JPS624276A - 架橋試薬 - Google Patents
架橋試薬Info
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- JPS624276A JPS624276A JP61149879A JP14987986A JPS624276A JP S624276 A JPS624276 A JP S624276A JP 61149879 A JP61149879 A JP 61149879A JP 14987986 A JP14987986 A JP 14987986A JP S624276 A JPS624276 A JP S624276A
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D249/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
- C07D249/16—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D249/18—Benzotriazoles
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
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- C07D207/30—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D207/34—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D207/36—Oxygen or sulfur atoms
- C07D207/40—2,5-Pyrrolidine-diones
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K17/00—Carrier-bound or immobilised peptides; Preparation thereof
- C07K17/02—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier
- C07K17/06—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier attached to the carrier via a bridging agent
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
たんばく質および不活性担体へのアミノ酸、ペプチドま
たは生物活性化合物のカップリングのための架橋試薬の
必要が増え続けている。下記一般式Ｂで表わされるヘテ
ロ２官能性試薬がこの目的の為に開発されており、これ
を用いるとたとえば、たんばく質および他の担体へのペ
プチドの特異的なＮ末端結合を実行することが可能であ
る。（Ｃｈｒｉｓｔｎｅｒ、 １． ： ５ｙｎｔｈｅ
ｓｅ ｖａｎＰｅｐｔｉｄｅｎ ｚｕｒ ｉｍｍｕｎ
ｏｌｏｇｉｓｃｈｅｎ Ｂｅａｔｉｍｍｕｎｇｖｏｎ
Ｐｒｏｔｅｉｎｅｎ、ｔｈｅｓｉｓ １９８４．Ｕｎ
ｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆＴｕｂｉｎｇｅｎ）− Ｖ−ＮＨ−ＮＨ−ＣＯ−Ａ−ＣＯ−Ｙ旦（式中、ＶはＢ
ｏｃ、 Ｚ、 Ｆｍ匹または他の保護基であり、ＹはＯ
Ｈ，０８ｕまたは他の活性エステル基であり、そしてＡ
はエチレンまたはプロピレン基である）。
たは生物活性化合物のカップリングのための架橋試薬の
必要が増え続けている。下記一般式Ｂで表わされるヘテ
ロ２官能性試薬がこの目的の為に開発されており、これ
を用いるとたとえば、たんばく質および他の担体へのペ
プチドの特異的なＮ末端結合を実行することが可能であ
る。（Ｃｈｒｉｓｔｎｅｒ、 １． ： ５ｙｎｔｈｅ
ｓｅ ｖａｎＰｅｐｔｉｄｅｎ ｚｕｒ ｉｍｍｕｎ
ｏｌｏｇｉｓｃｈｅｎ Ｂｅａｔｉｍｍｕｎｇｖｏｎ
Ｐｒｏｔｅｉｎｅｎ、ｔｈｅｓｉｓ １９８４．Ｕｎ
ｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆＴｕｂｉｎｇｅｎ）− Ｖ−ＮＨ−ＮＨ−ＣＯ−Ａ−ＣＯ−Ｙ旦（式中、ＶはＢ
ｏｃ、 Ｚ、 Ｆｍ匹または他の保護基であり、ＹはＯ
Ｈ，０８ｕまたは他の活性エステル基であり、そしてＡ
はエチレンまたはプロピレン基である）。
上記および後記する略語はこの明細書の末尾に表にまと
めである。
めである。
この種の試薬を使用したカップリングは多段階の方法に
おいて実行されることができる。第１の段階では活性化
されたカルボキシル基が特定の化合物、例えば重合体ま
たはペプチドのアミノ基と反応する。これに続く段階で
は保護基Ｖは除去され生成したヒドラジドがアジドへ転
換されこれは次に穏やかな条件下で他の成分のアミノ基
と反応させられる。しかしながらこの方法は手間がかか
り時間もかかる。そこで担体分子に選択的および直接的
にアミノ基を有する分子を結合することの可能な活性化
試薬の必要性が存在する。
おいて実行されることができる。第１の段階では活性化
されたカルボキシル基が特定の化合物、例えば重合体ま
たはペプチドのアミノ基と反応する。これに続く段階で
は保護基Ｖは除去され生成したヒドラジドがアジドへ転
換されこれは次に穏やかな条件下で他の成分のアミノ基
と反応させられる。しかしながらこの方法は手間がかか
り時間もかかる。そこで担体分子に選択的および直接的
にアミノ基を有する分子を結合することの可能な活性化
試薬の必要性が存在する。
本発明においては、カルボニル基が非保護の状態である
がカップリングが可能である適当な状態にカルボキシル
基がされているアルデヒド酸が橋かけ試薬として使用さ
れそしてアミノ基を有する物質と選択的に２段階工程に
おいて反応させられるという点で前記した問題点を解決
することが可能になったのである。
がカップリングが可能である適当な状態にカルボキシル
基がされているアルデヒド酸が橋かけ試薬として使用さ
れそしてアミノ基を有する物質と選択的に２段階工程に
おいて反応させられるという点で前記した問題点を解決
することが可能になったのである。
従って本発明は、
ｔ 弐■：
（式中、
Ｒ１は縮合条件下で２つの反応体の反応を妨害しないそ
してカルボキシル、カルボニル、ヒドロキシルまたはチ
オール基と反応することがない基であり、そして Ｘは、第１および第２アルキルアミノ基とのアミドの形
成のための反応条件下でＸｏ）ｌとして除去される基で
ある） で表わされる化合物、 ２ 式■： （式中、Ｒ１は上述した意味を有する）であられされる
化合物を、弐■： ＸＯＨｙｌ （式中、Ｘは上述した意味を有する）で表わされる化合
物と、縮合剤とともに水を除きながら反応させることよ
り得られる式■の化合物のｖ４製方法、 ＆ａ）２官能性カップリング試薬としての、ｂ）アルデ
ヒド基を有するアミド類の調製のための、 Ｃ）シツフ塩基の調製のための 式■の化合物の用途 に関するものである。
してカルボキシル、カルボニル、ヒドロキシルまたはチ
オール基と反応することがない基であり、そして Ｘは、第１および第２アルキルアミノ基とのアミドの形
成のための反応条件下でＸｏ）ｌとして除去される基で
ある） で表わされる化合物、 ２ 式■： （式中、Ｒ１は上述した意味を有する）であられされる
化合物を、弐■： ＸＯＨｙｌ （式中、Ｘは上述した意味を有する）で表わされる化合
物と、縮合剤とともに水を除きながら反応させることよ
り得られる式■の化合物のｖ４製方法、 ＆ａ）２官能性カップリング試薬としての、ｂ）アルデ
ヒド基を有するアミド類の調製のための、 Ｃ）シツフ塩基の調製のための 式■の化合物の用途 に関するものである。
本発明の好ましい実施態様は後の記載および請求範囲に
おいて詳述される。
おいて詳述される。
使用されることのできるアルデヒド酸（式■の化合物）
は、１０までの炭素原子、１０までの水素原子、５まで
の酸素原子を有する脂肪族化合物、脂環式化合物、芳香
脂肪族化合物および芳香族化合物でアリ、芳香族アルデ
ヒド酸とくに４−カルボキシベンズアルデヒドが好適で
ある。ペプチド化学において一般的な方法がカルボキシ
ル基を活性化するために使用される。
は、１０までの炭素原子、１０までの水素原子、５まで
の酸素原子を有する脂肪族化合物、脂環式化合物、芳香
脂肪族化合物および芳香族化合物でアリ、芳香族アルデ
ヒド酸とくに４−カルボキシベンズアルデヒドが好適で
ある。ペプチド化学において一般的な方法がカルボキシ
ル基を活性化するために使用される。
活性化は好ましくは、例えば、Ｍ、 Ｂｏｄａｎｓｚｋ
ｙのｒＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ
８ｙｎｔｈｅｓｉｓＪＳｐｒｉｎｇｅｒ刊（１９８４）
に記載されているような、活性エステルを形成するよう
な分子を使用してとりわけＮ−ヒドロキシスクシンイミ
ドまたはヒドロキシベンゾトリアゾールを使用して、対
称無水物またはいわゆる活性エステルを形成することに
より行なわれる。反応はカルボジイミド、好ましくはジ
シクロヘキシルカルボジイミドの存在下にて行なわれる
。
ｙのｒＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ
８ｙｎｔｈｅｓｉｓＪＳｐｒｉｎｇｅｒ刊（１９８４）
に記載されているような、活性エステルを形成するよう
な分子を使用してとりわけＮ−ヒドロキシスクシンイミ
ドまたはヒドロキシベンゾトリアゾールを使用して、対
称無水物またはいわゆる活性エステルを形成することに
より行なわれる。反応はカルボジイミド、好ましくはジ
シクロヘキシルカルボジイミドの存在下にて行なわれる
。
これらの活性化された化合物はそれから極性有機溶媒中
に、アミノ基を有する物質とともに、懸濁されるか溶解
される。この目的に適当であるものは、例えばジオキサ
ン、テトラヒドロフラン、エタノール、ジメチルスルフ
オキシド、塩化メチレン、トリクロロメタンまたはとり
わけジメチルホルムアミドである。塩基が反応混合物に
加えられるが、第３アミンとりわけＮ−メチルモルフォ
リンまたはトリエチルアミンが特に有用であることがわ
かった。
に、アミノ基を有する物質とともに、懸濁されるか溶解
される。この目的に適当であるものは、例えばジオキサ
ン、テトラヒドロフラン、エタノール、ジメチルスルフ
オキシド、塩化メチレン、トリクロロメタンまたはとり
わけジメチルホルムアミドである。塩基が反応混合物に
加えられるが、第３アミンとりわけＮ−メチルモルフォ
リンまたはトリエチルアミンが特に有用であることがわ
かった。
反応はアミノ基を有する物質が等モルか化学量論的量よ
り少なく存在するような方法にて行なわれる。アミノ成
分のカップリング試薬に対するモル比が１：１から１：
１０、好ましくは１：１からに３の範囲に維持された場
合に良好な転換率が得られる。
り少なく存在するような方法にて行なわれる。アミノ成
分のカップリング試薬に対するモル比が１：１から１：
１０、好ましくは１：１からに３の範囲に維持された場
合に良好な転換率が得られる。
驚くべきことにこの反応においてはアミン基は本発明に
よる化合物の活性化されたカルボキシル基に選択的に結
合し、そしてカルボニル基には結合しない。即ちアルデ
ヒド基を有しそして引き続く反応段階においてアミノ基
を有する他の化合物へ選択的に結合されることのできる
ようなアミドを得ることが可能である。この目的のため
にアミドは単離されることができる。
よる化合物の活性化されたカルボキシル基に選択的に結
合し、そしてカルボニル基には結合しない。即ちアルデ
ヒド基を有しそして引き続く反応段階においてアミノ基
を有する他の化合物へ選択的に結合されることのできる
ようなアミドを得ることが可能である。この目的のため
にアミドは単離されることができる。
はプチドの場合にはこれは好ましくは抽出または沈殿に
より行なわれ１重合体性の担体の場合には溶媒で洗浄す
ることにより行なわれる。
より行なわれ１重合体性の担体の場合には溶媒で洗浄す
ることにより行なわれる。
第２のアミノ酸分へのカップリングのためには反応体は
水溶液中で混合され、これは適切には５から１０好まし
くは６かも９のｐＨ領１．域にて緩衝液とされそして２
時間から７日好ましくは１日の期間インキュベートされ
る。これにより生成するシッフ塩基は芳香族アルデヒド
の場合には、加水分解に対して充分な安定性を有してい
る。加水分解に対してより安定でないようなシツフ塩基
の特別な場合には、アルジミン基の第２７ミノ基への水
素化を行なうことが可能である。水素化複合物、例えば
ナトリウムシアノボロハイドライドでの還元は反応時間
の短縮化という点で好ましいということがわかった。
水溶液中で混合され、これは適切には５から１０好まし
くは６かも９のｐＨ領１．域にて緩衝液とされそして２
時間から７日好ましくは１日の期間インキュベートされ
る。これにより生成するシッフ塩基は芳香族アルデヒド
の場合には、加水分解に対して充分な安定性を有してい
る。加水分解に対してより安定でないようなシツフ塩基
の特別な場合には、アルジミン基の第２７ミノ基への水
素化を行なうことが可能である。水素化複合物、例えば
ナトリウムシアノボロハイドライドでの還元は反応時間
の短縮化という点で好ましいということがわかった。
本発明による方法の有利な点はその速度、カップリング
反応における選択的な転換反応、および生成物の高収率
と安定性にある。その他の利点はスば一す−基の導入に
適切であるような適切な条件下において、アルデヒド基
を有するアミドがＮ末端へ結合することによりそのつぎ
のアミノ酸と反応させられ、このようにしてペプチドが
構成されるという点である。
反応における選択的な転換反応、および生成物の高収率
と安定性にある。その他の利点はスば一す−基の導入に
適切であるような適切な条件下において、アルデヒド基
を有するアミドがＮ末端へ結合することによりそのつぎ
のアミノ酸と反応させられ、このようにしてペプチドが
構成されるという点である。
さらに詳細な実施態様が下記の実施例により表わされる
。
。
実施例 １
Ｈ−ｇ−Ａｃａ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｌｙｓ （Ｂｏ ｃ
）−Ｇｉｎ−Ａｌａ−ＯＭｅのアミノ化された樹脂へ
の固定化 段階ｔ １５０ｑの４−カルボキシベンズアルデヒドおよび１５
３ｖの１−ヒドロキシベンゾ−１，２，３−トリアゾー
ルを５−のＤＭＦに溶解しそして２１０岬のジシクロヘ
キシルカルボジイミドを添加した。混合物を室温で１時
間攪拌しそれから１１０μｌのＮ−メチルモルフォリン
および７３４５ＷＩのＨ−ｇ−Ａｃａ−Ｇｌｙ−Ａｌａ
−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｇｉｎ−Ａｌａ−ＯＭｅ （ＤＭ
Ｆ中に溶解）を添加した。反応混合物を室温で一夜攪拌
した。溶媒を蒸留して除き、残存物を酢酸エチルおよび
クロロメタンとともに攪拌し濾過し残存物を集めて乾燥
した。
）−Ｇｉｎ−Ａｌａ−ＯＭｅのアミノ化された樹脂へ
の固定化 段階ｔ １５０ｑの４−カルボキシベンズアルデヒドおよび１５
３ｖの１−ヒドロキシベンゾ−１，２，３−トリアゾー
ルを５−のＤＭＦに溶解しそして２１０岬のジシクロヘ
キシルカルボジイミドを添加した。混合物を室温で１時
間攪拌しそれから１１０μｌのＮ−メチルモルフォリン
および７３４５ＷＩのＨ−ｇ−Ａｃａ−Ｇｌｙ−Ａｌａ
−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｇｉｎ−Ａｌａ−ＯＭｅ （ＤＭ
Ｆ中に溶解）を添加した。反応混合物を室温で一夜攪拌
した。溶媒を蒸留して除き、残存物を酢酸エチルおよび
クロロメタンとともに攪拌し濾過し残存物を集めて乾燥
した。
収量： ７２０Ｗｑ（理論値の約８３％ ）純度
の判定： ＴＬＣＲｆ＝α３７ 移動相：クロロホルム／メタノール／酢酸（５：２ ：
α５ ： ｖ ： ｖ ： ｖ ）検 知：ニンヒド
リン、 ＵＶ、ＴＤＭおよび２，４−ジヒドロフェニル
ヒドラジン陽性 段階２゜ ジビニルベンゼンで交叉結合されたペンタエリスリトー
ル、メタクリル酸誘導体およびポリエチレングリコール
のアミン基を有する共重合体の懸濁液１０ ｔｔｒｌ
（Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ”Ｔ８Ｋ ＨＷ ６５（Ｆ）＝水
性懸濁液中で０．１８ ｍｍｏｌの７ミノ基を含有する
１、５２の乾物）を１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液でｐＨ
９とし、そして３４７１１１１ｉの段階１のようにして
活性化されたペプチドを添加した。混合物は室温で２４
時間振盪した。樹脂をそれから水およびメタノールで洗
浄した。はプチド含有量の分析では乾燥樹脂Ｉ当りＱ、
０５３ ｍｍｏｊのはプチドを示した。
の判定： ＴＬＣＲｆ＝α３７ 移動相：クロロホルム／メタノール／酢酸（５：２ ：
α５ ： ｖ ： ｖ ： ｖ ）検 知：ニンヒド
リン、 ＵＶ、ＴＤＭおよび２，４−ジヒドロフェニル
ヒドラジン陽性 段階２゜ ジビニルベンゼンで交叉結合されたペンタエリスリトー
ル、メタクリル酸誘導体およびポリエチレングリコール
のアミン基を有する共重合体の懸濁液１０ ｔｔｒｌ
（Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ”Ｔ８Ｋ ＨＷ ６５（Ｆ）＝水
性懸濁液中で０．１８ ｍｍｏｌの７ミノ基を含有する
１、５２の乾物）を１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液でｐＨ
９とし、そして３４７１１１１ｉの段階１のようにして
活性化されたペプチドを添加した。混合物は室温で２４
時間振盪した。樹脂をそれから水およびメタノールで洗
浄した。はプチド含有量の分析では乾燥樹脂Ｉ当りＱ、
０５３ ｍｍｏｊのはプチドを示した。
実施例 ２
アルデヒド基を有するアミン化された樹脂の調製実施例
１に記載された重合体懸濁液１０ｔｎｔ（乾物的１．５
．９）からジオキサン濃度の漸増されたジオキサン／水
混合物を使用して水を除いた。
１に記載された重合体懸濁液１０ｔｎｔ（乾物的１．５
．９）からジオキサン濃度の漸増されたジオキサン／水
混合物を使用して水を除いた。
それとは別に、１５０■の４−カルボキシベンズアルデ
ヒドおよび１５３■の１−ヒドロキシベンゾ−１，２，
３−）リアゾールを５−のＤＭＦに溶解しそして２１０
１ｑのジシクロヘキシルカルボジイミドを添加した。混
合物を室温にて１時間攪拌しそれから０３焼結ガラスフ
イルター漏斗を通して１０−のジオキサンに懸濁された
樹脂に添加した。１００μｌのＮ−メチルモルフォリン
を添加しそして混合物を一夜振盪した。過剰の試薬は濾
過およびジオキサンで洗浄することにより除去した。樹
脂は水濃度の順増された水／ジオキサン混合物を使用し
ながら純粋な水相へ移した。
ヒドおよび１５３■の１−ヒドロキシベンゾ−１，２，
３−）リアゾールを５−のＤＭＦに溶解しそして２１０
１ｑのジシクロヘキシルカルボジイミドを添加した。混
合物を室温にて１時間攪拌しそれから０３焼結ガラスフ
イルター漏斗を通して１０−のジオキサンに懸濁された
樹脂に添加した。１００μｌのＮ−メチルモルフォリン
を添加しそして混合物を一夜振盪した。過剰の試薬は濾
過およびジオキサンで洗浄することにより除去した。樹
脂は水濃度の順増された水／ジオキサン混合物を使用し
ながら純粋な水相へ移した。
実施例 ３
アルデヒド基を有するアミノ化された樹脂上への生物活
性物質の添加 実施例２のとおりに調製しポリマーのＩ当り約０．０５
ｍｍｏｔのアルデヒド基を有する０、５．９の樹脂を
６−の１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ９に懸濁しそ
して１００■のＨ−Ａｒｇ （ＨＣｌ）−ＡＮＢＡ−Ｌ
ｙｓ（Ｚ）−Ｑ＆を添加した。混合物は室温で２日間振
盪し、過剰の試薬は水で洗い除いた。
性物質の添加 実施例２のとおりに調製しポリマーのＩ当り約０．０５
ｍｍｏｔのアルデヒド基を有する０、５．９の樹脂を
６−の１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ９に懸濁しそ
して１００■のＨ−Ａｒｇ （ＨＣｌ）−ＡＮＢＡ−Ｌ
ｙｓ（Ｚ）−Ｑ＆を添加した。混合物は室温で２日間振
盪し、過剰の試薬は水で洗い除いた。
担持試験：乾燥した後の樹脂のアミノ酸分析はα０５
ｍｍｏｌ／７の担持量を示した。
ｍｍｏｌ／７の担持量を示した。
実施例 ４
ＫＬＨへのＨ−ｔ−Ａｃａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−
Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＯＨの結合 段階１ ７、５ Ｎｇの４−カルボキシベンズアルデヒドシよび
７．６５岬の１−ヒドロキシベンゾ−１，２，３−トリ
アゾールを２−のジメチルホルムアミドに溶解し、ＩＱ
、５１ｑのジシクロヘキシルカルボジイミドを添加した
。混合物は室温で１時間攪拌しそして２０μｌのＮ−メ
チルモルフォリンを添加した。それから２−のジメチル
ホルムアミドに溶解した５６ｗｑのＨ−ｔ−Ａｃａ−Ｇ
ｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅ
ｕ−ＯＨＸ ３Ｈ２０Ｘ ＡｃＯＨをゆっくり添加した
。反応混合物を室温で一夜攪拌し溶媒を蒸発させて除き
そして残存物をジエチルエーテルおよび水との間に分配
した。水相を凍結乾燥した後アルデヒド基を有するはプ
チドを綿花状の雪白色粉末の形態で定量的な収量で得た
。
Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＯＨの結合 段階１ ７、５ Ｎｇの４−カルボキシベンズアルデヒドシよび
７．６５岬の１−ヒドロキシベンゾ−１，２，３−トリ
アゾールを２−のジメチルホルムアミドに溶解し、ＩＱ
、５１ｑのジシクロヘキシルカルボジイミドを添加した
。混合物は室温で１時間攪拌しそして２０μｌのＮ−メ
チルモルフォリンを添加した。それから２−のジメチル
ホルムアミドに溶解した５６ｗｑのＨ−ｔ−Ａｃａ−Ｇ
ｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅ
ｕ−ＯＨＸ ３Ｈ２０Ｘ ＡｃＯＨをゆっくり添加した
。反応混合物を室温で一夜攪拌し溶媒を蒸発させて除き
そして残存物をジエチルエーテルおよび水との間に分配
した。水相を凍結乾燥した後アルデヒド基を有するはプ
チドを綿花状の雪白色粉末の形態で定量的な収量で得た
。
純度試験： ＴＬＣ： Ｒｆ＝０．５３移動相：ブタノ
ール／酢酸／水 （３：１：１： ｖ：ｖ 二 Ｖ）検 知：ニン
ヒドリン 陰性、ＵＶ、 ２．４−ジヒドロフェニルヒ
ドラジン試験およびＴＤＭ陽性比較の為に、遊離ペプチ
ドのＴＬＣ二Ｒｆ＝α１２移動相：上記のとおり ジン陰性 段階２ 段階１のとおりに活性化した２５ｑのペプチドを４−の
リン酸緩衝液（０，５Ｍ、 ｐＨ８，５１）に溶解しそ
して１２５ｒ！９のＫＬＨを添加した。ｉ、５ｓｖの固
体ナトリウムシアノボロハイライドをこの混合物に添加
しこれをそれから一夜攪拌した。結合体を蒸留水での透
析により精製しそしてそれから凍結乾燥により固形物と
して得た。
ール／酢酸／水 （３：１：１： ｖ：ｖ 二 Ｖ）検 知：ニン
ヒドリン 陰性、ＵＶ、 ２．４−ジヒドロフェニルヒ
ドラジン試験およびＴＤＭ陽性比較の為に、遊離ペプチ
ドのＴＬＣ二Ｒｆ＝α１２移動相：上記のとおり ジン陰性 段階２ 段階１のとおりに活性化した２５ｑのペプチドを４−の
リン酸緩衝液（０，５Ｍ、 ｐＨ８，５１）に溶解しそ
して１２５ｒ！９のＫＬＨを添加した。ｉ、５ｓｖの固
体ナトリウムシアノボロハイライドをこの混合物に添加
しこれをそれから一夜攪拌した。結合体を蒸留水での透
析により精製しそしてそれから凍結乾燥により固形物と
して得た。
実施例 ５
ＢｐｏＣ−Ｇ１７−ＰｒＯ−Ａｒｇ （ＨＣｌ）−Ｐｒ
ｏ−ＨＭＤＡ−（４）−ベンズアルデヒドのｌ！Ｉｌ製 カップリングの可能なこのペプチドはプラン１に従って
調製した。
ｏ−ＨＭＤＡ−（４）−ベンズアルデヒドのｌ！Ｉｌ製 カップリングの可能なこのペプチドはプラン１に従って
調製した。
略語
Ｌｙｓ Ｌ −リ ジ ンＣｙ
ｓ Ｌ−システィン （−Ａｃａｇ−アミノカプロン酸 Ｇｌｙ グリシン Ａｌａ Ｌ−アラニン Ｇｉｎ Ｌ−グルタミン ＯＭｅ メチルエステル ＴＬＣ薄層クゴマトグラフイー ＤＭＦ ジメチルホルムアミド Ｒｆ 保持係数 ■ 紫外線可視化 Ａｒｇ Ｌ−アルギニン ＡＮＢＡ ５−アミノ−２−二トロ安息香酸ｚ
ベンジルオキシカルボニル− Ｇｌｕ Ｌ−グルタミン酸 Ｌｅｕ Ｌ−ロイシン ＡＳｎ Ｌ−アスパラギン ＫＬＥ キーホールリンぼットヘモクアニン（Ｋｅ
ｙｈｏｌｅ Ｌｉｍｐｅｔ Ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎｅ）
ＡｃＯＨ酢酸 ＨＭＤＡヘキサメチレンジアミン Ｐｒｏ Ｌ−プロリン ＢｐＱＣ２−Ｃ４−ビフェニリル〕−２−プロピルオキ
シカルボニル− ＤＣＣジシクロヘキシルカルボジイミド）１０Ｂｔ
Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾールＢｏｃ ｔ−ブチ
ルオキシカルボニルＦｍｏｃ ９−フルオレニルメチ
ルオキシカルボニルＨＯ８ｕ Ｍ−ヒドロキシスクシ
ンイミドＤＣＨＡ ジシクロヘキシルアンモニウム塩
特許出願人 ベーリングヴエルケ・アクチェンゲゼル
シャフト 外２名
ｓ Ｌ−システィン （−Ａｃａｇ−アミノカプロン酸 Ｇｌｙ グリシン Ａｌａ Ｌ−アラニン Ｇｉｎ Ｌ−グルタミン ＯＭｅ メチルエステル ＴＬＣ薄層クゴマトグラフイー ＤＭＦ ジメチルホルムアミド Ｒｆ 保持係数 ■ 紫外線可視化 Ａｒｇ Ｌ−アルギニン ＡＮＢＡ ５−アミノ−２−二トロ安息香酸ｚ
ベンジルオキシカルボニル− Ｇｌｕ Ｌ−グルタミン酸 Ｌｅｕ Ｌ−ロイシン ＡＳｎ Ｌ−アスパラギン ＫＬＥ キーホールリンぼットヘモクアニン（Ｋｅ
ｙｈｏｌｅ Ｌｉｍｐｅｔ Ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎｅ）
ＡｃＯＨ酢酸 ＨＭＤＡヘキサメチレンジアミン Ｐｒｏ Ｌ−プロリン ＢｐＱＣ２−Ｃ４−ビフェニリル〕−２−プロピルオキ
シカルボニル− ＤＣＣジシクロヘキシルカルボジイミド）１０Ｂｔ
Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾールＢｏｃ ｔ−ブチ
ルオキシカルボニルＦｍｏｃ ９−フルオレニルメチ
ルオキシカルボニルＨＯ８ｕ Ｍ−ヒドロキシスクシ
ンイミドＤＣＨＡ ジシクロヘキシルアンモニウム塩
特許出願人 ベーリングヴエルケ・アクチェンゲゼル
シャフト 外２名
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）式 I ： ▲数式、化学式、表等があります▼ I （式中、 Ｒ＾１は、縮合条件下で２つの反応体の反応を妨害せず
そしてカルボキシル、カルボニル、ヒドロキシルまたは
チオール基と反応することがない不活性の基であり、 Ｘは、第１および第２アルキルアミノ基とのアミドの形
成のための反応条件下でＸＯＨとして除去される基であ
る） で表わされる化合物。 ２）式中、Ｒ＾１は１０までの炭素原子および１０まで
の水素原子を有する脂肪族基、脂環式基、芳香脂肪族基
または芳香族基であり、Ｘはフェノール系化合物の基、
Ｎ−ヒドロキシ化合物の基または無水物の構成要素の基
である特許請求の範囲第１項に記載の化合物。 ３）式中、Ｒ＾１がｐ−フェニレン基である特許請求の
範囲第１および２項に記載の化合物。 ４）式中、Ｘがスクシンイミド基またはベンゾトリアゾ
ール基である特許請求の範囲第１および２項に記載の化
合物。 ５）式II： ▲数式、化学式、表等があります▼ II （式中、Ｒ＾１は上述した意味を有する） で表わされる化合物を、式III： ＸＯＨ III （式中、Ｘは上述した意味を有する） で表わされる化合物と、縮合剤とともに水を除きながら
反応させることよりなる特許請求の範囲第１から４項に
記載の化合物の調製方法。 ６）縮合剤がカルボジイミドである特許請求の範囲第５
項に記載の方法。 ７）カルボジイミドがジシクロヘキシルカルボジイミド
である特許請求の範囲第６項に記載の方法。 ８）式 I ： ▲数式、化学式、表等があります▼ I （式中、 Ｒ＾１は縮合条件下で２つの反応体の反応を妨害せずそ
してカルボキシル、カルボニル、ヒドロキシルまたはチ
オール基と反応することがない不活性の基であり、そし
て Ｘは、第１および第２アルキルアミノ基とのアミドの形
成のための反応の条件下でＸＯＨとして除去される基で
ある） で表わされる化合物の２官能性カップリング試薬として
の用途。 ９）アルデヒド基を有するアミドの調製のための式 I
の化合物の特許請求の範囲第８項に記載の用途。 １０）シツフ塩基の調製のための式 I の化合物の特許
請求の範囲第８項に記載の用途。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19853523365 DE3523365A1 (de) | 1985-06-29 | 1985-06-29 | Verbrueckungsreagenz, verfahren zu seiner herstellung und seine anwendung |
| DE3523365.6 | 1985-06-29 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS624276A true JPS624276A (ja) | 1987-01-10 |
| JPH07107059B2 JPH07107059B2 (ja) | 1995-11-15 |
Family
ID=6274574
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61149879A Expired - Lifetime JPH07107059B2 (ja) | 1985-06-29 | 1986-06-27 | 架橋試薬 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0207415B1 (ja) |
| JP (1) | JPH07107059B2 (ja) |
| AT (1) | ATE50992T1 (ja) |
| AU (1) | AU5932786A (ja) |
| DE (2) | DE3523365A1 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9112859D0 (en) * | 1991-06-14 | 1991-07-31 | Ici Plc | Peptide process |
| GB9112825D0 (en) * | 1991-06-14 | 1991-07-31 | Ici Plc | Process for making peptides |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BE639829A (ja) * | 1962-11-16 | |||
| GB1392181A (en) * | 1971-04-16 | 1975-04-30 | Rech Et Dapplications Soc Gen | Fixation of nitrogenous materials |
| US4218347A (en) * | 1977-09-15 | 1980-08-19 | Firmenich Sa | Bicyclic aldehyde perfuming and flavoring ingredients |
| DE2927133A1 (de) * | 1979-07-05 | 1981-01-08 | Bayer Ag | Verfahren zur herstellung von 2-formyl-3,3-dimethyl-cyclopropan1-carbonsaeureestern |
| DE3117985A1 (de) * | 1981-05-07 | 1982-11-25 | Hoechst Ag, 6000 Frankfurt | "verfahren zur phlegmatisierung von hydroxy-benzotriazolen und hydroxy-oxo-dihydro-benzotriazinen" |
| DE3317164A1 (de) * | 1983-05-11 | 1984-11-15 | Basf Ag, 6700 Ludwigshafen | Verfahren zur herstellung von (delta)-formylvaleriansaeureestern |
-
1985
- 1985-06-29 DE DE19853523365 patent/DE3523365A1/de not_active Withdrawn
-
1986
- 1986-06-23 EP EP86108517A patent/EP0207415B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-06-23 AT AT86108517T patent/ATE50992T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-06-23 DE DE8686108517T patent/DE3669508D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1986-06-27 JP JP61149879A patent/JPH07107059B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1986-06-27 AU AU59327/86A patent/AU5932786A/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH07107059B2 (ja) | 1995-11-15 |
| DE3523365A1 (de) | 1987-01-08 |
| EP0207415B1 (de) | 1990-03-14 |
| EP0207415A1 (de) | 1987-01-07 |
| DE3669508D1 (de) | 1990-04-19 |
| ATE50992T1 (de) | 1990-03-15 |
| AU5932786A (en) | 1987-01-08 |
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