよび１当量のトリエチルアミンを添加する。得ら
れる混合物を、５ｍｌのジメチルホルムアミド（ＤＭＦ
）中に溶解した１当量のアミンの塩酸塩またはトリフル
オロ酢酸塩に直ちに添加する。−２０℃において１時間
、次いで約２３°Ｃにおいて２時間攪拌することによっ
て、反応を確実にする。生ずる混合物を濾過し、次いで
これにより得られる癌液を蒸発によりほぼ５ｍｌにｅ縮
する。得られるｅｉＩｉｔ物または残留物を酢酸エチル
中に溶解し、順次に０．２Ｎの塩酸、５％の重炭酸ナト
リウム溶液、および飽和水性塩化ナトリウムで洗浄する
。次いで、得られる有機溶液を硫酸ナトリウムで簡単に
乾燥し、濾過し、そして最後に蒸発すると、粗製ペプチ
ド生成物が残る。

２、ヒドロキシスクシンイミド（Ｏ３ｕ）の結合玉町 Ｎ−保護されたアミノ酸類およびペプチド類のＮ−ヒド
ロキシスクシンイミドエステルは、アンダーソン（Ａｎ
ｄｅｒｓｏｎ）ら、ジャーナル−才ブ・アメリカンやケ
ミカル争ソサイアテイ（Ｊ、　　　Ａｍｅｒ、　　　Ｃ
ｈｅｍ、　　　Ｓｏｃ、）８旦＋１８３９　（１９６４
）に開示される手順に実質的に類似する手順により製造
することができる。ＯＳｕエステルを小さい体積のジオ
キサン中に溶解し、そして得られる溶液を等しい体積の
１．５当量のトリエチルアミンおよび１．５当量のアミ
ノ酸または１．１当量のペプチドから成る水溶液に添加
して反応混合物を形成する。５分後、完全な溶液が得ら
れない場合１反応混合物の小さい試験試料を水で希釈し
、そして他の試料をジオキサンで希釈することができる
。得られる結果を基準にして、反応混合物を次いで示し
た溶媒（水またはジオキサン）で完全に溶解するまで希
釈する。反応が完全に進行した後、得られる混合物を塩
酸で酸性化し、そして生ずる生成物を酢酸エチル中に抽
出する。次いで、得られる抽出液を０．２Ｎの塩酸で、
次いで飽和塩化ナトリウム中の０．２Ｎの塩酸で洗浄す
る。次いで、洗浄した抽出液を硫酸ナトリウムで乾燥し
、濾過し、そして最後に蒸発乾固すると、ａ製ペプチド
が残る。

３、他の結合手順 ヘフチド類のダンシル、２，４−ジニトロフェニル、お
よびメトキシスクシニル誘導体類は、選択した塩化物、
フッ化物またはＮ−とドロキシスクシンイミドエステル
を適当なペプチドと反応させることによって製造される
。アセチル誘導体およびスクシニル誘導体は対応する無
水物から製造することができる。ペプチドの塩酸塩また
はトリフルオロ酢酸塩を５０％の水性ジオキサン中に０
．２５ミリモル／ｍｌの水準で溶解し、そして得られる
溶液を０℃に冷却する０選択した結合剤（１，０〜１．
２当量）をジオキサン中に溶解し、そして２当量の重炭
酸ナトリウムと一緒に添加する。生ずる反応はニンヒド
リン陽性物質の消失に従い監視する。

４、メチルエステルの鹸化 Ｎ−保護メチルエステルをジオキサン中に溶解しく１ｍ
１１モル）、そして等しい体積の１．０ＯＮの水酸化ナ
トリウムを３０分かけて添加する。出発物質の消失は薄
層クロマトグラフィーにより監視する。得られる反応が
完全に進行した後、１当量の１．０ＯＮの塩酸を添加し
、そして溶液を１００ｍ１に水で希釈する９次いで、生
成物を酢酸エチル中に抽出し、そして生ずる有機相を０
．２Ｎの塩酸で、次いで飽和塩化ナトリウム中の０．２
Ｎの塩酸で洗浄する。次いで、溶媒を蒸発により除去す
ると、粗製カルボン酸が残る。

５、ＢｏＣ基の加水分解 Ｂｏｃ保護基は、選択したペプチドをトリフルオロ酢酸
中に溶解し、そしてこの溶液を室温で５分間攪拌するこ
とによってペプチドから除去される。次いで冷エーテル
を添加する。エールの添加時に沈殿が得られる場合、そ
れをエーテルで粉砕しそして単離する。沈殿が得られな
い場合、エーテルを蒸発させ、そしてトルエンを添加し
て脱保護されたペプチドをトリフルオロ酢酸塩として沈
殿させる。

あるいは、Ｂｏｃ保護ペプチドをエタノール性塩酸（２
，０〜３．５Ｎ）中に溶解し、そして生ずる溶液を約２
３℃で約３０分間攪拌し、次いで溶媒を蒸発させること
ができる。すべての場合において、ペプチドの塩酸塩ま
たはトリフルオロ酢酸塩は固体の水酸化カリウムおよび
五酸化リンの存在下に一夜真空乾燥する。

６、ｔ−プリルエステル（Ｂ　ｕ）の加水分解ｔ−ブチ
ルペプチドエステルをトリフルオロ酢酸中に溶解し、そ
して生ずる溶液を室温で１時間攪拌する。次いで、溶媒
を蒸発させ、生ずる残留物をトルエン中に溶解する。第
２のトルエンの蒸発工程後、残留物を固体の水酸化カリ
ウムを使用して真空乾燥する。粗生成物を適当な溶媒、
例えば、トルエンまたは酢酸エチルから再結晶化する。

７、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）手順ＴＬＣは５
Ｘ　１０　ａｍのシリカゲルの板上で蛍光性指示薬を使
用して実施する。斑点を普通の技術により、ＵＶ光また
はヨウ素びんを使用して可視化する。Ｂｏｃ基により保
護されたＭｇＩアミン基を有するペプチドをＨＣＩ蒸気
さらし、次いでニンヒドリンで着色させる。次の溶媒系
はクロマトグラフィーに有用である： メタノール：クロロホルム（１＋９） ブタノール：酢酸：水（４＋１＋１） 酢酸エチル：ヘキサン（８：　２） ペプチドハロメチルケトン類の合成 代表的ペプチドハロメチルケトン類は、下に記載するよ
うにして、示した手順により製造した：Ａ、　　Ａｃ−
Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−ＬｅｕＣ２ＣＩ Ａｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−ＬｅｕＣＨ２Ｃ１は、
インブチルクロロホルメートを使用する混合無水物手順
を用いて、Ｎ−７セチルーし−フェニルアラニルグリシ
ルーＬ−アラニンをロジンクロロメチルケトン塩酸塩と
縮合させることにおって製造した。パワーズ（Ｐｏｗｅ
　ｒｓ）　ら。

バイオヒミカ・エト・バイオフィジカ・アクタ３）１旦
０　：　２４６−２６１　（１９７７）は類似する手順
を記載している。粗生成物を酢酸エチルから再結晶化す
ると、白色結晶質固体、融点１５２．４−１５３．８℃
（融点１６７−１６８℃がｔμ告されている）、が得ら
れた。

Ｂ、　　Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−ＬｅｕＣ２Ｃ１ １００ｍｌのＴＨＦ中の４．ＯＯｇ（９，４ミリモ、Ｉ
Ｌ／）　（７）Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌ　ａ−ＯＨお
よび０．９５ｇのＮ−メチルモルホリンの溶液を窒素の
下に一２０℃に冷却し、次いで１．２８ｇのインブチル
クロロホルメートを添加した。５分後、乾燥アセトン中
の１．１４ｇのロイシンクロロメチルケトン塩酸塩の溶
液を添加し、次いで０．９５ｇのＮ−メチルモルホリン
を添加した。

生ずる反応混合物を攪拌し、そして２時間かけて約２５
℃に加温した。溶媒を蒸発させ、そして得られる残留物
を酢酸エチル中に溶解した。この溶液を氷水で洗浄し、
次いで冷５％クエン酸で洗浄した。得られる溶液を乾燥
し、次いで溶媒を蒸発させると、５．６３ｇの泡を含む
固体が残った。

この物質を２５０　ｍ　ｌのエーテルで一夜粉砕した。

生ずるゲル様生成物をエーテルから濾過し、そして追加
のエーテルで洗浄すると、３．１０ｇの粗生成物が微細
な白色粉末として得られた。

２．５６ｇの部分を２５ｍ１のあたたかい酢酸エチル中
に溶解すると、曇った溶液が形成した。この溶液を炭素
［セライ）（Ｃｅｌｉｔｅ）］を通して濾過し、そして
追加の２００ｍ１のニーテリを添加した。種結晶の添加
後、１．１５ｇのＺ−Ｐｈｅ−Ｇ　ｌ　ｙ−Ａ　ｌ　ａ
−ＬｅｕＣＨ２ＣＩが沈殿し、そしてこれを集めた。こ
れらの結晶は１３８−１４１．８℃で溶融した；δｂ５
−５９℃（Ｃ＝０．４５ｇ／１００ｍ１、アセトン中）
。

泣訴：Ｃ２９Ｈ３７ＣｌＮ４０６　； 計算値：　Ｃ１６０，７８；Ｈ２Ｓ、５１；Ｎ、９．７
８゜ 実測値：　Ｃ１６０，４５，Ｈ２Ｓ　、　４４　；　Ｎ
、９．６９゜ Ｃ，Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−ＬｅｕＣ２Ｃ１ 前の化合物の合成における予備工程として、Ｚ−Ｐｈｅ
−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−ＯＨを次の手順により調製した。

Ｚ−Ｐｈｅ−ＯＨのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエス
テル（１９，１５ｇ、４８．３ミリモル）を５０ｍ１の
ジオキサン中に溶解し、そして生ずる溶液を濾過し−（
Ｈ−Ｇ　ｌ　ｙ−Ｌｅ　ｕ−ＯＨ（１０，０ｇ、５３．
１ミリモル）、トリエチルアミン（１０，１ｍｌ、７２
．４ミリモル）および水（５０ｍｌ）から成る溶液中に
入れた。この反応混合物を約２３℃で一夜攪拌し、次い
で蒸発によりほぼ６０％にｅ縮した。得られるｅ縮され
た溶液を１．ＯＮの塩酸で酸性になるまで希釈した。生
成物のＺ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−ＯＨを酢酸エチル
中に抽出し、そして得られる抽出液を０．２Ｎの塩酸で
、次いで０．１ＯＮの塩酸に調節した飽和水性塩化ナト
リウムで洗浄した。洗Ｍｌ後、この酢酸エチル溶液を無
水硫酸ナトリウムで乾燥し、そして濾過した。次いで、
酢酸エチルを蒸発させて２２．５ｇの白色の泡を含む生
成物が得られ、これを引続いて酢酸エチルから結晶化す
ると、１６．７ｇ（７）Ｚ−Ｐｈｅ−ａｔｙ−Ｌｅｕ−
ＯＨ（融点１４７−１４８℃）が得られた。

公訴：　Ｃ２ｓ　Ｈ３＋　Ｎ３０６　；計算値：　Ｃ１
６３，９４；Ｈ２Ｓ、５１．Ｎ、８．９５゜ 実測値：　Ｃ１６４，１９，Ｈ２Ｓ、６５．Ｎ、８．９
０゜ Ｈ−Ｌｅ　ｕＣＨ２ＣＩ　＠ＨＣ１は、ケラトナーｓ、
）１６５ニア３９−７４３　（１９７４）に開示される
技術に実質的に従い調製した。

混合無水物は、Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇ　ｌ　ｙ−Ｌｅ　ｕ　−
ＯＨ（１，０５ｇ、２．２４ミリモル）を１０ｍ１のテ
トラヒドロフラン中に溶解し、生ずる溶液を一２０℃に
冷却し、モしてＮ−メチルモルホリン（０，２５ｍ１．
２．２４ミリモル）を添加することによって調製した。

得られる混合物を一２０℃で５分間攪拌し、次いで２０
ｍ１の冷テトラヒドロフランおよびトリメチルアミン（
０、３１ｍｌ、２．２４ミリモル）を添加した。この混
合物を５ｍｌの冷Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド中ノＨ
−Ｌｅ　ｕｃＨ２Ｃ１・ＨＣ１（０、４８ｇ、２．２４
ミリモル）の溶液に添加した。生ずる反応混合物を一２
０℃で約１時間攪拌し、次いで約２３℃で約２時間攪拌
した０次いで、この混合物を慮過し、そしてテトラヒド
ロフランを濾液から蒸発させた。得られる残留物を１０
０ｍ１の酢酸エチル中に溶解した０次いで、この溶液を
順次に０．２Ｎの塩酸、５％の水性重炭酸ナトリウム、
および飽和水性塩化ナトリウムで洗浄した。次いで、洗
浄した抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、次いで溶
媒を蒸発させると、１．２ｇの泡が得られた。この生成
物を酢酸エチルから結晶化すると、０．９４ｇ（融点１
６０−１６１．５°Ｃ）Ｃ７）Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌ
ｅｕ−ＬｅｕＣＨ２Ｃ１が得られた。

漣：　Ｃ３２Ｈａ　３　Ｎ４０６　Ｃ１；計算値：　Ｃ
１６２，４７，Ｈ２７，０６，Ｎ、９．１４゜ 実測値：　Ｃ１６２，３２；Ｈ２Ｓ、９０；Ｎ、９．１
４゜ Ｄ、　　Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−ＬｅｕＣ２Ｂｒ Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−ＬｅｕＣＨ２Ｃ１の製造
について記載する手順に実質的に従って、Ｚ−Ｐｈｅ−
Ｇ　ｌ　ｙ　−Ａ　１　ａ−ＯＨＣ７）混合無水物（０
，４１ｇ、０．９５ミリモル）を調製し、そしテＨ−Ｌ
ｅ　ｕＣＨ２Ｂ　ｒ　＊　ＨＢ　ｒに結合した。得られ
る生成物を酢酸エチル：へキサンらら結晶化すると、０
．３０ｇが得られた。得られた生成物を同一の溶媒から
再結晶化すると、０．０７ｇ、融点１３５．５−１３８
℃（分解）が得られた。

’ｔ＞Ｆｒ：Ｃ２９Ｈ３ｔ　Ｎ４０６　Ｂｒ；計算値：
　　Ｃ，５６，３９，Ｈ２Ｓ、０５．Ｎ、９．０７゜ 実測値：　Ｃ１５６，７０；Ｈ２Ｓ、２６；Ｎ、８．９
７゜ Ｅ、　　Ｚ−Ｐｈｅ−ＧＩＶ−Ａｌａ−ＶａｌＣ２Ｃ１ まず、Ｂｏｃ−Ｖａｌ　−ＯＨ（６，５ｇ、３０ミリモ
ル）をｌ　Ｏｍ　ｌのＴＨＦ中に溶解し、そしてそれを
Ｎ−メチルモルホリン（３、３ｇ、３０ミリモル）およ
びインブチルクロロホルメート（３，９ｍｌ、３０ミリ
モル）で−２０℃で１０分間処理することによって、前
駆体Ｈ−ＶａｌＣＨ２Ｃ１・ＨＣＩを調製した。得られ
る混合物を癌過し、そして保持された物質を４０ｍ１の
冷ＴＨＦで洗浄した。合わせた濾液を２００　ｍ　ｌの
ジアゾメタン：エーテルに添加した。得られた溶液を０
℃で２時間攪拌し、次いで溶媒を蒸発により除去すると
油が得られた。この油を酢酸エチル中に溶解し、５％の
重炭酸ナトリウムで洗浄し、次いで飽和水性塩化ナトリ
ウムで洗浄し、次いで硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒
を蒸発すると６゜４ｇの油が残った。この油を１００ｍ
１のエーテル中に溶解し、そして得られた溶液を５％の
過剰のエタノール性ＨＣＩで１５分間処理した。この溶
液を冷水で洗浄し、次いで飽和水性塩化ナトリウムで洗
節し、次いで硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒の蒸発後
、生成物をヘキサンで洗浄すると、２．７ｇのＢｏｃ−
ＶａｌＣＨ２Ｃ１（融点７０−７３°Ｃ）が得られた。

Ｂｏｃ−ＶａｌＣＨ２Ｃ１（１，０ｇ）を５ｍｌの３Ｎ
のエタノール性ＨＣＩとともに３０分間約２３℃で攪拌
することによって脱ブロッキングする。溶媒を蒸発し、
そして得られた残留物をエーテルで粉砕して０．６９ｇ
のＨ−ＶａｌＣＨ２Ｃ１・ＨＣｌが得られた。

次いで、上（１）Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ
ｃＨ２ｃｌの製造について記載した手順に実質的に類似
する手順により、Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａ　ｌ　ａ−Ｏ
Ｈ（１、６０ｇ、３．７３ミリモル）をＨＶ　ａ　ｒ　
ＣＨ２ＣＩ　８ＨＣｌに結合した。得られる生成物を酢
酸エチル：エーテルから再結晶化すると、１．２９ｇ（
７）Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａ　ｌ　ａ−Ｖａ　１ｃＨ２
Ｃｌ　（融点１４３−１４４℃）が得られる。

立祈：　Ｃ２８Ｈ３５Ｎ４　ｏ、、　Ｃ１；計算値：　
Ｃ１６０，１４，Ｈ，６，３２，Ｎ、１０．０２゜ 実Δ１１値：　Ｃ１５９，９２，Ｈ２Ｓ、２５．Ｎ、１
０．０５゜ Ｆ、　　Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−ＴｙｒＣ２ＣＩ Ｂｏｃ−Ｔｙｒ−ＯＨ（Ｌｏｇ、３５．５ミリモル）を
３０ｍ１のテトラヒドロフラン中に溶解し、次いでそれ
をＮ−メチルモルホリン（３，９１ｇ、３５．５ミリモ
ル）およびインブチルクロロホルメート　（４，６２ｍ
１．３５．５ミリモル）で−２０℃で５分間処理するこ
とによって、Ｂ　ｏ　ｃ−Ｔｙ　ｒＣＨＮ２を調製した
。得られる混合物を濾過し、そしてフィルターに保持さ
れた物質を５０ｍ１の冷テトラヒドロフランで洗浄した
。得られた溶液を集め、そして合わせた。合わせた政府
を１５０ｍ１のジアゾメタン：エーテル（約４０ミリモ
ル）に添加し、そして得られた反応混合物を１５分間Ｏ
℃で攪拌した。次いで、溶媒を窒素の流れで蒸発させた
。残留物を酢酸エチル中に溶解し、そして得られた溶液
を水で洗浄し、次いで水性塩化ナトリウムで洗浄した。

次いで洗浄した溶液を硫酸ナトリウムで乾燥し、次いで
溶媒を蒸発して粗生成物を得た。この物質を７５ｇのシ
リカゲルを含有する４ｃｍのカラムのクロでトゲラフイ
ーにかけ、溶媒としてクロロホルムを使用すると、３．
６７ｇのＢｏｃ−ＴｙｒＣＨＮ２が得られた。この生成
物をエーテルから再結晶化すると、ｔ、ｇｓｇ（融点１
３Ｂ−１３７℃）が第１収穫物として得られ、そして０
．５８ｇ（融点１３３．５−１３４．５℃）が第２収穫
物として得られた。ＣＤＣｌ３中のＮＭＲはδ５．２７
にジアゾのプロトンを示した。

公訴：Ｃ＋　５ＨＩ　９Ｎ３０４　　；計算値：　Ｃ１
５８，９９；Ｈ２Ｓ、２８；Ｎ、１３．７６゜ 実測値：　Ｃ１５９，０８；Ｈ２Ｓ、１６；Ｎ、１３．
６５゜ Ｂｏｃ−ＴｙｒＣＨＮ２　　（１，８１ｇ、５．９２ミ
リモル）を３０ｍ１のテトラヒドロフラン中に溶解し、
そして得られた溶液を３．４５Ｎのエタノール：ＨＣｌ
（１，７２ｇ、５．９２ミリモル）で０℃で５分間処理
した。温度を調節しないで、溶媒を回転蒸発器による蒸
発により除去した。残留物を酢酸エチル中に溶解し、そ
して得られた溶液を０．２Ｎの塩酸で、次いで悠和水性
塩化ナトリウムで洗浄した。洗浄した溶液を硫酸ナトリ
ウムで乾燥し、次いで溶媒を結晶質Ｂｏｃ−Ｔｙ　ｒＣ
Ｈ２Ｃ１を得た。結晶を単離し、そして冷エーテルで洗
浄して０．４５ｇ（融点１１０−１１２℃）が第１収穫
物として得られ、そして０．９０ｇ（融点１１０−１１
２℃）が第２収穫物として得られた。ＣＤＣｌ３中のＮ
ＭＲは期待するものに相当したが、ただし−〇〇ＣＨ２
Ｃｌのメチレンのプロトンはδ４，１に二重線として現
われた。

ｅＭ：ｃＩ５Ｈ２０ＮＯ４Ｃ１； 計算値：　Ｃ１５７，４１；Ｈ２Ｓ、４４；Ｎ、４．４
６゜ 実測値：　Ｃ１５７，６６；Ｈ２Ｓ、６６；Ｎ、４．５
２゜ Ｂｏｃ−ＴｙｒＣＨ２Ｃ１（０，５ｇ）を２０ｍ１の３
．５Ｎのエタノール性ＨＣＩで約２３６Ｃで３０分間処
理することによって脱ブロッキングした。溶媒を蒸発し
、得られた生成物、Ｈ−”ｒｙｒＣＨ２Ｃ１・ＨＣｌ　
（０，４５ｇ）を固体の水酸化カリウムおよび五酸化リ
ンの存在下に真空転帰した。

上の手順ＥにおけるＺ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅ　　、ｕ
−ＬｅｕＣＨ２Ｃ１の製造について記載した手順に実質
的に類似する混合無水物の結合により、Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇ
ｌｙ−Ａｌａ−ＯＨ（０，７７ｇ、１．８０ミリモル）
をＨ−Ｔｙ　ｒｃＨ２Ｃ１・ＨＣＩに結合した。生成物
を酢酸エチルから結晶化して、０．７３ｇ＋７）Ｚ−Ｐ
ｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌ　ａ−Ｔｙ　ｒＣＨ２ＣＩが得られ
た。生成物は１４０−１６０℃でゆっくり分解し、そし
て１６０−１６０．５℃で完全に分解と伴って溶融した
。

分析：　Ｃ３２Ｎ３　ｓ　Ｎ４０７　Ｃ１；計算値：　
Ｃ１５７，４１；Ｈ２Ｓ、４４；Ｎ、４．４６゜ 実測値：　Ｃ１５７，６６、Ｈ，６，６６、Ｎ、４．５
２゜ 手順Ｃについて記載するようにして、Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇ　
Ｉ　ｙ−Ｌｅ　ｕ−ＯＨからＭｅＯＳｕｃ−Ｐｈｅ−Ｇ
ｌｙ−Ｌｅｕ−ＯＨを製造した。ｚ−ｐｈｅ−ｃｔｙ−
Ｌｅｕ−ＯＨ（４，００ｇ、８゜５２ミリモル）を１０
０ｍ１のメタノール中に溶解し、そして１．０当量の無
水ＨＣＩおよび０゜５０ｇの炭素担持１０％Ｐｄの存在
下にバール（Ｐ　ａ　ｒ　ｒ）装置で一夜水素化した。

得られた反応混合物を濾過しそして溶媒を蒸発させると
、３、１ｇｔ７）Ｈ−Ｆｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−ＯＨが
得られた。

この生成物を５ｍｌのＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド中
に溶解し、これにメトキシコハク酸のＮ−ヒドロキシス
クシンイミドエステル（１，９ｇ、８．４ミリモル）お
よびトリエチルアミン（１，２ｍｌ、８．４ミリモル）
を添加した。この反応混合物を周囲温度において０．５
０時間攪拌し、次いで追加のトリエチルアミン（０，５
８ｍ１．４，２ミリモル）を添加した。次いで、この反
応混合物を一夜攪拌した。この時点で、５ｍｌの重炭酸
ナトリウムの５％の水溶液を添加した。５分後、反応混
合物を５％の水性重炭酸ナトリウムで５０ｍ１に希釈し
て沈殿が得られ、これを廃棄した。酢酸エチルを反応混
合物に添加して生成物ＭｅＯ３ｕｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−
Ｌｅｕ−ＯＨを抽出した。得られた抽出混合物の水性部
分を塩酸で酸性化し１次いで酢酸エチルの相または抽出
液を水性部分から分離した。抽出液を０．２ＯＮの塩酸
で洗浄し、次いで０．２ＯＮの塩酸中で調製した飽和塩
化ナトリウムで洗浄した。次いで、洗浄した溶液を硫酸
ナトリウムで乾燥した。

溶媒を蒸発し、そして得られた残留物を酢酸エチルから
再結晶化すると、１．３０ｇのＭ　ｅ　ＯＳ　ｕｃ−Ｐ
ｈ　ｅ−Ｇ　Ｉ　ｙ−Ｌｅ　ｕ−ＯＨ（融点１６７．５
−１６８．５°Ｃ）が得られた。

分析：　Ｃ２３Ｎ３２　Ｎ３０ｙ　； 計算値：　Ｃ１５８，９１；Ｈ２Ｓ、７６、Ｎ、９．３
７゜ 実測値：　Ｃ１５９，２０；Ｈ２Ｓ、９９；Ｎ、９．０
６゜ Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−ＬｅｕＣＨ２Ｃ１の製造
について記載した手順に実質的に類似する手順により、
ＭｅＯＳｕｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅ　ｕ−ＯＨ（１、
０ｇ、２．２３ミリモル）をＨ−ＬｅｕＣＨ２Ｃ１・Ｈ
Ｃｌに結合した。結合後、溶媒を蒸発して泡の生成物が
得られ、これを酢酸エチルから結晶化して、０．３０ｇ
（融点１１６−１１７°Ｃ）のＭｅＯＳｕｃ−Ｐｈｅ−
Ｇ　ｌ　ｙ−Ｌｅ　ｕ−Ｌｅ　ｕＣＨ２Ｃ１が第１収穫
物として得られ、そして０．２５ｇ（融点１１５−１１
６°Ｃ）が第２収穫物として得られた。第１収穫物の試
料を分析した。

立逝：Ｃ２９Ｈ４３Ｎ４０７Ｃ１； 計算値：　Ｃ１５８，５１，Ｎ１７．３０．Ｎ、９．４
２゜ 実測値：　Ｃ１５８，６７；Ｈ１７，２０，Ｎ、９．３
１゜ Ｈ，５ｕｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−ＬｅｕＨ２ＣＩ Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−ＯＨを前述の混合無
水物の結合手順に実質的に従って調製したが、ただしア
ミン成分をテトラヒドロフランまたはアミン塩酸塩を溶
解するために最少量の水を含有するテトラヒドロフラン
の中に添加した。酢酸エチルをメタノール中の水性水酸
化ナトリウムで鹸化した。

混合無水物手順を使用して、Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（３
５，Ｏｇ、２００ミリモル）をＨ−Ａ　１ａ　−ＯＣＨ
３・ＨＣｌ　（２７、９，２００ミリモル）に結合する
ことによって、Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−ＯＣＨ３を調
製した。得られる生成物（４３，５ｇ、ロアミリモル）
をジオキサン中において無水ＭＣＩで脱ブロッキングし
た。脱ブロッキング後、ジオキサン：エーテルから結晶
化すると、２７　、１　ｇＯＨ−Ｇ　ｌ　ｙ−Ａ　ｌ　
ａ−ＯＣＨ３・ＨＣＩが得られた。

混合無水物手順に従い、Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ（２６，
５ｇ、１００ミリモル）をＨ−Ｇ　ｌ　７−Ａｌａ−Ｏ
ＣＨ３・ＨＣｌ　（１９，６ｇ、１００ミリモル）に結
合した。酢酸エチル：へキサンから結晶化後、３０．２
ｇのＢｏｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａ　ｌ　ａ−ＯＣＨ３（
融点１２６．４−１２７．８℃）が得られた。

＋）ｉ：　Ｃ２ｏ　Ｈ２９Ｎ３０ｓ　；計算値：　Ｃ１
５８，９５；Ｈ１７，７１，Ｎ、１０．３１゜ 実測値：　Ｃ１５９，４９；Ｈ１７，０５；Ｎ、１０．
２６゜ Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−ＯＣＨ３（２８，４
ｇ、６９．７ミリモル）を鹸化して２２ｇ（７）固体（
７）Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−ＯＨが得られた
。それをアセトン：エーテルから結晶化すると、２０ｇ
の生成物（融点１０５．７−１０９℃）が得られた。

公訴：Ｃｌ９Ｈ２７Ｎ３０６； 計算値：　Ｃ１５８，００，Ｈ２Ｓ、９２．Ｎ、１０．
６８゜ 実測値：　Ｃ１５Ｂ、０４；Ｈ２Ｓ、７８．Ｎ、１０．
６６゜ 混合無水物手順に従い、Ｂ　ｏ　ｃ−Ｐｈ　ｅ　−Ｇ　
１ｙ−Ａ　ｌ　ａ−ＯＨ（１１、８ｇ、３０ミリモル）
をＨ−ＬｅｕＣＨ２Ｃ１＠ＨＣＩ　（６，０６ｇ、３０
ミリモル）に結合することによって、Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−
Ｇｌｙ−Ａｌａ−ＬｅｕＣＨ２Ｃ１を調製した。Ｂｏｃ
−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−ＯＨの混合無水物を３００
ｍ１のテトラヒドロフランおよび２５ｍ１のアセトンの
溶液の中で３Ｊ製し、次いでＨ−ＬｅｕＣＨ２Ｃ１−Ｈ
Ｃｌをアセトン中において添加した。得られる生成物の
１７．６ｇをエーテル中に溶解し、炭素で処理し、そし
て濾過した。生成物ＢｏＣ−Ｐｈｅ−ｃｔｙ−Ａ　ｌ　
ａ−Ｌｅ　ｕＣＨ２ＣＩをエーテルから再結晶化した（
１０．０ｇ）。

公１？：Ｃ２ｏ　Ｈ３９Ｎ４０ｓ　Ｃ１；計算値：　Ｃ
１５７，９３；Ｈ１７，２９，Ｎ、１０．３９゜ 実測値：　Ｃ１５７，９２，Ｈ１７，５３；Ｎ、１０．
１７゜ Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−ＬｅｕＣＨ２Ｃ１（
０，３０ｇ）を１ｍｌの無水トリプルオロ酢酸で約２３
°Ｃにおいて５分間処理してトリフルオロ酢酸塩を形成
し、これを冷エタノールの添加により沈殿させ、次いで
追加の冷エーテルで洗浄した。次いで、この塩を固体の
水酸化カリウムおよび五酸化リンで乾燥すると、０．３
１ｇ（０，５５ミリモル）　ｔ７）Ｈ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ
−Ａｌａ−ＬｅｕＣＨ２Ｃ１・トリフルオロアセテート
が得られた。この生成物を２ｍｌの５０％のジオキサン
：水中に溶解し、そして得られた溶液を０℃に冷却した
。１ｍｌのジオキサン中に溶解した重炭酸ナトリウム（
０，０９ｇ、０．６６ミリモル）およびコハク酸無水物
（０，０６６ｇ、０．６６ミリモル）を添加した。１時
間後、０゜５５ｍ１の１．ＯＮの塩酸を添加し、そして
得られた溶液水で１０ｍ１に希釈し、そして４℃に保持
した。この期間の間、生成物５ｕｃ−Ｐｈｅ−Ｇ　１　
ｙ−Ａ　ｌ　ａ−Ｌｅ　ｕＣＨ２Ｃ１は溶液から結晶化
した。この生成物を濾過し、そして１００ｍ１の０．０
ＩＮの塩酸で洗浄した。真空乾燥後、０．１８ｇｃ７）
Ｓｕｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−ＬｅｕＣＨ２Ｃ１（
融点１５７．５−１５８℃）が得られた。

９Ｆｔ：　Ｃ２ｓ　Ｈ３ｓ　Ｎａ　Ｏｙ　Ｃ１；計算値
：　Ｃ１５５，７０，Ｈ２Ｓ、５６．Ｎ、１０．４０゜ 実ａＩｌｌ値：　Ｃ１５５，４７，Ｈ２Ｓ、５９；Ｎ、
１０．４８゜ ５ｕｅ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−ＬｅｕＣＨ２Ｃ１（
０，２０ｇ、０．３７ミリモル）を１０ｍ１のアセトン
中に溶解し、そして得られた溶液をジアゾメタン：エー
テル（１０ｍ　ｌ）で０℃において３０分間処理した。

溶液を約２３℃に加温した後、溶媒を蒸発させた。残留
物をアセトン中に溶解し、そして得られた溶液濾過し、
そして溶媒の蒸発により濃縮した。濃縮物を酢酸エチル
で希釈し、そしてこの溶液を再び蒸発により濃縮してア
セトンの大部分を除去した。この生成物を単離し、そし
て冷酢酸エチルで洗浄すると、０゜１１ｇｃ７）ＭｅＯ
Ｓｕｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｌｅ　ｕＣＨ２Ｃ１
（融点１２８．５−１２９゜５°Ｃ）が得られた。

注折：　Ｃ２ｓ　Ｈ３７Ｎ４０７　Ｃ１；計算値：　Ｃ
１５６，４５；Ｈ２Ｓ、７６、Ｎ、１０．１３゜ 実測値：　Ｃ１５６，２６，Ｈ２Ｓ、６９．Ｎ、１０．
０１゜ Ｊ、　　　Ｂｏ　Ｃ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−ＬｅｕＣＨ２Ｃ
↓ Ｂ　ｏ　ｃ−Ｇ　ｌ　ｙ−Ａ　１　ａ−ＯＨをＮ−ｔド
ロキシスクシンイミドの結合手順により調製した。Ｂｏ
ｃ−Ｇｌｙ−Ｏ３ｕ　（７，６７ｇ、２８．２ミリモル
）を１０ｍ１のジメチルスルホキシド中に溶解し、そし
て得られた溶液を２０ｍ１の水中のＨ−Ａｌａ−ＯＨ（
３，７６ｇ、４２．３ミリモル）およびトリエチルアミ
ン（５，８９ｇ、４２．３ミリモル）から成る溶液に添
加した。−夜攪拌後、沈殿を濾過により除去した。残る
溶液を水で希釈し、次いで塩酸で耐性化した。水相を分
離し、それから生成物を酢酸エチルの添加により抽出し
た。酢酸エチル抽出液を０．２Ｎの塩酸で洗浄し１次い
で０．２Ｎの塩酸中で調製した飽和塩化ナトリウムで洗
浄した。次いで、洗浄した酢酸エチル溶液を硫酸ナトリ
ウムで乾燥し、そして濾過した。次いで溶媒を蒸発させ
ると、そして泡状生成物が残り、これを酢酸エチル：ヘ
キサンから結晶化させると、２．８８ｇ（７）Ｂｏｃ−
Ｇｌｙ−Ａｌａ−ＯＨ（融点１２８−１３０℃）が得ら
れた。

／！ＭＬ：　Ｃ＋　ｏ　Ｈ＋　ｓ　Ｎ２０Ｓ　　：計算
値：　Ｃ１４８，７６、Ｈ１７，３８，Ｎ、１１．３８
゜ 実測値：　Ｃ１４９，１２，Ｈ１７，２７；Ｎ、１１　
、２８゜ Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−ＬｅｕＣＨ２Ｃ１の製造
について記載した手順に実質的に類似する手順により、
Ｂ　ｏ　ｃ−Ｇ　ｌ　ｙ−Ｌｅ　ｕ−ＯＨ（２、５ｇ、
１０．２ミリモル）をＨ−ＬｅｕＣＨ２Ｃ１・ＨＣＩに
結合した。酢酸エチルの蒸発させると、３．７ｇの泡が
得られた。酢酸エチル：ヘキサンから結晶化すると、３
．１ｇのＢｏｃ−Ｇ　Ｉ　ｙ−Ａ　１　ａ−Ｌｅ　ｕＣ
Ｈ２Ｃ１（融点９５−９９．５℃）が得られた。

公ｆｒ：ｃ＋　７Ｈ３ＯＮ３０５Ｃ１；計算値：　Ｃ１
５２，０９；Ｈ１７，７３，Ｎ、１０．７２゜ 実測値：　Ｃ１５２，２１；Ｈ１７，４６；Ｎ、１０．
６３゜ Ｋ、　　Ｚ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−ＬｅｕＣ２ＣＩ Ｚ−Ｐｈｅ−Ｓｅ　ｔ　　（ＯＣＨ２Ｃ６Ｈ５）−Ａｌ
ａ−ＯＨを混合無水物結合手順に従い調製した。

まず、Ｂｏｃ−５ｅｔ　（ＯＣＨ２Ｃ６Ｈｓ）−ＯＨ（
４，９３ｇ、１６．７ミリモル）をＨ−Ａｌａ−ＯＣＨ
３・ＨＣｌ　（２，８０ｇ、２０．０ミリモル）に混合
無水物手順により結合すると、６．１ｇ（７）油が得ら
れた０次いでＺ−Ｓｅｒ（ＯＣＨ２Ｃ６Ｈｓ　）−Ａ　
１　ａ−ＯＣＨ３をトリフルオロ酢酸で脱ブロフキング
し、そして得られたＨ−３ｅ　ｒ　（ＯＣＨ２Ｃｓ　Ｈ
ｓ　）　−Ａ　１　ａ　−ＯＣＨ３・トリフルオロアセ
テート（６，１５ｇ、１５．６ミリモル）を混合無水物
手順に従いＺ−Ｐｈｅ−ＯＨ（３，８９ｇ、１３．０ミ
リモル）に結合した。この生成物を酢酸エチルから結晶
化すると、５．４ｇｃ７）Ｚ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ　ＣＯＣ
Ｈ２Ｃｓ　Ｈｓ　）−Ａ　Ｉ　＆−０ＣＨ３（融点１５
８−１５９℃）が得られた。

分析：Ｃ３１Ｈ３５Ｎ３０７； 計算値：　Ｃ１６６，２８；Ｈ２Ｓ、２９．Ｎ、７．４
８゜ 実測値：　Ｃ１６５，５４；Ｈ２Ｓ、２４；Ｎ、７．３
７゜ Ｚ−Ｐｈｅ−３ｅｒ　（ＯＣＨ２Ｃｓ　Ｈｓ）−Ａｌａ
−ＯＣＨ３（４，６３ｇ、８．２４ミリモル）を実質的
に前述のようにして餉化したが、ただし１６ｍ１のジオ
キサンおよび１．０ＯＮの水酸化ナトリウムを使用した
。所望生成物ｚ−ｐｈｅ−３ｅ　ｒ　（ＯＣＨ２Ｃ６Ｈ
ｓ　）　−Ａ　ｌ　ａ−ＯＨをメタノール：酢酸エチル
から結晶化させると、３．５ｇ（融点１７１．５−１７
２．５℃）が得られた。

’ｉ□　　二　Ｃ３ｏ　　Ｈ３３Ｎ３　０７　　；計算
値：　Ｃ１６５，７９，Ｈ２Ｓ、０８；Ｎ、７．６７゜ 実測値：　Ｃ１６５，５０、Ｈ２Ｓ、８６．Ｎ、７．８
４゜ 上の手順Ｃにおいテ２−Ｐｈｅ−Ｇ　Ｉ　ｙ−Ｌｅｕ−
Ｌｅ　ｕＣ）（２ＣＩの製造について記載した手順に実
質的に類似する手順により、Ｚ−Ｐｈｅ−５ｅ　ｒ　（
ＯＣＨ２Ｃ６Ｈｓ）　−Ａ　１　ａ−ＯＨ（１，３７ｇ
、２．５ミリモル）をＨ−ＬｅｕＣＨ２Ｃ１・ＨＣＩに
結合した。生成物は結晶質固体として得られた、０．９
８ｇ（融点１６７−１６８℃）。

公訴：Ｃ３７Ｈ４ＳＮ４０７； 計算値：　Ｃ２６４，０９；Ｈ２Ｓ、５６．Ｎ、８．０
８゜ 実測値：　Ｃ５６４，２２，Ｈ２Ｓ、３Ｂ、Ｎ、８．０
８゜ Ｚ−Ｐｈｅ−３ｅ　ｒ　（ＯＣＨ２Ｃ６Ｈｓ　）　−Ａ
ｉａ−ＬｅｕＣＨ２Ｃ１（０，７１ｇ、１０．２ミリモ
ル）を、１５ｍ１の無水ＨＦと１ｍｌのアニソールとの
混合物で商用ＨＦ装置［ペプチド・インスチュート、イ
ンコーポレーテッド（Ｐｅｐｔｉｄｅ　　Ｉｎ５ｔｉｔ
ｕｔｅ、Ｉｎｃ、）により処理した。０℃で７０分後、
ＨＦを蒸発により除去すると、残留物が残り、これを水
酸化カリウムで一夜真空乾燥した。残留物をエーテルで
粉砕した後、０．３５ｇのＨ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−３ｅｒ
　（ＯＣＨ２Ｃ６Ｈｓ　）　−Ｌｅ　ｕＣＨ２Ｃ１＊　
ＨＦが得られた。

このフッ化水素酸塩（０，３９ｇ、０．７１ミリモル）
を２ｍｌの水と１ｍｌのジオキサンとの混合物中に溶解
した。この得られた溶液を０℃に冷却し、モしてカーポ
ベンゾキシクロライド（０，１０ｍ１．　０．７１ミリ
モル）および重炭酸ナトリウム（０，１２ｇ、１．４２
ミリモル）を添加した。０℃で３０分後、ニンヒドリン
陽性物質を検出することはできなかった。得られた反応
混合物を酢酸エチルで希釈し、そして得られた有機層を
５％の重炭酸ナトリウム、０．２Ｎの塩酸、および飽和
塩化ナトリウムで洗浄した。洗浄した溶液を硫酸ナトリ
ウムで乾燥し、溶媒を蒸発させ、残留物が残り、これを
５０％だけへキサンで希釈すると、０．１３ｇ（７）Ｚ
−Ｐｈｅ−３ｅｒ−Ａ　ｌ　ａ−Ｌｅ　ｕＣＨ２Ｃｌ　
（融点１５５−１５７℃）が得られた。

漣：Ｃ３ｏＨ３９Ｎ４０７Ｃ１； 計算値：　Ｃ２５９，７３，Ｈ２Ｓ、５３；Ｎ、９．２
９゜ 実測値：　Ｃ１５９，８１，Ｈ２Ｓ、４７．Ｎ、９．１
３゜ Ｌ、　　Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−３ｅｒ−ＬｅｕＣＨＬ９
ユ Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇｌ　ｙ−Ｓｅ　ｒ−、ＬｅｕＣＨ２Ｃ１
を次の手順により調製した。まず、Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇ　Ｉ
　ｙ−５ｅ　ｒ　（ＯＣＨ２Ｃ６Ｈ５）　Ｌｅ　ｕＣＨ
２Ｃ１（０，９８ｇ、１４．４ミリモル）を１５ｍ１の
無水ＨＦおよびｌ　ｍ　ｌのアニソールで処理して脱ブ
ロッキングして（手１１１１’ｉＫ）、０．６９ｇ（７
）Ｈ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−３ｅｒ−ＬｅｕＣＨ２Ｃ１・Ｈ
Ｆが得られた。次いで、手順にの手順に実質的に従い、
この中間体（０，５９ｇ、１２６４ミリモル）をカーポ
ベンゾキシクロライドと結合し、酢酸エチル／ヘキサン
から結晶化した後、０．４ｇｃ７）Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ
−３ｅｒ−ＬｅｕＣＨ２Ｃ１（融点１４６−１４６．５
℃）が得られた。

公訴：Ｃ２９Ｈ３７Ｎ４０７Ｃ１； 計算値：　Ｃ１５９，１２；Ｈ２Ｓ、３４．Ｎ、９．５
１゜ 実測値：　Ｃ１５９，４５，Ｈ，６，３７，Ｎ、９．４
６゜ 選択したペプチドハロメチルケトン類の生物学的活性 本発明の組成物において有用な選択した化合物は、２種
類のアッセイにおいてウィルスのプロテアーゼ活性を阻
害することが示された。ウィルスの切離しアッセイ（ｖ
ｉａｌ　　ｃｌｅａｖａｇｅａｓｓａｙ）として知られ
る１つのアッセイは、選択した試験化合物の存在下およ
び不存在下に生長したウィルス感染ＨｅＬａ細胞におけ
る蛋白質合成のパターン（標識アミノ酸類の組込みによ
り可視化された）の比較を包含する。プラーク阻害アッ
セイとして知られる第２のアッセイは、寒天が上に配置
された細胞培養物におけるウィルスの感染性に対する試
験化合物の作用の評価を包含する。試験化合物の毒性の
作用も、存在した場合、プラーク阻害アッセイのインキ
ュベーションの期ｆｆＪＩＩの間にｉ８２察されるであ
ろう０両者のアッセイについて、下に詳しく説明する。

ウィルスの切離しアッセイ このアッセイにおいて、生長するＨｅＬａ−０細胞の試
料を、約１０感染ウイルス粒子／細胞のウィルス濃度で
、ヒトの急性灰白髄炎ウィルス２型またはヒトのライン
ウィルスＩＡ型に暴露した。数時ｆｌｆｌ後、宿主細胞
の代謝は著しく阻害され、そして添加された放射性アミ
ノ酸類はウィルスの蛋白質の中にのみ組込まれた。種々
の濃度の試験化合物を細胞の試料に添加した後、ウィル
スの蛋白質を感染の中間のサイクル（ｍｉｄ−ｃｙｃｌ
ｅ）において６０分Ｍ標識付けされた（ｍ胞をウィルス
に最初に暴露した後３〜５時間）。次いで、細胞の試料
を１％（Ｗ／Ｖ）のドデシル硫酸ナトリウムおよび１％
（Ｖ／Ｖ）の２−メルカフトエタノールを含有する０、
０１モルのトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン緩
衝液、ｐＨ６，８、の中で可溶化した。得られる標識付
けされたウィルスの蛋白質を、コララント（ＫｏｒａＬ
旦：　２９９２　（１９７９）に前に記載されているよ
うに、ポリアクリルアミドゲル上で分離し、そしてオー
トラジオグラフィーによって検出した。選択した濃度の
試験化合物がウィルスの蛋白質のプロセシングの通常の
パターンを崩壊させた場合、その化合物をその濃度で活
性であると記録した。ウィルスのプロテアーゼ阻害活性
を示す試験化合物の存在下に標識付けされた細胞の試料
に和名するゲルは、一般に、対照のゲル上には現われな
い高分子量の蛋白質種の出現によって区別することがで
きた。

プラーク阻害アッセイ このアッセイにおいて、培養したＨｅＬａ細胞を６０ｍ
ｍのプラスチックのペトリ皿中で全面生長させた１次い
で、各培養物にほぼ３００プラ一ク形成単位のウィルス
を感染させた。ヒトライノウィルスＩＡ型を下に報告す
る試験において使用した。この実験に使用したウィルス
を３４．５℃で３０分間細胞に吸収させた。

試験した化合物を、エタノール中に試験すべき最高濃度
より１００倍高い濃度で溶解した。次いで、得られた溶
液を、５％の熱不活性化ウシ胎児血清および０．３８％
の寒天を含有するマツクコイ（ＭｃＣｏｙ）の培地の溶
液中に１：１００に希釈した。次いで、寒天培地中で２
倍希釈を行なった。

ウィルスが細胞へ吸若した後、過剰のウィルスを洗浄除
去し、そして試験すべき化合物の予備選択した希釈物を
含有する寒天培地の５　ｍ　ｌを各培養物の上に配置し
た。対照には寒天培地のみを上にのせた。次いで、各培
養物を３４．５°Ｃでインキュベーションしてプラーク
を発生させた。

プラークは培養物中の死亡した細胞のほぼ円形の領域で
あり、ウィルスの１プラ一ク形成単位が最初に１つの細
胞に感染した区域を示す。寒天の上に配置したものはウ
ィルスの移動度を制限するので、ウィルスの感染は隣接
細胞の間においてのみ伝達される。

対照培養物中のプラークが観察されるために十分に大き
く、しかもなお比較的明確であるとき、すべての培養物
を１％のクリスタル・バイオレット（ｃｒｙｓｔａｌ　
　ｖｉｏｌｅｔ）で若色した。プラークは感染しない細
胞の深い紫色の領域中に明瞭な領域として現われた。試
験化合物の毒性の投与料は、培養血中のｎ（視細胞の脱
離を生じた。

実施例１−１９および比較例Ａ−Ｊ ウィルスの切離しアッセイにおけるペプチドハロメチル
ケトン類のプロテアーゼ阻害活性 ポリオウィルスを使用するウィルスの切離しアッセイに
おけるプロテアーゼ阻害活性について、代表的テトラペ
プチドおよびトリペプチドのクロロメチルケトン類を試
験した、１系列の実験において得られた結果を下の表１
および表２に記載する。結果は次のように記録するニ ー　　　　活性なし ＋／−低い活性 ＋　　　　１００ルｇ　／　ｍ　１で活性＋＋　　　　
　５０ｐｇ／ｍｌで活性 ＋＋＋　　　　１０ルｇ　／　ｍ　Ｉで活性＋＋＋＋　
　　＜５ＪＬｇ／ｍｌで活性表１：　選択したペプチド
ハロメチルケトン類Ｉ　　　Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌ
ａ −Ｌｅ　ｕＣＨ２Ｃ１＋＋＋ ２　　　Ａｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＡＩ ａ−ＬｅｕＣＨ２Ｃ１＋＋＋ ３　　５ｕｃ−Ｐｈｅ−ＧＩＶ−Ａ ｌ　ａ−Ｌｅ　ｕＣＨ２Ｃｌ　　　　＋＋＋４　　　　
ＭｅＯ３ｕｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａ　ｌ　ａ−Ｌｅ　ｕ
ＣＨ２Ｃ＋＋＋５　　　ＤＮＳ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａ ｌ　ａ−Ｌｅ　ｕＣＨ２Ｃ１＋＋＋ ６　　　ＤＮＰ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａ ｌ　ａ−Ｌｅ　ｕＣＨ２Ｃ１＋＋＋ ７　　　Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａ ｌ　　ａ−Ｌｅ　ｕｃＨ２Ｃ１＋＋ ８　　　　Ｚ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＡｌａＬｅ　ｕＣＨ２
Ｃ１＋士＋ ９　　　　Ｚ−Ｐｈｅ−ＧＩＶ−Ｇｌｙ−Ｌｅ　ｕＣＨ
２Ｃｌ　　　　　　　　＋＋＋１０　　　　Ｚ−Ｐｈｅ
−ｃｔｙ−Ａｌａ−Ｌｅ　ｕＣＨ２Ｂ　ｒ　　　　　　
　　＋＋＋１１　　　　Ｚ−Ｐｈｅ−ｃｔｙ−Ａｌａ−
ＶａｌＣＨ２Ｃ１＋＋ １２　　　　Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅ　ｕＣ
Ｈ２Ｃ１＋＋＋＋ １３　　　　Ｚ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅ　ｕＣ
８２Ｃ１＋＋ １４　　　　Ｚ−Ｐｈｅ−ｃｒｙ−Ｐｈｅ−ＬｅｕＣＨ
２Ｃ１−＋＋ １５　　　　Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−５ｅｒ−ＬｅｕＣＨ
２Ｃ１＋＋ １６　　　　Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｐｒ。

−ＬｅｕＣＨ２Ｃ１＋＋ １７　　　　ＭｅＯＳｕｃ−Ａｌａ−Ｉｆｅ−Ｐｈｅ−
ＬｅｕＣＨ２Ｃ＋＋＋ １８　　　　ＭｅＯＳｕｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅ　ｕ
−Ｇ　１　ｕ　　（ＯＣＨ＋＋＋＋３）　　ＣＨ２Ｃ１ １９ＭｅＯＳｕｃ−Ａｌａ−Ｉｉ ｅ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＱＣ＋＋＋ Ｈ３）　　ＣＨ２ＣＬ ２０　　　　Ｚ−Ｐｈｅ−ｃｔｙ−Ａｌａ−Ｔｙ　ｒｃ
Ｈ２ＣＩ　　　　　　＋＋表２：　他のペプチドハロメ
チルケトン類を含Ａ　　　Ｈ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ −Ｌｅ　ｕＣＨ２Ｃ１＋／　− Ｂ　　　Ｚ−Ａｌａ−ＧＩＶ−Ａｌａ −Ｌｅ　ｕＣＨ２Ｃ１＋／− ＣＺ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ａｌａ −ＬｅｕＣＨ２ＣＩ　　　　　　　　＋Ｄ　　　　Ｚ−
Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｌｅ　ｕＣＨ２Ｃ１＋／　− Ｅ　　　　Ｚ−Ｐｈｅ−３ｅｒ−Ａｌａ−ＬｅｕＣＨ２
Ｃｌ　　　　　　　　＋Ｆ　　　　Ｚ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ
−Ｌｙｓ−Ｌ６ｕＣＨ２ＣＩ　　　　　　　　＋Ｇ　　
　　Ｚ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−ＬｅｕＣＨ２Ｃ１＋ ＨＺ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ａｌａ −ＬｅｕＣＨ２Ｃ１＋ ＨＡｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｇｌ ｕ−Ｌｅ　ｕＣＨ２Ｃｌ　　　　　　　＋／−Ｊ　　　
　Ａｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ　　（ＯＥｔ）−Ａｌａ−Ｌｅ
ｕＣＨ２＋／− Ｉ Ｋ　　　　Ａｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−ＡＩａ−Ｌｅ　ｕＣ
Ｈ２Ｃ１＋／一 実施例２０ ラインウィルスＩＡ５に対するするＺ−Ｐｈｅ−Ｇ　ｌ
　ｙ−Ｌｅ　ｕ−Ｌｅ　ｕＣＨ２Ｃ１ｃ７）抗ウィルス
活性を、前述のプラーク阻害アッセイにより評価した。

９０％のプラーク減少により記録された抗ウィルス活性
がＩｇｇ／ｍｌで認められ、一方細胞毒性はヒトＨｅＬ
ａ−０ｌｔｆＪ胞を使用したとき約１５ルｇ　／　ｍ　
１の濃度で最初に検出された。

特許出願人　イー・アイ・デュポン・デ・ニモアス会ア
ンド争カンパニー 一一一）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 式中、 Ａ＾１はＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔ
   ｙｒ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、ＳｅｒおよびＴｈｒから成る群
   より選択されるアミノ酸残基であり、 Ａ＾２はＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、およびＧｌ
   ｙから成る群より選択されるアミノ酸残基であり、 Ａ＾３はＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔ
   ｙｒおよびＧｌｙから成る群より選択されるアミノ酸残
   基であり、 Ｒ＾１はＮ−末端保護基であり、そして Ｒ＾２はメチル、イソプロピル、イソブチル、４−ヒド
   ロキシベンジル、または ▲数式、化学式、表等があります▼ であり、ここで Ｒ＾３はアミノ、メトキシル、エトキシル、ベンジルオ
   キシ、または１〜６個の炭素原子のアルキルであり、 ＸはＣｌまたはＢｒであり、そして ｎは０または１であり、ただしＡ＾３およびＡ＾１の両
   者は同時にＡｌａではない、 の化合物または生理学的に許容されうるその塩を有効成
   分として含有することを特徴とする哺乳動物におけるピ
   コルナウイルス感染の処置剤。 ２、ｎが１である特許請求の範囲第１項記載の処置剤。 ３、Ｒ＾１がＺ、Ａｃ、Ｂｏｃ、ＭｅＯＳｕｃ、Ｓｕｃ
   、ＤＮＳまたはＤＮＰである特許請求の範囲第２項記載
   の処置剤。 ４、Ｒ＾２がイソプロピル、イソブチル、または▲数式
   、化学式、表等があります▼ であり、ここでＲ＾３はメトキシルである特許請求の範
   囲第３項記載の処置剤。 ５、Ａ＾１がＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ
   、Ｇｌｙ、ＰｒｏおよびＳｅｒから成る群より選択され
   る特許請求の範囲第４項記載の処置剤。 ６、Ａ＾２がＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ＧｌｙおよびＩ
   ｌｅから成る群より選択される特許請求の範囲第５項記
   載の処置剤。 ７、Ａ＾３がＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ＩｌｅおよびＰ
   ｈｅから成る群より選択される特許請求の範囲第６項記
   載の処置剤。 ８、Ｒ＾１がＺ、ＭｅＯＳｕｃまたはＳｕｃである特許
   請求の範囲第７項記載の処置剤。 ９、Ｒ＾２がイソプロピルまたはイソブチルである特許
   請求の範囲第８項記載の処置剤。 １０、Ａ＾１がＡｌａ、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、 Ｇｌｙ、ＰｒｏまたはＳｅｒである特許請求の範囲第９
   記載の処置剤。 １１、Ａ＾２がＩｌｅ、ＬｅｕまたはＧｌｙである特許
   請求の範囲第１０項記載の処置剤。 １２、ＡｓがＡｌａ、Ｖａｌ、ＬｅｕまたはＰｈｅであ
   る特許請求の範囲第１１項記載の処置剤。 １３、Ａ＾１がＡｌａ、ＬｅｕまたはＧｌｙである特許
   請求の範囲第１２記載の処置剤。 １４、Ａ＾２がＩｌｅまたはＧｌｙである特許請求の範
   囲第１３項記載の処置剤。 １５、Ａ＾３がＰｈｅ、ＬｅｕまたはＡｌａである特許
   請求の範囲第１４項記載の処置剤。 １６、Ｒ＾１がＺまたはＭｅＯＳｕｃである特許請求の
   範囲第１５項記載の処置剤。 １７、Ｒ＾２がイソブチルである特許請求の範囲第１６
   項記載の処置剤。 １８、Ａ＾１がＡｌａまたはＬｅｕである特許請求の範
   囲第１７記載の処置剤。 １９、Ａ＾２がＧｌｙである特許請求の範囲第１８項記
   載の処置剤。 ２０、Ａ＾３がＰｈｅである特許請求の範囲第１９項記
   載の処置剤。 ２１、Ａ＾１がＡｌａであり、そしてＲ＾１がＺである
   特許請求の範囲第２０項記載の処置剤。 ２２、Ａ＾１がＬｅｕであり、そしてＲ＾１がＺである
   特許請求の範囲第２０項記載の処置剤。 ２３、Ｒ＾２が ▲数式、化学式、表等があります▼ であり、ここでＲ＾３はメトキシルである特許請求の範
   囲第８項記載の処置剤。 ２４、Ａ＾１がＡｌａまたはＬｅｕであり、Ａ＾２がＧ
   ｌｙであり、 Ａ＾３がＰｈｅまたはＡｌａであり、そしてＲ＾１がＺ
   またはＭｅＯＳｕｃである、 特許請求の範囲第２３項記載の処置剤。 ２５、Ａ＾１がＬｅｕであり、 Ａ＾３がＰｈｅであり、そして Ｒ＾１がＭｅＯＳｕｃである、 特許請求の範囲第２４項記載の処置剤。 ２６、式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 式中、 Ｒ＾２は ▲数式、化学式、表等があります▼ であり、ここでＲ＾３はメトキシルまたはエトキシルで
   あり、そして Ａ＾１、Ａ＾２、Ａ＾３、Ｒ＾１、Ｘおよびｎは特許請
   求の範囲第１項において定義した通りである、 の化合物。 ２７、Ｒ＾２がＲ＾３はメトキシルである特許請求の範
   囲第２６項記載の化合物。 ２８、Ａ＾１がＡｌａまたはＬｅｕであり、Ａ＾２がＧ
   ｌｙであり、 Ａ＾３がＰｈｅまたはＡｌａであり、そしてＲ＾１がＺ
   またはＭｅＯＳｕｃである、 特許請求の範囲第２７項記載の化合物。 ２９、Ａ＾１がＬｅｕであり、 Ａ＾３がＰｈｅであり、そして Ｒ＾１がＭｅＯＳｕｃである、 特許請求の範囲第２８項記載の化合物。